Αφηρημένο

Ιστορικό

Αν και η ηλικία που σχετίζονται με την απώλεια του χρωμοσώματος Υ (LOY) σε φυσιολογικά αιμοποιητικά κύτταρα είναι ένα γνωστό φαινόμενο, οι φαινοτυπικές επιπτώσεις της LOY ήταν ασαφείς. Ωστόσο, LOY έχει βρεθεί σε συσχέτιση με το κάπνισμα, βραχύτερη επιβίωση και αυξημένο κίνδυνο καρκίνου. Προτάθηκε ότι LOY στα κύτταρα του αίματος θα μπορούσε να γίνει μια έξυπνη βιοδείκτη της ανδρικής καρκινογένεσης

Στόχοι, Μέθοδοι & amp.? Ευρήματα

Για να διερευνηθεί η συσχέτιση της LOY στα κύτταρα του αίματος με τον κίνδυνο για την ανάπτυξη του παχέος εντέρου (CC) και καρκίνους του προστάτη (PC), έχουμε αναλύσει δείγματα DNA από περιφερικό αίμα των 101 ασθενών CC αρσενικό (μέση ηλικία 60,5 ± 11,9 έτη), 70 ασθενείς PC (μέση ηλικία 68,8 ± 8,0 έτη) και 93 υγιείς άνδρες ελέγχου (μέση ηλικία 65,8 ± 16,6 έτη). Η μεθοδολογία που περιλαμβάνεται συν-ενίσχυση των ομόλογων αλληλουχιών στο χρωμόσωμα Υ και άλλων χρωμοσωμάτων χρησιμοποιώντας multiplex ποσοτικές φθορισμού (QF) PCR που ακολουθείται από την αυτόματη ανίχνευση και ανάλυση σχετικά με ΑΒΙ 3500 Genetic Analyzer. Ο μέσος λόγος Υ /Χ ήταν σημαντικά χαμηλότερη στην όλη την ομάδα των ασθενών με καρκίνο (0,907 ± 0,12? Ρ = 1.17×10

-9) σε σύγκριση με τους μάρτυρες (1,015 ± 0,15), καθώς και σε CC (0.884 ± 0,15? p = 3.76×10

-9) και οι ασθενείς PC (0,941 ± 0,06? p = 0,00012), όταν αναλύονται χωριστά. Πολυπαραγοντική ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης για την προσαρμογή για LOY και την ηλικία έδειξε ότι LOY είναι μια πιο σημαντικός παράγοντας πρόβλεψης της παρουσίας καρκίνου από την ηλικία, και ότι η ηλικία μάλλον δεν συμβάλλει στην αύξηση του αριθμού των ατόμων με ανιχνεύσιμη LOY σε ασθενείς με καρκίνο ομάδα.

συμπέρασμα

Εν κατακλείδι, τα αποτελέσματά μας υποστηρίζουν τα πρόσφατα ευρήματα της ένωσης LOY στα κύτταρα του αίματος με την καρκινογένεση στους άνδρες

Παράθεση:. Noveski P, Madjunkova S, Sukarova Stefanovska Ε, Matevska Geshkovska Ν, Kuzmanovska M, Dimovski A, et al. (2016) Απώλεια του χρωμοσώματος Υ στο περιφερικό αίμα του παχέος εντέρου και του καρκίνου του προστάτη ασθενείς. PLoS ONE 11 (1): e0146264. doi: 10.1371 /journal.pone.0146264

Επιμέλεια: Ezio Laconi, Πανεπιστήμιο του Κάλιαρι, Ιταλία

Ελήφθη: 14 του Σεπτεμβρίου του 2015? Αποδεκτές: 15 Δεκέμβρη 2015? Δημοσιεύθηκε: 8, Ιανουαρίου, 2016

Copyright: © 2016 Noveski et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε από το πρόγραμμα 13-3595 /1 από Υπουργείο Παιδείας και Επιστημών, Δημοκρατία της Μακεδονίας (σε DPK). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

απώλεια του χρωμοσώματος Υ (LOY) είναι ένα πολύ γνωστό φαινόμενο που σχετίζεται με τη γήρανση και παρατηρήθηκαν με ποικίλες συχνότητες στα κύτταρα του μυελού των οστών [1,2] ή σε κύτταρα περιφερικού αίματος [3,4] από υγιή ηλικιωμένους άνδρες. Η σύνδεση των LOY με αιματολογικών καρκίνων δεν ήταν εφικτή. Ωστόσο, LOY έχει αναφερθεί σε λευχαιμίες [5,6,7,8] και σε ασθενείς προβλέπεται να έχουν φτωχή ανταπόκριση στη θεραπεία του καρκίνου [9]. Άλλες μελέτες έχουν δείξει τη σύνδεση μόνο σε ασθενείς οι οποίοι έδειξαν LOY σε περισσότερο από 75% [10] ή 100% των προσβεβλημένων κυττάρων [11]. Πρόσφατη μελέτη που διερεύνησε LOY σε δύο ξεχωριστά κλάσματα κυττάρων περιφερικού αίματος βρέθηκε σημαντικά υψηλότερη συχνότητα LOY σε CD34 + κύτταρα σε ασθενείς με μυελοδυσπλαστικά σύνδρομα σε σύγκριση με τους ηλικιωμένους άνδρες χωρίς αιματολογικές ασθένειες [12]. Μια μελέτη δείχνει καμία συσχέτιση μεταξύ LOY και αιματολογικών καρκίνων έχει επίσης δημοσιευθεί [13].

Μια ένωση LOY έχει αναφερθεί σε καρκινικά κύτταρα από ουροφόρων καρκίνο της ουροδόχου κύστης [14], τον καρκίνο του παγκρέατος [15], καρκίνωμα του οισοφάγου [16], κυτταρικές σειρές καρκίνου της κεφαλής και του λαιμού καρκίνωμα [17], καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων [18], και του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος [19]. Αυτές οι μελέτες έχουν επικεντρωθεί στην LOY στο ίδιο όγκο ως δείκτης για τον υπότυπο καρκίνου και /ή την εξέλιξη της νόσου και την πιθανή έκβαση.

Αρκετές μελέτες έχουν διερευνήσει μωσαϊκό LOY σε κύτταρα περιφερικού αίματος σε σχέση με την παρουσία της νόσου. Μια ένωση βρέθηκε με πρωτοπαθή χολική κίρρωση [20], την αυτοάνοση θυρεοειδίτιδα [21], αλλά όχι με τους άνδρες με καρκίνο του μαστού [22]. Μεγάλες μελέτες σειρά που βασίζεται ομάδα SNP βρεθεί μια ένωση του ψηφιδωτού LOY στα κύτταρα του περιφερικού αίματος με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου, μικρότερη επιβίωση και το κάπνισμα [23,24].

Είμαστε εδώ για να παρουσιάσει τα αποτελέσματά μας μιας μελέτης ένωση LOY στα κύτταρα του περιφερικού αίματος σε άνδρες ασθενείς με ορθοκολικό και του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Θέματα

Μελετήσαμε 101 άνδρες ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου (μέση ηλικία 60,5 ± 11,9 έτη ), 70 άρρενες ασθενείς με καρκίνο του προστάτη (μέση ηλικία 68,8 ± 8,0 ετών) και 93 υγιείς άνδρες από το γενικό πληθυσμό (μέση ηλικία 65,8 ± 16,6 έτη). θέματα του καρκίνου είχαν προσληφθεί από το Τμήμα Ουρολογίας, Ιατρική Σχολή, Σκόπια, Πρώην Γιουγκοσλαβική Δημοκρατία της Μακεδονίας και παραπέμφθηκαν στο Εργαστήριο Φαρμακογενετική, Τμήμα Φαρμακευτικής, ενώ τα δείγματα DNA από υγιείς μάρτυρες ελήφθησαν από την τράπεζα DNA στο RCGEB «Γκεόργκι Δ Efremov «. Μερικά κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά των όγκων των ασθενών με καρκίνο που δίνονται στον Πίνακα 1. Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Ακαδημίας Μακεδονικού Επιστημών και Τεχνών (Έγκριση Νο 2010/1) και την επιτροπή δεοντολογίας του Τμήματος Φαρμακευτικής, Πανεπιστήμιο Αγίων Κυρίλλου και Μεθοδίου (Έγκριση Νο 03-95), Σκόπια, Πρώην Γιουγκοσλαβική Δημοκρατία της Μακεδονίας. Όλα τα θέματα που έχουν δώσει γραπτή συγκατάθεση για τη συμμετοχή στη μελέτη σύμφωνα με την Διακήρυξη του Ελσίνκι.

Η

απομόνωση DNA

Το DNA απομονώθηκε από το ολικό αίμα. Μετά τη λύση, τα λευκοκύτταρα κατακρημνίσθηκαν και πέψη με πρωτεϊνάση Κ και το DNA εκχυλίζεται σύμφωνα με το πρότυπο πρωτόκολλο φαινόλη-χλωροφόρμιο.

Προσδιορισμός του ψηφιδωτού LOY σε

αίμα

Η παρουσία του LOY προσδιορίστηκε με ποσοτική multiplex φθορισμός αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (QF-PCR) που αναπτύχθηκε αρχικά για την ανίχνευση του μικροδιαγραφές σε περιοχές AZF του Υ χρωμοσώματος και φυλετικών χρωμοσωμάτων ανευπλοειδιών σε ασθενείς με ανδρική υπογονιμότητα [25,26]. Σχετική ποσότητα του Υ χρωμοσώματος αξιολογήθηκε μέσω της chromosomeY /chromosomeX (Υ /Χ) λόγος του σήματος φθορισμού του συν-ενισχύεται μικρή αλληλουχίες από το Υ-Χ γονίδια ομόλογα αμελογενίνης (

AMELY

και

AMELX

).

AMELX

περιέχει ένα ζευγάρι 6 βάσεων διαγραφή (bp) στο ιντρόνιο 1 που λείπει στο

AMELY

, έτσι ώστε να συν-ενισχυμένα τεμάχια είναι μεγέθους 112 bp από το χρωμόσωμα Υ και 106 bp από το χρωμόσωμα Χ και διαχωρίζονται εύκολα και ποσοτικά με τριχοειδή ηλεκτροφόρηση (~ 1: 1 αναλογία 112/106 κορυφών bp σε φυσιολογικά δείγματα αρσενικό DNA και η παρουσία του μόνο 106 bp κορυφή σε δείγματα γυναικείων DNA) [27]. Ψευδώς θετικά αποτελέσματα σε περίπτωση απώλειας ή αύξηση του χρωμοσώματος Χ ελέγχονταν από την ενίσχυση των 152 bp θραύσμα του

TAF9B

γονίδιο στο χρωμόσωμα Χ με εκκινητές που επίσης συν-ενισχύει 148 bp ομόλογης αλληλουχίας στο χρωμόσωμα 3. Η αναλογία των εμβαδών των κορυφών των δύο συν-ενισχυμένα θραύσματα (148/152 bp? χρωμόσωμα 3 /χρωμόσωμα Χ) είναι ~ 2: 1 σε φυσιολογικά δείγματα αρσενικό DNA και ~ 1: 1 σε φυσιολογικά δείγματα θηλυκό DNA

. διαγραφές ή διπλασιασμούς στο

AMELY

περιοχή αποκλείστηκαν από δύο άλλες σειρές αστάρι. Το πρώτο ενισχύει ομόλογες ακολουθίες

DAZL

γονίδιο στο χρωμόσωμα 3 (δύο αντίγραφα του 217 bp θραύσμα) και

DAZ

γονίδια στο χρωμόσωμα Υ (τέσσερα αντίγραφα των 214 bp θραύσμα). Το άλλο σετ εκκινητών ενισχύει το

MYPT2

γονίδιο στο χρωμόσωμα 1 (175 bp θραύσμα) και δύο ομόλογες αλληλουχίες (θραύσματα 180 bp) από το χρωμόσωμα Υ ακολουθίες Primer και συνθήκες PCR για πολλαπλή QF-PCR ήταν όπως περιγράφεται αλλού [ ,,,0],26]. Co-ενισχυμένο φθορισμό σημασμένο προϊόντα PCR διέτρεξαν επί Applied Biosystems 3500 Genetic Analyzer με LIZ500 ως εσωτερικό πρότυπο και αναλύθηκαν με GeneMapper 4,1 λογισμικό (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Αντιπροσωπευτικά electrophoregrams από δύο άτομα, το ένα με με αμελογενίνης Υ /Χ αναλογία ~ 1 και ένα με αμελογενίνης Υ /Χ αναλογία 0.28 φαίνεται στην Εικόνα 1.

Electrophoregrams από άτομα με α) κανονική αμελογενίνης Υ /Χ αναλογία (περίπου ίση περιοχών κορυφής του Χ χρωμοσώματος και αλληλουχίες χρωμόσωμα Υ) και β) του ασθενούς με καρκίνο του παχέος εντέρου και σημαντικά αυξημένη αναλογία των κυττάρων με LOY (αναλογία Υ /Χ αμελογενίνης 0,28).

Η

προκειμένου για την επικύρωση της μεθοδολογίας QF-PCR έχουμε χρησιμοποιήσει δύο διαφορετικά δείγματα DNA: μία κανονική αρσενικό δείγμα (46, ΧΥ), και ένα δείγμα με σύνδρομο Turner (45, X0) (για να μιμούνται τα κύτταρα με LOY). Αμφότερα τα δείγματα αναμίχθηκαν σε διαφορετικές αναλογίες για να αντιπροσωπεύουν δείγματα με 2,5%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 50%, 70% και 90% LOY. Πριν από την ανάλυση τα δύο δείγματα ρυθμίστηκαν με την ίδια συγκέντρωση. συγκέντρωση νουκλεϊκών οξέων και το δείγμα καθαρότητα προσδιορίστηκαν από NanoVue ™ Plus Φασματοφωτόμετρο (GE Healthcare, Little Chalfont, Ηνωμένο Βασίλειο), ενώ η ακριβής συγκέντρωση διπλής έλικας του DNA μετρήθηκε με qubit

® κιτ προσδιορισμού dsDNA ΕΣ σε ένα qubit 2.0 φθοριόμετρο (Thermo Fisher Επιστημονική, Waltham, Massachusetts, USA). Και με τα δύο μετρήσεις DNA συγκεντρώσεις και καθαρότητα και για τα δύο δείγματα ήταν ταυτόσημα.

Η επαναληψιμότητα του προσδιορισμού /X αναλογία Y μετρήθηκε με επανάληψη της ενισχύσεως QF-PCR και ανάλυση σε 11 υποκείμενα με αμελογενίνης /X αναλογία Y παρακάτω 0.80 . Επιπλέον, ο συντελεστής διακύμανσης της αμελογενίνης Υ /Χ δείκτης υπολογίσθηκε από την επαναλαμβανόμενη QF-PCR αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν σε 14 υποκείμενα με /X αναλογία Y μεταξύ 0,8-1,0 και 12 υποκείμενα μεταξύ 1,0-1,2. Για να εξαλειφθεί η πιθανή προκατάληψη των διαφορετικών PCR που ups, οι αντιδράσεις PCR για το ένα τρίτο των υγιών μαρτύρων και τα δύο τρίτα των ασθενών με καρκίνο διεξήχθησαν ταυτόχρονα σε καθένα από τα PCR τρέχει.

Η στατιστική ανάλυση

οι διαφορές μεταξύ των μέσων των δύο ομάδων αναλύθηκαν με t-test του Student μετά την αξιολόγηση για την ισότητα των διακυμάνσεων με τεστ Levene`s. Συσχέτιση μεταξύ δύο μεταβλητών αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Pearson συντελεστής συσχέτισης (r). Το κατώτερο όριο ανίχνευσης υπολογίστηκε με βάση την τυπική απόκλιση της απόκρισης και την κλίση της γραμμής παλινδρόμησης [28]. Διαφορές μεταξύ επανειλημμένες μετρήσεις αναλύθηκαν με ζεύγη δείγματα t τεστ. Η πολυπαραγοντική λογιστική παλινδρόμηση χρησιμοποιήθηκε για να διαμορφώσει τη σύνδεση των LOY και μεταβλητές ηλικία με την παρουσία καρκίνου. Επίπεδο σημαντικότητας θεωρήθηκε όταν τιμή ρ ήταν μικρότερη από 0,05. Συντελεστής διακύμανσης από διπλές μετρήσεις υπολογίστηκε με MedCalc για Windows, έκδοση 12.5 (MedCalc Λογισμικό, Οστάνδη, Βέλγιο), σύμφωνα με περιγράφεται μεθοδολογία τους. αναλύει τα δεδομένα για έγιναν όλες οι άλλες στατιστικές δοκιμές με τη χρήση του στατιστικού πακέτου Κοινωνικών Επιστημών, Έκδοση 19 (SPSS, Chicago, IL, USA).

Αποτελέσματα

Επικύρωση της αμελογενίνης Υ /Χ αναλογία κορυφής ως μέθοδος για την ανίχνευση μωσαϊκό LOY στα κύτταρα του αίματος και τις δοκιμές για την αναπαραγωγιμότητα

Κανονικό 46, ΧΥ DNA δείγματος και εννέα μικτά δείγματα DNA με διαφορετικές αναλογίες 46, ΧΥ και 45, τα δείγματα X0 DNA ενισχύθηκαν εις τριπλούν και τα αντίστοιχα αναλογία αμελογενίνης Υ /Χ ελήφθη για κάθε αναλογία. ανάλυση συσχέτισης με βάση μέσες τιμές τριπλών μετρήσεων έδειξαν ισχυρή αρνητική συσχέτιση (r = -0,999, p = 8.03×10

-13) μεταξύ του ποσοστού του 45, δείγμα X0 και αμελογενίνης Υ /Χ αναλογία.

Η όριο ανίχνευσης (LOD) της LOY υπολογίστηκε σε 4,6%, με τη χρήση της τυπικής απόκλισης και η κλίση της γραμμής παλινδρόμησης των μέσων τιμών των μετρήσεων εις τριπλούν (Σχήμα 2).

τελείες αντιπροσωπεύουν κατά μέσο όρο αμελογενίνης τιμές /Χ αναλογία Υ που αντιστοιχεί στο 0%, 2,5%, 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 50%, 70% και 90% του 45, X0 στα μικτά δείγματα DNA. γραμμή παλινδρόμησης υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ποσοστό 45, δείγμα X0 ως ανεξάρτητοι και αμελογενίνης /Χ αναλογία Υ ως εξαρτημένη μεταβλητή. Κλίση (ες) και τυπική απόκλιση (σ) της γραμμής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό του ορίου ανίχνευσης με τον τύπο LOD = 3.3σ /s [28].

Η

Η επαναληψιμότητα της αμελογενίνης Υ /αναλογίες Χ αξιολογήθηκαν σε 37 άτομα. Το χαμηλό συντελεστή διακύμανσης 4,62% ​​και καμία σημαντική διαφορά στο μέσο μεταξύ των δύο μετρήσεων (p = 0,1097, Paired τεστ Τ) επιβεβαιώνουν ότι QF-PCR είναι μια αξιόπιστη μέθοδος για την εκτίμηση της αμελογενίνης Υ /Χ αναλογίες.

Μωσαϊκό LOY στα κύτταρα του αίματος συνδέεται σημαντικά με την παρουσία του καρκίνου

Έχουμε αναλύσει τον /Χ αναλογία Υ χρησιμοποιώντας QF-PCR σε 264 δείγματα DNA που απομονώθηκε από τα λευκοκύτταρα από περιφερικό αίμα σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου (n = 101 ), ο καρκίνος του προστάτη (n = 70) και των υγιών μαρτύρων (n = 93), σε συνδυασμό με την ηλικία. Κατανομή των /Χ αναλογίες Υ παρουσιάζεται ως ιστογράμματα στο σχήμα 3. Η μέση αναλογία Υ /Χ ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε ασθενείς με καρκίνο (0,907 ± 0,12? P = 1.17×10

-9) από τους ελέγχους (1.015 ± 0,15) . Η στατιστική σημαντικότητα διατηρήθηκε επίσης κατά μέσο Υ /Χ αναλογίες του παχέος ασθενείς (0.884 ± 0,15? P = 3.76×10

-9) και ασθενείς με καρκίνο του προστάτη (0,941 ± 0,06? P = 1.15×10

-4) αναλύθηκαν χωριστά.

οι μέσες τιμές και οι τυπικές αποκλίσεις παρουσιάζονται επίσης.

Η

Χρησιμοποιώντας πολυπαραγοντική λογιστική παλινδρόμηση έχουμε ως πρότυπο ποσοστό LOY (συνάγεται από αμελογενίνης Υ /Χ ratio) και την ηλικία για να αξιολογήσει τους δύναμη να προβλέψει την παρουσία καρκίνου. Και οι δύο μεταβλητές πρόβλεψης χρησιμοποιήθηκαν ως συνεχείς μεταβλητές ενώ έκβαση ήταν η παρουσία του καρκίνου και όχι ο καρκίνος ως αναφοράς (Πίνακας 2). LOY ποσοστό προβλέπει την παρουσία του καρκίνου με σημαντική δύναμη (p = 2.043×10

-9), ενώ η ηλικία έδειξε μόνο οριακή σημασία (p = 0,024). Οι δύο μεταβλητές πρόβλεψης του μοντέλου δείχνουν ότι η αύξηση της ηλικίας κατά την προσαρμογή για LOY ποσοστό δεν αυξάνει τον κίνδυνο για την παρουσία καρκίνου σε ομάδα μας των ασθενών με καρκίνο.

Η

Συζήτηση

Ο αριθμός των οι ερευνητικές ομάδες διερευνούν μη επεμβατική βιοδείκτες του καρκίνου για να βελτιωθεί η έγκαιρη διάγνωση και αντιμετώπιση των ασθενών με καρκίνο. Πρόσφατα, LOY προτάθηκε ως πιθανή βιοδείκτη για διαφορετικούς καρκίνους στους άνδρες. Τα δεδομένα από μεγάλες ομάδες που συνδέονται LOY στο περιφερικό αίμα με κίνδυνο θνησιμότητας από όλα τα αίτια και τη θνησιμότητα μη-αιματολογικές καρκίνο [23]. Οι επιβεβαιωτικές μελέτες ελέγχου περίπτωση συνδέουν μωσαϊκό LOY στα κύτταρα του περιφερικού αίματος με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου που απαιτούνται.

Για να συμβάλει στην αποσαφήνιση του ρόλου της LOY στο περιφερικό αίμα ως βιοδείκτη καρκίνου στους άνδρες, έχουμε εκτελούνται περίπτωση μελέτη ελέγχου σε άνδρες ασθενείς με δύο διαφορετικούς τύπους καρκίνου.

Η μεθοδολογία που χρησιμοποιήθηκε βασίστηκε σε έμμεσο προσδιορισμό της παρουσίας LOY με QF-PCR, μετρώντας την αναλογία των εμβαδών των κορυφών του επισημασμένου με φθορισμό PCR θραύσματα σταθερά μήκη αντιπροσωπεύουν ομόλογες αλληλουχίες για το Υ χρωμόσωμα και κάποιου άλλου χρωμοσώματος. Αυτή η μεθοδολογία για τη μέτρηση της αναλογίας των επιφανειών των κορυφών χρησιμοποιείται ευρέως σε ταχεία προγεννητική διάγνωση των κοινών ανευπλοειδιών χρωμοσώματος [29]. Χρησιμοποιείται επίσης για την ανίχνευση του φύλου χρωμοσωμάτων ανευπλοειδιών καθώς και για διαγραφές και αναδιατάξεις στις περιοχές AZF επί χρωμοσώματος Υ [25]. Σε αντίθεση με την κυτταρογενετική ανάλυση των καλλιεργημένων κυττάρων του αίματος (μόνο Τ-λεμφοκύτταρα), τα οποία είναι χρονοβόρα και επιρρεπής σε τεχνικά αντικείμενα, όπως η απώλεια χρωμοσωμάτων κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας των αντικειμενοφόρων [3], η μεθοδολογία QF-PCR εκτελείται σε ένα DNA που απομονώθηκε από τα λευκοκύτταρα από πλήρες αίμα , και είναι φθηνή και πιο ισχυρή. Ήμασταν σε θέση να συγκρίνουν τα αποτελέσματα της αμελογενίνης Υ /Χ αναλογίες χρησιμοποιώντας την άμεση καταμέτρηση των κυττάρων με κυτταρογενετική ανάλυση, αλλά έχουμε επικυρωμένη μεθοδολογία μας με την προσομοίωση LOY με τη χρήση του 45, δείγμα X0 DNA. Η υψηλή συσχέτιση μεταξύ των 45, το ποσοστό X0 και αμελογενίνης /Χ αναλογία Υ επιβεβαιώνει ότι QF-PCR είναι μια αξιόπιστη μέθοδος για την εκτίμηση των /Χ αναλογίες Υ. Αν και υπάρχουν αναφορές για

AMELY

αλληλομόρφων εγκατάλειψης ως αποτέλεσμα της διαγραφής σε αυτή την περιοχή του χρωμοσώματος Υ, η αυξημένη συχνότητα αναφέρεται κυρίως σε ασιατικούς πληθυσμούς [30,31,32]. Δεν έχουν ανιχνεύσει απώλεια

AMELY

μεταξύ των ανδρών που περιλαμβάνονται στην παρούσα μελέτη, καθώς και περισσότερα από 4000 αρσενικά δείγματα που αναλύθηκαν στο εργαστήριο μας για την παρουσία των πιο κοινών χρωμοσωμικών συνδρόμων, πατρότητας και ανδρική στειρότητα (αδημοσίευτα δεδομένα).

Στη μελέτη μας, συμπεριλάβαμε άνδρες ασθενείς με προστάτη και του παχέος εντέρου. Αν και η αμελογενίνης Υ /Χ αναλογία δεν δίνει μια ακριβή τιμή του ποσοστού των κυττάρων με LOY, οι μέσες τιμές λόγου που λαμβάνονται εντός ίδιες πειραματικές συνθήκες αντιπροσωπεύουν ένα κατά προσέγγιση αντανάκλαση για την έκταση των LOY για τις μελετήθηκαν ομάδες. Οι μέσες Υ /Χ αναλογίες ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε ορθοκολικό ασθενείς από ότι ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Το μεγαλύτερο ποσοστό των ασθενών με LOY στην ομάδα μας των ασθενών με καρκίνο είναι συνεπής με τα πρόσφατα ευρήματα δείχνουν σημαντικά αυξημένη συχνότητα των φυλετικών χρωμοσωμάτων μονοσωμίες σε ασθενείς με πνεύμονα και της ουροδόχου κύστης, σε σύγκριση με τους υγιείς μάρτυρες [33].

Επειδή LOY φέρεται να σχετίζεται με την ηλικία, έχουμε συμφωνημένα ασθενείς με καρκίνο μας και την ομάδα ελέγχου μη καρκινικές με την ηλικία και στη συνέχεια διαμορφώθηκε ηλικία και το ποσοστό LOY για τις προβλέψεις παρουσία καρκίνου. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι αύξηση του αριθμού των ατόμων με LOY σε ομάδα μας των ασθενών με καρκίνο μάλλον δεν επηρεάζεται από την ηλικία τους.

Ο ακριβής μηχανισμός με τον οποίο τα κύτταρα χάνουν το Υ χρωμόσωμα δεν είναι γνωστή. Ένας προτεινόμενος μηχανισμός είναι η επίδραση της βράχυνσης των τελομερών κατά τη γήρανση η οποία οδηγεί σε τρίφτης αστάθεια και την υποβάθμιση του χρωμοσώματος Υ η οποία έχει μικρότερη τελομερή από αυτοσωμικά [34]. Ένας άλλος προτεινόμενος μηχανισμός σχετίζεται με την ιδιότητα του χρωμοσώματος Υ να αναπαράγουν αργά στη φάση S [21], έτσι συντομεύοντας του κυτταρικού κύκλου (και να χάσει το Υ χρωμόσωμα) θα μπορούσε να δώσει ένα πολλαπλασιαστικό πλεονέκτημα σε μια επηρεάζονται ασθένεια οργανισμού. Διαφορετικές οδοί θα μπορούσαν να ενεργοποιηθούν, οδηγούν σε διαφορετικούς ρυθμούς πολλαπλασιασμού και ο αριθμός των αιμοποιητικών κυττάρων με LOY σε διαφορετικές μορφές καρκίνου σε απόκριση προς σήματα από τα καρκινικά κύτταρα. Μεταβολή στο γονιδίωμα μεταξύ διαφορετικών πληθυσμών καρκίνου θα μπορούσε επιπλέον να ρυθμίζουν την απόκριση των αιμοποιητικών κυττάρων σε σήματα των καρκινικών κυττάρων. Πρόσθετες αποδείξεις για αυτό το προτεινόμενο μηχανισμό σήματος που επάγεται LOY σχετίζεται με το γεγονός ότι το κάπνισμα έχει μια παροδική και δοσο-εξαρτώμενη επίδραση στην μεταλλαξογόνο LOY-κατάσταση [24]. Επίσης, ο μηχανισμός αυτός είναι σε συμφωνία με την προτεινόμενη επιρροή αλλαγμένη σηματοδότησης μικροπεριβάλλον του ιστού στη σωματική εξέλιξη σε μια εποχή-εξαρτώμενο τρόπο [35]. Πρόσφατα, κλωνικές αιματοποίηση με σωματικές μεταλλάξεις απεδείχθη όχι μόνο να είναι όλο και πιο συχνές σε ηλικιωμένους ανθρώπους, αλλά επίσης να αυξήσει τον κίνδυνο αιματολογικών κακοηθειών και του θανάτου [36,37], με την πιθανότητα ότι όλα τα αίτια της θνησιμότητας οφείλεται σε αυξημένο κίνδυνο καρδιαγγειακής νόσου [36]. Οι μελέτες αυτές αναλύονται μόνο και μόνο παραλλαγές νουκλεοτιδίων και μικρές indels και δεν αναφέρουν μεγάλη εκτροπή όπως Υ απώλεια χρωμοσωμάτων. Επίσης, μεγάλες χρωμοσωμικές ανωμαλίες (& gt? 2 Mb) του autosomes στο DNA από το αίμα βρέθηκαν να είναι πιο συχνή μεταξύ των ατόμων με συμπαγείς όγκους σε σχέση με τον καρκίνο ελεύθερα άτομα [38]. Θα ήταν ενδιαφέρον να δούμε αν εμφάνιση LOY, σωματικών μεταλλάξεων και /ή ορισμένων τύπων χρωμοσωμικών ανωμαλιών συνδέονται και να παρουσιάσει μαζί στην ίδια κύτταρα ή τύπους κυττάρων. Αν στοιχειοθετείται απομείωση της υγείας προωθεί την ταυτόχρονη εμφάνιση των διαφόρων τύπων γενετικών μεταλλάξεων, ο εύκολα ανιχνεύσιμη μωσαϊκό LOY θα μπορούσε να γίνει ένα πολύτιμο βιοδείκτη.

Εν κατακλείδι, τα αποτελέσματα από τη μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας έδειξε ισχυρή σύνδεση μεταξύ της παρουσίας καρκίνου και ψηφιδωτό LOY στην περιφερικό αίμα των ανδρών που πάσχουν από παχέος εντέρου και του καρκίνου του προστάτη είναι οι δύο πιο κοινές συμπαγών όγκων στους άνδρες. Υποστηρίζουν επίσης πρόσφατα ευρήματα της ένωσης LOY στο αίμα με την καρκινογένεση στους άνδρες.