Αφηρημένο

SALL4 παίζει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη και την εξέλιξη πολλών μορφών καρκίνου. Ωστόσο, ο ρόλος και το μοριακό μηχανισμό της SALL4 στον καρκίνο του ενδομητρίου παραμένουν ασαφείς. Στην παρούσα έρευνα, αποδείξαμε ότι η έκφραση του SALL4 ρυθμίζεται αυξητικά στον καρκίνο του ενδομητρίου και συσχετίζεται θετικά με το στάδιο του όγκου, μεταστάσεις και κακή επιβίωση των ασθενών. Η υπερέκφραση του SALL4 προώθησε την διεισδυτικότητα σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα, όπως υποδεικνύεται από την προς τα άνω ρύθμιση των μεσεγχυματικών κυττάρων δείκτη Ν-καντερίνης και προς τα κάτω ρύθμιση της επιθηλιακής δείκτη Ε-καδερίνης, και προσδιορισμούς εισβολής in vitro. Επιπλέον, υπήρχε επίσης μια αύξηση στην αντοχή φαρμάκου σε αυτά τα μοντέλα των κυττάρων, λόγω της προς τα πάνω ρύθμιση σύνδεσης ΑΤΡ κασέτας έκφρασης σε πολλαπλά φάρμακα μεταφορέα ABCB1. Επιπλέον, βρήκαμε επίσης ότι ABCB1 ήταν κρίσιμη για SALL4 επαγόμενη ανθεκτικότητα στα φάρμακα. Σε αντίθεση, SALL4 knockdown αποκατασταθεί ευαισθησία φαρμάκου, αντιστρέφεται EMT, μειωμένη κυτταρική μετάσταση και κατέστειλε την προς τα κάτω ρύθμιση της Ε-καδερίνης και την προς τα πάνω ρύθμιση του Ν-καντερίνης και ABCB1. Επιπλέον, δείξαμε ότι SALL4 υπερέκφραση c-Myc και c-Myc ήταν άμεσο στόχο για SALL4 με δοκιμασία ChIP, εξάντληση του c-myc με siRNA κατάργησε την SALL4 επαγόμενη μειορύθμιση της Ε-καδερίνης, προς τα πάνω ρύθμιση του Ν-καντερίνης και ABCB1 , γεγονός που υποδηλώνει ότι το c-Myc ήταν ένας προς τα κάτω στόχος για SALL4 και απαιτούνται για SALL4 επαγόμενη EMT, εισβολή και ναρκωτικών αντίσταση σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι θα μπορούσε να προκαλέσει SALL4 ΕΜΤ και αντοχή σε αντινεοπλασματικά φάρμακα μέσω της ρύθμισης του c-myc. SALL4 και c-Myc μπορεί να είναι μυθιστόρημα θεραπευτικούς στόχους για τον καρκίνο του ενδομητρίου

Παράθεση:. Liu L, Zhang J, Yang Χ, Fang C, Xu Η, SALL4 ως επιθηλιακά μεσεγχυματικά μετάβαση Xi X (2015) και Drug Resistance επαγωγέας μέσω του κανονισμού του c-myc σε καρκίνο του ενδομητρίου. PLoS ONE 10 (9): e0138515. doi: 10.1371 /journal.pone.0138515

Επιμέλεια: Lu-Zhe Sun, Πανεπιστήμιο του Τέξας Κέντρο Διάδοσης Επιστημών Υγείας, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 27 του Απριλίου του 2015? Αποδεκτές: 30 Αυγ 2015? Δημοσιεύθηκε: 25 Σεπτεμβρίου 2015

Copyright: © 2015 Liu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. το έργο αυτό χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (NSFC Νο 81172478). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του ενδομητρίου είναι η έβδομη πιο κοινή κακοήθεια με σχεδόν 200.000 γυναίκες διαγιγνώσκονται κάθε χρόνο παγκοσμίως [1]. Στην Ευρώπη, υπάρχουν περίπου 9000 γυναίκες πεθαίνουν από καρκίνο του ενδομητρίου κάθε χρόνο. Η έγκαιρη διάγνωση και η θεραπεία δεν έχουν σημαντική επίδραση στη θνησιμότητα [2]. Χειρουργική επέμβαση, χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία ανοσοενισχυτικό είναι οι κύριες θεραπευτικές μέθοδοι για ενδομήτριο καρκίνωμα. Παρ ‘όλα αυτά, μια μειοψηφία των ασθενών είναι ευαίσθητοι σε αυτές τις θεραπείες [3]. Ως εκ τούτου, είναι επιτακτική ανάγκη να βρούμε νέους θεραπευτικούς στόχους για την επεξεργασία των μοριακών μηχανισμών που διέπουν ενδομητρίου καρκινογένεση.

SALL4, ένα μέλος της οικογένειας γονιδίων SALL, είναι ένας παράγοντας μεταγραφής. Είναι ένας σημαντικός παράγοντας για τη διατήρηση της pluripotency και αυτο-ανανέωσης σε εμβρυϊκά βλαστοκύτταρα [4-6]. Οι προηγούμενες έρευνες απέδειξαν ότι SALL4 συμμετείχε στη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των αιμοποιητικών βλαστικών κυττάρων [7, 8]. SALL4 έχει αποδειχθεί ότι συμμετέχουν στη διατήρηση της χημειοευαισθησίας μέσω ρυθμίζουν την μεταφορέα φάρμακο σύνδεσης ΑΤΡ κασέτας (ABC) σε λευχαιμία [8-10]. Η ανώμαλη έκφραση των SALL4 βρέθηκε σε πολλούς καρκίνους, συμπεριλαμβανομένων των όγκων των γεννητικών κυττάρων [11], του καρκίνου του μαστού [12], ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [13, 14], γαστρικού καρκίνου [15]. Ωστόσο, ο λειτουργικός ρόλος και μοριακός μηχανισμός SALL4 δεν είναι καλά χαρακτηρίζεται από το καρκίνο του ενδομητρίου.

EMT είναι μια θεμελιώδης βιολογική διαδικασία κατά την οποία τα επιθηλιακά κύτταρα υφίστανται μια δραματική αναδιαμόρφωση του κυτταροσκελετού, χάνουν βασικοκυτταρικό-κορυφής πολικότητας και να αποκτήσουν μια αυξημένη ικανότητα να μεταστάσεις σε απομακρυσμένα όργανα [16-18]. Myometrial εισβολή είναι ένας από τους πιο σημαντικούς προγνωστικούς παράγοντες σε ενδομήτριο καρκίνωμα [19]. Ωστόσο, EMT έχει ελάχιστα κατανοητή στον καρκίνο του ενδομητρίου σε σχέση με άλλους τύπους καρκίνου [20].

Η πολυανθεκτικότητα είναι ένα κοινό φαινόμενο σε όλες σχεδόν τις καρκίνους και ένα μεγάλο εμπόδιο στην επιτυχή χημειοθεραπεία [21]. Σημαντικές μηχανισμοί αντίστασης φαρμάκου συνδέονται στενά με τους μεταφορείς πολυφαρμάκου ABC ενεργοποιηθεί. Οι μεταφορείς πολλαπλών φαρμάκων ABC όπως ABCB1, ABCC1 και ABCG2 θεωρήθηκαν υπεύθυνα για την πλειονότητα των εκροής φαρμάκου στον ανθρώπινο καρκίνο [21, 22]. Μια αύξηση στο ABC έκφραση μεταφορείς είχε κάτι να κάνει με κακή πρόγνωση σε πολλούς τύπους καρκίνου. ABCB1, που ονομάζεται επίσης MDR1, ήταν ένας από τους πρέπει να προσδιορίζονται τα πρώτα μεταφορείς ABC. Η υψηλή έκφραση του ABCB1 βρέθηκε στην πλειοψηφία των καρκινικών ιστών ενδομητρίου [23]. Παρ ‘όλα αυτά, ο ακριβής ρόλος για ABCB1 σε καρκίνο του ενδομητρίου δεν έχει ακόμη διευκρινιστεί.

ογκογόνο C-myc που κωδικοποιείται μια εξελικτικά συντηρημένη βασικού παράγοντα μεταγραφής, και η έκφραση του c-myc ήταν συνήθως παρεκκλίνουσα σε πολλούς καρκίνους [24, 25]. Η υπερέκφραση του c-myc έχει βρεθεί ότι εμπλέκεται στην διαφοροποίηση, έναρξη και την εξέλιξη σε καρκίνο του ενδομητρίου [26]. Πολλές μελέτες έχουν αποδείξει ότι η υπερέκφραση του c-myc ήταν στενά συνδεδεμένη με την αντίσταση χημειοθεραπεία και τη διαδικασία EMT. Ως εκ τούτου, μας ενδιαφέρει να προσδιοριστεί αν το c-Myc εμπλέκεται στην αντίσταση χημειοθεραπεία και EMT στον καρκίνο του ενδομητρίου.

Στην παρούσα έρευνα, αποδείξαμε ότι η έκφραση SALL4 ρυθμίζεται αυξητικά και συνδέεται με κακή επιβίωση στον καρκίνο του ενδομητρίου. SALL4 στην ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα όχι μόνο προκάλεσε την απόκτηση των ιδιοτήτων των EMT, αλλά και προώθησε τη μετανάστευση και την εισβολή μέσω της ενεργοποίησης του c-myc. Επιπλέον, βρήκαμε επίσης ότι το c-Myc χρησίμευσε ως άμεσο γονίδιο στόχος της SALL4 και συμμετείχε σε SALL4 επαγόμενη αντίσταση φαρμάκου με ρύθμιση της έκφρασης ABCB1. Συμπερασματικά, τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι SALL4 παίζει σημαντικό ρόλο στην μετάσταση καρκίνου του ενδομητρίου και των ναρκωτικών αντίσταση, με c-Myc ως μείζον κατάντη στόχου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και ιστοί

80 ενδομητρίου δείγματα καρκίνου και 10 φυσιολογικά ενδομητρίου δείγματα ελήφθησαν από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χειρουργική θεραπεία 2010-2013 στο Νοσοκομείο Σαγκάη Πανεπιστήμιο Jiao Tong της Σαγκάης Συνδεδεμένες Πρώτη Λαϊκής (Σαγκάη, Κίνα). Άλλες έξι ζευγάρια των κατεψυγμένων nontumorous ιστών και συμφωνημένα δίπλα του ενδομητρίου καρκινικούς ιστούς ελήφθησαν από έξι ασθενείς στο Νοσοκομείο Σαγκάη Πρώτα Λαϊκής από το 2014 έως το 2015. Κανένας ασθενής δεν είχε λάβει εισαγωγική θεραπεία πριν την επέμβαση. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς. Η ανθρώπινη Διερεύνηση Επιτροπή Ηθικής του Νοσοκομείου Συγγενείς Shanghai Jiao Tong University Σαγκάη Πρώτα Λαϊκής ενέκρινε την εν λόγω μελέτη.

Κυτταρική καλλιέργεια

Ο καρκίνος του ενδομητρίου κυτταρικές σειρές RL95-2, Ishikawa, HEC1-Α, HEC1-Β , AN3CA και KLE ελήφθησαν από την κινεζική Ακαδημία Επιστημών Επιτροπής Type Culture Collection (Σαγκάη, Κίνα). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε DMEM προστίθενται με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό

Ανοσοϊστοχημεία

Η ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε σε ιστούς παραφίνης χρησιμοποιώντας πρωτογενή αντισώματα ως εξής: α. Αντι-SALL4 (Santa Cruz Inc., Santa Cruz, CA, USA). Για την αξιολόγηση της έκφρασης του SALL4, ένταση χρώσης βαθμολογήθηκε ως 3 (ισχυρή), 2 (μέτρια), 1 (ασθενής), ή 0 (αρνητική). Ο βαθμός της χρώσης βαθμολογήθηκε ως 4 (76% -100%), 3 (51% -75%), 2 (26% -50%), 1 (1% -25%), ή 0 (0%). Το άθροισμα της έκτασης σκορ και το σκορ ένταση είχε θεωρηθεί ως το τελικό σκορ χρώση. Μια τελική βαφή σκοράρει ≥ 4 ήταν θετικά για έκφραση.

Νοκ ντάουν της SALL4 στα κύτταρα AN3CA

Η υψηλή έκφραση SALL4 ενδομητρίου κυτταρική γραμμή καρκινώματος AN3CA χρησιμοποιήθηκε για να καθοριστεί η σταθερή SALL4 νοκ ντάουν κυτταρική σειρά. SALL4-shRNA1 και SALL4-shRNA2 λεντοϊού πλασμίδια (GenePharma, Σαγκάη, Κίνα) χρησιμοποιήθηκαν για την εκτέλεση της νοκ ντάουν πείραμα. AN3CA κύτταρα μολυσμένα με ένα περιπλεγμένο shRNA ήταν υπόψη ως έλεγχος. SALL4 απόδοση νοκ ντάουν επιβεβαιώθηκε με western αποτύπωση. Οι αλληλουχίες για κωδικοποιημένα shRNA και SALL4 Τα siRNAs αναφέρονται ως εξής: SALL4shRNA1: 5’GCCTTGAAACAAGCCAAGCTA3 »? SALL4shRNA2: 5’CTATTTAGCCAAAGGCAAA3». και SCR-shRNA: 5’CCTAAGGTTAAGTCGCCCTCG3 «

Η επιμόλυνση

πλασμίδιο κατασκευή εκτελέστηκαν σύμφωνα με πρότυπες διαδικασίες. Για την κλωνοποίηση του (GenBank αριθμός πρόσβασης Νο. AY172738) SALL4A και (GenBank αριθμός πρόσβασης Νο. AY170621) SALL4B ισομορφές, αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) εκκινητές σχεδιάστηκαν. SALL4A και SALL4B cDNA σε έναν φορέα έκφρασης συντέθηκαν από GenePharma (Shanghai, Κίνα). κύτταρα Ishikawa ήταν σταθερά επιμολυσμένα με SALL4A ή SALL4B. Οι αλληλουχίες για το C-Myc siRNA: Sense: 5′-GGACUAUCCUGCUGCCAAGdTdT-3 ‘, Antisense: 3′-dTdT CCUGAUAGGACGACGGUUC-5’. Οι αλληλουχίες για ABCB1 siRNA: Sense: 5′-AGAGAAGAAACCAGUGGUC-3 ‘, Antisense: 5′-GACCACUGGUUUCUUCUCU-3’. Σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή, siRNA επιμολύνθηκαν χρησιμοποιώντας Lipofectamine 2000 (Invitrogen).

κηλίδωση Western

κηλίδωση Western πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [27]. Εν συντομία, οι πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν από τα καλλιεργημένα κύτταρα και διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE. Οι πρωτεΐνες που ενδιαφέρουν προσδιορίστηκαν με τη χρήση των αντίστοιχων ειδικών αντισωμάτων μετά τη μεταφορά σε μεμβράνες PVDF. Τα ακόλουθα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν για ανάλυση: αντίσωμα έναντι c-Myc (κουνελιού πολυκλωνικό, Cell Signaling (Beverly, ΜΑ, USA)? D84C12), αντι- SALL4 (μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού, Santa Cruz Inc, SC-101147) και αντι-ABCB1 ( μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού, Santa Cruz Inc, SC-55510). Αντι-Ε-καδερίνης (Rabbit πολυκλωνικά, ab53226), αντι-Ν-καντερίνης (Rabbit πολυκλωνικά, ab18203) και GAPDH (Rabbit μονοκλωνικά, ab181603) αγοράστηκαν μορφή Abcam (Cambridge, UK).

Ποσοτική RT- PCR

Σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, ολικό RNA παρασκευάστηκε χρησιμοποιώντας ΤΚΙζοΙ (Invitrogen) και αντίστροφη μεταγραφή όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28]. Εκκινητές για ABCB1, E-cadherin, N-cadherin, c-Myc και γονιδίων GAPDH συνετέθησαν από την Invitrogen Εμβιομηχανική Corporation (Σαγκάη, Κίνα). Αντιδράσεις qRT-PCR στήθηκαν με 2 μΙ προτύπου cDNA, 10μl SYBR Green ΡΟΚ Master Mix και 1 μλ μείγμα εκκινητή. Οι συνθήκες PCR ήταν 95 ° C για 5 λεπτά, ακολουθούμενο από 40 κύκλους των 94 ° C για 1 λεπτό, 60 ° C για 30 s και 72 ° C για 45 s.

χρωματίνης ανοσοκαταβύθιση

Σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή, η δοκιμασία τσιπ πραγματοποιείται με τη χρήση του κιτ ChIP-IT (Active Motif). Chromatinimmunoprecipitated DNA υποβλήθηκε σε ενίσχυση PCR για τη θέση σύνδεσης SALL4 στον υποκινητή του c-myc. Ειδικοί εκκινητές c-Myc έχουν ως εξής: προς τα εμπρός: 5′-TCAAGAGGCGAACACACAAC-3 ‘? αντίστροφη: 5’-GGCCTTTTCATTGTTTTCCA-3 ‘. Το PCR προϊόν (c-Myc: 110bp). Αναλύθηκε με ηλεκτροφόρηση σε πηκτή αγαρόζης 1% και οπτικοποιήθηκαν με χρώση βρωμιούχου αιθιδίου

Κυτταρική βιωσιμότητα δοκιμασία

Μια διαφορετική συγκέντρωση της καρβοπλατίνης (0, 20, 40 και 60 μg /ml) κύτταρα επεξεργασμένα τοποθετήθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων. Καταμέτρηση κυττάρων Kit-8 (Dojindo, Japan) χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η βιωσιμότητα των κυττάρων μετά την αγωγή με καρβοπλατίνη για 24 ώρες. Η απορρόφηση εξετάστηκε στα 450 nm μέσω ενός αναγνώστη μικροπλακός.

Colony δοκιμασία σχηματισμού

Περίπου 10

3 κύτταρα τοποθετήθηκαν σε μια πλάκα καλλιέργειας έξι φρεατίων. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με διάλυμα φορμαλδεΰδης 10% και χρωματίστηκαν με 10% Giemsa μετά την αγωγή με 20 μg /ml καρβοπλατίνη στους 37 ° C επωαστήρα για 10 ημέρες. Ο αριθμός των αποικιών που περιέχουν & gt? 50 κύτταρα μετρήθηκε υπό μικροσκόπιο

επούλωση πληγών

δοκιμασία

Μια γρατσουνιά συντάχθηκε μέσα στο στρώμα των κυττάρων μετά από 24 ώρες επώασης σε μία πλάκα 6 φρεατίων. . Οι φωτογραφίες ελήφθησαν σε 0 ώρες και 48 ώρες για να μετρηθεί η μετανάστευση. Εξετάστηκε η απόσταση των κυττάρων μετανάστευσης.

δοκιμασία κυττάρων εισβολή

1 × 10

5 κύτταρα σπάρθηκαν στον άνω θάλαμο των πλακών transwell 24 φρεατίων (Corning, ΝΥ, USA) επικαλυμμένα με Matrigel BD μήτρα βασικής μεμβράνης με μέσο χωρίς ορό. DMEM /F12 συμπληρωμένο με 10% βόειο εμβρυϊκό ορό προστέθηκε στον κάτω θάλαμο. Μετά από επώαση για 16 ώρες, οι επεμβατικές κύτταρα μετρήθηκαν υπό μικροσκόπιο. Όλα τα δείγματα απλώθηκαν σε τριπλή επανάληψη.

Στατιστικές αναλύσεις

Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση. Η στατιστική σημαντικότητα αναλύθηκε με t-test του Student. Chi τετράγωνο τεστ για 2 × 2 πίνακες χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση κατηγορικά δεδομένα. Η τιμή της P & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν.

Αποτελέσματα

Η έκφραση του SALL4 ρυθμίζεται αυξητικά και σχετίζονται με την κακή επιβίωση σε καρκίνο του ενδομητρίου

Για να προσδιοριστεί η λειτουργία του SALL4 σε καρκίνο του ενδομητρίου, εμείς πρώτον αξιολόγησε την έκφραση SALL4 σε έξι φρέσκα nontumorous τους ιστούς και τα συμφωνημένα δίπλα του ενδομητρίου καρκινικούς ιστούς. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Α, η έκφραση SALL4 σε ενδομητρίου καρκινικούς ιστούς ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε nontumorous ιστούς (Ρ & lt? 0,05). Η έκφραση του SALL4 σε 80 ενδομητρίου καρκινικούς ιστούς και 10 φυσιολογικούς ενδομητρίου ιστούς εξετάστηκε μέσω ανοσοϊστοχημείας. Βρήκαμε ότι SALL4 ήταν υψηλότερη σε καρκίνο του ενδομητρίου (56/80) σε σύγκριση με την κανονική του ενδομητρίου ιστούς (0/10) (Σχήμα 1Β, S1 πίνακα). Η διαφορά ήταν στατιστικά σημαντική και στις δύο ομάδες (P & lt? 0,01). Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης SALL4 και κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά ήταν έδειξε στον Πίνακα 1. Δείξαμε ότι αυξημένη έκφραση SALL4 σε καρκίνο του ενδομητρίου συσχετίστηκε σημαντικά με λεμφαδένα μετάσταση (Ρ = 0,048), το στάδιο του όγκου (Ρ = 0,001), μυομητριακές εισβολή ( Ρ = 0,007) και την κακή επιβίωση (Σχήμα 1 C). Συμπερασματικά, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι η έκφραση SALL4 στον καρκίνο του ενδομητρίου είναι στενά συνδεδεμένη με κακή επιβίωση των ασθενών.

(Α) Η έκφραση του SALL4 ενδομητρίου καρκινικούς ιστούς και nontumorous ιστούς εκτιμήθηκε μέσω κηλίδωση Western. (Β) Οι εικόνες έδειξαν ανοσοϊστοχημική χρώση SALL4 στην κανονική του ενδομητρίου και του ενδομητρίου καρκινικούς ιστούς (00D7200). ανάλυση (C) Kaplan-Meier έδειξε ότι η έκφραση του SALL4 συσχετίστηκε με κακή επιβίωση των ασθενών.

Η

SALL4 επάγει την EMT και επεμβατική φαινοτύπου σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα

θέλαμε να διαπιστωθεί αν SALL4 συμμετείχε στην EMT και μετάσταση μεταξύ του ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα, η έκφραση SALL4 αξιολογήθηκε να επιλέξουν κατάλληλες κυτταρικές γραμμές για την έρευνα μας σε καρκίνο του ενδομητρίου κυτταρικές σειρές: AN3CA, KLE, HEC1-Β, HEC1-Α, RL-952 και Ishikawa. Όπως φαίνεται στο σχήμα 2Α, AN3CA και KLE κύτταρα έδειξαν προφανή φαινότυπο μεσεγχυματικά, αλλά Ishikawa και RL-952 κύτταρα έδειξαν εμφανή επιθηλιακά χαρακτηριστικά (S1 Εικ). Η έκφραση του SALL4 συσχετίστηκε με τα χαρακτηριστικά των επιθηλιακών /μεσεγχυματικά σε αυτές ενδομητρίου καρκινικές κυτταρικές σειρές. Κύτταρα που σχετίζονται με σχετικά ισχυρά χαρακτηριστικά μεσεγχυματικά παρουσίασαν υψηλή έκφραση SALL4. Δύο Τα siRNAs που στοχεύουν ειδικά τόσο SALL4A και SALL4B χρησιμοποιήθηκαν για να χτυπήσει κάτω ενδογενή SALL4 στα κύτταρα AN3CA με σχετικά υψηλότερη έκφραση της SALL4. Knockdown των επιπέδων της πρωτεΐνης SALL4 σε κύτταρα AN3CA οδήγησε σε αυξημένη πρωτεΐνη και τα επίπεδα mRNA της ετικέτας επιθηλιακών Ε-καδερίνης και μειωμένη εκείνη του μεσεγχυματικών δείκτη Ν-cadherin, που συνοδεύουν με κύτταρα μορφολογικά μετάβαση από ένα διασκορπισμένο σχήματος ατράκτου εμφάνιση μεσεγχυματικών σε ένα στρογγυλό, σφικτά συσκευασμένα μορφολογία (Σχήμα 2Β, 2C και 2D). Επιπλέον, knockdown του SALL4 (Σχ 2Ε και 2F) σε κύτταρα AN3CA εξασθενημένα μετανάστευση των κυττάρων και την ικανότητα εισβολής. Αντιθέτως, τα κύτταρα Ishikawa με χαμηλό ενδογενές επίπεδο του SALL4 επιμολύνθηκαν με SALL4A και διάνυσμα SALL4B cDNA (φορέας ελέγχου). Η υπερέκφραση SALL4 οδήγησε σε μια μορφολογική αλλαγή από ένα σφικτά συσκευασμένα, στρογγυλή μορφολογία σε σχήμα ατράκτου διάσπαρτα μορφολογία στα κύτταρα Ishikawa, μειώνουν τα επίπεδα της πρωτεΐνης και του mRNA της ετικέτας επιθηλιακών E-cadherin και την αύξηση αυτή του μεσεγχυματικών δείκτη N-cadherin (Σχήμα 2Β , 2C και 2D). Η υπερέκφραση του SALL4 αυξηθεί δραματικά τη μετανάστευση και εισβολή ικανότητα των κυττάρων Ishikawa (Σχ 2Ε και 2F). Εν συντομία, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι SALL4 επάγει την ΕΜΤ και μετάστασης σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα

(Α) Ν-καδερίνης, Ε-καδερίνης, SALL4A και SALL4B εκτιμήθηκαν με κηλίδωση Western ενδομητρίου καρκινικές κυτταρικές σειρές:. AN3CA , η προσφεύγουσα, HEC1-Β, HEC1-Α, RL-952 και Ishikawa. μορφολογία (Β) κυττάρων εξετάσθηκε σε κύτταρα Ishikawa επιμολυσμένα με φορέα SALL4A ή SALL4B έκφρασης και κύτταρα AN3CA επιμολυσμένα με SALL4-SH1 ή SALL4-SH2. (Γ) (δ) Η πρωτεΐνη και τα επίπεδα mRNA του Ε-καδερίνης και Ν-καδερίνης αναλύθηκαν σε κύτταρα Ishikawa επιμολυσμένα με φορέα SALL4A ή SALL4B έκφρασης και κύτταρα επιμολυσμένα με AN3CA SALL4-SH1 ή SALL4-SH2. (Ε) Η μετανάστευση των κυττάρων και την εισβολή του Ishikawa ή AN3CA εξετάστηκαν μέσω των πληγών δοκιμασία επούλωσης και φρεατίων δοκιμασία εισβολής. (Στ) ο βαθμός της μετανάστευσης και της εισβολής στα κύτταρα Ishikawa και AN3CA αναλύθηκε. * P & lt?. 0.01

Η

δίσκους SALL4 χημειοαντοχή στην ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα

Η αντοχή στα φάρμακα είναι ένα σημαντικό εμπόδιο που επηρεάζει το συνολικό ποσοστό επιβίωσης για τις προηγμένες και υποτροπιάζοντα ασθενείς με καρκίνο του ενδομητρίου. Επιδιώξαμε να εξετάσουμε αν SALL4 σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα συμμετείχαν στη μεσολάβηση κυτταρική αντίσταση σε χημειοθεραπευτικά φάρμακα. Αποκαλύφθηκε με δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας που μία αύξηση στην βιωσιμότητα των κυττάρων κατά την έκθεση σε καρβοπλατίνη ήταν πολύ πιο έντονη σε κύτταρα Ishikawa επιμολυσμένα με είτε SALL4A ή SALL4B ό, τι σε κύτταρα επιμολυσμένα με άδειο φορέα (Σχήμα 3Α). Εν τω μεταξύ, η υπερέκφραση SALL4 στο ρόλο του πολλαπλασιασμού κυττάρων εξετάστηκε μέσω ανάλυσης σχηματισμού κλώνου σε κύτταρα Ishikawa σε επεξεργασία με 20 μg /ml καρβοπλατίνη. κύτταρα Ishikawa επιμολυσμένα με SALL4A ή SALL4B επέδειξαν αυξημένη αντίσταση καρβοπλατίνη και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε σύγκριση με τον έλεγχο (Εικόνα 3Β). Αντιθέτως, δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας και δοκιμασία σχηματισμού κλώνου έδειξε ότι knockdown του SALL4 μείωσε σημαντικά την αντίσταση στην καρβοπλατίνη σε κύτταρα AN3CA (Εικ 3Α και 3Β). Συνοπτικά, αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι SALL4 επάγει αντίσταση φαρμάκου σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα.

κύτταρα (Α) Ishikawa επιμολυσμένα με SALL4A ή φορέα έκφρασης SALL4B και AN3CA κύτταρα επιμολυσμένα με SALL4-SH1 ή SALL4-SH2 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με το διεξήχθησαν υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις καρβοπλατίνη, και δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας. κύτταρα (Β) Ishikawa επιμολυσμένα με φορέα SALL4A ή SALL4B έκφρασης και κύτταρα επιμολυσμένα με AN3CA SALL4-SH1 ή SALL4-SH2 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με καρβοπλατίνη, δοκιμασία σχηματισμού κλώνου εκτελέστηκαν. ** P & lt? 0,01, * P & lt?. 0.05

Η

ABCB1 είναι κρίσιμη για SALL4 που προκαλείται από την αντίσταση των ναρκωτικών

Η πλειοψηφία της ανθεκτικότητας στα φάρμακα στον καρκίνο του ανθρώπου συνδέονται με την ΑΤΡ-δεσμευτική κασέτα (ABC) μεταφορέων σε πολλαπλά φάρμακα. Δεν είναι σαφές αν ABCB1 εμπλέκεται με SALL4 επαγόμενη αντίσταση χημειοθεραπεία και κατάντη γονιδίου στόχου ρυθμίζεται άμεσα από SALL4 στον καρκίνο του ενδομητρίου. Αποκαλύφθηκε μέσω κηλίδωση western ότι SALL4 ρύθμιση προς τα πάνω σε SALL4A- ή SALL4B-επιμολυσμένα κύτταρα Ishikawa αύξησε σημαντικά την πρωτεΐνη έκφραση ABCB1 σε σύγκριση με άδειο φορέα (Σχήμα 4Α). Ένα παρόμοιο πείραμα SALL4 νοκ ντάουν τέθηκε σε ισχύ στα κύτταρα AN3CA. Όπως φαίνεται στο Σχ 4Α, SALL4 σίγηση μπορούσε προφανώς να μειώσει την έκφραση της πρωτεΐνης ABCB1. Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι SALL4 θα μπορούσε να ρυθμίζουν προς τα πάνω την έκφραση της ABCB1. Επειδή ABCB1 (MDR1) ήταν απαραίτητη για αντοχή φαρμάκου και ρυθμίζεται αυξητικά σε καρκίνο του ενδομητρίου, θέλαμε να προσδιοριστεί αν ABCB1 συμμετείχε στην SALL4 επαγόμενης αντοχής φαρμάκου. Έχουμε περαιτέρω αθόρυβη έκφραση ABCB1 από ειδικά siRNA σε κύτταρα Ishikawa υπερεκφράζουν SALL4, και βρήκαν ότι προς τα κάτω ρύθμιση του ABCB1 μειωμένη SALL4 προκαλούμενη αντοχή φαρμάκου (Εικόνα 4Β και 4C). Η προς τα κάτω ρύθμιση των επιπέδων mRNA και πρωτεΐνης ABCB1 επιβεβαιώθηκε με qRT-PCR και κηλίδωση Western (Σχήμα 4D και 4Ε). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα καταδεικνύουν ότι SALL4 επάγει χημειοαντοχή μέσω της ρύθμισης του ABCB1 σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα.

(Α) κηλίδωση Western έδειξε ότι η έκτοπη υπερέκφραση της SALL4 ρυθμίζεται αυξητικά την έκφραση της πρωτεΐνης σε κύτταρα ABCB1 Ishikawa και knockdown του SALL4 σε AN3CA κύτταρα ρυθμίζεται προς τα κάτω την έκφραση ABCB1. (Β) (C) κύτταρα Ishikawa επιμολυσμένα με SALL4A ή φορέα SALL4B ή φορέα ελέγχου επιμολύνθηκαν με si-ABCB1 ή τον έλεγχο siRNA. ευαισθησία Drug κυττάρων Ishikawa στην καρβοπλατίνη εξετάσθηκε με ανίχνευση κυτταρικής βιωσιμότητας και δοκιμασία σχηματισμού κλώνου. (D) (Ε) Η πρωτεΐνη και τα επίπεδα mRNA του ABCB1 αξιολογήθηκαν με κηλίδωση Western και qRT-PCR. ** P & lt?. 0.01

Η

c-Myc απαιτείται για SALL4 επαγόμενη EMT και ναρκωτικών αντίσταση

c-Myc παίζει σημαντικό ρόλο σε πολλές ογκογόνο διεργασίες, συμπεριλαμβανομένης της ανθεκτικότητας στα φάρμακα όγκων και μετάσταση. Η προηγούμενη έρευνα έχει δείξει ότι η SALL4 στο ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα προωθούμενη δραστηριότητα μεταγραφική γ-Myc [29]. Ήμασταν ενδιαφέρονται να προσδιοριστεί αν το c-Myc απαιτήθηκε για SALL4 επαγόμενη EMT και την αντίσταση χημειοθεραπεία. Συνεπής με την προηγούμενη μελέτη, δείξαμε ότι η έκφραση του c-myc συσχετίστηκε θετικά με εκείνη του SALL4 με κηλίδωση Western, και c-Myc ήταν ένα άμεσο στόχο SALL4 μέσω δοκιμασίας τσιπ ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα (Σχήμα 5Α, 5Β και S2 Σύκο). Εμείς επόμενη σιγήσει έκφραση c-Myc με siRNA σε SALL4A- και SALL4B επιμολυσμένα κύτταρα Ishikawa, και έδειξε ότι το c-Myc μειορύθμιση μειωθεί δραματικά SALL4 επαγόμενη κυτταρική εισβολή και αντοχή φαρμάκου (Σχήμα 5C, 5D και 5Ε). Τα επίπεδα πρωτεΐνης και του mRNA του c-myc ανιχνεύθηκαν με κηλίδωση Western και qRT-PCR (Σχ 5F και 5G). Επιπλέον, η αντιστροφή της επεμβατικής φαινότυπο που επάγεται από το c-Myc φίμωση σε SALL4 υπερέκφραση σε κύτταρα Ishikawa επιβεβαιώθηκε με ρύθμιση προς τα κάτω των μεσεγχυματικών δείκτη Ν-καντερίνης και προς τα πάνω ρύθμιση των επιθηλιακών δείκτη Ε-καδερίνης με κηλίδωση Western και qRT-PCR (Σχ 5F και 5Η ). Ταυτόχρονα, βρήκαμε επίσης ότι η θεραπεία c-Myc siRNA μειωθεί σημαντικά το επίπεδο της πρωτεΐνης ABCB1 SALL4 επαγόμενη (Σχήμα 5F). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το c-Myc απαιτείται για SALL4 επαγόμενη EMT και την αντίσταση χημειοθεραπεία.

(Α) Η έκφραση του c-myc συσχετίζεται θετικά με εκείνη του SALL4 στα κύτταρα Ishikawa και AN3CA με western αποτύπωση ανάλυση. (Β) γ-Myc ήταν ένα άμεσο στόχο SALL4 μέσω προσδιορισμού chip. (Γ) ρύθμιση προς τα κάτω του c-myc με ειδικό siRNA μειωμένη SALL4 επαγόμενη εισβολή σε κύτταρα Ishikawa υπερεκφράζουν SALL4 από Transwell δοκιμασίας. (D) (Ε) ρύθμιση προς τα κάτω του c-myc μειωμένη SALL4 επαγόμενης αντίστασης φαρμάκου σε κύτταρα Ishikawa υπερεκφράζουν SALL4 μέσω προσδιορισμού της βιωσιμότητας και δοκιμασία σχηματισμού κλώνου. (F) Η έκφραση της EMT που σχετίζονται με δείκτες και ABCB1 εκτιμήθηκε με κηλίδωση western σε κύτταρα Ishikawa. (G) (H) Τα επίπεδα mRNA του c-myc, Ε-καδερίνης και Ν-καδερίνης ανιχνεύθηκαν μέσω qRT-PCR σε κύτταρα Ishikawa. ** P & lt?. 0.01

Η

Συζήτηση

Είναι ολοένα και πιο σαφές ότι η επιθετική καρκινικά κύτταρα δείχνουν ένα πλαστικό, πολυδύναμα φαινότυπο παρόμοιο με το πολυδύναμα /βλαστικά κατάσταση που μοιάζει με εμβρυϊκά κύτταρα και καρκινικά κύτταρα της βασικής-όπως [30]. Το εμβρυϊκό κύτταρο-σαν υπογραφή γονιδιακή έκφραση στέλεχος έχει αποδειχθεί ότι σχετίζεται στενά με πτωχά διαφοροποιημένο επιθετική ανθρώπινων όγκων και έχει θεωρηθεί ως ένας πιθανός στόχος για τις μελλοντικές θεραπείες του καρκίνου [31]. SALL4 είναι ένας παράγοντας μεταγραφής που διατηρεί pluripotency και αυτο-ανανέωση σε εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα και παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην εμβρυϊκή ανάπτυξη. Ωστόσο, η λειτουργική ρόλους και μοριακός μηχανισμός SALL4 στον καρκίνο του ενδομητρίου δεν είναι καλά χαρακτηρισμένες.

Στην παρούσα μελέτη, δείξαμε ότι η έκφραση SALL4 ρυθμίζεται αυξητικά σε καρκίνο του ενδομητρίου και συσχετίζεται θετικά με κακή πρόγνωση και επιθετικό ιδιότητες. Δείξαμε ότι η αυξημένη έκφραση του SALL4 προωθείται μετάστασης με διεργασία EMT καθώς και αντίσταση χημειοθεραπεία μέσω διαμόρφωσης ABCB1 σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα. Αξίζει να σημειωθεί, διαπιστώσαμε ότι ένας μεταγενέστερος στόχος των SALL4, c-myc, ήταν απαραίτητο να SALL4 επαγόμενη EMT και την έκφραση της ABCB1. Αυτά τα ευρήματα αποκάλυψαν ότι SALL4 και c-Myc μπορεί να είναι πολλά υποσχόμενη θεραπευτικοί στόχοι σε καρκίνο του ενδομητρίου (Σχήμα 6).

SALL4 επαγόμενη EMT και ABCB1 έκφρασης, το οποίο στη συνέχεια συνέβαλε στην εισβολή και χημειοαντίσταση σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα. ABCB1 ήταν κρίσιμη για SALL4 που προκαλείται χημειοαντίσταση. Επιπλέον, SALL4 ρυθμίζεται προς τα πάνω και την έκφραση του c-myc, η οποία απαιτείται για SALL4 επαγόμενη EMT και ABCB1 έκφρασης. Συνοπτικά, SALL4 επαγόμενη EMT και αντοχή φαρμάκου μέσω της ενεργοποίησης του c-myc σε καρκίνο του ενδομητρίου.

Η

SALL4 παίζει σημαντικούς ρόλους σε πολλαπλές διεργασίες που σχετίζονται με όγκους, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων της μετάστασης και της αντίστασης στα φάρμακα. Η μετάσταση είναι όχι μόνο η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο, αλλά και οι κακοήθεις ιδιότητες του καρκίνου. Τα καρκινικά κύτταρα τα οποία υποβάλλονται σε διαδικασία EMT θα αποκτήσουν την ικανότητα εισβολής και της μετάστασης. Η παρούσα έρευνα έδειξε ότι SALL4 επάγεται πρωτεΐνες ΕΜΤ σχετίζονται συμπεριλαμβανομένης μια μείωση στην κυτταρική μόρια προσκόλλησης Ε-καδερίνης και αύξηση των μεσεγχυματικών δείκτη Ν-καδερίνης. Η έκφραση της E-cadherin και N-cadherin συνδέθηκε στενά με τα καρκινικά κύτταρα επεμβατική και μεταστατική ικανότητα. Τα αποτελέσματα υποστηρίχθηκαν από τις προηγούμενες μελέτες που δείχνουν ότι η κατιούσα ρύθμιση της έκφρασης της E-cadherin συσχετίστηκε σημαντικά με μυομήτριο εισβολή και την επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του ενδομητρίου [32, 33]. Οι πρόσφατες έρευνες έχουν δείξει ότι SALL4 συμμετείχε στην μετάσταση και εξέλιξης σε καρκίνο του παχέος εντέρου [34]. Επιπλέον, η υπερέκφραση SALL4 επαγόμενη EMT στο γαστρικό καρκινικά κύτταρα, με αυξημένη έκφραση του Twist1, Ν-cadherin και μειωμένη έκφραση Ε-καδερίνης [15]. Εν τω μεταξύ, αναφέρθηκε ότι SALL4 κατέστειλε την έκφραση του γονιδίου πρόσφυσης Cdh1 (Ε-καδερίνης), και θετικά ρύθμιζε την Cdh1 καταστολέα ZEB1 και διατηρήθηκε διασπορά των κυττάρων σε βασικό-όπως ο καρκίνος του μαστού [35]. Αυτή στοιχεία έδειχναν ότι SALL4 θα μπορούσε να προκαλέσει EMT και να προωθήσει την εισβολή σε μια ποικιλία των όγκων. Σε συμφωνία με μια προηγούμενη μελέτη [29], βρήκαμε ότι προς τα πάνω ρύθμιση του SALL4 αυξήθηκε σημαντικά ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα μετανάστευση και εισβολή. Το πιο σημαντικό, αποδείξαμε ότι η υπερέκφραση SALL4 ήταν σε θέση να επάγει ΕΜΤ και την προώθηση της μετάστασης σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα.

Χημειοθεραπευτικά είναι η πιο αποτελεσματική θεραπεία για τους ασθενείς με μεταστατικό καρκίνο. Ωστόσο, η αντίσταση των ναρκωτικών παραμένει ένα σοβαρό εμπόδιο στην επιτυχή χημειοθεραπεία [21]. Μεταξύ των διαφόρων μηχανισμών που εμπλέκονται στην χημειοθεραπευτικά αντίσταση, ABC μεταφορείς ήταν πιστεύεται ότι είναι στενά συνδεδεμένη με ανθεκτικότητα στα φάρμακα. Τοποθέτηση αποδεικτικά στοιχεία δείχνουν ότι το ABC μεταφορείς έπαιξε σημαντικό ρόλο στη SALL4 επαγόμενη χημειοθεραπευτική αντοχή σε μία ποικιλία καρκίνων. Για παράδειγμα, αναφέρθηκε πρόσφατα ότι SALL4 είχε εμπλακεί σε χημειοθεραπευτικά αντίσταση με απευθείας ρύθμιση της προς τα κάτω του γονιδίου στόχου ABCA3 στην οξεία μυελογενή λευχαιμία [10]. Επιπλέον, πρόσφατες αναφορές έχουν δείξει ότι SALL4 ρυθμίζονται θετικά την έκφραση του ABCA3, που επηρεάζουν την ευαισθησία σε χημειοθεραπεία φαρμάκου σε χρόνια μυελοειδή λευχαιμία [36]. Η υπερέκφραση του SALL4 οδήγησε σε αύξηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων που σχετίζονται με την υπερέκφραση του (ATP) -σύνδεση κασέτα-G2 (ABCG2) σε ηπατοκυτταρικά καρκινώματα [13]. ABCB1 είναι το πρωτότυπο αυτού του γονιδίου υπεροικογένειας, και η απορρύθμιση του έχει συσχετισθεί με αντοχή φαρμάκου σε διάφορους τύπους καρκίνων [21]. Αποδεικτικά στοιχεία είχαν δείξει ότι η έκφραση των ABCB1 ήταν ανώμαλη σε καρκίνο του ενδομητρίου [23]. Τα ευρήματα αυτά μας ώθησε να διερευνήσει κατά πόσον ABCB1 συμμετείχε σε SALL4 που προκαλείται από την αντίσταση χημειοθεραπεία στο καρκίνωμα του ενδομητρίου. Σύμφωνα με τον ρόλο των SALL4 επαγόμενης αντίστασης φαρμάκου μέσω διαμόρφωσης ABC μεταφορέων σε άλλους καρκίνους, βρήκαμε ότι ABCB1 είχε εμπλακεί σε SALL4 επαγόμενη αντίσταση φαρμάκου σε καρκίνο του ενδομητρίου. Προς τα κάτω ρύθμιση ABCB1 μπλοκάρει σημαντικά SALL4 επαγόμενη ανθεκτικότητα στα φάρμακα. Αυτά τα δεδομένα πρότειναν ότι ABCB1 ήταν ένας σημαντικός μεσολαβητής μεταξύ SALL4 επαγόμενης αντίστασης φαρμάκου σε καρκίνο του ενδομητρίου.

Η προηγούμενη μελέτη έχει δείξει ότι η προκαλούμενη από c-Myc EMT σε επιθηλιακά κύτταρα μαστού [37]. Επιπλέον, το c-Myc μπορεί να συμβάλει στην καρκινικά κύτταρα στη χημειοθεραπεία φαινότυπο μέσω ρύθμισης των γονιδίων μεταφορέα ABC [38]. Έχει αναφερθεί ότι το c-Myc συνδυασμό με επιγενετικές μηχανισμούς ρυθμίζεται ABC έκφραση γονιδίων μεταφορέα σε CML [39]. Στην παρούσα μελέτη, διαπιστώσαμε ότι το c-Myc ήταν ένα άμεσο στόχο SALL4 και που απαιτούνται για την ΕΜΤ και την έκφραση που προκαλείται από ABCB1 SALL4, που οδηγεί σε μετάσταση και αντοχή φαρμάκου σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα. Απεδείχθη από προηγούμενες μελέτες ότι υψηλότερη έκφραση του c-myc ήταν σημαντικά σχετίζονται με μειωμένη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνωμα του ενδομητρίου [40, 41]. Επιπλέον, αναφέρθηκε επίσης ότι η μεταγραφική δραστικότητα του c-myc ήταν ρυθμίζεται άμεσα από SALL4 σε ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα [29]. Τα δεδομένα μας ήταν σύμφωνα με την προηγούμενη αυτά τα αποτελέσματα. Ωστόσο, η παρούσα μελέτη ήταν η έλλειψη στοιχείων που εμπλέκονται στην αξιολόγηση της έκφρασης ABCB1 και c-Myc στο ενδομήτριο δείγματα καρκίνου. Θα ήταν πιο πειστική αν τα δεδομένα που το επίπεδο έκφρασης της SALL4 συσχετιζόταν θετικά με εκείνες των ABCB1 και c-Myc σε ένα υποσύνολο του ενδομητρίου δειγμάτων καρκίνου συμπληρώθηκε. Εν ολίγοις, το c-Myc ήταν η ουσία στο SALL4 επαγόμενη EMT και ναρκωτικών αντίσταση και μπορεί να είναι ένα θεραπευτικό στόχο για καρκίνο του ενδομητρίου.

Στο σύνολό τους, αποδείξαμε ότι η έκφραση SALL4 ρυθμίζεται αυξητικά στον καρκίνο του ενδομητρίου και συσχετίζεται θετικά με κακή πρόγνωση και επιθετικές ιδιότητες. Εντοπίσαμε ότι SALL4 όχι μόνο προκαλείται από EMT, αλλά και αυξημένη αντοχή φαρμάκου μέσω ABCB1 στην ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα. Δείξαμε επίσης ότι το c-Myc ήταν απαραίτητη για SALL4 επαγόμενη EMT και την αντίσταση χημειοθεραπεία. Συμπερασματικά, η μελέτη μας παρέχεται ένα δυναμικό μοριακών μηχανισμών που σχετίζονται με την επαγόμενη SALL4 εισβολή και χημειοθεραπεία αντίσταση στον καρκίνο του ενδομητρίου. SALL4 και c-Myc μπορεί να είναι μυθιστόρημα θεραπευτικούς στόχους για τον καρκίνο του ενδομητρίου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Εικ. SALL4 προκαλεί EMT στην ενδομητρίου καρκινικά κύτταρα

(A) Το επίπεδο του mRNA της E-cadherin και N-cadherin αξιολογήθηκε μέσω qRT-PCR σε καρκίνο του ενδομητρίου κυτταρικές σειρές:. AN3CA, KLE, HEC1-Β, HEC1-Α, RL . -952 και Ishikawa

doi: 10.1371 /journal.pone.0138515.s001

(ΔΕΘ)

S2 Εικ.