Αφηρημένο

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια επιθετική μορφή καρκίνου και πρόγνωση παραμένει φτωχή. Ως εκ τούτου, επιπλέον αποτελεσματική θεραπεία απαιτείται για να αυξήσει ή /και συμπληρώνουν την τρέχουσα θεραπεία. CD147, υψηλή έκφραση σε καρκίνο του παγκρέατος, εμπλέκεται στη μεταστατική διαδικασία και θεωρείται ένα καλό υποψήφιο για στοχευμένη θεραπεία. CD147-specfic απεικόνισης θα μπορούσαν να είναι χρήσιμα για την επιλογή των κατάλληλων ασθενών. Ως εκ τούτου, αξιολογήσαμε το δυναμικό μιας πλήρως ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-CD147 059-053 ως τομογραφία νέα εκπομπής ποζιτρονίων (ΡΕΤ) ανιχνευτή για τον καρκίνο του παγκρέατος.

Μέθοδοι

έκφραση CD147 αξιολογήθηκε σε τέσσερα παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές (MIA Paca-2, PANC-1, BxPC-3, και AsPC-1) και μία κυτταρική γραμμή ποντικού Α4 ως αρνητικός έλεγχος. Κυτταρική δέσμευση, ανταγωνιστικές δοκιμασίες αναστολής και εσωτερίκευση διεξήχθησαν με

125I-,

67Ga-, ή

89Zr-επισημασμένο 059-053.

In vivo

βιοκατανομή

125I- ή

89Zr-επισημασμένο 059-053 διεξήχθη σε ποντίκια που φέρουν ΜΙΑ Paca-2 και Α4 όγκων. απεικόνιση ΡΕΤ με [

89Zr] 059-053 διεξήχθη στο υποδόριο και ορθοτοπική μοντέλα ποντικών όγκου.

Αποτελέσματα

Μεταξύ των τεσσάρων παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές, MIA κύτταρα Paca-2 έδειξε το υψηλότερο έκφραση του CD147, ενώ Α4 κύτταρα δεν είχε καμία έκφραση. Η ανοσοϊστοχημική χρώση έδειξε ότι MIA Paca-2 ξενομοσχευμάτων επίσης ιδιαίτερα εξέφρασε CD147

in vivo

. Ραδιοσημασμένη 059-053 δεσμεύονται ειδικά με MIA κύτταρα Paca-2 με υψηλή συγγένεια, αλλά όχι να Α4. [

89Zr] 059-053 πρόσληψη σε ΜΙΑ Paca-2 όγκοι αυξήθηκαν με το χρόνο από την δόση με ένεση 11,0 ± 1,3% ανά γραμμάριο (ID /g) κατά την ημέρα 1 έως 16,9 ± 3,2% ID /g την ημέρα 6, ενώ το [ ,,,0],

125Ι] 059-053 πρόσληψη ήταν σχετικά χαμηλό και μειώθηκε με το χρόνο, γεγονός που υποδηλώνει ότι 059-053 είχε εσωτερικοποιηθεί μέσα στα κύτταρα του όγκου

in vivo

και

125I απελευθερώθηκε από τα κύτταρα. ΡΕΤ με [

89Zr] 059-053 σαφώς ορατά υποδόρια και ορθοτοπική όγκους.

Συμπέρασμα

[

89Zr] 059-053 είναι μια πολλά υποσχόμενη ανιχνευτής ΡΕΤ για την απεικόνιση έκφραση CD147 σε καρκίνο του παγκρέατος και έχει τη δυνατότητα να επιλέξει τα κατάλληλα ασθενείς με όγκους CD147 εκφράζουν οι οποίοι θα μπορούσαν να κερδίσουν οφέλη από τη θεραπεία με αντι-CD147

Παράθεση:. Sugyo Α, Tsuji ΑΒ, Sudo η, Nagatsu Κ, Κοϊζούμι M, Y Ukai , et al. (2013) Αξιολόγηση της

89Zr-Επισημασμένο Ανθρώπινα αντι-CD147 μονοκλωνικό αντίσωμα ως Τομογραφίας Εκπομπής Ποζιτρονίων Probe σε ένα μοντέλο ποντικού από καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 8 (4): e61230. doi: 10.1371 /journal.pone.0061230

Επιμέλεια: Γ Andrew Boswell, Genentech, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 24 Δεκεμβρίου, 2012? Δεκτές: 7, Μαρτίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: 5η του Απριλίου 2013

Copyright: © 2013 Sugyo et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο ραδιολογικής Επιστημών στο TS. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια συνήθως διαγιγνώσκεται καρκίνος και η όγδοη αιτία θανάτου από καρκίνο παγκοσμίως, αντιπροσωπεύοντας 278.684 των εκτιμώμενων νέων περιπτώσεων καρκίνου και 266669 της εκτιμώμενης θανάτων από καρκίνο [1] (gLOBOCAN 2008, http: //globocan. iarc.fr/). ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος παρούσα δευτερεύοντα συμπτώματα σε ιατρική αξιολόγηση, και η σιωπηλή φύση αυτής της ασθένειας που δεν είναι εμφανής μέχρι αργά στη διαδικασία της νόσου συμβάλλει σε μια πολύ φτωχή πρόγνωση. Μόνο το 7% των ασθενών παρουσιάζει με εντοπισμένο, δυνητικά ιάσιμη όγκων κατά τη διάγνωση και το 50% περίπου των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος διαγιγνώσκονται σε προχωρημένα στάδια της νόσου. [2] Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος είναι 6% στις Ηνωμένες Πολιτείες [2]. Ως εκ τούτου, επιπλέον αποτελεσματική αντικαρκινική θεραπεία είναι απαραίτητη για την αύξηση ή /και συμπληρώνουν τις παρούσες στρατηγικές θεραπείας, όπως χειρουργική επέμβαση και χημειο /ακτινοθεραπεία, ιδιαίτερα για τους ασθενείς με μεταστατικό καρκίνο.

CD147 (τα λεγόμενα EMMPRIN) είναι ένας 55- kDa διαμεμβρανική πρωτεΐνη της υπεροικογένειας των ανοσοσφαιρινών και εμπλέκεται σε πολλές φυσιολογικές λειτουργίες, όπως η σπερματογένεση, εμφύτευση εμβρύου, την ενεργοποίηση των λεμφοκυττάρων, σχηματισμός νευρωνικό δίκτυο σε πρώιμα στάδια και επαγωγή μονοκαρβοξυλικό μεταφορέων [3]. CD147 εκφράζεται σε πολλούς τύπους όγκων, συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του παγκρέατος [4]. CD147 επάγει την έκφραση των μεταλλοπρωτεϊνασών μήτρας (MMPs), όπως ΜΜΡ-1, ΜΜΡ-2, ΜΜΡ-9, ΜΜΡ-ΜΤ1, και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα. Η υπερέκφραση του CD147 σε κύτταρα καρκίνου του μαστού με μορφομετατροπή φορέα έκφρασης οδήγησε σε αυξημένη ανάπτυξη και μετάσταση όγκου [5]. Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι CD147 εμπλέκεται σε εισβολή, μετάσταση, αγγειογένεση και ο όγκος του πολλαπλασιασμού, και ως εκ τούτου είναι ένας καλός υποψήφιος για τη στοχευμένη θεραπεία του καρκίνου. Η εξάντληση του CD147 με παρεμβολή RNA ή ειδικό αντίσωμα μείωσε τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή, τη μετάσταση των όγκων και το σχηματισμό αιμοφόρων αγγείων, και επομένως κλινικές δοκιμές θεραπείας CD147 στόχευσης έχουν διεξαχθεί [3], [6], [7]. Αν και η συχνότητα εμφάνισης της έκφρασης CD147 είναι υψηλή (87%) σε καρκίνο του παγκρέατος [4], ορισμένοι όγκοι δεν εκφράζουν CD147, και έτσι δεν είναι κατάλληλοι υποψήφιοι για θεραπεία CD147-στόχο. Επομένως, είναι σημαντικό να χρησιμοποιηθεί μια μέθοδος μη επεμβατική απεικόνιση για να αξιολογηθεί η κατάσταση CD147 σε μεμονωμένο όγκο κατά τον χρόνο του σχεδιασμού θεραπείας για την επιλογή κατάλληλων ασθενών για θεραπεία CD147 στόχευση.

Πρόσφατα, απομονώθηκε ένα νέο πλήρως ανθρώπινο μονοκλωνικό IgG

1 αντίσωμα που ορίζεται ως 059-053 έναντι CD147 από μια μεγάλης κλίμακας βιβλιοθήκη ανθρώπινου αντισώματος κατασκευάζεται χρησιμοποιώντας ένα σύστημα εμφάνισης φάγου που ενσωματώνεται μία εξαιρετικά αποτελεσματική μέθοδο διαλογής που ονομάζεται απομόνωση των συμπλοκών αντιγόνου-αντισώματος μέσω οργανικού διαλύτη, με καρκίνο του παγκρέατος που ζουν κύτταρα [8]. Αυτό το αντίσωμα επάγει κυτταρομεσολαβητική κυτταροτοξικότητα εξαρτώμενη από αντίσωμα (ADCC) και αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του καρκίνου του παγκρέατος κυττάρων [8], [9]. Στην παρούσα μελέτη, ραδιοσημάνθηκαν 059-053, και να αξιολογηθεί η

in vitro

και

in vivo

ιδιότητες ως ανιχνευτής νέα τομογραφία εκπομπής ποζιτρονίων (ΡΕΤ) για την απεικόνιση CD147 εκφράζουν όγκων σε ένα παγκρεατικό μοντέλο καρκίνου.

Υλικά και Μέθοδοι

Cells

Ανθρώπινο παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές (MIA Paca-2, PANC-1, BxPC-3, και AsPC-1) ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA). Α4 κύτταρα, που ιδρύθηκε από κύτταρα 3Τ3 ποντικού διαμολυσμένα με φορέα ανθρώπινο HER2-έκφραση [10], χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικός έλεγχος. Τα κύτταρα διατηρήθηκαν σε μέσο RPMI 1640 (Sigma, St. Louis, ΜΟ, USA) συμπληρωμένο με ορό 5% εμβρυϊκό ορό (Sigma) σε υγροποιημένο επωαστή διατηρούμενο στους 37 ° C με 5% CO

2.

για υποδόρια και ορθοτοπική μοντέλα ποντικών όγκου

το ζώο πειραματικό πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την επιτροπή των ζώων Φροντίδα και Χρήση του Εθνικού Ινστιτούτου Ραδιολογικών Επιστημών, καθώς και όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες του ιδρύματος σχετικά ζώων φροντίδα και το χειρισμό. BALB /c-nu /nu αρσενικών ποντικών (ηλικίας 5 εβδομάδων, CLEA Japan, Tokyo, Japan) διατηρήθηκαν κάτω από ειδικές συνθήκες ελεύθερες παθογόνων. Για να προκληθεί μια υποδόρια μοντέλο όγκου, οι ποντικοί εμβολιάστηκαν υποδορίως με MIA Paca-2 (4 × 10

6) και Α4 (1 × 10

6) κύτταρα στα αριστερά και δεξιά τους μηρούς, αντίστοιχα, κάτω από αναισθησία με ισοφλουράνιο. Δεδομένου ότι τα κύτταρα A4 αυξηθούν ταχύτερα από MIA κύτταρα Paca-2 σε ποντίκια, την ημέρα εμβολιασμού του κάθε κυτταρική γραμμή ρυθμίστηκε να εξασφαλιστεί ότι ξενομοσχεύματα όγκου ήταν ισομεγέθη κατά το χρόνο του πειράματος (περίπου 30 ημερών διάστημα μεταξύ των δύο εμβολιασμούς). Για να προκληθεί ένα ορθοτοπικό πρότυπο όγκου, έχουμε εμφυτεύεται χειρουργικά ένα ξενομόσχευμα όγκου στο πάγκρεας όπως περιγράφηκε προηγουμένως [11]. Εν συντομία, ένας υποδόριος όγκος εκτομήθηκε υπό ασηπτικές συνθήκες, νεκρωτικό ιστοί απομακρύνθηκαν, και τα υπόλοιπα βιώσιμα ιστούς όγκων τεμαχίστηκαν σε κομμάτια περίπου 5 mm σε διάμετρο σε PBS (Sigma). Τα ποντίκια δέκτες αναισθητοποιήθηκαν με εισπνοή ισοφλουράνης, το δέρμα και κοιλιακό τοίχωμα τέμνεται πάνω από το πάγκρεας, το πάγκρεας προσεκτικά εκτεθειμένη, και ένα κομμάτι του όγκου μεταμοσχεύονται πάνω στην ουρά του παγκρέατος χρησιμοποιώντας ένα μεταξωτό ράμμα 6-0 (Alfresa Pharma, Osaka, Ιαπωνία). Το πάγκρεας επιστράφηκε στην περιτοναϊκή κοιλότητα, και το δέρμα και κοιλιακό τοίχωμα περατώθηκαν με 6-0 μεταξωτό ράμμα.

CD147 έκφραση πρωτεΐνης ανάλυση

κηλίδωση Western και χρώση ανοσοφθορισμού διεξήχθησαν ως προηγουμένως περιγράφεται [12], [13]. Εν συντομία, για western αποτύπωση, το λύμα των κυττάρων αναλύθηκε με ηλεκτροφόρηση δωδεκύλ θειικού νατρίου πηκτής πολυακρυλαμιδίου, μεταφέρεται σε ένα φθοριούχο πολυβινυλιδένιο (PVDF) (Hybond-P, GE Healthcare, Little Chalfont, UK) και αντιδρά με ένα αντι-CD147 μονοκλωνικό κουνέλι αντίσωμα (EPR4053, Abcam, Cambridge, UK) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Το πρωτογενές αντίσωμα αντέδρασε με υπεροξειδάση αρμορακίας-συνδεδεμένο αντίσωμα αντι-κουνελιού (GE Healthcare) και η μεμβράνη οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας κιτ ECL Plus (GE Healthcare). Μετά εικόνες συλλήφθηκαν χρησιμοποιώντας ένα LAS-3000 σύστημα απεικόνισης (FujiFilm, Tokyo, Japan), αντισώματα επί της μεμβράνης PVDF απομακρύνθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα απογύμνωσης και χρωματίστηκαν της μεμβράνης με Coomassie Brilliant Blue (ΑΤΤΟ, Tokyo, Japan) ως έλεγχος φόρτωσης. Η ένταση της κάθε ζώνης προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας το λογισμικό ImageJ (Εθνικό Ινστιτούτο Ψυχικής Υγείας, Bethesda, MD, USA). Για τη χρώση ανοσοφθορισμού, τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε γυάλινες καλυπτρίδες και μονιμοποιήθηκαν σε ψυχρή μεθανόλη για 5 λεπτά. Η μη ειδική δέσμευση του αντισώματος έχει αποκλειστεί από την εφαρμογή αντιδραστήριο Block Ace (Dainippon Pharmaceutical, Osaka, Japan) με 10% ορό κατσίκας για 30 λεπτά. Τα κύτταρα επωάστηκαν με 059-053 ως το πρωτογενές αντίσωμα [8] όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Μια δευτερεύουσα αντι-ανθρώπινο αντίσωμα συζευγμένο με Cy3 (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, ΡΑ, USA) εφαρμόστηκε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Οι πυρήνες βάφτηκαν με DAPI σε μέσο στερέωσης. Οι εικόνες ελήφθησαν με χρόνο έκθεσης 500 ms για CD147 χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού (Olympus, Tokyo, Japan). Η ένταση της χρώσης CD147 σε κάθε κυτταρική σειρά ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό ImageJ. Για ανοσοϊστοχημική χρώση, τα ποντίκια που φέρουν υποδόριους όγκους (MIA Paca-2 και Α4) υποβλήθηκαν σε ευθανασία και οι όγκοι αφαιρέθηκαν και καταψύχθηκαν ταχέως σε ένωση βέλτιστη κοπής-θερμοκρασίας (Sakura Finetek Ιαπωνία, Tokyo, Japan). Αποξηραμένα τομές (πάχους 10 μm) σταθεροποιήθηκαν με ψυχρή μεθανόλη και ανοσοχρωματίστηκαν με αντι-CD147 αντίσωμα κατσίκας (AF972, R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ, USA). Η μη ειδική σύνδεση εμποδίστηκε από Block Ace αντιβασιλέας με 10% ορό κατσίκας. Τα δείγματα επωάστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου με το πρωτογενές αντίσωμα. Ένα δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση (Simple Stain MAX-ΡΟ, Nichirei Biosciences, Tokyo, Japan) εφαρμόστηκε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια οπτικοποιήθηκαν με αντιδραστήριο χρώσης διαμινοβενζιδίνη (Απλή λύση Stain DAB, Nichirei Biosciences).

ραδιοεπισήμανση του αντισώματος

Για

67Ga και

επισήμανση 89Zr, το ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα αντι-CD147 059-053 (IgG

1) [8] ήταν συζευγμένο με το

p

-isothiocyanatobenzyl-δεσφερριοξαμίνη Β (DF? Macrocyclics, Dallas, TX, USA) σε DF προς αντίσωμα μοριακή αναλογία 3:01, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [14]. Ο λόγος σύζευξη των DF για να αντισώματος εκτιμήθηκε να είναι 1,0 έως 1,3 από

67Ga-DF-συζευγμένο αντίσωμα σε

αναλογία 67Ga-DF προσδιορίζεται με χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους χρησιμοποιώντας μια στήλη PD10 (GE Healthcare) πριν από τον καθαρισμό. Μη συζευγμένο χηλικό απομακρύνθηκε χρησιμοποιώντας μία στήλη σπιν Sephadex G-50 (GE Healthcare). Για την επισήμανση

67Ga, το DF-συζευγμένο αντίσωμα (45 μg σε 10 μL PBS) επωάστηκε με 600 kBq της

67Ga-χλωρίδιο (70-80 MBq /ml, Nihon Medi-Physics, Τόκιο, Ιαπωνία) για την 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, και ραδιοεπισημασμένα αντισώματα καθαρίστηκαν σε μία στήλη Sephadex G-50 σπιν. Η ραδιοχημική απόδοση

67Ga-επισημασμένου αντισώματος ήταν 45% έως 63%, η ραδιοχημική καθαρότητα ήταν μεγαλύτερη από 96%, και η ειδική ενεργότητα ήταν 6 έως 8 kBq /μα προσδιορίζεται με χρωματογραφία στήλης PD10. Για

επισήμανση 89Zr,

89Zr παρήχθη από ένα (p, n) αντίδραση σε

89Y (Νέα Μέταλλα και χημικών προϊόντων, Waltham Abbey, Ηνωμένο Βασίλειο) σε ένα κεραμικό δοχείο αλουμίνας (Kyocera, Κιότο, Ιαπωνία) κάθετη ακτινοβολία με τη χρήση της NIRS AVF-930 κύκλοτρο και καθαρίστηκε με υδροξαμικές στήλη από μια αυτοματοποιημένη συσκευή ανάκτησης /καθαρισμού όπως περιγράφηκε προηγουμένως [15]. Το DF-συζευγμένο αντίσωμα (100 μα σε 20 μΙ PBS) επωάστηκε με 2,8 να 5,2 MBq του

89Zr-οξαλικό (03.07 – 05.06 GBq /mL σε 1 Μ οξαλικού, ρΗ 7-8) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου , και ραδιοεπισημασμένα αντισώματα καθαρίστηκαν σε μία στήλη Sephadex G-50 σπιν. Η ραδιοχημική απόδοση

89Zr-επισημασμένου αντισώματος ήταν 54% έως 86%, η ραδιοχημική καθαρότητα ήταν μεγαλύτερη από 96%, και η ειδική δραστικότητα ήταν 16 έως 43 kBq /μα προσδιορίζεται με χρωματογραφία λεπτής στοιβάδας χρησιμοποιώντας 50 mM διαιθυλενοτριαμινοπενταοξικό οξύ ( Sigma, ρΗ 7) ως κινητή φάση. επισήμανση

125I διεξήχθη με Na

125Ι (PerkinElmer, Waltham, ΜΑ, USA) και χλωραμίνη-Τ (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japan) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [12], με αποτέλεσμα σε συγκεκριμένες δραστηριότητες που κυμαίνονται από 119 έως 669 kBq /μα.

In vitro

δοκιμασία

δοκιμασίες σύνδεσης Cell, ανταγωνιστική αναστολή, και εσωτερικοποίηση διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16]. Εν συντομία, σε μία δοκιμασία σύνδεσης κυττάρου, σειριακά αραιωμένο ΜΙΑ Paca-2 ή Α4 κύτταρα σε PBS με 1% BSA (Sigma) επωάστηκαν με το ραδιοεπισημασμένο αντίσωμα σε πάγο για 60 λεπτά. Μετά την πλύση, η ραδιενέργεια που συνδέεται προς τα κύτταρα μετρήθηκε. Η ανοσοαντιδραστικότητα ραδιοεπισημασμένων αντισωμάτων εκτιμήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο του Lindmo

κ.ά.

. [17]. Σε μια ανταγωνιστική δοκιμασία αναστολής, το ραδιοεπισημασμένο αντίσωμα επωάστηκε με κύτταρα ΜΙΑ PaCa-2 σε παρουσία διαφόρων συγκεντρώσεων του μη επισημασμένου αντισώματος επί πάγου για 60 λεπτά. Μετά την πλύση, η ραδιενέργεια δεσμευμένη στα κύτταρα μετρήθηκε. Η σταθερά διάστασης υπολογίστηκε με εφαρμογή των δεδομένων σε ένα τόπου ανταγωνιστικής δέσμευσης μοντέλο χρησιμοποιώντας λογισμικό GraphPad Prism (Graphpad Software, La Jolla, CA, USA). Σε μία δοκιμασία εσωτερίκευσης, κύτταρα MIA Paca-2 προεπωάστηκαν σε μέσο καλλιέργειας με

125I- ή

67Ga-επισημασμένο αντίσωμα σε πάγο για 60 λεπτά. Μετά το πλύσιμο, συλλέγεται κύτταρα καλλιεργήθηκαν περαιτέρω σε 37 ° C ή επί πάγου σε φρέσκο ​​μέσο χωρίς ραδιοεπισημασμένων αντισωμάτων. Σε διάφορα χρονικά σημεία, το υπερκείμενο και τα κύτταρα διαχωρίστηκαν με φυγοκέντρηση. Τριχλωροξικού οξέος προστέθηκε στο υπερκείμενο σε πάγο και στη συνέχεια διαχωρίζονται με φυγοκέντρηση για να προσδιοριστεί η μη-πρωτεΐνη-δεσμευμένο κλάσμα (υπερκείμενο) και πρωτεϊνικό κλάσμα συνδεδεμένο (pellet). Τα κύτταρα πλύθηκαν με όξινο ρυθμιστικό και στη συνέχεια διαχωρίζονται με φυγοκέντρηση για να προσδιορίσει τόσο το κλάσμα δεσμευμένο σε μεμβράνη (υπερκείμενο) και εσωτερικεύονται κλάσμα (ίζημα). Διενεργήσαμε αυτά

in vitro

αναλύσεις εις διπλούν.

βιοκατανομής

Όταν υποδόριων όγκων έφθασε σε διάμετρο περίπου 10 mm, τα ποντίκια ενδοφλέβια ένεση με το μείγμα

89Zr- και

125Ι-σημασμένο αντίσωμα (37 kBq το καθένα). Η ολική δόση εγχύθηκε πρωτεΐνης ρυθμίστηκε σε 20 μg ανά ποντικό από την προσθήκη μη επισημασμένου αντισώματος. Στις 1, 2, 4, και 6 ημέρες μετά την ένεση του ραδιοεπισημασμένου αντισώματος, πέντε ποντίκια σε κάθε χρονικό σημείο ευθανατώθηκαν και αίμα ελήφθη από την καρδιά. Οι όγκοι και τα κύρια όργανα αφαιρέθηκαν και ζυγίστηκαν, και οι μετρήσεις ραδιενέργειας μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μετρητή γάμμα (PerkinElmer). Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως το ποσοστό της ενέσιμης δόσης ανά γραμμάριο ιστού (% ID /g). Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± SD. τα δεδομένα πρόσληψης όγκου αναλύθηκαν με ANOVA με το τεστ πολλαπλών σύγκριση μέθοδος Student-Newman-Keuls.

PET /αξονική τομογραφία (CT), απεικόνιση

Διενεργήσαμε απεικόνισης σε δύο ποντίκια που έφεραν υποδόρια όγκους (MIA Paca-2 και Α4) με περίπου 10 mm σε διάμετρο και ένα ποντίκι που φέρει ένα ορθοτοπικό όγκο (MIA Paca-2 μόνο) 3 εβδομάδες μετά την εμφύτευση. Οι ποντικοί εγχύθηκαν με περίπου 3,7 MBq του

89Zr-επισημασμένου αντισώματος στην ουραία φλέβα. Η εγχυθείσα δόση πρωτεΐνης ρυθμίστηκε σε 100 μg ανά ποντικό από την προσθήκη μη επισημασμένου αντισώματος. απόκτησης δεδομένων ΡΕΤ διεξήχθη σε 30 λεπτά, και 1, 2, 4 και 6 ημέρες μετά τη χορήγηση για 10 έως 20 λεπτά χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ΡΕΤ μικρού ζώου (Inveon, Siemens Medical Solutions, Malvern, ΡΑ, USA) κάτω από αναισθησία με ισοφλουράνιο. Η θερμοκρασία του σώματος διατηρήθηκε στους 36 ° C έως 37 ° C με μια λάμπα και ένα μαξιλάρι θέρμανσης κατά τη διάρκεια της σάρωσης. Εικόνες ανακατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας ένα 3D μέγιστη

υστέρων

(18 επαναλήψεις με 16 υποσύνολα, β = 0,2) χωρίς διόρθωση εξασθένησης. πρόσληψη ιχνηλάτη εκφράστηκε ως% ID /g. Η περιοχή ενδιαφέροντος ήταν το χέρι που πάνω όγκων και η πρόσληψη του ιχνηθέτη προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας το λογισμικό Pro ASI (Siemens Medical Solutions). Μετά τη σάρωση ΡΕΤ ένα ορθοτοπικό μοντέλο ποντικού όγκου, CT εικόνες αποκτήθηκαν με πηγή ακτίνων Χ ορίζεται σε 90 kVp και 200 ​​μΑ χρησιμοποιώντας ένα σύστημα CT μικρό-ζώο (R_mCT2, Rigaku, Τόκιο, Ιαπωνία). Μετά την απεικόνιση, πραγματοποιήσαμε πειράματα βιοκατανομής για να επιβεβαιώσει τα αποτελέσματα PET.

Αποτελέσματα

πρωτεϊνική έκφραση CD147 σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα και αλλομοσχεύματα

Εμείς καθορίζεται πρωτεϊνική έκφραση CD147 σε τέσσερις ανθρώπινο καρκίνο του παγκρέατος κυτταρικές γραμμές (MIA Paca-2, PANC-1, BxPC-3, και AsPC-1) και η κυτταρική σειρά ποντικού Α4 ως αρνητικός έλεγχος, χρησιμοποιώντας κηλίδωση Western και χρώση ανοσοφθορισμού. CD147 εκφράζεται στα τέσσερα ανθρώπινα παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές, αλλά όχι σε Α4 (Σχήμα 1Α και Β). ΜΙΑ Paca-2 έδειξε την υψηλότερη έκφραση, που ακολουθείται από AsPC-1, PANC-1, και BxPC-3 όπως προσδιορίζεται με κηλίδωση Western ανάλυση (Σχήμα 1Α). ΜΙΑ Paca-2 επίσης έδειξαν την υψηλότερη έκφραση, όπως προσδιορίζεται με χρώση ανοσοφθορισμού, αλλά έκφραση σε AsPC-1, η οποία ήταν η δεύτερη υψηλότερη στην κηλίδωση Western, ήταν χαμηλότερη από εκείνη των PANC-1 (Σχήμα 1Β). CD147 πρωτεΐνη εντοπίστηκε κυρίως επί της μεμβράνης των κυττάρων CD147 που εκφράζουν (Εικόνα 1Β) του πλάσματος. έκφραση CD147 δεν ανιχνεύθηκε σε Α4 κύτταρα με κηλίδωση Western ή ανοσοφθορισμού αναλύσεις. Στη συνέχεια, διεξήχθη CD147 ανοσοϊστοχημική χρώση της MIA Paca-2 και Α4 υποδόριους όγκους. Σε MIA Paca-2 όγκους, βιώσιμα καρκινικά κύτταρα ήταν έντονα χρωματισμένο, αλλά όχι νεκρωτικά κύτταρα ή στρώμα (Σχήμα 1C άνω πάνελ). Δεν έκφραση πρωτεΐνη ανιχνεύθηκε σε όγκους Α4 (Σχήμα 1C κάτω πάνελ).

(Α) Κηλίδωση Western ανάλυση του συνολικού κυτταρικού λύματος χρησιμοποιώντας αντι-CD147 αντίσωμα (άνω πάνελ) και Coomassie Brilliant Blue χρώση της ίδιας μεμβράνης PVDF ως έλεγχος φόρτωσης (κάτω πάνελ). Η αναλογία της έντασης ζώνης παρουσιάζεται κάτω από τα πάνελ. (Β) υποκυτταρικός εντοπισμός της CD147 πρωτεΐνης προσδιορίζεται με χρώση ανοσοφθορισμού με αντι-CD147 αντίσωμα (κόκκινο) και χρώση ϋΑΡΙ νουκλεϊκό οξύ (μπλε). Η αναλογία της έντασης CD147 εμφανίζεται στα δεξιά των πλαισίων. (Γ) CD147 έκφραση σε MIA Paca-2 (άνω) και Α4 (κατώτερο) ξενομόσχευμα όγκων προσδιορίζεται με ανοσοϊστοχημική χρώση κατεψυγμένων τομών (10 μm πάχος).

Η

In vitro

χαρακτηρισμός του ραδιοσημασμένου 059-053

επισημασμένο ανθρώπινο αντι-CD147 μονοκλωνικό αντίσωμα 059-053 με

125Ι,

67Ga, ή

89Zr και πραγματοποίησε μια δοκιμασία σύνδεσης κυττάρου. Η δέσμευση του [

125I] 059-053, [

67Ga] 059-053, και [

89Zr] 059-053 σε 5 × 10

6 ΜΙΑ κύτταρα Paca-2 ήταν 63%, 73 %, και 94%, αντίστοιχα (Σχήμα 2Α). Ωστόσο, η δέσμευση του [

125Ι] 059-053 έως 5 × 10

6 Α4 κύτταρα ήταν μόνο 1,3% (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Το ανοσοδραστικό κλάσμα [

125I] 059-053, [

67Ga] 059-053, και [

89Zr] 059-053 σε κύτταρα ΜΙΑ Paca-2 εκτιμήθηκε να είναι 0,80, 0,96 και 1,00 , αντίστοιχα. Η συνεχής και δεσμευτική θέση ισορροπίας διάστασης του 059-053 εκτιμήθηκε ότι είναι 15.3 ηΜ και 5.4 × 10

4 θέσεις ανά MIA Paca-2 κυττάρων, αντιστοίχως, με δοκιμασία ανταγωνιστικής αναστολής (Σχήμα 2Β). Εξετάσαμε τη χρονική μεταβολή της ραδιενέργειας εντοπισμό του [

67Ga] κύτταρα 059-053 και [

125I] 059-053 σε ΜΙΑ Paca-2. Το κύτταρο δεσμευμένο σε μεμβράνη κλάσμα μειώθηκε γρήγορα, ενώ η πρωτεΐνη-δεσμευμένο κλάσμα στο μέσο καλλιέργειας αυξήθηκε ταχέως και για τις δύο ραδιοεπισημασμένα αντισώματα (Σχήμα 2C και D). Περίπου το 10% του [

67Ga] 059-053 στο μέγιστο ήταν εσωτερικοποιείται μετά την επώαση (Σχήμα 2C). Όταν τα κύτταρα επωάστηκαν επί πάγου, το κλάσμα δεσμευμένη σε μεμβράνη δεν άλλαξε για τουλάχιστον 3 ώρες (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

(Α) δοκιμασία σύνδεσης κυττάρων για [

89Zr] 059-053 (λευκή τρίγωνα), [

67Ga] 059-053 (λευκοί κύκλοι) και [

125I] 059-053 (μαύροι κύκλοι). (Β) Η ανταγωνιστική δοκιμασία αναστολής για [

125I] 059-053 (μαύροι κύκλοι). δοκιμασία εσωτερίκευση for [

67Ga] 059-053 (C) και [

125I] 059-053 (D). Οι αλλαγές σε% της συνολικής ραδιενέργειας για κάθε κλάσμα συναρτήσει του χρόνου επώασης στους 37 ° C (μαύροι κύκλοι, εσωτερικεύεται κλάσμα? λευκό κύκλους, κλάσμα δεσμευμένη σε μεμβράνη? μαύρα τρίγωνα, πρωτεΐνη δεσμευμένο κλάσμα στο μέσο καλλιέργειας? σταυρό σήματα, μη πρωτεΐνη-δεσμευμένο κλάσμα στο μέσο καλλιέργειας). Αυτές οι δοκιμασίες διεξήχθησαν εις διπλούν. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν το καθένα αντιγράφονται σε Α και Β και σημαίνει στην Γ

Η

In vivo

βιοκατανομή ραδιοσημασμένων 059-053

πειράματα βιοκατανομής χρησιμοποιώντας

89Zr- και

125Ι-επισημασμένο 059-053 διεξήχθησαν σε γυμνούς ποντικούς που φέρουν αμφότερα MIA Paca-2 και όγκους ξενομοσχεύματος A4 (η = 5 σε κάθε χρονικό σημείο). [

89Zr] 059-053 πρόσληψη σε MIA Paca-2 όγκους ήταν 11,0 ± 1,3% ID /g κατά την ημέρα 1, η οποία αυξήθηκε με τον χρόνο φθάνοντας 16.9 ± 3.2% ID /g κατά την ημέρα 6 (Σχήμα 3Α). Αντίθετα, η πρόσληψη σε όγκους A4 (μη-CD147 εκφράζουν) ήταν χαμηλή και μειώθηκε με τον χρόνο (Εικόνα 3Α). ΜΙΑ αναλογία πρόσληψη Paca-2-να-Α4 [

89Zr] 059-053 ήταν 1.7 ± 0.2 κατά την ημέρα 1 και την αύξηση με το χρόνο (7,1 ± 0,5 την ημέρα 6). Η πρόσληψη της [

89Zr] 059-053 σε φυσιολογικά μείζονα όργανα, συμπεριλαμβανομένου του παγκρέατος ήταν χαμηλή και μειώθηκε σταδιακά με το χρόνο εκτός από οστό (Σχήμα 3Α). Η πρόσληψη αναλογία όγκου-προς-πάγκρεας [

89Zr] 059-053 ήταν 9.1 ± 1.5 κατά την ημέρα 1 σε MIA Paca-2 όγκων, και αυξήθηκε σε 30,0 ± 6,7 την ημέρα 6. ΜΙΑ Paca-2 πρόσληψη όγκου του [

125I] 059-053 ήταν 4.6 ± 0.5% ID /g κατά την ημέρα 1 και συνεχίστηκε μέχρι την ημέρα 2, (4.6 ± 1.6% ID /g), αλλά στη συνέχεια μειώθηκε (Σχήμα 3Β). Η πρόσληψη στην κανονική κύρια όργανα του [

125I] 059-053 μειώθηκε σταδιακά με το χρόνο, συμπεριλαμβανομένων των οστών (Εικόνα 3Β). [

89Zr] 059-053 πρόσληψη σε ΜΙΑ Paca-2 όγκοι σε όλα τα χρονικά σημεία ήταν σημαντικά υψηλότερη σε σχέση με εκείνη των όγκων Α4 και [

125I] 059-053 πρόσληψη σε ΜΙΑ Paca-2 και Α4 όγκους (

P

& lt? 0,01)

τα δείγματα συλλέχθηκαν και σταθμίζονται, και η ραδιενέργεια μετρήθηκε κατά την ημέρα 1 (λευκές ράβδοι), 2 (μπαρ dot), 4 (γκρι ράβδοι) και 6 (μαύρο. μπαρ) μετά από ενδοφλέβια έγχυση 37 kBq καθένα από [

89Zr] 059-053 (Α) και [

125I] 059-053 (Β). Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέση τιμή ± SD (η = 5). *

P

& lt?. 0.01 vs. [

89Zr] 059-053 πρόσληψη του όγκου σε κάθε χρονικό σημείο αναλύθηκαν με ANOVA με το τεστ πολλαπλών σύγκριση μέθοδος Student-Newman-Keuls

Η

απεικόνισης PET των ποντικών που φέρουν όγκο με [

89Zr] 059-053

Για να επιβεβαιωθεί το αποτέλεσμα της μελέτης βιοκατανομής, πραγματοποιήσαμε απεικόνιση ΡΕΤ με [

89Zr] 059-053. Serial εικόνες ΡΕΤ σε δύο μοντέλα υποδόριου φέρουν όγκο MIA Paca-2 και Α4 όγκων ελήφθησαν σε 30 λεπτά, και τις ημέρες 1, 2, 4, και 6 μετά την ένεση. Στα 30 λεπτά, η ραδιενέργεια στην λίμνη αίματος ήταν πολύ υψηλή, ενώ ότι σε MIA Paca-2 και Α4 όγκων ήταν χαμηλή με καμία διαφορά μεταξύ των δύο (Σχήμα 4Α). Την ημέρα 1, η πρόσληψη σε MIA Paca-2 όγκους (10,8% ID /g) ήταν σημαντικά αυξημένη και υψηλότερες σε σχέση με τους όγκους Α4 (6.6% ID /g), και η δραστικότητα υποβάθρου μειώθηκε. Ο όγκος ΜΙΑ Paca-2 η πρόσληψη να αυξηθεί περαιτέρω από 12.2% ID /g κατά την ημέρα 2 έως 17,5% ID /g κατά την ημέρα 6, ενώ η δραστηριότητα φόντο συνέχισε να μειώνεται, με αποτέλεσμα την αύξηση της αντίθεσης της MIA Paca-2 όγκους πάνω από χρόνου (Σχήμα 4Α). πρόσληψη όγκου A4 μειώθηκε σταδιακά από 6,6% ID /g την ημέρα 1 σε 4,1% ID /g την ημέρα 6. Αυτά τα δεδομένα ήταν βασικά συνεπείς με τα αποτελέσματα της μελέτης βιοκατανομής. PET /CT εικόνες στο ορθοτοπικό πρότυπο όγκου που λαμβάνεται κατά την ημέρα 6 έδειξε ότι το ΡΕΤ με [

89Zr] 059-053 θα μπορούσε να απεικονίσει την ορθοτοπική εμφυτευμένου όγκου που βρίσκεται στο παγκρεατικό ουρά (Σχήμα 4Β). Από τα δεδομένα PET στο ορθοτοπικό μοντέλο, η πρόσληψη του όγκου των [

89Zr] 059-053 ήταν 8.6% ID /g την ημέρα 6. Από τα δεδομένα βιοκατανομής μετά από PET, [

89Zr] 059-053 πρόσληψη στο ίδιο ορθοτοπική όγκου ήταν 15,5% ID /g. Δεδομένου ότι η ορθοτοπική μέγεθος όγκου ήταν περίπου 5 mm σε διάμετρο, η μερική επίδραση όγκου θα μπορούσε να επηρεάσει τα ποσοτικά δεδομένα από ΡΕΤ.

(Α) Serial εικόνες ΡΕΤ (μέγιστη έντασης-προβολή) ενός γυμνού ποντικού που φέρει MIA PaCa- 2 (κίτρινο βέλος) και Α4 (λευκό βέλος) ξενομοσχεύτηκε όγκους σε 30 λεπτά, και τις ημέρες 1, 2, 4, και 6 μετά από ενδοφλέβια έγχυση 3,7 MBq [

89Zr] 059-053. Οι εικόνες ΡΕΤ από το ίδιο ποντίκι φαίνεται σε διαφορετικές ρυθμίσεις κλίμακα. (Β) Στεφανιαία (άνω) και εγκάρσιο (κάτω) εικόνες της PET /CT στη ορθοτοπικό μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος ποντικού (κίτρινο βέλος, ΜΙΑ Paca-2) κατά την ημέρα 6 μετά την ένεση.

Η

Συζήτηση

Ο καρκίνος του παγκρέατος είναι μια από τις πιο θανατηφόρες ανθρώπινες κακοήθειες, την κατάταξη πέμπτη και τέταρτη μεταξύ σχετίζονται με τον καρκίνο θανάτου σε άνδρες και γυναίκες, αντίστοιχα, σε οικονομικά αναπτυγμένες χώρες [1]. πρόγνωση του είναι πολύ κακή και το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για τους ασθενείς στις Ηνωμένες Πολιτείες με την τοπική και μακρινή μεταστατικού καρκίνου είναι 22% και 2%, αντίστοιχα [2]. Ως εκ τούτου, επιπλέον αποτελεσματική αντικαρκινική θεραπεία είναι απαραίτητη, ιδιαίτερα για τους ασθενείς με μεταστατικό καρκίνο. CD147 ιδιαίτερα εκφράζει σε καρκίνο του παγκρέατος [4] και εμπλέκεται στη μεταστατική διαδικασία [3], και ως εκ τούτου θεωρείται ένα καλό υποψήφιο για στοχευμένη θεραπεία του καρκίνου [3]. CD147 ειδικές μη επεμβατική απεικόνιση θα μπορούσε να είναι χρήσιμη για την επιλογή κατάλληλων ασθενών είναι πιθανότερο να ωφεληθούν από τη θεραπεία αντι-CD147. Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε το

in vitro

και

in vivo

ιδιότητες ενός νέου πλήρως ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα 059-053 που αναγνωρίζει CD147, και επισημαίνονται με έναν πομπό ποζιτρονίων

89Zr, να αναπτύξει μια νέα ανιχνευτή ΡΕΤ για την ανίχνευση της έκφρασης CD147 σε καρκίνο του παγκρέατος.

Αρχικά, αξιολογήσαμε πρωτεΐνη έκφραση CD147 τεσσάρων παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές (MIA Paca-2, PANC-1, BxPC-3, και AsPC-1), με Western και χρώση ανοσοφθορισμού για να επιλέξετε το κατάλληλο παγκρεατικό καρκίνο κυτταρική σειρά για την αξιολόγηση ραδιοεπισημασμένων 059-053. Η Paca-2 κυτταρική γραμμή ΜΙΑ έδειξε την υψηλότερη έκφραση όπως προσδιορίζεται με κηλίδωση Western και ανάλυση χρώση ανοσοφθορισμού. Επιπλέον, επιβεβαιώσαμε ότι MIA κύτταρα Paca-2 σχηματίζεται υποδόρια και ορθοτοπική όγκων σε γυμνούς ποντικούς και έκφραση υψηλού CD147 σε αυτούς τους όγκους προσδιορίστηκε με ανοσοϊστοχημική χρώση. κύτταρα Α4 δεν έδειξε την έκφραση της πρωτεΐνης CD147 είτε

in vitro

ή

in vivo

. Ως εκ τούτου, επιλέξαμε κύτταρα ΜΙΑ Paca-2 ως θετικός μάρτυρας και τα κύτταρα Α4 ως αρνητικός μάρτυρας για την επόμενη αξιολόγηση.

Στη συνέχεια, ραδιοσημάνθηκαν 059-053 με

125Ι,

67Ga, ή

89Zr και αξιολογούνται

in vitro

ιδιότητές του. συνδέσεως κυττάρων και ανταγωνιστικές δοκιμασίες αναστολής αποκάλυψαν ότι 059-053 δεσμεύονται ειδικά με MIA κύτταρα Paca-2 με υψηλή συγγένεια, αλλά όχι σε κύτταρα Α4. Το ανοσοδραστικό κλάσμα ραδιοεπισημασμένων αντισωμάτων ήταν περισσότερο από 0,8, υποδεικνύοντας ότι η απώλεια της ανοσοδραστικότητας με διαδικασίες ραδιοσήμανση ήταν ελάχιστη. Η δοκιμασία εσωτερικοποίηση έδειξε ότι τα κλάσματα με τις πρωτεΐνες στο μέσο καλλιέργειας αυξήθηκε ταχέως μετά από επώαση στους 37 ° C, και το εσωτερικεύεται κλάσμα ήταν χαμηλή. Αυτό υποδηλώνει ότι CD147-αντισώματος σύμπλοκο αποσπώνται εύκολα από την μεμβράνη του πλάσματος κάτω από τις συνθήκες /διαδικασίες αυτού του πειράματος εσωτερίκευσης. Στην παρούσα μελέτη, παρόλο που απασχολούνται

67Ga εκ μέρους του

89Zr για τον προσδιορισμό εσωτερίκευσης, το αποτέλεσμα αυτό θεωρείται ότι είναι σύμφωνη με την εν λόγω χρήση

89Zr-σημασμένο αντίσωμα, επειδή το χηλικό (DF) είναι κοινή μεταξύ δύο ραδιομέταλλα, αυτές ραδιομέταλλα με σύμπλεγμα DF είναι γνωστό ότι είναι σταθερός

in vitro

και

in vivo

[18], [19], [20], [21], [22], και βιοκατανομή αναφέρθηκε για να είναι παρόμοια μεταξύ

68Ga- και

89Zr-επισημασμένου αντισώματος [20]. Σε αντίθεση με το αποτέλεσμα της δοκιμασίας εσωτερίκευσης, η

in vivo

μελέτη απέδειξε ότι η διανομή πρόσληψη [

89Zr] 059-053 στη Μία Paca-2 όγκοι ήταν πολύ υψηλή και αυξήθηκε με το χρόνο, γεγονός που υποδηλώνει ότι η συγκρότημα CD147-αντισώματος δεν αποσπώνται από τη μεμβράνη

in vivo

. Επιπλέον, μια διαφορά στα πρότυπα πρόσληψη όγκου μεταξύ [

89Zr] 059-053 και [

125Ι] 059-053 υποδηλώνει έντονα ότι ραδιοεπισημασμένο 059-053 ήταν εσωτερικεύονται στα κύτταρα μετά την σύνδεση προς CD147 στην επιφάνεια των κυττάρων

in vivo

. Μετά τον μεταβολισμό μέσα στα κύτταρα,

δραστηριότητα 125I θα καθαριστεί από τα κύτταρα, ενώ

δραστηριότητα 89Zr θα πρέπει να διατηρούνται στα κύτταρα. Στο σύνολό τους, θρυψινοποίηση των κυττάρων που προκαλείται πιθανώς τα αποτελέσματα που παρατηρήθηκαν στην δοκιμασία εσωτερίκευση, αν και η διάρκεια της επεξεργασίας με θρυψίνη έγινε όσο το δυνατόν συντομότερη να ελαχιστοποιείται η φθορά CD147 στην επιφάνεια των κυττάρων με θρυψίνη. Στην προκειμένη περίπτωση, η

in vivo

διανομής δεν ήταν ανακεφαλαιωθούν πλήρως από τις

in vitro

πειράματα. Είναι αξιοσημείωτο ότι ο

in vivo

μελέτη με υποδόρια ξενομοσχεύματα έδειξαν ότι [

89Zr] 059-053 άκρως συσσωρευτεί στο MIA Paca-2 όγκους, αλλά όχι σε όγκους Α4. Αυτό επιβεβαιώθηκε με σειριακή απεικόνιση ΡΕΤ, υποδεικνύοντας ότι [

89Zr] 059-053 είναι μια πολλά υποσχόμενη ιχνηλάτης ΡΕΤ για την ανίχνευση του CD147 εκφράζουν όγκων και στην επιλογή των κατάλληλων ασθενών για θεραπεία αντι-CD147. Μελέτες βιοκατανομής έδειξαν ότι η πρόσληψη του [

89Zr] 059-053 σε φυσιολογικά σημαντικά όργανα μειώνεται με το χρόνο, εκτός από οστό, το οποίο δεν είναι πιθανό να είναι πραγματική πρόσληψη αντισωμάτων, αλλά των οστών που αναζητούν

89Zr καταβολισμού ακριβώς την ίδια όπως και για άλλα αντιγόνα [21], [22], [23], [24]. Από αντι-CD147 αντίσωμα μας 059-053 δεν δεσμεύεται με ποντίκι CD147, τα αποτελέσματα μας στο μοντέλο ποντικού μπορεί να μην προβλεφθεί πλήρως την διανομή σε ανθρώπους ασθενείς. έκφραση CD147 φέρεται να είναι υψηλός στους περισσότερους ιστούς του καρκίνου, αλλά είναι περιορισμένη σε φυσιολογικούς ιστούς [4]. Το σπινθηρογράφημα με

131I-επισημασμένο αντι-CD147 F (ab ‘)

2 σε ασθενείς με ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) έχει δείξει χαμηλότερη απορρόφηση σε φυσιολογικά όργανα σε σχέση με τους ιστούς HCC [25]. Ως εκ τούτου, μας αντι-CD147 αντίσωμα 059-053 αναμένεται να παρουσιάσει μικρή συσσώρευση σε φυσιολογικά όργανα των ασθενών, αν και περαιτέρω κλινική μελέτη θα είναι αναγκαίο να αξιολογηθεί με ακρίβεια η πρόσληψη κανονικό όργανο.

Η υποδόρια μοντέλα όγκων είναι ισχυρά εργαλεία για την ογκολογική έρευνες, αλλά αυτά τα μοντέλα δεν μπορούν να μιμούνται πάντα κλινικά ευρήματα.