Αφηρημένο

Είτε συστατικά στρωματικά διευκολύνουν την ανάπτυξη, την εισβολή και τη διάδοση των καρκινικών κυττάρων ή να καταστείλει νεοπλασματικές αλλοιώσεις από την περαιτέρω εξέλιξη της κακοήθειας είναι μια συνεχής αίνιγμα στη βιολογία του όγκου. Conceptualizing μια δυναμική εικόνα της ογκογένεσης περιπλέκεται από ενδο-ατομική ετερογένεια. Στη μετά γονιδιωματική εποχή, ξετυλίγοντας τέτοια πολυπλοκότητα παραμένει μια πρόκληση για τον βιολόγο του καρκίνου. Με στόχο τη δημιουργία μιας λειτουργικής σύνδεσης μεταξύ της κυτταρικής στιχομυθία και την επιθετικότητα του καρκίνου διαφορικό, εντοπίσαμε μια υπογραφή του κακοήθους αντίδραση του επιθηλίου του μαστού στην σηματοδότηση του στρώματος. Εγγύτητα σε ινοβλάστες οδήγησε σε μεταβολές γονιδιακής μεταγραφής & gt? 2-φορές για 107 ανιχνευτές, συλλογικά ορίζονται ως ινοβλαστών σκανδαλισμό της γονιδιακής έκφρασης σε Tumor (FTExT). Η αναλογία κινδύνου που προβλέπεται από τον ταξινομητή FTExT για μακρινά υποτροπής σε ασθενείς με όγκους του μαστού μέσης και υψηλής ποιότητας ήταν σημαντική σε σύγκριση με τις συνήθεις κλινικές μεταβλητές (dataset 1, n = 258, HR – 2.11, 95% CI 1,17 – 3,80, p-value 0,01 ? συνόλου δεδομένων 2, n = 171, HR – 3.07, 95% CI 1,21 – 7,83, p-value 0,01). Βιολειτουργίες αντιπροσωπεύεται από FTExT περιλαμβάνονται φλεγμονώδη σηματοδότηση, δωρεάν ριζών, κυτταρικό θάνατο και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Σε αντίθεση με τα γονίδια της «συστάδας πολλαπλασιασμού», που υπερεκφράζονται σε επιθετικές πρωτογενείς όγκους, τα γονίδια FTExT ήταν μοναδικά κατασταλεί σε τέτοιες περιπτώσεις. Ως απόδειξη της έννοιας για συσχετικός τα ευρήματά μας, οι οποίες συνδέουν τα στρωματικά-επιθηλιακών στιχομυθία και της συμπεριφοράς του όγκου, δείχνουμε μια χαρακτηριστική απόκλιση σε επίδραση στρωματικά στην πρόγνωση-προσδιορισμό των λειτουργικών παραμέτρων της προόδου του κυτταρικού κύκλου, και αντίσταση στην θεραπεία επαγόμενης από διακοπή αύξησης και απόπτωση σε χαμηλή εναντίον υψηλής ποιότητας καρκινικά κύτταρα. πειραματικά δεδομένα μας αποκαλύπτουν έτσι πτυχές της «παρακρινούς συνεργατικότητας» που είναι αποκλειστικά εξαρτάται από την ιστοπαθολογική ορίζεται βαθμό αλληλεπίδρασης επιθηλίου του όγκου, και αποδεικνύουν ότι τα επιθηλιακά απόκριση στο μικροπεριβάλλον του όγκου είναι μια ντετερμινιστική παράγοντας που επηρεάζει την κλινική έκβαση. Υπό αυτό το πρίσμα, η πρώιμη εξασθένιση των επιθηλιακών-στρωματικών στιχομυθία θα μπορούσαν να βελτιώσουν τη διαχείριση των υποθέσεων επιρρεπείς να είναι κλινικά προκλητική

Παράθεση:. Luciani MG, Seok J, Sayeed Α, Πρωταθλητής S, Goodson WH, Jeffrey SS, et al. (2011) Διακριτικός Ανταπόκριση σε στρωματικά Σηματοδότησης Συνοδεύει ιστολογική βαθμολογία Προγραμματισμός των καρκινικών κυττάρων. PLoS ONE 6 (5): e20016. doi: 10.1371 /journal.pone.0020016

Επιμέλεια: Ηλιάνα Σαούλ Furquim Werneck Abdelhay, Instituto Nacional de καρκίνο, Βραζιλία

Ελήφθη: 9 Φλεβάρη 2011? Αποδεκτές: 8 του Απρίλη 2011? Δημοσιεύθηκε: May 19, 2011

Copyright: © 2011 Luciani et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας στο πλαίσιο R01CA109325 επιχορήγησης. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

είναι ευρέως πιστεύεται ότι η τοπική μικροπεριβάλλον του ιστού υποδοχής είναι ενεργός συμμέτοχος σε όλη την ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου [1]. Σε αυτό το περιβάλλον, το διαδραστικό ανταλλαγές μεταξύ στρώματος και τα καρκινικά κύτταρα θα μπορούσαν να επηρεάσουν την επιβίωση, την ανάπτυξη και τη διάδοση [2]. Αυτοκρινές χημειοκίνες στρωματικά, και παρακρινή σήματα ΤΟΡβ είναι καλά γνωστές προ-ογκογόνο μεσολαβητών [3] – [8]. Σε όγκους του μαστού, οι ινοβλάστες εκφράζουν γενικά την πιο άφθονο κυτταρικό τύπο στο στρώμα, που συχνά αναφέρεται ως «αντιδραστική στρώμα», με υψηλό εμπλουτισμό, τύπου I και VI κολλαγόνο, λαμινίνη, εντακτίνη, πρωτεογλυκάνες ηπαράνης-θειικού και ινώδες [9]. Που προέρχεται από όγκο ινοβλαστών από διαφορετικά όργανα εμφανίζουν σημαντική μεταβλητότητα σε μεταγραφικό προφίλ [10], και σημαντικές μεταβολές συμβαίνουν σε γονιδιακή έκφραση στρωματικά εντός όγκων του ίδιου συστήματος οργάνου, συχνά σε συνδυασμό με κλινικοπαθολογική παραμέτρους. Για παράδειγμα, η υπερέκφραση του CD10, και του υποδοχέα PDGFß σε στρώμα καρκίνο του μαστού είναι χαρακτηριστικό της υψηλής ιστολογική βαθμολογία [11], [12]. Ινοβλαστών που σχετίζονται με τις υπογραφές και την κλινική συσχέτιση τους με αποτέλεσμα σε ασθενείς με καρκίνο [13], [14], δείχνουν ότι μια αλλαγμένη στρώματος του όγκου είναι αποτέλεσμα του «συνεταιρισμού στιχομυθία» με κύτταρα καρκινώματος.

Μια ολοκληρωμένη προσπάθεια για να αποκαλύψει οι βάσεις των στρωματικών-επιθηλιακών στιχομυθία μέσα σε συμπαγείς όγκους θα μπορούσε να βοηθήσει στην αναγνώριση ενός ευρύτερου φάσματος της στόχευσης, μοριακή καθοριστικούς παράγοντες της έκβασης των ασθενών. Είναι κατανοητό ότι η επιθετική φαινότυποι των κυττάρων του όγκου συχνά αντιπροσωπεύουν μια τοπική απάντηση σε μικροπεριβάλλον σήματα [15]. Ωστόσο, παρά παροδικές

in vitro

επαγωγή, στρωματικά-επιθηλιακών στιχομυθία έχει μακροχρόνιες λειτουργικές επιδράσεις επί ογκογονικότητα και μεταστατικό δυναμικό των κυττάρων εμβολιάστηκε σε πειραματόζωα [16]. Στην αναζήτηση για συγκεκριμένα φαινοτυπικά αποτελέσματα,

in vitro

αλληλεπιδράσεις μεταξύ ινοβλάστες και επιθηλιακά κύτταρα μαστού η προηγουμένως περιορίστηκαν σε αθανατοποιημένες κυτταρικές σειρές αυθόρμητα καρκίνου του μαστού ομοιόμορφα προέρχονται από επιθετικούς όγκους υψηλής ποιότητας και μεταστατικό διαχύσεις [17] – [19 ], ή από μη κακοήθη ιστό μαστού ανθρώπου [20]. Ερμηνεία των δεδομένων αυτών βαρύνεται από την έλλειψη μιας ευρείας, ασθένεια που βασίζεται φάσμα των παρένθετων μοντέλα του ανθρώπινου καρκίνου. Έτσι κατηγορηματική συμπεράσματα σχετικά με την συσχέτιση μεταξύ της κλινικής ετερογένειας και της λειτουργικής βιολογίας υποκείμενη στρωματικά-επιθηλιακών σηματοδότησης παραμένουν ασαφείς. Μία κρίσιμη προϋπόθεση για την ανάλυση της αλληλεπίδρασης μεταξύ των διαφόρων κυτταρικών υποσυνόλων εντός του ιστού του όγκου είναι η διαθεσιμότητα των ζωντανών διαδραστικά στοιχεία κλασματώθηκαν από νωπό χειρουργικό απορρίψεων ιστού σε ποσότητες επαρκείς για την ισχυρή συλλογή δεδομένων και τη δημιουργία υποθέσεων. Ομοίως, για την επίτευξη της μεταφράσεως ιδέες μέσω πειραματικών προσομοίωσης, είναι εξαιρετικά σημαντικό να ενσωματωθεί ένα κυτταρικό ρεπερτόριο, το οποίο αντανακλά το εύρος των κλινικών μεταβλητότητα εισφέρει επιθηλιακών και στρωματικών στοιχείων εντός του ιστού του όγκου. Διευκολύνοντας την άμεση στιχομυθία μεταξύ μυθιστόρημα πρωτογενείς κυτταρικές σειρές όγκων του ευρέος φάσματος clinicopathology [21] και πολλαπλά ανεξάρτητα δείγματα καλοήθεις ή όγκου ινοβλάστες που προέρχονται από ιστούς, η μελέτη μας έχει στόχο προς μια καλύτερη κατανόηση της βιολογίας του καρκίνου και η εφαρμογή του με τους παρακάτω τρόπους. Πρώτον, ένα σύνολο γονιδίων έχει ταυτοποιηθεί, του οποίου η έκφραση μεταβάλλεται συνεχώς μέσω παρακρινούς αλληλεπιδράσεων. Στη συνέχεια, ο ρόλος μιας τέτοιας στο στρώμα που προκαλείται ανταπόκριση του όγκου των κυττάρων στην προώθηση της σοβαρότητας της νόσου παρουσιάζεται μέσω συσχέτιση με την κλινική έκβαση. Τέλος, μια άμεση λειτουργική βάση για τη μεταβολή της κλινικής έκβασης που σχετίζονται με την ανταπόκριση του όγκου σε σηματοδότηση στρωματικών αποδεικνύεται από αλλαγές στην κινητική του κυτταρικού κύκλου, αποπτωτική διαφυγή, μείωση ROS, και εξουδετέρωση των ανασταλτικών αποτελεσμάτων ανάπτυξη της ορμονικής θεραπείας του καρκίνου. επίδειξη μας της ποιότητας που σχετίζονται με μεταβλητότητα στη δυναμική επαναπρογραμματισμό του καρκινικού επιθηλίου από το μικροπεριβάλλον στρωματικών βελτιώνει το πεδίο της κλασικής παθοβιολογίας καρκίνου, και προτείνει νέους στόχους για όγκους πυρίμαχα στις τρέχουσες θεραπείες. Επιπλέον, η ανίχνευση των προτύπων της παρακρινούς ανταπόκρισης σε πρώιμα στάδια μπορεί να συναχθεί η τάση για πρόοδο από προκαρκινικές και preinvasive νόσου σε προχωρημένο βλάβες

Αποτελέσματα

Αναγνώριση FTExT – α. Το προφίλ της γονιδιακής έκφρασης που απεικονίζει κακοήθη κύτταρο απόκριση σε στρωματικά σηματοδότησης

ένα προφίλ έκφρασης απόκλιση μεταξύ μόνος κυτταρικές γραμμές όγκου πρωτογενούς μαστού (Τ κανένα) και εκείνων που πολλαπλασιάζονται με την παρουσία των ινοβλαστών όγκου του μαστού (Τ + TF) ορίστηκε από μια σημαντική λίστα γονίδιο που αποτελείται από 482 σύνολα καθετήρα με προσαρμοσμένη τιμή p & lt? 0,05, όπου 7 ανεξάρτητες κυτταρικές σειρές πρωτογενούς όγκου συμβολίζεται με Τ, και πρωτογενείς ινοβλάστες που προέρχονται από όγκους όπως TF. προφίλ έκφρασης για 3/7 κυτταρικές σειρές αποκτήθηκαν με 2 ανεξάρτητα δείγματα ινοβλαστών. Ένας θερμικός χάρτης, αντανακλώντας σε μεγάλο βαθμό μεταγραφική καταστολή από όγκο ινοβλαστών συγκαλλιέργεια (Σχήμα 1Α) περιλαμβάνει 107 σύνολα ανιχνευτή, με & gt? 2 φορές αλλαγή στην έκφραση γονιδίου (Πίνακας S1). Αυτή η ομάδα γονιδίων, η οποία εμφανίζεται σημαντική αρνητική πολλαπλή μεταβολή σε κύτταρα όγκου, και ορίστηκε ως ινοβλαστών σκανδαλισμό της γονιδιακής έκφρασης σε Tumor (FTExT), διερευνήθηκε περαιτέρω. Απορυθμίζεται σετ καθετήρα μέσα στο σημαντικό κατάλογο των γονιδίων δεν πληρούν τα κριτήρια επιλογής μας για την αλλαγή φορές, και δεν θεωρήθηκαν για περαιτέρω μελέτη. Εμπλουτισμένο κατηγορίες των βιολογικών λειτουργιών που σχετίζονται με τα γονίδια FTExT προσδιορίστηκαν από Ingenuity Pathway Ανάλυση, και κυρίως εμπλέκονται φλεγμονώδη απόκριση, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, κυτταρικό θάνατο, και δωρεάν ριζών (Σχήμα 1Β, και το σχήμα S1).

Α. Ιεραρχική συσταδοποίηση κυτταρικών σειρών καρκίνου του μαστού πρωτογενή ως μονοκαλλιέργεια ελέγχου, και σε συγκαλλιέργεια με ινοβλάστες που προέρχονται από όγκους. Σημείωση ανεξάρτητες συστάδες που απεικονίζει διακριτικά στο στρώμα που προκαλείται πρότυπα έκφρασης στα κύτταρα του όγκου που αντανακλάται από 482 σημαντικά σύνολα ελέγχων. κατηγορίες Β Εμπλουτισμένο των βιολογικών λειτουργιών που αντιπροσωπεύεται από 107 σύνολα ανιχνευτή, με & gt? 2 φορές αλλαγή στην έκφραση γονιδίου, που ορίζεται ως FTExT. Οι μπάρες ομαδοποιούνται και χρωματιστά σύμφωνα με τις κατηγορίες των βιολογικών λειτουργιών. Κάθε γραμμή αντιπροσωπεύει ένα εμπλουτισμό p-value δοκιμή ενός βιο-λειτουργία. C. Ανάλυση 482 σημαντικών συνόλων καθετήρα κατά μέσο όρο σε πολλαπλές καλλιέργειες επιθηλιακών κυττάρων που προέρχονται από κακοήθη (κόκκινο) και ιστών μη κακοήθη μαστού (πράσινο) με την παρουσία (γ-άξονας) ή απουσία (χ-άξονας) του στρωματικά συγκαλλιέργειας. Η μαύρη διακεκομμένη γραμμή αντιπροσωπεύει x = y. καρκινικά κύτταρα εμφανίζουν μεγαλύτερη απόκλιση από αυτή τη γραμμή, δηλαδή μεταξύ του ελέγχου και της συγκαλλιέργειας, ενώ τα πρότυπα έκφρασης των συνκαλλιεργημένα κακοήθη επιθηλιακά κύτταρα παρουσιάζει ελάχιστη απόκλιση από τον έλεγχο. Δ Διάγραμμα διασποράς των σχετικών επιπέδων μεταγραφής των 11 γονιδίων FTExT μετράται με QPCR σε ένα ανεξάρτητο σύνολο 6 πρωτογενείς κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού καλλιεργήθηκαν με ένα από τα 4 που προέρχεται από όγκο ινοβλαστών (TF) δείγματα. αντιπροσωπεύουν δεδομένα

ACTB

κανονικοποιημένη έκφραση του γονιδίου δοκιμής σε συνκαλλιεργημένα καρκινικά κύτταρα σε σχέση με τον έλεγχο. . Σημείωση εύρος της έκφρασης για κάθε γονίδιο δοκιμή

Η

Πρόσθετες προσεγγίσεις για την αξιολόγηση της πολυμορφίας της επιρροής στρωματικών, περιλαμβάνονται: (1) συγκριτική ανάλυση των όγκων προερχόμενων λίστα σημαντική γονίδιο (482 σύνολα ανιχνευτή) με δεδομένα συστοιχία από στρωματικά-επιθηλιακά συγκαλλιέργειες που απομονώθηκε από 8 ανεξάρτητα δείγματα καλοήθη ιστό μαστού. πρότυπα έκφρασης γονιδίων διακριτικό μεταξύ συνκαλλιεργημένα κακοήθη εναντίον μη-κακοήθη επιθηλιακά κύτταρα μαστού (Σχήμα 1 C). Λαμβάνοντας υπόψη ότι η μη κακοήθη επιθηλιακά κύτταρα καλλιεργήθηκαν με τα αντίστοιχα μη κακοήθη ινοβλάστες εμφανίζεται σχετική ομοιομορφία στην ανταπόκριση, μεγάλη ετερογένεια παρατηρήθηκε σε όγκους που προέρχονται από στρωματικά-επιθηλιακών συγκαλλιέργειες (2) ανάλυση QPCR των 11 γονιδίων FTExT σε ένα ανεξάρτητο σύνολο 6 πρωτοπαθούς όγκου που προέρχονται από επιθηλιακά κυτταρικές σειρές συνκαλλιεργημένα με 4 παρελθόν έχουν δοκιμαστεί ινοβλάστες που προέρχονται από όγκους. Παρόμοια με τα ανωτέρω αναφερθέντα δεδομένα συστοιχίας, ένα γονίδιο-προς-γονίδιο ποσοτική ανάλυση επιβεβαίωσε επαγωγή αλλαγές στη γονιδιακή έκφραση δοκιμής σε σχέση με το γονίδιο οικοκυρική,

ACTB

, εντός συνκαλλιεργημένα κυττάρων όγκου (από 4 συμφωνημένα, και 2 απαράμιλλη συγκαλλιέργειες) (Σχήμα 1D).

FTExT διακύμανση και συσχέτιση με την κλινική έκβαση της πρωτοπαθούς καρκίνου του μαστού

Για να προσδιοριστεί η κλινική σημασία των φαινοτυπικών αλλαγών που προκαλούνται άμεσα από στρωματικά στιχομυθία, τη δύναμη ταξινόμηση των FTExT (107 σετ καθετήρα) δοκιμάστηκε σε συνδυασμό με τα δεδομένα πίνακα από 2 ανεξάρτητα σύνολα δεδομένων του καρκίνου του μαστού. Μακρινή μετάσταση επιβίωση χωρίς (ΒΔΜ) χρησιμοποιήθηκε ως τελικό σημείο για την έκβαση των ασθενών. Στο σύνολο δεδομένων GSE6532 [22], οι όγκοι με φτωχή πρόγνωση εμφανίζεται σημαντικά μεγαλύτερη γονίδιο καταστολής FTExT σε σύγκριση με αυτά με καλή πρόγνωση (n = 401? Ρ = 0.031, Εικόνα 2Α – αριστερός πίνακας). Η δύναμη διαστρωμάτωση της FTExT περιλάμβανε όγκων όλων των βαθμών. Επιπλέον, ο ταξινομητής βελτίωσε περαιτέρω την υποδιαίρεση του υποσυνόλου που αποτελείται μόνο από ενδιάμεσου και υψηλού βαθμού όγκους (n = 258? P = 0,011, Εικόνα 2Α – δεξιά πάνελ). Με άλλα λόγια, FTExT αξιόπιστη αναγνώριση των ασθενών που έκαναν καλά σε καταστάσεις όπου οι παραδοσιακές ιστοπαθολογική εξέταση με βάση την πρόγνωση ήταν περιορισμένη όσον αφορά την παροχή μια ακριβή πρόβλεψη. Αναπαραγωγιμότητα της απόδοσης ταξινομητή FTExT αποδείχθηκε περαιτέρω σε ένα ανεξάρτητο σύνολο δεδομένων [23] – GSE11121 σε όλες τις βαθμίδες (n = 200? Ρ = 0,013, σχήμα 2Β – αριστερό πάνελ), καθώς και σε μια ξεχωριστή ανάλυση του καρκίνου του μαστού ενδιάμεσου και υψηλού βαθμού (n = 171? ρ = 0,013, σχήμα 2Β – δεξί πάνελ). Αξίζει να σημειωθεί ότι σε όλες τις αναλύσεις, FTExT ήταν ένας καλύτερος ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για το αποτέλεσμα των ενδιάμεσων και υψηλού περιπτώσεις βαθμό σε σύγκριση με τα συμβατικά προγνωστικές παραμέτρους, όπως, το βαθμό του όγκου, την κατάσταση ER, λεμφαδένα θετικότητα, και το μέγεθος του όγκου (Πίνακας 1).

Α.

Σύνολο δεδομένων 1 (GSE6532) –

FTExT ταξινομητή προβλέπει καλό εναντίον κακή έκβαση για το τελικό σημείο της μακρινό μετάσταση επιβίωση χωρίς (ΒΔΜ) (n = 401,

αριστερό πάνελ

). FTExT βασίζεται διαστρωμάτωση των ασθενών που διαγιγνώσκονται με βαθμού 2 (ενδιάμεσο) και 3 (υψηλή) όγκους (n = 258,

δεξί πάνελ

). Β

Σύνολο δεδομένων 2 (GSE11121)

– FTExT πρόβλεψη της ΒΔΜ σε ένα ανεξάρτητο σύνολο δεδομένων (n = 200,

αριστερό πάνελ

). Επιβεβαίωση της FTExT με βάση τη διαστρωμάτωση των ασθενών που έχουν διαγνωστεί με βαθμό 2 και 3 όγκους (n = 171,

δεξί πάνελ

).

Η

συνδυασμένα δεδομένα γονιδιακής έκφρασης συγκαλλιέργεια μας και ανάλυση FTExT του πρωτογενούς όγκου σύνολα δεδομένων έδειξε ότι αυτό το στρώμα, που προκαλείται από το προφίλ εκδηλώθηκε ως ένα συνεχές. Σε μία ακραία ήταν σχετικά αμετάβλητη πρότυπα χαρακτηριστική έκφραση του γονιδίου της καλοήθεις συγκαλλιεργειών, η στροφή προς την ελάχιστη καταστολή των γονιδίων FTExT μέσα πρωτοπαθών όγκων που σχετίζονται με την καλή κλινική έκβαση, ενώ στο άλλο άκρο ήταν πολύ καταπιεσμένη προφίλ έκφρασης εντός των όγκων που παρέχουν κακή έκβαση των ασθενών.

Επαγωγή ένα ευρύ φάσμα λειτουργικών αλλαγών σε κακοήθη κύτταρα με στρωματικά ινοβλαστών στιχομυθία

σε μια προσπάθεια να αποκαλύψουν την βιολογική σημασία του στο στρώμα που επάγεται φαινοτύπων, ως καθοριστικός παράγοντας της κλινικής έκβασης, χρησιμοποιήσαμε νέα πρωτογενούς όγκου μαστού κυτταρικές γραμμές διαφορετικής ιστολογικής βαθμού [21] σε μία ποικιλία λειτουργικών δοκιμασιών. Αντανακλώντας την εμπλουτισμένη ανάλυση biofunction των γονιδίων FTExT, ισχυρή δοκιμασίες προτεραιότητα, όπου θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν ποσοτικά τελικά σημεία, και το οποίο θα μπορούσε να διεξαχθεί άμεσα ενόψει των περιορισμών στη διαθεσιμότητα των πολιτισμών στρωματικών πεπερασμένης ζωής. Συγκεκριμένα, οι αλλαγές στις λειτουργικές παραμέτρους των σημαντικών κυτταρικών προγραμμάτων, όπως υπερδραστηριοποιημένο κινητική πολλαπλασιασμό? οξειδωτικό στρες εξουδετέρωση? και αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο διαφυγή ερευνήθηκαν σε καρκινικά κύτταρα συν-καλλιεργήθηκαν με ινοβλάστες που προέρχονται από κακοήθη ή μη κακοήθη ιστό του μαστού του ανθρώπου:.

(1) διανομή επαναπρογραμματιστεί κυτταρικού κύκλου καρκινικών κυττάρων

δέκα ανεξάρτητες πρωτοπαθή καρκίνο του μαστού κυτταρικές σειρές υπό συνθήκες ελέγχου και TF-συγκαλλιέργεια σημάνθηκαν με BrdU, και αναλύθηκαν με FACS. Οι αλλαγές του κυτταρικού κύκλου που προκαλείται από συγκαλλιέργεια συνοψίζονται στον πίνακα 2. Οι Dot οικόπεδα των αντιπροσωπευτικών κυτταρικών σειρών που απεικονίζεται στην Εικόνα 3Α. Τα δεδομένα κατέδειξαν διακριτικά βαθμού που εξαρτάται από τα προφίλ του κυτταρικού κύκλου. Σε απάντηση των στρωματικών κυττάρων σηματοδότησης, βαθμού 1 (CCdl22, CCdl68) και βαθμού 2 (CCdl1570) προέρχεται καρκινικών κυτταρικών σειρών που εμφανίζονται είτε (α) καμία σημαντική αλλαγή στην κατανομή του κυτταρικού κύκλου σε σύγκριση με μη συνκαλλιεργημένα ελέγχους, ή (β) επαγωγή του κυτταρικού κύκλου σύλληψη στη G2 /M φάση, υποδεικνύοντας ενεργοποίηση ενός οδοφράγματος επισκευής μετά την ανατύπωση /DNA. Σε αντίθεση, τα κύτταρα βαθμού 3 όγκου (CCdl54, CCdl257, CCdl675), συμπεριλαμβανομένου ενός καρκινώματος υψηλής ποιότητας πορογενές

in situ

(DCIS) προερχόμενο από κυτταρική σειρά (CCdl1797) και πρόσθετες γραμμές όγκου βαθμού 2 (CCdl66, CCdl329, CCdl1599) παρουσίασαν σημαντική αύξηση του πληθυσμού S-φάση, ενδεικτικό της (α) ελαττώματα DNA σύνθεση /αναπαραγωγής λόγω διακοπής ρεύματος, πιρούνια αντιγραφής, ή (β) με ταχύτερο ρυθμό πολλαπλασιασμού των κυττάρων. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η ιδιαιτερότητα της ανταπόκρισης καρκινικών κυττάρων ήταν κοινά μεταξύ ανεξάρτητων δειγμάτων των ινοβλαστών.

Α. Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου των πρωτογενών κυτταρικών γραμμών όγκου μαστού σε συγκαλλιέργεια με 2 ανεξάρτητα δείγματα ινοβλαστών, TF1 και TF2. διαγράμματα πίτας συνοψίζουν τα δεδομένα FACS. Οι αριθμοί υποδηλώνουν τοις εκατό κυττάρων στην S-φάση του κυτταρικού κύκλου. Κάθε τιμή είναι ο μέσος όρος των σημείων δεδομένων εις τριπλούν. Εκπρόσωπος FACS dot Τα οικόπεδα παρουσιάζονται για έλεγχο (αριστερά αντίστοιχο γράφημα πίτας) και TF2-καλλιεργήθηκαν κύτταρα (δεξιά των αντίστοιχων γράφημα πίτας). Σημείωση ποικίλες επιδράσεις των στρωματικών συγκαλλιέργειας επί ποδηλασία κυττάρου όγκου. B. Μέτρηση της κινητικής φάσης S πάροδο του χρόνου σε αντιπροσωπευτικές κυτταρικές γραμμές βαθμού 1 και βαθμού 3 παρουσία των κυττάρων TF1 και TF2. Σημείωση αντίθεση επιδράσεις των στρωματικών κυττάρων από το ρυθμό αναδιπλασιασμού των κυτταρικών σειρών φαίνονται. Οι ράβδοι σφάλματος αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση του μέσου όρου των τιμών εις τριπλούν. Ινοβλαστών επαγόμενη μείωση στην BrdU επισημασμένα κύτταρα σε βαθμό 1 κύτταρα όγκου, και μία αντίστοιχη αύξηση του βαθμού 3 κύτταρα όγκου ήταν σημαντική σε όλα τα χρονικά σημεία (ρ & lt? 0.005 και ρ & lt? 0.001, αντίστοιχα)

Η

(2) Δραματικές αλλαγές στο ρυθμό πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων.

για να επιβεβαιωθεί ότι η αυξημένη κλάσμα S-φάσης σε απάντηση στρωματικά σηματοδότησης σε βαθμό 3 καρκινικά κύτταρα πράγματι αντιπροσώπευε ένα ταχύτερο ρυθμό πολλαπλασιασμού σε σύγκριση με βαθμός 1 κυτταρικές γραμμές, οι εκπρόσωποι της κάθε ομάδας σε συγκαλλιέργεια με 2 ανεξάρτητα δείγματα TF σημάνθηκαν με BrdU σε πολλαπλά χρονικά σημεία σε χρονική περίοδο 1 ώρας. μετρήσεις FACS της κυτταρικής κλάσμα BrdU-ενσωματώνει την πάροδο του χρόνου παρέχεται μια αξιόπιστη εκτίμηση του ρυθμού της σύνθεσης του DNA σε κύτταρα όγκου με και χωρίς έκθεση σε σηματοδότηση ινοβλαστών. κινητική πολλαπλασιασμό του βαθμού 1 (CCdl22) συνκαλλιέργειες επιβεβαιώθηκε περαιτέρω μια ήδη παρατηρηθεί ινοβλαστών που προκαλείται G2 /M σύλληψη. σύλληψη κυτταρικού κύκλου διατηρήθηκε καθ ‘όλη τη πειραματική χρονική πορεία, που οδηγεί σε μια σημαντική μείωση (μέχρι 70%) στην αναλογία των κυττάρων BrdU-ενσωματώνουν (Σχήμα 3Β). Σε πλήρη αντίθεση, σε βαθμό 3 (CCdl675) συνκαλλιέργειες, μια δραματική αύξηση κατά τουλάχιστον 47% και έως 60% σημειώθηκε στο ρυθμό αντιγραφής με βάση τις κλίσεις των καμπυλών ανάπτυξης σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου. Επαγωγή με πιο αργό ή ταχύτερο ρυθμό πολλαπλασιασμού των κυττάρων του όγκου βαθμό 1 και βαθμού 3, αντίστοιχα, ήταν συνεπείς μεταξύ ανεξάρτητων δειγμάτων των ινοβλαστών.

(3) Stroma υποβοηθούμενη προστασία από αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο.

για να αξιολογηθεί το κατά πόσον σηματοδότηση στρωματικά ενισχύει την επιβίωση και πολλαπλασιασμό των συνκαλλιεργημένα κυττάρων όγκου, ο ανταγωνιστής ESR1, 4-υδροξυ ταμοξιφένη (ΟΗΤ), είναι γνωστό ότι ασκούν αντι επιδράσεις του όγκου του με το οξειδωτικό επαγωγή στρες και μετέπειτα απόπτωση, χρησιμοποιήθηκε για να κινήσει τον κυτταρικό θάνατο σε κυτταρικές γραμμές , η οποία εμφανίζεται μια αύξηση της επί τοις εκατό δ-φάση σε απόκριση σε συγκαλλιέργεια. Οι κυτταρικές σειρές που προέρχονται από δύο βαθμού 2 (CCdl329 και CCdl1599) και βαθμού 3 (CCdl675) όγκοι αξιολογήθηκαν. Πειραματικώς λαμβανόμενο αποπτωτικό δείκτη σύγκρισης μια ενιαία συγκέντρωση 10 μΜ ΟΗΤ χωρίς έλεγχο ΟΗΤ επέτρεψε μια τυποποιημένη δοκιμασία όπου οι σχετικές προστατευτικές επιδράσεις του στρωματικών συγκαλλιέργειας θα μπορούσε να μετρηθεί με χρώση Annexin-V. Πρώτον, μια σύγκριση μεταξύ του βασικού απόπτωση σε κυτταρικές σειρές όγκων (CCdl675, CCdl329 και CCdl1599) καλλιεργήθηκε μόνος του ή ως συγκαλλιεργειών με 3 ανεξάρτητες πηγές ινοβλαστών (1 μείωση mammoplasty που προέρχονται, ορίζονται ως EF, και 2 όγκων που προέρχονται ή TF) έδειξε ένα στρώμα, που προκαλείται προστατευτική επίδραση (Σχήμα 4Α). Η αποπτωτική κλάσμα μειώθηκε κατά 30-60% με βαθμό 2 κυτταρικές σειρές (CCdl1599 – p & lt? 0,002? CCdl329 – ρ & lt? 0.001), και κατά 85% σε βαθμού 3 κύτταρα (CCdl675 – p & lt? 0.005). Πιο σημαντικά, η δραματική ακίδα σε ΟΗΤ-κυτταρικό θάνατο που επάγεται επίσης καταστέλλεται από προηγούμενη έκθεση του όλες τις κυτταρικές σειρές 3 όγκου σε ινοβλαστών συγκαλλιέργεια. Στρωματικά ινοβλάστες τόσο κακοήθεις και μη κακοήθεις παραγωγή ήταν εξίσου αποτελεσματικές στην πρόκληση καταστολής της απόπτωσης σε κύτταρα όγκου (ρ & lt? 0.001) (Σχήμα 4Β). Ενώ είναι πιθανό ότι η μεταβλητότητα στην κυτταρική απόκριση προς ΟΗΤ εμφανής σε συγκαλλιέργεια είναι σε μεγάλο βαθμό μια αντανάκλαση της διαφορικής δραστικότητας ESR1, τα δεδομένα μας υποδηλώνουν έντονα ότι η αύξηση επαγωγή παρακρινική σηματοδότηση σε κύτταρα όγκου θα μπορούσε δυνητικά να μεταβάλλουν την ευαισθησία στην ορμονική θεραπεία και να παίξουν ένα ρόλο στην απόκτηση ενός ανθεκτικού φαινοτύπου.

Α. Μείωση στο κλάσμα βασικής γραμμής αποπτωτικών μετράται ως αννεξίνης-ν θετικών κυττάρων με ανάλυση FACS. Τρεις ανεξάρτητες κυτταρικές γραμμές όγκου συν-καλλιεργήθηκαν με μη κακοήθη (EF), και που προέρχεται από όγκο (TF1) και (TF2) ινοβλάστες, και σε σύγκριση με καρκινικά μόνος καλλιέργειες ελέγχου για αλλαγές στο αποπτωτικό δείκτη. Τα αντιπροσωπευτικά FACS προφίλ που διέπουν τις γραφικές περιλήψεις και τοις εκατό Annexin-V θετικά κύτταρα φαίνονται. Σημείωση σημαντική μείωση στο αποπτωτικό κλάσμα του συνόλου των 3 γραμμών όγκου (* ρ & lt? 0.005). Β Αντοχή σε ΟΗΤ που προκαλείται αποπτωτικό θάνατο σε καρκινικά κύτταρα συν-καλλιεργήθηκαν με τα δείγματα EF και TF σε σύγκριση με αγωγή με φάρμακο καρκινικά μόνος ελέγχου. Σημείωση αξιοσημείωτη καταστολή της ΟΗΤ κυτταρικό θάνατο που επάγεται από την συγκαλλιέργεια. C. Εξουδετέρωση των κυτταρικών επιπέδων ROS μετρώνται ως C400 μέση ένταση φθορισμού (MFI) με ανάλυση FACS. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως επί τοις εκατό μείωση έναντι της βασικής γραμμής φθορισμού των καλλιεργειών όγκου ελέγχου έναντι συγκαλλιεργειών. Τα αντιπροσωπευτικά FACS προφίλ που εκπροσωπούν τις γραφικές περιλήψεις και τις αξίες των ΝΧΙ εμφανίζονται. Σημείωση μείωση ΟΗΤ που προκαλείται C400 ΝΧΙ όλων των γραμμών του όγκου (* p & lt? 0.005). Δ συγκαλλιέργεια που προκαλείται παράκαμψη της ΟΗΤ μεσολάβηση σύλληψη G1 στα κύτταρα του όγκου. μείωση Σημείωση σε ποσοστό ΟΗΤ επαγόμενη αύξηση του πληθυσμού G1 σε συνκαλλιέργεια κυτταρικές γραμμές όγκου (* ρ & lt? 0.005). Κάθε σημείο δεδομένων είναι ο μέσος όρος των τιμών εις τριπλούν σε όλα τα πάνελ του σχήματος. Μπαρ είναι χρώμα που κωδικοποιείται στο πάνελ Β και D να αντιπροσωπεύουν τα ακόλουθα: γκρι -untreated ελέγχου, μαύρο – ΟΗΤ επεξεργασμένο έλεγχο, λευκό – επεξεργασία ΟΗΤ της EF συγκαλλιέργειας, μπλε – επεξεργασία ΟΗΤ της TF1 συγκαλλιέργειας, κόκκινο – επεξεργασία ΟΗΤ του TF2 συγκαλλιέργειας.

Η

(4) Μείωση του οξειδωτικού στρες εντός των κυττάρων του όγκου.

Η μέση ένταση φθορισμού της χρώσης C400 εξυπηρέτησε καλά ως ένας δείκτης της ενδογενούς επίπεδα ROS, αν και είναι γενικά χαμηλά σε όγκο κυτταρικές σειρές σε σύγκριση με φλεγμονώδεις κυτταρικούς τύπους. Μια σημαντική μείωση της ΟΗΤ που προκαλείται από τη συσσώρευση των ROS παρατηρήθηκε σε κυτταρικές σειρές όγκων (CCdl1599, CCdl329 και CCdl675) καλλιεργήθηκαν πριν από την φαρμακευτική αγωγή (Σχήμα 4C). Η μέση μείωση σε ROS με συγκαλλιέργεια ήταν 34% (ρ & lt? 0,0001). Όλα τα 3 κυτταρικές γραμμές ήταν συνεπή ως προς το βαθμό απόκρισης σε κακοήθεις και μη κακοήθεις ινοβλάστες που προέρχονται από ιστούς.

Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου έδειξαν μια ΟΗΤ επαγόμενη σύλληψη φάση G1 σε όλες τις κυτταρικές σειρές όγκων που δοκιμάστηκαν, που κυμαινόταν από 35% σε αύξηση 73% σε αυτό το κλάσμα (p & lt? 0.001). Επιπλέον, μια ήπια συσσώρευση στο κλάσμα G2 /M ήταν επίσης εμφανής σε 2/3 κυτταρικές γραμμές όγκου (ρ & lt? 0,02) παρουσία του ανταγωνιστή θεραπευτικής ορμόνης. Σε συγκαλλιέργειες των 2/3 καρκινικών κυτταρικών σειρών (CCdl1599, CCdl675), το G1-συνελήφθη κλάσμα μειώθηκε σημαντικά, παρά ΟΗΤ έκθεση (ρ & lt? 0.001) (Σχήμα 4D). Η προστατευτική δράση των ινοβλαστών συγκαλλιέργειας δεν ήταν τόσο εμφανής στη γραμμή CCdl329 δεδομένου ότι εμφανίζεται σχετική αντίσταση στη θεραπεία ΟΗΤ όπως υποδεικνύεται από την μικρότερη αύξηση στο κλάσμα G1 – υποδηλώνοντας ότι η G1 /S σημείο ελέγχου μπορεί να είναι ελαττωματικό σε αυτά τα κύτταρα. Είναι ενδιαφέρον, παρά την επαγωγή μόνο ένα ήπιο G1 σύλληψη, τα κύτταρα CCdl329 ήταν αποκρίνεται σε ΟΗΤ επαγόμενη απόπτωση (Σχήμα 4Β). Αυτή η διαφοροποίηση απαντήσεις σε ΟΗΤ προτείνουν άλλες πηγές μεταβλητότητας σε όγκους του μαστού, οι οποίες τροποποιούν περαιτέρω το αποτέλεσμα των αλληλεπιδράσεων όγκου-στρώματος, και αντικατοπτρίζουν πρόσθετες πηγές ετερογένειας.

Στο σύνολό τους, τα στοιχεία μας αποδεικνύουν ότι ινοβλαστών συγκαλλιέργεια διευκόλυνε μια παράλληλη μείωση σε 3 ανεξάρτητες, αλλά συνδέονται στενά με τις παραμέτρους της ΟΗΤ που προκαλείται από βλάβη: συσσώρευση των ROS, G1 σύλληψη, και αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο μέσα σε μια επιθετική υποσύνολο του πρωτογενούς όγκου μαστού που προέρχονται κυτταρικές σειρές. Ωστόσο, παρά όγκου προώθηση ανταπόκρισης που εμφανίζονται από αυτές τις κυτταρικές γραμμές, που σημειώνονται παραλλαγή ήταν εμφανής. κύτταρα CCdl329 απέφυγε αποτελεσματικά ΟΗΤ επαγόμενη απόπτωση, ακόμη και αν G1 σύλληψη με την παρουσία του φαρμάκου ξεπεραστεί μόνο εν μέρει από συγκαλλιέργεια. Σε αντίθεση, τα κύτταρα CCdl675 ήταν σχετικά ανεπαρκές σε ξεπεραστεί το αποπτωτικό επιβάρυνση παρά την παρατηρούμενη μείωση των ROS και μια εντυπωσιακή μείωση του G1 και G2 /M συνελήφθη κλάσμα, σύμφωνα με τις παρατηρήσεις μας με ανεπάρκεια επισκευής με αποκορύφωμα την αυξημένη αστάθεια του γονιδιώματος (στοιχεία που πρέπει να δημοσιευθεί αλλού ).

στρωματικά ινοβλαστών που προκαλείται από λειτουργική επίδραση είναι αναστρέψιμη

Τέλος, για την αξιολόγηση της αναστρεψιμότητας των διακριτικών και ντετερμινιστική παραμέτρους της στο στρώμα που προκαλείται επιθετικότητα ανάπτυξης, τα καρκινικά κύτταρα αναλύθηκαν σε μια περίοδο βραχυπρόθεσμης αποκατάστασης για αντιστροφή των αλλαγών του κυτταρικού κύκλου, και διέγερση θανάτου κυττάρου, μετά διακόπηκαν συνθήκες συγκαλλιέργεια (Σχήμα 5Α). Απομάκρυνση του επιρροή στρωματικών από βαθμού 3 (CCdl675) συγκαλλιέργειες ανέστρεψε την εντυπωσιακή αύξηση S-φάσης πάνω ελέγχου κατά τη διάρκεια της περιόδου δοκιμής 48 ώρες. Ωστόσο, η ενίσχυση σε αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο δεν εντοπίστηκε κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται), επιβεβαιώνοντας ότι επάγεται συγκαλλιέργεια αύξηση του BrdU-επισημασμένο κλάσμα των κυττάρων όγκου αντιπροσώπευε ένα μεγαλύτερο πληθυσμό ποδηλασία, αντί της συσσώρευσης σε S-φάση, λόγω replication- σύλληψη και πιρούνι απώλειας στήριξης. Στην περίπτωση της τελευταίας αυτής δυνατότητας, τον τερματισμό της συγκαλλιέργειας θα οδηγούσε σε κινητά εξέλιξη του κύκλου σε καρκινικά κύτταρα που φιλοξενούν ένα μη αντιγραφομένων σύνολο των χρωμοσωμάτων, με αποκορύφωμα την μιτωτική καταστροφή και θάνατο των κυττάρων. Στο βαθμό 1 καρκινικά κύτταρα (CCdl22), η οποία απάντησε σε συγκαλλιέργεια εμφανίζοντας μια μέση αύξηση της τάξης του 64% στην G2 /M συνελήφθη πληθυσμού σε σχέση με τον έλεγχο (ρ & lt? 0.001), την επανείσοδο παρατηρήθηκε μετά την απομάκρυνση των ινοβλαστών του κυτταρικού κύκλου. Ωστόσο, καθώς η καλλιέργεια έφθασε σε συρροή εντός του πειραματικού χρονικό πλαίσιο, ο επόμενος G0 /G1 σύλληψη ήταν εμφανής και στις δύο κύτταρα ελέγχου και συνκαλλιεργημένα βαθμού 1, γεγονός που δείχνει ότι (α) αυτά τα κύτταρα όγκου ήταν πιθανό επιδιόρθωσης του DNA ικανό, όπως απομάκρυνση των τελεστών στρωματικών υπερνίκησε το G2 σημείο ελέγχου, και ότι το δυναμικό (β) η ανάπτυξη ήταν άθικτο, αλλά αποκρίνεται σε αρνητική ρύθμιση από παρακρινούς σηματοδότηση. Αν η G2 /M σημείο ελέγχου δεν ήταν αναστρέψιμη αλλά λόγω αντίθετα από την έναρξη της μιτωτικής σύλληψης σε συνκαλλιέργειες, αυτό θα είχε ως αποτέλεσμα αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο, ανιχνεύσιμη ως σημαντική αύξηση του πληθυσμού subG1 εντός της περιόδου δοκιμής.

ΈΝΑ. Συγκριτικά προφίλ κυτταρικού κύκλου των κυττάρων του όγκου βαθμού 1 και βαθμού 3 μετά από 7-ημερών συγκαλλιέργειας ινοβλαστών, που ακολουθείται από μία περίοδο 48 ωρών χωρίς συγκαλλιέργεια. Σημείωση αξιοσημείωτη μείωση στον πληθυσμό G2 της κυτταρικής γραμμής βαθμού 1 μετά την λήξη της συνθήκες συγκαλλιέργειας. Και οι δύο πληθυσμοί ελέγχου και δοκιμής εμφανίζουν σημάδια G0 /G1 σύλληψη λόγω της συμβολής του πολιτισμού. Στη γραμμή όγκου βαθμού 3, ποδηλασία μετά συγκαλλιέργεια των κυττάρων επιστρέφει για τον έλεγχο των προφίλ. Αριθμημένα τμήματα γράφημα πίτας δείχνουν το ποσοστό των κυττάρων στην G1 και S φάση. SubG1: κίτρινο? G1: πράσινο? S: κόκκινο? G2 /M: μπλε. Β

Το μοντέλο FTExT

:

μέσω της εφαρμογής της ζωντανής διαδραστικής συγκαλλιεργειών στρωματικών ινοβλαστών και πρωτογενούς όγκου προερχόμενα επιθήλιο ποικίλης ιστολογική βαθμολογία, FTExT προσφέρει νέες γνώσεις για τη βιολογική βάση του grade- συνδέονται διαστρωμάτωση του πρωτογενούς καρκίνου του μαστού. Προτείνει ότι κυτταρικές σειρές που προέρχονται από καλά διαφοροποιημένο όγκων που σχετίζονται με την καλή κλινική πρόγνωση Ανακεφαλαιώνοντας λειτουργικά χαρακτηριστικά τους με την παρουσία των ινοβλαστών στρωματικών

in vitro

. Ομοίως, τα καρκινικά κύτταρα που προέρχονται από φτωχά διαφοροποιημένο κακοήθεις αλλοιώσεις διατηρούν την συμφραζόμενα ικανότητα να ανταποκριθούν με την ίδια παρακρινή επίδραση με τρόπο που αντιστοιχεί στην επιθετικότητα του καρκίνου και δυσμενή έκβαση των ασθενών. Τέτοια αυθεντικά πρότυπα συστήματα αποτελούν βασικό εργαλείο για την προώθηση των στόχων της έρευνας στη βιολογία του καρκίνου.

Η

Σε γενικές γραμμές, τα πειραματικά ευρήματα αυτής της μελέτης είναι συνεπείς και υποστηρικτική των διαφορικών δεδομένων κλινικής έκβασης που προέρχονται μέσω διασυνδέσεων FTExT προφίλ ανάλυσης του πρωτογενούς καρκίνου του μαστού. Μαζί, παρέχουν μία νέα εννοιολογικό πλαίσιο για τη σημαντική συσχέτιση μεταξύ του προτύπου έκφρασης FTExT σε μέτρια και φτωχά διαφοροποιημένο ή βαθμού 2 και 3 όγκων αντίστοιχα, και ο ρόλος του στρώματος στην επαγωγή ταχείας ανάπτυξης και φτωχή κλινική έκβαση. Σε αντίθεση, το σημείο ελέγχου επαγωγής σε καλά διαφοροποιημένα ή βαθμού 1 καρκινικών κυττάρων που προκαλείται από σηματοδότηση στρωματικά αντιστοιχεί στην παρατηρούμενη πρότυπο γονιδιακής έκφρασης των πρωτοπαθών όγκων, οι οποίες παρέχουν ένα καλό κλινικό αποτέλεσμα (Εικόνα 5Β).

Συζήτηση

για μια πλήρη εικόνα της ανάπτυξης και της εξέλιξης του καρκίνου, μια ολοκληρωμένη σκιαγράφηση των υποκείμενων πηγών που συμβάλλουν στην εκδήλωση των κακοήθων φαινοτύπων και ετερογένεια τους, είναι κρίσιμη. Σε προηγούμενες μελέτες έχουμε εξατομικεύονται εγγενή φαινοτύπων αντανακλώντας ιστολογική μεταβλητότητα του όγκου, αλλά ανεξάρτητη από τα συμφραζόμενα επιρροές, όπως η επαγωγή στρωματικά [21]. Με απασχολεί πειραματική συγκαλλιέργεια σε συνδυασμό με νέες πρωτογενείς κυτταρικές σειρές όγκων, εδώ η προσέγγισή μας έχει εντοπίσει FTExT, μια προγραμματισμένη απάντηση στο στρώμα που εκκρίνεται παράγοντες. Αντί για μια επίδραση στρωματικά που προωθεί ομοιόμορφα ή αναστέλλει όλους τους όγκους, τα δεδομένα μας καταδεικνύουν τη σημασία των μεταβλητών επιθηλιακών ανταπόκρισης σε έκβαση της νόσου. Μαζί με συνακόλουθη αναλύσεις κλινικών ιστού, όπως εστιασμένη ακόμη ευρέως πεδίου εφαρμογής στρατηγικών ερευνών για να καθορίσει το λειτουργικό πλαίσιο των φαινοτύπων του καρκίνου θα μπορούσε να βελτιώσει σημαντικά το εύρος και την ακρίβεια των druggable αναγνώρισης στόχου.

Το προφίλ FTExT δημιουργείται μέσω πειραματικών συγκαλλιέργεια απεικονίζει ρύθμιση στρωματικά μεγάλων προγραμμάτων βιολογικής, προτείνοντας ένα ρόλο κλειδί για στρώμα υποβοηθούμενη προώθηση της έγκαιρης χαρακτηριστικά του καρκίνου που περιλαμβάνει παράκαμψη των ρυθμιστικών κυκλωμάτων, όπως ανοσολογική επαγρύπνηση, οξειδωτικό στρες, και μεταβολική ανεπάρκεια [24], εκτός από τα χαρακτηριστικά του προχωρημένου καρκίνου [25]. Κατά συνέπεια, το προφίλ έκφρασης FTExT βρέθηκε να συνδέεται με κακή κλινική έκβαση σε δύο ανεξάρτητα σύνολα δεδομένων, που αντιπροσωπεύουν πάνω από 600 περιπτώσεις. Συνεπής με αυτή την συνακόλουθη κλινικά δεδομένα, έχουμε αποδείξει περαιτέρω, ότι οι μεταγενέστεροι λειτουργικές επιδράσεις της στο στρώμα που επάγεται μεταγραφικής αλλαγές ήταν δραματικά μεταβλητή μεταξύ πρωτογενών κυττάρων όγκου μαστού αποκλινουσών ιστοπαθολογικών παραγωγή. Σε επιθετικό καρκίνο του μαστού, οι επιπτώσεις του όγκου προώθηση ήταν εμφανής ως αυξημένη ικανότητα για την οξειδωτική εξουδετέρωση του στρες, απόπτωση φοροδιαφυγής, και ποδηλασία ταχεία κυττάρων.