Protein μεθυλίωση είναι ένα μετα-μεταφραστική τροποποίηση η οποία εμφανίζεται κυρίως σε αργινίνης και λυσίνης. Όταν οι μεθυλτρανσφεράσες νοκ άουτ σε ποντίκια, μπορεί να οδηγήσει σε εμβρυϊκή θνησιμότητα ή πρόωρου θανάτου, αναφέροντας τις ζωτικής σημασίας βιολογικό ρόλο σε αυτή την ομάδα των ενζύμων. Το ρεκόρ του μετουσιωμένο αριθμού πεπτιδίου εντοπίζονται σε ένα μόνο πείραμα είναι 249 αργινίνη περιοχές μεθυλίωσης.

Εδώ, έχουμε αναπτύξει πολύ ειδικά αντισώματα κατά της αργινίνης και μεθυλίωση της λυσίνης. Μετά ανοσοσυγγένειας εμπλουτισμό και την ανάλυση φασματομετρίας μάζας, εντοπίσαμε πάνω από 1000 τοποθεσίες αργινίνη μεθυλίωσης σε κυτταρική σειρά και το ποντίκι τους ιστούς του ανθρώπου, και 160 τοποθεσίες μεθυλίωση της λυσίνης στην ανθρώπινη κυτταρική σειρά HCT116.

Πρώτον, έχουμε αναπτύξει αντισώματα κατά του μετουσιωμένο λυσίνη, χρησιμοποιώντας μια βιβλιοθήκη πεπτίδιο που είχε ένα απλό τροποποιημένο λυσίνης σε μια βιβλιοθήκη πεπτίδιο που περιέχει αμινοξέα στις θέσεις που περιβάλλουν.

στη συνέχεια, θα ρίξουμε το μεθυλιωμένο πεπτίδιο και ανάλυση τους με LC /MS /MS. Και τότε έχουμε ταξινομήσει την αργινίνη μεθυλίωση μορφή μοτίβο του εγκεφάλου και εμβρύου ποντικού.

Επιτέλους, έχουμε την ένδειξη της συνολικής πρωτεΐνης με διμεθυλίωση in vitro. Χρησιμοποιήστε αυτό το τεχνητό δείγμα, προσδιορίσαμε περισσότερα από χιλιάδες μεθυλιωμένου πεπτιδίου, ωστόσο, το φυσιολογικό δείγμα έχει λιγότερες από 100 θέσεις λυσίνης μεθυλίωση, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτή η τροποποίηση περιορίζεται σε ένα μικρό υποσύνολο των πρωτεϊνών.

Η μεθυλίωση αργινίνης και υπολείμματα πρωτεΐνης λυσίνης έχει γίνει γνωστό από πολλά χρόνια, η πρόκληση για τον τομέα είναι ανύπαρκτη εργαλείων και μεθόδων για τη μελέτη αυτών των μεταβολών. Αυτή η μελέτη παρέχει μια ισχυρά εργαλεία για να πάρει εικόνα στο πεδίο της πρωτεΐνης μεθυλίωσης.

MC4R είναι ένα συζευγμένο υποδοχέα G-πρωτεΐνης που δεσμεύει; -melanocyte ορμόνη (α-ΜδΗ). Σε μοντέλα ποντικών έχουν υποδοχείς MC4 έχουν βρεθεί ότι εμπλέκονται στην διατροφική συμπεριφορά, τη ρύθμιση του μεταβολισμού, τη σεξουαλική συμπεριφορά, και αρσενικά στυτική λειτουργία. Τόσο σε τρωκτικά και ανθρώπους, μελανοκορτίνης-4 υποδοχείς (MC4Rs) καταστέλλουν την όρεξη και την πρόληψη της παχυσαρκίας. Η ενεργοποίηση της μελανοκορτίνης-4 υποδοχείς (MC4Rs) συγκρατεί σίτισης και αποτρέπει την παχυσαρκία.

Εμείς διαγραφεί και εκ νέου εξέφρασε MC4Rs από νευρώνες CRE-έκφραση και παρατήρησε το φαινότυπο. Δεδομένου ότι οι βασικές νευρώνες MC4R που εκφράζουν είναι γλουταμινεργικό, είναι σχεδόν βέβαιο ότι θα απελευθερώσει γλουταμινικό και να ενθουσιάσει κατάντη νευρώνες-στόχους τους.

Στη συνέχεια, δείχνουμε ότι MC4Rs στο γλουταμινεργικής νευρώνων είναι απαραίτητες για την πρόληψη υπερφαγία και την παχυσαρκία. Στη συνέχεια, έχουμε την ανοικοδόμηση MC4Rs μόνο SIM1 νευρώνες διασωθεί; 60% της παχυσαρκίας και του 100% της υπερφαγία του MC4R-null ποντίκια. Αυτό το αποτέλεσμα δείχνει ότι MC4Rs για SIM1 νευρώνες ρυθμίζουν τη διατροφική. Επειδή μεταγραφικού παράγοντα SIM1 απαιτείται για την ανάπτυξη PVH.

Για την περίληψη, έχουμε αποδείξει ότι οι MC4R εκφράζουν νευρώνες που ρυθμίζουν διατροφή είναι SIM1 +, που βρίσκεται στην PVH, γλουταμινεργικό και όχι ΟΑΒΑεργικοί, και δεν εκφράζουν ωκυτοκίνη, κορτικοτροπίνης -απελευθερωτ ική ορμόνη και βασοπρεσίνη. Εντοπίζουμε κατάντη προβλέψεις από αυτές γλουταμινεργικό νευρώνες στο πλευρικό parabrachial πυρήνα, το οποίο θα μπορούσε να μεσολαβήσει την όρεξη καταστέλλοντας αποτελέσματα.