Αφηρημένο

Ιστορικό

Οι μελέτες ασθενών με παρανεοπλασματικές νευρολογικές διαταραχές (PND) έχουν αποκαλύψει ότι η αποπτωτική όγκου χρησιμεύει ως μια πιθανή ισχυρό έναυσμα για την έναρξη της φυσικά ανοσία όγκου. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογήσει τη σκοπιμότητα, την ασφάλεια, και την ανοσογονικότητα μιας αποπτωτικών δενδριτικών κυττάρων (DC) εμβόλιο όγκου-αυτόλογη.

Μέθοδοι και Ευρήματα

ασυλία

Έχουμε πρότυπο PND όγκου σε μια κλινική δοκιμή στην οποία τα αποπτωτικά κύτταρα όγκου αλλογενών προστάτη χρησιμοποιήθηκαν για να δημιουργήσουν ένα αποπτωτικό όγκο αυτόλογων δενδριτικών κυττάρων εμβόλιο. Είκοσι τέσσερις ασθενείς με καρκίνο του προστάτη ανοσοποιήθηκαν σε μια Φάσης Ι, τυχαιοποιημένη, μονή-τυφλή, ελεγχόμενη με εικονικό φάρμακο μελέτη για να αξιολογηθεί η ασφάλεια και η ανοσογονικότητα του εμβολίου αυτού. Εμβολιασμοί ήταν ασφαλής και καλά ανεκτή. Είναι σημαντικό, βρήκαμε επίσης ότι το εμβόλιο ήταν ανοσογονικό, που προκαλεί καθυστερημένου τύπου υπερευαισθησία (DTH) και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων CD4 + και CD8 + Τ, με καμία επίδραση στην FoxP3 + ρυθμιστικά Τ κύτταρα. Μια στατιστικά σημαντική αύξηση σε Τ αποκρίσεις πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη

in vitro

(p = 0,002), η μείωση στο ειδικό προστατικό αντιγόνο (PSA) κλίση (p = 0,016), και δύο φορές αύξηση στην PSA χρόνος διπλασιασμού (p = 0.003) ταυτοποιήθηκαν όταν συγκρίναμε δεδομένων πριν και μετά τον εμβολιασμό.

Συμπεράσματα

ένα εμβόλιο αποπτωτικών κυττάρων καρκίνου πρότυπο φυσικά όγκου άνοσο αποκρίσεις σε ασθενείς PND παρέχει ένα ασφαλές και ανοσογονικό εμβόλιο όγκου. (Αριθμός ClinicalTrials.gov NCT00289341)

Δίκη ΕΓΓΡΑΦΕΣ

ClinicalTrials.gov NCT00289341

Παράθεση:. Frank MO, Kaufman J, Tian S, Suárez-Fariñas M, Parveen S , Blachere ΝΕ, et al. (2010) Αξιοποίηση απαντά στη φύση ανοσία όγκου: Μια Κλινική του δοκιμαστικού εμβολίου κατά του καρκίνου του προστάτη. PLoS ONE 5 (9): e12367. doi: 10.1371 /journal.pone.0012367

Επιμέλεια: Torbjorn Ramqvist, του Ινστιτούτου Καρολίνσκα, στη Σουηδία

Ελήφθη: 1 Μάρ 2010? Αποδεκτές: 22 Ιουνίου, 2010? Δημοσιεύθηκε: 1 του Σεπτέμβρη, 2010

Copyright: © 2010 Frank et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από την Burroughs Ταμείο Wellcome και Doris Duke Foundation (MLA), τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (NIH) (R01 CA85784 να RBD), το Πανεπιστήμιο Rockefeller Νοσοκομείο Κλινική και Μεταγραφική Science βραβεία (CTSA) (χορηγήσει UL1 RR024143) από την Εθνική κέντρο Έρευνας Πόρων στο ΝΙΗ, το Ταμείο Memorial Leslie Misrock, και David H. Koch. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Tumor ανοσίας σε ασθενείς με παρανεοπλασματική νευρολογικές διαταραχές (PND) έχουν μελετηθεί με την ελπίδα της αποκάλυψης αρχές που μπορούν να εφαρμοστούν στο γενικό πληθυσμό των ασθενών με καρκίνο [1], [2]. Αυτές οι μελέτες κατέδειξαν όγκου αντιγόνου-ειδικά CD8

+ Τ κυττάρων στο περιφερικό αίμα ασθενών PND [3], [4], αλλά δημιουργείται επίσης ένα παράδοξο. Τα αντιγόνα PND εκφράζονται κανονικά στον εγκέφαλο, και τα εκτοπικά εκφράζονται σε όγκους, αλλά δεν εκφράζονται σε δενδριτικά κύτταρα (DCs) που είναι απαραίτητα για την εκκίνηση αφελή αποκρίσεις Τ κυττάρων. [5] Με βάση τις παρατηρήσεις γίνονται με αντιγόνα λύκου [6], υποθέσαμε ότι αποπτωτικά κύτταρα θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως ένα αποτελεσματικό μέσο για τη μεταφορά αντιγόνων σε δενδριτικά κύτταρα και παρουσίαση MHC Ι για την ενεργοποίηση των CD8

+ Τ κύτταρα [7]. Αυτό αποδείχθηκε ότι είναι σωστό και για τις δύο όγκων [3] και ιικά αντιγόνα [8], και είναι πιθανό ότι η φαγοκυττάρωση των αποπτωτικών κυττάρων χρησιμεύσουν ως γενικό μέσο με το οποίο το ανοσοποιητικό σύστημα έρευνες αντιγόνων σε όλη τη ζωή. Insights από τη μελέτη της φυσικής ανοσίας του όγκου σε PND παρέχει μια συναρπαστική βάση πάνω στην οποία να διαμορφώσει κλινικές μελέτες [2], [9], [10].

Πολλές παρατηρήσεις υποστηρίζουν την άποψη ότι αποπτωτικά κύτταρα του όγκου μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα ισχυρό πηγή αντιγόνου για την τόνωση της υποδοχής ανοσολογικές αποκρίσεις

in vivo

. Θεωρητικά, όλες οι πιθανές καρκινικά αντιγόνα μέσα σε ένα αποπτωτικών κυττάρων του όγκου, και πολλαπλών επιτόπων από κάθε αντιγόνο, μπορεί να είναι cross-παρουσιάστηκε από αναπτυσσόμενες χώρες, όπου τα μεταποιημένα αντιγόνο μπορεί να τοποθετηθεί σε όλα τα (συνήθως έξι) αλληλόμορφα MHC Ι. Αυτό προσφέρει σημαντικά πλεονεκτήματα σε σχέση με πεπτίδιο παλμικά πρωτόκολλα DC, στην οποία ο ερευνητής πρέπει να έχουν γνώση του αντιγόνου όγκου και πρέπει να επιλέξει συγκεκριμένη MHC Ι-περιορισμένα πεπτίδια για διέγερση αντιγόνου. παρουσίαση αντιγόνου από τα αποπτωτικά κύτταρα έχει εκτιμηθεί ότι είναι 10.000-50.000 πιο αποτελεσματική από ό, τι το ελεύθερο πεπτίδιο σε φόρτωση των μορίων MHC του DC [11], [12]. Αποπτωτικών υλικό υποβάλλεται σε επεξεργασία από ένα φυσικό μονοπάτι: Τα αποπτωτικά κύτταρα εσωτερικεύεται από DC-περιορισμένη υποδοχείς, συμπεριλαμβανομένου του α

νβ υποδοχέα

5 ιντεγκρίνης [13], στη συνέχεια υποβάλλονται σε επεξεργασία σε δενδριτικά κύτταρα από διακριτών οδών [14]. Αυτά τα DCs τότε δημιουργούν τόσο MHC Ι και επίτοπους πεπτιδίου MHC II [13], που οδηγεί στην ενεργοποίηση των δύο

+ και CD4

+ Τ κύτταρα CD8. Δεδομένου ότι η ικανότητα των DC αποπτωτικών κυττάρων διασταυρούμενη παρουσίαση για την ενεργοποίηση τελεστών CD8

+ Τ κυττάρων απαιτεί σήματα από CD4 βοηθητικών κυττάρων [15], η ικανότητα των αποπτωτικών υλικού που πρόκειται να φορτωθούν σε δύο μόρια MHC Ι και MHC II έχει ιδιαίτερη σημασία κατά την εξέταση των δυνατοτήτων του στην ανοσοθεραπεία.

ΑΧ παρουσιάζοντας αποπτωτικά κύτταρα του όγκου διεγείρουν αποκρίσεις Τ-κυττάρων σε ζώα και

in vitro

[16]. Κλινικά, αρκετές μελέτες έχουν χρησιμοποιηθεί σκοτώθηκαν κύτταρα όγκου σε δοκιμασίες εμβολίων, συμπεριλαμβανομένων των νευρογλοιακών [17] – [21], του προστάτη [22], το μελάνωμα [23], του μαστού [24], των ωοθηκών [25] και παιδιατρικών στερεών καρκινικών κυττάρων [26] (αναθεωρηθούν [9], [16], [27]). Αυτές οι μελέτες δεν έχουν επικεντρωθεί στην αποπτωτικό θάνατο per se, αλλά μάλλον έχουν σκοτώσει τα καρκινικά κύτταρα με διάφορα μέσα (π.χ. με κατάψυξη απόψυξη, ή μεγάλες ποσότητες UVB και γάμμα ακτινοβολία), που οδηγεί σε ατελώς χαρακτηρισμένο μίγματα νεκρωτικό και αποπτωτικό κυτταρικό θάνατο. Ερμηνεία των μελετών αυτών περιπλέκεται από αντιπαράθεση σχετικά με την ανοσογόνο δραστικότητα των διαφόρων μορφών των νεκρών κυττάρων [28]. Παρ ‘όλα αυτά, μερικές μελέτες έχουν δείξει το δυναμικό για ανοσολογικές και κλινικές αποκρίσεις σε αυτόλογα DC που παρουσιάζουν τα νεκρά κύτταρα όγκου [19], [23]. Εδώ παραθέτουμε για τη δοκιμή με μεγαλύτερη ακρίβεια τη σχέση μεταξύ του όγκου επαγωγή ανοσοαποκρίσεων PND-όπως και η ανάπτυξη μιας κλινικής εμβολίου. Εμείς επαγόμενη αποπτωτικό θάνατο των καρκινικών κυττάρων LNCaP του προστάτη, και τους επέτρεψε να φαγοκυτταρώνονται από αυτόλογα DC που παράγεται από μονοκύτταρα περιφερικού αίματος ασθενών με καρκίνο του προστάτη »? όπως ΑΧ είχαν προηγουμένως αποδειχθεί ότι διεγείρει τόσο CD8

+ και CD4

+ Τ κυττάρων

in vitro

[29], και σε Β16 μοντέλο μελανώματος ποντικιού ΑΧ cross-παρουσίαση αποπτωτικών όγκου ήταν αποτελεσματικό στην πρόληψη της ανάπτυξη του όγκου (Blachere et al., μη δημοσιευμένα δεδομένα). Εδώ αναφέρουμε την ασφάλεια και την ανοσογονικότητα του DC /αποπτωτικών κυττάρων όγκου LNCaP του προστάτη σε μια ελεγχόμενη μελέτη των ασθενών με καρκίνο του προστάτη 24.

Αποτελέσματα

Πληθυσμός μελέτης

Είκοσι-τέσσερις διαδοχικές επιλέξιμες ασθενείς εμβολιάστηκαν με DC /LNCaP, μαζί με τους εμβολιασμούς ελέγχου. Συνολικά 28.4-78.9 εκατομμύριο (μέσος όρος 50,3 εκατ) καρκινικά κύτταρα αποπτωτικά LNCaP DCs εγκάρσιας παρουσίασης δόθηκαν ανά ασθενή, υποδιαιρούνται σε 4 δόσεις, η κάθε μία 2 εβδομάδων (σχήμα 1). Κατά τη στιγμή της εισόδου της μελέτης, 11 από τους 12 ασθενείς στο Σκέλος 1 και 10 από τους 12 ασθενείς στο Σκέλος 2 είχε μόνο βιοχημική υποτροπή, χωρίς άλλα αποδεικτικά στοιχεία της μεταστατικής νόσου (Πίνακας 1). Η μέση ηλικία των ασθενών ήταν 62,5 ± 6,7 και 65,7 ± 9,2 χρόνια και η μέση βαθμολογία Gleason κατά την έναρξη της μελέτης ήταν 7,25 και 7,17 στα όπλα 1 και 2, αντίστοιχα.

Οι ασθενείς ελέγχθηκαν και τυχαιοποιήθηκαν σε 1 από 2 βραχίονες , το καθένα με 12 ασθενείς. Οι ασθενείς και στα δύο σκέλη ήταν τυφλοί κατά τη διάρκεια των φάσεων του εμβολίου /εικονικό φάρμακο μέχρι την εβδομάδα 8. ασθενείς στο Σκέλος 1 συνεχίστηκε στη φάση μετά το εμβόλιο, ενώ οι ασθενείς στο Σκέλος 2 πέρασαν στη φάση του εμβολίου πριν από την είσοδο φάση μετά το εμβόλιο.

χαρακτηριστικών του εμβολίου DC

ΑΧ καλλιεργήθηκαν με LNCaP ή κύτταρα LNCaP-M1 που ήταν & gt? 90% αποπτωτικών (Σχήμα 2). Όλα τα παρασκευάσματα εμβολίου DC χορηγηθούν ανταποκρίνονταν στα κριτήρια για τη βιωσιμότητα και την ωριμότητα (Πίνακας 2 και Σχήμα 2). λειτουργία DC παρακολουθήθηκε με αλλο-MLR? DCs διεγέρθηκαν 2 × 10

5 αλλογενή Τ κύτταρα να ενσωματώσουν ≥10

5 CPM του

3Η-θυμιδίνης την 5η ημέρα μετά από μια 18-ωρη

παλμού θυμιδίνης 3Η (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

υπεριώδη ακτινοβολία (UV +) ειδικά επαγόμενη απόπτωση στα κύτταρα LNCaP όπως υποδεικνύεται από 96% Caspatag + TOPRO + χρώση 38 ώρες μετά την υπεριώδη ακτινοβολία. DC καλλιεργήθηκαν με αποπτωτικά κύτταρα LNCaP (Vaccine) είναι ώριμα, με & gt? 96% CD83 θετικά κύτταρα. Δεδομένα που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά του συνόλου των 24 εμβόλια που παρασκευάζονται.

Η

Ασφάλεια

Η επίπτωση στη θέση της ένεσης και συστηματικές αντιδράσεις στο εμβόλιο παρουσιάζονται στον Πίνακα 3. Κανένα εμβόλιο δεν σχετίζονται με σοβαρές παρατηρήθηκαν ανεπιθύμητες ενέργειες. Μόνο 1 τοξικότητα ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των ομάδων εικονικού φαρμάκου και του εμβολίου στην ενιαία τυφλή φάση της μελέτης: βαθμού 1 ή 2 αντιδράσεις ενέσεις ιστοσελίδα που συνέβη σε 11 από 12 ασθενείς στην ομάδα του εμβολίου (ρ & lt? 0.001), που αναλογούν στους εμβόλιο (αλλά δεν placebo) παράγει DTH-όπως αποκρίσεις. Δεν υπήρξε συμπτωματική ενδείξεις αυτοάνοσης νόσου σε κάθε ασθενή, συμπεριλαμβανομένων αγγειίτιδα, θυρεοειδίτιδα, κολίτιδα, νευρολογική νόσο, ενδοκρινοπάθειας ή μυοκαρδιοπάθεια.

Η

Ανοσολογική απάντηση

Όλοι οι ασθενείς που έλαβαν το DC /αιμοκυανίνη πεταλίδας (KLH) εμβόλιο είχε θετική DTH απόκριση σε KLH. Κανένας από τους 24 ασθενείς είχαν μια απάντηση σε LNCaP λύμα κατά την έναρξη (εβδομάδα 0). Όλοι οι 24 ασθενείς έλαβαν LNCaP λύμα ως μέρος της DTH πάνελ στις εβδομάδες 3, 5, 7, και 9. Δεκαέξι από τους 24 ασθενείς (67%) είχαν μια DTH απόκριση σε LNCaP λύμα σε τουλάχιστον 1 από αυτά τα 4 χρονικά σημεία, με το υψηλότερο ποσοστό των ασθενών (54,2%) ανταποκρίνονται σε LNCaP λύμα σε 2 εβδομάδες μετά την τελευταία αναμνηστική (εβδομάδα 9). Απαντήσεις διατηρήθηκαν σε 9 από 13 ασθενείς (69%) σε 22 εβδομάδες μετά την τελευταία αναμνηστική (εβδομάδα 29, Εικόνα 3). Οι απαντήσεις σε LNCaP λύμα ήταν στατιστικά σημαντικές σε όλα τα χρονικά σημεία με διάστημα εμπιστοσύνης 95%. Κανονικό αλατούχο διάλυμα, δίνεται ως μάρτυρας, ήταν αρνητικό σε όλα τα χρονικά σημεία σε όλους τους ασθενείς.

εμβόλιο προκάλεσε DTH απόκριση σε κυτταρολύματα LNCaP εγχύθηκε ενδοδερμικά μετρήθηκαν στους χρόνους που υποδεικνύονται. Εβδομάδα 1 ήταν βασική γραμμή, στον οποίο χρόνο κανένα ασθενείς είχαν DTH αποκρίσεις (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). DTH αποκρίσεις θεωρήθηκαν θετικά κατά ≥5 mm ερύθημα διαβάστηκε σε 48 ώρες μετά την τοποθέτηση. Μπάρες δείχνουν τον αριθμό των ασθενών με θετικές απαντήσεις σε κάθε χρονικό σημείο. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν διαστήματα εμπιστοσύνης 95%. Διακεκομμένη γραμμή αντιπροσωπεύει την τάση του ποσοστού των ασθενών με θετικές απαντήσεις σε κάθε χρονικό σημείο. Στατιστικώς σημαντική θετική DTH αποκρίσεις σε κυτταρικό λύμα LNCaP εμφανιζόταν Εβδομάδα 3 (πρώτο χρονικό σημείο μετά την αρχική τιμή) και αποκρίσεις ήταν ακόμη παρούσα σε 9 από 13 ασθενείς (69%) σε 22 εβδομάδες μετά την τελευταία αναμνηστική δόση (Εβδομάδα 29).

A

3Η δοκιμασία πολλαπλασιασμού θυμιδίνης χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η αντιδραστικότητα των κυττάρων Τ προς KLH πρωτεΐνη και σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη (είτε αυτές που χρησιμοποιούνται σε εμβολιασμό (LNCaP) ή σε ένα άλλο κύτταρο όγκου προστάτη γραμμή (PC3) ). Αρνητική αντιγόνα ελέγχου που περιλαμβάνονται αυτόλογα μονοκύτταρα και ένα άσχετο γραμμή κυττάρων (3Τ3). 3Τ3 μολυσμένα με γρίπη χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος. Τ κύτταρα συλλέχθηκαν την εβδομάδα 0 (προ-εμβολίου) λευκαφαίρεση και την εβδομάδα 13 (μετα-εμβολίου) λευκαφαίρεση (Σχήμα 1). Για να είναι έγκυρη, κάθε δοκιμασία μεμονωμένα πολλαπλασιασμού πρέπει να είχε μια ανιχνεύσιμη πριν ανταπόκριση γρίπης και μετά το εμβόλιο. Δύο από τους 24 ασθενείς δεν είχαν καμία ανιχνεύσιμη απόκριση των πτηνών και έτσι αποκλείστηκαν από την ανάλυση. Τα 22 αξιολογήσιμους ασθενείς, θεωρούνται ως ομάδα, δεν είχε καμία στατιστικώς σημαντική διαφορά στην απόκριση Τ κυττάρου σε γρίπη, προ- έναντι μετα-εμβολίου (ρ = 0,310, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Υπήρξε μια στατιστικά σημαντική απόκριση κυττάρων Τ σε KLH μετα-εμβόλιο εναντίον προ-εμβολίου (ρ = 0,008), καθώς και σε αποπτωτικά LNCaP (p = 0,017) και τα αποπτωτικά κύτταρα PC3 όγκου (ρ = 0,011) (Σχήμα 4α). Δεν υπήρχαν στατιστικά σημαντικές διαφορές σε προ- vs αποκρίσεις μετά εμβόλιο Τ κυττάρων σε κύτταρα παρουσίασης αντιγόνου (APC) μόνη (p = 0.160), για τον έλεγχο των αντιγόνων, 3Τ3 (p = 0.070) ή αυτόλογα μονοκύτταρα (p = 0,156) (Πίνακας 4, Το σχήμα 4α και τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

σύγκριση αποκρίσεων χύδην Τ κυττάρων πριν και μετά την εμβόλιο για το αντιγόνο του προστάτη. ένα. Τα αποπτωτικά κύτταρα όγκου (LNCaP και PC3, ή ένα άσχετο κυτταρική σειρά (3Τ3)) ή με πρωτεΐνη KLH συν-καλλιεργήθηκαν με ασθενή μονοκύτταρα περιφερικού αίματος και συγγενικά χύδην Τ κύτταρα που ελήφθησαν από ασθενείς πριν ή μετά τον εμβολιασμό. Μονοκύτταρα χωρίς εξωγενές αντιγόνο (Όχι Ag) ή αποπτωτικά κύτταρα 3Τ3 (Ctrl Ag), χρησίμευσαν ως αρνητικοί μάρτυρες. Πολλαπλασιασμό αξιολογήθηκε την ημέρα 5 μετά από μια 18-ωρη

παλμό 3Η θυμιδίνης. Τα δεδομένα παρουσιάζονται για 22 από τους 24 ασθενείς. Η διαφορά στον πολλαπλασιασμό (μετά μείον προ-εμβόλιο) για κάθε ομάδα το αντιγόνο παρουσιάζεται στο οικόπεδα κουτί. Οι τιμές που αναφέρονται είναι οι μέσες απαριθμήσεις ανά λεπτό (CPM) φρεατίων εις τριπλούν. Η μέση διαφορά για κάθε ομάδα το αντιγόνο φαίνεται από την γραμμή στο κουτί. Κάθε ασθενής ο οποίος είναι μια ακραία τιμή υποδεικνύεται από ένα μοναδικό σύμβολο. Στατιστικά σημαντικές διαφορές στην προ-εμβόλιο εναντίον πολλαπλασιαστικές αποκρίσεις μετά εμβόλιο κυττάρων Τ αποτελέσματα για KLH (p = 0,008), LNCaP (p = 0,017) και PC3 (p = 0,011). σι. Μαζική Τ κύτταρα που λαμβάνονται μετά τον εμβολιασμό βάφτηκαν με CFSE και καλλιεργήθηκαν με τα αντιγόνα του προστάτη ΑΧ cross-παρουσίαση, LNCaP και PC3, ή άσχετο κυτταρική γραμμή (293, Ctrl Ag). Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων την ημέρα 5, αξιολογούνται από αραίωση χρωστική CFSE, εμφανίζεται στον χ-άξονα και η έκφραση CD8 εμφανίζεται στον γ-άξονα. Ποσοστά που εμφανίζονται αντιπροσωπεύουν CD8 + κύτταρα που έχουν χωριστεί μέσα στον πληθυσμό μεγαλύτερο των Τ κυττάρων. Τέσσερα από τα πέντε επιπλέον ασθενείς που εξετάστηκαν έδειξαν παρόμοια CD8 + απαντήσεις? τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι για τον ασθενή # 15.

Η

Με βάση τα δεδομένα DTH (Σχήμα 3) και το

στοιχεία πολλαπλασιασμό 3Η θυμιδίνης (Σχήμα 4α), υπολογίσαμε και κατατάσσονται σε DTH δείκτη και ένα δείκτη πολλαπλασιασμού για να προσδιοριστεί εάν υπήρχε σχέση μεταξύ των δύο. Μια θετική συσχέτιση βρέθηκε (0.55 χρησιμοποιώντας το τεστ rank συσχέτιση Spearman (ρ = 0.008)), υποδεικνύοντας ότι οι ασθενείς που είχαν θετικές αποκρίσεις DTH σε LNCaP λύμα έτειναν επίσης να έχει Τ αποκρίσεις πολλαπλασιασμού των κυττάρων να αποπτωτικά κύτταρα LNCaP

in vitro

.

Η απάντηση πολλαπλασιασμός αξιολογήθηκε επίσης με τη δοκιμασία αραίωσης χρωστική CFSE [30]. Σε 5 από τους 6 ασθενείς, μία απόκριση CD8 + Τ κυττάρων ειδικών για αντιγόνα προστάτη παρατηρήθηκε (Σχήμα 4β και τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επιβεβαιώσαμε ότι και οι έξι ασθενείς που εξετάστηκαν, επίσης, είχε μια απάντηση CD4 + Τ κυττάρων σε αντιγόνα του προστάτη.

Εμείς εξετάζεται η πιθανότητα ότι το αυξημένο Τ πολλαπλασιασμό των κυττάρων απόκρισης μετά τον εμβολιασμό μπορούν να αφορούν σε μείωση των ρυθμιστικών Τ κυττάρων στην κυκλοφορία. Για τον προσδιορισμό της επί τοις εκατό των CD4 + Τ κυττάρων που είναι ρυθμιστικά κύτταρα Τ σε προ- και μετα-εμβολιασμένα δείγματα αίματος, PBMCs χρωματίστηκαν και αξιολογήθηκαν για έκφραση Foxp3 (Σχήμα 5). Καμία διαφορά (ρ = 0,924) βρέθηκε σε έκφραση Foxp3 σύγκριση πριν και μετά τον εμβολιασμό CD4 + Τ κύτταρα από 15 ασθενείς (Πίνακας 4).

α. προφίλ FACS της έκφρασης Foxp3 σε προ- και μετα-εμβολιασμένα περιφερικό αίμα με περίφραξη σε CD4 + Τ κύτταρα. Ένας εκπρόσωπος του ασθενούς (# 13) εμφανίζεται. σι. οικόπεδα κουτί του ποσοστού Foxp3 + κύτταρα (περίφραξη σε CD4 + Τ κύτταρα) προ και μετά τον εμβολιασμό σε 15 αντιπροσωπευτικά ασθενείς, συμπεριλαμβανομένων και αυτών σε όλο το φάσμα των πολλαπλασιαστικών αποκρίσεων και των αλλαγών στην κλίση PSA. Το μεσαίο φαίνεται από το +. Οι ακραίες τιμές που υποδεικνύεται από •. Δεν παρατηρήθηκε διαφορά στην προ-εμβόλιο εναντίον μετα-εμβόλιο έκφραση των Τ κυττάρων του Foxp3 (p = 0,924).

Η

PSA απάντηση

Το ειδικό προστατικό αντιγόνο χρόνος διπλασιασμού (PSADT) υπολογίστηκε για κάθε ασθενή κατά τη διάρκεια κάθε φάσης της μελέτης. Ο διάμεσος χρόνος διπλασιασμού κατά τη φάση της προ-εμβολίου ήταν 4,5 μήνες, και αυτό αυξήθηκε σε 5,4 και 8,9 μήνες κατά τη διάρκεια των φάσεων του εμβολίου και μετα-εμβόλιο, αντίστοιχα. Υπήρχαν στατιστικώς σημαντικές διαφορές στα PSADT μεταξύ των φάσεων προ και μετά το εμβόλιο (p = 0,003) και μεταξύ των φάσεων του εμβολίου και μετα-εμβολίου (ρ & lt? 0.001), αλλά όχι μεταξύ των φάσεων προ-εμβόλιο και εμβόλιο (p = 0,915) .

Συγκρίναμε επίσης την κλίση της αύξησης PSA μεταξύ των φάσεων 3 μελέτης. Δεκαοκτώ από 23 (78%) αξιολογήσιμων ασθενών είχαν μια μείωση στην κλίση PSA μεταξύ των φάσεων προ και μετά το εμβόλιο. Κατά την εξέταση όλων των 23 ασθενείς, υπήρξε μια στατιστικά σημαντική μείωση στην κλίση PSA μεταξύ των προ-εμβολίου και μετα-εμβόλιο φάσεις -0.093 /μήνα (ρ = 0.016, Εικόνα 6 και Πίνακας 5). Δεν υπήρχε στατιστική διαφορά σε κλίση PSA μεταξύ των προ-εμβόλιο και εμβόλιο φάσεις (-0.018 /μήνα, ρ = 0.681) ή τις φάσεις του εμβολίου και μετα-εμβολίου (-0.075 /μήνα, p = 0,098). Αξιολογήσαμε αν αυτή η αλλαγή κλίσης PSA θα μπορούσε να προκύψει από την ανάπτυξη αντισωμάτων αντι-PSA ορού. Προ- και μετα-ορό εμβόλιο αξιολογήθηκε με μέτρηση αντιδραστικότητα αντισώματος ορού προς καθαρισμένη πρωτεΐνη PSA σε κηλίδα Western, χρησιμοποιώντας PSA μονοκλωνικών αντισωμάτων ως θετικός έλεγχος. Δεν βρήκαμε κανένα στοιχείο για αντιδραστικότητα αντισώματος προς το PSA (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Παρ ‘όλα αυτά, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε ότι τα αντισώματα δεν ανιχνεύονται λόγω συμπλεγμάτων αντιγόνου /αντισώματος που σχηματίζεται και ότι αυτά με κάποιο τρόπο βοήθησαν στην εκκαθάριση PSA από τον ορό.

Γράφημα του μέσου καταγραφής

2 (PSA) κλίση ανά φάση της μελέτης (συνεχής γραμμή)? για λόγους σύγκρισης, μια προέκταση του μέσου καταγραφής προ-εμβόλιο

2 (PSA) κλίση φαίνεται (διακεκομμένη γραμμή). Με βάση το γραμμικό μοντέλο spline, η μέση μεταβολή στην κλίση PSA των 23 ασθενών από προ φάσεις για να υποβάλετε-εμβόλιο είναι -0,093 /μήνα (p = 0,016). τιμές PSA ένας ασθενής δεν συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση ως τιμές προ-εμβόλιο του είχαν επηρεαστεί από άλλη θεραπεία κοντά στην έναρξη της συμμετοχής της μελέτης. Τρεις άλλοι ασθενείς που ξεκίνησε άλλη θεραπεία είτε κατά τη διάρκεια ή μετά τον εμβολιασμό? τιμές PSA που λαμβάνεται μετά από αυτό το σημείο δεν συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση

Η

Στη συνέχεια, στρωματοποιημένη τον πληθυσμό της μελέτης με δύο σταθερά αποτελέσματα σε ένα μικτό μοντέλο και πραγματοποίησε δοκιμή λόγου πιθανοφανειών.? οι ασθενείς που είχαν μια DTH απόκριση σε LNCaP λύμα είχαν σημαντικά διαφορετική αλλαγή κλίση PSA σε σύγκριση με εκείνες που δεν είχαν DTH απόκριση σε LNCAP λύμα (p = 0.004). Δεκαέξι από τους 24 ασθενείς είχαν DTH αποκρίσεις σε LNCaP σε ένα τουλάχιστον σημείο του χρόνου. Αυτή η ομάδα των ασθενών είχαν μια στατιστικά σημαντική μεταβολή στην κλίση PSA μεταξύ των φάσεων προ-εμβολίου και μετα-εμβολίου (-0.105 /μήνα, p = 0,020, Πίνακας 6). Οκτώ από τους 24 ασθενείς δεν είχε καμία απάντηση σε LNCaP λύμα σε οποιοδήποτε χρονικό σημείο, και αυτοί οι ασθενείς δεν είχαν στατιστικά σημαντική μεταβολή στην κλίση μεταξύ των προ-και μετα-εμβόλιο φάσεις (-0.033 /μήνα, p = 0,631). Όταν στρωματοποίηση του πληθυσμού της μελέτης σε 2 ομάδες με βάση την τιμή του PSA κατά την έναρξη της μελέτης, το τεστ λόγου πιθανοφανειών έδειξε μια σημαντικά διαφορετική αλλαγή κλίσης PSA μεταξύ αυτών των δύο ομάδων (p & lt? 0.001). Με το μικτό μοντέλο, βρήκαμε ότι όσοι είχαν PSA ≥1 ng /ml κατά την έναρξη της μελέτης (15 ασθενείς) είχαν μια σημαντική αλλαγή κλίση PSA μεταξύ φάσης πριν να δημοσιεύσετε-εμβολίου (-0.099 /μήνα, p = 0,031, Πίνακας 6), ενώ η υποομάδα ασθενών που είχαν PSA & lt? 1 ng /ml κατά την έναρξη της μελέτης (8 ασθενείς) δεν το έκανε (-0.078 /μήνα, p = 0.279). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι οι ασθενείς της μελέτης λαμβάνεται ως μία ομάδα είχαν μια σημαντική μείωση στο ρυθμό αύξησης του PSA μετά τον εμβολιασμό, και ότι αυτή η επίδραση ήταν ιδιαίτερα εμφανής σε εκείνους με ανοσολογική απόκριση και πιο εύκολα μετρήσιμη νόσο.

Συζήτηση

οι ασθενείς με PND αναπτύξουν αποτελεσματική καταστολή του όγκου των κοινών τύπων καρκίνου [2], η οποία είναι πιθανό να ενεργοποιείται από το ανοσοποιητικό αναγνώριση των έκτοπη έκφραση των νευρωνικών πρωτεϊνών από αυτές τις μορφές καρκίνου. Προκειμένου να ενεργοποιούνται οι ανοσολογικές αντιδράσεις, υποθέσαμε και απέδειξαν ότι αποπτωτικά όγκου χρησιμεύει ως ένας ισχυρός πηγή αντιγόνου για παρουσίαση από τα APC [7], [29]. Το επίκεντρο αυτής της μελέτης ήταν να αξιολογηθεί η ασφάλεια και ανοσογονικότητα μιμούνται αυτό σημαίνει πρόκλησης ανοσίας όγκου με τη χρήση ΑΧ ασθενείς με καρκίνο του προστάτη «cross-παρουσίαση αποπτωτικών κυττάρων όγκου ως εμβόλιο καρκίνου.

Παρά την εννοιολογική σχέση μεταξύ της ανάπτυξη των αποπτωτικών κυττάρων ως εμβόλιο και ανοσία όγκου σε PND, βρήκαμε καμία απόδειξη ότι η προσέγγιση αυτή προκάλεσε αυτοάνοσης νόσου στους ασθενείς μας. Κάναμε σημειώστε μικρές αυξήσεις ANA δημοσιεύσετε εμβολίου σε 5 ασθενείς (τίτλος 1:160 σε έναν ασθενή, ≤1:80 σε τέσσερις ασθενείς) οι οποίες υποχώρησαν την πάροδο του χρόνου στο 4/5 των ασθενών. Ωστόσο, μπορούμε επίσης να σημειωθεί ότι 7 ασθενείς με ανιχνεύσιμα επίπεδα ANA προ του εμβολιασμού, 5 έγινε κάτω μετά τον εμβολιασμό. Η στατιστική ανάλυση των ΑΠΕ αλλάζει πριν σε σχέση με μετά το εμβόλιο /εικονικό φάρμακο σε Σκέλος 1 έναντι Σκέλος 2 δεν αποκάλυψε σημαντικές διαφορές (ακριβής δοκιμασία του Fisher), και καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι ANA αλλαγές δεν ήταν κλινικά σημαντική? Επιπλέον, τέτοιες μεταβατικές αποκρίσεις έχουν κοινώς δει σε εμβόλια που βασίζονται DC [26], [31], [32]. Ένας λόγος που επιλέξαμε καρκίνο του προστάτη ως αρχική όγκου για μελέτη με τη χρήση αυτής της προσέγγισης εμβολίου είναι ότι αυτοί οι όγκοι είναι σπάνια σχετίζονται με PND. Παρά την ασφάλεια του εμβολίου εδώ, απαιτείται προσοχή στην επέκταση αυτής της προσέγγισης σε ασθενείς οι οποίοι φέρουν όγκους είναι γνωστό ότι σχετίζονται με PND (για όγκους παράδειγμα γυναικολογικών εκφράζουν το CDR2 ή αντιγόνα Nova και μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα που εκφράζουν το αντιγόνο Hu) [1], [2].

/αποπτωτικών εμβόλιο όγκου δενδριτικών κυττάρων μας ήταν ανοσογόνος. Εξήντα επτά τοις εκατό των ασθενών ανέπτυξαν DTH αποκρίσεις σε αντιγόνα LNCaP. Επιπλέον, αυτές οι αποκρίσεις DTH συσχετίζεται θετικά με μετα-χύδην εμβολίου Τ αποκρίσεις πολλαπλασιασμού των κυττάρων. Αυτό το υψηλό επίπεδο ανοσογονικότητας ήταν παρόμοια με αυτή που αναφέρθηκε σε άλλες μελέτες εμβολίων DC συνδέονται κύτταρο πεπτιδίου-παλμική ή όγκου. Σημαντικά, αυτές οι αποκρίσεις περιλαμβάνονται κυτταρικές αποκρίσεις CD8 + Τ σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη (Σχήμα 4β). Αυτό είναι σημαντικό, καθώς ένας κρίσιμος προσδιοριστής της επιτυχούς εμβόλια όγκου είναι πιθανό να είναι η επαγωγή αποκρίσεων CD8 + Τ κυττάρου [33]. Η ικανότητα για την ανίχνευση τέτοιων αποκρίσεων εδώ είναι συνεπές με την παρατήρηση ότι διασταυρούμενη παρουσίαση των αποπτωτικών κυττάρων είναι σε θέση να διεγείρουν αφελή και μνήμη αποκρίσεις κυττάρων CD8 + Τ σε κύτταρα όγκου [3] ή σε κύτταρα μολυσμένα με ιό [8]

ex vivo

. Λόγω της φύσης της νόσου, τα αυτόλογα καρκινικά κύτταρα δεν ήταν διαθέσιμα για τις αποκρίσεις δοκιμής Τ κυττάρων. Ωστόσο, και οι δύο οι απαντήσεις πολλαπλασιασμού CD4 και CD8 ανιχνεύθηκαν σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη, παρά τις υψηλές αποκρίσεις φόντο φαίνεται στο Τ κύτταρα μετά τον εμβολιασμό (Σχήμα 4α). Τέτοιες αντιδράσεις φόντο έχουν ξαναδεί σε εμβόλια DC-βάση και δεν είναι σαφής αιτιολογία [34], και μπορεί να αντανακλάται σε παροδικές αυξήσεις των ΑΠΕ δει σε μερικούς ασθενείς. Είναι πιθανό ότι οι ασθενείς είχαν μεταβλητή ανοσολογική απάντηση στον εμβολιασμό του όγκου, είτε προκύπτει από ενδογενείς διαφορές στην ανοσολογική ρεπερτόριο, ή από τις δράσεις του ίδιου του όγκου να τροποποιήσει ασθενή ανοσοαποκρίσεων [35].

Σημαντικά, βρήκαμε ότι PSA πλαγιές μειώθηκε και PSADT αυξήθηκε μετά τον εμβολιασμό του πληθυσμού μας ασθενή ως σύνολο (p = 0,016). Υποθέσαμε ότι αν αυτή η συσχέτιση αφορούσε την ανοσογονικότητα του εμβολίου, θα πρέπει να υπάρχει στο υποσύνολο των ασθενών που δείχνουν ανοσογονική απόκριση στο εμβόλιο αλλαγές PSA αλλά όχι σε αυτούς που δεν το κάνουν. Στην πραγματικότητα, οι ασθενείς οι οποίοι είχαν DTH αποκρίσεις σε LNCaP μετά τον εμβολιασμό είχαν σημαντικές μειώσεις στην κλίση PSA (p = 0,020), σε σύγκριση με τους ασθενείς που δεν είχαν αποκρίσεις DTH (p = 0.631). Λαμβανόμενα μαζί, τα δεδομένα μας δείχνουν ότι οι αλλαγές παρατηρήθηκαν σε κλίση PSA αντιπροσωπεύουν μια ανοσολογική απόκριση σε καρκινικά κύτταρα του ασθενούς

in vivo

.

Αν και μεταβλητή ανοσολογικές και κλινικές αποκρίσεις έχουν αναφερθεί ότι τα εμβόλια που χρησιμοποιούν νεκρά όγκου κύτταρα ως πηγή αντιγόνου, αυτές οι μελέτες δεν έχουν επικεντρωθεί στην χρήση καθαρής, καλά καθορισμένους πληθυσμούς των αποπτωτικών κυττάρων όγκου. Χρησιμοποιήσαμε ακτινοβολία UV-B να επάγει αποπτωτικό (δεν νεκρωτικός) θάνατο σε & gt? 90% της κυτταρική σειρά προστάτη χρησιμοποιήθηκε για το εμβόλιο? παρ ‘όλα αυτά, το προφίλ παρενέργειας μας ήταν πολύ χαμηλή, παρόμοια με άλλα εμβόλια όγκου. Οι περισσότερες άλλες μελέτες έχουν χρησιμοποιήσει ακτινοβολία γάμμα ή με κατάψυξη απόψυξη, δημιουργώντας μεταβλητής μίγματα των αποπτωτικών και νεκρωτικών κυττάρων, η οποία μπορεί να αποτελούν τη βάση διαφορές στην ανοσογονική πιθανότητα [28].

Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται στη μελέτη αυτή παρέχει την αρχική ασφάλεια και τα δεδομένα ανοσογονικότητας για ένα εμβόλιο που μιμούνται αυτό που πιστεύουμε ότι είναι ένα κρίσιμο έναυσμα για φυσικά αποτελεσματική όγκου ανοσολογικές αντιδράσεις που παρατηρούνται σε ασθενείς PND. Αυτές οι αποκρίσεις συσχετίζονται με κλινικώς απόκριση όγκου του ασθενούς, όπως εκτιμάται από υψηλά στατιστικά σημαντικές επιπτώσεις στην κλίση PSA και διπλασιασμού χρόνου. Αυτές οι παρατηρήσεις υποδεικνύουν ότι αυτή η προσέγγιση εμβολιασμού δικαιολογεί περαιτέρω διερεύνηση ως μια ασφαλή και ισχυρό μέσο ενεργοποίησης όγκου ανοσοαπόκρισης στο γενικό πληθυσμό των ασθενών με καρκίνο. Μελλοντικές τροποποιήσεις εμβόλιο που θα εξεταστούν είναι η προσθήκη του ανοσοποιητικού ανοσοενισχυτικά κατά την παρασκευή του εμβολίου ex vivo ή σε συνδυασμό με τη χορήγηση του εμβολίου in vivo [9], [36], ή η χρήση των αυτόλογων καρκινικών ως πηγή αποπτωτικών αντιγόνου. Επιπλέον, ένα ασφαλές μέσο του εμβολιασμού κατά του προστάτη (ή άλλες) καρκίνοι μπορούν να χρησιμεύσουν κατά συνεργικό τρόπο με τα άλλα ανοσο-διέγερσης παράγοντες, όπως CTLA4-Ig, οι οποίες δείχνουν υπόσχεση σε συνδυασμένες ανοσοθεραπείες στον προστάτη [37] και άλλων καρκίνων [ ,,,0],38]

Μέθοδοι

Το πρωτόκολλο για αυτή τη δοκιμή και την υποστήριξη κατάλογος CONSORT είναι διαθέσιμα ως υποστηρικτικές πληροφορίες.? βλέπε Λίστα ελέγχου S1 και το πρωτόκολλο S1.

Ασθενείς και Μελέτη

Δήλωση Ηθικής.

Η μελέτη εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review Πανεπιστήμιο Rockefeller (RDA-0466) και η FDA (IND 10710). Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς. Όχι

de novo

κυτταρικές σειρές παρήχθησαν στη μελέτη αυτή

Μελέτη

Η μελέτη πραγματοποιήθηκε στο Πανεπιστήμιο Rockefeller στη Νέα Υόρκη..? είκοσι τέσσερις ασθενείς ηλικίας 53 έως 81 είχαν εγγραφεί μεταξύ του Νοεμβρίου 2003 και Φεβρουαρίου 2006. Όλες οι συντάκτες εγγυηθώ για την πληρότητα και την ακρίβεια των δεδομένων και την ανάλυσή της και συμμετείχε στην συγγραφή του άρθρου.

Είκοσι τέσσερις ασθενείς ήταν τυχαία ανατεθεί σε ένα από τα δύο σκέλη με σκοπό την αξιολόγηση της ασφάλειας των εμβολίων, πρωτεύον καταληκτικό σημείο μας (Εικόνα 1). Όλοι οι ασθενείς τυφλώθηκαν. Δώδεκα ασθενείς έχουν ανατεθεί στο Σκέλος 1 έλαβαν το εμβόλιο που ακολουθείται από 3 ενισχύει το εμβόλιο σε διαστήματα 2 εβδομάδων, για συνολικά τέσσερις ενέσεις σε διάστημα οκτώ εβδομάδων και αποκάλυψη του θεραπευτικού σκέλους μετά την τελευταία αναμνηστική. Δώδεκα ασθενείς εκχωρηθεί σε βραχίονα 2 έλαβαν εικονικό φάρμακο (φορέα (5% DMSO σε αλατούχο)) για κάθε μία από τέσσερις ενέσεις, ήταν τυφλή, πέρασαν στη φάση εμβόλιο, και έλαβε εμβόλιο ακολουθούμενο από 3 αναμνηστικά σε διαστήματα 2 εβδομάδων. Μετά την τελευταία αναμνηστική, ασθενείς και στις δύο ομάδες παρακολουθήθηκαν για μέχρι και 22 εβδομάδες. Όλα τα χρονικά σημεία και στα δύο σκέλη μέχρι και την ημέρα του πρώτου εμβολιασμού με το εμβόλιο DC θεωρήθηκαν φάση προ-εμβόλιο. Όλα τα χρονικά σημεία από την πρώτη αναμνηστική διαμέσου του πρώτου επίσκεψη παρακολούθησης μετά τον τελικό εμβολιασμό (εβδομάδα 9) θεωρήθηκε φάση εμβόλιο. Όλα τα υπόλοιπα χρονικά σημεία της μελέτης θεωρήθηκαν φάση μετά το εμβόλιο. Τα δεδομένα ασφάλειας συγκρίθηκε μεταξύ των 2 βραχίονες της μελέτης, ενώ το ανοσοποιητικό και PSA δεδομένα αξιολογήθηκαν με συγκρίσεις μεταξύ προ- και μετα-φάσεις εμβόλιο σε όλους τους 24 ασθενείς.

Επιλογή ασθενών και εμβολιασμός.

οι ασθενείς ήταν επιλέξιμοι να συμμετέχουν, εφόσον παρέχεται εν επιγνώσει συναίνεση, είχε βιοψία αποδεδειγμένα καρκίνο του προστάτη και προοδευτική ασθένεια: PSA τεκμηριωμένα να αυξάνεται σε 3 φορές, είτε παρά επίπεδα ευνουχισμού τεστοστερόνης (κάτω από 50 ng /dl) ή παρά την οριστική τοπική θεραπεία (προστατεκτομή , ακτινοβολία, κ.λ.π.). Τα κριτήρια αποκλεισμού περιελάμβαναν πριν βιολογική θεραπεία με δενδριτικά κύτταρα, αυτοάνοση νόσο, ή σημαντική μείζονα νόσο οργάνων.

εμβόλια DC δόθηκαν μαζί με DTH πάνελ και οι ασθενείς ήταν στενά παρατηρήθηκαν για μία ώρα. Οι ασθενείς επέστρεψαν στην κλινική στις 48 ώρες, κατά τον οποίο χρόνο εξετάστηκαν κλινικώς και DTH ανταποκρίσεις τους διαβάστηκαν. Τα εμβόλια χορηγήθηκαν σε μια δόση που κυμαίνεται από κύτταρο 2-10 × 10

6 DCs /εμβολιασμού, χορηγείται υποδορίως στην εσωτερική πλευρά του άνω βραχίονα, περίπου 6-8 cm από τα μασχαλιαίους λεμφαδένες. Οι ασθενείς έλαβαν μια αρχική και τρεις δεκαπενθήμερη αναμνηστική εμβολιασμούς. Κατά τη διάρκεια των δύο πρώτων ενέσεων, οι ασθενείς έλαβαν επίσης 2-10 × 10

6 DC /KLH.

Εμβόλιο

Εμβόλιο κατασκευάστηκε σε BSL-2 εγκαταστάσεις συντηρούνται και ελέγχονται ανεξάρτητα για την κάλυψη καλή προδιαγραφές ιστών πρακτικής. Για την παρασκευή αυτόλογα DC, μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) ελήφθησαν με λευκαφαίρεση, προσκολλάται στην ενδοτοξίνη πιάτα χωρίς ιστοκαλλιέργειας (Falcon), και διαφοροποιούνται

in vitro

σε ανώριμα DCs πάνω από έξι ημέρες σε RPMI-1640 συμπληρωμένο με 1% αυτόλογο πλάσμα, GM-CSF (180 ng /ml? Bayer HealthCare Pharmaceuticals) και IL-4 (10 mg /ml? Κ &? D Systems) όπως περιγράφεται [29], [39]. LNCaP κύτταρα όγκου του προστάτη ελήφθησαν από την American Type Cell Culture και μια κύρια τράπεζα κυττάρων έγινε και διαλογή με BioReliance Corporation (Rockville, MD) για να αποκλείσει μόλυνση ή τυχαίους παράγοντες. LNCaP κύτταρα από το κύριο απόθεμα (κατεψυγμένα σε ΑΙΜ V media (Invitrogen) συν ΣΕΒ-ελεύθερο εμβρυϊκό βόειο ορό (20% FBS? ΗνΟΙοηε) και 5% DMSO (Edward Life Sciences)) επεκτάθηκαν στο Σκοπός V media /1% FBS, και τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ακτινοβολία UV-B έτσι ώστε & gt? 90% των κυττάρων υπέστησαν αποπτωτικό θάνατο (Caspatag θετική, όπως περιγράφεται [29]). Τα ανώριμα DCs και αποπτωτικά LNCaP συν-καλλιεργήθηκαν σε αναλογία 1:01 για 36-48 ώρες παρουσία της PGE

2 (20 mM? Sigma) και TNF-α (150 ng /ml? Κ &? D Systems ) να ωριμάσει DCs όπως περιγράφεται [40]. DCs παλμούς με KLH (2.5 μg /ml, Biosyn) έδωσε ένα θετικό έλεγχο για τη λειτουργία DC. Όλοι οι ασθενείς επίσης ανοσοποιήθηκαν με 2-10 × 10

6 DCs διασταυρούμενη παρουσίαση αποπτωτικό LNCaP παραγωγή του αντιγόνου Μ1 ως δυνητικό θετικό έλεγχο (DC /LNCaP-Μ1), αλλά μόνο τέσσερις ασθενείς ήταν HLA Α2.1

+ και ανάλυση τετραμερές δεν έδειξαν ενίσχυσε αποκρίσεις M1 μετά τον εμβολιασμό σε αυτούς τους ασθενείς (δεδομένα που δεν δείχνονται). Η ποιότητα και η βιωσιμότητα του εμβολίου παρακολουθήθηκε με κυτταρομετρία ροής? για να περάσει τα κριτήρια απελευθέρωσης το κλάσμα των κυττάρων HLA-DR (DC) έπρεπε να είναι & gt? 70% CD83 +, & lt? 15% CD14 + και & lt? 20% ιωδιούχου προπιδίου (PI) + (Serologicals). Όλα τα αντισώματα αγοράστηκαν από Βϋ Pharmingen. Στειρότητα ελέγχθηκε από gram χρώση, από τον πολιτισμό για βακτήρια και μύκητες μόλυνση (BacT /ALERT, Biomereux), και από το DNA φθοριόχρωμα για μυκόπλασμα (Bionique Testing Laboratories, Inc.). Η μέθοδος LAL (Associates of Cape Cod) χρησιμοποιήθηκε για τη δοκιμή για ενδοτοξίνη. Το τελικό προϊόν διαιρέθηκε σε 4 ίσα κλάσματα, έκαστο των οποίων περιέχει 2-10 × 10

6 DCs καθένα.