Οι

Αφηρημένο

βελτιωμένες μέθοδοι για τον ακριβή προσδιορισμό τόσο της παρουσίας και της σοβαρότητας της τραχηλικής ενδοεπιθηλιακής νεοπλασίας (CIN) και την έκταση της εξάπλωσης των επιθετικών καρκινωμάτων του τραχήλου της μήτρας (IC) που απαιτούνται. Διαφορική θερμιδομετρία σάρωσης (DSC) έχει πρόσφατα δειχθεί να ανιχνεύσει συγκεκριμένες αλλαγές στη θερμική συμπεριφορά των πρωτεϊνών του πλάσματος του αίματος σε πολλές ασθένειες. Η μεθοδολογία αυτή διερευνάται για να παρέχουν μια συμπληρωματική προσέγγιση για τον έλεγχο του τραχήλου της νόσου. Η παρούσα μελέτη αξιολόγησε τη χρησιμότητα του DSC στη διαφοροποίηση μεταξύ των υγιών μαρτύρων, αυξάνοντας τη σοβαρότητα της CIN και πρώιμη και προχωρημένη IC. Σημαντική διάκριση ήταν εμφανής σε σχέση με την έκταση της νόσου χωρίς σαφή επίδραση των δημογραφικών παραγόντων όπως η ηλικία, η εθνικότητα, το κάπνισμα και την ισοτιμία. Των περισσότερων κλινική σημασία, υπήρξε έντονη διαφοροποίηση του CIN από υγιείς μάρτυρες και IC, καθώς και μεταξύ των ασθενών με ΣΔ μεταξύ ΦΥΓΩ σταδίου Ι και προχωρημένο καρκίνο. Οι παρατηρούμενες ασθένειες συγκεκριμένες αλλαγές στο DSC προφίλ (θερμογραφήματα) έχουν υποτεθεί να αντανακλούν διαφορική έκφραση των βιοδεικτών ασθένεια που στη συνέχεια δεσμεύεται και το οποίο επηρεάζεται η θερμική συμπεριφορά από τις πιο άφθονες πρωτεΐνες του πλάσματος. Η επίδραση των αλληλεπιδρώντων βιοδεικτών μπορεί να συναχθεί από τη διαφοροποίηση των Θερμογραφήματα, αλλά δεν μπορεί να προσδιοριστεί άμεσα από DSC. Για να διερευνηθεί η φύση των προτεινόμενων αλληλεπιδράσεων, φασματομετρία μάζας (MS) αναλύσεις που χρησιμοποιούνται. Ποσοτική εκτίμηση των χαμηλού βάρους πρωτεΐνη, θραύσματα μοριακού δειγμάτων πλάσματος και ούρων αποκάλυψαν μια μικρή λίστα των πεπτιδίων των οποίων η αφθονία συσχετίστηκε με το βαθμό του τραχήλου της νόσου, με τα πιο εντυπωσιακά στοιχεία πεπτιδιώματος πλάσμα που υποστηρίζουν τη θεωρία interactome του πεπτιδίου σε μερίδες με άφθονες πρωτεΐνες του πλάσματος. Η συνδυασμένη DSC και προσέγγιση MS σε αυτή τη μελέτη ήταν επιτυχής στον προσδιορισμό μοναδικές υπογραφές βιοδείκτη για τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και απέδειξε την χρησιμότητα του προφίλ πλάσματος DSC ως συμπληρωματικό διαγνωστικό εργαλείο για την αξιολόγηση του τραχήλου της μήτρας για την υγεία του καρκίνου

Παράθεση:. Garbett NC, Εμπορικής ML, Helm CW, Jenson AB, Klein JB, Chaires JB (2014) Ανίχνευση του Καρκίνου του Τραχήλου της Μήτρας βιοδεικτών Μοτίβα στο Αίμα πλάσμα και στα ούρα με θερμιδομετρία διαφορικής σάρωσης και φασματομετρία μάζας. PLoS ONE 9 (1): e84710. doi: 10.1371 /journal.pone.0084710

Επιμέλεια: Jose M. Sanchez-Ruiz, Universidad de Granada, Ισπανία

Ελήφθη: 31, Αυγούστου του 2013? Αποδεκτές: 18 Νοέμβρη 2013? Δημοσιεύθηκε: 8 Γενάρη του 2014

Copyright: © 2014 Garbett et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το υλικό βασίζεται στο έργο που υποστηρίζεται από το Γραφείο Έρευνας και Ανάπτυξης, Ιατρικής Υπηρεσίας Ερευνών, Τμήμα Υποθέσεων Βετεράνων, το Υπουργείο Ενέργειας Office of Science Πρόγραμμα βοήθειας Χρηματοοικονομικής (DE-FG02-05ER6406 να MLM και JBK), και το P30ES014443 επιχορήγηση NIEHS ( σε MLM και JBK). Το έργο αυτό υποστηρίζεται επίσης από υπεργολαβίας απονέμεται σε JBC από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου επιχορήγηση R44 CA103437 και με επιχορήγηση για JBC από την Έλσα. Ίδρυμα U. Pardee. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. NCG, ABJ και JBC είναι συν-εφευρέτες για τις αιτήσεις διπλωμάτων ευρεσιτεχνίας που περιγράφουν το διάγραμμα θερμοκρασίας του πλάσματος DSC τεχνολογία για την οποία Louisville Bioscience, Inc. (LBI) κατέχει την αποκλειστική άδεια από το Πανεπιστήμιο του Louisville. JBC και ABJ είναι ιδρυτές και μετόχους της LBI? NCG είναι ιδρυτής, μέτοχος και υπάλληλος της LBI. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις πολιτικές PLoS ONE για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

διηθητικό καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας (IC) είναι η τρίτη πιο κοινή μορφή καρκίνου που πλήττει τις γυναίκες με εκτιμάται ότι 529.000 περιπτώσεις διαγιγνώσκονται σε όλο τον κόσμο το 2008 και 274.000 θάνατοι [1]. Τις τελευταίες δεκαετίες έλεγχο ρουτίνας βοήθησε να μειώσει σημαντικά τόσο τη συχνότητα εμφάνισης και των θανάτων από IC στις ΗΠΑ, αλλά, παρ ‘όλα αυτά, εκτιμάται ότι 12.340 νέα περιστατικά θα διαγνωστούν με 4.030 θανάτους το 2013 [2]. Διηθητικού καρκίνου του τραχήλου προηγείται ένα προκαρκινική κατάσταση, τραχηλική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (CIN), στην οποία ανώμαλη κυτταρική ανάπτυξη λαμβάνει χώρα στην επένδυση επιθηλιακά του τραχήλου. CIN χωρίζεται σε κατηγορίες (1 = ήπιο, 2 = μέτρια, 3 = σοβαρή) με βάση ιστολογικά χαρακτηριστικά συμπεριλαμβανομένης της πυρηνικής αλλαγές και την έκταση της συμμετοχής του επιθηλίου. Ο κίνδυνος για την εξέλιξη της CIN σε IC πάροδο του χρόνου αυξάνεται κατά βαθμό, να είναι υψηλότερο για CIN 3 [3], [4]. CIN μπορεί να αντιμετωπιστεί για να μειώσει σημαντικά την πιθανότητα IC ανάπτυξη. Εν μέρει για να βοηθήσει με το σχεδιασμό της θεραπείας, CIN 2 και CIN 3 είναι συνήθως ομαδοποιούνται ως υψηλού βαθμού πλακώδους ενδοεπιθηλιακή αλλοίωση (HSIL), η οποία θα πρέπει να αντιμετωπίζονται και CIN 1 και HPV κονδυλώματα ως χαμηλού βαθμού πλακώδους ενδοεπιθηλιακή αλλοίωση (LSIL), η οποία θα ήταν χωρίς θεραπεία . Μόλις IC ανιχνεύεται η κύρια ανάγκη είναι να διαπιστωθεί αν υπάρχει πρώιμο στάδιο της νόσου (FIGO στάδιο Ι), η οποία περιορίζεται στον τράχηλο ή αν υπάρχει πιο προχωρημένη μεταστατική νόσο. Μόνο νόσος περιορίζεται στον τράχηλο και επαρκώς μικρού μεγέθους θεωρείται θεραπεύσιμη με χειρουργική επέμβαση.

αξιόπιστες μέθοδοι για την ανίχνευση με ακρίβεια CIN και IC είναι κρίσιμη. Τρέχουσα προβολή δεν μπορεί να διακρίνει χαμηλού βαθμού από υψηλότερο βαθμό CIN, CIN από IC, νωρίς από πιο προχωρημένα στάδια της IC, ή να καθορίσει πρόσθετες ενδείξεις κατάστασης της νόσου, όπως η παρουσία των λεμφαδένων. Για πολλά χρόνια, η αρχική μέθοδος ελέγχου για CIN ήταν το τεστ Παπανικολάου που επιτρέπει κυτταρολογική ανωμαλίες που πρέπει να ανιχνευθεί σε ξέσματα από τον τράχηλο της μήτρας. Οι γυναίκες με τεστ Παπανικολάου που υποδηλώνει πλακώδους ενδοεπιθηλιακής βλάβες στη συνέχεια θα αξιολογείται, μεταξύ άλλων με την κλινική εξέταση και κολποσκόπηση και βιοψία, για να καθορίσει το βαθμό και την έκταση της κάθε παρόντες CIN και να αποκλείσει (ή τη διάγνωση) η παρουσία του IC. τεστ Παπανικολάου τώρα ενσωματωμένη με τη δοκιμή για γονότυπους υψηλού κινδύνου του ιού του ανθρώπινου θηλώματος (HPV HR) που μπορεί να ανιχνευθεί με τον ίδιο κυτταρολογικά δείγμα τεστ Παπανικολάου που χρησιμοποιούν υγρά με βάση το Hybrid Capture τεχνολογία II [5]. Όλοι οι βαθμοί των CIN που σχετίζεται με υψηλή πιθανότητα της παρουσίας του ιού HPV HR. Στις γυναίκες μεταξύ 30 έως 65 ετών δοκιμών HPV HR βελτιώνει το ποσοστό ανίχνευσης CIN 3 ή μεγαλύτερης κατά 17-31% στον πρώτο γύρο διαλογής και μειώνει τη συχνότητα εμφάνισης του IC στο δεύτερο γύρο διαλογής [6], [7], [8], [9]. HPV τεστ HR είναι τώρα επίσης ενσωματωθεί στην παρακολούθηση των γυναικών που έχουν προηγουμένως αποδειχθεί ότι έχει λοίμωξη HR HPV ή CIN, αφού εμμένουσα λοίμωξη από HPV HR συνδέεται με αυξημένο κίνδυνο για την ανάπτυξη των επαναλαμβανόμενων CIN και IC [6] , [10]. Αν και οι δοκιμές για τον HPV HR μπορεί να βελτιώσει την ανίχνευση CIN δεν μπορεί να γίνει διάκριση μεταξύ των CIN αλλοιώσεων που έχουν μεγαλύτερη πιθανότητα να προχωρούν από εκείνους που δεν το κάνουν. Οι βιοδείκτες διερευνηθεί το θέμα αυτό, αλλά δεν έχουν ακόμη αποδειχθεί χρήσιμη [11], [12], [13], [14]. Εργασία-up και τη θεραπεία για τις γυναίκες με παθολογικό τεστ Παπανικολάου είναι τραυματική σωματικά, συναισθηματικά και οικονομικά και, δυστυχώς, λόγω της αδυναμίας να διαφοροποιήσει βλάβες CIN έχουν μεγαλύτερη πιθανότητα εξέλιξης σε IC πολλές γυναίκες εξακολουθούν να ξεπεράσω αντιμετωπίζονται.

Εδώ περιγράφουμε την εφαρμογή μιας συνδυασμένης προσέγγισης χρησιμοποιώντας θερμιδομετρία διαφορικής σάρωσης (DSC) και φασματομετρία μάζας (MS) για το χαρακτηρισμό του τραχήλου της νόσου. DSC χρησιμοποιείται συνήθως για τη μέτρηση των προφίλ μετουσίωση των βιομορίων, γνωστή ως θερμογραφήματα, με άμεση παρακολούθηση των αλλαγών που συνδέονται με θερμότητα μοριακών γεγονότων ως συνάρτηση της θερμοκρασίας. Κάτω από δεδομένες συνθήκες λύση, ένα διάγραμμα θερμοκρασίας παρέχει μια μοναδική υπογραφή για μια δεδομένη πρωτεΐνη αντικατοπτρίζει ειδικά δομικά μοτίβα και μοριακών δυνάμεων. Έχει πρόσφατα αποδειχθεί ότι DSC μπορεί να εφαρμοστεί στην ανάλυση του πλάσματος αίματος για να παρέχει μία ένδειξη της κλινικής κατάστασης του ατόμου [15], [16], [17], [18], [19], [20], [ ,,,0],21], [22], [23], [24]. Το θερμόγραμμα του πλάσματος από υγιή άτομα αντανακλούσε το σταθμισμένο άθροισμα των προφίλ μετουσίωσης από τις πιο άφθονες πρωτεΐνες του πλάσματος? Ωστόσο, Θερμογραφήματα από άτομα με διάφορες καταστάσεις ή ασθένειες ήταν σημαντικά αλλάξει [15], [16], [17], [18]. αλλαγές θερμόγραμμα φάνηκε να είναι ευαίσθητη στο συγκεκριμένη κατάσταση ασθένειας και έδειξαν ότι DSC πλάσμα θα μπορούσαν να έχουν χρησιμότητα ως μέθοδος κλινικό διαγνωστικό έλεγχο. Μηχανισμοί για τη νόσο-συγκεκριμένες αλλαγές στο Θερμογραφήματα είναι υπό έρευνα στο εργαστήριο μας, αλλά υποθέτουμε ότι αντανακλούν την παρουσία των βιοδεικτών της νόσου που τροποποιούν ή αλληλεπιδρούν με τις πρωτεΐνες του πλάσματος με τον τρόπο αυτό επηρεάζει τις ιδιότητες μετουσίωση τους. Τέτοιες αλληλεπιδράσεις βιοδείκτη θα υποστηρίξει την «interactome» ιδέα που προτείνει ότι τα πεπτίδια χαμηλού μοριακού βάρους που υπάρχουν στη proteome πλάσμα σε σύμπλοκο με πιο άφθονες πρωτεΐνες του πλάσματος δημιουργία ενός δικτύου των πρωτεϊνών και των αλληλεπιδράσεων πεπτιδίου-πρωτεΐνης [25]. Αν και η παρουσία θεωρούμενων βιοδεικτών χαμηλού μοριακού βάρους μπορούν να συναχθούν από αλλαγές στην θερμόγραμμα καμία άμεση αναγνώριση μπορεί να γίνει με τη μέθοδο αυτή. Έχουμε εφαρμόσει ένα MS peptidomic προσέγγιση για τη διερεύνηση της φύσης των προφίλ θερμογράφημα πλάσμα σχετίζονται με καρκίνο του τραχήλου της νόσου.

MS έχει χρησιμοποιηθεί ως εργαλείο για να βοηθήσει στην κατανόηση της παθογένειας της νόσου και την παραγωγή των υποψηφίων βιοδεικτών της νόσου [ ,,,0],26], [27], [28], [29], [30], [31], [32]. Μία εφαρμογή της MS υπήρξε η ποσοτική και ποιοτική ανάλυση των θραυσμάτων χαμηλού μοριακού βάρους πρωτεΐνη που βρίσκεται στο πλάσμα ή /και στα ούρα, που αναφέρεται ως ένα peptidomic προσέγγιση [33], με στόχο να συσχετίζονται αφθονία με ανίχνευση ή την πρόγνωση της νόσου. Τα πεπτίδια που παρατηρήθηκαν σε αυτές τις μελέτες είναι αντανακλαστική του μεταβολικού κύκλου εργασιών των μητρικών πρωτεϊνών με αλλαγές αφθονία μεταξύ υπόθεση (νόσος) και συνθήκες ελέγχου που σχετίζονται με μια μεταβολή (ες) στην κανονική καταβολικές ή αναβολικές μεταβολική ημιζωή της πρωτεΐνης. Αυτές οι μελέτες έχουν peptidomic σε ορισμένες περιπτώσεις αποδεικνύεται επιτυχώς συσχετίσεις μεταξύ των ποσών ή μοτίβα αρκετών πεπτιδίων με την ασθένεια ή την εξέλιξη της νόσου. Όσον αφορά τραχήλου της νόσου, το μεταστατικό δυναμικό των CIN έχει συσχετιστεί με την έκφραση τριών πρωτεϊνών συμπεριλαμβανομένης μεταλλοπρωτεϊνάσης-2 (ΜΜΡ-2), ΜΜΡ-9, και ενεργοποιητή πλασμινογόνου τύπου ουροκινάσης [14]. Λόγω της πρωτογενούς συμμετοχή των μεταλλοπρωτεϊνασών παραγωγής πεπτιδίου στην εξέλιξη της νόσου, αυτή η συσχέτιση του CIN θα μπορούσε να επεκταθεί στην peptidomic φαινότυπο. Ως εκ τούτου, η παρουσία του μοναδικού πλάσματος ή /και το προφίλ (ες) του ουροποιητικού πεπτίδιο θα μπορούσε να δημιουργηθεί από προσεγγίσεις ΚΜ και να συσχετισθεί με τα προφίλ θερμόγραμμα που αντικατοπτρίζει την παρουσία και την έκταση της νόσου του τραχήλου της μήτρας. Περιγράφουμε τα αποτελέσματα αποδεικνύουν την ευαισθησία του DSC θερμογράμματα με την κλινική κατάσταση και τα αποδεικτικά στοιχεία για τη σύνδεση των προφίλ θερμογράφημα με την αλληλεπίδραση του πεπτιδίου βιοδείκτες που προσδιορίζονται από τα κράτη μέλη.

Υλικά και Μέθοδοι

Συλλογή Δείγματος

το πρωτόκολλο της μελέτης και τις διαδικασίες συναίνεσης του ασθενούς εγκρίθηκαν από το Πανεπιστήμιο του Louisville Διοικητικού κριτική Θεσμική (IRB # 08,0108, 608,03). Οι γυναίκες παρακολουθούν τις κλινικές του Τμήματος Γυναικολογικής Ογκολογίας με βιοψία του τραχήλου της μήτρας ενδο-επιθηλιακή νεοπλασία και επεμβατικές καρκινώματος του τραχήλου ήταν επιλέξιμες και έδωσαν γραπτή συγκατάθεση για το αίμα και τους ιστούς τους, να εγγραφούν σε ένα αποθετήριο ιστού (IRB # 608.03) και να χρησιμοποιηθούν για την ερευνητικούς σκοπούς. Η IRB ενέκρινε ρητώς τη χρήση των ιστών από το αποθετήριο ιστού για χρήση σε αυτή τη μελέτη, χωρίς την ανάγκη για περαιτέρω συναίνεση (IRB # 08,0108). Οι γυναίκες είναι γνωστό ότι είναι θετικοί στον ιό HIV ήταν μη επιλέξιμες. δείγματα αίματος και ούρων σημείο συλλέχθηκαν από προσληφθεί ασθενών κατά την αρχική κλινική επίσκεψη τους κατά τη στιγμή της αξιολόγησης και πριν από τη λήψη της θεραπείας. Δείγματα ούρων δειγματίστηκε και φυλάχθηκε αμέσως στους -80 ° C μέχρι την ανάλυση. Αίμα συντάχθηκε σε 5 mL μωβ κορυφή (πλάσμα? Κ

2-αντιπηκτικό EDTA) φιαλίδια. Οι σωλήνες αναμίχθηκαν απαλά με αναστροφή 8-10 φορές αμέσως μετά τη συλλογή του αίματος να διανείμει ομοιόμορφα το πρόσθετο αντιπηκτικό που ακολουθείται από φυγοκέντρηση στις 3200 rpm για 10 λεπτά (φυγόκεντρος BD-Clay Adams Compact II). Διαχωρισμένο πλάσμα αναρροφήθηκε προσεκτικά για να αποφευχθεί η αιμόλυση ή μόλυνση των διαχωρισμένων φάσεων του αίματος, κλασματοποιήθηκε και αποθηκεύθηκε αμέσως στους -80 ° C μέχρι την ανάλυση. δείγματα αίματος ελέγχου και ούρων συλλέχθηκαν σύμφωνα με τις ίδιες διαδικασίες μελέτης από υγιείς εθελοντές χωρίς ιστορικό παθολογικά τεστ Παπανικολάου ή καρκίνο. Όπως και παραπάνω, οι διαδικασίες πρωτοκόλλου και συγκατάθεση της μελέτης εγκρίθηκαν από το Πανεπιστήμιο του Louisville Διοικητικού κριτική Θεσμική (IRB # 08,0108, 608,03). Όλοι οι εθελοντές έδωσαν γραπτή συγκατάθεση μετά από ενημέρωση για το αίμα και τους ιστούς τους, να εγγραφούν σε ένα αποθετήριο ιστού (IRB # 608.03) και να χρησιμοποιηθούν για ερευνητικούς σκοπούς. Η IRB ενέκρινε ρητώς τη χρήση των ιστών από το αποθετήριο ιστού (IRB # 608.03) για χρήση σε αυτή τη μελέτη, χωρίς την ανάγκη για περαιτέρω συναίνεση (IRB # 08,0108). Υπόδειγμα κλάσματα αποψύχθηκαν για την ανάλυση και το υπόλοιπο απορρίπτεται. Όλοι οι χειρισμοί των δειγμάτων και δειγμάτων αποβλήτων ήταν, σύμφωνα με τις διαδικασίες που μεταδίδονται δια του αίματος παθογόνων OSHA. Όλα τα δείγματα που συλλέγονται για την μελέτη deidentified και αποθηκεύονται στη Γυναικολογική Ογκολογία Tissue Bank στο James Graham Brown Κέντρο Καρκίνου. Συνδέονται δημογραφικές και κλινικές πληροφορίες που συλλέγονται από την κλινική μελέτη προσωπικού και αποθηκεύονται με ασφάλεια στον υπολογιστή μελέτη. Η τράπεζα ιστών εγκρίθηκε από το Πανεπιστήμιο του Louisville Διοικητικού κριτική Θεσμική (IRB # 608.03) και ήταν πλήρως συμβατή με HIPAA. Υποδείγματα που προβλέπονται στη βασική προσωπικού επιστήμη μελέτης (NCG, MLM, ABJ, JBK, JBC) για μελέτες DSC και MS κωδικοποιήθηκαν με βάση τον αριθμό συλλογή τράπεζα ιστών. Σε αυτή τη μορφή δείγματα deidentified και τυφλώθηκε τόσο για τις δημογραφικές και παθολογική κατάσταση της νόσου για τη συλλογή αμερόληπτη δεδομένων. Δημογραφικές και η νόσος του καθεστώτος στη συνέχεια παρέχονται για τα δεδομένα της διαλογής και της ερμηνείας.

DSC Σπουδών

Η προετοιμασία των δειγμάτων για τις μελέτες DSC.

Τα δείγματα πλάσματος (100 μλ) υποβλήθηκαν σε διαπίδυση έναντι ενός προτύπου φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα (1,7 mM ΚΗ

2 ΡΟ

4, 8,3 mM Κ

2HPO

4, 150 mM NaCl, 15 mM κιτρικό νάτριο, ρΗ 7.5) για 24 ώρες στους 4 ° C, προκειμένου να επιτευχθεί ομαλοποίηση των συνθηκών ρυθμιστικού για όλα τα δείγματα. Τα κατεψυγμένα δείγματα πλάσματος αποψύχθηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C την ημέρα πριν την αιμοκάθαρση. Το πρωί της αιμοκάθαρσης, δείγματα φορτώθηκαν σε Slide-Α-Lyzer μονάδες μίνι αιμοκάθαρσης (MWCO 3500? Pierce, Rockford, IL) που είχε εξισορροπηθεί σε ρυθμιστικό διάλυσης όλη τη νύκτα. Με βάση το κόστος και την αξιοπιστία που συνήθως εκ νέου συναρμολογούνται πλένονται μονάδες αιμοκάθαρσης αντικαθιστώντας την αρχική μεμβράνη αιμοκάθαρσης με cut-to-μεγέθους Snakeskin Πλισέ αιμοκάθαρσης σωλήνωση (Pierce, Rockford, IL). Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε διαπίδυση έναντι 1 Ι φωσφορικού ρυθμιστικού με αλλαγές ρυθμιστικού μετά από τρεις ώρες αιμοκάθαρσης, τότε μετά από δύο περιόδους των τεσσάρων ωρών με ένα τελικό χρονικό διάστημα για όλη τη νύχτα διαπίδυση. Τα δείγματα ανακτήθηκαν από αιμοκάθαρση και διηθείται για να απομακρυνθούν τα σωματίδια χρησιμοποιώντας ένα φίλτρο σωλήνα φυγοκέντρου Spin-X (0,45 μm οξικής κυτταρίνης? Corning Incorporated, Corning, ΝΥ). Το τελικό ρυθμιστικό διάλυσης επίσης φιλτράρεται (0,2 μm πολυαιθερασουλφονη? Pall Corporation, Ann Arbor, MI).. Και χρησιμοποιείται για όλες τις αραιώσεις του δείγματος και ως διάλυμα αναφοράς για τις μελέτες DSC

ανάλυση DSC

δεδομένα DSC συλλέχθηκαν με ένα όργανο MicroCal VP-τριχοειδών DSC με ολοκληρωμένο αυτόματο δειγματολήπτη (MicroCal, LLC, Northampton, ΜΑ, τώρα μέρος της GE Healthcare). Ηλεκτρική βαθμονόμηση του σήματος διαφορικού ρεύματος και βαθμονόμηση θερμοκρασίας με τη χρήση προτύπων θερμοκρασίας υδρογονανθράκων πραγματοποιήθηκαν στο πλαίσιο του κατασκευαστή ετήσια συντήρηση του οργάνου. προδιαγραφές απόδοσης του κατασκευαστή για τα πρότυπα της θερμοκρασίας είναι ± 0,2 ° C. Ενδιάμεσες απόδοση του οργάνου αξιολογήθηκε με τη χρήση βιολογικών προτύπων λυσοζύμη και RNaseA. προδιαγραφές απόδοσης Κατασκευαστής για βιολογικά πρότυπα είναι ± 0,5 ° C. Διαπίδυση δείγματα πλάσματος αραιώθηκαν 25 φορές για να ληφθεί μία κατάλληλη συγκέντρωση πρωτεΐνης για ανάλυση DSC. Δείγματα και διαπήδησης μεταφέρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων και στη συνέχεια φορτώνονται στο αυτόματο δειγματολήπτη όργανο θερμοστατικά στους 5 ° C μέχρι την ανάλυση. Δείγμα όγκους 400 μλ ήταν υποχρεωμένες να παρέχουν επαρκή όγκο για τη φόρτωση των τριχοειδών μέσου και εξασφαλίζει την ορθή συμπλήρωση του 135 μλ θερμική περιοχή ανίχνευσης. σαρώσεις DSC καταγράφηκαν από 20 ° C έως 110 ° C με ρυθμό σάρωσης 1 ° C /min με ένα θερμοστάτη προ-σάρωση των 15 λεπτών, η λειτουργία μέσα ανάδρασης και μια περίοδο φιλτραρίσματος 2 δευτερόλεπτα. Διπλότυπα σαρώσεις DSC ελήφθησαν για κάθε δείγμα πλάσματος. Για κάθε σύνολο πείραμα, θα ομαδοποιούνται έτσι ώστε να εξασφαλίζεται η ανάλυση είχε ολοκληρωθεί μέσα σε ένα παράθυρο επτά ημέρες μετά την αρχική απόψυξη των δειγμάτων. Στις αναπτυσσόμενες πειραματική διαδικασία μας έχουμε αξιολογηθεί προσεκτικά δείγμα και ρυθμιστικό σαρώσεις ως συνάρτηση της ακολουθίας τρέξιμο, μέσο έκπλυσης θάλαμο και το πρωτόκολλο καθαρισμού, και φορά από την προετοιμασία. Έχουμε εξετάσει ρυθμιστικό σαρώσεις συλλέχθηκαν στην αρχή και στο τέλος ενός σετ δείγματος και μετά από μία ή διαδοχικές σαρώσεις δείγματος και προσδιορίζεται αποδεκτή αναπαραγωγιμότητα και αποτελεσματικός καθαρισμός των θαλάμων οργάνου. Έχουμε σύγκριση διπλούν δείγμα σαρώσεις συλλέχθηκαν μετά από ένα ρυθμιστικό ή δείγμα σάρωση και διαπιστώθηκε ότι είναι δυνατή η συλλογή διαδοχικών δειγμάτων σαρώσεις μετά από εκτεταμένο ξέπλυμα των θαλάμων μέσου με καμία επίδραση στο προφίλ thermogram. Εμείς συνήθως σε σύγκριση διπλούν δείγματος σαρώνει συλλέγονται υπό διαφορετικές αλληλουχίες τρέχει και σε διαφορετικά χρονικά σημεία για να εξασφαλίσει το προφίλ θερμόγραμμα ήταν να αναπαραχθεί.

δεδομένα DSC αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας Προέλευση 7 (OriginLab Corporation, Northampton, ΜΑ). Δεδομένα πρωτογενών DSC διορθώθηκαν για την οργανική βασική με αφαίρεση ενός κατάλληλου σάρωσης αναφοράς ρυθμιστικού. Διορθώνεται σαρώσεις κανονικοποιήθηκαν για την ολική συγκέντρωση πρωτεΐνης που προσδιορίσθηκε χρωματομετρικά χρησιμοποιώντας το κιτ δικιγχονινικού πρωτεΐνη οξύ δοκιμασίας και διαδικασία μικροπλάκας από την Pierce (Pierce, Rockford, IL), με μικρές τροποποιήσεις με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. αναγνώσεις απορρόφησης πάρθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Tecan Sunrise ανάγνωσης μικροπλάκας απορρόφηση (Tecan U.S., Research Triangle Park, NC). Μετά την κανονικοποίηση, σαρώσεις DSC πλάσμα διορθώθηκαν για μη-μηδέν γραμμές βάσης με εφαρμογή μιας γραμμικής γραμμής βάσης ταιριάζει. Επιλογή της κατάλληλης διόρθωσης βασικής γραμμής δείγμα περιπλέκεται από την παρουσία μιας περιορισμένης περιοχής της μετα-μεταβατική βασικής γραμμής που ακολουθείται από συσσωμάτωση και καθίζηση γεγονότα που συμβαίνουν μετά το περίβλημα θερμικής μετουσίωσης. Έχουμε αξιολόγησε όλες τις διαθέσιμες επιλογές διόρθωση γραμμής βάσης μέσα από το λογισμικό ανάλυσης και βρήκε την βασική επιλογή γραμμικού να δώσει τα πιο σταθερά αποτελέσματα, όταν δοκιμάζονται σε επανειλημμένες μετρήσεις, διαφορετικά δείγματα και από ανεξάρτητους προσδιορισμούς χρήστη. Δεχόμαστε ότι η προσέγγισή μας θα μπορούσε να έχει περιορισμούς, αλλά έχουν επιλέξει την πιο συνεπή μέθοδο βασική διόρθωση που μπορεί να εφαρμοστεί σε όλες τις μελέτες μας. Τελική θερμογραφήματα καταγράφηκαν ως πλεονάζουσα ειδική θερμοχωρητικότητα (cal /° Cg) έναντι της θερμοκρασίας (° C).

Η στατιστική ανάλυση των δεδομένων DSC.

Η εξέταση όλων των δεδομένων θερμογράφημα αποκάλυψε ότι το εύρος της θερμοκρασίας 45-90 ° C κάλυψαν το πλήρες προφίλ μετουσίωση για όλα τα δείγματα και σαρώσεις περικοπεί σε αυτό το εύρος για όλες τις επόμενες αναλύσεις. Ποσοτική σύγκριση των θερμογράμματα επιτεύχθηκε μέσω υπολογισμού ενός αριθμού του σχήματος και χαρακτηριστικό μετρήσεις. Παράμετροι που εξετάστηκαν ήταν συνολικού εμβαδού κορυφής? ύψος κορυφής? κορυφή πλάτος στο μισό ύψος? θερμοκρασία της κορυφής μέγιστου (T

max)? θερμοχωρητικότητα του πρωτεύοντος μετάβασης στην περιοχή 60-65 ° C [C

p

ex (κορυφή 1)]? θερμοχωρητικότητα του δευτερεύοντος μετάβαση στους 68-72 ° C [C

p

ex (κορυφή 2)]? αναλογία του πρώτου και του δεύτερου μετάβαση πλάτη [C

p

ex (κορυφή 1)] /[C

p

ex (κορυφή 2)]. Λόγω της πολυπλοκότητας των σχημάτων θερμογράφημα, ένα επιπλέον παράμετρο υπολογίστηκε να παρέχει ένα μέτρο της κατανομής της περιοχής του προφίλ μετουσίωσης σχέση με τον άξονα της θερμοκρασίας. Η πρώτη θερμοκρασία στιγμή (Τ

FM) προσδιορίστηκε σύμφωνα με την εξίσωση 1: (1)

θερμογράμματα ομαδοποιήθηκαν με βάση την κατάσταση παθολογική νόσο σε πέντε ομάδες: υγιείς μάρτυρες, LSIL (CIN 1), HSIL (CIN 2, CIN 3), πρώιμο στάδιο IC (στάδιο Ι) και προηγμένες IC (στάδιο II-IV). Μέση θερμογράμματα με τυπικές αποκλίσεις προσδιορίστηκαν για κάθε ομάδα μελέτης.

Οι διαφορές ως προς το σχήμα και θερμόγραμμα χαρακτηριστικό μετρήσεις εκτιμήθηκαν με μη-παραμετρικές μεθόδους. Πρώτον, τα διαγράμματα κουτί χρησιμοποιήθηκαν για να συγκριθούν οι διαφορές στις κατανομές μεταξύ κάθε ομάδα μελέτης. διαγράμματα κουτί κατασκευάστηκαν με την ακόλουθη μορφή: το κάτω μέρος και την κορυφή του box αντιπροσώπευε το 25

ου και 75

ο εκατοστημόριο, αντίστοιχα, και το 50ό εκατοστημόριο εκπροσωπήθηκε από τη ζώνη στη μέση του κουτιού. Το επάνω και κάτω άκρα των μουστάκια συμβολίζεται το 5

ου και 95

ου τοις εκατό, αντιστοίχως. Οριζόντιες γραμμές αναφέρεται το ελάχιστο και το μέγιστο όλων των δεδομένων και οι σταυροί αντιπροσώπευαν το 1

ου και 99

ου εκατοστημόρια. Η μέση αυτή συμβολίζεται από ένα ανοιχτό τετράγωνο. Οι διαφορές στις μετρήσεις θερμόγραμμα για κάθε κλινική ομάδα δοκιμάστηκαν για σημαντικότητα χρησιμοποιώντας το μη-παραμετρικό Mann-Whitney U για άνιση διάμεσες [34].

MS Σπουδών

Πειραματικός σχεδιασμός των μελετών MS.

Η σειρά των χειρισμού του δείγματος και την ανάλυση (αριθμός δείγματος, προκειμένου προετοιμασίας του δείγματος, λυοφιλίωση, MALDI-TOF κηλίδες πλάκα, και απόκτησης δεδομένων TOF) ήταν τυχαία για την ελαχιστοποίηση συστηματικές διακυμάνσεις κατά τη διάρκεια της συλλογής δεδομένων. Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για την απομόνωση ελεύθερα πεπτίδια (Κλάσμα 1 ή FX1), απομόνωση πεπτιδίων που δεσμεύονται με τις συνολικές πρωτεΐνες του πλάσματος (κλάσμα 2 ή FX2), απομόνωση πεπτίδια που απελευθερώνονται κατά τη διάρκεια της ανοσοεξάντληση λευκωματίνης και IgG από το πλάσμα (Κλάσμα 3 ή FX3), και απομόνωση πεπτιδίων επιλεκτικά συνδέεται προς το εξαιρετικά άφθονες πρωτεΐνες, λευκωματίνη και IgG (Κλάσμα 4 ή FX4). Τα δείγματα που είχαν εντοπισθεί στο τριπλούν, τα δεδομένα MALDI-TOF MS απέκτησε και το σήμα κατά μέσο όρο στις τρεις θέσεις. Η ανάλυση των δεδομένων κατά μέσο όρο για διαφορικά άφθονη πεπτιδίων διεξήχθη χρησιμοποιώντας ανάλυση κύριων συνιστωσών (PCA) και έλεγχος τ, που ακολουθείται από μη αυτόματο έλεγχο των εντάσεων ιόντων για επιλεγμένα πεπτίδια. Εγχειρίδιο αναθεώρηση διεξήχθη για να διασφαλιστεί ότι τα πεπτίδια δεν αποκλείεται ως αποτέλεσμα της λανθασμένης βάσης εξομάλυνση ή αφαίρεση της γραμμής βάσεως.

χειρισμού του δείγματος.

Τα δείγματα αποψύχονται μία φορά για να κλασματο σε 100 όγκους μι για αποθήκευση σε -80 ° C και μία φορά για την προετοιμασία του δείγματος για το πεπτίδιο ποσοτικοποίηση. Τα δείγματα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας δύο ξεχωριστά κλάσματα και τα μεμονωμένα κλάσματα αναλύθηκαν εις τριπλούν. Δείγματα πλάσματος εξαντλημένο λευκωματίνης και IgG χρησιμοποιώντας διαθέσιμα στο εμπόριο στήλες spin συγγένεια (Sartorius Ν.Α. Inc, Edgewood, ΝΥ) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα πεπτίδια δεν συνδέεται με τις πρωτεΐνες του πλάσματος απομονώθηκαν χρησιμοποιώντας μία τροποποίηση της μεθόδου καθίζησης του Chertov κ.ά. [35]. Πεπτίδια δεσμεύεται στη λευκωματίνη και IgG ανακτήθηκαν από τη ρητίνη συγγένειας αλβουμίνης /IgG με οξύ απογύμνωση με 10% οξικό οξύ. Πεπτίδια συνδέεται με τις πρωτεΐνες του πλάσματος ανακτήθηκαν από τον οργανικό διαλύτη-πηγμένες πρωτεΐνες με άλας ή οξύ ιονισμού. Τα ανακτημένα πεπτίδιο διαλύματα λυοφιλοποιήθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε 0,1% τριφθοροξικό οξύ (ΤΡΑ) πριν από την ανάλυση MALDI-TOF MS. Spot δείγματα ούρων αποψύχθηκαν από -80 ° C επί πάγου. Δείγματα ούρων περιστράφηκαν στα 1.500 χ g για 15 λεπτά στους 4 ° C για να ιζηματοποιηθούν τα κυτταρικά υπολείμματα και σωματιδιακή ύλη. Ούρα πεπτίδια απομονώθηκαν χρησιμοποιώντας Amicon Ultra-4 (10,000 NMWCO) (Millipore, Billerica, ΜΑ) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26].

MS ανάλυση των απομονωμένων πεπτιδίων στο πλάσμα και στα ούρα.

Όλα τα δείγματα αφαλατώθηκαν και συμπυκνώθηκαν για ανάλυση MALDI-TOF MS χρησιμοποιώντας C18 ZipTips (Millipore, Billerica, ΜΑ). Τα πεπτίδια εκλούστηκαν από τη ρητίνη C18 χρησιμοποιώντας μήτρα δείγματος, 5 mg /mL 4-υδροξυ-α-cyanocinnamic οξύ (α-CN), και στίγματα απ ‘ευθείας εις τριπλούν επί της MALDI πλάκα. Θετικά φάσματα μάζας ιόντων MALDI-TOF αποκτήθηκαν όπως περιγράφεται [36]. Πεπτίδια επιλέχθηκαν για περαιτέρω μελέτες αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το AB4700 σε TOF λειτουργία /TOF και την ερμηνεία των δεδομένων κατακερματισμού χρησιμοποιώντας Mascot (Matrix Science, Boston, ΜΑ) ver1.9 όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26].

Στατιστική ανάλυση MS δεδομένων.

τα αρχεία δεδομένων (.t2d) εξήχθησαν από την Πρωτεομική Analyzer AB4700 και εισάγονται στο λογισμικό οπτική στίγματος. Αυτό το λογισμικό μπορεί να βρει φασματικές κορυφές από το χρήστη καθορισμένα όρια μάζας ανοχής ή φάσματα κάδο μέσω ορίζονται από το χρήστη μεγέθη bin. Επιπλέον, ο χρήστης μπορεί να ορίσει ελάχιστες και μέγιστες αποκρίσεις σήματος, η οποία βοηθά στην αντιμετώπιση σύνολα υψηλής διαστάσεων φασματικά δεδομένα μάζας. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας binning δεδομένων, η οποία επιτρέπεται για αφαίρεση της γραμμής βάσεως. δεδομένα έκφρασης πεπτιδίου εξετάστηκαν πρώτη χρήση PCA. Μετά την εισαγωγή των δεδομένων, τα δεδομένα έτοιμη τροφή χρησιμοποιώντας καμία στάθμιση και είτε μέσες επίκεντρο ή Pareto δεδομένων κλιμάκωση πριν από την PCA. PCA είναι μια μέθοδος διερευνητική ανάλυση δεδομένων που μειώνει την πολυπλοκότητα των δεδομένων, διατηρώντας μεταβλητότητα τους, με τη μετατροπή των δεδομένων σε μια νέα ομάδα μεταβλητών, που αναφέρονται ως τα κύρια συστατικά. PCA χρησιμοποιήθηκε για να ληφθεί μια αμερόληπτη εκτίμηση του κατά πόσον ή όχι η MALDI-TOF MS δεδομένα έκφραση πεπτιδίου αυτο-ταξινομημένα σε ομάδες που αντιστοιχούν σε ασθενείς με CIN, καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και των υγιών μαρτύρων χωρίς CIN /καρκίνο του τραχήλου. Διαφορική έκφραση πεπτιδίων και πρωτεϊνών συγκρίθηκε με t-test unpaired, δύο ουρών Student χρησιμοποιώντας ευθυγραμμίζονται φάσματα MALDI και την κατά μέσο όρο περιοχή κορυφής συμπλέγματος για μεμονωμένα πεπτίδια. Μια τιμή ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. Διαφορικά εκφρασμένων πεπτιδίων επιλέχθηκαν για tandem MS ανάλυση χρησιμοποιώντας το AB4700 Πρωτεομική Analyzer.

Αποτελέσματα

Plasma δείγματα από 67 γυναίκες παρακολουθούν το τμήμα της Γυναικολογικής Ογκολογίας κλινική και 4 υγιείς εθελοντές συλλέχθηκαν για ανάλυση DSC. Η κατανομή των αριθμών δείγμα ήταν ως εξής: έλεγχος = 4, CIN 1 = 3, CIN 2 = 4, CIN 2-3 = 3? CIN 3 = 22, IC = 35 (FIGO στάδιο Ι = 14, Β = 10, IIIb = 7, IV = 4)? ηλικιακό εύρος = 18-69 ετών (μέσος όρος 38,7 χρόνια) (Πίνακας S1). Πλήρης δημογραφικές και κλινικές πληροφορίες, συμπεριλαμβανομένων βιοψία CIN και IC κατάσταση, συγκεντρώθηκαν για όλα τα δείγματα από τα μέλη της ομάδας της κλινικής μελέτης. Τα δείγματα που παρέχονται από τη βασική επιστημονική ομάδα μελέτης deidentified και στερείται κάθε δημογραφικές και κλινικές πληροφορίες. ανάλυση DSC των δειγμάτων πλάσματος απέδωσε κανονικοποιημένη, βασική γραμμή διορθωμένες θερμογράμματα διπλούν για κάθε δείγμα. Σε αυτό το στάδιο, κλινικές και δημογραφικές πληροφορίες που παρέχονται στη βασική επιστημονική ομάδα για τις επόμενες αναλύσεις.

Έχουμε δείξει στο παρελθόν ότι το θερμογράφημα του πλάσματος που λαμβάνεται από υγιή άτομα είναι αντιπροσωπευτική της θερμικής μετουσίωσης από τις πιο άφθονες πρωτεΐνες του πλάσματος σταθμίζονται σύμφωνα με το μέσο όρο της κανονικής συγκεντρώσεις στο πλάσμα τους [18]. Για την τρέχουσα μελέτη, Θερμογραφήματα του πλάσματος που λαμβάνονται από υγιείς εθελοντές κατά μέσο όρο να αποκτήσει ένα προφίλ «υγιή ελέγχου» μελέτη ειδικών που αντιπροσωπεύει τα συγκεκριμένα πρωτόκολλα συλλογής και επεξεργασίας που χρησιμοποιούνται στην παρούσα μελέτη. Συγκριτικά, η μέση προηγουμένως δημοσιευθείσες θερμόγραμμα ελήφθη από 15 υγιή άτομα: 9 άνδρες και 6 γυναίκες (11 αφροαμερικάνων και 4 του Καυκάσου) που κυμαίνονται σε ηλικία από 22 έως 50 ετών (μέσος όρος 37,0 έτη). Η μέση θερμόγραμμα έχει εμβαδόν 5,02 ± 0,23 cal /g και μια πρώτη θερμοκρασία στιγμή (Τ

FM) του 67.4 ± 0.8 ° C. Η μελέτη ειδικών «υγιή ελέγχου» προφίλ που λαμβάνονται από 4 Καυκάσιοι γυναίκες με παρόμοιο εύρος ηλικίας με την προηγούμενη μελέτη (25-50 ετών? Σημαίνει 39,3 χρόνια) συγκρίνει καλά με παρόμοια περιοχή (4,94 ± 0,19 cal /g) και Τ

FM (66,3 ± 0,3 ° C) τιμές

θερμογράμματα κατά μέσο όρο μέσα σε πέντε κλινικές ομάδες:. έλεγχος, LSIL, HSIL, στάδιο Ι και ΙΙ-IV. Οι μέσες θερμογράμματα είναι διακριτές η μία από την άλλη και δείχνουν μια προοδευτική αλλαγή στο προφίλ σχήματος (Σχήμα 1Α). Η κύρια μετάβαση στην κλίμακα 60-65 ° C γίνεται προοδευτικά χαμηλότερα με αύξηση του πλάτους του δεύτερου μετάβασης περίπου 70 ° C. Κάθε κλινική ομάδα εξετάστηκε η επίδραση του ασθενούς δημογραφικούς παράγοντες, συγκεκριμένα η ηλικία, η εθνικότητα, το κάπνισμα και η ισοτιμία χωρίς σημαντική επίδραση που βρέθηκαν στις μέσες θερμογραφήματα. Η διακύμανση που σχετίζεται με κάθε προφίλ ομάδα εξετάστηκε μέσω υπολογισμό των τυπικών αποκλίσεων σε κάθε θερμοκρασία και την κατασκευή ενός οικοπέδου τυπικής απόκλισης της χωρητικότητας θερμότητας ως συνάρτηση της θερμοκρασίας (Σχήμα 1Β). Η υγιής ομάδα ελέγχου δείχνει το μικρότερο διακύμανση σε όλο το εύρος θερμοκρασίας. Οι άλλες κλινικές ομάδες δείχνουν υψηλότερη διακύμανση που σχετίζεται κυρίως με το σημαντική μετάβαση -65 ° C, καθώς και η δεύτερη μετάβαση -70 ° C και υψηλότερες ώμους θερμοκρασία του. Η παρατηρούμενη διακύμανση thermogram είναι παρόμοια με προηγούμενες παρατηρήσεις μας [18] και αντικατοπτρίζει τόσο την αναμενόμενη κλινική διακύμανση των επιπέδων της πρωτεΐνης του πλάσματος, καθώς και νόσου που σχετίζεται με τροποποιήσεις των πρωτεϊνών.

Το προφίλ της μέσης θερμογράφημα της πλεονάζουσας ειδική θερμοχωρητικότητα (C

p

ex) έναντι της θερμοκρασίας (Πίνακας Α) και τυπική απόκλιση (Πίνακας Β) της κάθε κλινικής ομάδας: έλεγχοι (μαύρο)? LSIL (κόκκινο)? HSIL (πράσινο)? πρώιμο στάδιο IC [ΦΥΓΩ Στάδιο Ι] (μπλε)? και προηγμένες IC [ΦΥΓΩ Στάδιο ΙΙ-IV] (κυανό). Θερμογράμματα δείχνουν μια προοδευτική μετατόπιση προς υψηλότερες θερμοκρασίες μετουσίωσης με την αύξηση του φορτίου της νόσου. Διαφορά οικόπεδα της κλινικής ομάδας θερμογράμματα σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Πίνακας C) δείχνουν αρνητική κορυφές διαφορά ~62 ° C και αυξανόμενη στροφή και το μέγεθος της υψηλότερης θερμοκρασίας κορυφών θετική διαφορά. Αυτά υποτίθεται ότι αντικατοπτρίζει την αλληλεπίδραση της νόσου συγκεκριμένα συστατικά με άφθονες πρωτεΐνες του πλάσματος, κυρίως λευκωματίνη, με αποτέλεσμα τη θερμική σταθεροποίηση και τις μεταβολές του προφίλ θερμογράφημα πλάσμα.

Η

Οι αλλαγές στο προφίλ θερμόγραμμα που συνδέονται με την επιβάρυνση από ασθένειες που εξετάστηκαν μέσω DSC διαφορά οικοπέδων τα οποία αντανακλούν τις αλλαγές στην ομάδα θερμογραφήματα σε σχέση με την υγιή ομάδα ελέγχου (Σχήμα 1C). Για κάθε βαθμό CIN ή το στάδιο IC, υπήρχε μια αρνητική κορυφή διαφορά επικεντρώνεται ~62 ° C με υψηλότερη θερμοκρασία αιχμές θετική διαφορά. Οι θετικές κορυφές διαφορά μετατοπίζεται προς υψηλότερες θερμοκρασίες και αυξημένη σε μέγεθος με αυξημένη επιβάρυνση της νόσου. Η ομάδα LSIL δεν ακολουθεί αυτή την τάση στο θετικό κορυφές διαφορά? Αυτό θα μπορούσε να αντανακλά φτωχή ορισμός αυτής της κλινικής ομάδα που χορηγείται το χαμηλό αριθμό δειγμάτων (η = 3) που διατίθενται για την αξιολόγηση. Αν και αυτές οι αλλαγές στο προφίλ θερμόγραμμα παραμένουν υπό έρευνα στο εργαστήριο μας προτείνουν τη θερμική σταθεροποίηση των πρωτεϊνών (ες) στο πλάσμα με ένα προφίλ μετουσίωση εμφανίζεται ~62 ° C.