Οι

Αφηρημένο

Καρκίνος βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) θεωρείται ένα υποσύνολο του μεγαλύτερου όγκου αρμόδιος για την έναρξη και τη διατήρηση της νόσου. Αρκετές επιφάνεια κυτταρικούς δείκτες έχουν χρησιμοποιηθεί πρόσφατα για την αναγνώριση ΚΕΠ. Μεταξύ αυτών είναι CD133, η οποία εκφράζεται από αιμοποιητικά προγονικά κύτταρα καθώς και τα εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα και διάφορους καρκίνους. Έχουμε απομονώσει πρόσφατα και καλλιεργούνται CD133 θετική [CD133 (+)] κύτταρα από διάφορες καρκινικές κυτταρικές σειρές χρησιμοποιώντας ένα NASA ανέπτυξε Υδροδυναμική Εστίαση βιοαντιδραστήρα (HFB) (Celdyne, Houston, TX). Για σύγκριση, ένα άλλο βιοαντιδραστήρα, χρησιμοποιήθηκε το σύστημα περιστροφικού κυτταρική καλλιέργεια (Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης) που κατασκευάζεται από Synthecon (Houston, ΤΧ). Τόσο η HFB και οι βιοαντιδραστήρες Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης προσομοιώνουν τις πτυχές της hypogravity. Στη μελέτη μας, η HFB αυξημένη CD133 (+) κυτταρική ανάπτυξη από διάφορες κυτταρικές σειρές σε σύγκριση με το δοχείο Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης και στο φυσιολογικό έλεγχο της βαρύτητας. Παρατηρήσαμε μια (+) 15-φορές του πολλαπλασιασμού του CD133 (+) κυτταρικό κλάσμα με καρκινικά κύτταρα που καλλιεργήθηκαν για 7-ημέρες σε βελτιστοποιημένες συνθήκες. Το σκάφος Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης αντί απέδωσε ένα (-) 4,8-πλάσια μείωση της CD133 (+) κυτταρικό κλάσμα σχέση με το HFB μετά από 7-ημέρες καλλιέργειας. Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε επίσης ότι η hypogravity περιβάλλον της HFB ευαισθητοποιηθεί σε μεγάλο βαθμό τα CD133 (+) καρκινικά κύτταρα, τα οποία είναι συνήθως ανθεκτική στη θεραπεία χημειο, να γίνει ευαίσθητο σε διάφορους χημειοθεραπευτικούς παράγοντες, ανοίγοντας το δρόμο για λιγότερο τοξικά και πιο αποτελεσματική χημειοθεραπευτική αγωγή σε ασθενείς. Για να μπορέσει να ελεγχθεί η αποτελεσματικότητα των κυτταροτοξικών παραγόντων in vitro πριν από την χρήση τους σε κλινικό περιβάλλον για τα καρκινικά κύτταρα, καθώς και για τον καρκίνο του βλαστικά κύτταρα μπορεί να ανοίξει το δρόμο για πιο αποτελεσματικές χημειοθεραπευτικές στρατηγικές σε ασθενείς. Αυτό θα μπορούσε να είναι μια σημαντική πρόοδος στις θεραπευτικές επιλογές των ογκολογικών ασθενών, επιτρέποντας πιο στοχευμένες και εξατομικευμένες αγωγές χημειοθεραπείας, καθώς και για υψηλότερα ποσοστά ανταπόκρισης

Παράθεση:. Kelly SE, Di Benedetto Α, Γκρέκο Α, Χάουαρντ CM , Sollars VE, Primerano DA, et al. (2010) ταχεία επιλογή και διάδοση των CD133 (+) κύτταρα από καρκίνο κυτταρικές γραμμές: Χημειοθεραπευτικοί επιπτώσεις. PLoS ONE 5 (4): e10035. doi: 10.1371 /journal.pone.0010035

Επιμέλεια: Annarosa leri, Ιατρική Σχολή του Χάρβαρντ, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 10 του Φεβρουαρίου 2010? Αποδεκτές: 16, Μαρτίου 2010? Δημοσιεύθηκε: 8 Απριλίου του 2010

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της δήλωσης Creative Commons Public Domain που ορίζει ότι, μόλις τοποθετηθεί στο δημόσιο τομέα, το έργο αυτό μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο σκοπό

Χρηματοδότηση:. η έρευνα πραγματοποιήθηκε με κεφάλαια που λαμβάνονται εν μέρει από τη διαφοροποίηση των κυττάρων και το Κέντρο Ανάπτυξης (ΑΧΕΒΠ) στο Πανεπιστήμιο Μάρσαλ, NIH- CA138510, ΝΙΗ-CA140024, ΝΙΗ-COBRE 5P20RR020180 (στη ΔΕΗ)? Δυτική Βιρτζίνια NASA Space Grant Consortium (έως S.K. και J.V.V.)? WV-INBRE 5P20RR016477 (με Β.Π.). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Τα νεοπλάσματα μπορεί να θεωρηθεί ως ιστός που αποτελείται από έναν ετερογενή πληθυσμό κυττάρων που διαφέρουν σε βιολογικά χαρακτηριστικά και τις δυνατότητες αυτο-ανανέωση [1]. Η κλωνική φύση ορισμένων κακοήθων όγκων είναι καλά εδραιωμένη [2]. Σύμφωνα με το μοντέλο του κλωνική εξέλιξη των καρκινικών κυττάρων, ο καρκίνος σχηματίζεται μέσω της συσσώρευσης των γενετικών αλλαγών στα κύτταρα και σταδιακή επιλογή κλώνων [3], [4]. Ως εκ τούτου, ο όγκος θεωρείται ως μη φυσιολογικού ιστού που κατέβηκε από ένα μόνο κύτταρο μέσω της συνεχούς συσσώρευσης γενετικών λαθών και διάφορες επιγενετικές μεταβολές. Ωστόσο, διάφορα πειράματα που πραγματοποιούνται κατά τη διάρκεια των τελευταίων δεκαετιών έχουν δείξει ότι δεν είναι κάθε καρκινικό κύτταρο είναι ένα κύτταρο για την έναρξη του όγκου (Τ-IC) και ότι τόσο πολλοί όπως 10

Τα 6 ποντικού ή ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα που απαιτούνται για την μεταμόσχευση ενός νέου όγκου από ένα υπάρχον [4], [5], [6], [7]. Αυτά τα στοιχεία πρότειναν την πιθανότητα ότι τα καρκινικά κύτταρα μπορεί να υπάρχουν σε μια ιεραρχική κατάσταση στην οποία μόνο ένας μικρός αριθμός των κυττάρων που διαθέτουν όγκου δυναμικό έναρξη της έρευνας. Πρόσφατα στοιχεία τόσο από αιματολογικές κακοήθειες και συμπαγείς όγκους έχουν προτείνει ότι υπάρχουν μόνο μικρές πληθυσμοί των κυττάρων σε κάθε κακοήθεια που είναι ικανά για την έναρξη του όγκου τα οποία είναι τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα (CSC) [4], [5], [6], [ ,,,0],7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]. Αυτά τα κύτταρα φαίνεται να είναι ικανά ασύμμετρη διαίρεση και αυτο-ανανέωση και είναι μόνο ένα μικρό κλάσμα μεταξύ το μεγαλύτερο μέρος των πιο διαφοροποιημένων κυττάρων στον όγκο [16], [17], [18].

Πρόσφατα, οι CSCs μελετηθεί σε διάφορα είδη πρωτογενούς όγκου ώστε να αναπτυχθούν CSC-ειδικών θεραπειών [6], [11], [19], [20], [21]. Είναι ενδιαφέρον ότι, ορισμένοι όγκοι είναι ιδιαίτερα ανθεκτικοί σε χημειοθεραπεία και σε άλλες μορφές θεραπείας και παρόλο επιθετικές θεραπείες καταστρέφουν την πλειονότητα των καρκινικών κυττάρων, ένα μικρό κλάσμα των κυττάρων επιβιώνουν και συχνά αναγεννηθούν σε ακόμη μεγαλύτερες μάζες των καρκινικών κυττάρων [22], [23] , [24]. Αποτελεσματικές θεραπείες για τους ασθενείς με καρκίνο απαιτεί σε βάθος κατανόηση των μηχανισμών που οδηγούν στην ανάπτυξη των όγκων και την ανθεκτικότητα στα φάρμακα.

Η πρόσφατη ανακάλυψη των ΚΕΠ έχει διαδραματίσει καίριο ρόλο στην αλλαγή άποψή μας για την καρκινογένεση και τη χημειοθεραπεία. ΚΕΠ πιστεύεται ότι είναι υπεύθυνη για το σχηματισμό και την ανάπτυξη του νεοπλαστικού ιστού. Τα ΚΕΠ είναι φυσικά ανθεκτικά στην πιο πρόσφατη χημειοθεραπεία λόγω της ηρεμίας της φύσης τους. Αυτό μπορεί να εξηγήσει γιατί τα παραδοσιακά χημειοθεραπείες μπορεί να μειώσει αρχικά το μεγαλύτερο μέρος του χύδην όγκου αλλά αποτυγχάνουν να εξάλειψή πλήρως, επιτρέποντας ενδεχόμενη επανάληψη [1], [11], [17], [18], [22]. ΚΕΠ είναι πιο ανθεκτικοί στη θεραπεία όχι μόνο δευτερογενώς προς ηρεμία, αλλά και λόγω της αυξημένης έκφρασης του αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών και μεταφορέων εκροής φαρμάκου. θεραπείες για τον καρκίνο που διατίθενται σήμερα εκμεταλλεύονται κυρίως τις πολλαπλασιαστικές και μεταστατικό δυναμικό των καρκινικών κυττάρων? Ως εκ τούτου, η πλειοψηφία των θεραπειών στοχεύουν σε ταχέως διαιρούμενα κύτταρα και στο μοριακών στόχων που αντιπροσωπεύουν το μεγαλύτερο μέρος του όγκου. Αυτό μπορεί να εξηγήσει την αποτυχία των θεραπειών για την εξάλειψη της ασθένειας ή για την πρόληψη της υποτροπής του καρκίνου. Επιπλέον, εάν ένα φάρμακο επηρεάζει την ανάπτυξη του μόνο ένα μικρό πληθυσμό κυττάρων, θα υπάρχει μόνο μια ελάχιστη μείωση στην ανάπτυξη του όγκου σε σύντομο χρονικό διάστημα.

Θεωρητικά, ταυτοποίηση και χαρακτηρισμός της ΚΕΠ μπορεί να επιτρέψει η ανάπτυξη των τρόπων θεραπείας που στοχεύουν τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα και όχι τα ταχέως διαιρούμενα κύτταρα του καρκίνου.

η παρατεταμένη έκθεση των ανθρώπων και των πειραματόζωων με τις αλλαγμένες βαρυτική συνθήκες της διαστημικής πτήσης έχει δυσμενείς επιπτώσεις σε διαφορετικά κυτταρικά συστήματα. Οι επιδράσεις του περιβάλλοντος hypogravity για την ανάπτυξη του όγκου και την καρκινογένεση είναι ακόμη άγνωστη και αυτό το ερευνητικό πεδίο εξακολουθεί να στερείται συστηματική έρευνα που προκαλείται hypogravity έκφραση του γονιδίου, το οποίο είναι το κλειδί για πληροφορίες που χρειάζονται για να ξεδιπλώσει τελικά το μηχανισμό πίσω από hypogravity που προκαλούνται από ασθένειες. Για το σκοπό αυτό, μελετήσαμε τα αποτελέσματα της προσομοιωμένης hypogravity σε ανθρώπινα κύτταρα οστεοσαρκώματος καλλιεργούνται σε NASA ανεπτυγμένων hydrofocusing βιοαντιδραστήρα (HFB) και στο σύστημα περιστροφικού κυτταρικής καλλιέργειας (Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης). Διάφοροι σχεδιασμοί σκαφών περιστρεφόμενου τοιχώματος έχουν χρησιμοποιηθεί για να δημιουργήσει ένα τρισδιάστατο περιβάλλον καλλιέργειας με μεταβλητή τάση διατμήσεως και hypogravity προσομοίωση ότι στο διάστημα [25]. Η HFB (Celdyne, Houston, TX) που αναπτύχθηκε από τη NASA στο Διαστημικό Κέντρο Johnson, είναι ένα υγρό γεμάτο τρούλο, ο οποίος περιστρέφεται σε μια συγκεκριμένη ταχύτητα και έχει κωνικό κλώστη να παρέχει μια μοναδική ικανότητα hydrofocusing που θα επιτρέψει για μια εξαιρετικά χαμηλή διάτμηση περιβάλλον πολιτισμός και μία μεμβράνη μεταφοράς φυσικού αερίου νάιλον [25]. Η Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης αποτελείται από ένα οριζοντίως περιστραφεί δοχείο καλλιέργειας οξυγονωμένο από μία μεμβράνη μεταφοράς αερίου επίπεδη καουτσούκ σιλικόνης [26]. Η NASA σχεδιασμένο βιοαντιδραστήρα HFB και η Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης έχουν χρησιμοποιηθεί με επιτυχία στη Γη και στο διάστημα για να μπορέσουν οι ερευνητές να χρησιμοποιήσουν μοντελοποιημένη ή πραγματική hypogravity, αντίστοιχα, για να μελετήσει το ρόλο της βαρύτητας στη διαμόρφωση των τρισδιάστατων μοντέλων των κυττάρων των ιστών θηλαστικών και παραγωγή βιο-προϊόντων [25], [27], [28], [29], [30], [31].

στην παρούσα μελέτη αποδεικνύουμε ότι τα καρκινικά βλαστικά κύτταρα διεγείρονται να πολλαπλασιάζονται όταν καλλιεργούνται στις συνθήκες hypogravity που παράγεται από το HFB και ότι η μείωση της βαρύτητας προσομοίωση στην HFB ευαισθητοποιεί ΚΕΠ σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες.

Αποτελέσματα

οστεοσάρκωμα βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν πολλαπλασιάζονται στην Hydro-Εστίαση βιοαντιδραστήρα ( HFB), αλλά όχι σε περιστροφικό σύστημα καλλιέργειας κυττάρων (Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης)

Διαμορφώθηκε hypogravity είναι μια κατάσταση κατά την οποία τα κύτταρα βρίσκονται σε συνεχή ελεύθερη πτώση και στην οποία είναι σε θέση να αναπτυχθούν σε αγκυροβόλιο ανεξάρτητο τρόπο. Δεδομένου ότι τα αποτελέσματα hypogravity σε όγκους είναι άγνωστες, πιστεύαμε να διερευνηθούν οι επιδράσεις του μοντελοποιούνται hypogravity απουσία διάτμηση στρες στην ικανότητα ανάπτυξης καρκινικών κυττάρων διαφορετικής εμβρυϊκής προέλευσης. Έχουμε χρησιμοποιήσει μια HFB που αναπτύχθηκε από τη NASA στο Διαστημικό Κέντρο Johnson, η οποία αποτελείται από ένα γεμάτο θόλου 50 mL υγρό που περιστρέφεται σε μία καθορισμένη ταχύτητα και ότι έχει ένα εσωτερικό κωνικό κλώστη που υδρο-εστιάζει την κυτταρική καλλιέργεια επιτρέπει την χαμηλής διάτμησης περιβάλλοντος.

Προς έκπληξή μας, βρήκαμε ότι όταν ένας γνωστός αριθμός κυττάρων SAOS-2 σπάρθηκαν στην HFB, μόνο ένα μικρό κλάσμα αυτών των κυττάρων επιβίωσαν της θεραπείας, ανεξάρτητα από την κυτταρική πυκνότητα σπάρθηκαν στο βιοαντιδραστήρα . Το Σχήμα 1Α δείχνει ότι ο αριθμός των βιώσιμων κυττάρων SAOS-2 καλλιεργήθηκαν για 5 ημέρες στο HFB μειώθηκε δραματικά.

Α) Trypan blue αριθμό των κυττάρων αποκλεισμό των κυττάρων SAOS-2 (κύτταρα οστεοσαρκώματος) και SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργούνται στην HFB, CD133 (+) κύτταρα SAOS-2 και CD133 (+) κύτταρα SAOS-2 καλλιεργήθηκαν HFB, και του CD133 (+) κύτταρα SAOS-2 και CD133 (+) SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργήθηκαν σε φυσιολογικά κατάσταση της βαρύτητας. Γκρι ράβδοι υποδεικνύουν τον αριθμό των κυττάρων που τοποθετήθηκαν στον έλεγχο την ημέρα-1. Μαύρες μπάρες δείχνουν τον αριθμό των βιώσιμων κυττάρων ανακτώνται μετά από 5 ημέρες καλλιέργειας σε αυτή την κατάσταση καλλιέργειας. Β) εικόνα αντίθεσης φάσης Bright πεδίου (20 ×) 3-D καλλιέργειας (σφαίρες) που σχηματίζεται από SAOS-2 κύτταρα που αναπτύχθηκαν στο HFB για 5 ημέρες. Ένθετο (επάνω δεξιά) δείχνει μια εικόνα του CD133 χρώση ανοσοφθορισμού των κυττάρων SAOS-2 αναπτύχθηκαν σε βιοαντιδραστήρα για 5 ημέρες. Γ) Η κυτταρομετρία ροής διάγραμμα του ανοσοφαινότυπο CD133 κυττάρων SAOS-2. Ένα αντίσωμα ισοτύπου χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. μπλε κύτταρο αποκλεισμός μετρήσεις D) Trypan ενός βελτιστοποιημένου πείραμα του HFB καλλιέργειας κυττάρων SAOS-2 στο HFB μετά από επτά ημέρες. CD133 (+) επιλέχθηκαν SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργήθηκαν στον βιοαντιδραστήρα και πολλαπλασιάστηκαν 15-φορές μετά από επτά ημέρες. Λευκή ράβδος υποδεικνύει τον αριθμό των κυττάρων που SAOS-2 σπείρονται στην HFB. Μαύρη γραμμή υποδεικνύει τον αριθμό των βιώσιμων CD133 (+) SAOS-2 κύτταρα ανακτήθηκαν μετά από 7 ημέρες καλλιέργειας βελτιστοποιημένα στο βιοαντιδραστήρα. Γκρι μπάρα αναφέρει τον αριθμό των CD133 (+) κύτταρα που υπάρχουν στο γονικό πληθυσμό SAOS-2. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά τριών ξεχωριστών πειραμάτων αποδίδοντας συγκρίσιμα αποτελέσματα.

Η

Είναι ενδιαφέρον ότι, SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργήθηκαν στον βιοαντιδραστήρα που σχηματίζονται κύτταρο σφαίρες και φάνηκε να είναι σημαντικά μικρότερη από ό, τι τα κύτταρα SAOS-2 καλλιεργήθηκαν σε πιάτα και συλλέχθηκαν με επεξεργασία με θρυψίνη (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η Εικόνα 1Β δείχνει ένα 20 × φωτεινή εικόνα πεδίο των σφαιρών που σχηματίζονται από κύτταρα SAOS-2 που αναπτύχθηκαν στο HFB για 5 ημέρες. Τα κύτταρα απομακρύνθηκαν από τον αντιδραστήρα HFB και φωτογραφίες τραβήχτηκαν αμέσως χρησιμοποιώντας ανεστραμμένο μικροσκόπιο χρησιμοποιώντας φάσης αντίθεσης.

Λόγω της φαινομενικής αλλαγής τους στη μορφολογία και την ικανότητα να σχηματίζουν σφαίρες στο περιβάλλον HFB και επειδή άλλοι έχουν αποδείξει την παρουσία του CD133 (+) κύτταρα εντός πρωτεύοντα σαρκώματα οστών, καθώς και οι κυτταρικές γραμμές οστεοσαρκώματος MG-63, OS-521, 0S-01-187, OS-99-01, και SAOS-2 και η κυτταρική γραμμή χονδροσαρκώματος CS-828 [ ,,,0],32], [33], υποθέσαμε ότι οι HFB επιλεγμένα κύτταρα ήταν CD133 (+). Για να εξεταστεί αυτή η υπόθεση έχουμε ανοσοφαινότυπου αυτών των κυττάρων με ένα αντίσωμα που κατευθύνεται έναντι CD133 (Miltenyi, Γερμανία), και βρήκαν ότι HFB επιλεγμένα κύτταρα ήταν 100% θετικά στη CD133, ένα τυπικό δείκτη βλαστικών κυττάρων μεσεγχυματικής προέλευσης (Σχήμα 1Β, πάνελ ένθετο και το Σχήμα 1C ). Δεδομένου ότι οι SAOS-2 κύτταρα που ανακτήθηκαν από τον βιοαντιδραστήρα ήταν όλα CD133 (+) (98,8%) (Σχήμα 1 C), θελήσαμε να καθοριστεί αν η CD133 (+) κύτταρα όχι μόνο επέζησε, αλλά και πολλαπλασιάστηκαν στο περιβάλλον hypogravity. Για το σκοπό αυτό, επιλέξαμε κύτταρα CD133 (+) από τα SAOS-2 ή ΕΟΕ κυτταρικές σειρές χρησιμοποιώντας ένα σύστημα MACSorting και προκλήθηκαν αυτά τα κύτταρα CD133 (+) σε ένα 5-ημερών τρέξιμο στο HFB. Είναι ενδιαφέρον ότι, SAOS-2 ή κύτταρα HOS MACSorted με ένα αντίσωμα έναντι CD133 και καλλιεργήθηκαν στον βιοαντιδραστήρα για 5 ημέρες αυξήθηκε σε αριθμό από δύο φορές (Εικόνα 1Α). Σχήμα 1Α δείχνει τα trypan μπλε κελί αποκλεισμού μετρήσεις του CD133 (+) SAOS-2 βιώσιμα κύτταρα ανακτήθηκαν μετά από 5 ημέρες καλλιέργειας στο βιοαντιδραστήρα.

Μετά από μερικές δοκιμές για βελτιστοποίηση της κυτταρικής καλλιέργειας, ήμασταν σε θέση να επιτύχει μια 15-πλάσια αύξηση στον πολλαπλασιασμό του CD133 καρκίνου (+) βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν από τα γονικά κύτταρα SAOS-2 σε μια περίοδο επτά ημερών από τη διακοπή του αντιδραστήρα κάθε 24 ώρες και απαλά ανάμιξη του πολιτισμού 10 φορές σε μια ορθογώνια τρόπο πάνω από ένα χρονικό διάστημα ενός λεπτού, η οποία επέτρεψε την αναδιανομή των μέσων ενημέρωσης στον τρούλο και την ανάμειξη του σε θρεπτικά συστατικά με τα πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα (Εικόνα 1D). Το Σχήμα 1D δείχνει ότι μετά από βελτιστοποιημένο πρωτόκολλο κυτταρικής καλλιέργειας στην HFB, είναι δυνατόν να επιλεγούν και να πολλαπλασιάζονται ένα συγκεκριμένο πληθυσμό που περιέχεται στο γονική κυτταρική γραμμή SAOS-2. Παρόμοια αποτελέσματα επιτεύχθηκαν χρησιμοποιώντας διάφορες άλλες καρκινικές κυτταρικές σειρές διαφορετικής προέλευσης ιστού και τα οποία εκφράζουν μια μεταβλητή ποσότητα του δείκτη CD133 (ΕΟΕ, U2OS, T98G, U87MG, Du145, LNCap, WI38, H23, Hep3B, Hela, Mewo, ΗΟ-1 κύτταρα, ΗΝ12 και HN30), βλέπε πίνακα 1, και τα δεδομένα δεν εμφανίζονται.

η

Μια άλλη βιοαντιδραστήρα που προσομοιώνει hypogravity, η mL σύστημα 50 περιστροφικό κυτταρικής καλλιέργειας (Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης) [26] που κατασκευάζεται από Synthecon (Χιούστον, TX), χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση των αποτελεσμάτων που προκύπτουν με τη χρήση του HFB. Σε ένα παράλληλο πείραμα στο οποίο εμβολιάζεται από ίσο αριθμό κυττάρων SAOS-2 με τον ίδιο επωαστήρα καλλιέργειας ιστού με τις ίδιες συνθήκες της ταχύτητας του ρότορα, CO2, θερμοκρασία, και όγκο του δοχείου (50 mL), το HFB αυξημένη CD133 (+) κυτταρική ανάπτυξη από SAOS-2 κύτταρα σε σύγκριση με το σκάφος Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης και τον έλεγχο της βαρύτητας της γης. 5 × 10∧6 κύτταρα SAOS-2 εμβολιάστηκαν σε βιοαντιδραστήρες HFB ή Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης των οποίων 350.000 (7%) ήταν CD133 (+) και 4.650.000 CD133 (-) (Πίνακας 2). μέσα καλλιέργειας, οξυγόνωση, την ταχύτητα, τη θερμοκρασία και τις εκπομπές CO

2 κρατήθηκαν σταθερά σταθερό για τα δύο συστήματα καλλιέργειας και στην ίδια θερμοκοιτίδα για τρέξιμο 7-ημέρες. Μετά από μια 7-ήμερη τρέξιμο, τα αγγεία συλλέχθηκαν και τα κύτταρα αντέδρασαν με ένα αντίσωμα έναντι φθορεσκεϊνωμένο CD133 (Miltenyi, Γερμανία) και μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα BD Facs Aria κυτταρόμετρο ροής. Ένα αντίσωμα ισοτύπου χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. Από τη σύγκριση των δύο καλλιεργειών βιοαντιδραστήρα, δείξαμε ότι ένα (+) 15-πλάσια αύξηση της CD133 (+) αριθμός κυττάρων (5.370.960 CD133 + κυττάρων) επιτεύχθηκε με τη χρήση του HFB σε μια 7-ημερών τρέξιμο. Αριθ πολλαπλασιασμό των κυττάρων CD133 (+) παρατηρήθηκε στην καλλιέργεια που προέρχεται από το δοχείο καλλιέργειας Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης. Το δοχείο καλλιέργειας Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης έδειξαν αντί δραστική μείωση στον πληθυσμό των κυττάρων CD133 (+) [(-) 4,8 φορές μείωση] από τον αριθμό των CD133 (+) κύτταρα σπάρθηκαν σε βιοαντιδραστήρες την ημέρα-0 (Πίνακας 2). Στην πραγματικότητα, ο αριθμός των CD133 κύτταρα SAOS-2 (+) μειώθηκε από 350.000 σε 72.800 σε 7 ημερών κίνηση του Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης, ενώ η HFB καλλιεργούνται SAOS-2 CD133 (+) κυττάρων αυξήθηκε από 350.000 σε 5.370.960 κατά τη διάρκεια μιας ισοδύναμης περιόδου του χρόνου.

η

Λόγω αυτής δραματική διαφορά στην ανάπτυξη των κυττάρων SAOS-2 CD133 (+) στα δύο βιοαντιδραστήρες παραγωγής hypogravity (HFB και Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης), θελήσαμε να ελέγξει εάν το pH θα μπορούσε να είναι μια μεταβλητή προκαλώντας τα αποτελέσματα επί της κυτταρικής ανάπτυξης παρατηρήθηκε. Συνεπώς, μετρήσαμε το ρΗ του μέσου της HFB και Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης βιοαντιδραστήρες διατηρούνται στην ίδια θερμοκοιτίδα με ένα επίπεδο

2 CO ορίζεται σε 5% και μία σταθερή θερμοκρασία 37 ° C πριν και μετά από μια σειρά από 7-ημερών. Συγκρίναμε το pH των μέσων μαζικής ενημέρωσης από την HFB και σκάφη Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης με τα προσαρμοσμένα μέσα από κύτταρα ελέγχου που καλλιεργούνται σε ένα τρυβλίο Petri σε κατάσταση βαρύτητα της Γης σε σχέση με αδιάθετα μέσο D-ΜΕΜ. Δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά βρέθηκε μεταξύ των διαφορετικών συνθηκών καλλιέργειας κυττάρων με επανάληψη των πειραμάτων τρεις φορές. Στην πραγματικότητα, δεν δαπανήθηκαν μέσο έδειξε ρΗ 7,82 ± 0,04. Medium από τον έλεγχο SAOS-2 κύτταρα αναπτύσσονται σε ένα τρυβλίο Petri σε κανονικές συνθήκες βαρύτητα έδειξε ένα ρΗ 7,96 ± 0,23? μέσο από κύτταρα SAOS-2 αναπτύχθηκαν στο HFB είχε ένα ρΗ 7,71 ± 0,23? και μέσο από κύτταρα SAOS-2 αναπτύχθηκαν σε βιοαντιδραστήρα Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης έδειξε ένα ρΗ 7.9 ± 0.11, αποδεικνύοντας ότι η διαφορετική ανάπτυξη του CD133 (+) SAOS-2 κύτταρα που παρατηρήθηκαν μεταξύ του Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης και σκάφη HFB δεν οφειλόταν σε μεταβολές στο ρΗ στο καλλιέργεια των μέσων ενημέρωσης.

κύτταρα οστεοσαρκώματος πεθαίνουν με απόπτωση στην Hydro-Εστίαση βιοαντιδραστήρα (HFB)

Δεδομένου ότι μόνο ένα μικρό κλάσμα του οστεοσαρκώματος SAOS-2, καθώς και κύτταρα ΕΟΕ τοποθετείται στο κελί HFB σύστημα καλλιέργειας ανακτήθηκαν μετά από 3 ή 5 ημέρες καλλιέργειας, ελέγξαμε κατά πόσο αυτά τα κύτταρα να εξαλειφθούν από τον αρχικό πληθυσμό προκαλώντας τους να υποστούν απόπτωση. Ως εκ τούτου, σε σύγκριση των ποσοστών των απόπτωση κυττάρων SAOS-2 καλλιεργήθηκαν HFB για 3 και 5 ημέρες για να MACSorted CD133 (+) κύτταρα καλλιεργήθηκαν HFB για 3 και 5 ημέρες.

Για το σκοπό αυτό έχουμε αναλύθηκαν SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργήθηκαν για 3 ημέρες ή 5 ημέρες στον βιοαντιδραστήρα και διαπίστωσε ότι SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργήθηκαν στο HFB για 3 ή 5 ημέρες πεθαίνουν με απόπτωση, όπως φαίνεται με μία δοκιμασία κυτταρομετρίας ροής αννεξίνης-V και προπίδιο ιωδιούχο χρώση των δειγμάτων (Σχήματα 2 Β και D). 24% των κυττάρων βρέθηκαν σε απόπτωση μετά από 3 ημέρες του πολιτισμού στην HFB. Είναι ενδιαφέρον ότι, το κλάσμα των κυττάρων που πεθαίνουν με απόπτωση αυξήθηκε στο 62% μετά από 5 ημέρες καλλιέργειας στο HFB, επιβεβαιώνοντας την αρχική παρατήρηση (Σχήμα 1). Το πιο σημαντικό, τα δείγματα του CD133 (+) MACSorted κύτταρα που αναπτύσσονται στην HFB για 5-ημερών δεν έδειξαν μια τέτοια αύξηση στην απόπτωση με χρώση αννεξίνης V σε σύγκριση με το δείγμα ελέγχου (Σχήμα 2Ε και F). Υπό τις ίδιες συνθήκες καλλιέργειας στην HFB, ο CD133 (+) κύτταρα πολλαπλασιάζονται, ενώ το CD133 (-). Κύτταρα αντί να πεθάνουν με απόπτωση

Α) Annexin-V χρώση των κυττάρων SAOS-2 καλλιεργήθηκαν σε 1-G για 3 ημέρες. Η ανάλυση επιτρέπει να διακρίνουμε στο διάγραμμα μεταξύ των ζωντανών κυττάρων (κάτω αριστερά τεταρτημόριο), πρώιμων αποπτωτικών κυττάρων (κάτω δεξιά τεταρτημόριο), αποπτωτικά κύτταρα (άνω δεξιά τεταρτημόριο), και νεκρωτικές κύτταρα (επάνω αριστερά τεταρτημόριο). Β) Annexin-V χρώση SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργήθηκαν στο HFB για 3 ημέρες. C) Annexin-V χρώση SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργήθηκαν σε 1-G για 5 ημέρες. Δ) Annexin-V χρώση SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργήθηκαν στο HFB για 5 ημέρες. Ε) Annexin-V χρώση του CD133 (+) MACSorted SAOS-2 κύτταρα τα οποία καλλιεργήθηκαν σε 1-G για 5 ημέρες. F) Annexin-V χρώση του CD133 (+) MACSorted SAOS-2 κύτταρα τα οποία καλλιεργήθηκαν HFB για 5 ημέρες. G) Σχετική κασπάσης-3 δραστικότητα των κυττάρων SAOS-2 (συνολικός πληθυσμός) καλλιεργήθηκαν για 5 ημέρες στο HFB σύγκριση με κύτταρα SAOS-2 (συνολικός πληθυσμός) που αναπτύσσονται σε στατική κατάσταση 1G.

Η

Έχουμε ερευνήθηκε επίσης το φαινόμενο αυτό με μέτρηση της δραστικότητας των κασπασών με τη χρήση ενός κιτ χρωματομετρική κασπάσες που μετρά τη δραστηριότητα των κασπασών-3 στα δείγματα. Σύμφωνα με τα δεδομένα που παρουσιάζονται βρήκαμε ότι τα κύτταρα SAOS-2 (συνολικός πληθυσμός) καλλιεργήθηκαν HFB για 5 ημέρες έδειξαν αύξηση του 1,6-φορές στην δραστικότητα των κασπασών-3 ανιχνεύτηκε (Σχήμα 2 G), η οποία είναι ένα μέτρο της αποπτωτικής δείκτη σε αυτά τα κύτταρα.

βλαστικά δείκτη κυττάρων αυξάνει την έκφραση μετά από καλλιέργεια στην Hydro-Εστιάζοντας βιοαντιδραστήρα

Ίσως η πιο ενδιαφέρουσα δυνατότητα που παρέχει η εκ περιτροπής, σύστημα βιοαντιδραστήρα χαμηλής διάτμησης είναι η ευκαιρία να σπουδάσουν , υπό ελεγχόμενες συνθήκες, η αλληλεπίδραση των κυττάρων ενός συγκεκριμένου τύπου ή την αλληλεπίδραση ενός τύπου κυττάρου με ένα άλλο όταν τα κύτταρα σε αιώρηση είναι ελεύθεροι να διαμορφώσουν τις δικές τους οργανώσεις. Θελήσαμε να αναλύσει τα επίπεδα έκφρασης των διαφόρων δεικτών που σχετίζονται με την ανάπτυξη των βλαστικών κυττάρων μεσεγχυματικής προέλευσης. Η έκφραση του CD133, CD34, CD38, οστεοκαλσίνη, Sparc, Sox-9, RunX-2, Stro-1, CD117 /c-Kit, Oct3 /4, ΕηάοβΗη, και Ιντεγκρίνης-SS1 εξετάστηκε με κυτταρομετρία ροής. Το Σχήμα 3Α δείχνει το ποσοστό των φθοριζόντων κυττάρων των διαφόρων δεικτών που εξετάστηκαν σε SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργήθηκαν σε στατική κατάσταση και μετά την καλλιέργεια στην HFB για 5 ημέρες. Τα επίπεδα έκφρασης και ο αριθμός των κυττάρων που εκφράζουν τους δείκτες που εξετάστηκαν αυξήθηκαν μετά 5 ημέρες καλλιέργειας στο δοχείο HFB σε σύγκριση με τα κύτταρα που καλλιεργήθηκαν υπό κανονικές συνθήκες βαρύτητος. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα κύτταρα SAOS-2 αναπτύχθηκαν σε δοχείο HFB έδειξε την υψηλότερη σχετική αύξηση στον αριθμό των κυττάρων που είναι θετικά για Sox-9, CD133, οστεοκαλσίνη, Integrin-SS1, Sparc, RunX-2, και ΕηάοβΗη (94,7%, 89,3% , 82%, 81,8%, 81,3%, 79%, και 76%, αντίστοιχα), σε σύγκριση με SAOS-2 κύτταρα καλλιεργήθηκαν υπό κανονικές συνθήκες σε βαρύτητα. Oct3 /4, CD117, Stro-1, και CD34 έδειξε επίσης μια αύξηση του αριθμού των αριθμού των κυττάρων θετικότητας (75,9%, 67,5%, 47,6%, 22,36%, αντίστοιχα) σύγκριση 1G-ανάπτυξη έναντι κυττάρων SAOS-2 αναπτύχθηκαν σε προσομοιωμένο hypogravity για 5 ημέρες. Βρήκαμε καμία αλλαγή στον αριθμό των CD38 θετικών κυττάρων υπό τις ίδιες συνθήκες. Το πείραμα επαναλήφθηκε 5 φορές με παρόμοια αποτελέσματα και υπολογίστηκαν οι τυπικές αποκλίσεις και αναφέρονται στο διάγραμμα ως ράβδοι σφάλματος. Το Σχήμα 3Β δείχνει ένα παράδειγμα χρώσης ανοσοφθορισμού και θετικότητα των κυττάρων SAOS-2 σε CD133, Sox-9, Sparc, και CD117 /c-Kit μετά την ανάπτυξη σε δοχείο HFB για 5 ημέρες.

Α) Διάγραμμα της τα επίπεδα έκφρασης διαφόρων βιο-δείκτες. Lavender μπάρες δείχνουν το ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν τα βασικά επίπεδα των διαφόρων δεικτών σε γονικά κύτταρα SAOS-2 καλλιεργούνται σε κανονική κατάσταση βάρος 1-G (έλεγχος). Purple μπάρες δείχνουν το ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν τους διάφορους δείκτες σε CD133 (+) MACSorted κύτταρα SAOS-2 που απομονώθηκαν από γονικά κύτταρα SAOS-2 καλλιεργούνται σε κανονική κατάσταση βάρος 1-G. Κίτρινο μπάρες δείχνουν το ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν τους διάφορους δείκτες σε CD133 (+) MACSorted SAOS-2 κύτταρα που καλλιεργήθηκαν σε κατάσταση hypogravity. Φως μπλε γραμμές δείχνουν το ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν τους διάφορους δείκτες σε γονικά κύτταρα SAOS-2, που καλλιεργήθηκαν σε κατάσταση hypogravity για 5 ημέρες, με αποτέλεσμα ένα πληθυσμό επιλέγονται και πολλαπλασιάστηκαν CD133 (+) κύτταρα SAOS-2. Β) χρώση ανοσοφθορισμού (40 φορές) και θετικότητα των κυττάρων SAOS-2 σε CD133, Sox-9, SPARC, και CD117 /c-Kit μετά την ανάπτυξη σε βιοαντιδραστήρα για 5 ημέρες.

Η

CD133 (+) κύτταρα αναπτύσσονται σε τρεις διαστάσεις στο Hydro-Εστιάζοντας βιοαντιδραστήρα και τη μορφή σφαιρών

το SAOS-2 CD133 (+) εμπλουτισμένο με κύτταρα οστεοσαρκώματος πολλαπλασιάζονται και να συγκεντρώσει σε τρεις διαστάσεις όπως sarcospheres μετά από 3 ημέρες καλλιέργειας στο βιοαντιδραστήρα , το οποίο είναι ένα ακόμη χαρακτηριστικό της ανάπτυξης αρχέγονων κυττάρων. Τα σχήματα 4 Α και Β δείχνουν στις 10 και 40 × μεγέθυνση εξουσία, αντίστοιχα, οι sarcospheres που καλλιεργούνται σε βιοαντιδραστήρα μετά από 3 ημέρες καλλιέργειας σε προσομοίωση hypogravity. Είναι ενδιαφέρον ότι η CD133 (+) SAOS-2 κύτταρα που αναπτύχθηκαν σε προσομοιωμένο hypogravity ήταν σε θέση να αποκαταστήσει την γονική κυτταρική γραμμή (που αποτελείται από περίπου 10% ± 6,8 CD133 (+) κύτταρα και 90% ± 6,8 CD133 (-) κύτταρα ) μετά από μια περίοδο μιας εβδομάδας, όταν εμφυτεύτηκαν σε θεραπεία δίσκους καλλιέργειας, τα οποία επιτρέπουν κύτταρα προσκολλημένα να επισυνάψετε στο πλαστικό περιβάλλον. Το Σχήμα 4 Γ και Δ (10 × 40 × και, αντίστοιχα) δείχνουν την CD133 (+) κύτταρα πολλαπλασιάστηκαν και επιλέγονται με την HFB που στη συνέχεια αναπτύχθηκαν σε προσάρτηση πιάτα ιστοκαλλιέργειας SAOS-2. Στην ανασύσταση της κυτταρικής καλλιέργειας και μερικοί όχι και προσκολλημένων κυττάρων ήταν εμφανής? αυτά θα μπορούσαν να είναι τα βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν επίσης γνωστή ως καρκινικά βλαστικά κύτταρα.

Α) HFB καλλιεργούνται οστεοσάρκωμα Saos-2 κύτταρα (CD133 +) είναι σε θέση να πολλαπλασιάζονται και να συναρμολογεί τρισδιάστατα ως sarcosheres μετά από 3 ημέρες καλλιέργειας σε το βιοαντιδραστήρα (μεγέθυνση 10x). Β) HFB καλλιεργούνται κύτταρα SAOS-2 οστεοσαρκώματος (CD133 +) είναι σε θέση να πολλαπλασιάζονται και να συγκεντρωθούν σε τρεις διαστάσεις όπως sarcosheres μετά από 3 ημέρες καλλιέργειας σε βιοαντιδραστήρα (40 × μεγέθυνση). Γ) HFB καλλιεργούνται κύτταρα SAOS-2 οστεοσαρκώματος (CD133 +) σπάρθηκαν σε ακτινοβολημένα πλαστικό πιάτο καλλιέργειας, την ανασύσταση της κανονικής συνημμένο φαινότυπος των γονικών κυττάρων SAOS-2 μετά από μία εβδομάδα καλλιέργειας (10 χ μεγέθυνση). Τα βέλη επισημαίνουν CD133 (+) κύτταρα SAOS-2 που δείχνει ένα στρογγυλεμένο και ασθενώς προσάρτηση φαινότυπο. Δ) HFB καλλιεργούνται κύτταρα SAOS-2 οστεοσαρκώματος (CD133 +) σπάρθηκαν σε ακτινοβολημένα πλαστικό πιάτο καλλιέργειας, την ανασύσταση της κανονικής συνημμένο φαινότυπος των γονικών κυττάρων SAOS-2 μετά από μία εβδομάδα καλλιέργειας (40 χ μεγέθυνση). Arrow σημεία στα κύτταρα SAOS-2 CD133 (+) δείχνει ένα στρογγυλεμένο και ασθενώς συνδέονται φαινότυπο.

Η

Είναι γνωστό ότι τα βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν να αποτελούν τις σφαίρες των κυττάρων, όταν καλλιεργούνται σε εξαιρετικά πιάτα με χαμηλό προσάρτηση. Συνεπώς εξετάσαμε την ικανότητα του CD133 (+) SAOS-2-MAC ταξινομημένα κύτταρα να σχηματίσουν συστάδες κυττάρων αν τοποθετηθεί σε εξαιρετικά πιάτα χαμηλής προσάρτηση. Η ικανότητά τους να σχηματίζουν συμπλέγματα ήταν λιγότερο αποτελεσματική σε σύγκριση με εκείνα τα κύτταρα που έχουν καλλιεργηθεί σε βιοαντιδραστήρα hydrofocusing, αλλά ήταν ακόμα σε θέση να σχηματίσουν σφαίρες. Το Σχήμα 5 Α και Β δείχνουν σφαίρες σχηματίζονται από CD133 (+) κύτταρα σε εξαιρετικά πιάτα χαμηλής προσάρτηση SAOS-2. Ελέγξαμε επίσης την ικανότητα του SAOS-2 CD133 (+) MACSorted και εμπλουτισμένα κύτταρα να προσκολληθούν σε δίσκους καλλιέργειας ιστού και να ανασυστήσει την γονική κυτταρική γραμμή SAOS-2. Όπως αναμενόταν, η MACSorted CD133 (+) εμπλουτισμένο κύτταρα τοποθετούνται σε προσάρτηση δίσκους καλλιέργειας ιστού αφού καλλιεργήθηκαν σε εξαιρετικά πιάτα χαμηλής προσάρτηση για δύο εβδομάδες, ανασυσταθέν τη γονική κυτταρική γραμμή SAOS-2 μετά από μία εβδομάδα καλλιέργειας με προσάρτηση στο πιάτο, εκδηλώνεται ένα πεπλατυσμένο και διαφοροποιημένο φαινότυπο πάροδο του χρόνου. Σχήμα 5C και D δείχνει προσκολλημένα κύτταρα SAOS-2 που προέρχεται από CD133 (+) MACSorted κύτταρα αναπτύσσονται σε προσκολλητικά τρυβλία καλλιέργειας ιστού. Το σχήμα 5 Ε δείχνει την κυτταρική γραμμή SAOS-2 ανασυστάθηκε μετά από 10-ημερών από τον εμβολιασμό του CD133 (+) εμπλουτισμένο κύτταρα σε προσκόλληση πιάτα καλλιέργειας ιστού.

Α) MACSorted CD133 (+) κύτταρα SAOS-2 συναρμολόγηση τριών διαστάσεις όπως sarcosheres μετά από 2 εβδομάδες καλλιέργειας σε εξαιρετικά πιάτα με χαμηλό προσάρτηση (20 × μεγέθυνση). Β) Ένα άλλο παράδειγμα MACSorted CD133 (+) SAOS-2 κύτταρα που σχηματίζουν Sarco-σφαίρες μετά από 2 εβδομάδες καλλιέργειας σε εξαιρετικά πιάτα με χαμηλό προσάρτηση (10 × μεγέθυνση). κύτταρα C) οστεοσάρκωμα Saos-2 που προκύπτει από τρισδιάστατη καλλιέργειες που αναπτύσσονται σε εξαιρετικά πιάτα χαμηλής προσάρτηση σπάρθηκαν σε προσάρτηση πιάτα παρουσιάζουν μια προσκολλημένη διαφοροποιημένο φαινότυπο μετά από 3 ημέρες. κύτταρα D) οστεοσάρκωμα Saos-2 που προκύπτει από τρισδιάστατη καλλιέργειες που αναπτύσσονται σε εξαιρετικά πιάτα χαμηλής προσάρτηση σπάρθηκαν σε προσάρτηση πιάτα παρουσιάζουν μια προσκολλημένη διαφοροποιημένο φαινότυπο μετά από 5 ημέρες. Ε) SAOS 2-κύτταρα οστεοσαρκώματος που απορρέουν από τρισδιάστατες καλλιέργειες που αναπτύσσονται σε εξαιρετικά πιάτα με χαμηλό προσάρτηση σπέρνονται σε προσάρτηση πιάτα παρουσιάζουν μια προσκολλημένη και διαφοροποιημένο φαινότυπο μετά από 10 ημέρες.

Η

Μια πρόσθετη ένδειξη ότι δύο διακριτούς πληθυσμούς είναι αναγνωρίσιμες στην κυτταρική γραμμή SAOS-2 είναι η απόδειξη ότι CD133 (+) MACSorted κύτταρα SAOS-2 έχουν ενισχυμένη ικανότητα να αναπτύσσονται σε μαλακό άγαρ, σε σύγκριση με τα γονικά κύτταρα. Τα κύτταρα τοποθετήθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων που εκτελεί 6 επαναλήψεις της κάθε πειραματικό σημείο. Ίδιος αριθμός των κυττάρων SAOS-2 και των κυττάρων SAOS-2 CD133 (+) (5 × 10

3 κύτταρα /φρεάτιο) σπάρθηκαν σε 6 αντίγραφα σε ένα πιάτο έξι φρεατίων. Η αποτελεσματικότητα του CD133 (+) κύτταρα SAOS-2 να αναπτύσσονται σε μαλακό άγαρ και να συγκεντρωθούν σε τρισδιάστατες δομές είναι πολύ υψηλότερο από αυτό των γονικών κυττάρων SAOS-2. Έξι εκατόν σαράντα ± 240 αποικίες μετρήθηκαν από το μαλακό άγαρ πιάτα 6 φρεατίων εμβολιάστηκε με το CD133 (+) SAOS-2 εμπλουτισμένα κύτταρα σε σύγκριση με μόνο 20 ± 12 αποικίες καταμετρώνται από το μαλακό άγαρ πιάτα εμβολιάστηκε με το CD133 (- ) κύτταρα SAOS-2. Είναι ενδιαφέρον, 120 ± 80 αποικίες μετρήθηκαν από το μαλακό άγαρ πιάτα σπέρνεται με τα γονικά κύτταρα SAOS-2, υποδηλώνοντας ότι η ικανότητα σχηματισμού αποικιών σε μαλακό άγαρ μπορεί να οφείλεται στην παρουσία ενός κλάσματος (με συνέπεια, περίπου 10% ± 6.8) των βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν εντός της κυτταρικής γραμμής SAOS-2 έχουμε στο εργαστήριο μας (Πίνακας 3). Το Σχήμα 6 δείχνει ένα παράδειγμα ενός προσδιορισμού μαλακού άγαρ διεξήχθη με τη γονική κυτταρική γραμμή όγκου (Σχήμα 6Α) ή με το CD133 (+) εμπλουτισμένο κλάσμα κυττάρων SAOS-2 (Σχήμα 6Β). Τα γονικά κύτταρα SAOS-2 σχηματίζονται σφαίρες, αλλά με πολύ χαμηλή απόδοση σε σύγκριση με το εμπλουτισμένο CD133 (+) κυττάρων.

Α) μικροσκοπία φάσης αντίθεσης ενός μαλακού άγαρ δοκιμασίας των γονικών κυττάρων SAOS-2. Β) μικροσκοπία φάσης αντίθεσης ενός μαλακού δοκιμασίας άγαρ HFB CD133 (+) πολλαπλασιάστηκαν κύτταρα SAOS-2. Γ) προπίδιο ροής ιωδιούχο ανάλυση κυτταρομετρίας του SAOS-2 κύτταρα αναπτύχθηκαν σε 1-G καλλιέργεια ταξινομούνται κατά την θέση τους CD133 που δείχνει δύο διακριτές πληθυσμούς: ο CD133 (+) και CD133 (-) κύτταρα με ένα διαφορετικό προφίλ κυτταρικού κύκλου. Δ) Immunophenotype κυττάρων SAOS-2 αναπτύχθηκαν σε 1-G έναντι HFB καλλιέργειας που δείχνει ότι τα κύτταρα SAOS-2 αναπτύχθηκαν για 5 ημέρες σε προσομοιωμένο hypogravity περιέχουν την πλειονότητα των κυττάρων χρωματίστηκαν για Κί-67 και ως εκ τούτου στη φάση S του κυτταρικού κύκλου

η

Περαιτέρω ενδείξεις ότι υπάρχουν δύο διακριτές πληθυσμούς στην κυτταρική σειρά SAOS-2, το οποίο φαίνεται να αποτελείται από CD133 (+) και. (-) κύτταρα, είναι ότι αυτά δύο διαφορετικούς πληθυσμούς έχουν ένα διακριτό προφίλ κυτταρικού κύκλου. Πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των κυττάρων SAOS-2 αναπτύχθηκαν σε καλλιέργεια 1G και διαπίστωσε ότι SAOS-2 CD133 (+) κύτταρα, τα οποία ταξινομούνται κατά το καθεστώς τους CD133 και χρωματίστηκαν με ιωδιούχο προπίδιο, είχε ένα διαφορετικό προφίλ κυτταρικού κύκλου σε σχέση με το CD133 (+) του πληθυσμού. Το Σχήμα 6C δείχνει μία αντιπροσωπευτική δοκιμασία κυτταρομετρίας ροής των κυττάρων SAOS-2 που αποδεικνύει ότι το CD133 (-) SAOS-2 πληθυσμός είχε 13,8% των κυττάρων στο G2 /M φάση του κυτταρικού κύκλου, ενώ τα κύτταρα CD133 (+) έδειξε αυξημένη κλάσμα (49%) των κυττάρων στην φάση G2 /M του κυτταρικού κύκλου. Συγκρίσιμα αποτελέσματα ελήφθησαν παράλληλα και επανειλημμένα πειράματα.

Είναι ενδιαφέρον ότι, SAOS-2 κύτταρα αναπτύσσονται στον βιοαντιδραστήρα για 5 ημέρες και βάφτηκαν με ένα αντι-CD133 (Miltenyi, Γερμανία) και τον δείκτη πολλαπλασιασμού αντι-Ki-67 κατέδειξε αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε σύγκριση με τα κύτταρα SAOS-2 αναπτύχθηκαν σε καλλιέργειες 1G. Το Σχήμα 6D δεικνύει ένα αντιπροσωπευτικό κυτταρομετρία ροής δοκιμασίας κυττάρων SAOS-2 αποδεικνύουν ότι τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν στο HFB πολλαπλασιάζονται με διαφορετικό ρυθμό από το συνολικό πληθυσμό κυττάρων SAOS-2. Στην πραγματικότητα, το κλάσμα του CD133 κύτταρα SAOS-2 (+), τα οποία είναι επίσης θετικές για Ki-67, αυξήθηκε από 14,27% σε 53,98% συγκρίνοντας τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε 1G-ανάπτυξης έναντι αυτών των κυττάρων που καλλιεργήθηκαν για 5 ημέρες σε HFB προσομοιωμένη κατάσταση hypogravity , αντίστοιχα. Συγκρίσιμα αποτελέσματα ελήφθησαν παράλληλα και επανέλαβε τα πειράματα.

Εικονικές hypogravity ενισχύει την απόπτωση και ευαισθητοποιεί καρκινικά βλαστικά κύτταρα στη χημειοθεραπεία

Τα ΚΕΠ πιστεύεται ότι είναι υπεύθυνη για την έναρξη και τη διατήρηση της νόσου. Ορισμένοι τύποι όγκων είναι ιδιαίτερα ανθεκτικά στην χημειοθεραπεία και σε άλλες μορφές θεραπείας.