Αφηρημένο

Micro RNAs (miRNAs) ρυθμίζουν την έκφραση των γονιδίων στόχων μετα-μεταγραφικά από την αντιστοίχιση ατελώς με mRNA σε μια αλληλουχία-ειδικό τρόπο. Περίπου το 30% των ανθρώπινων γονιδίων ρυθμίζονται από miRNAs, και ένα ενιαίο miRNA είναι ικανό να μειώνει την παραγωγή εκατοντάδων πρωτεϊνών μέσω ατελούς ζευγαρώματος κατά τη δέσμευση miRNA-mRNA. Τον τελευταίο καιρό, τα αποδεικτικά στοιχεία που εμπλέκουν miRNAs στην ανάπτυξη των καρκίνων του πνεύμονα έχει αναδυόμενες. Ειδικότερα, miR-19a, η οποία εκφράζεται δυναμικά σε κακοήθη καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα, θεωρείται το κλειδί miRNA για ογκογένεση. Ωστόσο, άμεσοι στόχοι της παραμένουν λιγότερο δημοσιοποιημένες. Στην παρούσα μελέτη, επικεντρώθηκε σε έξι πιθανών γονιδίων στόχων miR-19a επιλέγονται από miRNA λογισμικό πρόβλεψης στόχου. Να αξιολογήσει αυτά τα γονίδια ως άμεσο στόχο τα γονίδια miR-19a, πραγματοποιήσαμε λουσιφεράσης, pull-down και αναλύσεις κηλίδας western. Η δραστικότητα λουσιφεράσης των πλασμιδίων με κάθε τοποθεσία miR-19a-πρόσδεσης παρατηρήθηκε να μειώνεται, ενώ αυξημένη δραστικότητα λουσιφεράσης παρατηρήθηκε με την παρουσία του αντι-miR-19a κλειδωμένο νουκλεϊκό οξύ (LNA). Ο προσδιορισμός pull-down έδειξε βιοτινυλιωμένου miR-19a να δεσμεύεται με πρωτεΐνη ago2 και σε τέσσερις από έξι πιθανών mRNAs στόχο. Η ανάλυση στυπώματος Western έδειξε ότι τα επίπεδα έκφρασης των τεσσάρων γονιδίων αλλάζει, ανάλογα με τη θεραπεία με miR-19a μιμούνται ή αντι-miR-19a-LNA. Τέλος,

FOXP1

,

TP53INP1

,

TNFAIP3

, και

TUSC2

αναγνωρίστηκαν ως στόχοι miR-19a. Για να εξεταστεί η λειτουργία αυτών των τεσσάρων γονιδίων στόχων σε κύτταρα καρκίνου του πνεύμονα, LK79 (η οποία έχει υψηλή έκφραση miR-19a) και Α549 (το οποίο έχει χαμηλή έκφραση miR-19a) χρησιμοποιήθηκαν. Η έκφραση των τεσσάρων πρωτεϊνών στόχων ήταν υψηλότερη σε σχέση με το Α549 LK79 κύτταρα. Οι φορείς τέσσερα miR-19a έκφρασης cDNA στόχο κατέστειλε τη βιωσιμότητα των κυττάρων, σχηματισμό αποικιών, τη μετανάστευση και την εισβολή των Α549 και κύτταρα LK79, αλλά τα κύτταρα LK79 επιμολυσμένα με

FOXP1

και

TP53INP1

cDNA που έδειξε καμία διαφορά σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου στη δοκιμασία εισβολής

Παράθεση:. Yamamoto K, Ito S, Hanafusa η, Shimizu K, Ouchida Μ (2015) Αποκάλυψη άμεσους στόχους της MiR-19α συμμετέχει στο Καρκίνο του πνεύμονα εξέλιξη. PLoS ONE 10 (9): e0137887. doi: 10.1371 /journal.pone.0137887

Επιμέλεια: Partha Mukhopadhyay, National Institutes of Health, Ηνωμένες Πολιτείες