Αφηρημένο

Ιστορικό

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι λιγότερο διαφοροποιημένα κύτταρα Τ είναι ιδανικά για θετή θεραπεία Τ κυτταρική μεταφορά (ACT) και ότι CH296 φιμπρονεκτίνη (FN-CH296) μαζί με αντι-CD3 οδήγησε σε καλλιεργημένα κύτταρα τα οποία περιέχουν υψηλότερες ποσότητες λιγότερο διαφοροποιημένα κύτταρα Τ. Σε αυτή τη φάση Ι των κλινικών δοκιμών, χτίζουμε σε αυτά πριν τα αποτελέσματα από την αξιολόγηση της ασφάλειας και της αποτελεσματικότητας του FN-CH296 διεγείρονται θεραπείας Τ-λεμφοκυττάρων σε ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο.

Μέθοδοι

Οι ασθενείς που υποβλήθηκαν σε φιμπρονεκτίνης CH296 αξιολογήθηκαν διεγερμένων θεραπεία κυττάρων Τ έως έξι φορές κάθε δύο εβδομάδες και η δραστηριότητα ασφάλεια και κατά του όγκου του ACT. Προκειμένου να προσδιοριστεί λειτουργία του ανοσοποιητικού, τα επίπεδα ολόκληρη κυτοκινών στο αίμα και τον αριθμό των περιφερειακών ρυθμιστικά Τ κύτταρα αναλύθηκαν πριν από την ACT και κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης.

Αποτελέσματα

Μεταφέρθηκε κυττάρων που περιέχονται πολυάριθμα λιγότερο διαφοροποιημένα Τ κύτταρα που αντιπροσωπεύεται σε μεγάλο βαθμό από CD27 + CD45RA + ή CD28 + CD45RA + κυττάρων, τα οποία αντιπροσωπεύουν περίπου το 65% και το 70% του συνόλου, αντίστοιχα. Δεν παρατηρήθηκαν ACT που σχετίζονται με σοβαρή ή απροσδόκητη τοξικότητα. Το ποσοστό ανταπόκρισης μεταξύ των ασθενών ήταν 22,2% και το ποσοστό ελέγχου της νόσου ήταν 66,7%.

Συμπεράσματα

Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται σε αυτή τη δοκιμή φάσης Ι, δείχνουν ότι η FN-CH296 διεγείρονται θεραπεία Τ κυττάρων ήταν πολύ καλά ανεκτή με ένα επίπεδο αποτελεσματικότητας που είναι αρκετά ελπιδοφόρα. Μπορούμε επίσης να υποθέσουμε ότι η επέκταση των κυττάρων Τ χρησιμοποιώντας CH296 είναι μια μέθοδος που μπορεί να εφαρμοστεί και σε άλλες Τ κυτταρικές θεραπείες που βασίζονται

Δίκη ΕΓΓΡΑΦΕΣ

Umin UMIN000001835

Παράθεση:. Ishikawa Τ, Kokura S, Enoki Τ, Sakamoto Ν, Okayama Τ, Ideno M, et al. (2014) κλινική δοκιμή Φάσης Ι των κυττάρων Θεραπεία Ινωδονεκτίνης CH296-διεγερμένα Τ σε ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο. PLoS ONE 9 (1): e83786. doi: 10.1371 /journal.pone.0083786

Συντάκτης: William C. S. Cho, Queen Elizabeth Hospital, το Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 14, Ιουλίου 2013? Αποδεκτές: 5 Νοέμ 2013? Δημοσιεύθηκε: 31 Ιαν, 2014

Copyright: © 2014 Ishikawa et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε μερικώς από JSPs KAKENHI Grant Αριθμός 23590891. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου. Καμία πρόσθετη εξωτερική χρηματοδότηση που έλαβε για την παρούσα μελέτη

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Τακέσι Ishikawa, Satoshi Kokura, Tetsuya Okayama, και Τοσικάζου Yoshikawa έχουν μια συνεργασία με μια δωρεά που χρηματοδοτούνται από το τμήμα από το TAKARA ΒΙΟ Inc. Αυτό δεν αλλάζει τους συντάκτες «τήρηση όλων των PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Η θετή μεταφορά κυττάρων Τ (ACT) είναι σήμερα μία από τις λίγες ανοσοθεραπεία που μπορεί να προκαλέσει αντικειμενικά κλινικές αποκρίσεις σε σημαντική αριθμός ασθενών με μεταστατικό στερεούς όγκους [1]. Οι εγγενείς ιδιότητες του πληθυσμού ACT, ιδιαίτερα την κατάσταση της διαφοροποίησης, λέγεται ότι είναι ζωτικής σημασίας για την επιτυχία των προσεγγίσεων ACT-βάση [2] – [5]. Λιγότερο διαφοροποιημένα κύτταρα Τ έχουν υψηλότερη πολλαπλασιαστικό δυναμικό και είναι λιγότερο επιρρεπείς σε απόπτωση από περισσότερο διαφοροποιημένα κύτταρα. Λιγότερο διαφοροποιημένα κύτταρα Τ εκφράζουν υποδοχείς, όπως η IL-7 υποδοχέα α-αλυσίδας (IL-7Rα), ως εκ τούτου αυτά τα κύτταρα έχουν το δυναμικό να πολλαπλασιάζονται και να ενεργοποιούνται πλήρως σε απόκριση ομοιοστατική κυτοκίνες όπως η IL-7 [6]. Τα αποτελέσματα από προηγούμενη κλινικές μελέτες κατέδειξαν μία σημαντική συσχέτιση μεταξύ υποχώρηση του όγκου και το ποσοστό της επίμονης ACT μεταφέρεται κυττάρων στο περιφερικό αίμα [3], [7]. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η επιμονή και πολλαπλασιαστικό δυναμικό των Τ κυττάρων μεταφέρεται παίζουν ένα ρόλο στην κλινική απόκριση και ότι λιγότερο διαχωριζόμενες Τ κύτταρα είναι ιδανικά για θεραπεία μεταφοράς ACT. Χρησιμοποιώντας ένα πρότυπο πρωτόκολλο ταχεία επέκταση, τα κύτταρα Τ για ACT συνήθως επεκταθεί με μια υψηλή δόση της IL-2 και CD3-ειδικό αντίσωμα για περίπου 2 εβδομάδες. Τ κύτταρα χρησιμοποιώντας αυτό το πρωτόκολλο να προκαλέσει προοδευτική διαφοροποίηση των Τ κυττάρων προς μια κατάσταση τελεστή αργά. Ωστόσο, αν και η IL-2 είναι ουσιώδης για την εμμονή και την ανάπτυξη των Τ κυττάρων έχει επίσης ανεπιθύμητες ιδιότητες, όπως η ικανότητά της να προάγει την τελική διαφοροποίηση των κυττάρων Τ [8]. Ως αποτέλεσμα, τα υλικά που χρησιμοποιούνται επί του παρόντος η διαδικασία οδηγεί σε φαινοτυπικές και λειτουργικές αλλαγές των κυττάρων Τ που τα καθιστούν λιγότερο βέλτιστες για μεσολάβηση κατά του όγκου αποκρίσεις in vivo. Υπό το πρίσμα αυτό, την ανάπτυξη νέων μεθόδων για τη λήψη λιγότερο διαφοροποιημένα κύτταρα Τ είναι αποφασιστικής σημασίας για τη βελτίωση ρεύματος με βάση τα κύτταρα Τ θεραπείες έτσι ώστε οι ασθενείς μπορεί να αναπτύξουν μια μακράς διαρκείας θετική ανοσολογική απόκριση.

Έχει αναφερθεί ότι φιμπρονεκτίνη (FN), μία σημαντική πρωτεΐνη εξωκυτταρικής μήτρας, λειτουργεί όχι μόνο ως μόριο προσκόλλησης αλλά και ως επαγωγέας σήματος μέσω σύνδεσης προς ιντεγκρίνες που εκφράζονται στα Τ κύτταρα [9], [10]. FN δρα μαζί με αντι-CD3 για να επάγει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Τ, η οποία πιστεύεται ότι εξαρτάται από ιντεγκρίνη πολύ αργά ενεργοποίηση αντιγόνου 4 (VLA-4) /CS1 αλληλεπιδράσεις [11], [12]. Κλάσμα ανασυνδυασμένης ανθρώπινης φιμπρονεκτίνης (FN-CH296, RetroNectin) έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για ρετροϊική γονιδιακή θεραπεία για την ενίσχυση της αποτελεσματικότητας της μεταφοράς γονιδίου. FN-CH296 αναφέρθηκε επίσης να είναι σε θέση να διεγείρουν περιφερικού αίματος ανάπτυξης Τ κυττάρων in vitro όταν χρησιμοποιούνται μαζί με αντι-CD3 και IL-2. Αντι-CD3 /IL-2 /FN-CH296-διεγερμένα Τ κύτταρα περιείχαν μια υψηλότερη ποσότητα μικρότερη διαχωριζόμενες Τ κυττάρων και in vivo επιμονή αυτών των κυττάρων ήταν σημαντικά υψηλότερη από κύτταρα διεγερμένα με άλλες μεθόδους [13]. Αυτές οι παρατηρήσεις μας οδήγησαν να εφαρμόσει FN-CH296-διαμεσολαβούμενη διέγερση του σε λιγότερο διαφοροποιημένο φαινότυπο Τ κυττάρων να παράγουν «fit κύτταρα Τ» [2], [14], που είναι ιδανικά για ACT. Με τον τρόπο αυτό, προχωρήσαμε στην αξιολόγηση της ασφάλειας και της αποτελεσματικότητας του FN-CH296-διεγείρονται θεραπείας των Τ κυττάρων σε ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο.

Μέθοδοι

Το πρωτόκολλο για αυτή τη δοκιμή και την υποστήριξη κατάλογος TREND είναι διαθέσιμο ως υποστηρικτικές πληροφορίες? βλέπε Λίστα ελέγχου S1 και το πρωτόκολλο S1.

Μελέτη

Το κλινικό πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Κιότο Νομαρχιακό Πανεπιστήμιο Ιατρικής και διεξήχθη σύμφωνα με την Διακήρυξη του Ελσίνκι και τους ηθικούς κανόνες για την Clinical Research (το Υπουργείο Υγείας, Εργασίας και Πρόνοιας, Ιαπωνία). Ο πρωταρχικός στόχος αυτής της φάσης Ι κλινική δοκιμή ήταν να αξιολογηθούν τα προφίλ ασφάλειας και δυσμενείς περίπτωση FN-CH296-διεγερμένα θεραπεία Τ κυττάρων σε ασθενείς με προχωρημένο καρκίνο. δευτερεύων στόχος μας ήταν να αξιολογηθεί η αντικαρκινική δράση της θεραπείας ACT. Η μελέτη αυτή διεξήχθη ως πρότυπο 3 + 3 σχεδιασμός φάσης Ι που διερεύνησε τη δόση τοξικότητα που περιορίζει (ΔΛΤΣ) που συμβαίνουν κατά τη διάρκεια μιας περιόδου 28 ημερών μετά τη δεύτερη έγχυση των καλλιεργημένων λεμφοκυττάρων. DLT ορίστηκε ως βαθμού ≥3 για οποιαδήποτε ανεπιθύμητη ενέργεια που σχετίζονται με την έγχυση των καλλιεργημένων κυττάρων. Χρησιμοποιήσαμε την επιτάχυνση του σχεδιασμού τιτλοδότηση για την αξιολόγηση της ασφάλειας του αριθμού των θετών λεμφοκυττάρων σε 1 × 10

9 (ομάδα 1), 3 × 10

9 (ομάδα 2), και 9 × 10

9 ( ομάδα 3) ανά άτομο. Εάν δεν παρατηρήθηκαν ΔΛΤΣ στην πρώτη ομάδα ασθενών, μια δεύτερη ομάδα από 3 ασθενείς υποβλήθηκαν σε αγωγή στην επόμενη υψηλότερη δόση. Αν παρατηρήθηκε DLT σε τουλάχιστον έναν ασθενή, ο ομάδα επεκτάθηκε σε 6 ασθενείς. Αν ≥2 ΔΛΤΣ σημειώθηκαν στην αρχική ή διευρυμένη ομάδα, καμία περαιτέρω κλιμακώσεις δόσης πραγματοποιήθηκαν και η μέγιστη ανεκτή δόση (MTD) θεωρήθηκε ότι έχουν ξεπεραστεί. Δεν υπήρχε μεταξύ των ασθενών κλιμάκωση δόσης σε αυτή τη μελέτη.

Γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς. Αυτή η μελέτη είναι εγγεγραμμένη στο Μητρώο Umin κλινικές δοκιμές με το UMIN000001835 αναγνωριστικό

Ασθενείς

Οι ασθενείς που συμμετείχαν στη μελέτη αυτή πληρούνται τα ακόλουθα κριτήρια επιλεξιμότητας:. Ιστολογικά ή κυτταρολογικά επιβεβαιωθεί καρκίνο του οισοφάγου, καρκίνο του στομάχου, του παχέος εντέρου καρκίνο, καρκίνο του παγκρέατος, καρκίνο χοληφόρου οδού ή μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα? υπολειμματικής νόσου μετά τη συνήθη θεραπεία χωρίς άλλες επιλογές θεραπευτική αγωγή διαθέσιμα? δεν σχεδιάζει να λάβει χημειοθεραπεία άλλο από του στόματος προφαρμάκων φθοριοουρακίλη, ακτινοθεραπεία ή τροποποιητές της βιολογικής απόκρισης? μεταξύ 20 έως 80 ετών? μια κατάσταση Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) την εκτέλεση των 2 ή λιγότερο? ένα προσδόκιμο ζωής τουλάχιστον τριών μηνών? τουλάχιστον τέσσερις εβδομάδες από την τελευταία χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία? . Και επαρκή αιματολογική, ηπατική, νεφρική και καρδιακή λειτουργία

Ο αποκλεισμός κριτήρια ήταν τα εξής: η παρουσία της ανεξέλεγκτης μόλυνσης? ένα ιστορικό αυτοάνοσης νόσου ή σοβαρή υπερευαισθησία, παρουσία σοβαρές επιπλοκές, όπως η ασταθής στηθάγχη ή έμφραγμα του μυοκαρδίου εντός έξι μηνών από την έναρξη του καρκίνου, διάμεση πνευμονία ή πνευμονική ίνωση με ακτινολογικά ευρήματα, παρουσία σημειώνονται ασκίτη ή υπεζωκοτική συλλογή, ειλεός, ενεργό άλλη κακοήθεια , σοβαρή ψυχική βλάβη, εγκυμοσύνη ή γαλουχία, και το ιατρικό ιστορικό σοβαρής υπερευαισθησίας.

Προετοιμασία των FN-CH296-διεγερμένα Τ κύτταρα

περιφερικού αίματος (50-70 ml) λήφθηκε από ασθενείς με καρκίνο. Μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) διαχωρίστηκαν με τη χρήση Ficoll-Paque PREMIUM (GE Healthcare, Tokyo, Japan). Στη συνέχεια, 3-8 × 10

7 κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε μέσο καλλιέργειας σε μια τσάντα CultiLife215 (Takara Bio, Otsu, Japan) που είχε προ-επικαλυφθεί με αμφότερα τα αντι-CD3 και FN-CH296 (RetroNectin®, Takara Bio), το οποίο είναι ένα ανασυνδυασμένο θραύσμα της ανθρώπινης ινονηκτίνης. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μέσο άνευ ορού, GT-T551 (Takara Bio), η οποία συμπληρώθηκε με 0,6-1,2% θερμο-απενεργοποιημένο αυτόλογο πλάσμα και 200 ​​U /mL ανασυνδυασμένης IL-2 (Proleukin? NovartisPharma, Nürnberg, Germany) . Την ημέρα 4, τα κύτταρα μεταφέρθηκαν σε ένα σάκο CultiLife Eva (Takara Bio), και μέσον GT-T551 που συμπληρώθηκε με 0,6-1,2% θερμο-απενεργοποιημένο αυτόλογο πλάσμα και προστέθηκαν 200 U /ml IL-2. Την ημέρα 7, προστέθηκε μέσον GT-T551 περιέχει 200 ​​U /ml IL-2. Την ημέρα 10, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε 50-90 κ.εκ. κρυοσυντηρημένων διαλύματος που αποτελείται από CP-1 (Kyokutou Seiyaku, Tokyo, Japan), ΡΡΜΙ1640 (KOHJIN ΒΙΟ, Sakado, Japan) και αλβουμίνη ανθρώπινου ορού (Albuminar? CSL Behring, ΡΑ, USA) για να δημιουργήσει το τελικό προϊόν των κυττάρων. Προκειμένου να επιτύχει τον καθορισμένο αριθμό των θετών λεμφοκυττάρων, οι ασθενείς σε ομάδες 1 και 2 απαιτείται μια κουλτούρα one-time λεμφοκυττάρων, και οι ασθενείς στην ομάδα 3 χρειάζονται τρεις καλλιέργειες λεμφοκυττάρων. . Καλλιεργημένα λεμφοκύτταρα καταψύχθηκαν και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι το χρόνο της μετάγγισης

Πριν την έγχυση των ασθενών, κύτταρο προϊόντα αξιολογήθηκαν για ) και το ποσοστό ελέγχου της ασθένειας (DCR? CR + PR + SD) ήταν 66,7% (95% CI 29,9 – 92,5%)

ανοσολογική παρακολούθηση

Για να προσδιορίσετε τις ανοσολογικές αντιδράσεις σε ασθενείς που λαμβάνουν μυθιστόρημα ACT, αναλύσεις ολόκληρη κυτοκινών στο αίμα και περιφερειακών ανάλυση Treg, η οποία θα μπορούσε να είναι χρήσιμο στην ανοσολογική παρακολούθηση [18] – [20], έγιναν χρησιμοποιώντας φλεβικό αίμα που λαμβάνεται από τους ασθενείς. Δεν υπήρξε καμία αξιοσημείωτη αλλαγή στα επίπεδα κυτοκινών ολόκληρο αίμα (Σχήμα 4Α.) σε ασθενείς μετά εγχύθηκαν με καλλιεργημένα κύτταρα? Ωστόσο, υπήρξε μια μείωση της IL-4, IL-5 και IL-13 μετά την αγωγή. Τα επίπεδα της ΙΡΝ-γ, TNF-α, IL-2, IL-12 και GM-CSF σε ομάδα 3 αυξήθηκε μετά τη θεραπεία? ειδικότερα, τα επίπεδα της IFN-γ, IL-12 και GM-CSF αυξήθηκε ένα πολλαπλάσιο των 10 ή περισσότερες φορές. Στη συνέχεια, θα αξιολογηθούν τα επίπεδα ολόκληρη κυτοκινών στο αίμα, σύμφωνα με αντικειμενική ανταπόκριση του όγκου. Τα επίπεδα της ΙΡΝ-γ, IL-2, IL-12 και GM-CSF σε ασθενείς με PR /CR αυξήθηκε περισσότερο από δύο φορές μετά τη θεραπεία, ενώ τα επίπεδα αυτά σε ασθενείς με SD ή PD μειωμένη ή δεν άλλαξε σημαντικά μετά την αγωγή ( Εικ. 4Β).

η μέση κυτταροκινών επίπεδα σε άτομα σε κάθε ομάδα (Α) και τα επίπεδα για τις διάφορες απαντήσεις των όγκων (Β) φαίνονται.

η

Όσον αφορά Tregs, τόσο η αριθμός και η αναλογία αυτών των κυττάρων στο περιφερικό αίμα δεν έδειξαν καμία σημαντική αλλαγή μετά τη θεραπεία όταν αξιολογήθηκαν σύμφωνα με την ομάδα ή την ανταπόκριση του όγκου (Σχ. 4Α, Β).

παρουσιάστηκαν Συζήτηση

Τα αποτελέσματα σε αυτή τη μελέτη δείχνουν ότι η FN-CH296-διεγερμένα θεραπεία Τ κυττάρου ήταν πολύ καλά ανεκτή σε δείγμα μας ασθενή. Καμία σημαντική ACT-σχετικές βαθμού 3 ή 4 ανεπιθύμητες ενέργειες εμφανίστηκαν σε κάθε ασθενή και η πράξη παρήγαγε υποχώρηση του όγκου σε 2 ασθενείς: CR σε έναν ασθενή με καρκίνο του ορθού και PR σε ένα άλλο με καρκίνο του χοληδόχου πόρου. Το ποσοστό ανταπόκρισης ήταν 22,2% και το DCR ήταν 66,7%. Παρά το μέγεθος του δείγματος, τα αποτελέσματα αυτά είναι ενθαρρυντικά.

Τα συμπεράσματα προηγούμενων μελετών ποντικιού και κλινικές δοκιμές έδειξαν ότι λιγότερο διαχωριζόμενες Τ κύτταρα μπορεί να είναι η βέλτιστη πληθυσμός για ACT-based ανοσοθεραπείες εξαιτίας in vivo επιμονή τους , υψηλή πολλαπλασιαστικού δυναμικού, δεκτικότητα να ομοιοστατική και συνδιεγερτικά σήματα, παλιννόστησης τους να δευτερογενών λεμφοειδών ιστών και την ικανότητά τους να εκκρίνουν IL-2 [2] – [5]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, Yu et al. έχουν αναφέρει ότι FN-CH296 που ενεργεί με αντι-CD3 διεγείρει πολλαπλασιασμό Τ κυττάρου. Αυτά τα στοιχεία δείχνουν thats που FN-CH296 /αντι-CD3 διέγερση μπορεί να είναι ένας αποτελεσματικός τρόπος για να δημιουργήσετε ένα μεγάλο αριθμό των λιγότερο διαφοροποιημένα κύτταρα Τ κατάλληλο για ACT με αποτέλεσμα την υψηλότερη και πλέον εμμονή in vivo [13].

CD45RA , CD27, CD28, και CCR7 είναι γνωστό ότι εκφράζεται υψηλά σε λιγότερο διαχωριζόμενες Τ κύτταρα. Με βάση τις μελέτες σε ανθρώπους ιική μόλυνση, ένα γραμμικό μοντέλο της διαφοροποίησης των Τ κυττάρων, έχει προταθεί στην οποία CD27 + CD28 + CD45RA + αφελή κύτταρα πρόοδο μέσω μιας πρόωρης φαινότυπο αντιγόνο CD27 έμπειρους + CD28 + CD45RA- και στη συνέχεια προχωρά σε ένα CD27 + CD28-CD45RA- /+ ενδιάμεσο φαινότυπο και τελικά να CD27-CD28-CD45RA +/- αργά φαινότυπο αντιγόνο-έμπειρους. Αυτή η γραμμική κίνηση οδηγεί σε μια αύξηση στην κυτοτοξική δυναμικού και τη μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων [21]. CD27 και CD28 είναι συνδιεγερτικά μόρια τα οποία δρουν σε συμφωνία με τον υποδοχέα Τ κυττάρων (TCR) για στήριξη της επέκτασης Τ κυττάρου [22]. Έχει προταθεί ότι CD28 που εκφράζουν τα Τ κύτταρα εκκρίνουν IL-2 και επάγει αντιαποπτωτικά μόρια [23]. Τον τελευταίο καιρό, ο ρόλος της έκφρασης CD28 σε κλινικές δοκιμές ACT-based έχει πάρει μεγαλύτερη προσοχή και πιο λεπτομερείς έρευνες που γίνονται. Ανάλυση των επίμονων και μη επίμονων TIL κλώνοι δείχνουν προτιμησιακή επιβίωση των clonotypes που εκφράζουν υψηλά επίπεδα CD28, εμπλέκοντας ένα πλεονέκτημα επιβίωσης για τα μεταφερόμενα Τ κυττάρων με CD28 + λιγότερο διαφοροποιημένο φαινότυπο [4], [5]. CD27 μπορεί επίσης να αυξήσει TCR-επαγόμενο πολλαπλασιασμό κυττάρων Τ και απαιτείται για την παραγωγή και τη συντήρηση της μνήμης Τ κυττάρων in vivo [24]. Υπάρχουν ενδείξεις ότι η συχνότητα των Τ κυττάρων που εκφράζουν CD27 αυξάνεται σταδιακά μετά ACT και μπορεί να σχετίζεται με τη μακροπρόθεσμη διατήρηση ενός σταθερού αριθμού όγκου-ειδικά Τ κύτταρα σε ασθενείς που ανταποκρίνονται [25]. Σε αυτή τη φάση Ι των κλινικών δοκιμών, οι συχνότητες των δύο κυττάρων CD27 + CD45RA + και CD28 + CD45RA + αυξήθηκαν σημαντικά μετά την κουλτούρα και τον πληθυσμό τους σε μεταφέρεται κύτταρα ήταν περίπου 60%. Από την άλλη πλευρά, η συχνότητα των + CD45RA + κυττάρων CCR7, οι οποίες εκφράστηκαν επίσης σε λιγότερο διαχωριζόμενες κύτταρα Τ, δεν άλλαξε μετά από καλλιέργεια για άγνωστους λόγους. Οι αναλογίες των λιγότερο διαφοροποιημένο φαινότυπο Τ κυττάρων (δηλαδή CD27 + CD45 +, CD28 + CD45RA +, και CCR7 + CD45RA + κύτταρα) σε μεταφέρθηκαν κύτταρα διέφεραν σε μεγάλο βαθμό για κάθε ασθενή. Μια ισχυρή θετική συσχέτιση βρέθηκε μεταξύ των λόγων των CD27 + CD45RA + (ρ = 0.717, p = 0.037), CD28 + CD45RA + (ρ = 0.717, p = 0.037), CCR7 + CD45RA + (ρ = 0.733, p = 0,031) κύτταρα μεταφέρθηκαν κύτταρα και εκείνων σε PBMCs (πριν καλλιέργεια). Είναι απαραίτητο να βελτιώσουμε την κατάσταση ή να βρουν νέες μεθόδους που μπορούν να δημιουργήσουν αποτελεσματικά μεγάλο αριθμό των λιγότερο διαφοροποιημένα κύτταρα Τ, ακόμη και σε περιπτώσεις όπου υπάρχουν μερικά λιγότερο διαφοροποιημένα κύτταρα Τ. Σε συμφωνία με προηγούμενες αναφορές [13], βρήκαμε ότι η διέγερση με FN-CH296 /αντι-CD3 επεκταθεί κατά προτίμηση CD8 + κύτταρα σε αυτή τη μελέτη. Πιστεύεται γενικά ότι η επικρατούσα μηχανισμός ογκοκτόνο τελεστής είναι η κυτταροτοξική θανάτωση επίδραση των CD8

+ Τ κύτταρα, ωστόσο, παρά την έρευνα που γίνεται μέχρι σήμερα, ο αντίκτυπος της προτιμησιακής πολλαπλασιασμό των CD8 Τ κυττάρων σε ανοσοθεραπεία καρκίνου εξακολουθεί να χρειάζεται πολύ περισσότερο έρευνας.

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η ΙΡΝ-γ παίζει έναν σημαντικό ρόλο στην ανοσοθεραπεία του καρκίνου και ΙΡΝ-γ έκφραση των Τ κυττάρων θεωρείται ότι σχετίζεται ισχυρά με θεραπευτική επιτυχία. Έχουμε αποδείξει επίσης ότι η δοκιμασία των επιπέδων ΙΡΝ-γ σε ολικό αίμα ήταν μια αποτελεσματική μέθοδο για την αξιολόγηση της κλινικής ανταπόκρισης για ανοσοθεραπεία του καρκίνου [19] [20]. Σε αυτή τη μελέτη, τα επίπεδα ΙΡΝ-γ πλήρους αίματος σε ομάδα 3 αυξήθηκαν μέχρι 10 ή περισσότερες φορές μετά από 6 εγχύσεις καλλιεργημένων κυττάρων. Ολόκληρο επίπεδα IFN-γ αίματος σε δημόσιες σχέσεις ή υποθέσεις CR αυξήθηκε περισσότερο από δύο φορές, ενώ εκείνες του PD ή SD περιπτώσεις, δεν σημειώθηκε σημαντική αύξηση μετά τη θεραπεία. Το εύρημα σε προηγούμενη μελέτη μας [20] ότι η αύξηση της IFN-γ επιπέδων στο ολικό αίμα μετά ACT ήταν ανεξάρτητα σχετίζονται με τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο τονίζει τη σημασία των αποτελεσμάτων που έχει αποκτηθεί σε αυτή τη μελέτη.

Αν και δεν έχει σημαντική συσχέτιση μεταξύ του αριθμού των εγχύεται λιγότερο διαφοροποιημένα κύτταρα Τ και ΙΡΝ-γ επίπεδα ολικό αίμα δεν επιβεβαιώθηκε πιθανόν να οφείλεται σε μικρά μεγέθη δειγμάτων, μπορούμε να υποθέσουμε ότι οι λιγότερο διαχωριζόμενες Τ κύτταρα μπορούν να συμβάλλουν στην αύξηση των επιπέδων της ΙΡΝ-γ. Οι μελλοντικές μελέτες για να διερευνήσει την επίδραση του αριθμού των CD27 + CD45RA +, CD28 + CD45 + και CCR7 + CD45RA + κυττάρων στις IFN-γ επιπέδων στο ολικό αίμα.

Εκτός από ΙΡΝ-γ άλλα επίπεδα κυτοκίνης Th1 όπως ως IL-2, IL-12 και ΤΝΡ-α αυξήθηκαν επίσης σε ασθενείς στην ομάδα 3, και σε ασθενείς με PR /CR, ενώ Th2 κυτοκίνης επίπεδα όπως IL-4, IL-5 και IL-13 μειώθηκε μετά τη θεραπεία. Εκτός αυτού, το επίπεδο GM-CSF ολικό αίμα είναι αυξημένες σε ασθενείς με ομάδα 3 και σε ασθενείς που εμφάνισαν PR /CR. Έχει αναφερθεί στο παρελθόν ότι κυτταρική ανοσία κατά προτίμηση ενεργοποιείται από Th1 κυτοκίνες, ενώ Th2 κυτοκινών καταστέλλει την κυτταρική ανοσία [26]. GM-CSF είναι μία πλειοτροπική κυτοκίνη που διεγείρει τα δενδριτικά κύτταρα (DCs) και προάγει την πρόσληψη των αντιγόνων όγκου μέσω DCs οδηγεί σε Τ-κυττάρων διασταυρούμενη εκκίνηση και ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος έναντι ειδικών αντιγόνων [27], [28]. Κατά συνέπεια, με βάση τα αποτελέσματα από το ανοσοποιητικό παρακολούθησης γίνεται στην παρούσα μελέτη, έχουν την τάση να πιστεύουν ότι η φιμπρονεκτίνη CH296-διεγερμένα θεραπεία Τ κυττάρου μπορεί να ασκήσει κατά του όγκου αποτελέσματα με την ενεργοποίηση της κυτταρικής ανοσίας. Παρόλο που απέδειξε πρόσφατα ότι η ACT έχει τη δυνατότητα να μειώσει τον αριθμό των Tregs [29], στην ανάλυση γίνεται σε αυτή τη μελέτη, ο αριθμός των περιφερειακών Tregs δεν άλλαξε σημαντικά μετά τη θεραπεία.

Ανταπόκριση στο ανοσοποιητικό σύστημα που βασίζεται θεραπείες ποικίλλει μεταξύ τύπων όγκου. Ενώ το μελάνωμα και καρκίνο νεφρικών κυττάρων είναι κλασικά θεωρούνται ανοσογόνα, οι περισσότερες επιθηλιακές κακοήθειες δεν είναι ανοσογόνα και μικρή ανταπόκριση στην ανοσοθεραπεία. Στο δείγμα μας, οι εννέα ασθενείς είχαν επιθηλιακές κακοήθειες όπως καρκίνοι του γαστρεντερικού και τον καρκίνο του πνεύμονα που παραδοσιακά θεωρούνται ως ανθεκτική στην ανοσοθεραπεία. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι σκοπός απόκριση παρατηρήθηκε σε ασθενείς με καρκίνο του ορθού και καρκίνο του χοληφόρου πόρου. Παραμένει ασαφές αν αυτή η νέα ACT έχει θεραπευτικές δυνατότητες για πολλούς τύπους όγκων.