Αφηρημένο

Sarsaparilla, επίσης γνωστή ως

σμίλαξ Glabra

Ρίζωμα (SGR) , δείχθηκε να διαμορφώνουν ανοσία, την προστασία από βλάβη του ήπατος, μειώνουν τη γλυκόζη του αίματος και την καταστολή του καρκίνου. Ωστόσο, τα αποτελέσματά της στην προσκόλληση των καρκινικών κυττάρων, τη μετανάστευση και την εισβολή ήταν ασαφείς. Στην παρούσα μελέτη, βρήκαμε ότι το υπερκείμενο του υδατοδιαλυτού εκχυλίσματος από SGR (SW) θα μπορούσε να προωθήσει την πρόσφυση, αναστέλλουν τη μετανάστευση και την εισβολή του HepG2, MDA-MB-231 και τα κύτταρα Τ24

in vitro

, καθώς και ως καταστέλλουν μετάσταση των κυττάρων MDA-MB-231

in vivo

. Αποτελέσματα της F-ακτίνης και διπλή χρώση βινκουλίνης έδειξε την αυξημένη εστιακή προσκόλληση σε κύτταρα SW-θεραπεία. ανάλυση μικροσυστοιχιών έδειξε καταστολή της σηματοδότησης ΤΟΡ-β1 με αγωγή SW, η οποία επιβεβαιώθηκε με πραγματικού χρόνου RT-PCR του ΤΟΡ-β1 που σχετίζονται με τα γονίδια και ανοσοστύπωμα TGFBR1 πρωτεΐνης. SW δείχθηκε επίσης να ανταγωνίζονται ΤΟΡ-β1-προωθείται κυτταρική μετανάστευση. Συλλογικά, η μελέτη μας αποκάλυψε μια νέα αντικαρκινική λειτουργία της Sarsaparilla στην αντιμετώπιση εισβολής ενός υποσυνόλου των καρκινικών κυττάρων, αναστέλλοντας τη σηματοδότηση TGF-β1

Παράθεση:. Εκείνη Τ, Zhao C, Feng J, Wang L, Qu L, Fang Κ, et al. (2015) Sarsaparilla (

σμίλαξ Glabra

Ρίζωμα) Απόσπασμα Αναστέλλει τη Μετανάστευση και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων καταστέλλοντας TGF-β1 Pathway. PLoS ONE 10 (3): e0118287. doi: 10.1371 /journal.pone.0118287

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Jung Weon Lee, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Σεούλ, Δημοκρατία της Κορέας

Ελήφθη: 28 Ιουν 2014? Αποδεκτές: 12η Ιανουαρίου, 2015? Δημοσιεύθηκε: 5, Μαρ 2015

Copyright: © 2015 Εκείνη et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: δεδομένα μικροσυστοιχιών έχει έχουν κατατεθεί στο NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (ένταξη όχι. GSE58201), https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE58201.

Χρηματοδότηση : η χρηματοδότηση που παρέχεται από το Εθνικό Πρόγραμμα βασικής Έρευνας της Κίνας (2010CB529303, 2013CB910504), https://www.973.gov.cn/Default_3.aspx. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Sarsaparilla, επίσης γνωστή ως

σμίλαξ Glabra

Ρίζωμα (SGR), είναι ένα φυσικό συμπλήρωμα διατροφής που χρησιμοποιείται ευρέως σε τρόφιμα αποφάσεων και της υγειονομικής περίθαλψης, με βάση την ικανότητά του αντιοξειδωτικές, εκκαθάριση θερμότητα και την ανακούφιση υγρασία [1,2]. Μερικά ποτά SGR που περιέχουν, τα τρόφιμα και τα συμπληρώματα διατροφής είναι αγοράσιμος στη Νοτιοανατολική Ασία και τη Βόρεια Αμερική. Οι ασθενείς με δερματίτιδα, σύφιλη ή ουρική αρθρίτιδα στη Νοτιοανατολική Ασία έχουν επωφεληθεί από τη θεραπεία SGR που περιέχουν φυτικά μείγματα για μια μακρά ιστορία [3,4]. Επί του παρόντος, υπάρχουν επίσης αυξανόμενες επιστημονικές αποδείξεις αναφορά θεραπευτικές δυνατότητές της για την αντιμετώπιση της ρευματοειδούς αρθρίτιδας [5], η φλεγμονή [6], ηπατική βλάβη [1], υπερινσουλιναιμία [7] και τον καρκίνο [8].

Οι λειτουργίες της SGR είναι κυρίως χωρίζεται σε τέσσερις πτυχές, δηλαδή ανοσοτροποποιητικά, ηπατο-προστατευτική, ογκοκτόνο και άλλα. Από την ανοσορρυθμιστική άποψη, το υδατικό εκχύλισμα από SGR εξασκεί μία αξιοσημείωτη αναστολής επί πικρυλοχλωρίδιο (PCL) – ή ερυθρών αιμοσφαιρίων προβάτου (SRBC) προκληθείσα υπερευαισθησίας καθυστερημένου τύπου (DTH) [6,9]. SGR δρα κυρίως στην κυτταρική ανοσολογική απάντηση (CIR), η φάση τελεστή της DTH αντί χυμική ανοσολογική απόκριση (HIR), πράγμα που παρέχει μια ανώτερη SGR πλεονέκτημα σε άλλους ανοσοκαταστολείς στη θεραπεία CIR φλεγμονώδεις ασθένειες όπως η ηπατίτιδα και η ρευματοειδής αρθρίτιδα [6,9 ]. Astilbin, ένας βιοδραστικών ενώσεων που απομονώνονται από SGR, μπορεί να αλλάξει η

in vivo

προφίλ κυτοκίνης των λεμφοκυττάρων και καταστέλλουν την μετανάστευση των ενεργοποιημένων Τ κυττάρων, ανακουφίζοντας έτσι υπερευαισθησίας επαφής και DTH [10,11]. Από την ηπατο-προστατευτική άποψη, Astilbin διευκολύνει την απόπτωση των ηπατικών-διηθητικά λεμφοκύτταρα Τ και αναστέλλει την προσκόλληση μήτρας-κυττάρων των σπληνοκυττάρων να ελαχιστοποιείται βλάβη του ήπατος [12,13]. Επιπλέον, θα μπορούσε να βελτιώσει τη λειτουργία του ήπατος με την αντιστροφή ανύψωση τρανσαμινασών, μειώνοντας την παραγωγή TNF-α και τη μείωση της ηπατοτοξικότητας της μη παρεγχυματικών κυττάρων [12,14]. Taxifolin, μια άλλη ένωση που απομονώνεται από SGR, βρέθηκε να αλλάζουν τον μεταβολισμό των λιπιδίων για την ανακούφιση του ήπατος βάρος [15,16]. Η λειτουργία του SGR επεκτείνεται και σε άλλες βιολογικές λειτουργίες, συμπεριλαμβανομένης της καταστολής Helicobacter pylori δραστηριότητα [17], μειώνοντας την γλυκόζη του αίματος [2] και μείωση της δραστηριότητας των HIV-1 ενσωματάση [18]. Όλα αυτά τα ευρήματα δείχνουν τον πολυλειτουργικό δυναμικό της SGR.

Από την αντικαρκινική πτυχή, από του στόματος πρόσληψη ενός φυτική φόρμουλα που περιέχει SGR βρέθηκε να παρατείνει την ανακούφιση του πόνου συνεχή χρόνο, τη βελτίωση της ποιότητας ζωής των ασθενών και να παρατείνει τη μακροπρόθεσμη μακροπρόθεσμη επιβίωση των ασθενών με ηπατικό καρκίνωμα [19]. Μια άλλη ένεση SGR περιέχει ανακαλύφθηκε να μειωθεί η ανάπτυξη του όγκου σε σχέση με υψηλές δόσεις σε μοντέλα ποντικών [20]. Αποσπάσματα από SGR βρέθηκαν να προάγουν την απόπτωση στον ανθρώπινο καρκίνο του παχέος ΗΤ-29, ανθρώπινο καρκίνο του ήπατος HepG2 και HepG3 κυττάρων [8,21]. Υπάρχουν επίσης αρκετές υποδείξεις αναφέροντας τις πιθανοί ρόλοι των SGR στον έλεγχο κυτταρική προσκόλληση και μετανάστευση. Astilbin μπορεί να καταστείλει την προσκόλληση των σπληνοκυττάρων να εξωκυττάριας μήτρας σε μοντέλα ποντικών ήπατος τραυματίστηκαν [14], και μπλοκάρει διακυτταρική προσκόλληση μεταξύ των ανθρώπινων Jurkat Τ κύτταρα και ECV-304 κύτταρα [13]. Επιπλέον, η 5-Ο-caffeoylshikimic οξύ, taxifolin και astilbin από SGR ανέστειλαν την μετανάστευση και την προσκόλληση των μακροφάγων [22]. Παρ ‘όλα αυτά, ο άμεσος ρόλος του εκχυλίσματος SGR στο καρκινικό κύτταρο εισβολής είναι ασαφής και η μηχανιστική βάση είναι ανύπαρκτη. Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε τα αποτελέσματα του υπερκειμένου του υδατοδιαλυτού εκχυλίσματος του SGR (SW) για την προσκόλληση, μετανάστευση και εισβολή των τριών καρκινικών κυτταρικών σειρών, και διερεύνησε ο πιθανός μηχανισμός.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

μελέτη των ζώων εγκρίθηκε από την Biomedical Επιτροπή Ηθικής του Πανεπιστημίου του Πεκίνου Αντικαρκινικό Νοσοκομείο & amp? Ινστιτούτο και εκτελείται κατά μήκος θέσπισε κατευθυντήριες γραμμές θεσμικό καλή διαβίωση των ζώων σύμφωνη με τις κατευθυντήριες γραμμές των ΗΠΑ (ΝΙΗ Δημοσίευση # 85-23, αναθεωρήθηκε το 1985).

Υλικά |

Matrigel αγοράστηκε από την BD Biosciences (San Jose, CA). Αντισώματα προς βινκουλίνης και TGFBRI αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ) και Bioworld (Πεκίνο, Κίνα) αντίστοιχα. TGF-β1 ήταν από την Sigma-Aldrich.

Προετοιμασία SGR εξαγάγετε

SGR ελήφθησαν από Ben Cao Fang Yuan Pharmaceutical Co. (Πεκίνο, Κίνα). Οι διαδικασίες για την παρασκευή του υπερκείμενου του υδατοδιαλυτού εκχυλίσματος από SGR (SW) έχουν περιγραφεί προηγουμένως [23]. Το ποσοστό απόδοσης για SW ήταν 7,27% (g /g). Ο διαλύτης για παρασκευή του SW (μητρικό διάλυμα) ήταν 3% DMSO σε PBS, και το DMSO σε διάλυμα SW εργασίας ήταν μικρότερη από 0,15% (ν /ν).

Κυτταρική καλλιέργεια

HepG2, MDA-MB-231 και Τ24 κύτταρα ελήφθησαν από την ATCC (Rockville, MD) και καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS) συν 100 U /ml πενικιλλίνη και 100 μg /ml στρεπτομυκίνη. Όλα τα αντιδραστήρια για καλλιέργεια ελήφθησαν από την Invitrogen (Carlsbad, CA).

Η προσκόλληση κυττάρου δοκιμασία

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε 6-cm πιάτα και καλλιεργήθηκαν με RPMI 1640 που περιέχει 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS ). Matrigel ήταν 1: 100 αραιωμένο με RPMI 1640 χωρίς ορό και προστέθηκαν σε πλάκα 96 φρεατίων για να επιτρέψει να επικαλύψει τη διάρκεια της νύχτας στους 4 ° C. Την επόμενη ημέρα, τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν και συλλέχθηκαν σε μέσο ελεύθερο ορού συμπληρωμένου με υποδεικνυόμενες δόσεις SW. Μετά φάρμακο προ-θεραπείας για 15 λεπτά (για τα κύτταρα Τ24) ή 30 λεπτά (για τα κύτταρα MDA-MB-231 και HepG2), εναιώρημα του κυττάρου στη συνέχεια συμπληρώθηκε με 0,5% FBS πριν σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων Matrigel προ-επικαλύπτεται σε η πυκνότητα των 2 χ 10

4 ανά φρεάτιο και αφέθηκαν να προσκολληθούν για 2 ώρες. Μετά την απομάκρυνση μη προσκολλημένα κύτταρα με PBS, τα προσκολλημένα κύτταρα φωτογραφήθηκαν με το σύστημα CloneSelect Imager (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Εννέα μικροσκοπικά πεδία από κάθε πηγάδι επιλέχθηκαν τυχαία σταματούν και τα κύτταρα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας Image Pro Plus λογισμικό.

μετανάστευση Transwell /εισβολή δοκιμασία

Για δοκιμασία μετανάστευσης, τα κύτταρα σπάρθηκαν σε τρυβλία 10 cm. Την επόμενη ημέρα, τα κύτταρα συλλέχθηκαν σε μέσο χωρίς ορό και χωρίζεται σε τρία ίσα μέρη. Μετά από κάθε τμήμα συμπληρώθηκε με ενδεικνυόμενες δόσεις του SW, το ήμισυ του αιωρήματος κυττάρων προστέθηκαν στο ανώτερο φρεάτιο του ενθέτου transwell (Corning Inc, Corning, ΝΥ) σε πυκνότητα 1 × 10

4 (για τα κύτταρα Τ24 και HepG2 ) ή 5 × 10

3 (για ΜϋΑ-ΜΒ-231 κύτταρα) ανά φρεάτιο. Το κατώτερο φρεάτιο προστέθηκαν με RPMI 1640 που περιέχει 10% FBS μέσο ως χημειοτακτικός ελκυστές. Το υπόλοιπο ήμισυ του κυτταρικού εναιωρήματος ήταν τότε εμβολιάζονται σε πλάκες 96-φρεατίων για την δοκιμασία βιωσιμότητας. Μετά από επώαση 12 h, τα κύτταρα που έχουν εισχωρήσει μέσα κάτω πλευρά της μεμβράνης transwell βάφτηκαν με κρυσταλλικό ιώδες και φωτογραφήθηκαν κάτω από μικροσκόπιο. 14 μικροσκοπικά πεδία τυχαία συλληφθεί και μετρήθηκαν. Για να αξιολογηθεί η επίδραση του ΤΟΡ-β1 στην κυτταρική μετανάστευση, τα κύτταρα στερήθηκαν τροφής με RPMI 1640 που περιείχε 0.5% FBS για 24 ώρες και στη συνέχεια συλλέγονται με θρυψινοποίηση. εναιώρημα κυττάρων χωρίζεται σε τέσσερα ίσα μέρη και κάθε μέρος συμπληρώθηκε με διαλύτη, 5 ng /ml ΤΟΡ-β1, 1,5 μg /μl SW ή SW συν ΤΟΡ-β1. Μετά την προσθήκη ενός δεύτερου κυτταρικού εναιωρήματος που περιέχει το φάρμακο μέσα στο ανώτερο φρεάτιο Transwell ένθετου, το απομένον κυτταρικό εναιώρημα προστέθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων. Αμφότερες οι πλάκες επωάστηκαν για 12 ώρες. Οι πλάκες Transwell εχρησιμοποιήθησαν για ποσοτικό προσδιορισμό της μετανάστευσης και τις πλάκες 96-φρεατίων για την δοκιμασία κυτταρικής βιωσιμότητας. Για την ανίχνευση εισβολής, ένα στρώμα matrigel (1: 4 αραίωση σε μέσο ελεύθερο ορού) προ-επικαλυμμένο στο άνω φρεάτιο Transwell ένθετου πριν από την προσθήκη των κυττάρων, και τα κύτταρα επωάστηκαν για 36 ώρες πριν από τη χρώση κρυσταλλικού ιώδους. Οι διαδικασίες υπόλοιπα ήταν το ίδιο με δοκιμασία μετανάστευσης.

τηλέφωνα επούλωση των πληγών δοκιμασία

Δύο παράλληλες γραμμές καταρτίστηκαν από την πίσω πλευρά των 12-φρεατίων με μαρκαδόρο πριν κύτταρο σπορά. Την επόμενη ημέρα, το μέσο καλλιέργειας απομακρύνθηκε και αντικαταστάθηκε από 0,5% FBS /RPMI 1640. 24 ώρες αργότερα, μια ευθεία γραμμή πληγή που ήταν κάθετα σε αυτές τις παράλληλες γραμμές συντάχθηκε σε όλη τη συνημμένη κυτταρικό στρώμα με ρύγχη πιπετών. Ως εκ τούτου, η διαφορά μεταξύ του τραύματος δύο παράλληλες γραμμές σημαδεύτηκε. Μετά την απομάκρυνση των επιπλεόντων κυττάρων με PBS, που υποδεικνύεται προστέθηκαν δόσεις SW σε κάθε φρεάτιο. Φωτογραφίες τραβήχτηκαν από την σημειώνονται κενό κάθε 6-8 ώρες μέχρι την πληγή έκλεισε. Τα κενά του τραύματος ψηφιακά ποσοτικά με τη χρήση Image Pro Plus λογισμικό.

ζωικό μοντέλο

7 έως 8 εβδομάδων θηλυκών Balb /c γυμνών ποντικών (Vital River Laboratories, Πεκίνο, Κίνα) ήταν εγχέεται μέσω της φλέβας της ουράς με 1 χ 10

6 MDA-MB-231 κύτταρα. Την επόμενη ημέρα, τα ποντίκια (η = 8 για κάθε ομάδα) χορηγείται από το στόμα με 72,7 mg SW (που παρασκευάστηκε σε PBS, ισούται με 1 g SGR) ή PBS ανά ημέρα. Μετά από δύο εβδομάδες, οι ποντικοί κρατήθηκαν για άλλες 3 εβδομάδες πριν να θυσιαστούν για πνεύμονα και συλλογή ήπατος. Αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε). Χρώσης χρησιμοποιήθηκε για την παρακολούθηση και μετρούν μεταστατικές εστίες σε πνεύμονα ή συκώτι

Μέτρηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων

Κύτταρα κατεργασμένα με SW ή διαλύτη σπάρθηκαν σε 96 φρεατίων πλάκες και επωάζονται. ποσοστό κυττάρων συρροή ποσοστώθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα CloneSelect Imager.

κηλίδος Western

Cells εκτίθενται σε ΝΔ για υποδεικνυόμενους χρόνους συλλέχθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης που περιέχει 50 mM Tris-HCl (ρΗ 7.0), 150 mM NaCl , 2 mM EDTA, 1% SDS, 2 mM διθειοθρεϊτόλη (DTT) και 1 × αναστολέα πρωτεάσης κοκτέιλ (Roche, Mannhelm, Germany) και στη συνέχεια κατεργασία με υπερήχους για 30 s σε πάγο. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε με κιτ BCA (Pierce, Rockford, IL). Τα κυτταρικά λύματα (30 μα ανά δείγμα) διαχωρίστηκαν σε 8% -15% SDS-PAGE πριν ηλεκτρομεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης. Μετά από αποκλεισμό με 5% άπαχο γάλα σε 0,1% Tween 20 /TBS (TBST), μεμβράνες ανιχνεύθηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C και στη συνέχεια ξαναϊχνηθετούνται με HRP-σημασμένο δευτερογενή αντισώματα για 45 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (RT). Σήματα ανιχνεύθηκαν με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια σύστημα από την Pierce (Rockford, IL).

ανοσοφθορισμού

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε αποστειρωμένο καλυπτρίδες. Την επόμενη ημέρα, SW προστέθηκε και τα κύτταρα επωάστηκαν για προκαθορισμένο χρόνο. Στο τέλος του πειράματος, τα κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη για 20 λεπτά σε RT πριν διαπερατά με 0,1% Triton-X-100 σε PBS για 4 λεπτά. Μετά τον αποκλεισμό με 5% BSA /PBS για 1 ώρα, τα κύτταρα επωάστηκαν με αντι-βινκουλίνης αντίσωμα (1: 100) όλη τη νύκτα στους 4 ° C και στη συνέχεια TRITC-συζευγμένο δεύτερο αντίσωμα αντι-ποντικού και FITC-επισημασμένο φαλλοϊδίνη (Sigma) μείγματα για 1 h σε RT. Οι πυρήνες βάφτηκαν με DAPI πριν από τη λήψη φωτογραφιών μέσω Leica TCS SP5 συνεστιακό λέιζερ μικροσκόπιο.

Ανάλυση της εστιακής προσκόλλησης

Η ένταση του σήματος βινκουλίνης και στον τομέα της εστίασης πρόσφυση αναλύθηκαν από την Adobe Photoshop CS5 και Image Pro λογισμικό Plus. Πρώτον, βινκουλίνης-βάφονται εικόνες απο-κορεσμένη, ανεστραμμένο και de-noised χρησιμοποιώντας το λογισμικό Photoshop για να παράγει ίχνη πρόσφυση. Στη συνέχεια, αυτά τα αποτυπώματα βινκουλίνης περιείχαν περαιτέρω επιλέγονται από κατωφλίου σε Pro Image Plus λογισμικό. Μέσω της βαθμονόμησης, η περιοχή και η ένταση των αποτυπωμάτων βινκουλίνης περιέχουν προσδιορίστηκε ποσοτικά χρησιμοποιώντας την εντολή «μετράνε /μεγέθους». Ένα σύνολο 50 κύτταρα αναλύθηκαν σε εκάστη ομάδα.

ανάλυση Microarray και σε πραγματικό χρόνο RT-PCR

RNA εξήχθη από κύτταρα HepG2 σε επεξεργασία με SW (1,5 μg /μl) χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen) και cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα αντίστροφης μεταγραφάσης (Promega, Madison, WI). προφίλ γονιδιακής έκφρασης εξετάστηκαν από Σαγκάη Βιοτεχνολογία Corporation (Σαγκάη, Κίνα) χρησιμοποιώντας Affymetrix Human Gene μικροσυστοιχίες 1.0st. δεδομένων των μικροσυστοιχιών έχει κατατεθεί στο NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (ένταξη όχι. GSE58201). Μετά Στιβαρή Multi-array Μέση (RMA) κανονικοποίηση,

P

αξία & lt? 0.05 και το όριο & gt Fold-Αλλαγή? 1.5 ταυτοποιήθηκαν να είναι στατιστικά σημαντικές μεταβολές. KEGG, GO και Gene κάρτες (https://www.genecards.org/) χρησιμοποιήθηκαν για να επιλέξετε από τα γονίδια που σχετίζονται με την κυτταρική προσκόλληση, τη μετανάστευση και την εισβολή. Στη συνέχεια, αυτά τα γονίδια τέθηκαν σε βάση δεδομένων STRING για σηματοδότηση αναζήτηση μονοπάτι. Real-time RT-PCR χρησιμοποιήθηκε για την επικύρωση των αποτελεσμάτων των μικροσυστοιχιών και πραγματοποιούνται σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (SYBR, ΤΟΥΟΒΟ). Τα επίπεδα έκφρασης όλων των γονιδίων ομαλοποιήθηκαν μέσω

GAPDH

γονίδιο και το 2

-ΔΔCT μέθοδος χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό σχετική έκφραση γονιδίου. Οι εκκινητές για πραγματικού χρόνου RT-PCR (

TGFBR1

, προς τα εμπρός, 5′-CCTGGGATTTATAGCAGCAGAC-3 ‘, αντίστροφη, 5′-TGACACCAACCAGAGCTGAG-3’?

NTS

, προς τα εμπρός, 5 ‘ -ATTAGTAAAGCACATGTTCC-3 ‘, αντίστροφη, 5′-CTCCCAGTGTTGAAAAGCCC-3’?

ID 1

, προς τα εμπρός, 5′-GAGCTGAACTCGGAATCCGAAG-3 ‘, αντίστροφη, 5′-GATCGTCCGCAGGAACGCATGC-3’?

ID 2

, προς τα εμπρός, 5′-TCAGCCTGCATCACCAGAGA-3 ‘, αντίστροφη, 5′-CTGCAAGGACAGGATGCTGATA-3’?

ID3

, προς τα εμπρός, 5′-CTGAGCTTGCTGGACGACA-3 ‘, αντίστροφη, 5′-ATGTAGTCGATGACGCGCTGTA-3’) συντέθηκαν από GenePharma (Σαγκάη, Κίνα).

η στατιστική ανάλυση

η ανάλυση των δεδομένων έγινε με τη χρήση SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Δύο-tailed t test μαθητή και ANOVA χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί η σημασία των διαφορών μεταξύ των διαφορετικών πειραματικών ομάδων.

Αποτελέσματα

ΝΔ ενισχύει την κυτταρική προσκόλληση

Για να δοκιμαστεί η επίδραση της ΝΔ σχετικά με την ικανότητα των καρκινικών κυττάρων να δεσμεύονται σε εξωκυτταρική μήτρα, εκτελέσαμε ανάλυση προσκόλλησης κυττάρων με τη χρήση κυττάρων ηπατώματος HepG2 (εικ. 1Α), του μαστού καρκινική κυτταρική σειρά MDA-MB-231 (Εικ. 1Β) και της ουροδόχου κύστης καρκινικής κυτταρικής γραμμής Τ24 (Σχ. 1C). Διαπιστώθηκε ότι η προσκόλληση των κυττάρων HepG2 για Matrigel αυξήθηκε κατά 0,7 μg /μl του SW (Εικ. 1Α), ενώ η επίδρασή της ίδιας συγκέντρωσης του SW για την προσκόλληση των κυττάρων MDA-MB-231 κύτταρα ήταν οριακή (Εικ. 1Β) . Αντίθετα, η αύξηση στην προσκόλληση ήταν περισσότερο εμφανής σε κύτταρα Τ24 και το υψηλότερο προσκόλληση επιτεύχθηκε με τόσο χαμηλά όσο 0,07 μg /μl του SW (Σχήμα 1C).

Αριστερά πάνελ:. HepG2 (Α), MDA-MB-231 (Β) και κύτταρα Τ24 (C) υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με υποδεικνυόμενες δόσεις του SW για 15 ή 30 λεπτά πριν την σπορά στα φρεάτια επικαλυμμένα με Matrigel, και 2 ώρες αργότερα, προσκολλημένα κύτταρα μετρήθηκαν μετά την απομάκρυνση των επιπλεόντων κυττάρων με PBS. Εκπρόσωπος εικόνες που εμφανίζονται. μπαρ κλίμακα, 200 μm. Δεξιά πλαίσια: ποσοτικοποίηση των δεδομένων στο αριστερό πλαίσιο, που δείχνεται ήταν σύνθετα αποτελέσματα από τρία ανεξάρτητα πειράματα με εις τριπλούν. Στήλες, σημαίνει? μπαρ, SD.

Η

SW αναστέλλει τον καρκίνο κυτταρική μετανάστευση

Στη συνέχεια, θα πραγματοποιηθεί

in vitro

δοκιμασία μηδέν. Τα κύτταρα προ-επωάστηκαν σε 0.5% FBS μέσο για 24 ώρες πριν από την εισαγωγή του το μηδέν, ώστε να αποκλειστεί η επίδραση της FBS επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων. Η επούλωση του τραύματος παρακολουθείται σε τακτά χρονικά διαστήματα μέχρι να κλείσει επάνω. Παρατηρήσαμε ότι SW οδήγησε σε επιβράδυνση της μετανάστευσης σε HepG2, MDA-MB-231 και τα κύτταρα Τ24 (Σχ. 2Α, Β και C), με MDA-MB-231 κυττάρων που δείχνει την πιο προφανή ανασταλτική δράση (σχ. 2Β ). Έχουμε παρατηρήσει ότι απαιτείται διαφορετική χρονική στιγμή για διαφορετικές κυτταρικές σειρές για να επουλώσει τις πληγές. Επιπλέον, ίδια συγκέντρωση SW εμφάνισαν διακριτή αναστολής επί της επούλωσης τραύματος σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές. Αυτό θα μπορούσε να εξηγηθεί από την εξειδίκευση των κυττάρων linage σε μετανάστευση. Λαμβάνοντας υπόψη την τραχύτητα και την υποκειμενικότητα της δοκιμασίας μηδέν, έχουμε χρησιμοποιούνται επίσης φρεατίων δοκιμασία μετανάστευσης. Τα κύτταρα τα οποία κατάφεραν να συμπιέζει διαμέσου των μικρο-οπών της μεμβράνης βάσης στην ομάδα SW-αγωγή ήταν σημαντικά μικρότερες από εκείνες της ομάδας ελέγχου (Εικ. 3Α, Β και Γ, αριστερά και μεσαία πλαίσια), με μικρή επίδραση στην βιωσιμότητα των κυττάρων (Εικ. 3Α, Β και C, δεξιά πάνελ). Αυτά τα αποτελέσματα επεσήμανε την ανασταλτική δράση της ΝΔ σχετικά με τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων.

In vitro

δοκιμασία μηδέν χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η επίδραση της ΝΔ για τη μετανάστευση των HepG2 (Α), MDA-MB -231 (Β) και Τ24 κύτταρα (C). Εκπρόσωπος εικόνες που εμφανίζονται στο αριστερό πάνελ? ποσοτικοποίηση των δεδομένων στο αριστερό πάνελ που φαίνεται στο δεξιό πλαίσιο, που δείχνεται ήταν σύνθετα αποτελέσματα από τρία ανεξάρτητα πειράματα με εις τριπλούν παράλληλα δείγματα. Ο δείκτης μετανάστευσης αντιπροσωπεύει την ταχύτητα μετανάστευσης σε σχέση με την ομάδα ελέγχου. Στήλες, σημαίνει? μπαρ, SD.

Η

HepG2 (Α), κύτταρα Τ24 (Β) και MDA-MB-231 (C) σπάρθηκαν στο ένθετο transwell παρουσία υποδεικνυόμενες δόσεις του SW για 12 ώρες. Τα κύτταρα φθάνοντας την κάτω πλευρά της μεμβράνης transwell χρώθηκαν και αντιπροσωπευτικές εικόνες εμφανίζονται στο άνω πάνελ. μπαρ κλίμακα, 200 μm. Τα δεδομένα στον αριστερό πάνελ προσδιορίστηκαν ποσοτικά και φαίνεται στο μεσαίο πλαίσιο, και η βιωσιμότητα των κυττάρων που ανακλάται από ποσοστό συρροής των κυττάρων στο δεξί πλαίσιο. Ορατή ήταν σύνθετα αποτελέσματα από δύο ανεξάρτητα πειράματα. Στήλες, σημαίνει? μπαρ, SD? NS, όχι στατιστικά σημαντική.

Η

SW αναστέλλει την εισβολή των κυττάρων του καρκίνου του

in vitro

και μετάσταση

in vivo

Η

Επίσης, δοκιμάστηκε η επίδραση της ΝΔ για καρκινικών κυττάρων εισβολής. Ακόμα, χρησιμοποιήσαμε την ίδια συσκευή transwell συν τη φόρτωση ενός στρώματος Matrigel επί της μεμβράνης βάσεως. Όπως ήταν αναμενόμενο, η θεραπεία SW εμπόδισε όλες τις τρεις κυτταρικές γραμμές από την εισβολή σε όλη την matrigel να φτάσει στην κάτω πλευρά της μεμβράνης βάσης (Σχ. 4Α, άνω πάνελ και κάτω αριστερό πλαίσιο). Επιπλέον, 36 ώρες έκθεσης σε υποδεικνύεται δόσεις SW ασκείται ασήμαντη αναστολή επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων (Σχ. 4Α, κάτω δεξιά πλαίσιο). Για την περαιτέρω αξιολόγηση της επίδρασης της ΝΔ για μετάσταση

in vivo

, χρησιμοποιήθηκε MDA-MB-231 μεταστατικό μοντέλο ποντικών. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4Β, από του στόματος χορήγηση του SW για 2 εβδομάδες μείωσε σημαντικά τον αριθμό των μεταστατικών εστιών στους πνεύμονες. Δεν εστιών στο ήπαρ μεταστατικό παρατηρήθηκαν σε αμφότερες τις ομάδες (S1 Σχ.)

(Α) Οι θάλαμοι Transwell προ-επικαλύφθηκαν με 60 μΙ αραίωσης matrigel (1: 4 σε μέσο χωρίς ορό). Πριν από την σπορά των κυττάρων. Τα κύτταρα επωάστηκαν με δεικνυόμενες δόσεις του SW για 36 ώρες πριν από την χρώση. Εκπρόσωπος εικόνες που εμφανίζονται στο άνω πίνακα. μπαρ κλίμακα, 200 μm. Τα δεδομένα της μετανάστευσης και κυτταρικής βιωσιμότητας προσδιορίστηκαν ποσοτικά και φαίνεται αντίστοιχα στα κατώτερο πάνελ, δεικνύεται ήταν σύνθετα αποτελέσματα από δύο ανεξάρτητα πειράματα με εις τριπλούν. Στήλες, σημαίνει? μπαρ, SD? NS, όχι στατιστικά σημαντική. (Β) Αριστερός πίνακας: αντιπροσωπευτικό εικόνες της H & amp? Ε βάφονται ιστούς του πνεύμονα σε PBS-και η ομάδα SW-θεραπεία. Εγκλεισμένα σε παραφίνη πνεύμονες τεμαχίσθηκαν κατά διαστήματα και & gt 30-μm? 10 MDA-MB-231 κύτταρα καρκίνου ταυτοποιήθηκαν ως μεταστατικές εστίες. Μεγέθυνση, 4 × (άνω) και 20 × (κατώτερο). Δεξιό πλαίσιο: ποσοτικοποίηση των πνευμόνων μεταστατικών εστιών σε PBS-και SW-αγωγή ομάδα ποντικών (η = 8 για κάθε ομάδα). Στήλες, σημαίνει? μπαρ, SD.

Η

ΝΔ ενισχύει την εστιακή πρόσφυση

Έχει αναφερθεί ότι ο αριθμός και το μέγεθος των συμφύσεων ήταν αντιστρόφως ανάλογη με την ταχύτητα της μετανάστευσης [24]. Για το λόγο αυτό πραγματοποιήσαμε διπλή φθορίζουσα χρώση των F-ακτίνης και βινκουλίνης να εκτιμηθεί η επίδραση, αν υπάρχει, των SGR για εστίασης πρόσφυση [20,24,25]. Μετά από έκθεση σε ΝΔ για 0,5 ώρες, HepG2 και Τ24 κύτταρα άρχισαν να εμφανίζουν ισχυρότερο σήμα βινκουλίνης κυρίως γύρω από την περιφέρεια του κυττάρου, εμφανίζοντας μια δεσμίδα-ομοειδών ή spot-όπως το σχήμα (σχ. 5Α). Αντίστοιχα, μεγάλες ίνες στρες σε όλο το σώμα των κυττάρων χάθηκαν, με F-ακτίνη ίνες σταδιακά μετατοπίζεται στο κελί περιφέρεια και συν-εντόπιση εκεί με βινκουλίνης, καθώς και. Εμείς ποσοτικά τις περιοχές και εντάσεις φθορισμού των χώρων πρόσφυση. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5Β, η περιοχή προσκόλλησης ανά κύτταρο αυξημένα κατά 0,5 ώρα και έφτασε πλατώ σε 1 ώρα σε κύτταρα HepG2 SW-θεραπεία, ενώ έχει ήδη επιτευχθεί κορυφή σε 0,5 ώρες μετά τη θεραπεία SW σε κύτταρα Τ24. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν σε ένταση ποσοτικού προσδιορισμού (Σχ. 5C).

(Α) HepG2 και Τ24 κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με SW (3,5 μg /μl) για υποδεικνυόμενους χρόνους και στη συνέχεια ανοσο-χρώση με Ρ-ακτίνης (FITC -phalloidin) και βινκουλίνης (κόκκινο). Πυρήνες αντιχρωματίζεται με DAPI (μπλε). Εκπρόσωπος εικόνες που εμφανίζονται. μπαρ κλίμακα, 100 μm. (Β) Η έκταση των τόπων προσκόλλησης ανά κύτταρο (όπου F-ακτίνη και βινκουλίνης συγχωνεύονται). Ορατή ήταν σύνθετα αποτελέσματα δύο ανεξάρτητα πειράματα (η = 50 κύτταρα). Στήλες, σημαίνει? μπαρ, SD. (Γ) Η ένταση φθορισμού των βινκουλίνης στα έμπλαστρα προσκόλληση ανά κύτταρο. Ορατή ήταν σύνθετα αποτελέσματα δύο ανεξάρτητα πειράματα (η = 50 κύτταρα). Στήλες, σημαίνει? μπαρ, SD.

Η

SW ανταγωνίζονται TGF-β1 που προκαλείται ανοδική ρύθμιση των γονιδίων που σχετίζονται με την εισβολής

Για να πάρετε μια βαθύτερη κατανόηση της πιθανής μηχανισμό βάση όλων αυτών των αποτελεσμάτων, πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση μικροσυστοιχιών γονιδιακής έκφρασης με κύτταρα HepG2 SW-θεραπεία. Βρήκαμε υπήρχαν 118 γονίδια με περισσότερα από 1,5 φορές αλλαγή έκφραση στα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με SW, ορισμένοι από αυτούς είχαν σχέση με την κυτταρική κινητικότητα, τον μεταβολισμό, και το οξειδωτικό στρες (Εικ. 6Α). Στη συνέχεια, αναλύσαμε ένα υποσύνολο των γονιδίων που σχετίζονται με τη διεισδυτικότητα κυττάρων με χρήση της βάσης δεδομένων STRING. Όπως φαίνεται στο Σχ. 6Β, τα περισσότερα από αυτά τα 12 γονίδια άμεσα ή έμμεσα ρυθμίζονται από το μονοπάτι TGF-β1, υποδεικνύοντας ότι μονοπάτι TGF-β1 μπορεί να εμπλέκεται σε SW-ρυθμιζόμενες φαινοτύπους. Real-time RT-PCR διεξήχθη για να αξιολογηθούν τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων 5, δηλαδή,

TGFBR1

,

NTS

,

ID 1

,

ID 2

, και

ID3

σε HepG2 και Τ24 κύτταρα επεξεργασμένα με ΤΟΡ-β1, με ή χωρίς SW. ΝΔ και μόνο μειωμένα επίπεδα

NTS

,

ID 1

,

ID2

, και

ID3

στα κύτταρα HepG2 και

TGFBR1

,

NTS

,

ID 1

, και

ID 2

στα κύτταρα Τ24. Από την άλλη πλευρά, ο ΤΟΡ-β1 είναι σημαντικά αυξημένα επίπεδα του mRNA των γονιδίων αυτών σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές (Σχ. 6C), επιβεβαιώνοντας ότι αυτά τα γονίδια είναι προς τα κάτω του σηματοδότηση TGF-β1. Ωστόσο, η πλειοψηφία του ΤΟΡ-β1 επαγόμενη αύξηση στην έκφραση γονιδίου εξουδετερώθηκαν με ταυτόχρονη θεραπεία με SW, εκτός από

ID1

σε κύτταρα HepG2 (εικ. 6C). Επιπλέον, παρατηρήσαμε επάνω ρυθμισμένη επίπεδα πρωτεΐνης του TGFBR1 σε ΤΟΡ-β1 επεξεργασμένου HepG2 και Τ24 κύτταρα, τα οποία αντιστράφηκε με SW (Εικ. 6D). Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η ανασταλτική επίδραση της ΝΔ επί σηματοδότησης ΤΟΡ-β1, αξιολογήσαμε την επίδραση της SW επί TGF-β1 επαγόμενη μετανάστευση. Όπως φαίνεται στο Σχ. 7, TGF-β1-προωθείται μετανάστευση ήταν σημαντικά καταργήθηκε με SW σε HepG2, MDA-MB-231 και τα κύτταρα Τ24, ενώ η βιωσιμότητα των κυττάρων δεν επηρεάστηκε από SW (Σχ. 7Α, Β και C).

(Α ) Η θερμότητα χάρτη της λειτουργικής εμπλουτισμό της differentialy εκφρασμένων γονιδίων από το αποτέλεσμα HepG2 τσιπ. Cluster 3.0 και το λογισμικό TreeView χρησιμοποιήθηκαν για τη δημιουργία του χάρτη θερμότητας. Κόκκινο: πάνω ρύθμιση έναντι σημαίνει? πράσινο: ρύθμιση προς τα κάτω σε σχέση με σημαίνουν. (Β) Το ρυθμιστικό δίκτυο μεταξύ των γονιδίων που σχετίζονται με την προσκόλληση, τη μετανάστευση και την εισβολή στο (Α) χρησιμοποιώντας τη βάση δεδομένων STRING. (C) σε πραγματικό χρόνο RT-PCR επαλήθευση των γονιδίων σε HepG2 και τα κύτταρα Τ24 σε επεξεργασία με ΤΟΡ-β1, με ή χωρίς SW. Ορατή ήταν σύνθετα αποτελέσματα από τρία ανεξάρτητα πειράματα με εις τριπλούν. Στήλες, σημαίνει? μπαρ, SD. (D) Επίδραση SW επί TGF-β1 που προκαλείται ανοδική ρύθμιση της TGFBR1 αξιολογήθηκε με ανοσοκηλίδωση. Ορατή ήταν αντιπροσωπευτικά αποτελέσματα από 3 ανεξάρτητα πειράματα.

Η

HepG2 (Α), MDA-MB-231 (Β) και κύτταρα Τ24 (C) σπάρθηκαν στα ένθετα transwell παρουσία ΤΟΡ-β1 συν ΝΔ. 12 ώρες αργότερα, τα κύτταρα χρωματίστηκαν και απεικονίζεται. Εκπρόσωπος εικόνες που εμφανίζονται στον αριστερό πίνακα. μπαρ κλίμακα, 100 μm. Τα δεδομένα της μετανάστευσης ποσοτικοποιήθηκαν και φαίνεται στο μεσαίο πλαίσιο. Η βιωσιμότητα των κυττάρων εκφράστηκε από το ποσοστό συμβολής των κυττάρων στο δεξί πλαίσιο. Ορατή ήταν σύνθετα αποτελέσματα από δύο ανεξάρτητα πειράματα με εις τριπλούν. Στήλες, σημαίνει? μπαρ, SD? NS, όχι στατιστικά σημαντική.

Η

Συζήτηση

SGR, επίσης γνωστή ως Sarsaparilla, αναφέρθηκε για να δείξει αντικαρκινική δυναμικό [8,21]. Αρκετές SGR περιέχουν βοτάνων που χρησιμοποιούνται στη Νοτιοανατολική Ασία είχαν αποδειχθεί ότι αναστέλλουν τον καρκίνο του

in vitro

και

in vivo

[20,26]. Η πλειοψηφία των προηγούμενων μελετών επικεντρώθηκαν στην ανασταλτική επίδραση της SGR στην ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων, και μόνο μερικά αξιολογηθεί η επίδρασή του στην ικανότητα εισβολής των καρκινικών κυττάρων. Μια φυτική φόρμουλα SGR περιέχει δείχθηκε να καταστέλλει τη μετάσταση πνευμονικού καρκινώματος [27]. Ενώσεις που απομονώνεται από SGR, δηλαδή 5-Ο-caffeoylshikimic οξύ, taxifolin και astilbin, έδειξαν να έχουν ανασταλτική επίδραση στην προσκόλληση και /ή μετανάστευση των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος [22]. Σε προηγούμενη μελέτη, βρήκαμε η αναστολή της κυτταρικής ανάπτυξης της SGR ήταν μια σχετικά μακροχρόνια επίδραση (& gt? 24 h) κάτω από υψηλές δόσεις [21]. Στην παρούσα μελέτη, για πρώτη φορά, ανέφεραν την ανασταλτική δράση του εκχυλίσματος SGR για την διεισδυτικότητα των τριών καρκινικών κυττάρων, πιθανόν μέσω της καταστολής του μονοπατιού TGF-β1. Θα πρέπει να αναφερθεί ότι όλα τα

in vitro

πειράματα πραγματοποιήθηκαν με χαμηλές δόσεις της ΝΔ στο σύντομο χρονικό διάστημα για να ελαχιστοποιηθεί η προκατάληψη προέκυψε από ΝΔ-επαγόμενη αναστολή της ανάπτυξης.

Focal πρόσφυσης είναι η βασική δομή μονάδα ενότητα της κυτταρικής προσκόλλησης, οι αλλαγές στη δομή ή η σύνθεση του θα μπορούσε να επηρεάσει τη δύναμη προσκόλλησης των κυττάρων στο σύνολο [24,25]. Ο σχηματισμός της εστιακής προσκόλλησης περνά από διάφορα στάδια, συμπεριλαμβανομένων των εν τω γεννάσθαι πρόσφυση, εστιακή σύνθετη και, στη συνέχεια, εστιακή πρόσφυση [25]. Το μέγεθος και η ωριμότητα των συμφύσεων έχουν αναφερθεί να σχετίζεται αντίστροφα με την ταχύτητα μετανάστευσης των κυττάρων [24]. Στην παρούσα μελέτη, παρατηρήσαμε μια σταδιακή μετατόπιση των επιθεμάτων πρόσφυσης από το σώμα κύτταρο σε κύτταρο περίμετρο στη ΝΔ επεξεργασμένου HepG2 και Τ24 κύτταρα, με ισχυρότερο σήμα βινκουλίνης και μεγαλύτερο μέγεθος προσκόλλησης επί του κυττάρου φλοιό. Το φαινόμενο αυτό ήταν, τουλάχιστον εν μέρει, οφείλεται σε μια χώρο- και τοποκατευθυνόμενη μετατόπιση των πρωτεϊνών προσκόλλησης που σχετίζονται ειδικά σε κύτταρα Τ24. Είναι ενδιαφέρον, SW-που προκαλείται από μεγάλη και σταθερή περιφερειακή συμφύσεις έμοιαζε με τις κινάση εστιακής προσκόλλησης (FAK) ελλιπή ως κύτταρα [25,28]. Επιπλέον, τα κύτταρα στερούνται είτε τυροσίνης φωσφατάσες όπως SHP-2 ή η Src κινασών παρουσίασε επίσης ένα παρόμοιο μοτίβο πρόσφυσης [24,29]. Ως εκ τούτου, η απομείωση της FAK-Src μονοπάτι θα μπορούσε να μεσολαβήσει αυτό το SW-επαγόμενη αποτέλεσμα, το οποίο απαιτεί περαιτέρω διερεύνηση.

Το αποτέλεσμα τσιπ έδειξε καταστολή της σηματοδότησης TGF-β1 σε κύτταρα SW-θεραπεία. Γονίδια συμπεριλαμβανομένων των

HMOX1

[30,31],

PSAT1

[32],

TGFBR1

[33],

EDNRA

[34,35],

NTS

[36,37],

ID 1

[38,39],

ID 2

[40,41] και

ID3

[42,43 ], όλα σχετίζονται με προσκόλληση κυττάρου, μετανάστευση και εισβολή, είτε άμεσα είτε έμμεσα ρυθμίζονται από μονοπάτι σηματοδότησης ΤΟΡ-β1. Η απενεργοποίηση του τομέα κινάσης TGFBR1 θα μπορούσε να εμποδίσει τη σηματοδότηση TGF-β1 από πολλαπλασιαστικό κάτω [33]. Εν τω μεταξύ, κατάργηση της σηματοδότησης ΤΟΡ-β1 χρησιμοποιώντας κυρίαρχο αρνητικό TGFBR θα μπορούσαν να μπλοκάρουν διακόπτης επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ)

in vivo

[44], υποδηλώνοντας ότι η καταστολή του TGFBR μπορεί να παρέχει ένα εφικτό μέσο για να καταστείλει σηματοδότηση ΤΟΡ-β1 . Στην παρούσα μελέτη, TGF-β1 που προκαλείται TGFBR1 ελαττώθηκε από ΝΔ. Επιπλέον, SW κατήργησε ΤΟΡ-β1 που προκαλείται ώθηση στη μετανάστευση, επιβεβαιώνοντας την ανασταλτική επίδραση της ΝΔ επί οδού TGF-β1.

Θα πρέπει να αναφερθεί ότι η σηματοδότηση TGF-β1 βρέθηκε να αυξάνει την κυτταρική προσκόλληση και την προώθηση της εστιακής προσκόλλησης [45], ως εκ τούτου, SW-επαγόμενη κυτταρική προσκόλληση και εστιακή πρόσφυση μπορεί να στηριχθεί σε διακριτούς μηχανισμούς. Αυτό εγείρει την πιθανότητα ότι SW-ανέστειλε καρκινικό κύτταρο διεισδυτικότητα θα μπορούσαν να είναι τα ολοκληρωμένα αποτελέσματα αρκετών γεγονότων σηματοδότησης. Άλλες οδοί προβλέπεται επίσης να επηρεαστούν από SW στην ανάλυση μικροσυστοιχιών, όπως ο μεταβολισμός και το οξειδωτικό στρες. Πρόσφατες μελέτες αναδεικνύουν τη συνεισφορά των απελευθερωμένης μεταβολισμό και το οξειδωτικό στρες σε καρκινικό κύτταρο εισβολής [46,47]. Είτε ΝΔ θα μπορούσε να αξιοποιήσει αυτές τις οδούς για τη ρύθμιση των καρκινικών κυττάρων εισβολής χρήζουν περαιτέρω διερεύνησης.

Μαζί, βρήκαμε SGR θα μπορούσε να προωθήσει την προσκόλληση των κυττάρων, ενδεχομένως, αυξάνοντας το μέγεθος και τη δύναμη των εστιακών συμφύσεων, και αναστέλλει τη μετανάστευση και την εισβολή των HepG2, MDA -ΜΒ-231 και Τ24 κύτταρα. Καταστολή του ΤΟΡ-β1 σηματοδότησης μερικώς συμβάλλει στην SW-επαγόμενη αναστολή της μετανάστευσης. Αν και αυτά τα αποτελέσματα ελήφθησαν από ένα υποσύνολο των καρκινικών κυτταρικών σειρών, η νέα αντικαρκινική λειτουργία του SGR μπορεί να παρέχει μία πιθανή μοριακή βάση για τη μελλοντική κλινική εφαρμογή της στη θεραπεία του καρκίνου.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 Σχ. Δεν μεταστατικές εστίες παρατηρήθηκε στο ήπαρ των ποντικών

Αντιπροσωπευτικές εικόνες του Η &?. Ε χρώση ιστών του ήπατος σε PBS-και ομάδα SW-θεραπεία. Εγκλεισμένα σε παραφίνη ήπατα τεμαχίστηκαν σε διαστήματα 30-mm και ˃10 καρκινικά κύτταρα MDA-MB-231 ταυτοποιήθηκαν ως μεταστατικές εστίες. μπαρ κλίμακα 200 mm, μεγέθυνση, × 10

doi:. 10.1371 /journal.pone.0118287.s001

(ΔΕΘ)