Αφηρημένο

Ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι σήμερα το πιο συχνά διαγιγνώσκεται κακοήθεια στις δυτικές χώρες. Είναι πιο διαδεδομένη στους άνδρες μεγαλύτερης ηλικίας με 75% των περιπτώσεων περιστατικό άνω των 65 ετών. Μετά ριζική προστατεκτομή, περίπου 30% των ανδρών αναπτύσσουν κλινικά επανάληψη με τα επίπεδα αντιγόνου ειδικού προστατικού αυξημένα στον ορό. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να διαλευκάνουν των μοριακών μηχανισμών στους οποίους βασίζεται PCa εξέλιξη για την ανάπτυξη νέων διαγνωστικών /θεραπευτικών προσεγγίσεων. Σε αυτή τη μελέτη, αυτό έχει ως στόχο να συγκρίνουν τα χαρακτηριστικά microRNA (miRNA) των περιοδικών και μη επαναλαμβανόμενα ιστούς όγκων του προστάτη για να διερευνήσει την πιθανή εμπλοκή των miRNAs στην εξέλιξη της ΣΕΣΣ. Ολικό RNA από 41 επαναλαμβανόμενες και 41 μη επαναλαμβανόμενα δείγματα ιστού του προστάτη χρησιμοποιήθηκαν για να διερευνήσει την υπογραφή miRNA σε δείγματα προστάτη. Πρώτα απ ‘όλα, 20 επαναλαμβανόμενες και 20 μη επαναλαμβανόμενα δείγματα προστάτη είχαν προφίλ χρησιμοποιώντας miRNA μικροσυστοιχιών μάρκες. Των διαφορικά εκφρασμένων miRNAs, miR-1, miR-133b και miR-145 * επιλέχθηκαν για περαιτέρω επικύρωση με qRT-PCR σε ένα διαφορετικό σύνολο 21 επαναλαμβανόμενες και 21 μη επαναλαμβανόμενα δείγματα του προστάτη. Τα δεδομένα αναλύθηκαν στατιστικά με τη χρήση t-test δύο όψεων του Student, τεστ συσχέτισης Pearson, λειτουργικού χαρακτηριστικού δέκτη ανάλυση. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το miR-1 και mir-133b έχουν μειωτικά σημαντικά σε επαναλαμβανόμενες προστάτη δείγματα σε σύγκριση με μη-επαναλαμβανόμενα δείγματα προστάτη και έχουν επαρκή δύναμη να διακρίνει επαναλαμβανόμενα δείγματα από μη επαναλαμβανόμενες αυτοί από μόνοι τους. Εδώ, αναφέρουμε ότι η σχετική έκφραση του miR-1 και mir-133b έχουν μειωθεί σημαντικά σε επαναλαμβανόμενες προστάτη δείγματα σε σύγκριση με μη-επαναλαμβανόμενα δείγματα ΣΕΣΣ, η οποία μπορεί να χρησιμεύσει ως νέοι βιολογικοί δείκτες για την πρόβλεψη της εξέλιξης του προστάτη.

Παράθεση: Καρατάς ΤΗΣ, Guzel Ε, Suer Ι, Ekici ID, Caskurlu Τ, Creighton CJ, et al. (2014) miR-1 και miR-133b εκφράζονται διαφορικά σε ασθενείς με υποτροπιάζοντα καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 9 (6): e98675. doi: 10.1371 /journal.pone.0098675

Επιμέλεια: Xin Yuan-Γκουάν, το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Κίνα

Ελήφθη: 13 του Μάρτη 2014? Αποδεκτές: 30 Απριλίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 26 του Ιουνίου 2014

Copyright: © 2014 Καρατάς et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. έχουν δεδομένων Array κατατεθεί στο Gene Expression Omnibus (GEO) υπό τον αριθμό πρόσβασης GSE55323

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή υποστηρίχθηκε από το Επιστημονικό και Τεχνολογικό Ερευνητικό Συμβούλιο της Τουρκίας (TUBITAK) (αριθμός επιχορήγηση 108S051), καθώς και ως εν μέρει από το Εθνικό Ινστιτούτο των Ηνωμένων Πολιτειών της Υγείας (CJC και ΜΙ, επιχορήγηση P30 CA125123). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. CJC είναι ένα PLoS ONE Συντακτική μέλος του Διοικητικού Συμβουλίου και αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων να PLoS One Editorial πολιτικές και κριτήρια.

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι σήμερα το πιο συχνά διαγιγνώσκεται κακοήθεια και η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στους άνδρες ηλικίας άνω των 50 ετών οι δυτικές χώρες [1]. Προστάτη έχει μια τάση να είναι πολύ πιο διαδεδομένη σε ηλικιωμένους άνδρες με 75% των περιπτώσεων περιστατικό άνω των 65 ετών [2]. Ριζική προστατεκτομή, ριζική ακτινοθεραπεία και ορμονοθεραπεία κατάλυσης οι προτίμηση εφαρμόζονται τεχνικές για πρώιμου σταδίου κλινικά εντοπισμένο όγκων να θεραπεύσει την ασθένεια, πάντως, αυτές οι τεχνικές δεν πρέπει απαραίτητα παρέχουν ενισχυμένη ποσοστά επιβίωσης [3] και σχεδόν το 30% των ανδρών αναπτύσσουν κλινικά επανάληψη με αυξημένη αντιγόνο (PSA) επίπεδα ειδικού προστατικού ορού [4]. Από την άλλη πλευρά, για τους προχωρημένους και μεταστατικούς όγκους, η χημειοθεραπεία, η οποία είναι η μόνη επιλογή, ως επί το πλείστον δεν παρέχει θετική κλινική έκβαση [5]. Ως εκ τούτου, έχει μεγάλη σημασία για την κατανόηση των μοριακών μηχανισμών που διέπουν την εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη για την ανάπτυξη νέων διαγνωστικών και θεραπευτικών προσεγγίσεων.

Τα microRNAs (miRNA) είναι ενδογενώς συντίθενται, ρυθμιστικές μη-κωδικοποίησης μικρά RNAs που αποτελείται από περίπου 20 νουκλεοτίδια και θεωρούνται ως μία νέα κατηγορία των ρυθμιστικών γονιδίων. Καταστέλλουν έκφραση των στόχων τους μέσω αποικοδόμησης του mRNA ή την αναστολή της μεταφράσεως, ως αποτέλεσμα της ατελούς σύνδεσης προς 3 ‘μη μεταφρασμένης περιοχές (3’UTR) των mRNA [6]. Τα miRNAs υποτίθεται ότι ρυθμίζουν την έκφραση σχεδόν το 60% των ανθρώπινων γονιδίων [7]. Περίπου τα μισά από τα σχολιασμένη ανθρώπινα miRNAs βρίσκονται σε εύθραυστη περιοχές του γονιδιώματος που υποδηλώνει ότι αυτά τα μικρά μόρια θα μπορούσαν να έχουν μια ζωτική λειτουργία στην παθογένεση πολλών ασθενειών, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου [8], [9]. Έχουν αποδειχθεί ότι είναι σε θέση να διακρίνουν καταστάσεις διαφοροποίηση πολλών κακοηθειών περιλαμβανομένων του μαστού, του πνεύμονα και του κόλου. Επιπλέον, υπάρχουν μελέτες που προτείνουν miRNA προφίλ έκφρασης μπορούν να διακρίνουν τα κακοήθη από μη κακοήθεις ιστούς του προστάτη [10], [11]. Υπάρχουν, ωστόσο, ένας περιορισμένος αριθμός αναφορών στη βιβλιογραφία σπούδασε miRNAs στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη.

Mirna προφίλ μέσω μικροσυστοιχίες είναι μια πολύτιμη τεχνική για να καθορίσουν μια υπογραφή miRNA, που είναι απαραίτητα σημαντικό να καταλάβουμε το γενικό και ειδικές αλλοιώσεις έκφραση μεταξύ διακριτών τύπων ιστών [12], [13]. Σε αυτή τη μελέτη, με στόχο να συγκρίνουν τα χαρακτηριστικά miRNA των περιοδικών και μη επαναλαμβανόμενα ιστούς όγκων του προστάτη για τους ρίχνει φως σε μια πιθανή συμμετοχή των miRNAs στην εξέλιξη του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς

RNAs απομονώθηκαν από 41 επαναλαμβανόμενες και 41 μη επαναλαμβανόμενα καρκίνους από ρίζα προστατεκτομές, το οποίο περιείχε τουλάχιστον 70% του ιστού του όγκου, τα οποία ελήφθησαν από Baylor College of Medicine πρόγραμμα Καρκίνος του προστάτη. Υποτροπή ορίστηκε ως δύο διαδοχικές PSAs ορού μεγαλύτερες από 0,2 ng /ml. Οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν για μέχρι PSA υποτροπή ή τουλάχιστον 4 έτη (για τις μη επαναλαμβανόμενες περιπτώσεις). Αυτή η μελέτη έχει εγκριθεί από μια εσωτερική επιτροπή δεοντολογίας του Baylor College of Medicine. Οι ασθενείς συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη μετά από γραπτή συγκατάθεση τους. Τα χαρακτηριστικά των περιοδικών και μη επαναλαμβανόμενα ασθενείς συνοψίζονται στον Πίνακα 1.

Η

Σύνολο Απομόνωση RNA

Το συνολικό RNA από 41 επαναλαμβανόμενες και 41 δείγματα μη επαναλαμβανόμενες ιστό χρησιμοποιώντας ΤπζοΙ (Invitrogen , San Diego, CA) αντιδραστήριο σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι καθαρότητες και τις συγκεντρώσεις των δειγμάτων RNA προσδιορίστηκαν φασματοφωτομετρικά χρησιμοποιώντας NanoDrop ND-2000c (Thermo Fisher Scientific, Inc., Wilmington, DE). ακεραιότητα του RNA ελέγχθηκε χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση γέλης και επιτόπιου ελέγχου νουκλεϊκών οξέων ποσοτικός Kit (Sigma).

Mirna μικροσυστοιχιών και δεδομένων

Ανάλυση

100 ng ολικού RNA από 20 επαναλαμβανόμενες και 20 μη-επαναλαμβανόμενα δείγματα είναι σημασμένο με Cy3 χρησιμοποιώντας Agilent miRNA κιτ επισήμανσης ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Σημασμένα RNAs είναι μετουσιώθηκε και υβριδοποιήθηκε σε Agilent 8 × 15 k miRNA μικροσυστοιχιών V2 αποτελείται από 799 ανιχνευτές στοχεύει σε μια ολοκληρωμένη συλλογή από 723 ανθρώπων και των 76 ανθρώπινα ιογενή miRNAs με ανιχνευτές ελέγχου από Sanger miRBase (αφήστε 10.1) στους 55 ° C για 20 ώρες θερμότητας. Μετά την υβριδοποίηση και μετα-υβριδοποίησης πλύσεις, διαφάνειες σαρώθηκαν αμέσως Agilent μικροσυστοιχιών σαρωτή με SureScan τεχνολογία υψηλής ανάλυσης (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). Χαρακτηριστικό Εξαγωγή v10.7.3.1 (Agilent Technologies, CA), το λογισμικό χρησιμοποιήθηκε για να εξαγάγετε όλα τα χαρακτηριστικά των δεδομένων που λαμβάνονται από τις σαρωμένες εικόνες και λογισμικού Bioconductor χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των πρώτων στοιχείων, τα οποία είχαν ομαλοποιηθεί από quantile εξομάλυνση. τιμές P (δύο όψεων t-test) και διπλώστε τις αλλαγές μεταξύ των ομάδων σύγκριση υπολογίστηκαν, χρησιμοποιώντας δεδομένα log-μετασχηματιστεί. Από 15.714 ανιχνευτών, ο αριθμός των αληθώς θετικά θα πρέπει να υπερβαίνει κατά πολύ 157 για την αναμενόμενη Λάθος Discovery Rate (FDR) πρέπει να θεωρηθεί χαμηλή (χρησιμοποιώντας τη μέθοδο με Storey et al. [14]). Τα ονομαστικά σημαντικές ανιχνευτές δεν υπερβαίνουν την τύχη αναμένεται από πολλαπλές δοκιμές, η οποία κατέστησε αναγκαία την πρόσθετη επικύρωση επιλέξτε miRNAs. έχουν δεδομένων Array κατατεθεί στο Gene Expression Omnibus (GEO, αριθμός ένταξης GSE55323).

Σύνθεση cDNA και ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR

Για να επικυρώσετε την διαφορική έκφραση του miR-1, ΜΙΚ 133Β και miR-145 *, RNA δείγματα από ένα διαφορετικό σύνολο 21 επαναλαμβανόμενες και 21 μη επαναλαμβανόμενα ασθενείς μελετήθηκαν. Για πειράματα miRNA qRT-PCR, ίσες ποσότητες του συνολικού RNA (30 ng) από κάθε δείγμα χρησιμοποιήθηκαν για τη σύνθεση του DNA πρώτου κλώνου (cDNA) με τη χρήση miRNA ειδικούς εκκινητές αγοράστηκαν από την Applied Biosystems και «TaqMan microRNA Kit αντίστροφη μεταγραφή» σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Applied Biosystems, Foster City, CA). TaqMan HSA-miR-1 (Δοκιμασία ID: 002222), -133b (Δοκιμασία ID: 002247) και -145 * (Δοκιμασία ID: 002149). Κιτ ενίσχυσης ελήφθησαν από την Applied Biosystems (Foster City, CA)

ανάλυση έκφρασης miRNA με ποσοτική RT-PCR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα Roche LightCycler480-ΙΙ σε πραγματικό χρόνο θερμικό κυκλοποιητή (Roche, Ελβετία). TaqMan καθολική Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA) χρησιμοποιήθηκε και microRNA ειδικών ανιχνευτών αγοράστηκαν από την Applied Biosystems (Δανία). δεδομένα έκφρασης miRNA ομαλοποιήθηκαν να RNU43. Κάθε πείραμα διεξήχθη εις διπλούν. Η σχετική ποσοτική ανάλυση διεξήχθη με τη μέθοδο δέλτα-δέλτα-Ct όπως περιγράφηκε προηγουμένως [15].

Στατιστική Ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση t-test δύο όψεων Student. Η τιμή p & lt? 0,05 θεωρήθηκε ως στατιστικά σημαντική. τεστ συσχέτισης Pearson χρησιμοποιήθηκε για να δείξει τη συσχέτιση του miR-1 και miR-133b έκφραση σε δείγματα προστάτη. λειτουργούν χαρακτηριστικό (ROC) καμπύλη δέκτη χαράχθηκαν χρήση του λογισμικού SPSS 15.0 για να δείτε τη δύναμη του PSA και επικυρώνονται miRNAs να διαφοροποιήσουν τα επαναλαμβανόμενα δείγματα προστάτη από μη επαναλαμβανόμενες δείγματα. Για την ανάλυση ROC, η λογιστικής παλινδρόμησης διεξήχθη και οι προβλεπόμενες πιθανότητες υπολογίζονται για κάθε μεμονωμένο miRNA ή miR-1 και miR-133b μαζί. Στη συνέχεια, η περιοχή κάτω από την καμπύλη υπολογίζεται με διάστημα εμπιστοσύνης 95%. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη γίνεται αποδεκτή διαφέρει σημαντικά από 0,5, όταν το p-value είναι μεγαλύτερη από 0,5 την έννοια ότι η λογιστική παλινδρόμηση, κατατάσσει την ομάδα σημαντικά καλύτερη από ό, τι κατά τύχη.

Αποτελέσματα

Ένα σύνολο των 41 επαναλαμβανόμενες και 41 μη-επαναλαμβανόμενες όγκους από ριζικές προστατεκτομές, οι οποίες ελήφθησαν από Baylor College of Medicine του προστάτη του καρκίνου, συμπεριλήφθηκαν στην παρούσα μελέτη για την εκτέλεση των miRNAs προφίλ (Πίνακας 1). Η μέση ηλικία κατά τη στιγμή της επέμβασης των ασθενών προστάτη με υποτροπή ήταν 62,8 ± 6, ενώ αυτοί χωρίς υποτροπή είχε μέσο όρο ηλικίας 61,7 ± 7,2 (δεν είναι σημαντική, p = 0,54, Mann Whitney). Περισσότερο από το 80% των ασθενών και στις δύο ομάδες ήταν μη-ισπανόφωνοι Καυκάσιους. Μέση μήνες από τη λειτουργία έως 1

ου υποτροπή ή η τελευταία κανονική αξιολόγηση για επαναλαμβανόμενες και μη επαναλαμβανόμενες ασθενείς προστάτη ήταν 22.63 ± 3.89 και 76.59 ± 2.87, αντίστοιχα. επίπεδα PSA κυμαίνεται 4,2 με 100 και 3,1 – 40,3 σε ασθενείς με υποτροπή και μη υποτροπής, αντίστοιχα. Όπως ήταν αναμενόμενο, η μέση προεγχειρητική επίπεδο PSA των επαναλαμβανόμενων ασθενείς ήταν σχεδόν διπλάσιο από αυτό των μη επαναλαμβανόμενων ασθενείς (22 έναντι 11,3 ng /ml). Σε επαναλαμβανόμενες ασθενείς μόνο 3 δείγματα ήταν Gleason 6 (3 από 41), ενώ για τα μη επαναλαμβανόμενα ασθενείς 14 από 41 δείγματα ήταν Gleason 5 ή 6. Ομοίως, 15, 40 ριζικές προστατεκτομές από επαναλαμβανόμενες ασθενείς για τους οποίους υπήρχαν διαθέσιμα στοιχεία έδειξαν σπερματοδόχων εισβολή κύστη, αλλά μόνο 4 από 41 μη επαναλαμβανόμενες καρκίνων είχαν αυτή τη δυνατότητα. Έτσι, ενώ τα δημογραφικά χαρακτηριστικά των δύο ομάδων είναι πολύ παρόμοια, οι επαναλαμβανόμενες καρκίνοι είναι πολύ πιο πολύ επιθετική με βάση την κλινική και παθολογικά χαρακτηριστικά.

Για να συγκρίνετε τα προφίλ miRNA των περιοδικών και μη επαναλαμβανόμενα δείγματα προστάτη, πραγματοποιήσαμε ανάλυση έξω μικροσυστοιχιών χρησιμοποιώντας 20 δείγματα από κάθε ομάδα. ανάλυσης μικροσυστοιχιών 20 επαναλαμβανόμενες και 20 μη-επαναλαμβανόμενα δείγματα αποκάλυψε ότι το 93 ανιχνευτές έχουν διαφορικά εκφράζεται με μια τιμή ρ μικρότερη από 0,01. Από τα 93 ονομαστικά σημαντικές ανιχνευτές που αναφέρθηκαν, υπάρχουν 84 χαρτογράφησης για την ανθρώπινη miRNAs, οι οποίες παρέχονται στον Πίνακα S1.

Μια αναπαράσταση χάρτη θερμότητας των διαφορικά εκφρασμένων miRNAs επιδεικνύεται στο Σχήμα 1Α. Ανάμεσα στα σημαντικά απελευθερωμένη miRNAs, mir-1, mir-133Β, και mir-145 * (Εικόνα 1Β) επιλέχθηκαν για περαιτέρω qRT-PCR επιβεβαίωση σε ένα διαφορετικό σύνολο των περιοδικών και μη επαναλαμβανόμενα δείγματα του προστάτη.

αναπαράσταση (Α) Heat-χάρτη της σημαντικά απελευθερωμένης miRNAs σε επαναλαμβανόμενες προστάτη δείγματα εναντίον μη επαναλαμβανόμενα δείγματα του προστάτη. (Β) Heat-χάρτη εκπροσώπηση του miR-1, miR-133b και miR-145 * σε επαναλαμβανόμενες προστάτη δείγματα εναντίον μη επαναλαμβανόμενα δείγματα του προστάτη.

Η

Τα αποτελέσματα qRT-PCR έδειξε ότι η έκφραση επίπεδο των miR-1 ήταν σημαντικά μειωμένη σε επαναλαμβανόμενα δείγματα προστάτη από εκείνο των μη επαναλαμβανόμενων δείγματα ιστού του προστάτη (Σχήμα 2Α, p = 0,036). Προς τα κάτω ρύθμιση mir-133b σε επαναλαμβανόμενες προστάτη (Σχήμα 2Β, p = 0,012) Επιβεβαιώθηκε επίσης. Αντιθέτως, αν και υπάρχει μια ελαφρά μείωση στο επίπεδο έκφρασης του miR-145 * σε επαναλαμβανόμενα δείγματα σε σύγκριση με μη-επαναλαμβανόμενες αυτά, η διαφορά δεν ήταν στατιστικώς σημαντική (Σχήμα 2C, ρ & gt? 0,05). Η αξιολόγηση του συσχετισμού των miR-1 και miR-133b έκφραση σε τόσο επαναλαμβανόμενες και μη επαναλαμβανόμενες δείγματα προστάτη, χρησιμοποιήσαμε ανάλυση συσχέτισης Pearson, η οποία κατέδειξε ότι το miR-1 έκφραση συσχετίζεται έντονα με miR-133b έκφραση σε δείγματα ιστού του προστάτη (Σχήμα 3, συντελεστής συσχέτισης (R) = 0,780).

επίπεδα Σχετική έκφραση (Α) miR-1, (Β) miR-133b, και (Γ) miR-145 * σε 20 επαναλαμβανόμενες προστάτη δείγματα σε σύγκριση με 20 μη-επαναλαμβανόμενα δείγματα του προστάτη. RNU43 χρησιμοποιήθηκε για την εξομάλυνση της έκφρασης των miRNAs αναλύσεις.

Η

Για να δοκιμάσετε τη δύναμη του PSA, miR-1 και miR-133b για τη διάκριση επαναλαμβανόμενες προστάτη δείγματα από μη επαναλαμβανόμενες δείγματα, το λειτουργικό δέκτη καμπύλες (ROC) χαράχθηκαν, η οποία έδειξε ότι το PSA, miR-1 και miR-133b είχε περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC) των 0.950, 0.661 και 0.692, αντίστοιχα, γεγονός που αποδεικνύει την επάρκεια τους να έχουν τη δύναμη να διακρίνει επαναλαμβανόμενα δείγματα από μη επαναλαμβανόμενες αυτοί από μόνοι τους. Επιπλέον, όταν miR-1 και miR-133b αξιολογήθηκαν μαζί έχουν καλύτερη εκπροσώπηση ισχύος (AUC? 0,719). Από την περίπτωση όπου miRNAs αναλύθηκαν ξεχωριστά (Σχήμα 4)

Καμπύλες για μεμονωμένες miRNAs και συνεργατική δύναμη τους να διακρίνει δύο ομάδες των ασθενών που αποτελείται από 20 επαναλαμβανόμενα και 20 μη επαναλαμβανόμενα δείγματα του προστάτη.

η

Συζήτηση

PCA είναι μια εξαιρετικά ετερογενής νόσος, για την οποία σημερινή προγνωστικούς δείκτες κυρίως αποτυγχάνουν να καθορίσουν το αποτέλεσμα και σχεδόν το 30% των ασθενών προστάτη εμφανίσουν υποτροπή μετά από μια επιτυχημένη ριζική προστατεκτομή ή συμπληρωματική θεραπεία [16], [17]. Επί του παρόντος, το στάδιο πρωτογενούς όγκου, επίπεδο PSA ορού και βιοψία Gleason βαθμού χρησιμοποιούνται κατά τη διάρκεια κλινικών εκτίμηση για την πρόβλεψη της παθολογικής στάδιο του όγκου και την αποτελεσματικότητα της θεραπείας, ωστόσο, καμία ή ακόμα και ένας συνδυασμός αυτών των δεικτών είναι επαρκείς για να προβλέψει αξιόπιστα αποτελέσματα για τους ασθενείς [3], [4]. Μια κριτήρια συναίνεση σχετικά με τον ορισμό της βιοχημικής υποτροπής με βάση τα επίπεδα του PSA, δεν έχει καθιερωθεί, το οποίο εμποδίζει τη δημιουργία ενός προτύπου προγνωστικό μοντέλο σε άντρες που έλαβαν ριζική προστατεκτομή [18]. Εκτός αυτού, η ανίχνευση του PSA στον ορό των ασθενών προστάτη μετά από ριζική προστατεκτομή μπορεί να οφείλεται στην παρουσία του υπολειμματικού καλοήθους ιστού του προστάτη, η οποία misguides επαγγελματίες να καταλήξουμε σε μια ψευδή θετική διάγνωση [19]. Επιπλέον, οι ασθενείς με παρόμοιο επίπεδο PSA στον ορό, Gleason στείλει και παθολογικών στάδιο έχουν δειχθεί ότι έχουν διακριτές κλινικές εκβάσεις, λόγω της ετερογένειας των υποτύπων σε μοριακό επίπεδο [20], [21].

Λόγω της γεγονός ότι τα νέα προγνωστικούς βιοδείκτες χρειάζονται επειγόντως να αναπτύξουν πιο αποτελεσματικές, βελτιστοποιημένο και εξατομικευμένες στρατηγικές θεραπείας, αρκετές υποτιθέμενη προγνωστικούς βιοδείκτες προτάθηκαν τα τελευταία χρόνια, η οποία επιτεύχθηκε περιορισμένη επιτυχία στη διαστρωμάτωση των ασθενών [22]. Για παράδειγμα, διάφορα γονίδια, τα οποία ανιχνεύονται ειδικά στον αδένα του προστάτη, όπως η ανθρώπινη KLK2, PCA3, προστατικό αντιγόνο μεμβράνης ειδικό και αντιγόνο βλαστικών προστάτη κυττάρων προτάθηκαν ως χρήσιμες προγνωστικοί δείκτες για την πρόβλεψη των παθολογικών χαρακτηριστικών σε ασθενείς PCa [23]. Altered εκφράσεις του Bcl-2 και Bax επίσης σχετίζεται με επακόλουθη ανάπτυξη βιοχημικής υποτροπής [18]. Ωστόσο, μεταξύ των γονιδίων που προτείνονται ως προγνωστικός βιοδείκτη ανάλογα με γονιδιακή έκφραση μεγάλης κλίμακας προφίλ μελέτες, μόνο λίγα γονίδια θα μπορούσαν να επικυρωθούν σε πολλαπλές μελέτες [24]. Επιπλέον, πολλά μοντέλα πρόβλεψης κλινικής κίνδυνος αναπτύχθηκαν για να προβλέψουμε την βιοχημική κίνδυνο υποτροπής ή κλινική αποτυχία, αν και αυτά τα μοντέλα επίσης απέτυχε να αξιόπιστα και με ακρίβεια την εκτίμηση της κλινικής έκβασης λόγω ετερογένεια της ασθένειας [25]. Λαμβάνοντας υπόψη τους περιορισμούς των σημερινών προγνωστικά εργαλεία και μοντέλα, είναι σημαντικό να ενσωματώσει νέα βιοδείκτες στα υπάρχοντα μοντέλα για να ξεπεραστούν αυτοί οι περιορισμοί κατά τη διάρκεια των διαδικασιών κλινικής λήψης αποφάσεων.

Ως εκ τούτου, είναι ζωτικής σημασίας στόχος στην τρέχουσα έρευνα για τον καρκίνο του προστάτη για να μάθετε αποτελεσματική προγνωστικοί μοριακοί βιοδείκτες που θα βοηθήσουν με ακρίβεια τον εντοπισμό ασθενών με επιθετική και μεταστατική νόσο, προκειμένου να κατευθύνει τις θεραπευτικές αποφάσεις και να καθορίσει τους ασθενείς που χρειάζεται στενότερη παρακολούθηση και εντατική φροντίδα. Επιπλέον, η ταυτοποίηση βιοδεικτών που έχουν το δυναμικό να προβλέψει επανεμφάνιση μετά από ριζική προστατεκτομή θα είναι υψίστης κλινικής σημασίας για να αποφασίσει κατά πόσον απαιτείται επικουρική θεραπεία. Τέτοια βιοδείκτες θα είναι ιδιαίτερα πολύτιμη για τους ασθενείς με διακριτά αποτελέσματα αν και έχουν παρόμοια κλινικά χαρακτηριστικά.

Η πρώτη επίπτωση των miRNAs στη βιολογία του καρκίνου έχει περιγραφεί μέσω της ανίχνευσης του miR-15 και miR-16 προς τα κάτω ρύθμιση σε χρόνιες Β κυττάρων λεμφοκυτταρικές λευχαιμίες [26]. Από τότε, διάφορες miRNAs συνδέθηκαν με παθογένεση όγκων παίζοντας ρόλο στην έναρξη, την εξέλιξη και τη μετάσταση του καρκίνου [27], [28]. Εκτός από την διερεύνηση της διαφορικής έκφρασης των miRNAs στον καρκίνο, είναι σημαντικό να εξερευνήσουν τα προφίλ των miRNAs των δειγμάτων για να μάθετε μια ένωση της έκφρασης των miRNAs με την κλινική έκβαση.

miR-1 και miR-133b, που κωδικοποιείται από το miR -1 /133α και miR-206 /133b συστάδες, υποδηλώνονται ως μυο-ειδικό miRNAs [29] και έχουν αναφερθεί να μειωτικά συχνά σε διάφορους τύπους όγκων [30]. Εκτός αυτού, έκτοπη υπερέκφραση τους έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλει την κυτταρική ανάπτυξη, μετανάστευση κυττάρου και διεγείρει απόπτωση σε διάφορους τύπους καρκίνων [30]. miR-1 έχει πρόσφατα προταθεί ως προγνωστικός δείκτης στο PCA, ώστε να προβλεφθεί η επανάληψη [31]. ρύθμιση προς τα κάτω της μπορεί να εμπλέκεται σε προστάτη επανάληψης ενδελεχή αυξημένα επίπεδα των στόχων της. Για παράδειγμα, η υπερέκφραση του CXCR4 και SDF-1 άλφα, όπως επικυρώθηκαν οι στόχοι του miR-1 [32], συνδέθηκαν με τοπική υποτροπή και μακρινή μετάσταση στον προστάτη [33] και την κακή πρόγνωση σε παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα του πόρου σταδίου ΙΙ [34], αντίστοιχα. Προς τα πάνω ρύθμιση NOTCH3, ένα ογκογόνο στόχο miR-1, έχει επίσης αποδειχθεί να συνδέσει με προστάτη υποτροπής [35]. Όσον αφορά το ρόλο του miR-133b σε επανάληψη, αυτό έχει συσχετισθεί με τη συνολική επιβίωση και τη μετάσταση σε καρκίνο του παχέος εντέρου [36] και προτείνεται ως προγνωστικός βιοδείκτη για την PCA υποτροπή σε μια πολύ πρόσφατη μελέτη [37]. Αυξημένα επίπεδα των επικυρωμένων στόχων miR-133b όπως CXCR4 [38], FGFR1 [39], FSCN1 [40] έχει συνδεθεί με την πρόγνωση των διαφόρων μορφών καρκίνου.

Συμπεράσματα

Οι σημερινές τεχνικές κάνουν δεν παρέχουν κατ ‘ανάγκη ενισχυμένης ποσοστά επιβίωσης για τους ασθενείς του προστάτη και σχεδόν το 30% των ανδρών αναπτύσσουν κλινική υποτροπή με τα επίπεδα του αντιγόνου ειδικού προστατικού αυξημένα στον ορό. Ως εκ τούτου, είναι υψίστης σημασίας να διαλευκάνουν των μοριακών μηχανισμών που διέπουν προστάτη εξέλιξη για την ανάπτυξη νέων και αποτελεσματικών διαγνωστικών /θεραπευτικών εργαλείων. Εδώ, αναφέρουμε ότι το miR-1 και mir-133b έχουν μειωτικά σημαντικά σε επαναλαμβανόμενες προστάτη δείγματα σε σύγκριση με μη-επαναλαμβανόμενα δείγματα ΣΕΣΣ, η οποία μπορεί να χρησιμεύσει ως νέοι βιολογικοί δείκτες για την πρόβλεψη της εξέλιξης του προστάτη.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακας S1.

Ο κατάλογος των διαφορικά εκφρασμένων miRNAs σε επαναλαμβανόμενες εναντίον μη επαναλαμβανόμενα δείγματα καρκίνου του προστάτη

doi:. 10.1371 /journal.pone.0098675.s001

(XLS)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Yiqun Zhang για τεχνική βοήθεια στην ανάλυση μικροσυστοιχιών.