Αφηρημένο

μακροφάγων ανασταλτική κυτοκίνης-1 (MIC-1 /GDF15), μια αποκλίνουσα μέλος της TGF-β υπεροικογένεια, είναι υπερ-εκφράζεται από πολλούς κοινούς καρκίνους συμπεριλαμβανομένων αυτών του προστάτη (PCA) και έκφρασή του είναι συνδεδεμένο με αποτέλεσμα τον καρκίνο. Έχουμε αξιολόγησε την επίδραση της MIC-1 /GDF15 υπερέκφραση για την ανάπτυξη του προστάτη και την εξάπλωση στο TRAMP διαγονιδιακό μοντέλο της αυθόρμητης καρκίνου του προστάτη. ποντίκια TRAMP διασταυρώθηκαν με MIC 1-/GDF15 υπερεκφράζουν ποντίκια (MIC-1

FMS) για να παράγει συγγενικά TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια. ποσοστό επιβίωσης, το μέγεθος του όγκου του προστάτη, ιστοπαθολογικές βαθμούς και την έκταση των μεταστάσεων μακρινό οργάνου συγκρίθηκαν. Η μετάσταση του TC1-T5, ανεξάρτητο TRAMP κυτταρική γραμμή που έχει έλλειψη ανδρογόνων MIC-1 έκφρασης /GDF15, συγκρίθηκε με ένεση ενδοφλεβίως σε MIC-1

fms και συγγενικά C57BL /6 ποντίκια. Ενώ TRAMP

fmsmic-1 επιβίωσαν κατά μέσο όρο 7,4 εβδομάδων πλέον, είχαν σημαντικά μικρότερες ουροποιογεννητικού (GU) όγκων και κάτω προστάτη ιστοπαθολογικές βαθμούς από ό, τι τα ποντίκια TRAMP, περισσότερα από αυτά τα ποντίκια ανέπτυξαν απομακρυσμένες μεταστάσεις όργανο. Επιπλέον, μια αύξηση του αριθμού των αποικιών όγκου πνεύμονα TC1-T5 παρατηρήθηκαν σε MIC-1

FMS ποντίκια από συγγενή WT ποντικούς C57BL /6. Οι μελέτες μας δείχνουν έντονα ότι MIC-1 /GDF15 έχει πολύπλοκες δράσεις για τη συμπεριφορά του όγκου: περιορίζει την τοπική ανάπτυξη του όγκου, αλλά μπορεί με την πάροδο της νόσου, την προώθηση μεταστάσεις. Όπως MIC-1 /GDF15 προκαλείται από όλες τις θεραπείες του καρκίνου και των μεταστάσεων είναι η κύρια αιτία της αποτυχίας και των θανάτων από καρκίνο θεραπεία του καρκίνου, τα αποτελέσματα αυτά, αν ισχύει στους ανθρώπους, μπορεί να έχει άμεσο αντίκτυπο στην περίθαλψη των ασθενών.

Παράθεση : Husaini Υ, Qiu MR, Lockwood GP, Luo XW, Shang P, Kuffner T, et al. (2012) μακροφάγων Ανασταλτικά κυτοκίνης-1 (MIC-1 /GDF15) επιβραδύνει την ανάπτυξη του καρκίνου, αλλά Αυξάνει μεταστάσεις σε TRAMP Καρκίνος του προστάτη ποντίκια επιρρεπή. PLoS ONE 7 (8): e43833. doi: 10.1371 /journal.pone.0043833

Συντάκτης: Μινγκ Tat Λινγκ, Queensland University of Technology, Αυστραλία

Ελήφθη: 28 Απρ 2012? Αποδεκτές: 30 Ιουλίου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 27 του Αυγούστου του 2012

Copyright: © Husaini et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το παρόν έργο υποστηρίχθηκε εν μέρει από το Ίδρυμα Καρκίνου του προστάτη της Αυστραλίας (https://www.prostate.org.au), Αντικαρκινικό Συμβούλιο Νέας Νότιας Ουαλίας (https://www.cancercouncil.com.au/) και το Εθνικό Σύστημα Υγείας και Ιατρικής Συμβούλιο Έρευνας της Αυστραλίας (https://www.nhmrc.gov.au/). DAB είναι ένα Εθνικό Συμβούλιο Ιατρικής Έρευνας Υγείας και Βιοϊατρικής Εξέλιξης Fellow. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. DAB και SNB ονομάζονται εφευρέτες για τα διπλώματα ευρεσιτεχνίας που ανήκουν Νοσοκομείο Σεντ Βίνσεντ που αφορούν το κλινική χρήση του MIC-1 /GDF15 για διαγνωστική δοκιμασία και διαμορφωτική θεραπεία. Αυτά τα διπλώματα ευρεσιτεχνίας έχουν αδειοδοτηθεί στην Novo Nordisk και η Roche Diagnostics. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών, όπως αναφέρεται λεπτομερώς στην ηλεκτρονική διεύθυνση https://www.plosone.org/static/policies.action#sharing.

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (PCA) είναι η πιο συχνά διαγιγνώσκεται καρκίνος στους άνδρες μετά τον καρκίνο του δέρματος και είναι η δεύτερη κύρια αιτία της ανδρικής θανάτων από καρκίνο. Το 2011, στις ΗΠΑ μόνο, υπήρξαν 240.890 νέες περιπτώσεις προστάτη και περίπου 33.720 θάνατοι [1]. PCa, όπως πολλούς καρκίνους, χαρακτηρίζεται από την αλλοιωμένη έκφραση κυτοκινών και αυξητικών παραγόντων. Ένα τέτοιο κυτοκίνη είναι MIC-1 /GDF15, μια αποκλίνουσα μέλος του μετασχηματιστικού αυξητικού παράγοντα-β (ΤΟΡ-β) υπεροικογένεια [2] που είναι πάνω-εκφράζονται από πολλούς ασθενείς με κοινούς καρκίνους συμπεριλαμβανομένων εκείνων του προστάτη και μπορεί να είναι περαιτέρω induced με θεραπείες καρκίνου συμπεριλαμβανομένης της χειρουργικής επέμβασης, χημειο και ραδιο-θεραπεία του προστάτη, του παχέος εντέρου και του καρκίνου του μαστού [3] – [9]. κυτταρικές σειρές

MIC-1 /GDF15 έκφραση πρωτεΐνης είναι σημαντικά αυξημένη σε καρκινικούς ιστούς, και ο καρκίνος . Σε καρκίνους, όπως του προστάτη, η κύρια πηγή MIC-1 /GDF15 είναι η κακοήθης επιθηλιακών ίδια κυττάρων [5], [10], αν και μπορεί επίσης να υπάρξει μια συμβολή από στρωματικά κύτταρα όγκου [11] και διηθητικά φαγοκύτταρα [12]. Αυτή η έκφραση όγκου του MIC-1 /GDF15 συχνά εκφράζεται με τα επίπεδα στο αίμα της, οι οποίες αυξάνουν με την ανάπτυξη και την εξέλιξη [5] ο καρκίνος, [10], [13] – [27], γενικά σε αναλογία με το στάδιο και την έκταση της νόσου . Για παράδειγμα, τα επίπεδα στον ορό αυξάνονται σταδιακά σε ασθενείς από την κανονική, σε χαμηλού βαθμού πολυπόδων του κόλου, υψηλής ποιότητας πολυπόδων του κόλου, εντοπισμένο καρκίνο του παχέος εντέρου και τέλος διαδίδεται καρκίνο του παχέος εντέρου [13]. Οι ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου οι οποίοι έχουν αυξημένα επίπεδα ορού MIC-1 /GDF15 έχουν χειρότερη συνολική πρόγνωση και την υποτροπή της νόσου νωρίτερα [13], [25]. Παρόμοια αποτελέσματα έχουν παρατηρηθεί για πολλές άλλες κακοήθειες συμπεριλαμβανομένου του μελανώματος [28], [29] και των καρκίνων του παγκρέατος [12], [19], [30], του θυρεοειδούς [31], [32], ωοθήκη [26] και του ενδομητρίου [27]. Σε ασθενείς με καρκίνο του προστάτη, MIC-1 συγκεντρώσεις /GDF15 ορό προβλέψει ανεξάρτητα μετάσταση στα οστά και τη συνολική επιβίωση [14], [21].

Σε ασθενείς με προχωρημένους καρκίνους, τα επίπεδα MIC-1 /GDF15 ορό αυξηθεί από το μέσο όρο σε μη καρκινοπαθείς περίπου 450 pg /ml [13] έως και 10.000-100.000 pg /ml [5]. Λόγω των αποτελεσμάτων της σε επισιτιστικά κέντρα μέσα στον εγκέφαλο, αύξηση των επιπέδων της MIC-1 /GDF15 ορό είναι μια σημαντική αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με την ανορεξία /καχεξία [33]. Η ποσότητα της MIC-1 /GDF15 παρόν στον ορό ασθενών με καρκίνο είναι, εν μέρει, εξαρτώνται από την αναλογία των MIC-1 /GDF15 εντοπιστεί στον όγκο σε σχέση με ότι διαχέονται στην κυκλοφορία [34]. Η μεταβλητή επεξεργασία των αποτελεσμάτων MIC-1 /GDF15 στην έκκριση τόσο σε μη επεξεργασμένα (με προπεπτιδίου) και επεξεργασία (χωρίς προπεπτιδίου) μορφή [34]. Όπως τομέα προπεπτίδιο του συνδέεται με εξωκυττάριας μήτρας, μη επεξεργασμένα MIC-1 /GDF15 παραμένει εντοπισμένη στο στρώμα του όγκου, ενώ η επεξεργασμένη μορφή διαχέεται γρήγορα στην κυκλοφορία [12], [34]. Σε προστάτη, αυξημένη ποσότητα MIC-1 /GDF15 εντοπίζεται στον όγκο βελτιώνει την έκβαση των ασθενών, ιδιαίτερα σε εκείνους με ένα Gleason συνολική βαθμολογία των 6 ή λιγότερο [34].

Αν και υπάρχουν πολλές γραμμές του στοιχεία που συνδέουν MIC-1 /GDF15 με τον καρκίνο γενικά και ειδικά PCa, πειστική και συνεπή στοιχεία για βιολογικό ρόλο της στην παθογένεση και την πρόοδο του καρκίνου περιορίζεται [4]. Αποδεικτικά στοιχεία, σε μεγάλο βαθμό από το

in vitro

και πειράματα ξενομοσχεύματος παρέχουν φαινομενικά αντιφατικά αποτελέσματα. Η πλειονότητα των μελετών έχουν προτείνει ότι MIC-1 /GDF15 έχει αντικαρκινική δράση και επάγει την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων [35] – [38]. Για παράδειγμα, MIC-1 /GDF15 επιμολυσμένα HCT-116, ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου εμφάνισαν αυξημένο βασικό απόπτωση, αυξημένη απόκριση σε μη στεροειδή αντι-φλεγμονώδη φάρμακα και μειωμένη αποτελεσματικότητα μαλακό άγαρ κλωνοποίησης [35]. Η κυτταρική σειρά DU145 του προστάτη, ένας από τους λίγους που δεν εκφράζει MIC-1 /GDF15, υφίσταται απόπτωση όταν αντιμετωπίζονται

in vitro

με MIC-1 /GDF15 [36].

αντικρούουν τα παραπάνω στοιχεία, υπάρχουν επίσης ενδείξεις από

in vitro

πειράματα που MIC-1 /GDF15 μπορεί να διευκολύνει την πρόοδο του όγκου [39] – [42]. Για παράδειγμα, εκτελούνται MIC-1 /υπερέκφραση GDF15 ή θεραπεία με καθαρισμένη ανασυνδυασμένη MIC-1 /GDF15 αύξησε σημαντικά την

in vitro

εισβολή του γαστρικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές. Αυτό επιτεύχθηκε με τη μεσολάβηση αύξηση των ουροκινάσης τύπου ενεργοποιητή πλασμινογόνου (υΡΑ) και περιελάμβανε ενεργοποίηση εξωκυτταρικό σήμα κινάση ρυθμίζονται-1/2 (ERK-1/2) [16]. Η υπερέκφραση και knockdown πειράματα σε εξαρτώμενη από ανδρογόνο LNCaP-C33 ανθρώπινο προστάτη κυτταρική γραμμή και του άκρως μεταστατική παραλλαγή, ανδρογόνα ανεξάρτητο LNCaP-Ln3 έχουν δείξει ότι η MIC-1 /GDF15 μπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των ανδρογόνων υποδοχέων (AR

+) – θετικών κυττάρων LNCaP μέσω της διέγερσης της πορείας σήματος ERK-1/2 [20]. Αντίθετα, άλλοι δεν ήταν σε θέση να εντοπίσει οποιαδήποτε ενέργεια του MIC-1 /GDF15 για το

in vitro

πολλαπλασιασμό των κυττάρων LNCaP [36].

Το

in vivo

σχετικές με τον καρκίνο δραστηριότητα του MIC-1 /GDF15, έχει επίσης εξεταστεί σε έναν περιορισμένο αριθμό μελετών ξενομοσχεύματος όγκου. Η αναγκαστική MIC-1 /GDF15 υπερέκφραση σε HCT-116 κύτταρα καρκίνου του παχέος εντέρου, ξενομοσχεύτηκε σε γυμνά ποντίκια, οδήγησε σε μείωση του μεγέθους του όγκου [35]. Μια κυτταρική σειρά γλοιοβλαστώματος, χωρίς αντιπολλαπλασιαστική απόκριση σε MIC-1 /GDF15

in vitro

, απέτυχε να αναπτυχθεί ως ένα ξενομοσχεύματος όγκου σε γυμνούς ποντικούς όταν επιμολυσμένα με MIC-1 /GDF15 [43]. Σε αντίθεση, siRNA γκρεμίζω του MIC-1 /GDF15 σε ένα κυτταρική γραμμή μελανώματος μείωσε σημαντικά την ανάπτυξη των ξενομοσχευμένων όγκων [28].

Επειδή MIC-1 /GDF15 είναι τόσο συχνά και ουσιαστικά υπερεκφράζεται σε καρκίνους, και επειδή αντικαρκινικές αγωγές διεγείρουν MIC-1 /έκφραση GDF15 τόσο σε καρκίνο και μη-καρκινικούς ιστούς, τυχόν επιπτώσεις στη συμπεριφορά του όγκου μπορεί να είναι υψηλής κλινικής σημασίας. Για να αποκτήσετε τα πιο αξιόπιστα στοιχεία σχετικά με τον συνολικό ρόλο της MIC-1 /GDF15 στη βιολογία του προστάτη, και από τον καρκίνο αναλογία σε γενικές γραμμές, χρησιμοποιήσαμε

T

ransgenic

Μια

denocarcinoma της

Μ

Ouse

P

rostate (TRAMP) καρκίνο του προστάτη επιρρεπή ποντίκια. TRAMP ποντικών εκφράζουν SV40 πρώιμο γονίδια (Τ και Τ? Tag) στην προστατική επιθήλιο κάτω από τον έλεγχο του probasin αρουραίου (RPB) υποκινητή [44]. Οι ετερόζυγοι TRAMP αρσενικά ποντίκια αναπτύσσουν προοδευτική καρκίνο του προστάτη που παρουσιάζουν το φάσμα της ασθένειας, όπως συμβαίνει στους άνδρες που είναι επεμβατική και ικανό μεταστατική εξάπλωση σε απομακρυσμένες θέσεις, κυρίως των πυελικών λεμφαδένων, του ήπατος, των νεφρών και των πνευμόνων [45]. Διασχίσαμε ποντίκια TRAMP με MIC-1 /GDF15 υπερεκφράζουν ποντίκια (MIC-1

FMS) για να παράγει ποντίκια TRAMP που υπερεκφράζουν MIC-1 /GDF15 (TRAMP

fmsmic-1). Σε MIC-1

FMS ποντίκια έκφραση του MIC-1 /GDF15 είναι από μυελοειδή κύτταρα (μακροφάγα, δενδριτικά κύτταρα και ουδετερόφιλα), και είναι επαρκής για να αυξήσει τα επίπεδα στον ορό της κατά περίπου 10-90 φορές [33]. Έχουμε σύγκριση ποσοστό επιβίωσης, πρότυπο ανάπτυξης προστάτη και εξαπλώθηκε σε TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια. Αυτές οι μελέτες δείχνουν ότι ενώ TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια έχουν πιο αργά αναπτυσσόμενους όγκους, επιβιώνουν περίπου 1/3 περισσότερο και έχουν χαμηλότερο βαθμό όγκους, αναπτύσσουν πολύ πιο μεταστάσεις. Ως εκ τούτου, όπως και ΤΟΡ-β, MIC-1 /GDF15 έχει μια σύνθετη επίδραση στη συμπεριφορά των όγκων, την αναστολή της τοπικής ανάπτυξης όγκου, αλλά ενισχύοντας μεταστατική εξάπλωση.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Όλες οι διαδικασίες έρευνας και της φροντίδας των ζώων εγκρίθηκαν από Νοσοκομείο επιτροπή του Garvan Institute /Σεντ Βίνσεντ των πειραμάτων σε ζώα Ηθικής (Ηθική No: 07/05 και 10/05) και ήταν σε συμφωνία με την αυστραλιανή κώδικα πρακτικής για την φροντίδα και Χρήση των ζώων για επιστημονικούς σκοπούς.

διαγονιδιακά ποντίκια

αρσενικά ποντίκια TRAMP ετερόζυγο για το διαγονίδιο PB-Tag, δημιουργήθηκαν από το ζευγάρωμα TRAMP

+/- θηλυκά (C57BL /6 υπόβαθρο) με μη διαγονιδιακά C57BL /6 αρσενικά. Στα ποντίκια TRAMP, η ρυθμιστική αλληλουχία ελάχιστη probasin αρουραίου (RPB) στοχεύει πρώιμου γονιδίου SV40 (Τ και Τ? Tag) έκφραση ειδικά σε προστάτη επιθήλιο [44]. Συγγενή ποντίκια που υπερεκφράζουν MIC-1 /GDF15 υπό τον έλεγχο του μυελοειδούς κυττάρου ειδικό c-fms προαγωγό (MIC-1

FMS) χρησιμοποιήθηκαν για την εκτροφή ποντίκια TRAMP που υπερεκφράζουν επίσης MIC-1 /GDF15 (TRAMP

fmsmic-1 ). MIC-1 /έκφραση GDF15 στο MIC-1

FMS ποντίκια είναι από μυελοειδή κύτταρα, αλλά είναι αρκετή για να αυξήσει επίσης τα επίπεδα ορού της κατά περίπου 10-90 φορές [33].

Η διπλή διαγονιδιακά TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια που παράγεται από τη διέλευση TRAMP

+/- γυναίκες με ομόζυγο MIC-1

FMS αρσενικά. Το διαγονίδιο PB-SV40 Τ αναγνωρίστηκε χρησιμοποιώντας DNA από δείγματα ουράς και εκκινητές PCR κατευθύνεται στην αλληλουχία PB-SV40 Τ αντιγόνου: Pb-εμπρός: 5′-CCGGTCGACCGGAAGCTTCCACAAGTGCATTTA-3 ‘και SV40Tag-αντίστροφη: 5′-CTCCTTTCAAGACCTAGAAGGTCCA-3’ . PCR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μίγμα της αντίδρασης και τις συνθήκες που περιγράφηκαν προηγουμένως [46]. Η MIC-1 /GDF15 διαγονιδίου σε TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια πιστοποιήθηκε με PCR χρησιμοποιώντας εκκινητές, Flag-εμπρός: 5′-GACTACAAGGACGACGATGACAAG-3 ‘και MS8-αντίστροφη: 5′-CGAAGCCTACCGCGTGCACCGAG-3’ και αντίδραση συνθήκες: μετουσίωση στους 95 ° C για 10 s, ανόπτηση στους 60 ° C για 20 s, και επέκταση στους 72 ° C για 30 s.

Μελέτη επιβίωσης

Με βάση την ανάλυση στατιστική ισχύ για το δείγμα μέγεθος, 35 ελεύθερα φορτηγά πλοία και 35 TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια κατανεμήθηκαν σε 4-6 εβδομάδες της ηλικίας, για μια μελέτη επιβίωσης. Από εκείνη τη στιγμή, οι ποντικοί ζυγίστηκαν μία φορά την εβδομάδα και να παρακολουθούνται δύο φορές την εβδομάδα για το μέγεθος του όγκου και η έκταση με ψηλάφηση της κοιλιάς. Ποντίκια είτε πέθαναν ή θανατώθηκαν όταν έφτασαν ηθική ακραία σημεία του μεγέθους του όγκου μεγαλύτερου από 11 mm × 11 mm × 11 mm, περισσότερο από 20% απώλεια βάρους ή την ικανοποίηση κάθε άλλης κριτήρια ηθικά τελικό σημείο για την ευθανασία. Η συνολική επιβίωση των μεμονωμένων ποντικών υπολογίσθηκε από τη γέννηση ηθικούς τελικό σημείο ή θανάτου από όγκο. κατανομής επιβίωσης εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο των Kaplan-Meier. Κατά τη νεκροψία το ουροποιητικό συγκρότημα (GU) που αποτελείται από προστάτη (συμπεριλαμβανομένων των ισχιακών, πλευρική, κοιλιακά, και λοβούς πρόσθιο), ουρήθρα, ampullary αδένα, σπερματοδόχο κύστη (SV) και την ουροδόχο κύστη παραλήφθηκε και ζυγίστηκε. Βάρος της GU, του προστάτη, και SV κάθε ποντικού ομαλοποιήθηκε με το σώμα του βάρος (κ.β. οργάνων /βάρους σώματος).

πρωτοπαθούς όγκου Μέγεθος

Σε μια ξεχωριστή ομάδα σε αυτό το παραπάνω, GU και την ανάπτυξη του όγκου του προστάτη σε σύγκριση με ελεύθερα φορτηγά πλοία και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια. Κατά την έναρξη της μελέτης 60 TRAMP και 60 TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια, 15 καθενός για κάθε στάδιο, προ-διατεθεί για να θυσιαστεί σε διαφορετικά χρονικά σημεία από νωρίς για προχωρημένα στάδια του όγκου (8, 17, 25 και 33 εβδομάδων). Επιπλέον 3 ποντίκια ανατεθεί ο αλήτης, ομάδα 33 εβδομάδων ως 3 από τα αρχικά ποντίκια σε αυτή την ομάδα πέθαναν ή έφθασαν ηθική τελικών σημείων μεταξύ 23 και 33 εβδομάδων. Για καθένα από τα 60 ποντίκια σε νεκροψία, ο GU αποκόπηκε. Σύνολο GU, του προστάτη και των σπερματοδόχων κυστιδίων βάρος μετρήθηκαν και προστάτη διαστάσεις καταγράφεται. Όλες οι μετρήσεις ομαλοποιήθηκαν για το συνολικό βάρος σώματος ποντικού δότη. Μετά από αυτό, ο ιστός που χρησιμοποιείται για την ταξινόμηση των όγκων του προστάτη.

όγκου του προστάτη βαθμολόγησης

ιστούς του προστάτη από 8, 17, 25 και 33 εβδομάδων TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια παραπάνω , τοποθετήθηκαν σε κασέτα και σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη. Ελήφθη πρόνοια να τοποθετήσει και να ενσωματώσετε προστάτες από όλα τα ποντίκια σε αυτό το πείραμα με τον ίδιο προσανατολισμό. Οι τομές που λαμβάνονται σε 200

–

μm διαστήματα μέχρι να εξαντληθεί ο ιστός στο μπλοκ. Τα πλακίδια χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη και όλα τα τμήματα για τα μεμονωμένα ζώα εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας οπτικό μικροσκόπιο, από έναν ιστοπαθολόγο εμπειρία στην παθολογία του προστάτη. Η ιστοπαθολόγο τυφλώθηκε ως προς το γονότυπο των ποντικών από την οποία προέρχεται το όγκου. Τα τμήματα ιστοί βαθμολογήθηκαν με βάση τα κριτήρια του Gingrich et al [47]. Εν συντομία, (

α

) φυσιολογικό επιθήλιο αποδόθηκε μια βαθμολογία από 1? (

β

) χαμηλής ποιότητας προστατική ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (ΡΙΝ) με καπιτοναρίσματος του επιθηλίου και αυξημένη πυρήνα σε αναλογία κυτταρόπλασμα βαθμολογήθηκαν ως 2? (

γ

) PIN υψηλού βαθμού με σημειωμένη δομές cribiform και μια αύξηση στην μιτωτική ή /και αποπτωτικών στοιχεία βαθμολογήθηκε με 3? (

δ

) καλά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα με την απώλεια της interductal χώρων και την εισβολή των βασικών μεμβρανών βαθμολογήθηκε με 4? (

e

) μετρίως διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα με συνολική απώλεια του πόρου lumens με ενδείξεις αδενοκαρκίνωμα βαθμολογήθηκε με 5? και (

f

) κακώς-διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα με φύλλα αναπλαστικό κύτταρα βαθμολογήθηκαν ως 6. Κάθε τμήμα από κάθε ποντικό βαθμολογήθηκε και η αναλογία του προστάτη επηρεάζεται από κάθε βαθμού εκτιμήθηκε. Τα δεδομένα από όλα τα τμήματα σε μια δεδομένη ποντικό συνενώθηκαν για να παρέχουν ένα μέσο ποσοστό του προστάτη επηρεάζεται από κάθε βαθμό τον καρκίνο του προστάτη.

Προσδιορισμός των μεταστάσεων όγκου

εκτιμάται η εμφάνιση της μετάστασης του κατά τη χρόνο θανάτου ή θανάτωσης σε ομάδα επιβίωση TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια. Στο νεκροψία πυελική λεμφαδένες, τους νεφρούς, το ήπαρ και του ορθού όγκων (εάν υπάρχει) συλλέχθηκαν και σταθεροποιήθηκαν σε 10% ουδέτερη ρυθμισμένη φορμαλίνη. Πνεύμονες αποκόπηκαν, ζυγίστηκαν και μονιμοποιήθηκαν σε μονιμοποιητικό Bouin (Sigma-Aldrich) για να απεικονίσει και να μετρήσει τις αποικίες του όγκου του πνεύμονα. Μεταστατικές βλάβες σε όλα τα όργανα μετρήθηκαν υπό ανατομικό μικροσκόπιο. Μερικές από τις βλάβες που επιβεβαιώθηκαν από την H & amp? E χρώση και περαιτέρω με ανοσοχρώση κατεψυγμένων τμημάτων ιστού με αντίσωμα αντι-Tag (Santa Cruz) για να επιβεβαιώσετε την προστατική προέλευση του όγκου

Για να εξασφαλιστεί η ακρίβεια των δεδομένων μετάσταση που λαμβάνονται. από τους ποντικούς της ομάδας επιβίωσης, εξετάσαμε μια περαιτέρω ομάδα του TRAMP (n = 59) και TRAMP

(n = 33) ποντικών-1 fmsmic. Σε αυτή την ομάδα, θα καθορίζεται το ποσοστό των ποντικών με μετάσταση που έχασαν τη ζωή τους μεταξύ 18-40 εβδομάδων, σε μια περίοδο όπου TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια φτάσει ηθική τελικά σημεία με τον ίδιο ρυθμό.

Αξιολόγηση

MIC-1 /GDF15

έκφραση από qRT-PCR

MIC-1 /GDF15

έκφραση σε προστάτες των 8, 17 και 25 εβδομάδων TRAMP (n = 5) και TRAMP

fmsmic-1 (n = 5) ποντικών προσδιορίστηκε από qRT-PCR και κανονικοποιημένο στο

Β-ακτίνης

(γονίδιο σπίτι κρατώντας) έκφρασης. Τα δείγματα συλλέχθηκαν και τοποθετήθηκαν αμέσως σε 1 ml RNAlater (Qiagen) για αποθήκευση στους -20 ° C μέχρι την εκχύλιση. RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας ΤπζοΙ (Invitrogen) και Ambion Purelink RNA Mini Kit (Invitrogen) με επί στήλης βήμα DNase πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας RNA-Free DNase Set (Qiagen). AMV αντίστροφη μεταγραφάση (Roche Applied Sciences) χρησιμοποιήθηκε για να εκτελέσει αντίστροφη μεταγραφή σε 2 μg του RNA από κάθε δείγμα. Οι ειδικοί εκκινητές για PCR για ποντίκι

MIC-1 /GDF15

ήταν, Forward: 5′-AGGACTCGATCAGAACCAAG-3 ‘και Reverse: 5′-CGGTTGACGCGGAGTAGCA-3’ και για το

Β-ακτίνης

ήταν Forward: 5′-TGACAGGATGCAGAAGGAGATTACTG-3 ‘και Reverse: 5′-CCACCGATCCACACAGAGTACTTG-3’. Αραιωμένα δείγματα cDNA (1:10) υποβλήθηκαν σε ενίσχυση PCR με 25 mM MgCl

2 (Roche Applied Sciences), Taq πολυμεράση (Roche Applied Sciences) και SYBR Green Ι χρωστική (Invitrogen). qRT-PCR πραγματοποιήθηκε σε όργανο Lightcycler LC480 (Roche Applied Sciences). Το μίγμα της αντίδρασης μετουσιώθηκε στους 95 ° C για 10 s, που ακολουθείται από 60 έως 67 ° C ανόπτηση για 15 s, και επέκταση στους 72 ° C για 20 s. Η εξειδίκευση των προϊόντων πιστοποιήθηκε με καμπύλες τήξης που παράγεται από το Lightcycler 480 λογισμικού έκδοση 1.5 και με το μέγεθος του προϊόντος PCR σε ηλεκτροφορητικές πηκτές. αριθμό αντιγράφων του γονιδίου τόσο για

MIC-1 /GDF15

και

Β-ακτίνης

υπολογίστηκαν κάνοντας τυπικές καμπύλες που προκύπτουν από την ενίσχυση σειριακά αραιωμένο

MIC-1 /GDF15

και

Β-ακτίνη

PCR προϊόντων. τιμές Cp των δειγμάτων προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τη δεύτερη υπολογισμούς παραγώγων που εκτελούνται από Lightcycler 480 έκδοση λογισμικού 1.5.

MIC-1 /GDF15

αντιγράψετε αριθμούς ομαλοποιήθηκαν σε

Β-ακτίνη

αριθμό αντιγράφων.

Σχετική

MIC-1 /GDF15

έκφραση σε TC1- κυτταρική γραμμή Τ5 επίσης εκτιμάται από qRT-PCR και σε σύγκριση με εκείνη σε προχωρημένο TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 όγκων του προστάτη. κύτταρα TC1-T5 αναπτύχθηκαν σε έξι φρεατίων πλάκες όπως παρακάτω. RNA από κύτταρα TC1-T5 (n = 3) εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας RNeasy Mini Kit (Qiagen). RNA από TRAMP (n = 3) και TRAMP

fmsmic-1 (n = 3) του όγκου του προστάτη εκχυλίστηκε όπως περιγράφεται παραπάνω. 2 ug RNA από κάθε δείγμα υποβλήθηκε σε αντίστροφη μεταγραφή και υποβλήθηκε σε qRT-PCR χρησιμοποιώντας την ίδια διαδικασία και

MIC-1 /GDF15

εκκινητή οριστεί ως ανωτέρω.

TBP

ενισχύθηκε ως ένα γονίδιο καθαριότητας χρησιμοποιώντας αστάρι που Forward: 5′-ACCCTTCACCAATGACTCCTATG-3 ‘και Reverse: 5′-ATGATGACTGCAGCAAATCGC-3’. Η εξειδίκευση των προϊόντων πιστοποιήθηκε με καμπύλες τήξης που παράγεται από το Lightcycler 480 λογισμικού Έκδοση 1.5 και κατά μέγεθος σε ηλεκτροφορητικές πηκτές. Σχετική αναλογία

MIC-1 /GDF15

να

TBP

στη συνέχεια υπολογίζεται χρησιμοποιώντας Lightcycler 480 λογισμικού έκδοση 1.5.

Εκτίμηση της TC1-T5 TRAMP όγκων στους πνεύμονες

TRAMP C1 (TC1) είναι μια εξαρτώμενη από ανδρογόνα κυτταρική σειρά προστάτη που προέρχονται από TRAMP όγκου του προστάτη από Foster et al. [48]. TC1-T5 είναι ένα ανδρογόνο ανεξάρτητη υπογραμμή της κυτταρικής σειράς TC1 [49]. κύτταρα TC1-T5 δεν εκφράζουν MIC-1 /GDF15 στον πολιτισμό και έτσι είναι κατάλληλο για την αξιολόγηση των επιπτώσεων της MIC-1 /GDF15. κύτταρα TC1-T5 αναπτύχθηκαν σε μέσα DMEM (Invitrogen, Life Technologies) που περιέχει 5% του ξυλάνθρακα δεξτράνη απογυμνωμένο ορό εμβρύου μοσχαριού και 125u /L ινσουλίνη (Humulin-BD Biosciences). Για να ελεγχθεί απ ‘ευθείας αν τα κύτταρα TC1-T5 θα μεταστάσεις περισσότερο σε MIC-1

FMS ποντικούς, ενέθηκε 5 × 10

5 κυττάρων σε ένα συνολικό όγκο 100 μΙ μέσω της φλέβας της ουράς 9 εβδομάδων Έξοδος μικροφώνου 1

FMS (n = 17) και συγγενικά C57BL /6 (n = 14) ποντικών. Δέκα εβδομάδες αργότερα, τα ποντίκια θυσιάστηκαν? πνεύμονές τους αποκόπηκαν και σταθεροποιήθηκαν σε στερεωτικό Bouin (Sigma-Aldrich). Lung αποικίες στην επιφάνεια όλων των λοβών και των δύο πνευμόνων μετρήθηκαν υπό ανατομικό μικροσκόπιο.

Στατιστική Ανάλυση

Οι στατιστικές εκτιμήσεις όλων των πειράματα διεξήχθησαν με την έκδοση του λογισμικού GraphPad Prism 5 (GraphPad Software , San Diego, CA, USA). Όλα τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπικό σφάλμα του μέσου (SEM). Οι συγκρίσεις μεταξύ των ομάδων έγιναν με αταίριαστα

t

δοκιμές ή Chi-square test ανάλογα με την περίπτωση και οι δύο ουρά σ τιμές που αναφέρθηκαν. Οι καμπύλες επιβίωσης αναλύθηκαν με ανάλυση Kaplan-Meier και log-rank στατιστική έχει αναφερθεί. Να εξετάσει τη σχέση της μετάστασης με το χρόνο επιβίωσης που χρησιμοποιούνται πολυπαραγοντική ανάλυση. Όλοι οι παράγοντες σημαντικά συνδέεται με τη μετάσταση από μονοπαραγοντική παλινδρόμησης περιλήφθηκαν σε ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο παλινδρόμησης με το χρόνο επιβίωσης. Μία τιμή ρ μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Η υπερέκφραση του MIC-1 /GDF15 Παρατείνει προστάτη Επιβίωση σε TRAMP ποντίκια

Για να αξιολογηθούν οι επιπτώσεις της MIC -1 /GDF15 στη συνολική επιβίωση των ποντικών TRAMP, θα παρακολουθείται μια ομάδα των TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια μέχρι το θάνατο ή ηθική τελικό σημείο. Kaplan-Meier ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι η διπλή διαγονιδιακά TRAMP

fmsmic-1 επέζησε σημαντικά μεγαλύτερη από ό, τι TRAMP ποντίκια (Εικ. 1Α, p

=

0,0002, δοκιμασία log-rank).

Γενικά επιβίωση μεμονωμένων ποντικών από τη γέννηση μέχρι το θάνατο δείχνεται (πίνακας Α). Τα δεδομένα επιβίωσης για ελεύθερα φορτηγά πλοία (-▴-) και TRAMP

fmsmic-1 (-Δ-) ποντίκια χαράχθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier. Η στατιστική log-rank για διάμεσος χρόνος επιβίωσης εμφανίζεται. Το ουροποιητικό (GU), σπερματοδόχο κύστη (SV) και τον προστάτη μεγέθη όγκων σε TRAMP

fmsmic-1 και TRAMP ποντικών (η = 15 /ομάδα) θυσιάστηκαν σε 8, 17, 25 και 33 εβδομάδων φαίνονται στον πίνακα Β , C και D. Το GU (πίνακας Β), SV (πίνακας C) και τα βάρη του προστάτη (πίνακας D) παρουσιάζονται ως μέσες mg βάρος /g σωματικού βάρους ± SEM. Οι τιμές ρ εμφανίζονται ως * p

& lt?

0,05? ** P

& lt?

0,01? *** P

& lt?

0.001

Η

Αρχικά, τα δύο ελεύθερα φορτηγά πλοία και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια πέθαναν σε παρόμοιο ποσοστό.. Ωστόσο, μετά από περίπου 38-40 εβδομάδες, τα ποντίκια TRAMP άρχισαν να υποκύπτουν πιο γρήγορα από ό, τι ο αλήτης

fmsmic 1-ποντίκια. Η επιβίωση 50% 40 εβδομάδες σε TRAMP ποντίκια επεκτάθηκε σε 51 εβδομάδες στο TRAMP

fmsmic-1 ομάδα. Περαιτέρω, ενώ μόνο το 9,4% των TRAMP ποντίκια επιβίωσαν κατά την εβδομάδα 50, το 52% των TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια ήταν ακόμα ζωντανός (Εικ. 1Α). Πάνω από όλα, ο μέσος χρόνος επιβίωσης για TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια ήταν 47,4 εβδομάδες και ήταν 41 εβδομάδες για τους ποντικούς TRAMP. Έτσι, κατά μέσο όρο, TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια επέζησαν περίπου 7,4 εβδομάδες (περίπου 2 μήνες) περισσότερο από τα ποντίκια TRAMP. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η αυξημένη έκφραση του MIC-1 /GDF15 είναι σε θέση να βελτιώσει αισθητά προστάτη που σχετίζονται με την επιβίωση σε ποντίκια TRAMP.

Η υπερέκφραση του MIC-1 /GDF15 Σταματά προστάτη Ανάπτυξης

Για να εκτιμηθεί άμεσα η αντίκτυπο της MIC-1 /GDF15 για την ανάπτυξη του καρκίνου του προστάτη, βάλαμε 60 TRAMP και 60 TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια σε 4-6 εβδομάδες από την ηλικία και τους θανατώθηκαν σταδιακά καθ ‘όλη 8-33 εβδομάδων. Οι συγκρίσεις έγιναν με τη χρήση του 15 ποντίκια προ-εκχωρηθεί σε κάθε ομάδα στις τέσσερις διαφορετικά χρονικά σημεία (8, 17, 25 και 33 εβδομάδες), που αντιπροσωπεύουν πολύ νωρίς για να προχωρημένα στάδια του όγκου. Τα δεδομένα από ποντίκια θυσιάζονται σε κάθε χρονικό σημείο έδειξε ότι TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια είχαν σημαντικά μικρότερη σύμπλοκα GU από TRAMP ποντικών (Σχήμα 1 Β.) Σε όλα τα στάδια (ρ = 0,0004, p = 0,0005, ρ & lt? 0,0001, και ρ = 0,02, αντίστοιχα).

Όταν προστάτη και βάρη SV αναλύθηκαν ξεχωριστά από το συγκρότημα GU, τα μεγέθη του όγκου SV ήταν σημαντικά μειωμένες σε TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια σε όλα τα χρονικά σημεία (Εικ. 1 C). Μια παρόμοια, αλλά πιο ποικίλη, επίδραση της MIC-1 /GDF15 υπερέκφραση παρατηρήθηκε στην αύξηση του όγκου του προστάτη (Σχ. 1D). Υπήρχε 17,0% και 26% μείωση του βάρους του όγκου του προστάτη στις εβδομάδες 8 και 25 αντίστοιχα σε TRAMP

fmsmic-1 σε σύγκριση με τα ποντίκια TRAMP (p

=

0,04 και 0,01, αντίστοιχα). Παρά το γεγονός ότι υπήρχε μειωμένο βάρος του όγκου σε TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια σε 17 εβδομάδες (& gt? 10%), η διαφορά μεταξύ των δύο ομάδων δεν ήταν σημαντική. Σε 33 εβδομάδες, αν και υπήρχε μείωση κατά 55% του μέσου βάρους του προστάτη σε TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια σε σύγκριση με εκείνη σε ποντίκια TRAMP, η διαφορά μεταξύ των δύο ομάδων δεν ήταν σημαντική λόγω της μεγάλης διακύμανσης στο μέγεθος του όγκου του προστάτη στην ομάδα TRAMP. Πρόσθετες ποντίκια έπρεπε να ανατεθεί σε αυτή την ομάδα καθώς πολλά από τα αρχικά ανατεθεί ποντίκια πέθαναν /έφτασε ηθική τελικό σημείο μεταξύ 23 και 33 εβδομάδων, ενδεχομένως επηρεαστούν τα αποτελέσματα TRAMP, από την επιλογή των TRAMP ποντικών με μικρότερους όγκους. Αυτά τα ποντίκια με μικρότερους όγκους είχαν περισσότερες πιθανότητες να επιβιώσουν σε 33 εβδομάδες της ηλικίας και να επιλεγεί. Ωστόσο, τα δεδομένα που πρότειναν, σύμφωνα με τα στοιχεία κοόρτη επιβίωσης, ότι η υπερέκφραση MIC-1 /GDF15 μειώνει την ανάπτυξη του όγκου.

TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια έχουν χαμηλότερη ποιότητα Καρκίνοι

Επιπλέον να ακολουθεί την ανάπτυξη του όγκου, θα καθοριστεί αν MIC-1 /GDF15 θα μπορούσε επίσης να επηρεάσει προστάτη βαθμό, συγκρίνοντας ιστοπαθολογικές βαθμολογίες στα ελεύθερα φορτηγά πλοία και διπλά διαγονιδιακά TRAMP

fmsmic-1 όγκων του προστάτη. Την εβδομάδα 8, χαμηλή (βαθμός 2) και υψηλή (Βαθμού 3) βαθμού PIN ήταν τα κυρίαρχα παθολογίες σε TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια. Ενώ το μέσο ποσοστό του προστάτη επηρεάζεται από το PIN ήταν υψηλότερο σε σύγκριση με TRAMP TRAMP

fmsmic 1-ποντίκια? Ωστόσο, η διαφορά αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική (Σχ. 2Α).

προστάτες 15 TRAMP και 15 TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια αποκόπηκαν την εβδομάδα 8 (πίνακας Α), 17 (πίνακας Β), 25 (πάνελ C), και 33 (πίνακας D). Διαδοχικές τομές βαθμολογήθηκαν και τα σκορ για κάθε βαθμό υπολογίστηκαν κατά μέσο όρο για όλους τους ποντικούς στην ομάδα. Η γραφική παράσταση αντιπροσωπεύει το μέσο ποσοστό του προστάτη από όλα τα ποντίκια στην ομάδα που έχει κάθε διαφορετικό παθολογική βαθμού, σημείωσε μεταξύ 1 και 6 ± SEM. Αριθμοί στις μπάρες δείχνουν τον αριθμό των ποντικών στην ομάδα που έχει ένα συγκεκριμένο βαθμό. Οι τιμές ρ εμφανίζονται ως * p

& lt?

0,05? ** P

& lt?

0,01? *** P

& lt?.

0.001

Η

Την εβδομάδα 17, Grade 2 και της κατηγορίας 3 παθολογίες ήταν ακόμα κυρίαρχο και στις δύο γραμμές του ποντικιού, αλλά Βαθμού 4, 5 και 6 όγκων άρχισε να αναδύεται στις προστάτες TRAMP. Αυτή τη στιγμή τα ποντίκια σημείο TRAMP είχαν σημαντικά περισσότερες Βαθμού 3 νόσου (p & lt? 0,0001) και σημαντικά λιγότερες ασθένειες Grade 2 (p & lt? 0.0001). Από TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια δείχνει πιο εξέλιξη ταχεία όγκου (Εικ. 2Β)

στην ηλικία των 25 εβδομάδων, βαθμού 4 όγκων ήταν πιο εμφανείς στα ποντίκια TRAMP αλλά regions βαθμού 2 και της κατηγορίας 3 όγκου ήταν ακόμη παρόντες και στα δύο σειρές ποντικού. Σύγκριση μεταξύ των επιμέρους βαθμών των όγκων στο TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 του προστάτη έδειξε ότι ένα υψηλότερο ποσοστό του TRAMP

fmsmic-1 του προστάτη είχαν τις χαμηλότερες κατηγορίες 2 και 3 όγκους (p

=

0.004 και 0.02, αντίστοιχα), ενώ ένα σημαντικά χαμηλότερο ποσοστό των TRAMP

fmsmic-1 του προστάτη είχαν οι πιο επιθετική βαθμού 4 όγκων (Σχ. 2C, p

=

0.019).

με 33 εβδομάδων ηλικίας (Σχ. 2D), τα περισσότερα από τα ποντίκια, σε αμφότερες τις ομάδες, είχε προχωρημένη νόσο και τη διαφορά στην κατανομή των βαθμών όγκου μεταξύ του TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια δεν ήταν σημαντική. Και πάλι αυτά τα δεδομένα μπορεί να έχουν επηρεαστεί από την προκατάληψη επιλογής στην ομάδα TRAMP 33 εβδομάδες, συζητήθηκε παραπάνω. Οι ποντικοί στην ομάδα TRAMP με περισσότερο επιθετικούς όγκους πέθαναν πριν από 33 εβδομάδες της ηλικίας, και μόνο ποντίκια με λιγότερο επιθετικούς όγκους επέζησαν σε αυτή την ηλικία. Συνολικά, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια έχουν ένα μεγαλύτερο ποσοστό του προστάτη σε χαμηλότερο βαθμό όγκου από TRAMP ποντικών (Σχ. 2Α, Β, Γ και Δ), υποδεικνύοντας την υπερέκφραση MIC-1 /GDF15 επιβραδύνει τοπική εξέλιξη του όγκου.

TRAMP προστάτη Στερείται MIC-1 /έκφρασης GDF15

για να αποκλειστεί η πιθανότητα ότι η έκφραση του MIC-1 /GDF15 από καρκίνους στα ποντίκια TRAMP μπορεί να επηρεάσει κατά όγκων την ανάπτυξη και να τροποποιήσει τις διαφορές μεταξύ τους και ποντίκια τροποποιημένα ώστε να υπερεκφράζουν την κυτοκίνη αυτή, μπορούμε ποσοτικοποιηθεί MIC-1 έκφρασης /GDF15 στον προστάτη και των σπερματοδόχων κυστιδίων όγκους από TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια. Λόγω της μη διαθεσιμότητας ενός καθιερωμένου ποντικιού MIC-1 /GDF15 ELISA και ενός ειδικού αντι-ποντικού MIC-1 /GDF15 μονοκλωνικό αντίσωμα, χρησιμοποιήσαμε qRT-PCR για να συγκρίνουν την έκφραση MIC-1 /GDF15 σε TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 προστάτη και πρωτογενείς όγκους. Υπήρχε αμελητέα έκφραση /GDF15 MIC-1 σε ποντίκια TRAMP, τα οποία είναι άγριου τύπου για MIC-1 /GDF15, σε 8, 17 και 25 εβδομάδες ηλικίας (Σχ. 3Α) και με προχωρημένους όγκους (Σχ. 3Β). Αντίθετα TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια που εκφράζεται 44 έως 166 φορές περισσότερο MIC-1 /GDF15 (Σχ. 3Α) σε προστάτη τους που είναι συνεπής με c-fms οδηγείται διαγονιδιακή έκφραση MIC-1 /GDF15 από την διείσδυση μυελοειδή κύτταρα.

(Α)

MIC-1 /GDF15

έκφραση ποσοτικοποιήθηκε με qRT-PCR στον προστάτη του TRAMP και TRAMP

fmsmic-1 ποντικούς σε 8, 17 και 25 εβδομάδες και ομαλοποιήθηκε ως προς

Β-ακτίνης

έκφρασης όπως περιγράφεται στα υλικά και μεθόδους. (Β) Σχετική

MIC-1 /GDF15

έκφραση ποσοτικοποιήθηκε με qRT-PCR στην κυτταρική σειρά TC1-T5 (n = 3) και σε σύγκριση με TRAMP (n = 3) και TRAMP

fmsmic- 1 (n = 3) των όγκων του προστάτη μετά την ομαλοποίηση με το

TBP

έκφρασης. Οι τιμές παρουσιάζονται ως μέση κανονικοποιημένη

MIC-1 GDF15

έκφρασης /± SEM. σ τιμές για τα δύο-ουρά αταίριαστο

t

τεστ φαίνονται σαν *** ρ

& lt?.

0.001

Η

Ενώ TRAMP

fmsmic-1 τα ποντίκια ζουν περισσότερο έχουν περισσότερα μετάσταση

Δεδομένου ότι η μετάσταση είναι η κύρια αιτία θανάτου από συμπαγείς όγκους σε ασθενείς με προστάτη, αξιολογήσαμε την επίδραση της MIC-1 /GDF15 σχετικά με την επίπτωση και την έκταση της μετάστασης σε ποντίκια TRAMP. Αν και TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια ζουν περισσότερο και έχουν πιο αργή πρωτογενή ανάπτυξη του όγκου (Σχ. 1 Α, Β, Γ και Δ), μια σημαντικά υψηλότερη αναλογία αυτών των ποντικών κατέδειξε όργανα με μετάσταση. 15 από 30 (50%) TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια είχαν μακρινή μετάσταση όργανο σε σύγκριση με 6 από τους 30 (20%) των ποντικών TRAMP (Εικ. 4Α). Ένα σημαντικά υψηλότερο ποσοστό των TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια είχαν μακροσκοπικά ανιχνεύσιμα μεταστατικές αλλοιώσεις στο ήπαρ, τους νεφρούς και το ορθό. Ενώ το ποσοστό των TRAMP

fmsmic-1 ποντίκια με όγκους του πνεύμονα επιφάνεια ήταν επίσης αυξημένη, αυτό υπολείπεται της στατιστικής σημαντικότητας (Σχ. 4Α). Είναι ενδιαφέρον ότι το ορθό μεταστάσεις αναπτύχθηκε σε 6 από τα 30 TRAMP

fmsmic-1 αλλά όχι σε οποιαδήποτε από τα ποντίκια TRAMP (Σχ. 4Α).