Αφηρημένο

Σκοπός

Για να προσδιοριστεί η συχνότητα και η προγνωστική αξία των αυξημένων μεταβολές μικροδορυφόρων σε επιλεγμένες επαναλήψεις τετρανουκλεοτιδικές (EMAST) στο μεταστατικό καρκίνο του παχέος εντέρου (mCRC) ασθενείς σε σχέση με μικροδορυφορικού αστάθεια (MSI ) την κατάσταση και την έκφραση της πρωτεΐνης MSH3.

Υλικό και Μέθοδοι

Η συχνότητα των EMAST αξιολογήθηκε σε ασθενείς με όγκους mCRC MSI και μικροδορυφορικού σταθερή (MSS) όγκους. Μια επισκόπηση της βιβλιογραφίας έγινε για να συγκρίνουν τη συχνότητα της EMAST στη μελέτη μας, με τα υπάρχοντα δεδομένα. Ανοσοϊστοχημεία για MSH3 συγκρίθηκε με την κατάσταση EMAST. Αποτέλεσμα μελετήθηκε όσον αφορά τη συνολική επιβίωση (OS) των ασθενών mCRC με MSI και MSS όγκων.

Αποτελέσματα

EMAST εκτιμήθηκε σε 89 ασθενείς με MSI όγκους (συμπεριλαμβανομένων 39 ασθενών με σύνδρομο Lynch) και 94 ασθενείς με όγκους MSS. EMAST παρατηρήθηκε στο 45,9% (84 από 183) των ασθενών, με αυξημένη συχνότητα σε όγκους MSI (79,8% έναντι 13,8%, p & lt? 0.001). Εμείς δεν βρήκε καμία συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης EMAST και MSH3. Δεν υπήρξε καμία επίδραση της EMAST στην πρόγνωση σε ασθενείς με όγκους MSS, αλλά οι ασθενείς με όγκους MSI /μη-EMAST είχαν σημαντικά καλύτερη πρόγνωση από τους ασθενείς με MSI /EMAST όγκους. (OS: HR 3.22, 95% CI 01.25 – 08.30)

Συμπέρασμα

Συχνότητα EMAST αυξήθηκε σε ασθενείς με όγκους mCRC MSI, σε σύγκριση με τους όγκους MSS. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι η παρουσία του EMAST συσχετίζεται με χειρότερα OS σε αυτούς τους ασθενείς. Δεν υπήρξε καμία επίδραση του EMAST στην πρόγνωση των ασθενών με όγκους MSS. Ένας περιορισμός της μελέτης μας είναι ο μικρός αριθμός των ασθενών στην ανάλυση των υποομάδων μας

Παράθεση:. Venderbosch S, van Lent-van Vliet S, de Haan AFJ, Ligtenberg MJ, Goossens Μ, Punt τον CJAΑ, et al. (2015) EMAST σχετίζεται με κακή πρόγνωση σε Μικροδορυφορικοί Η αστάθεια Μεταστατικό Καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (4): e0124538. doi: 10.1371 /journal.pone.0124538

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Hiromu Suzuki, Σαπόρο Ιατρικό Πανεπιστήμιο, ΙΑΠΩΝΙΑ

Ελήφθη: 27 Ιούνη 2014? Αποδεκτές: 15 Μάρ, 2015? Δημοσιεύθηκε: 17 Απριλίου 2015

Copyright: © 2015 Venderbosch et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Λόγω ηθικές περιορισμούς, είναι διαθέσιμα κατόπιν αιτήματος από [email protected] σχετικών δεδομένων

Χρηματοδότηση:. η μελέτη αυτή υποστηρίζεται από μια επιχορήγηση από το παχέος Ομάδα Καρκίνου Ολλανδικά (DCCG). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος του παχέος εντέρου (CRC) καρκινογένεση είναι μια διαδικασία πολλών σταδίων στην οποία εμπλέκονται διαφορετικά μονοπάτια, μεταξύ των οποίων μικροδορυφορικού αστάθεια (MSI) είναι σημαντικός [1-3]. MSI χαρακτηρίζεται από ανεπάρκεια του συστήματος επιδιόρθωσης αταίριαστων βάσεων, το οποίο οδηγεί στην ανάπτυξη του καρκίνου μέσω της συσσώρευσης επιδιορθώθηκε μεταλλάξεων μετατόπισης πλαισίου σε απλές επαναλαμβανόμενες αλληλουχίες ή μικροδορυφόρων [4]. Μέχρι σήμερα πολλές επισκευή ασυμφωνία έχουν πρωτεΐνες (MMR) έχουν εντοπιστεί σε ανθρώπους: MSH2, MSH3, MSH6, MLH1 και PMS2. MSH2 σχηματίζει ένα ετεροδιμερές με MSH6 ή MSH3, προκαλώντας MutSα ή MutSβ, αντίστοιχα [5]. MutSα αναγνωρίζει μόνο τις αναντιστοιχίες ζευγών βάσεων και των μικρών βρόγχων εισαγωγής-διαγραφή (IDLS), ενώ MutSβ αναγνωρίζει κατά προτίμηση μεγαλύτερες αναντιστοιχίες και IDLS. Επιπλέον, MLH1 και PMS2 σχηματίζουν MutLα, η οποία ενεργεί ως ένας μοριακός προξενητής. Εκτός από την πρωτογενή ελάττωμα MMR, δευτεροβάθμιας απώλεια πρωτεϊνών MMR μπορεί να εμφανιστεί ως συνέπεια της

MSH3

και

MSH6

μεταλλάξεις μετατόπισης πλαισίου που προωθείται από

MLH1

αδρανοποίηση [6, 7] ή λόγω MSH3 και MSH6 υποβάθμιση της πρωτεΐνης σε όγκους που δεν εκφράζουν ετεροδιμερικού συντρόφου τους MSH2 [8,9]. Ως αποτέλεσμα, μονό ή σε συνδυασμό ελαττώματα MMR υπομονάδες (MutSα, MutSβ και MutL) μπορούν μεταβλητώς διέπουν τη γενετική αστάθεια των όγκων MSI. Βλαστικής σειράς αλλοιώσεις των γονιδίων MMR είναι η αιτία της MSI σε ασθενείς με σύνδρομο Lynch [10]. MSI παρατηρείται επίσης σε 10-20% των ασθενών με σποραδική CRC, συνήθως οφείλεται σε υπερμεθυλίωση προαγωγού του

MLH1

γονίδιο [11,12]. MSI όγκοι έχουν ιδιαίτερα χαρακτηριστικά, όπως η τοποθεσία στο εγγύς κόλον, υψηλή συχνότητα εμφάνισης της λεμφοκυτταρικής διήθησης, μια κακώς διαφοροποιημένο, βλεννώδες ή σφραγίδα ιστολογία δακτυλίου [13]. Οι MSI όγκων που σχετίζονται με ευνοϊκή πρόγνωση σε πρώιμο στάδιο καρκίνου του παχέος εντέρου [14].

Μια ξεχωριστή μορφή της MSI παρατηρείται σε διάφορους τύπους καρκίνων και ονομάζεται «αυξημένα αλλοιώσεις μικροδορυφορικού σε επιλεγμένα τετρανουκλεοτιδικές επαναλαμβάνει» (EMAST) σε αντίθεση με μονο- και δινουκλεοτίδιο βάση αστάθεια στην κοινή MSI [15-20]. Μόνο λίγες μελέτες περιγράφουν αυτή υποτύπου σε ένα μικρό αριθμό ασθενών CRC [21-24]. EMAST δεν έχει συνδεθεί με μεγάλα ελαττώματα στην επισκευή ασυμφωνία DNA. Ετερογενής και μειωμένη έκφραση της πρωτεΐνης του MSH3 παρατηρήθηκε σε σχέση με EMAST στο CRC [21-24]. Πιο πρόσφατες εκθέσεις υποδεικνύουν ότι η ανεπάρκεια MSH3 είναι η αιτία της EMAST σε ανθρώπινα κύτταρα CRC [25,26]. Η σχέση μεταξύ MSH3 και EMAST προτείνει μια επίκτητη αποτέλεσμα, καθώς δεν μετάλλαξη βλαστικής στο

MSH3

έχει ποτέ αποδειχθεί [4]. Υπάρχει ένα ευρύ φάσμα του επιπολασμού της EMAST είναι CRC και η βιολογική σημασία της EMAST στο CRC δεν είναι σαφής. Μόνο ένα άρθρο περιγράφεται μια ένωση με αποτέλεσμα για /ασθενείς III CRC. Σταδίου ΙΙ [27]

Μόνο περιορισμένα δεδομένα είναι διαθέσιμα σχετικά με EMAST ή έκφραση MSH3 σε ασθενείς CRC. Στην παρούσα μελέτη αξιολογήσαμε τη συχνότητα των EMAST σε MSI και μικροδορυφορικού σταθερή όγκους (MSS) CRC. Επιπλέον, εκτιμήθηκε σε μια διερευνητική ανάλυση του ρόλου των EMAST ως προγνωστικό βιοδείκτη στο μεταστατικό CRC (mCRC) ασθενείς.

Υλικό και Μέθοδοι

πληθυσμούς ασθενών

Τα στοιχεία ήταν που προέρχονται από ασθενείς mCRC που περιλαμβάνονται σε δύο μεγάλες μελέτες φάσης ΙΙΙ: ΚΑΪΡΟ (ClinicalTrials.gov NCT00312000) (n = 820) και CAIRO2 (n = 755) (ClinicalTrials.gov NCT00208546), εκ των οποίων τα αποτελέσματα έχουν δημοσιευτεί στο παρελθόν [28,29 ]. Συλλογή υλικού φορμόλη-σταθερής εμπεδωθεί με παραφίνη (FFPE) του πρωτοπαθούς όγκου ήταν μέρος του αρχικού πρωτοκόλλου και στις δύο μελέτες. Να καθορίζει τη συχνότητα και την προγνωστική αξία της EMAST σε ασθενείς mCRC με όγκους MSI επιλέξαμε 50 ασθενείς mCRC με MSI όγκοι αντιμετωπίζονται με δύο μελέτες Κάιρο. Από MSI είναι σχετικά σπάνια σε mCRC συνδυάσαμε τους ασθενείς του ΚΑΪΡΟ (n = 19) και το CAIRO2 (n = 31) της μελέτης. Αριθ κοόρτη επικύρωσης θα μπορούσαν να επιλεγούν για τους ασθενείς MSI. Για να αξιολογηθεί περαιτέρω η σχέση μεταξύ EMAST και MSI, θα ανακτηθεί 39 όγκους από ασθενείς CRC (ανώνυμα δείγματα) με τις γνωστές σύνδρομο Lynch (στάδιο I-IV) από τη δική μας βάση δεδομένων (που έχει δημιουργηθεί είναι σύμφωνη με τις κατευθυντήριες γραμμές της τοπικής ιατρικής επιτροπής δεοντολογίας (Commissie Mensgebonden Onderzoek Radboudumc) με τη γραπτή συγκατάθεση των ασθενών, από τις οποίες η χρήση του ιστού έχει εγκριθεί για αυτή τη μελέτη). Να καθορίζει τη συχνότητα και την προγνωστική αξία της EMAST σε ασθενείς mCRC με όγκους MSS επιλέξαμε 54 ασθενείς της μελέτης ΚΑΪΡΟ με συγκρίσιμα χαρακτηριστικά (ομάδα ελέγχου). Οι ασθενείς μέσα στην ομάδα δοκιμής όλα έλαβαν θεραπεία με καπεσιταβίνη μονοθεραπεία πρώτης γραμμής για τουλάχιστον 3 κύκλους, ο εντοπισμός του πρωτογενούς όγκου στο παχύ έντερο ή recto- σιγμοειδές που εκτομή, ΠΟΥ επιδόσεις στείλει 0, η κανονική γαλακτικής αφυδρογονάσης ορού βασικής γραμμής συγκέντρωση (LDH), και δεν είχαν λάβει προηγούμενη επικουρική χημειοθεραπεία. Επιπλέον, θα επιλέγονται τυχαία 40 επιπλέον ασθενείς mCRC με MSS όγκοι αντιμετωπίζονται με την ίδια μελέτη ΚΑΪΡΟ ως ομάδα επικύρωσης. (Σχήμα 1)

Η

EMAST ανάλυση

Το γονιδιακό DNA εκχυλίζεται από τέσσερις έως οκτώ μικροτομή χειροκίνητα 30 μm τμήμα της FFPE ιστούς των πρωτογενών όγκων. Περιοχές που περιέχουν & gt? 50% καρκινικά κύτταρα επιλέχθηκαν με μικροσκοπική αξιολόγηση σε ένα πλακίδιο αναφοράς χρωματίστηκαν με Η &? Ε. Γονιδιωματικό DNA από μικροδιατομή ιστούς απομονώθηκε χρησιμοποιώντας το QIAamp DNA μικρο κιτ (Qiagen, Valencia, CA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. συγκέντρωση του DNA προσδιορίστηκε στα 260 nm χρησιμοποιώντας το φασματοφωτόμετρο Nanodrop ND-1000 (Nanodrop Technologies, Inc., Wilmington, DE, USA). ανάλυση EMAST διεξήχθη εις διπλούν σε φυσιολογικά και καρκινικά DNA των επιλεγμένων ασθενών. κατάσταση EMAST προσδιορίστηκε με ανάλυση PCR και GeneScan χρησιμοποιώντας πέντε τετρανουκλεοτιδική δείκτες: MYCL1, D8S321, D9S242, D20S82 και D20S85 (S1 πίνακα) [23]. Ένας όγκος ορίστηκε EMAST εάν τουλάχιστον δύο από τους πέντε δείκτες έδειξαν αστάθεια και μη EMAST αν μόνο ένα ή κανένα από τους δείκτες έδειξαν αστάθεια [22].

Οι ασθενείς αναλύθηκαν για τη συχνότητα και προγνωστική αξία σε τέσσερις διαφορετικές ομάδες: ασθενείς με συνδυασμένη MSI και EMAST όγκους (MSI /EMAST), ασθενείς με συνδυασμένη MSI και μη EMAST όγκους (MSI /μη-EMAST), ασθενείς με συνδυασμένη MSS και EMAST όγκους (MSS /EMAST) και σε ασθενείς με συνδυασμένη MSS και όγκους μη EMAST (MSS /μη-EMAST). Η συχνότητα των EMAST συγκρίθηκε για ασθενείς με MSI και MSS όγκους. Το αποτέλεσμα αναλύθηκε μέσα στην ομάδα των ασθενών με όγκους MSI (εξαιρουμένων των ασθενών με σύνδρομο Lynch) για EMAST σε σύγκριση με όγκους μη EMAST και εντός της ομάδας των ασθενών με όγκους MSS για EMAST σε σύγκριση με μη-EMAST όγκων.

Ανοσοϊστοχημεία MSH3

ανοσοϊστοχημεία (IHC) διεξήχθη σε μικροσυστοιχίες ιστού (TMA) των πρωτογενών όγκων από 549 ασθενείς τυχαιοποιήθηκαν επιλέξιμων στη μελέτη ΚΑΪΡΟ όπως περιγράφηκε προηγουμένως [30]. 4 μm slides κόπηκαν από κάθε ΤΜΑ και τοποθετημένα σε γυαλί. Ξυλόλιο και αιθανόλη χρησιμοποιήθηκαν για αποπαραφινώσεως και αφυδάτωση των διαφανειών ΤΜΑ. Νερό και αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS) χρησιμοποιήθηκαν για το πλύσιμο των διαφανειών. Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% σε PBS για 30 λεπτά και πλακίδια πλύθηκαν με νερό, μετά την οποία η ανάκτηση επιτόπου θερμότητα προκαλούμενη διεξήχθη. Τα πλακίδια χρωματίστηκαν με μονοκλωνικό αντίσωμα έναντι MSH3 (κλώνος ERP4334? Epitomics-εταιρείας Abcam, Burlingame, CA, USA), αραίωση 1: 5000. Δύο ανεξάρτητοι ερευνητές πραγματοποιηθεί το σκορ, και αν το σκορ διαφάνεια δεν ήταν σαφής, η γνώμη ενός τρίτου ερευνητή (παθολόγος IDN) ήταν οριστική. Χρώση μοτίβο της πρωτεΐνης MSH3 αξιολογήθηκε με τη χρήση της κανονικής επιθηλίων, στρώματος και φλεγμονώδη κύτταρα ως εσωτερικός έλεγχος. έκφραση Χαμηλή πρωτεΐνη MSH3 ορίστηκε ως & lt? 85% καφέ χρώση των κυτταρικών πυρήνων σε κύτταρα όγκου και η έκφραση πρωτεΐνης υψηλής MSH3 ορίστηκε ως ≥85% καφέ χρώση των κυτταρικών πυρήνων σε κύτταρα όγκου και δεν ισχύει αν ούτε τα κύτταρα όγκου ούτε στρωματικά έδειξε MSH3 πρωτεΐνη έκφρασης [21].

MSI, υπερμεθυλίωση του υποκινητή του γονιδίου MLH1 και BRAF κατάσταση

για τα δείγματα των δύο μελετών Κάιρο, ανοσοϊστοχημεία (IHC) διεξήχθη σε FFPE ιστούς με αντισώματα εναντίον MLH1, MSH2 , MSH6 και PMS2. Επιπλέον, η ανάλυση MSI διεξήχθη όπου υπήρχε απουσία της έκφρασης της πρωτεΐνης MMR ή αμφίβολα αποτελέσματα IHC. κατάσταση MSI προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας δύο δείκτες (ΒΔΤ 25 και ΒΔΤ 26). Αν μόνο ένας από αυτούς τους δείκτες παρουσίασαν αστάθεια, η ανάλυση επεκτάθηκε με τέσσερις επιπλέον δείκτες (ΒΔΤ 40, D2S123, D5S346, και D17S250). Ένας όγκος ορίστηκε ως MSI εάν τουλάχιστον δύο από τους έξι δείκτες έδειξαν αστάθεια ή MSS εάν κανένας από τους δείκτες έδειξαν αστάθεια. Όγκους με μόνο έναν από τους δείκτες που δείχνουν αστάθεια ορίστηκαν ως MSI-χαμηλά και περιλαμβάνονται στην κατηγορία MSS. [30] καθεστώς υπερμεθυλίωση του

MLH1

γονίδιο υποκινητή και το

BRAF

κατάσταση μετάλλαξης V600E , αξιολογήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [30-32]

Στατιστική ανάλυση

Για την ανάλυση EMAST, οι ασθενείς χωρίστηκαν σε δύο κατηγορίες:. EMAST και μη EMAST όγκων. Η συσχέτιση μεταξύ EMAST και η έκφραση της πρωτεΐνης MSH3 ερευνήθηκε με ένα μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης με ανεξάρτητους παράγοντες της ομάδας και την έκφραση MSH3. OS ορίστηκε ως ο χρόνος από την ημερομηνία τυχαιοποίησης έως την ημερομηνία του θανάτου από οποιαδήποτε αιτία. καμπύλες OS εκτιμήθηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox. Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων και ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε ως στατιστικά σημαντική. Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SAS έκδοση του συστήματος 9.2.

στρατηγική αναζήτησης Λογοτεχνία, τα κριτήρια ένταξης, και τα δεδομένα εξόρυξη

Εμείς ανασκόπηση της βιβλιογραφίας σχετικά με τη συχνότητα των EMAST σε ασθενείς CRC με MSI και MSS όγκους . Μια έρευνα διεξήχθη από Medline, PubMed, και την Cochrane Library από Ιανουάριος 1990 – Απρίλιος 2014, με περιορισμό της αγγλικής γλώσσας, χρησιμοποιώντας τους ακόλουθους όρους αναζήτησης: EMAST, τετρανουκλεοτιδικές επαναλαμβάνω, σε συνδυασμό με τον καρκίνο του παχέος εντέρου και του παχέος εντέρου. επιλέχθηκαν πρωτότυπες δημοσιεύσεις αν η αφηρημένη περιέχονται δεδομένα για ασθενείς με EMAST. Στην περίπτωση των δύο αντίτυπα εκδόσεων, συμπεριλήφθηκε η πιο πρόσφατη και /ή πιο ολοκληρωμένη μελέτη. Εκδόσεις αποκλείστηκαν εάν η συχνότητα της EMAST περιορίζεται είτε σε ασθενείς με MSI ή MSS όγκων.

Αποτελέσματα

Επικράτηση της EMAST

Σε γενικές γραμμές, EMAST παρατηρήθηκε μεταξύ 45,9% του α συνολικά 183 όγκων (Πίνακας 1). Συχνότητα EMAST ήταν σημαντικά υψηλότερη στους ασθενείς με MSI όγκους σε σύγκριση με τους όγκους MSS:. 79,8% σε σύγκριση με 13,8% (p & lt? 0.001)

Η

Σε ασθενείς με MSS /EMAST όγκους αστάθεια γενικά εμφανίζονται σε 2 EMAST τόπους (69,2%, 9 στους 13), ενώ σε ασθενείς με MSI /EMAST όγκους αστάθεια συχνά εμφανίζονται σε 4 (33,8%, 24 από τα 71), ή 5 (50,7%, 36 από 71) EMAST τόπους ( Σχήμα 2Α). Η υψηλότερη συχνότητα της αστάθειας σε όγκους EMAST επιδείχθηκε στον τόπο D20S82 (91,7%, 77 από 84), ακολουθούμενη από την θέση MYCL1 (86,9%, 73 από 84), η θέση D9S242 (84,5%, 71 από 84 ), ο τόπος D8S321 (72,6%, 61 από τους 84) και ο τόπος D20S85 (65,5%, 55 από τους 84) (Σχήμα 2Β).

η

EMAST και MSH3

Η πλειοψηφία των ασθενών mCRC (n = 381, 69,4%) είχαν μια υψηλή έκφραση των MSH3 σε καρκινικά κύτταρα (Σχήμα 3). 21,1% των όγκων αποδεικνύεται πυρηνικών ετερογένεια με έκφραση και των δύο θετικών και αρνητικών πυρήνων κατά MSH3 IHC χρώση (Σχήμα 3Α-3C). Τόσο η έκφραση MSH3 και την κατάσταση EMAST ήταν γνωστό σε 139 ασθενείς. έκφραση πρωτεΐνης ετερογενείς ή υψηλής MSH3 δεν συσχετιζόταν με την κατάσταση EMAST (ρ = 0,088 και ρ = 0,856, αντίστοιχα).

έκφραση Ετερογενής MSH3 πρωτεΐνης (Α), αποδεικνύεται από την έκφραση τόσο του καφέ (θετικό) και το μπλε ( αρνητικό) πυρήνες κατόπιν χρώσης MSH3 IHC. έκφραση Χαμηλή πρωτεΐνη MSH3 ορίστηκε ως & lt? 85% καφέ χρώση των κυτταρικών πυρήνων σε κύτταρα όγκου (Β) και η έκφραση πρωτεΐνης υψηλής MSH3 ορίστηκε ως ≥85% καφέ χρώση των κυτταρικών πυρήνων σε κύτταρα όγκου (Γ)

Αποτελέσματα των ασθενών με όγκους MSI

οι ασθενείς με MSI /EMAST όγκοι ήταν ως επί το πλείστον γυναίκες (52% έναντι 22%, αντίστοιχα, p = 0,038) (Πίνακας 2). Επιπλέον, EMAST όγκοι πιο συχνά βρίσκονται πάνω από το ορθοσιγμοειδικής περιοχή (93% έναντι 63%, p = 0,006).

Η

Η διάμεση OS ήταν σημαντικά χειρότερο για τους ασθενείς με MSI /EMAST σε σύγκριση με το MSI /μη EMAST όγκοι αντιμετωπίζονται με δύο μελέτες Κάιρο (11,4 έναντι 39,4 μήνες, αντίστοιχα, HR 3,22, 95% CI 1.25 έως 8.30) (Πίνακας 3).

η

MSI /EMAST και η σχέση με τις πρωτεΐνες MMR

Η κατανομή της απώλειας των πρωτεϊνών MMR σε όγκους mCRC συνοψίζεται στο Σχ 4Α. Οι περισσότεροι ασθενείς με όγκους MSI έδειξε απώλεια του MLH1 ή /και η έκφραση πρωτεΐνης PMS2 (72,0%, 36 από τους 50 ασθενείς). Απώλεια MSH2 ή /και η έκφραση πρωτεΐνης MSH6 βρέθηκε σε 18,0% (9 από 50) των ασθενών. Αυτοί οι ασθενείς είναι πιθανό Lynch ή ασθενείς με σύνδρομο Lynch-όπως. Μόνο 7,1% (3 στα 42) των ασθενών με όγκο MSI /EMAST έδειξε απώλεια της έκφρασης της πρωτεΐνης MSH6, σε σύγκριση με 62,5% (5 από 8) των ασθενών με όγκους MSI /μη-EMAST.

(Α). Ποσοστό των ασθενών με γνωστό σύνδρομο Lynch και βλαστικής μετάλλαξη των διαφορετικών γονιδίων MSI, υποδιαιρούνται σε ασθενείς με όγκους MSI /EMAST και ασθενείς με όγκους MSI /μη-EMAST (Β).

Η

Η υπερμεθυλίωση του

MLH1

γονίδιο υποκινητή (32 από τους 40 ασθενείς) και

BRAF

μεταλλάξεις (24 από τους 40 ασθενείς) περιορίστηκαν στους ασθενείς με όγκο MSI /EMAST (p & lt? 0.001 και p = 0,004 αντίστοιχα).

EMAST σε ασθενείς με σύνδρομο Lynch

για να αναλύσει περαιτέρω τη σχέση της MSI και EMAST επιλέξαμε 39 ασθενείς με γνωστή σύνδρομο Lynch (με φύτρο μεταλλάξεις γραμμή στο

MSH2

γονίδιο (n = 11),

MLH1

γονίδιο (n = 10),

MSH6

γονίδιο (n = 10) και

PMS2

γονίδιο (n = 8)). Η πλειοψηφία του πληθυσμού αυτού έδειξε EMAST (29 από τους 39 ασθενείς). Κανένας από τους ασθενείς δεν παρουσίασε υπερμεθυλίωση του

MLH1

υποκινητή του γονιδίου, και όλοι οι όγκοι ήταν

BRAF

άγριου τύπου. Εννέα από τους 10 ασθενείς που παρουσιάζουν όγκους μη EMAST είχε βλαστική μετάλλαξη στο

MSH6

(Σχήμα 4Β).

Αποτελέσματα των ασθενών με όγκους MSS

Baseline ασθενούς και όγκου τα χαρακτηριστικά των ασθενών με MSS όγκους (ομάδα δοκιμής και ομάδα επικύρωσης), υποδιαιρείται με EMAST και μη EMAST όγκους που παρουσιάζονται στον πίνακα 2. δεν υπήρχε καμία σημαντική διαφορά στην έκβαση για ασθενείς με EMAST σύγκριση με τους ασθενείς με όγκους μη EMAST (Πίνακας 3 ).

Ανασκόπηση της βιβλιογραφίας

Η αναζήτηση βιβλιογραφίας εντοπίστηκαν 7 μελέτες στις οποίες EMAST περιγράφηκε στο στάδιο ασθενείς I-IV CRC με MSI και MSS όγκους [21-24,27,33, 34]. Δύο μελέτες αποκλείστηκαν: μία μελέτη που περιγράφεται τον ίδιο πληθυσμό [23] και μία μελέτη αξιολόγησε την επικράτηση του EMAST μόνο σε ασθενείς με όγκους MSS [27]. Τρεις μελέτες είχαν περιοριστεί ο αριθμός των όγκων MSI. Σχήμα 5 συνοψίζει ένα δάσος οικόπεδο των 5 δημοσιευμένες μελέτες και η παρούσα μελέτη για τον επιπολασμό της EMAST σε ασθενείς σταδίου Ι-IV CRC με MSI και MSS όγκων. EMAST είναι σημαντικά συχνότερη σε όγκους με MSI (148/174) (RR 4,80, 95% διάστημα εμπιστοσύνης 3,90 έως 5,91). Παρατηρήθηκε σημαντική ετερογένεια.

Η

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη παρουσιάζει την ανάλυση σχετικά με τη συχνότητα και την προγνωστική αξία της EMAST σε ασθενείς με mCRC. Παρά το γεγονός ότι παρατηρήθηκε EMAST στο 45,9% του συνόλου των ασθενών mCRC, ήταν περισσότερο έντονη σε όγκους MSI (79,8%). Η συχνότητα των EMAST μεταξύ των όγκων MSS (13,8%) ήταν πολύ χαμηλότερη στη μελέτη μας σε σύγκριση με τις περισσότερες μελέτες στο στάδιο I-IV CRC [21-24,27,34]. Το ευρύ φάσμα των συχνοτήτων (0,54 – 60,2%) των EMAST μεταξύ MSS όγκους που περιγράφονται στην βιβλιογραφία [21-24,27,33,34] μπορεί να οφείλεται στο γεγονός ότι δεν υπάρχει συναίνεση σχετικά με τον ορισμό της EMAST και του πίνακα που απαιτούνται για την διάγνωση της. Λόγω της πολυμορφικής φύσης του επαναλήψεις τετρανουκλεοτιδική στην παρούσα μελέτη χρησιμοποιήσαμε αυστηρά κριτήρια για τον ορισμό της EMAST:. Τουλάχιστον δύο από τα πέντε τετρανουκλεοτιδική δείκτες θα πρέπει να δείχνουν αστάθεια

Παρά το γεγονός ότι αρκετές μικρές μελέτες (n = 3 έως n = 56) [21-24,33,34] έδειξαν ότι MSI πάντα συνδέεται με EMAST, η συσχέτιση μεταξύ EMAST και MSI δεν είναι ευρέως αποδεκτή. Βρήκαμε μια υψηλή συχνότητα EMAST στην MSI όγκους, η οποία επιβεβαιώθηκε με ανάλυση της υπάρχουσας βιβλιογραφίας στο στάδιο I-IV CRC (Σχήμα 5). Μόνο ένα μικρό υποσύνολο των ασθενών με όγκους MSI είναι μη-EMAST. Είναι ενδιαφέρον ότι, η πλειοψηφία των ασθενών με όγκους MSI /μη-EMAST έδειξε απώλεια του MSH6. Αυτό συνάδει με το γεγονός ότι MSH6 ασχολείται μόνο με την επισκευή ασυμφωνία μονονουκλεοτίδης [35,36]. Οι ασθενείς με όγκους MSI /μη-EMAST είναι πιο συχνά άνδρες και οι όγκοι αναπτύσσονται πιο συχνά στο ορθό, τα χαρακτηριστικά αυτά είναι συγκρίσιμα σε ασθενείς με

MSH6

μεταλλάξεις βλαστικής γραμμής [37]. Στον πληθυσμό του MSI όγκοι Η παρουσία του EMAST συσχετίζεται με

MLH1

ανεπάρκεια, η οποία προκαλεί μια συνολική αναντιστοιχία DNA ελάττωμα επισκευή, τόσο στο σύνδρομο Lynch, καθώς και στην σποραδική ρύθμιση, επιβεβαιώνοντας προηγούμενες παρατηρήσεις [21,27 ].

δεδομένα σχετικά με το φαινότυπο EMAST στο CRC είναι λιγοστές και υποκείμενος μηχανισμός (ες) παραμένουν ασαφείς. Οι πρώτες εκθέσεις πρότειναν ότι EMAST μπορεί να σχετίζεται με μεταλλάξεις στο

TP53

γονίδιο [16,17] ή ότι τα περιβαλλοντικά καρκινογόνα μπορεί να επιδεινώσει αυτό το φαινότυπο [38] σε καρκίνους, εκτός από CRC. Αργότερα, μια ένωση έγινε μεταξύ της απώλειας των MSH3 και EMAST στο CRC [21]. Λόγω του γεγονότος ότι MutSβ έχει μια ισχυρή συγγένεια για την αναγνώριση περισσότερο από δύο ασύζευκτα νουκλεοτίδια και γενετική συμπλήρωση της ανεπάρκειας MSH3 σε ανθρώπινα κύτταρα αυξημένη σταθερότητα σε τόπους που περιέχουν δινουκλεοτίδιο και τετρανουκλεοτιδικές επαναλήψεων [39], προβλήθηκε το επιχείρημα ότι αυτή η απώλεια MutSβ λόγω MSH3 απενεργοποίηση μπορεί να οδηγήσει σε MSI όχι μόνο σε τόπους που περιέχουν επαναλήψεις δινουκλεοτιδίου, αλλά και σε τόπους με επαναλήψεις τετρανουκλεοτιδική, όπως EMAST [21]. Πρόσφατες μελέτες επιβεβαιώνουν τη σχέση μεταξύ της απώλειας των MSH3 και EMAST στην CRC, ωστόσο ο ακριβής υποκείμενος μηχανισμός παραμένει άγνωστος [25,26]. Εμείς δεν κατάφερε να αποδείξει μια συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης MSH3 και EMAST. Στην πραγματικότητα, κάναμε βρείτε το ετερογενές πρότυπο έκφρασης των MSH3 στο 21,1% των ασθενών, όπως περιγράφεται από τους άλλους, αν και αυτό δεν συσχετίστηκε με EMAST. Ωστόσο μελέτη μας είχε ένα μικρό αριθμό ασθενών. Μια άλλη πιθανή εξήγηση για τη διαφορά μεταξύ της μελέτης μας και προηγούμενες μελέτες θα μπορούσε να είναι ένας πιθανός undersampeling προκατάληψη αφού χρησιμοποιήσαμε ένα δείγμα TMA ανά όγκου, αντί της πλήρους διαφάνειες όγκου.

Έχουμε αποδείξει ότι οι ασθενείς με όγκους MSI /μη-EMAST είχε μια σημαντικά καλύτερη πρόγνωση σε σύγκριση με ασθενείς με όγκους MSI /EMAST. Η προσθήκη EMAST σε όγκους MSI φαίνεται να επιδεινώσει τη συνολική πρόγνωση και την επιβίωση. Η ομάδα MSI /μη-EMAST θα πρέπει να αναμένεται να εμπλουτιστεί για

MSH6

ανεπάρκεια, δεδομένου EMAST θα ταυτιστεί με μια συνολική αναντιστοιχία επιδιόρθωση του DNA ελάττωμα, όπως με το

MLH1

ή

MSH2

ανεπάρκεια. Τα αποτελέσματά μας για το συσχετισμό των EMAST με την κλινική έκβαση θα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή λόγω του μικρού αριθμού των ασθενών στις διάφορες υποομάδες.

Εν ολίγοις, η συχνότητα των EMAST μεταξύ των ασθενών με όγκους mCRC MSS είναι χαμηλή σε σύγκριση με ασθενείς με όγκους MSI. Δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης EMAST και MSH3. Κάναμε βρούμε μια σαφής σύνδεση μεταξύ της MSI και EMAST, και το αποτέλεσμα ήταν σημαντικά καλύτερο για τους ασθενείς με όγκους mCRC MSI /μη-EMAST. Περαιτέρω μελέτες δικαιολογείται για να αποσαφηνιστεί η μοριακή βάση για EMAST και να δείξει κατά πόσον οι μεταβολές τετρανουκλεοτιδική παρατηρούνται σε όγκους EMAST μπορεί να έχει μια λειτουργική επίδραση από μόνες τους ή απλώς αντιπροσωπεύουν παριστάμενο μεταβολές σε ένα υποσύνολο των όγκων με ειδικά ελαττώματα στην αντιγραφή και επιδιόρθωση του DNA.

Υποστήριξη Πληροφορίες

πίνακα S1. Τετρανουκλεοτιδικές αλληλουχίες των εκκινητών PCR μικροδορυφόρων

doi:. 10.1371 /journal.pone.0124538.s001

(PDF)

Ευχαριστίες

Η μελέτη αυτή υποστηρίζεται από μια επιχορήγηση από το ολλανδικό του παχέος εντέρου Ομάδα του καρκίνου (DCCG).