Αφηρημένο

Σκοπός

Η έκφραση της δεσμογλεΐνες (DSGs), το οποίο είναι γνωστό ότι είναι ζωτικής σημασίας για τη δημιουργία και τη διατήρηση της προσκόλλησης κυττάρου-κυττάρου που απαιτείται για την ακεραιότητα του ιστού, έχει χαρακτηριστεί το η επιδερμίδα και θύλακα της τρίχας? Ωστόσο, η έκφραση τους σε άλλα επιθηλιακούς ιστούς όπως ο προστάτης είναι ελάχιστα κατανοητή. Αν και προς τα κάτω ρύθμιση της κλασικής καντερίνες, όπως Ε-καδερίνης, έχει περιγραφεί σε δείγματα ιστού καρκίνου του προστάτη, η έκφραση του δεσμογλεΐνες έχει μόνο αναφερθεί προηγουμένως σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου του προστάτη. Σε αυτή τη μελέτη η οποία χαρακτηρίζεται δεσμογλείνης έκφραση σε φυσιολογικούς ιστούς του προστάτη, και περαιτέρω ερευνήθηκε αν δεσμογλεΐνης 2 (DSG2) έκφραση ειδικά μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα δυνητικό κλινικό προγνωστικό παράγοντα για ασθενείς που διαγνώστηκαν με πρωτοπαθή καρκίνο του προστάτη.

Πειραματικός σχεδιασμός

Αξιοποιήσαμε ανοσοφθορισμού για να εξετάσει την έκφραση DSG2 σε κανονικό προστάτη (

n

= 50) και σε κλινικά καλά χαρακτηρισμένο ομάδα των ασθενών με καρκίνο του προστάτη (

n

= 414). Συσχέτιση της έκφρασης DSG2 με κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικών και βιοχημική υποτροπή αναλύθηκε για να εκτιμηθεί η κλινική σημασία του.

Αποτελέσματα

Αυτές οι μελέτες αποκάλυψαν ότι DSG2 και DSG4 ήταν ειδικά εκφράζονται σε προστάτη του αυλού κυττάρων, ενώ βασική κύτταρα στερούνται την έκφραση τους. Σε αντίθεση, DSG1 και DSG3 δεν εκφράζεται σε φυσιολογικό επιθήλιο προστάτη. Περαιτέρω αναλύσεις της έκφρασης DSG2 στον καρκίνο του προστάτη αποκάλυψε ότι τα μειωμένα επίπεδα αυτού του βιοδείκτη ήταν ένας σημαντικός ανεξάρτητος δείκτης κακής κλινικής έκβασης.

Συμπέρασμα

Εδώ έχουμε αναφέρει για πρώτη φορά ότι μια χαμηλή έκφραση DSG2 φαινότυπος είναι ένα χρήσιμο προγνωστικό βιοδείκτη της επιθετικότητας του όγκου και μπορεί να χρησιμεύσει ως βοήθημα στον προσδιορισμό των ασθενών με κλινικά σημαντική καρκίνο του προστάτη

Παράθεση:. Κομμωτήριο AG, Καστίγιο-Martin M, Bonal DM, Rybicki BA, Christiano AM, Cordon -Cardo C (2014) Χαρακτηρισμός της δεσμογλεΐνης έκφρασης στην κανονική του προστάτη αδένα. Δεσμογλεΐνης 2 είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για επιθετικό καρκίνο του προστάτη. PLoS ONE 9 (6): e98786. doi: 10.1371 /journal.pone.0098786

Συντάκτης: Craig Ν Robson, Βόρεια Ινστιτούτο για την Έρευνα του Καρκίνου, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 17 Φεβ 2014? Δεκτές: 7 Μαΐου 2014? Δημοσιεύθηκε: 4 Ιουνίου 2014

Copyright: © 2014 Barber et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο έχει υποστηριχθεί εν μέρει από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας χορηγεί P01-CA087497 (CCC και MCM) και R01-ES11126 (BAR). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

δεσμοσώματα είναι ένας τύπος διασταύρωση αγκύρωσης κυττάρου-κυττάρου που βρέθηκαν σε ιστούς που υποβάλλονται σε υψηλό βαθμό μηχανική καταπόνηση, και απώλεια της πρόσφυσης των δεσμοσωμάτων συνδέεται με ασθένειες που επηρεάζουν το δέρμα, τα μαλλιά, και η καρδιά [1] – [ ,,,0],13]. Στην δεσμόσωμα, η οικογένεια cadherin πρωτεϊνών αντιπροσωπεύεται από τα λεγόμενα «μη κλασικά» καντερίνες, οι οποίες περιλαμβάνουν δεσμογλεΐνες (DSG 1-4) και desmocollins (DSC 1-3) [14]. Δεσμογλεΐνες και desmocollins παίζουν διπλό ρόλο στο σχηματισμό των δεσμοσωμάτων. Στον εξωκυτταρικό χώρο, δεσμογλεΐνες και desmocollins σε αντίθετες κύτταρα αλληλεπιδρούν σε ένα ετεροφιλική εξαρτώμενο από ασβέστιο τρόπο μέσω καντερίνης επαναλαμβανόμενες επικράτειες τους. Ενδοκυτταρικώς, οι καντερίνες δεσμεύονται με την πλακοσφαιρίνη και plakophilin, η οποία με τη σειρά τους συνδέονται με δεσμοπλακίνη. Δεσμοπλακίνη τότε συνδέεται με ενδιάμεσα νημάτια, ασφαλίζοντας έτσι το σύνολο της δομής στον κυτταρικό σκελετό [15], [16]. Ενώ σαφώς σημαντικό για τη διατήρηση της ακεραιότητας των ιστών ενηλίκου, ο ρόλος των δεσμοσωμάτων καντερίνες στην πρόοδο του καρκίνου που είναι λιγότερο καλά κατανοητές. Απώλεια ετεροζυγωτίας κοντά στην χρωμοσωμική περιοχή που περιέχει το γονίδιο δεσμοσωμάτων συστάδα καντερίνη έχει αναφερθεί σε καρκίνο του οισοφάγου, καθώς και κεφαλής και λαιμού καρκίνωμα από πλακώδες επιθήλιο [17], [18]. Μεταβολές στην έκφραση του δεσμογλεΐνες έχουν αναφερθεί για μία ποικιλία καρκίνων. Μειωμένη έκφραση του DSG2 έχει αναφερθεί σε γαστρικά και παγκρεατικά καρκινώματα [19] – [21]. Αντιστρόφως, η υπερέκφραση του DSG2 και DSG3 έχει αναφερθεί σε καρκινώματα πλακωδών κυττάρων του δέρματος, καθώς και καρκίνο κεφαλής και λαιμού, αντίστοιχα [22], [23].

Η έκφραση των καδερινών δεσμοσωμάτων έχει πλήρως χαρακτηρίζεται από το η επιδερμίδα, θύλακα της τρίχας, και arachnoidal ιστού. Ενώ η έκφραση του DSG2 είναι γνωστό ότι είναι πανταχού παρούσα σε όλους τους ιστούς που σχηματίζουν δεσμόσωμα, η έκφραση των υπολοίπων καντερίνες δεσμοσωμάτων εκτός της επιδερμίδας και του θύλακα της τρίχας είναι ελάχιστα κατανοητή [24]. Μια μελέτη από Whittock και Bower το 2003 χρησιμοποιήθηκαν RT-PCR για να αναλυθεί η έκφραση του

DSG4

σε ένα πάνελ ιστών και βρήκαν ότι

DSG4

μπορούσε να ανιχνευθεί σε διάφορους ιστούς, συμπεριλαμβανομένου του προστάτη, γεγονός που υποδηλώνει ότι το προφίλ έκφρασης δεσμογλεΐνης του προστάτη μπορεί να εκτείνεται πέρα ​​από την πανταχού παρούσα έκφραση της DSG2 [25]. Η ρύθμιση προς τα κάτω ή απώλεια πρωτεϊνών προσκόλλησης κυττάρου-κυττάρου – όπως την κλασική καντερίνη, E-cadherin – είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό μιας ποικιλίας καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του προστάτη, και μπορεί να προκληθεί από μια ποικιλία διαφορετικών μηχανισμών [26], [ ,,,0],27]. Αντιστρόφως, αν και η παρεκκλίνουσα έκφραση του δεσμογλεΐνες έχει αναφερθεί σε διάφορους τύπους καρκίνου, η έκφραση αυτών των καντερινών στον καρκίνο του προστάτη έχει αναφερθεί μόνο σε κυτταρικές σειρές μέχρι σήμερα [28] – [30]. Σε αυτή τη μελέτη χαρακτηρίζουν για πρώτη φορά την έκφραση σε φυσιολογικό δεσμογλεΐνες δείγματα ιστών ανθρώπινου προστάτη και τον προσδιορισμό του ειδικού τύπου κυττάρου στο οποίο προστάτη είναι συγκεκριμένες δεσμογλεΐνες εκφράζονται. Στη συνέχεια την ανάλυση της έκφρασης του DSG2 σε ένα καλά χαρακτηρισμένο κοόρτη ασθενών με καρκίνο του προστάτη, και να εξετάσει τη σχέση μεταξύ της έκφρασης DSG2 και κλινική έκβαση των ασθενών. Τα αποτελέσματά μας αποκαλύπτουν ότι DSG2 και DSG4 εκφράζονται ειδικά στα κύτταρα του αυλού του φυσιολογικού ανθρώπινου προστάτη, ενώ DSG1 και DSG3 δεν εκφράζονται στο επιθήλιο του προστάτη. Περαιτέρω, η μειωμένη έκφραση του DSG2 βρέθηκε να συνδέεται ανεξάρτητα με μικρότερη βιοχημική υποτροπή, τονίζοντας την πιθανή χρησιμότητα της έκφρασης DSG2 ως προγνωστικός βιοδείκτη της επιθετικότητας του καρκίνου του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική δήλωση

Κατεψυγμένα κανονική διαφάνειες ανθρώπινο ιστό του προστάτη αντιστοιχεί σε προστατικού μεταβατική ζώνη με ιστολογικά επιβεβαιωμένο περιοχές της κανονικής αδένων από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ριζική προστατεκτομή ελήφθησαν ανώνυμα από την Columbia όγκων Τράπεζα Υπηρεσία σύμφωνα με το Διοικητικό συμβούλιο Institutional Review of Columbia Πανεπιστήμιο πρωτόκολλο # AAAB2447. Η TMAs που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη χτίστηκαν στο εργαστήριο Cordon-Cardo, και παρήχθησαν από 414 ριζική περιπτώσεις προστατεκτομή, αρχικά συλλεχθεί μεταξύ Σεπτεμβρίου 2000 και Ιανουαρίου 2005 το Σύστημα Henry Ford Health στο Ντιτρόιτ, μετά από εγκεκριμένο πρωτόκολλο # ενός συμβουλίου Institutional Review 1018 [31]. Κάθε συμμετέχων ολοκλήρωσε μια σύντομη τηλεφωνική συνέντευξη (δημογραφικά στοιχεία και το ιστορικό της υγείας), ένα ερωτηματολόγιο συχνότητας κατανάλωσης τροφίμων, και ένα πρόσωπο με πρόσωπο συνέντευξη σχετικά με τα ανοίγματα που σχετίζονται με την εργασία. Επιπλέον, όλοι οι συμμετέχοντες έδωσαν ένα δείγμα αίματος για γενετικές αναλύσεις και για τη δοκιμή PSA. Εγγραφή έκλεισε την άνοιξη του 2005, και η IRB παραμένει ανοιχτό για την PSA παρακολούθησης (επαφή μη-ασθενή) για τα υποκείμενα της μελέτης.

Cell Culture και του RNA Απομόνωση

Η καλοήθης επιθηλιακά προστάτη BPH- 1 κυτταρική γραμμή (μία γενναιόδωρη προσφορά από τον Dr. Ralph Buttyan, και εμπορικά διαθέσιμο μέσω του Γερμανική Συλλογή μικροοργανισμών και κυτταρικών Καλλιεργειών? DSMZ, Braunschweig, Germany) καλλιεργήθηκε σε RPMI με 10% ορό εμβρύου μόσχου (FBS) (Invitrogen, Carlsbad, CA). Τρία ανθρώπινα μεταστατικές κυτταρικές γραμμές καρκίνου του προστάτη, χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη: DU145, PC3 και LNCaP. Η κυτταρική γραμμή DU145 (ATCC, Manassas, VA) καλλιεργήθηκε σε ΜΕΜ με 10% FBS (Invitrogen, Carlsbad, CA). Η κυτταρική σειρά PC3 (ATCC, Manassas, VA) καλλιεργήθηκε σε F12K με 10% FBS (Invitrogen, Carlsbad, CA). Η LNCaP κυτταρική σειρά (ATCC, Manassas, VA) καλλιεργήθηκε σε RPMI με 10% FBS (Invitrogen, Carlsbad, CA). Για την απομόνωση του RNA, τα κύτταρα πλύθηκαν σε 1 Χ PBS, σε επεξεργασία με θρυψίνη, και σφαιροποιήθηκαν μέσω φυγοκέντρησης. Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν τέσσερα ημέρες μετά τη συρροή πριν από την απομόνωση του RNA όπως έχει αναφερθεί στο παρελθόν ότι το πλήρες προφίλ έκφραση δεσμογλεΐνης τους επιτυγχάνεται σε αυτό το χρονικό σημείο [32]. Τα σφαιρίδια του κυττάρου επανααιωρήθηκαν σε 1Χ PBS και στη συνέχεια σφαιροποιήθηκαν μέσω φυγοκέντρησης για να πλύνετε. Αυτό το στάδιο έκπλυσης επαναλήφθηκε δύο φορές για να απομακρυνθούν όλα τα ίχνη μέσων πριν από τη συγκομιδή RNA. Το RNA στη συνέχεια συλλέγονται χρησιμοποιώντας το RNeasy Mini Kit και QIAshredder ακολουθώντας το πρωτόκολλο του κατασκευαστή με τίτλο «Καθαρισμός του ολικού RNA από κύτταρα ζώων Χρησιμοποιώντας την τεχνολογία Spin» (Qiagen, Valencia, CA).

Αντισώματα

Anti -DSG3 (κλώνος 5Η10) και DSG1 (κλώνος 27B2) έχουν μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού έχουν περιγραφεί προηγουμένως και μας δόθηκαν ως δωρεά από τον Δρ Τζέιμς Wahl? και τα δύο χρησιμοποιούνται σε αραίωση 1:10 [33]. Αντι-DSG2 μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (κλώνος 10G11) αγοράστηκε από ARP, Inc (Belmont, ΜΑ) και χρησιμοποιήθηκαν σε αραίωση 1:50 για ανάλυση ανοσοφθορισμού της κανονικής γραμμών προστατικού ιστού και κυτταρικές? αντι-DSG1 /2 μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (κλώνος DG3.10) αγοράστηκε από Fitzgerald (Acton, ΜΑ) και χρησιμοποιήθηκαν σε αραίωση 1:20 για TMAs. Anti-DSG4 πολυκλωνικό ινδικό χοιρίδιο αντίσωμα που παράγεται από τον Δρ Lutz Langbein και που μας δόθηκαν ως δωρεά, αυτό το αντίσωμα χρησιμοποιήθηκε σε αραίωση 1:2000. Αντι-κυτοκερατίνης 14 (CK14) πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού αγοράστηκε από την Covance (Princeton, NJ) και χρησιμοποιήθηκε σε μια αραίωση του 1:1000. Anti-PSA μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αγοράστηκε από την Dako (Carpinteria, CA) και χρησιμοποιήθηκαν σε αραίωση 1:20. Anti-PSA μονοκλωνικό αντίσωμα κουνελιού αγοράστηκε από την Abcam (Cambridge, ΜΑ) και χρησιμοποιήθηκαν σε αραίωση 1:200. Αντι-κυτοκερατίνες 8/18 (Ck8 /18) πολυκλωνικό αντίσωμα ινδικού χοιριδίου αγοράστηκε από Progen (Χαϊδελβέργη, Γερμανία) και χρησιμοποιήθηκε σε αραίωση 1:100. 488 δευτερογενή αντισώματα Alexa Fluor 594 ή Alexa Fluor αγοράστηκαν από την Invitrogen (Carlsbad, CA) και χρησιμοποιήθηκαν σε αραίωση 1:600.

RT-PCR

Το ολικό RNA από ανθρώπινο κανονικό δέρμα και φυσιολογικό προστάτη (και οι δύο προέρχονται από έναν μόνο δότη) αγοράστηκε στο εμπόριο (Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA). Πρώτος κλώνος cDNA παρασκευάστηκε χρησιμοποιώντας Ολίγο dT και το πρώτο-Strand Synthesis System SuperScript II (Invitrogen, Carlsbad, CA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. PCR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας Platinum PCR Supermix (Invitrogen, Carlsbad, CA) και εκκινητές για τις μεταγραφές του ενδιαφέροντος (συνοψίζονται στον Πίνακα S1). Το ακόλουθο πρωτόκολλο PCR χρησιμοποιήθηκε: Στάδιο 1: 94 ° C για 3 λεπτά? Βήμα 2: 94 ° C για 30 δευτερόλεπτα, 56 ° C για 45 δευτερόλεπτα, 72 ° C για 2 λεπτά? Βήμα 3: 72 ° C για 10 λεπτά? επαναλάβετε το βήμα 2 για 34 κύκλους. Τα προϊόντα PCR υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση σε 1% πηκτή αγαρόζης /ΤΒΕ που περιέχει 1Χ βρωμιούχο αιθίδιο και κατέστησαν ορατά χρησιμοποιώντας Kodak ηλεκτροφόρησης Τεκμηρίωση και Σύστημα Ανάλυσης 120 κάμερα (Kodak, Rochester, ΝΥ).

qRT-PCR

RNA συλλέχθηκε από κυτταρικές σειρές που μας ενδιαφέρει όπως περιγράφηκε. Πρώτος κλώνος cDNA παρασκευάστηκε χρησιμοποιώντας Ολίγο dT και το πρώτο-Strand Synthesis System SuperScript III (Invitrogen, Carlsbad, CA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. qRT-PCR πραγματοποιήθηκε σε ένα μηχάνημα Stratagene Mx3005P και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό Stratagene MxPro QPCR (Stratagene, Santa Clara, CA). Όλες οι αντιδράσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix (Qiagen, Valencia, CA), 200 ηΜ εναρκτήρων (που συνοψίζονται στον Πίνακα S1), και 10 ng cDNA σε όγκο αντίδρασης 20 μι. Η ακόλουθη αντίδραση PCR χρησιμοποιήθηκε: Στάδιο 1: 95 ° C για 10 λεπτά? Βήμα 2: 95 ° C για 15 sec, 60 ° C για 1 λεπτό? επαναλάβετε το βήμα 2 για 40 κύκλους. Όλα τα δείγματα έγιναν εις τετραπλούν και τα δείγματα ομαλοποιήθηκαν έναντι ενός ενδογενούς εσωτερικού ελέγχου, β-ακτίνη.

ανοσοφθορισμού-κατεψυγμένους ιστούς και κυτταρικές γραμμές

Κατεψυγμένα φυσιολογικό διαφάνειες ανθρώπινο προστατικό ιστό αντιστοιχεί σε προστατικού μεταβατικές ζώνη με ιστολογικά επιβεβαιωμένο περιοχές κανονικής αδένων από ασθενείς χρησιμοποιήθηκαν για τον χαρακτηρισμό των αντισωμάτων για την ανίχνευση δεσμογλεΐνης έκφρασης. Οι κυτταρικές σειρές αναπτύχθηκαν σε γυάλινες καλυπτρίδες (Fisher, Pittsburgh, ΡΑ) σε πλάκες ιστοκαλλιέργειας 6-φρεατίων (Falcon BD, Bedford, ΜΑ). Διαφάνειες /καλυπτρίδες μονιμοποιήθηκαν σε ψυχρή 100% μεθανόλη για 15 λεπτά στους -20 ° C που ακολουθείται από ψυχρή 100% καθήλωση ακετόνη για 2 λεπτά στους -20 ° C. Διαφάνειες /καλυπτρίδες πλύθηκαν σε 1 Χ αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό άλας (PBS) με ανάδευση, διαπερατά με 1% Triton-Χ100 σε 1Χ PBS σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά, και πλύθηκαν πάλι σε 1Χ PBS με ανάδευση. Διαφάνειες /καλυπτρίδες επωάστηκαν σε 0.1% Triton Χ-100/1% αλβουμίνη βόειου ορού (BSA) /1Χ PBS μπλοκ σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα, ακολουθούμενη από επώαση πρωτογενές αντίσωμα όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Την επόμενη ημέρα διαφάνειες /καλυπτρίδες πλύθηκαν σε 1XPBS με ανάδευση, στη συνέχεια αραίωση 1:600 ​​του δευτερογενούς αντισώματος, είτε Alexa Fluor 594 ή Alexa Fluor 488 (Invitrogen, Carlsbad, CA), προστέθηκε και slides /καλυπτρίδες επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 45 λεπτά. Διαφάνειες /καλυπτρίδες στη συνέχεια πλένονται σε 1XPBS με ανάδευση, βυθισμένο σύντομα σε νερό και τα συναρμολογημένα χρησιμοποιώντας μέσο στερέωσης Vectashield με DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA).

ανοσοφθορισμού Ανάλυση Ιστών Microarray (TMA) Τμήματα

TMAs χτίστηκαν ως εξής: αιματοξυλίνη & amp? Ηωσίνη χρωματισμένο τμήματα από τα δείγματα (FFPE) προστατεκτομή φορμόλη-σταθερής παραφίνη-ενσωματωμένες εξετάστηκαν για τον προσδιορισμό βιώσιμων, μορφολογικά αντιπροσωπευτικές περιοχές της κανονικής αδένων του προστάτη και αδενοκαρκινώματος κυψελωτά από την οποία θα μπορούσαν να ληφθούν πυρήνα της βελόνας δείγματα. Από κάθε δείγμα, εις τριπλούν δίπλα πυρήνες ιστού με διάμετρο 0,6 mm κτυπήθηκαν και παρατάσσονται σε ένα μπλοκ δέκτη παραφίνης χρησιμοποιώντας ένα όργανο ακριβείας (Beecher Instruments, MD). Όλες οι διατρήσεις ελήφθησαν από την εστίαση με το υψηλότερο Gleason Score, και η πλειοψηφία των διατρήσεων ελήφθησαν από την κυρίαρχη οζίδιο όγκου – ορίζεται ως η μεγαλύτερη όζος με την υψηλότερη Gleason Σχολίων και το στάδιο σε μια συγκεκριμένη δείγμα προστατεκτομή. Παρακολούθηση δεδομένων για όλες τις υποθέσεις που αφορούν απόδειξη της βιολογικής υποτροπής ήταν διαθέσιμο για αυτή τη μελέτη. Διαδοχική τομές πέντε μικρομέτρων από αυτά τα μπλοκ ΤΜΑ χρησιμοποιήθηκαν για ανάλυση ανοσοφθορισμού, και το πρώτο τμήμα χρωματίστηκε με αιματοξυλίνη & amp? Ηωσίνη για να χρησιμεύσει ως πρότυπο για μορφολογία. Οι πλάκες αποπαραφινοποιήθηκαν και επανυδατώθηκαν, και ανάκτηση αντιγόνου διεξήχθη με διαφάνειες θέρμανση σε ατμοποιητή σε κιτρικό ρυθμιστικό, ρΗ 6.0 για 15 λεπτά. Τα πλακίδια στη συνέχεια πλύθηκαν μία φορά σε 1Χ PBS. Τα πλακίδια επωάστηκαν σε 0.1% Triton Χ-100/1% BSA /PBS 1Χ ορό αποκλεισμού σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα ακολουθούμενη από πρωτογενή επώαση αντίσωμα όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Την επόμενη ημέρα, τα πλακίδια πλύθηκαν σε 1XPBS με ανάδευση, στη συνέχεια αραίωση 1:600 ​​του δευτερογενούς αντισώματος, είτε Alexa Fluor 594 ή Alexa Fluor 488 (Invitrogen, Carlsbad, CA), προστέθηκε και τα πλακίδια επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 45 λεπτά . Τα πλακίδια στη συνέχεια πλύθηκαν τρεις φορές σε 1Χ PBS + 0.1% Triton Χ με ανάδευση, πλύθηκαν τρεις φορές σε 1Χ PBS, βυθισμένο σύντομα σε νερό και στερεώθηκαν χρησιμοποιώντας μέσο στερέωσης Vectashield με DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Ck8 /18 έκφραση χρησιμοποιήθηκε για τον εντοπισμό όλων των επιθηλιακών περιοχές (τόσο του όγκου και κανονικούς αδένες) στους πυρήνες και την έκφραση των πρωτεϊνών που ενδιαφέρουν βαθμολογήθηκε με προσδιορισμό του ποσοστού των κυττάρων όγκου με ανοσοαντιδραστικότητα ανά πυρήνα ιστού (από 0% έως 100% ), χωρίς να λαμβάνεται υπόψη η ένταση σήματος. Η αξιολόγηση διεξήχθη με uropathologist (MCM) μετά χρησιμοποιήθηκαν προηγουμένως μεθοδολογία: περιοχές του όγκου στον πυρήνα ταυτοποιήθηκαν πρώτα με DAPI, επιβεβαιώνεται από την παρουσία του Ck8 /18 και στη συνέχεια Ο καθιέρωση ποσοστό των όγκων κυττάρων με έκφραση μεμβράνης του DSG2 [ ,,,0],34] .Οι μέσες τιμές των αντιπροσωπευτικών πυρήνες από κάθε δείγμα ασθενή χρησιμοποιήθηκαν στη συνέχεια για στατιστικές αναλύσεις. Ένα θετικό cut-off 60% χρησιμοποιήθηκε για να εκτελέσει στατιστικές αναλύσεις συσχέτισης με κλινικο- παθολογικά χαρακτηριστικά και επιβίωση, καθώς αυτό ήταν το κατά προσέγγιση διάμεση τιμή έκφρασης που παρατηρήθηκε για DSG2 στην παρούσα προστάτη κοόρτη του καρκίνου, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως στην βιβλιογραφία [35].

Καρκίνος του προστάτη Colson και Κλινικο-παθολογική Χαρακτηριστικά

Στην παρούσα μελέτη αναλύσαμε μια ομάδα των 414 ασθενών που έχουν διαγνωστεί με πρωτοπαθή καρκίνο του προστάτη. Οι κλινικο- παθολογικά χαρακτηριστικά των ασθενών αυτών συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Η μέση ηλικία κατά τη διάγνωση ήταν 61 έτη (εύρος: 41 έως 74,7 ετών). Οι περισσότεροι από τους ασθενείς ήταν λευκό (56%) ή Αφρο-Αμερικανός (43%). Η μέση παρακολούθηση ήταν 56,8 μήνες (εύρος: 1,4 έως 123,6 μήνες). Μόνο 98 (24%) από τους ασθενείς εμφάνισαν μια βιοχημική υποτροπή, που ορίζεται ως έχουσα δύο συνεχόμενες ανιχνεύσιμα αυξανόμενα επίπεδα PSA (& gt? 0,2 ng /ml) τέσσερις εβδομάδες ή περισσότερο μετά τη χειρουργική επέμβαση. Οι καμπύλες επιβίωσης χωρίς βιοχημικής υποτροπής που αντιστοιχούν σε πολύ γνωστούς παράγοντες κινδύνου κλινικο-παθολογικές, όπως προ-χειρουργικές PSA, Παθολογική Σκηνή, Gleason Score, Angiolymphatic εισβολή και Περινευρική εισβολή, που εμφανίζεται στο σχήμα S1.

Η

Στατιστική Ανάλυση

η στατιστική ανάλυση έγινε με τη χρήση του SPSS v18.0 (ΙΒΜ, Armonk, NY). t-test του Student χρησιμοποιήθηκε για να συγκριθεί η έκφραση της πρωτεΐνης του ενδιαφέροντος σε πρωτογενή καρκίνο του προστάτη και κανονικό ιστό προστάτη. Κατάταξη συσχέτιση Spearman χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση της συσχέτισης μεταξύ των πρωτεϊνών του ενδιαφέροντος και κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικά. Βιοχημικής υποτροπής επιβίωση χωρίς αναλύθηκε χρησιμοποιώντας καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier και καμπύλες συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία log-rank. Πολυπαραγοντική ανάλυση, περιλαμβανομένης της έκφρασής DSG2 και κλινικο-παθολογικών παραμέτρων έγινε με τη χρήση Cox μοντέλο αναλογικού κινδύνου. Ένα

P

-τιμή ≤0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

δεσμογλεΐνες είναι ειδικά εκφράζεται σε αυλού κύτταρα του ανθρώπινου φυσιολογικού προστάτη

Καθώς η έκφραση του δεσμογλεΐνες στον αδένα του προστάτη δεν είχε χαρακτηρισθεί μέχρι σήμερα, αρχίσαμε τη μελέτη αυτή με την εξέταση της πλήρους δεσμογλείνης προφίλ έκφρασης σε φυσιολογικό ιστό ανθρώπινου προστάτη, χρησιμοποιώντας RT-PCR και αναλύσεις ανοσοφθορισμού. RT-PCR ανάλυση έδειξε ότι οι περισσότεροι δεσμογλεΐνες μπορούσε να ανιχνευθεί εύκολα σε φυσιολογικό ανθρώπινο προστάτη σε επίπεδο RNA, με την εξαίρεση του

DSG1

η οποία έδειξε μόνο αμυδρή έκφραση του mRNA (Σχήμα 1Α). Ανάλυση ανοσοφθορισμού έδειξε ότι μόνο η έκφραση DSG2 και DSG4 θα μπορούσε να είναι εύκολα και με συνέπεια ανιχνευθεί στο επιθήλιο του προστάτη στο επίπεδο πρωτεΐνης (Εικόνα 1Β-C), ενώ DSG1 και DSG3 δεν ήταν αποδείξιμη στο φυσιολογικό επιθήλιο προστάτη (Εικόνα S2).

(Α) Καθαρισμός έκφραση του mRNA μπορεί να ανιχνευθεί για τα περισσότερα δεσμογλεΐνες, με την εξαίρεση του

DSG1

το οποίο δείχνει μόνο αμυδρή έκφραση. (Β-Ο) Αντιπροσωπευτικά ανοσοφθορισμού αναλύσεις DSG2 (Β) και DSG4 (C) στην κυτταρική σύνορα των φυσιολογικών ανθρώπινων προστατικών αδενικό επιθήλιο. Αρχική μεγέθυνση: 200Χ. Ράβδοι κλίμακας αντιστοιχούν σε 100 μm.

Η

Αφού διαπιστώθηκε η έκφραση των δεσμογλεΐνες στο φυσιολογικό ανθρώπινο προστάτη, έχουμε ως στόχο να καθορίσει τον τύπο κυττάρου ειδική έκφραση της DSG2 και DSG4. Το αδενικό ιστό του προστάτη αποτελείται από αγωγούς και acini που είναι επενδεδυμένα με απλή cuboidal επιθήλιο που αντιμετωπίζει τον αυλό των αδένων. Εκτός από αυτό το εκκριτικό συστατικό, δύο άλλα εξειδικευμένα κύτταρα αποτελούν αναπόσπαστο μέρος του προστάτη αδενικές δομές, δηλαδή τα βασικά κύτταρα και τα νευροενδοκρινή κύτταρα [36], [37]. Αυλού κύτταρα εκκρίνουν, μεταξύ άλλων μορίων, ειδικό προστατικό αντιγόνο (PSA) και αντιπροσωπεύουν την κύρια λειτουργική μονάδα του οργάνου. Αυτά τα κύτταρα σχηματίζουν ένα συνεχές στρώμα που βρίσκεται πάνω από τα βασικά κύτταρα. Τα βασικά κύτταρα χαρακτηρίζονται από την έκφραση του κυτοκερατίνες υψηλού μοριακού βάρους (των Ck) – όπως CK14 – και ρ63. Διασκορπισμένο σε ολόκληρο το acini είναι το τρίτο πληθυσμό κυττάρων, τα νευροενδοκρινή κύτταρα, η προέλευση και η λειτουργία των οποίων στο κανονικό προστάτη δεν είναι ακόμη καλά καθορισμένες.

Co-ανοσοφθορισμού ανάλυση διεξήχθη για να εξεταστεί η εντόπιση της DSG2 και DSG4 με CK14 ειδικό κυτταρικό δείκτη βασικών καθώς και την ειδική πρωτεΐνη του αυλού, PSA. Ανάλυση Συν-ανοσοφθορισμού DSG2 και CK14 δείχνει ότι DSG2 είναι γερά εκφράζεται στα κύτταρα του αυλού του προστάτη και ότι αυτή η έκφραση σπανίως συνεντοπίζεται με εκείνη του βασική έκφραση CK14 (Σχήμα 2Α-C). Ανάλυση της έκφρασης DSG2 και PSA αποκάλυψε συν-εντοπισμό και των δύο βιοδεικτών στα αυλού κύτταρα (Σχήμα 2D-F). Η έκφραση του DSG4 ήταν πολύ παρόμοια με εκείνη του DSG2, δείχνοντας έντονη έκφραση στα κύτταρα του αυλού, σπάνια συν-εντόπιση με βασική έκφραση CK14 (Σχήμα 2G-I), αλλά συν-εντόπιση με έκφραση του αυλού PSA (Σχήμα 2J-L). Επιπλέον, η έκφραση του DSG2 έδειξε σχεδόν πλήρη συν-εντοπισμό με εκείνο του DSG4, με τα περισσότερα αυλού κύτταρα που παρουσιάζουν ένα ακόμα επίπεδο έκφρασης για τα δύο δεσμογλεΐνες και μερικά κύτταρα που εμφανίζει ένα ελαφρώς υψηλότερο επίπεδο έκφρασης για μία σε σύγκριση με το άλλο (Σχήμα 2M- O). Λαμβανόμενα μαζί αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η έκφραση του DSG2 και DSG4 περιορίζεται κυρίως στα κύτταρα του αυλού των αδένων ανθρώπινου προστάτη επιθηλιακά.

(Α-Γ) DSG2 εκφράζεται στα αυλού κύτταρα των προστατικών αδένων και αυτό έκφραση σπανίως συνεντοπίζεται με έκφραση βασικών κυττάρων CK14. (D-F) DSG2 συνεντοπίζεται με την έκφραση του PSA στο διαμέρισμα του αυλού του αδένα. (G-I) DSG4 εκφράζεται επίσης στα αυλού κύτταρα και σπανίως συνεντοπίζεται με έκφραση βασικών κυττάρων CK14. (J-L) έκφραση DSG4 συνεντοπίζεται με έκφραση του αυλού κύτταρο PSA. (Μ-Ο) Η έκφραση του DSG4 δείχνει επίσης σχεδόν πλήρης συν-εντοπισμό με εκείνη των DSG2 στα αυλού κύτταρα. Αρχική μεγέθυνση: 200Χ. Ράβδοι κλίμακας αντιστοιχούν σε 100 μm.

Η

DSG2 εκφράζεται σε Ανθρώπινα Καρκίνος του προστάτη Κυτταρικές Γραμμές

Αφού χαρακτήρισε την έκφραση του δεσμογλεΐνες σε φυσιολογικό ιστό ανθρώπινου προστάτη, θελήσαμε να επικεντρωθεί σε DSG2 για το υπόλοιπο της μελέτης καθώς αυτή είναι η πιο ευρέως εκφραζόμενη δεσμογλείνης ισομορφή – που δείχνουν πανταχού παρούσα έκφραση σε όλα δεσμόσωμα ιστούς που σχηματίζουν. Σε συνέχεια της προηγούμενης ανακάλυψη μας ότι DSG2 εκφράζεται σε φυσιολογικό επιθήλιο ανθρώπινου προστάτη, μπορούμε τότε το ερώτημα εάν αυτή η πρωτεΐνη εκφράζεται επίσης σε ανθρώπινες καρκινικές κυτταρικές σειρές προστάτη. Για να εξεταστεί αυτό το ερώτημα, qRT-PCR πραγματοποιήθηκε σε RNA που εκχυλίζεται από τρία εμπορικά διαθέσιμα και καλά χαρακτηρισμένο μεταστατικό καρκίνο του προστάτη κυτταρικές γραμμές ανθρώπου (Εικόνα 3Α). Οι καρκινικές κυτταρικές γραμμές που χρησιμοποιούνται για αυτό το τμήμα της μελέτης περιλαμβάνουν την κυτταρική σειρά LNCaP, η οποία προέρχεται από ένα καρκίνο του προστάτη που κάνει μετάσταση στον λεμφαδένα? η PC3 κυτταρική γραμμή, η οποία προέρχεται από ένα καρκίνο του προστάτη που έχει κάνει μετάσταση στα οστά του? και η κυτταρική γραμμή DU145, η οποία προέρχεται από ένα καρκίνο του προστάτη που κάνει μετάσταση στον εγκέφαλο [38] – [40]. Η κυτταρική γραμμή ΒΡΗ-1 χρησίμευσε ως μάρτυρας για τη μελέτη αυτή, δεδομένου ότι είναι ένα αθανατοποιημένη, μη ογκογόνων προστατική επιθηλιακή κυτταρική γραμμή που λαμβάνεται από έναν ασθενή με καλοήθη υπερπλασία του προστάτη, μία κατάσταση που δεν σχετίζονται με κακοήθη μετασχηματισμό του προστάτη [41]. Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης qRT-PCR έδειξε ότι

DSG2

εκφράζεται σε διαφορετικά επίπεδα σε όλες τις κυτταρικές σειρές που εξετάστηκαν. Είναι ενδιαφέρον ότι η έκφραση του

DSG2

είναι μεγαλύτερη σε όλες τις μεταστατικές κυτταρικές γραμμές καρκίνου του προστάτη που εξετάστηκαν από ό, τι στο μη ογκογόνο ελέγχου ΒΡΗ-1.

(Α) έκφραση DSG2 ανιχνεύεται σε όλες οι κυτταρικές σειρές που εξετάστηκαν, συμπεριλαμβανομένου του κανονικού αθανατοποιημένη κυτταρική σειρά προστάτη ΒΡΗ-1. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση τιμή ± SD. ** P & lt? 0,01? *** P & lt? 0.001. (Β-Ε) DSG2 εκφράζεται στο κύτταρο σύνορα των LNCaP και DU145 κύτταρα? Ωστόσο, κελί σύνορα έκφραση δεν ανιχνεύεται στα κύτταρα PC3 με μόνο μερικά κύτταρα δείχνει εξασθενημένο, στικτή, και διάχυτη χρώση (ένθετο μεγέθυνση? παρουσιάζεται σε 2,5Χ). Αρχική μεγέθυνση: 200Χ. Ράβδοι κλίμακας αντιστοιχούν σε 100 μm.

Η

Στη συνέχεια, ανάλυση ανοσοφθορισμού χρησιμοποιήθηκε για να εξετάσει την έκφραση του DSG2 σε αυτές τις μεταστατικές ανθρώπινου καρκίνου του προστάτη κυτταρικών γραμμών στο επίπεδο πρωτεΐνης (Σχήμα 3Β-Ε). Κυττάρων σύνορα έκφραση DSG2 ανιχνεύθηκε σε ΒΡΗ-1, τα κύτταρα LNCaP και DU145. Ωστόσο, τα κύτταρα PC3 έλειπε η έκφραση του DSG2 στα σύνορα των κυττάρων, ενώ ένας μικρός πληθυσμός κυττάρων έδειξε μόνο μια διάχυτη κοκκώδη χρώση για DSG2 στο κυτταρόπλασμα (βλέπε ένθετο μεγέθυνση στο Σχήμα 3D). Τα αποτελέσματα αυτά είναι συνεπή με και ακόμα πιο συγκεκριμένα τα αποτελέσματα μιας προηγούμενης μελέτης από Lang

et al.

Στην οποία χρησιμοποιήθηκε ένα αντίσωμα ειδικό για τόσο DSG1 και DSG2 να εξετάσει την έκφραση δεσμογλεΐνης σε LNCaP, PC3, και τα κύτταρα DU145 [ ,,,0],29], [42]. Τα αποτελέσματα της qRT-PCR και ανάλυση ανοσοφθορισμού δείχνουν ότι η έκφραση του

DSG2

είναι παρούσα σε όλες τις κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη και ότι, σε δύο από τις τρεις γραμμές κυττάρων καρκίνου του προστάτη που εξετάστηκαν, DSG2 εντοπίζεται στο σύνορο κύτταρο υποδηλώνοντας ότι ο σχηματισμός των δεσμοσωμάτων συγκρατείται στις περισσότερες μεταστατικές κυτταρικές γραμμές καρκίνου του προστάτη που εξετάστηκαν

in vitro

.

A Low DSG2 φαινότυπος συνδέεται με την εξέλιξη του όγκου σε ασθενείς με πρωτοπαθή καρκίνωμα του προστάτη

Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, ενώ η απώλεια της κλασικής έκφρασης καδερίνης έχει περιγραφεί σε καρκίνο του προστάτη, μέχρι σήμερα η έκφραση των καδερινών δεσμοσωμάτων σε δείγματα ιστών καρκινώματος του προστάτη δεν έχει αναφερθεί. Για να εκτιμηθεί το ποσοστό των κυττάρων που είναι θετικά για έκφραση DSG2 σε καρκίνωμα του προστάτη σε σύγκριση με φυσιολογικό ιστό του προστάτη, ανάλυση ανοσοφθορισμού της έκφρασης DSG2 διεξήχθη σε καρκίνωμα του προστάτη TMAs (

n

= 414) καθώς επίσης και κανονικό προστάτη TMAs (

n

= 50). Εκτός από ένα αντίσωμα για την πρωτεΐνη του ενδιαφέροντος, ενός αντισώματος για Ck8 /18 – κυτοκερατίνες βρέθηκε τόσο φυσιολογικό προστάτη του αυλού των επιθηλιακών κυττάρων και κυττάρων αδενοκαρκινώματος -. Συμπεριλήφθηκε επίσης σε κάθε ΤΜΑ ως μέσο για τον προσδιορισμό των επιθηλιακών κυττάρων σε κάθε δείγμα

Μια σημαντική μείωση στο ποσοστό των κυττάρων που είναι θετικά για έκφραση DSG2 βρέθηκε στα καρκινώματα του προστάτη, σε σύγκριση με κανονικό προστάτη (Πίνακας 2 και Σχήμα S3). Η κανονική επιθήλιο του προστάτη χαρακτηρίζεται από υψηλό ποσοστό κυττάρων θετικών για έκφραση DSG2 (μέση έκφραση του 81,1%, διάμεση τιμή 84,5%), ενώ προστάτη δείγματα όγκου έδειξαν σημαντικά χαμηλότερο ποσοστό DSG2 θετικών κυττάρων (μέση έκφραση του 57,5%, διάμεσος 66,7%?

P

= 0.0002). Μία τιμή αποκοπής της έκφρασης DSG2 θετικών κυττάρων 60% χρησιμοποιήθηκε, καθώς αυτό ήταν το κατά προσέγγιση διάμεση τιμή έκφρασης που παρατηρήθηκε για DSG2 στην κοόρτη του καρκίνου του προστάτη, και η διάμεση έχει προηγουμένως και χρησιμοποιείται ευρέως για την πραγματοποίηση αναλύσεων επιβίωση [35]. Χρησιμοποιώντας αυτή την τιμή αποκοπής, παρατηρήσαμε ότι το 96% των κανονικών δειγμάτων προστατικού ιστού θεωρήθηκαν θετικά για DSG2, σε σύγκριση με μόνο το 46% των δειγμάτων καρκίνου του προστάτη που μελετήθηκαν. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η ποσότητα των κυττάρων που ήταν θετικά για την κυτταρική συνόρων έκφραση DSG2 ήταν γενικά υψηλότερη σε καλά διαφοροποιημένες περιοχές του όγκου, ενώ η ποσότητα των κυττάρων που δείχνουν την έκφραση αυτή ήταν συχνά πολύ χαμηλότερη σε ασθενώς διαφοροποιημένες περιοχές του όγκου (Σχήμα 4Α-Ε ), ένα εύρημα που περαιτέρω επικυρωθεί από βαθμό συσχέτισης Spearman (πίνακας 3).

(α-Ε) Εκπρόσωπος ανάλυση ανοσοφθορισμού των DSG2 και Ck8 /18 στον καρκίνο του προστάτη. (D, Ε-Η) TMAs δείχνει υψηλή έκφραση DSG2 στο κύτταρο σύνορα καλά διαφοροποιημένες περιοχές του όγκου (πίνακας D, μέσα κίτρινη διακεκομμένη γραμμή). (D, I-L) TMAs δείχνει χαμηλή έκφραση DSG2 σε ασθενώς διαφοροποιημένες περιοχές του όγκου (πίνακας D, που φαίνεται στο υπόλοιπο του όγκου έξω από την κίτρινη διακεκομμένη γραμμή). Αρχική μεγέθυνση: 200Χ. Ράβδοι κλίμακας αντιστοιχούν σε 100 μm. (Μ) Οι ασθενείς εκφράζουν υψηλότερα επίπεδα DSG2 είχαν σημαντικά μεγαλύτερη υποτροπής επιβίωση χωρίς από εκείνες που εκφράζουν χαμηλότερα επίπεδα της DSG2 (

P

= 0,01).

Η

Η

η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των DSG2 και τα κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικών πιο συχνά συνδέεται με έναν επιθετικό φαινότυπο του καρκίνου του προστάτη, συμπεριλαμβανομένων των προ-χειρουργικών συγκέντρωση του PSA, Gleason Score, και παθολογικής Στάδιο Στη συνέχεια εξετάστηκε χρησιμοποιώντας συσχέτιση κατάταξης Spearman (πίνακας 3). Είναι ενδιαφέρον, υπήρχε μια σημαντική αρνητική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης DSG2 και συγκέντρωση προ-χειρουργικές PSA καθώς Gleason Score. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι ένα φαινότυπο χαμηλής έως αρνητική έκφραση DSG2 συσχετίστηκε με προ-χειρουργική επίπεδα συγκέντρωσης του PSA στον ορό αυξήθηκαν, καθώς και με υψηλό Gleason σκορ.

μειωμένη έκφραση DSG2 είναι ένας ανεξάρτητος παράγοντας που σχετίζεται με ένα Κακή κλινική έκβαση σε ασθενείς με πρωτοπαθή καρκίνωμα του προστάτη

Αφού εξέτασε τη συσχέτιση μεταξύ φαινότυπο DSG2 και κλινικο-παθολογικών παραγόντων κινδύνου του καρκίνου του προστάτη, είμαστε δίπλα καθοριστεί αν η έκφραση DSG2 συνδέεται με βιοχημική υποτροπή δωρεάν επιβίωσης. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι ασθενείς των οποίων οι όγκοι εκφράζονται ≥ 60% DSG2 είχαν μεγαλύτερο υποτροπή επιβίωσης χωρίς από εκείνες που εκφράζουν & lt? 60%, και η διαφορά μεταξύ αυτών των δύο ομάδων ήταν στατιστικά σημαντική (Σχήμα 4Μ,

P

= 0,01). Ένας μέσος χρόνος μέχρι την βιοχημική υποτροπή των 103,7 μήνες (CI 95% διάστημα: 87,7 έως 119,8 μήνες) παρατηρήθηκε για τους ασθενείς με & lt? 60% φαινότυπο έκφρασης DSG2, ενώ εκείνοι με φαινότυπο έκφρασης DSG2 ≥60% δεν έφθασε το διάμεσος χρόνος μέχρι την βιοχημική υποτροπή μετά από ένα χρόνο παρακολούθησης των 123,6 μήνα. Το πιο σημαντικό, όταν πραγματοποιήσαμε μια πολυπαραγοντική ανάλυση, παρατηρήσαμε ότι η έκφραση DSG2 ήταν ανεξάρτητος παράγοντας της βιοχημικής υποτροπής (HR = 1,579,

P

= 0,050), καθώς και τα κλασικά κλινικο-παθολογικών χαρακτηριστικά: Gleason Score και Παθολογική Στάδιο (Πίνακας 4). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι μειωμένη έκφραση DSG2 είναι ένας ανεξάρτητος βιοδείκτης συνδέεται με βραχύτερη βιοχημική υποτροπή στον καρκίνο του προστάτη, αποκαλύπτοντας έτσι την πιθανή κλινική χρησιμότητα των DSG2 ως προγνωστικός βιοδείκτη της επιθετικότητας του όγκου για ασθενείς που πάσχουν από αυτή την συχνότερα εμφανιζόμενες ασθένεια.

Συζήτηση

Τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται στην παρούσα μελέτη παρέχει την πρώτη μοριακό χαρακτηρισμό της έκφρασης δεσμογλείνης σε φυσιολογικό ανθρώπινο προστάτη, ο χαρακτηρισμός των DSG2 σε κυτταρικές γραμμές καρκίνου του προστάτη μεταστατικό, και την πρώτη ανάλυση της έκφρασης DSG2 σε δείγματα ιστού του πρωτογενούς καρκινώματος του προστάτη. Τα αποτελέσματα που αναφέρονται εδώ δείχνουν ότι ενώ τα περισσότερα δεσμογλεΐνες είναι σαφώς εκφράζονται στον ανθρώπινο προστάτη σε επίπεδο RNA, μόνο DSG2 και DSG4 εντοπίζονται σταθερά σε υψηλό επίπεδο σε φυσιολογικό ανθρώπινο προστάτη σε πρωτεϊνικό επίπεδο.