Αφηρημένο

Η ικανότητα όγκου-παλιννόστησης των μονοκυττάρων τα καθιστά ένα δυναμικό σύστημα παροχής κυψελοειδές για εναλλακτικές θεραπείες του καρκίνου, αν και τα μεταναστευτικά ικανότητά τους μπορεί να είναι απομειωθεί μετά την πρόσληψη του αντιδραστηρίου. Προσεγγίσεις που ενισχύουν μονοκυττάρων παλιννόστησης του όγκου και την προώθηση της μετανάστευσης τους θα βελτιώσει την κλινική αξία αυτών των κυττάρων ως κυτταρικό φορείς. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η ακτινοβόληση (IR) μπορούν να προάγουν συσσωμάτωση των μακροφάγων σε υποξικές περιοχές. Για να διερευνηθεί αν IR ενισχύει την διείσδυση μονοκυττάρων που προέρχονται από μυελό των οστών (BMDMs) σε όγκους, η διείσδυση του BMDMs από GFP-διαγονιδιακών ποντικών σε μυϊκό αδενοκαρκίνωμα του προστάτη μοντέλο TRAMP-C1 εξετάστηκε με μικροσκοπία φθορισμού. IR δεν αύξησε τον αριθμό των BMDMs που διείσδυσε αρχικά, αλλά αύξησε την κατακράτηση μονοκυττάρων εντός των όγκων IR-θεραπεία για μέχρι και 2 εβδομάδες. Δείξαμε επίσης ότι BMDMs μπορεί να διαρκέσει μέχρι διάφορες απεικονιστικές και θεραπευτικοί παράγοντες, αν και η κινητικότητα των BMDMs μειώθηκε με την αύξηση του φορτίου. Όταν BMDMs διαφοροποιήθηκαν σε IR-αγωγή όγκων-ρυθμισμένο μέσο (IR-CM)

in vitro

, το νανοσωματίδιο φορτίο μεσολάβηση αναστολή της μετανάστευσης ήταν εξασθενημένος. Αυτά τα IR-CM-διαφοροποιούνται BMDMs παραδοθεί πολυμερές κυστίδια εγκλεισμού δοξορουβικίνη σε ακτινοθεραπεία (RT) επαγόμενη από υποξικές περιοχές του όγκου, και να ενισχυθεί η αποτελεσματικότητα της RT. Η παρατεταμένη κατακράτηση μονοκυττάρων εντός ακτινοβολημένων καρκινικών ιστών και η ικανότητα του IR-CM για να ενισχυθεί η μεταναστευτική ικανότητα φορτίου-φορτωμένο BMDMs υποδηλώνουν ότι τα μονοκύτταρα προ-ρυθμισμένο με IR-CM μπορεί δυνητικά να δράσουν ως κυψελοειδείς φορείς για στοχευμένη θεραπεία ακολουθώντας συμβατικές RT.

Παράθεση: Jiang PS, Yu CF, γεν CY, Woo CW, Lo SH, Huang YK, et al. (2015) σε ακτινοβολία ενισχύει την ικανότητα της μονοκύτταρα ως νανοσωματιδίων Μεταφορέα για Θεραπεία Καρκίνου. PLoS ONE 10 (9): e0139043. doi: 10.1371 /journal.pone.0139043

Επιμέλεια: Gabriele Multhoff, Technische Universitaet Muenchen, Γερμανία

Ελήφθη: 9, Ιουνίου 2015? Αποδεκτές: έβδομης Σεπτεμβρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 29 του Σεπτεμβρίου, 2015

Copyright: © 2015 Jiang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. το έργο υποστηρίζεται από NSC 101-2627-Ν-007-001, NHRI-EX100-9827BI, και 102N2767E1 από το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο, Εθνικό Σύστημα Υγείας Ινστιτούτο Έρευνας και Εθνικό Tsing Hua University, αντίστοιχα, την Ταϊβάν, σε Chi-Shiun Chiang, και CIRPG3D0141 και CMRPG3E1301 από το Memorial Hospital Chang-Gung να Ji-Χονγκ Χονγκ. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η τάση του αίματος μονοκύτταρα /μακροφάγα να διεισδύουν όγκους και να συσσωρεύονται σε υποξικές περιοχές [1, 2] έχει κάνει αυτά τα κύτταρα ένα δυνητικό κυτταρικό όχημα για τη στόχευση θεραπευτικών παραγόντων σε θέσεις όγκου [3, 4] και ως εκ τούτου ζητηθεί έρευνα για τη χρήση των μονοκυττάρων ή μακροφάγων ως οχήματα παροχής σε αντι-ιική [5] ή αντικαρκινική θεραπεία [3, 4, 6, 7]. Η έννοια της υιοθεσίας μεταφορά

ex vivo

παραγομένης μακροφάγων σε ασθενείς με καρκίνο του προτάθηκε πριν από αρκετά μεγάλο χρονικό διάστημα. Αυτό το είδος της υιοθετούμενη μεταφορά πραγματοποιήθηκε για πρώτη φορά σε μοντέλο μελανώματος Β16, όπου έγχυση του

ex vivo

-ενεργοποιημένου μακροφάγα καταστέλλεται πνευμονικές μεταστάσεις [8]. Μουτάνα

et al

. [4] απέδειξαν πρόσφατα μια πολλά υποσχόμενη κλινική εφαρμογή για προερχόμενα από μονοκύτταρα μακροφάγα ανθρώπινο αίμα, τα οποία ήταν σε θέση να παραδώσει ογκολυτικού ιού στα υποξικές περιοχές των ανθρώπινων όγκων του προστάτη μετά την θεραπεία σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο ξενομοσχεύματος. Αυτό δείχνει ότι τα μονοκύτταρα μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως κυτταρικά μεταφορείς για τη θεραπεία όγκων υποξικό. Αν και οι αναφορές έχουν δείξει ότι σχετίζονται με τον όγκο μακροφάγων (ΤΑΜ) είναι κατά προτίμηση βρίσκονται σε υποξικές περιοχές [2], έχουμε δείξει παλαιότερα ότι η σύνδεση των ΤΑΜ με υποξία εξαρτάται από τον τύπο του όγκου και τοπικές υποδείξεις μικροπεριβάλλον [9, 10]. Προσεγγίσεις που μπορεί να ενισχύσει τη διακίνηση και ιστών κατακράτηση μονοκυττάρων εντός περιοχών υποξικών θα αυξήσει την κλινική αξία της χρήσης μονοκυττάρων ως κυτταρικοί μεταφορείς στη θεραπεία του καρκίνου.

Η πρόσληψη διαφόρων κυττάρων που προέρχονται από μυελό των οστών από το αίμα (BMDCs) σε ιστούς όγκων έχει αναφερθεί σε πολλά μοντέλα καρκίνου ως απόκριση σε φλεγμονώδη σήματα που παράγονται από ιστούς όγκων. Μετά τη διείσδυση των όγκων, τα μονοκύτταρα /μακροφάγα μεταναστεύουν στη συνέχεια κατά μήκος ορίζεται χημειοτακτική κλίσεις [11], όπως κλίσεις του HIF-1 [2, 12], VEGF [13], ή SDF-1 [14], για τη στόχευση περιοχών. Θεραπείες που μπορούν να προκαλέσουν φλεγμονώδεις αντιδράσεις, καθώς και υποξική σήματα μπορούν να χρησιμοποιηθούν για να ενισχύσουν την αποτελεσματικότητα των μονοκυττάρων ως κυψελοειδείς φορείς. Η ακτινοθεραπεία (RT) είναι ένα κοινό πρωτόκολλο στη θεραπεία του καρκίνου και μπορεί να δημιουργήσει φλεγμονώδεις αποκρίσεις [15]. Πράγματι, έχουμε δείξει προηγουμένως ότι η ακτινοβολία-θεραπεία, αλλά όχι αντι-αγγειογένεσης παράγοντα-αγωγή, οι όγκοι [10] ή ιστούς [16] προωθούν τη συσσώρευση CD68

+ ΤΑΜ σε ανάγγειο υποξικές περιοχές [9]. Αυτό δείχνει ότι οι όγκοι ή ιστούς ακτινοβολία επεξεργασμένο παράγουν ειδικούς παράγοντες που προσελκύουν και να διατηρούν τα μακροφάγα σε άσηπτη, υποξικές περιοχές του όγκου.

Η ικανότητα να καταπιεί διάφορα σωματίδια καθιστά μακροφάγα ανώτερη ως φορείς σε σχέση με άλλους τύπους κυττάρων [17-20 ]? Ως εκ τούτου, η χρήση των μακροφάγων ως κυψελοειδείς φορείς για θεραπευτικούς ή απεικόνιση νανοσωματίδια έχει εξεταστεί σε διάφορα μοντέλα [5, 6, 21-24]. Εκτός από το γεγονός ότι είναι καλοί φορείς, η κινητικότητα των κυττάρων μετά από προ-φόρτωση με τα αντιδραστήρια είναι ένας άλλος παράγοντας που καθορίζει τη χρησιμότητά τους σε κλινική? Για παράδειγμα, η κινητικότητα των κυψελιδικών μακροφάγων μειώνεται μετά την πρόσληψη των σωματιδίων [25]. Ωστόσο, λίγες μελέτες έχουν διερευνήσει τις αλλαγές στην κινητικότητα μακροφάγων μετά την πρόσληψη θεραπευτικών φαρμάκων. Εδώ, διερευνήσαμε την αλλαγή στη μακροφάγων κινητικότητα μετά την πρόσληψη νανοσωματιδίων, και να αξιολογηθούν τα αποτελέσματα της ακτινοβολίας (IR) για την πρόσληψη και τη διατήρηση των μονοκυττάρων που προέρχονται από μυελό των οστών (BMDMs) σε ένα μοντέλο ποντικού όγκου του προστάτη.

Υλικά και Μέθοδοι

Τα κύτταρα και ζώα

Ο καρκίνος του προστάτη κυτταρική γραμμή TRAMP-C1 αγοράστηκε από την αμερικανική Συλλογή ιστών τύπου (ATCC? CRL-2730). Έξι έως οκτώ εβδομάδων ηλικίας C57BL /6J ή C57BL /6-Tg (CAG-EGFP) 1Osb /J ποντίκια αγοράστηκαν από το Εθνικό Κέντρο Laboratory Animal, Ταϊβάν. Οι συστάσεις του εγκεκριμένου οδηγό για τη φροντίδα και τη χρήση των πειραματόζωων από την Επιτροπή Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και Χρήση (IACUC) του Εθνικού και Καποδιστριακού Πανεπιστημίου Tsing Hua, Ταϊβάν (εγκεκριμένο αριθμό: IACUC: 10012), παρακολουθήθηκαν ανά πάσα στιγμή. Οι όγκοι που δημιουργούνται από ενδομυϊκή εμβολιασμό 3 × 10

6 βιώσιμων κυττάρων στο μηρό. Οι όγκοι στο μηρό μετρήθηκαν με διαμέτρημα χονδροειδώς σε τρεις ορθογώνιους άξονες να καθορίζουν τον όγκο του όγκου.

Παρασκευή των μονοκυττάρων που προέρχονται από μυελό των οστών (BMDMs).

κύτταρα του μυελού των οστών συλλέχθηκαν από C57BL /6J ή C57BL /6-Tg (CAG-EGFP) 1Osb /J ποντικούς με έκπλυση των μηρούς και κνήμες με 2% ορό εμβρύου μόσχου (FBS) σε Roswell Park Memorial Institute (RPMI) μέσο. Τα κύτταρα στη συνέχεια καλλιεργήθηκαν σε μέσο διαφοροποίησης (μέσο RPMI που περιείχε 10% FBS, 10 ng /ml M-CSF ανασυνδυασμένου ποντικού (R -με φορτίο PAAC-D25 και δοξορουβικίνη (Dox) με επιβάρυνση PAAC-D15 κυστίδια (PAAC-Dox) που παρασκευάζεται από τον καθηγητή Hsin -Chen Chiu [27, 28] καλλιεργήθηκαν με BMDMs για 4 ώρες. BMDMs προ-φορτωμένο με PAAC-Dox χρησιμοποιήθηκαν για

in vitro

μελέτη.

In vitro μετανάστευση

δοκιμασία

Ο προσδιορισμός της μετανάστευσης έγινε όπως τις διαδικασίες που περιγράφονται στην προηγούμενη δημοσίευση { Wang, 2012 # 250}. Κάθε δοκιμασία διεξήχθη εις τριπλούν και επαναλήφθηκε 3 φορές.

In vivo μοντέλο όγκου

Οι όγκοι αφέθηκαν να αναπτυχθούν σε μέγεθος 5 mm σε διάμετρο και στη συνέχεια κατεργάζεται με 6-MV ακτίνες Χ από ένα γραμμικό επιταχυντή σε ένα ρυθμό δόσης 2-3 Gy /min και 1,5-cm bolus στην επιφάνεια. Οι χημικές ουσίες ή BMDMs (5 χ 10

6 κύτταρα /ποντικό) ήταν ενδοφλεβίως (i.v.) εγχύεται σε 1, 4 και 7 ημέρες μετά την εφάπαξ δόση των 25 Gy. Η ποσότητα της Dox μέσα σε 5 χ 10

6 κύτταρα BMDMs (δηλ. BMDMs-PAAC-Dox) προσδιορίστηκε με DOX ένταση φθορισμού στα 560 nm των κυτταρολυμάτων και τη συγκέντρωση της Dox όλων των θεραπειών ρυθμίστηκε για να βεβαιωθείτε ότι όλα τα ποντίκια ενέθηκαν με ίδια ποσότητα Dox, που ήταν ισοδύναμη με 1 mg Dox /kg σωματικού βάρους. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε δυο ~ τρεις φορές την εβδομάδα με παχύμετρο πριν την θυσία για ιστολογία.

Ανοσοϊστοχημεία και εικόνας ανάλυση

Η παρασκευή του ιστού και διαδικασίες χρώσης ήταν το ίδιο όπως περιγράφηκε στο προηγούμενο δημοσίευμα {Chen , 2009 # 176}. Tumor υποξία μελετήθηκε με ε.π. ένεση 4 mg υδροχλωρικής πιμονιδαζόλη (Hypoxyprobe ™ -1 Kit, Hypoxyprobe, Burlington, ΜΑ, USA) σε 0.1 ml διαλύματος 1 ώρα πριν από τη συγκομιδή του όγκου. Οι ιστοί απομακρύνθηκαν και τοποθετήθηκαν σε ψυχρό 4% παραφορμαλδεΰδη όλη τη νύκτα, στη συνέχεια, την επεξεργασία και την ενσωμάτωση σε παραφίνη ή ΥΧΕ. Δέκα μικρόμετρα κρυοστάτη τομές στερεώθηκαν σε μεθανόλη στους -20 ° C για 10 λεπτά, και στη συνέχεια επανυδατώνονται εντός PBS. Η μη ειδική δέσμευση παρεμποδίστηκε με επώαση τμημάτων σε 1% αλβουμίνης βόειου ορού (BSA) σε PBS για 30 λεπτά. Πιμονιδαζόλη (PIMO) ανιχνεύθηκε με αντίσωμα ποντικού (Hypoxyprobe) και αντι-ποντικού κατσίκας Alexa 488 IgGγ1 (Invitrogen). Για την ανίχνευση όγκων υποξία και η σύνδεσή της με αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα, συν-χρώση διεξήχθη με ένα μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (Hypoxyprobe-1 Kit? Chemicon) και αρουραίου αντι-ποντικού CD31 αντίσωμα (BD Biosciences). Για τον εντοπισμό των μακροφάγων, αντι-ποντικού F4 /80 (Serotec, Oxford, UK), αρουραίου αντι-ποντικού αρουραίου CD68 (Serotec, Oxford, UK), αρουραίου αντι-ποντικού CD11b (BD Biosciences), και αρουραίου αντι-ποντικού CD45 (BD χρησιμοποιήθηκαν βιοεπιστήμες). Πρωτογενή αντισώματα ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας δευτερεύοντα αντισώματα σημασμένα με φθοριοχρώματα τα Alexa Fluor 594 (Molecular Probes), Alexa 488 ή αντι-κουνελιού FITC (BD Biosciences). Για την ποσοτικοποίηση θετικά γεγονότα, κάθε όγκου σειριακά, 5 τμήματα 100 μm εκτός βάφτηκαν, εικόνες συλλήφθηκαν από AxioCam MRC-5 φωτογραφική μηχανή σε ένα μικροσκόπιο φθορισμού Axiovert40 (Care Zeiss, Güttingen, Γερμανία) ή λέιζερ σάρωσης ομοεστιακό μικροσκόπιο (FluoView 1000, Όλυμπος, Ιαπωνία), και ο συνολικός αριθμός των θετικών εκδήλωση αναλύθηκε με Image-Pro 6 (Media Cybernetics) ανά ποντικό (n ≧ 3 ποντίκια ανά ομάδα).

η στατιστική ανάλυση

οι στατιστικές αναλύσεις διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας λογισμικό GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., CA, USA). Για όλες τις συγκρίσεις, η στατιστική σημαντικότητα ελέγχθηκε με μονόδρομη ANOVA ή δοκιμή μαθητές Τ και

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Η διείσδυση και διαφοροποίηση της BMDMs σε εδραιωμένους όγκους

Για να εξεταστεί αν BMDMs μπορούσε να λειτουργήσει ως κυτταρική φορείς στην ακτινοθεραπεία του καρκίνου, GFP-BMDMs ενδοφλεβίως (iv) εγχύεται εντός C57BL /6J ποντικούς με διάμετρο TRAMP-C1 όγκους 5 mm στο μηρό μετά από μία μόνο δόση των 25 Gy ακτινοβολίας. Μικροσκοπία φθορισμού του όγκου έδειξε ότι GFP

+ κύτταρα άρχισαν να εμφανίζονται στις άκρες του όγκου 1 ημέρα μετά την ένεση (S1 Σχήμα), αν και δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ του ελέγχου και IR-αγωγή όγκων (Σχ 1Aa και 1Αβ). Μία εβδομάδα μετά την έγχυση (Εικ 1AC και 1AD), ο αριθμός των GFP

+ κυττάρων αυξήθηκε και ήταν αδιακρίτως διανέμεται σε όλο το καρκινικό ιστό. Ενώ αυτά GFP

+ κύτταρα θα μπορούσαν ακόμη να ανιχνευθεί σε όγκους IR-αγωγή μετά από δύο εβδομάδες (Σχήμα 1Α-1f), μόνο μερικά παρέμειναν στους όγκους ελέγχου (Σχ 1Α-1ε). Μετρώντας της GFP

+ κυττάρων επιβεβαίωσε ότι IR-αντιμετωπίζονται οι όγκοι είχαν περισσότερες GFP

+ κυττάρων από ό, τι είχε τους όγκους ελέγχου μετά από δύο 1 και 2 εβδομάδες (Εικόνα 1Β).

(Α) φθορισμού μικροσκόπιο ανίχνευσης του GFP-BMDMs εντός καρκινικών ιστών εγκεφάλου σε 1 ημέρα (α και β), μια εβδομάδα (γ και δ), ή δύο εβδομάδες (ε και f) μετά την ενδοφλέβια ένεση 2 χ 10

6 GFP-BMDMs. Το βέλος δείχνει προς τα κύτταρα διευρυνθεί στο εσωτερικό πλατεία. Το μπαρ τρομάξει = 50 μm. (Β) Η ποσοτικοποίηση των GFP + κύτταρα μέσα στους ιστούς του όγκου. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν το μέσο αριθμό των GFP + κυττάρων του κάθε τμήματος του πλήρους όγκου από 3 ιστούς όγκων μετρήθηκε κάτω από 40Χ στόχος len. Bar: SE 3 όγκων της κάθε θεραπείας. ***: Ρ & lt? 0,005 με δοκιμή μαθητές Τ.

Η

Για τον περαιτέρω χαρακτηρισμό του φαινοτύπου του διεισδύοντας GFP-BMDMs, κυτταρομετρία ροής (σχήμα 2) και ανοσοϊστοχημεία (IHC) (S2 Εικ) χρησιμοποιήθηκαν για να εκτιμηθούν οι φαινοτυπικές αλλαγές GFP-BMDMs

in vitro

και

in vivo

, αντίστοιχα. Μετά από 8 ημέρες διαφοροποίησης

in vitro

, όλα GFP-BMDMs εκφράζεται CD45 και CD11b, ενώ 85,4% ± 1,9% εκφρασμένο F4 /80 και 61,0% ± 1,7% εκφρασμένο CD68

+ (Σχήμα 2Α). Ποσοτικοποίηση της χρώσης σε ιστούς όγκων έδειξε ότι το 97% των GFP

+ κυττάρων σε όγκους ελέγχου εξέφρασε επίσης CD45, το 85% εξέφρασε CD11b, το 62% εξέφρασε F4 /80, και περίπου το 47% ήταν CD68

+ (Σχήμα 2Β) . Οι αναλογίες αυτές δεν αλλάζουν με την πάροδο του χρόνου, αν και αυτά τα ποσοστά ήταν ελαφρώς χαμηλότερη σε σύγκριση με τις

in vitro

αποτελέσματα. επεξεργασία IR (25 Gy) δεν μετέβαλε σημαντικά την αναλογία των CD45

+ GFP

+ και CD11b

+ GFP

+ κυττάρων, αν και υπήρξε μια σημαντική αύξηση του αριθμού των CD68

+ GFP

+ και F4 /80

+ GFP

+ κυττάρων 1 εβδομάδα μετά IR (Σχήμα 2Β).

Το ποσοστό των GFP + κυττάρων (Α) συν-express CD45, CD11b, F4 /80, ή CD68 αντιγόνου όπως προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής για τα μονοκύτταρα διαφοροποιούνται από τα κύτταρα του μυελού των οστών συλλέχθηκαν από C57BL /6-Tg (CAG-EGFP) 1Osb /J ποντίκια

in vitro

. Bar: SE 3 ανεξάρτητα πειράματα. (Β) Το ποσοστό των GFP + κύτταρα συν-εκφράζουν CD45, CD11b, F4 /80, ή το αντιγόνο CD68 που εξετάστηκαν με ανοσοϊστοχημεία (IHC) εντός των όγκων που λαμβάνονται από μία ημέρα ή μία εβδομάδα μετά 25 Gy ακτινοβολίας (IR) ή ντροπής ακτινοβολημένα ( Έλεγχος). Το μέσο ποσοστό του κάθε δείκτη επιφανείας των GFP + κυττάρων από 5 τυχαία επιλεγμένα πεδία του κάθε όγκου από 3 ιστούς όγκων μετρήθηκε κάτω από 40Χ στόχος len. Bar: SE δειγμάτων 3 όγκου. ***:. Ρ & lt? 0,005 από ένας τρόπος για τεστ ANOVA

Η

ακτινοβολημένα TRAMP-C1 όγκο μέσο προάγει τη μετανάστευση των BMDMs προς όγκο μέσο

Για να εξεταστεί αν μικροπεριβάλλοντα όγκου παράγουν παράγοντες που προωθούν τη μετανάστευση των μονοκυττάρων, ο μεταναστευτική ικανότητα BMDMs σε διάφορα ρυθμισμένα μέσα εξετάστηκε μέσω ενός ποσοτικού προσδιορισμού θαλάμου Boyden. TRAMP-C1-ρυθμισμένο μέσο (Τ-CM) ήταν πιο αποτελεσματικό από το κανονικό μέσο καλλιέργειας (CTRL) ή μέσο που περιέχει 10 ng /ml RM-CSF σε εκμαίευση μετανάστευση BMDM (Σχήμα 3Α). Ωστόσο, ο ρυθμός μετανάστευσης του BMDMs προς ακτινοβολημένων TRAMP-C1-ρυθμισμένο μέσο (IR-CM) ή άλλο μέσο ρυθμισμένο με ποντικού ALTS1C1 αστροκύτωμα κυτταρική γραμμή (Α-CM) ήταν παρόμοια με εκείνη στην οποία αυτά τα κύτταρα μετανάστευσαν προς το Τ-CM. Αυτό δείχνει ότι μικροπεριβάλλοντα όγκου εκφράζουν παράγοντες που προσελκύουν μονοκύτταρα, και εξηγεί γιατί GFP-BMDMs έχουν παρόμοια αρχικός ρυθμός διείσδυσης στον έλεγχο και ακτινοβολείται-TRAMP-C1 όγκους. Ωστόσο, τα στοιχεία αυτά δεν μπορούν να εξηγήσουν γιατί τα ακτινοβολημένα όγκοι περιέχουν περισσότερο GFP-BMDMs σε 1 και 2 εβδομάδες μετά την RT. Να εξετάσει περαιτέρω αν ακτινοβοληθεί ιστούς επηρεάζει BMDM μεταναστευτική ικανότητα, BMDMs προ-Fi σε διάφορα ρυθμισμένα μέσα για 1 ημέρα πριν από τη δοκιμασία μετανάστευσης. Βρήκαμε ότι BMDMs προ-Fi σε T-CM έδειξε αυξημένη μεταναστευτική ικανότητα προς το Τ-CM από το κανονικό μέσο διαφοροποίησης (CTRL), και η ικανότητα αυτή ενισχύθηκε ακόμη περισσότερο εάν BMDMs ήταν το πρώτο καλλιεργούνται σε IR-Τ-CM (Σχήμα 3Β). Ωστόσο, και οι δύο προϋποθέσεις δεν επηρέασε τη μετανάστευση των BMDMs προς κανονικού μέσου καλλιέργειας (S3 Εικ). Επιπλέον, αυτή η επίδραση ήταν όγκου-ειδικά, καθώς τα κύτταρα μετανάστευσαν ταχύτερα προς TRAMP-C1-ρυθμισμένο μέσο από προς ALTS1C1-ρυθμισμένο μέσο (IR-A-CM * στην Εικόνα 3Β). Μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι, μετά την εισαγωγή ακτινοβοληθεί μικροπεριβάλλοντα όγκου, μακροφάγα μπορεί να αποκτήσει αυξημένη ικανότητα να μεταναστεύουν μέσα στους όγκους.

(Α) Η σύγκριση της ικανότητας μετανάστευσης των μονοκυττάρων προς διαφορετικό μέσο όρο μέσα στον κάτω θάλαμο. CTRL: Τακτικές μέσο καλλιέργειας κυττάρων. RM-CSF: κανονικό μέσο κυτταρικής καλλιέργειας που περιέχει 10 ng /ml RM-CSF. T-CM: ψευδο-ακτινοβολημένα μέσο TRAMP-C1condition. IR-T-CM: 70 Gy-ακτινοβολημένα TRAMP-C1 μέσο όρο. Α-CM: ψευδο-ακτινοβολημένα μέσο όρο ALTS1C1. (Β) Η επίδραση της προ-condition για BMDM ικανότητα μετανάστευσης. CTRL *: BMDMs προ-ρυθμισμένο σε κανονικό διαφορικό ορό και στη συνέχεια εξετάζονται για τη μετανάστευσή τους προς την κανονική μέσο τακτική του πολιτισμού. CTRL: BMDMs προ-ρυθμισμένο σε κανονικό διαφορικό μέσο και στη συνέχεια εξετάζονται για τη μετανάστευσή τους προς το Τ-CM. T-CM: BMDMs προ-ρυθμισμένο σε T-CM για 24 ώρες και στη συνέχεια εξετάζονται για τη μετανάστευσή τους προς το Τ-CM. IR-T-CM: BMDMs προ-Fi σε ακτινοβολημένα Τ-CM για 24 ώρες και στη συνέχεια εξετάζονται για τη μετανάστευσή τους προς το Τ-CM. IR-A-CM *: BMDMs προ-Fi σε ακτινοβολημένα Τ-CM για 24 ώρες και στη συνέχεια εξετάζονται για τη μετανάστευσή τους προς μια-CM. Bar: SE για 8-10 τυχαίως επιλεγμένα πεδία από κάθε φρεάτιο 3 ανεξάρτητων πειραμάτων. **: Ρ & lt? 0,01? ***: Ρ & lt? 0.005? ns:. Ρ & gt? 0.05 με έναν τρόπο δοκιμή ANOVA

Η

Για να διερευνηθεί περαιτέρω τα αποτελέσματα της προ-ρύθμισης για την μεταναστευτική ικανότητα των μακροφάγων, κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιήθηκε για να εξετάσει την έκφραση του μακροφάγα που σχετίζονται διαφοροποίηση δείκτες CD45, CD11b, CD68, F4 /80, και για τον χαρακτηρισμό CD206 φαινοτύπους μακροφάγων. Το ποσοστό του κάθε δείκτη επιφανείας δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ των BMDMs ελέγχου και εκείνα τα προ-Fi σε IR-Τ-CM (Σχήμα 4Α). Περαιτέρω, κυτταρομετρίας ροής ιστογράμματα δείχνουν ότι η μέση ένταση φθορισμού (MFI) των εν λόγω επιφανειακών δεικτών σε BMDMs ελέγχου έναντι IR-CM BMDMs επίσης δεν διέφερε σημαντικά (S4 σχήμα), με την εξαίρεση του CD68 (Σχήμα 4Β) και F4 /80 ( Σχήμα 4C). Η μοναδική αιχμή CD68 (MFI: 770) σε BMDMs έλεγχο αυξηθεί και χωρίζεται σε δύο κορυφές, δηλαδή, CD68

μέσα και CD68

ψηλές κορυφές, με ΝΧΙ των 787 και 4337, αντίστοιχα (Σχήμα 4Β). Η MFI του F4 /80 μειώθηκε 9,7 έως 5,7. Αν και δεν ήταν σε θέση να προσδιορίσει το βασικό παράγοντα που συμβάλλει στη διαφορά αυτή, τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι μία ημέρα πολιτισμού στην RT-CM κατά τη διάρκεια της διαφοροποίησης μπορεί να αλλάξει το φαινότυπο και τα μεταναστευτικά χαρακτηριστικά των BMDMs.

(Α) Η ποσοστό των κυττάρων που περιέχουν BMDM CD45, CD11b, CD68, F4 /80, ή αντιγόνα επιφανείας CD206 εξετάστηκε με κυτταρομετρία ροής. CTRL: κύτταρα προερχόμενα από μυελό των οστών διαφοροποιούνται σε κανονικό μέσο διαφοροποίησης BMDM για 8 ημέρες. IR-T-CM: Οστών κύτταρα που προέρχονται από μυελό διαφοροποιήθηκαν σε κανονικό μέσο διαφοροποίησης BMDM για 7 ημέρες και περαιτέρω καλλιεργήθηκαν σε ακτινοβολημένα μέσο όρο TRAMP-C1 (IR-Τ-CM) για 24 ώρες. (Β) Το ιστόγραμμα της έντασης του FITC-συζευγμένο αντι-CD68 αντισώματος για BMDM διαφοροποιούνται από διαφορετικό μέσο όρο. (Γ) Το ιστόγραμμα της έντασης του FITC-συζευγμένο αντι-F4 /80 αντισώματος για BMDM διαφοροποιούνται από διαφορετικό μέσο όρο. Bar:. SE 3 ανεξάρτητα πειράματα

Η

Pre-Fi BMDMs ανακτηθεί από την πρόσληψη που προκαλείται από την απώλεια της μετανάστευσης

Πολλές μελέτες έχουν δείξει ότι τα μονοκύτταρα και τα μακροφάγα κύτταρα έχουν μια μεγάλη ικανότητα για την ανάληψη διαφόρων νανοσωματίδια [17-20]. Σε αυτή τη μελέτη, BMDMs ήταν σε θέση να αναλάβουν νανοσωματίδια (S5 σχήμα) όπως ΔΗΩ-φορτωμένο φυσαλίδες PAAC-D25 πολυμερές, Dox-φορτωμένα κυστίδια PAAC-D15, και του DIO-επισημασμένο περφθοροπεντάνιο σταγονίδια. Σε πειραματικά μοντέλα με Dox φορτωμένα κυστίδια PAAC-D15 και του DIO-επισημασμένο σταγονίδια υπερφθοροπεντάνιο, κινητικότητα BMDM μειώθηκαν μετά την ανάληψη των σωματιδίων (Σχήμα 5Α), όπως φαίνεται μέσω δοκιμασίες μετανάστευσης, και μια δοκιμασία τιτλοδότησης έδειξαν ότι η κινητικότητα BMDM συσχετίζεται αρνητικά με την ποσότητα του προ-φορτωμένο σωματίδια (Σχήμα 5Β και 5Γ). Ενώ αυτά τα στοιχεία επιβεβαιώνουν ότι BMDMs μπορεί να είναι κυτταρικά φορείς για την απεικόνιση ή θεραπευτική νανοσωματίδια, δείχνουν επίσης ότι BMDM μετανάστευση απομειώνεται μετά την πρόσληψη του φορτίου. Ωστόσο, το ωφέλιμο φορτίο που προκαλείται από την απώλεια της μετανάστευσης περιορίστηκε στο IR-Τ-CM-προέρχεται BMDMs, αν και αυτά τα κύτταρα ήταν ακόμη πιο αργή από ό, τι un-φορτωμένο, προ-Fi BMDMs (Σχήμα 5D).

(Α) Η ποσοστό μετανάστευσης των BMDM μειώνεται μετά uptaking τα Dox-φορτωμένα κυστίδια PAAC-D15 ή Dio-lableled σταγονίδια υπερφθοροπεντάνιο. (Β) Μία δοκιμασία τιτλοδότησης για την αντίστροφη σχέση μεταξύ της ποσότητας Dox-φορτωμένο κυστίδια PAAC-D15 (όπως φαίνεται από την MFI του Dox στο αριστερό άξονα μετρήθηκε με κυτταρομετρία ροής) και ο αριθμός των BMDM μετανάστευσαν μέσω Boyden θαλάμου (όπως φαίνεται από οι μετρήσεις /πεδίο στα δεξιά του άξονα). (C) Μία δοκιμασία τιτλοδότησης για την αντίστροφη σχέση μεταξύ της ποσότητας Dio-επισημασμένου υπερφθοροπεντάνιο σταγονίδια (όπως φαίνεται από την MFI του Δίωνα αριστερά άξονας) και του αριθμού των BMDM μετανάστευσαν μέσω Boyden θαλάμου (όπως φαίνεται από τις μετρήσεις /πεδίο στα δεξιά του άξονα ). (D) Σύγκριση του ρυθμού μετανάστευσης του BMDM προ-καλλιεργήθηκαν σε κανονικό (CTRL) έναντι IR-Τ-CM (Pre-condition) για 24 ώρες. Bar: SE για 8-10 τυχαίως επιλεγμένα πεδία από κάθε φρεάτιο 3 ανεξάρτητων πειραμάτων. ***: Ρ & lt? 0.005? **: Ρ & lt? 0,01 κατά ένα τρόπο δοκιμασία ANOVA

Η

παράδοση BMDM θεραπευτικών νανοσωματιδίων ενισχύει την αποτελεσματικότητα της ακτινοβολίας Therap

y

Η

Για να προσδιορίσετε αν πριν. κλιματιζόμενο BMDMs μπορεί να μεταφέρει νανοσωματίδια φορτωμένα με φάρμακο ως ανοσοενισχυτικό για ακτινοθεραπεία, δοξορουβικίνη (Dox) αρχικά έγκλειστα σε PAAC-D15 κυστίδια, τα οποία μπορεί να αποτρέψει Dox επαγόμενη κυτταροτοξικότητα στα μακροφάγα για μέχρι 72 ώρες

in vitro

( τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). BMDMs ήταν πρώτα προ-καλλιεργήθηκαν σε IR-T-CM για 1 ημέρα, στη συνέχεια, με Dox ενθυλακωμένα κυστίδια PAAC-D15 (PAAC-Dox) για 4 ώρες πριν από την ένεση. Η συγκέντρωση του PAAC-Dox κυστίδια προσδιορίστηκε με μια καμπύλη τιτλοδότησης (Σχήμα 5) για τη βελτιστοποίηση του φορτίου Dox κατά εξασθένηση του ρυθμού μετανάστευσης. Η συγκέντρωση του Dox μέσα BMDMs ποσοτικοποιήθηκε φασματομετρικό, και χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η ποσότητα του Dox και PAAC-Dox χορηγείται (ισοδύναμο με 1 mg Dox /kg σωματικού βάρους). Ελεύθερη Dox, PAAC-Dox, BMDMs, ή BMDMs φέρουν PAAC-Dox (BMDMs-PAAC-Dox) ενέθηκαν ενδοφλεβίως σε ποντικούς που φέρουν 5-mm διαμέτρου TRAMP-C1 όγκους μετά από 1, 4, και 7 ημέρες μία μόνο δόση των 25 ακτινοθεραπεία Gy. Η καμπύλη ανάπτυξης όγκου δείχνει ότι οι ελεύθερες Dox, PAAC-Dox, και BMDMs-PAAC-Dox μόνο του (Σχήμα Α και Β στο S6 Σχήμα), αλλά όχι PAAC, BMDMs, ή BMDMs-PAAC (τα δεδομένα δεν φαίνονται), μειωμένη ανάπτυξη του όγκου. Μία εφάπαξ δόση των 25 Gy παραδίδεται σε έναν όγκο περίπου 5 mm σε διάμετρο (IR) καθυστέρηση της ανάπτυξης του όγκου για περίπου 4 ημέρες (Εικ 6Α). Αυτή η επίδραση του IR ενισχύθηκε περαιτέρω όταν Dox, PAAC-Dox, ή BMDMs-PAAC-Dox χορηγήθηκαν μετά IR. Η σύγκριση των όγκων του όγκου μετά από κάθε θεραπεία στο τέλος του πειραματισμού (Σχήμα 6Β) έδειξε ότι οι βοηθητικές ουσίες, δωρεάν Dox, PAAC-Dox, και BMDMs-PAAC-Dox, ενίσχυσε σημαντικά την επαγόμενη από IR καθυστέρηση ανάπτυξης του όγκου. Η μέγιστη καταστολή της ανάπτυξης του όγκου επιτεύχθηκε μετά από IR με την χορήγηση BMDMs-PAAC-Dox.

(Α) καμπύλη ανάπτυξης όγκου TRAMP-C1 όγκων αυξανόμενης υποδόρια στο μηρό ακόλουθο διάφορες θεραπείες συνδυασμού. IR: 25 Gy ακτινοβολίας δόθηκε όταν διάμετρος όγκου είναι περίπου 5 mm. PBS, Dox, PAAC-Dox ή BMDMs-PAAC-Dox χορηγήθηκε ενδοφλεβίως σε 1, 4 και 7 ημέρες μετά την αγωγή ακτινοβολίας. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν το μέσο όρο τριών έως πέντε ποντίκια από κάθε ομάδα από έναν εκπρόσωπο δεδομένα σετ 3 ανεξάρτητων επανειλημμένα πειράματα. (Β) Σύγκριση του όγκου του όγκου στο τέλος των πειραμάτων. Bar: SE. **: Ρ & lt? 0,01? ***: Ρ & lt? 0.005? N.s .: P & gt? 0,05 κατά ένα τρόπο δοκιμασία ANOVA. (Γ) και (Δ) Αντιπροσωπευτική φθορισμού απεικόνιση ιστών όγκου που λαμβάνεται από την πρώτη μέρα μετά την τελευταία χορήγηση του PAAC-Dox. (Ε) και (στ) αντιπροσωπευτική φθορίζουσα απεικόνιση ιστών όγκου που λαμβάνεται από την πρώτη μέρα μετά την τελευταία χορήγηση του BMDM-PAAC-Dox. μπάρα κλίμακας = 50 um. Σύγκριση των DOX ένταση φθορισμού εντός PIMO αρνητικό έναντι PIMO θετική περιοχή μετά από μία ένεση (G) ή τρεις ενέσεις (H) του PAAC-Dox έναντι BMDMs-PAAC-Dox μεταξύ όγκου με (IR) και χωρίς (w /o IR) 25 Gy της ακτινοβολίας. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση ένταση φθορισμού Dox μέσα PIMO- ή PIMO + περιοχή από 5 τυχαία επιλεγμένα πεδία κάθε όγκου από 3 ιστούς όγκων αναλύθηκε με Image Pro 6 υπό ίδιες χρόνο έκθεσης 40Χ αντικειμενικό φακό απεικόνισης. Bar: SE. ***: Ρ & lt? 0.005? **: Ρ & lt? 0,01? *: P & lt? 0,05 κατά ένα τρόπο ANOVA test

Η

Για να εξεταστεί περαιτέρω η χωρική κατανομή των Dox παραδίδεται με διαφορετικά πρωτόκολλα, ιστούς όγκων 1 ημέρα μετά από κάθε ένεση υποβλήθηκαν σε ανοσοϊστοχημική χρώση (IHC).. PAAC-D15 κυστιδίων ενκαψουλωμένη Dox παραδίδονται από BMDMs συν-εντοπισμένη με CD11b

+ μακροφάγων την ημέρα 1 μετά από την πρώτη ένεση (σχήμα C σε S6 σχήμα), επιβεβαιώνοντας ότι PAAC-D15 κυστίδια μπορεί να αποτρέψει Dox διαμεσολαβούμενη κυτταροτοξικότητα στον φορέα για μέχρι 72 ώρες. IHC έδειξε επίσης ότι Dox με ή χωρίς πολυμερικό φλύκταινα ενθυλάκωση, παραδίδεται από την κυκλοφορία του, ήταν πρωτίστως μέσα σε ένα εύρος 100 μm των CD31

+ σκαφών (Σχήμα 6C) και αρνητικών περιοχών PIMO (Σχήμα 6D). Όταν Dox ενσωματώθηκε μέσα PAAC-D15 κυστίδια και μεταφέρονται από BMDMs, όμως, το σήμα Dox θα μπορούσε να βρεθεί όσο 100 μm μακριά από τα δοχεία (Σχήμα 6Ε) και εντός του PIMO

+ υποξική περιοχή (Εικ 6F). Για να επιβεβαιώσετε εάν η ενισχυμένη δράση του IR και BMDMs-PAAC-Dox συνδέθηκε με την υποξική τροπισμό του BMDMs, την ένταση του σήματος φθορισμού Dox στο PIMO

+ και PIMO

– περιοχές 1 ημέρα μετά την πρώτη ή την τελευταία ένεση (Σχήμα 6G και 6Η) συγκρίθηκε στις ομάδες θεραπείας με και χωρίς ακτινοβολία προ-έκθεσης. Βρήκαμε ότι η Dox παραδίδεται από πολυμερικό κυστιδίων ομοιογενώς κατανεμημένα εντός όγκων single-θεραπεία (δηλαδή, χωρίς IR). Καμία σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε μεταξύ PIMO

+ και PIMO

– περιοχές σε όγκους και μόνο-θεραπεία μετά από 1 ή 3 ενέσεις. Από την άλλη πλευρά, η Dox ένταση φθορισμού σε όγκους μονού θεραπεία παραδίδονται από BMDMs-PAAC ήταν υψηλότερη σε PIMO

+ περιοχές ανεξάρτητα από το χρονικό σημείο μετά τη θεραπεία. Προ-έκθεση των όγκων να IR αύξησε την κατανομή των Dox παραδίδονται από PAAC-D15 κυστίδια στο PIMO

– περιοχές 1 ημέρα μετά την πρώτη ένεση, αλλά είχε μικρότερη επίδραση μετά από 3 ενέσεις. Σε αντίθεση, η προ-έκθεση των όγκων σε RT δεν επηρέασε τη συσσώρευση το DOX σε PIMO

+ περιοχές για τους ιστούς που λαμβάνονται 1 ημέρα μετά την πρώτη ένεση, αν και η σχετική ένταση το DOX σε PIMO

+ περιοχές ενισχύθηκε περαιτέρω μετά από 3 ενέσεις .

Συζήτηση

Η ικανότητα των μακροφάγων να καταπιεί ξένα σωματίδια και διεισδύουν όγκους ώθησε τους ερευνητές να ερευνήσουν τα μακροφάγα ως πιθανές κυτταρικές φορείς για θεραπευτικούς ή απεικόνιση παράγοντες. Παρά το γεγονός ότι μια πρόσφατη έκθεση του Choi

et al

. [21] επιβεβαίωσε το θεραπευτικό δυναμικό του LP-Dox-φορτωμένο περιτοναϊκών μακροφάγων στην καθυστέρηση της ανάπτυξης του όγκου, η επίδραση ήταν ακόμα πολύ περιορισμένη. Στην παρούσα μελέτη, δείχνουμε ότι BMDMs προ-καλλιεργείται σε ακτινοβολημένα καρκινικά κύτταρο-ρυθμισμένο μέσο μπορεί να ενισχύσει την απελευθέρωση ενός θεραπευτικού φαρμάκου σε υποξικές περιοχές, και ότι αυτά τα κύτταρα μπορούν να είναι ένα αποτελεσματικό ανοσοενισχυτικό για ακτινοθεραπεία σε ένα μοντέλο ποντικού όγκου του προστάτη.

το αρχικό

in vivo

πείραμα χρησιμοποιώντας GFP-tagged BMDMs έδειξε ότι GFP-BMDMs ήταν σε θέση να διεισδύσει αναπτυσσόμενους όγκους, παρόλο που ήταν κατά κύριο λόγο βρίσκεται στην άκρη του όγκου, δηλαδή, περιοχές με μεγαλύτερη αιμάτωση [29]. Ο αριθμός των διηθητικών GFP-BMDMs σε όγκους ελέγχου παρέμεινε η ίδια κατά την εβδομάδα 1, αλλά μειώθηκε κατά την εβδομάδα 2 μετά την ένεση. Αυτό μπορεί να εξηγήσει γιατί εβδομαδιαίες ενέσεις BMDMs για μια περίοδο 5 εβδομάδων ήταν υποχρεωμένες να τηρούν σημαντική καθυστέρηση της ανάπτυξης σε προηγούμενη μελέτη [21].

Στην παρούσα μελέτη, IR δεν επηρεάζει την αρχική διείσδυση BMDM, αλλά ακτινοβολημένα όγκους ήταν σε θέση να προσελκύσει με συνέπεια BMDMs για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα και σε βαθύτερους ιστούς, από ήσαν όγκους ελέγχου, για διάστημα έως περίπου 1-2 εβδομάδες. Αυτό θα μπορούσε να είναι ένα πλεονέκτημα να συνδυάζει BMDM μεσολάβηση χορήγησης φαρμάκου με RT. θεραπευτικό μοντέλο μας απέδειξε ότι η αποτελεσματικότητα της RT αυξήθηκε μετά από 3 ενέσεις PAAC-Dox-φορτωμένο BMDMs. Σύγκριση πυκνότητα Dox σε PIMO

+ έναντι PIMO

– περιοχές σαφώς δείχνει ότι προ-ρυθμισμένο BMDMs μπορεί να παραδώσει τα φάρμακα σε υποξικές περιοχές πιο αποτελεσματικά από ό, τι στους μη-υποξικές περιοχές (Σχήμα 6). Ενδιαφέρον, η τελευταία ένεση ήταν λιγότερο αποτελεσματική από την πρώτη ένεση (ημέρα 2 έναντι ημέρα 8 του Σχ 6G και 6Η, αντίστοιχα), και IR μείωσε σημαντικά τη συσσώρευση Dox σε ιστούς όταν το φάρμακο δεν παραδόθηκε από BMDMs. Αυτό είναι πιθανόν σχετίζεται με το IR μεσολάβηση μείωση στην πυκνότητα μικροαγγείων [10]. Σε αντίθεση, IR δεν επηρέασε συσσώρευση Dox όταν παραδόθηκε με BMDMs, και η τελευταία ένεση ήταν πιο αποτελεσματική από την πρώτη. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι τα ακτινοβολημένα ιστοί εκφράζουν παράγοντες που προωθούν BMDM διείσδυση, καθώς και τους παράγοντες που μπορούν να ενισχύσουν τη στόχευση αυτών των κυττάρων σε υποξικές περιοχές του όγκου.