Αφηρημένο

Αυξημένα Μικροδορυφορικοί Μεταβολές σε Επιλεγμένα Τετρανουκλεοτιδικός επαναλαμβάνει (EMAST) είναι μια γενετική υπογραφή βρέθηκαν σε ποσοστό έως 60% των καρκίνων του παχέος εντέρου (CRCs) που προκαλείται από σωματική δυσλειτουργία της επιδιόρθωσης του DNA (MMR) πρωτεΐνη hMSH3. Δείξαμε προηγουμένως

in vitro

ότι η αναγνώριση του 5-φθοριοουρακίλη (5-FU) μέσα στο DNA και επακόλουθη κυτταροτοξικότητα ήταν πιο αποτελεσματική όταν οι δύο hMutSα (hMSH2-hMSH6 ετεροδιμερές) και hMutSβ (hMSH2-hMSH3 ετεροδιμερές) MMR σύμπλοκα ήταν παρόντες, σε σύγκριση με hMutSα & gt? hMutSβ μόνο. Δοκιμάσαμε εάν οι ασθενείς με EMAST CRCs (hMutSβ ελαττωματικά) είχε μειωθεί απάντηση στην επικουρική 5-FU χημειοθεραπεία, παραλληλίζοντας

in vitro

ευρήματα.

Αναλύσαμε 230 ασθενείς με σταδίου ΙΙ /ΙΙΙ σποραδικές παχέος εντέρου για τις οποίες είχαμε δεδομένα θεραπείας και επιβίωση 5-FU. Αρχειακό DNA αναλύθηκε για EMAST (& gt? 2 από 5 δείκτες μεταλλαγμένα μεταξύ UT5037, D8S321, D9S242, D20S82, D20S85 τετρανουκλεοτιδικές loci). Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier δημιουργήθηκαν και πολυπαραγοντική ανάλυση χρησιμοποιήθηκε για να καθοριστεί συμβολή σε κίνδυνο.

Εντοπίσαμε 102 (44%) EMAST καρκίνων. Ενενήντα τέσσερις ασθενείς (41%) έλαβαν επικουρική 5-FU χημειοθεραπεία, και η διάμεση παρακολούθηση για όλους τους ασθενείς ήταν 51 μήνες. Ασθενείς με EMAST CRCs αποδειχθεί βελτιωμένη επιβίωση με ανοσοενισχυτικό 5FU στον ίδιο βαθμό όπως ασθενείς με μη-EMAST CRCs (Ρ & lt? 0,05). Δεν παρατηρήσαμε καμία διαφορά στην επιβίωση μεταξύ των ασθενών με /III EMAST και καρκίνους μη EMAST (P = 0,36).

Υπάρχει βελτιωμένη επιβίωση φάση ΙΙ για /χημειοθεραπεία ασθενών III CRC μετά από επικουρική 5-FU με βάση το στάδιο ΙΙ ανεξάρτητα από την κατάσταση EMAST. Η απώλεια της συμβολής της hMSH3 για 5-FU κυτταροτοξικότητα δεν μπορεί να επηρεάσει αρνητικά την έκβαση των ασθενών, σε αντίθεση ασθενείς των οποίων οι όγκοι στερούνται εντελώς τη λειτουργία MMR DNA (MSI-H)

Παράθεση:. Hamaya Υ, Guarinos C, Τσενγκ-Rogenski SS, Iwaizumi Μ, Das R, Jover R, et al. (2015) Η αποτελεσματικότητα της Επικουρική 5-φθοριοουρακίλη θεραπεία για ασθενείς με EMAST-θετικό στάδιο ΙΙ /ΙΙΙ του καρκίνου του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (5): e0127591. doi: 10.1371 /journal.pone.0127591

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Jian-Xin Gao, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, ΚΙΝΑ

Ελήφθη: 22 Γενάρη του 2015? Αποδεκτές: 16 Απρ 2015? Δημοσιεύθηκε: May 21, 2015

Copyright: © 2015 Hamaya et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή υποστηρίχθηκε από τις Ηνωμένες Πολιτείες Υπηρεσία Δημόσιας Υγείας (DK067287 και CA162147) και την A. Alfred Τάουμπμαν Ιατρικού Ερευνητικού Ινστιτούτου του Πανεπιστημίου του Michigan. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο ορθοκολικός καρκίνος (CRC) είναι μία από τις πιο κοινές αιτίες της θνησιμότητας που σχετίζονται με τον καρκίνο παγκοσμίως [1]. Στις Ηνωμένες Πολιτείες μόνο, 50.000 άνθρωποι θα πεθάνουν από την CRC κατά τη διάρκεια του 2014 [2]. Οι ασθενείς που δεν έχουν μακρινή μετάσταση CRC είναι δυνητικά θεραπεύεται με χειρουργική επέμβαση, και πενταετή ποσοστά επιβίωσης για ασθενείς με στάδιο ΙΙ και το στάδιο ΙΙΙ CRC κατά προσέγγιση 75% και 55%, αντίστοιχα [3, 4]. Για να ελαχιστοποιηθεί η υποτροπή της χειρουργικής θεραπείας, επικουρική 5-φθοριοουρακίλη (5-FU) -με βάση χημειοθεραπεία έχει γίνει πρότυπο για ορισμένους ασθενείς υψηλού κινδύνου με τη φάση ΙΙ CRC και όλους τους ασθενείς με σταδίου ΙΙΙ CRC, καθώς βελτιώνει τα ποσοστά επιβίωσης κατά 10-20% [ ,,,0],4, 5]. 5-FU ασκεί διάφορες μεταβολικές δράσεις που επάγουν κυτταροτοξικότητα σε καρκινικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων των (α) την αναστολή της θυμιδυλικής συνθετάσης (η οποία καταλύει τη μετατροπή του δεοξυουρακίλη μονοφωσφορικής (dUMP) προς δεοξυθυμιδίνη μονοφωσφορική (dTMP), οδηγώντας σε μια ανεπάρκεια των νουκλεοτιδίων θυμίνη για τη σύνθεση του DNA και επακόλουθη υποκατάσταση της ουρακίλης και της 5-φθοριοουρακίλη νουκλεοτίδια για τη σύνθεση του DNA, και (β) ενσωμάτωση σε RNA [5].

η ενσωμάτωση του 5-FU σε ϋΝΑ όπου η επισκευή αναντιστοιχία DNA (MMR) σύστημα αναγνωρίζει , δεσμεύει, και εκτελεί ορισμένες από κυτταροτοξικότητας 5-FU, η ανεξάρτητη από 5-FU επίδραση επί RNA [6-11]. τα συμπλέγματα αναγνώριση του DNA MMR, hMutSα και hMutSβ, αποτελείται από ετεροδιμερή των πρωτεϊνών MMR hMSH2-hMSH6 και hMSH2- hMSH3, αντίστοιχα [12, 13]. hMutSα αναγνωρίζει μόνο mispairs βάσης μετά από τη σύνθεση του DNA και σύντομη εισαγωγή /βρόχους διαγραφή (I /D βρόχους) σε επαναλαμβανόμενες αλληλουχίες μικροδορυφορικού DNA, ενώ hMutSβ αναγνωρίζει μεγαλύτερα I /D βρόχων [12, 13]. αφού ένα mispair ή I /D βρόχος έχει αναγνωριστεί, η εκτέλεση πολύπλοκων hMutLα (ένα ετεροδιμερές των MMR πρωτεϊνών hMLH1 και hPMS2) δεσμεύεται με hMutSα ή hMutSβ να επισημάνει άλλες πρωτεΐνες για την αποκοπή και την εκ νέου σύνθεση του προσβεβλημένου DNA, ή δεσμεύει το κύτταρο να προγραμματισμένο κυτταρικό θάνατο αν η επισκευή είναι μάταιη [12, 13]. Όσον αφορά την 5-FU, CRC κύτταρα εντελώς ανεπαρκή σε DNA MMR είναι & gt? 20 φορές πιο ανθεκτικά στην 5-FU κυτταροτοξική θανάτωση [6]. προσδιορισμούς δέσμευσης πρωτεΐνης-DNA και πειράματα συντονισμού επιφανειακών πλασμονίων αποδεικνύουν ότι hMutSα είναι ο κύριος συγκρότημα αναγνώριση για 5-FU που ενσωματώνεται στο DNA όπως αυτό έχει την υψηλότερη συγγένεια για δέσμευση και καταδεικνύει το μεγαλύτερο βαθμό κυτταροτοξικότητας [8, 9]. Το συγκρότημα hMutSβ, παρά την αρχή λειτουργίας του σε δέσμευση μεγαλύτερων βρόχους I /D, μπορεί επίσης να δεσμεύσει 5-FU και το σήμα κυτταροτοξικότητα, αλλά σε μικρότερο βαθμό από ό, τι hMutSα [9, 10]. Όταν και οι δύο hMutSα και hMutSβ είναι παρόντα, το υψηλότερο επίπεδο της 5-FU κυτταροτοξικότητα επιτυγχάνεται, υποδεικνύοντας ότι και οι δύο συμπλέγματα αναγνώρισης DNA MMR συνεργούν να συμβάλει στην 5-FU κυτταροτοξικότητα, σε σύγκριση με hMutSα και hMutSβ μόνος [9, 10]. Έτσι, τα σύμπλοκα αναγνώρισης DNA MMR έχουν ένα ιεραρχικό επίπεδο για χημειοευαισθησία για 5-FU κυτταροτοξικότητα. Απουσία τόσο hMutSα και hMutSβ εμποδίζει τα σύμπλοκα να δεσμεύσει 5-FU εντός του DNA, και η έλλειψη hMutLα (hMLH1-hPMS2 ετεροδιμερές) απομακρύνει τη συνιστώσα εκτέλεση του MMR, με τα δύο σενάρια που προκαλεί πλήρη απουσία DNA MMR και ματαίωση 5-FU επαγόμενη κυτταροτοξικότητα [8-10].

Αυτά τα ευρήματα έχουν επιπτώσεις για το ~ 15% των ασθενών CRC με MMR ανεπάρκεια όγκων DNA που λαμβάνουν θεραπεία με 5-FU. Εμείς και άλλοι έχουν δείξει προηγουμένως ότι το στάδιο ΙΙ /ΙΙΙ σποραδικές ασθενείς CRC των οποίων οι όγκοι επιδεικνύουν αστάθεια μικροδορυφόρου-υψηλή (MSI-H) (δηλαδή είναι MMR-ανεπαρκή) δεν έχουν βελτίωση στην επιβίωση τους με τη χρήση του ανοσοενισχυτικού 5-FU θεραπεία, ενώ οι ασθενείς των οποίων οι όγκοι διατηρούν MMR βελτιώσουν την επιβίωσή τους [14-19]. Έτσι, σε ασθενείς CRC, ικανότητας όγκου για DNA MMR είναι σημαντική για μια απόκριση επιβίωσης σε 5-FU.

Αυξημένα μεταβολές μικροδορυφορικών σε επιλεγμένες επαναλήψεις τετρανουκλεοτιδική (EMAST) είναι μια γενετική υπογραφή παρατηρήθηκε σε έως και 60% του ΚΕΣ [20-24]. Η παρουσία της EMAST συνδέεται στενά με ενδοεπιθηλιακή φλεγμονή, προχωρημένο στάδιο CRC, κακή επιβίωση και αφρικανική αμερικανική φυλή [21, 22, 25]. EMAST CRCs δείχνουν πυρηνική ετερογενή έκφραση hMSH3, [20, 22] και πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι η κυτοκίνη με γνώμονα το οξειδωτικό στρες προκαλεί μια πυρηνική-to-κυτοσολικού μετατόπισης για hMSH3, αφαιρώντας το από λειτουργική ιστοσελίδα επιδιόρθωση του DNA του, και είναι η πιθανή εξήγηση για η παρατηρούμενη πυρηνική ετερογένεια [26, 27, 28]. Θεωρείται ότι η φλεγμονή και το οξειδωτικό στρες σκανδάλη hMSH3 ο εσφαλμένος εντοπισμός, προκαλώντας hMutSβ λειτουργία να αποτύχει, ενώ θα διατηρήσει hMutSα λειτουργία στον πυρήνα [26]. EMAST και ο εσφαλμένος εντοπισμός του hMSH3 είναι η πιο κοινή ελάττωμα DNA MMR σε ανθρώπινο CRC.

Ο στόχος μας ήταν να εξετάσει αν η επιβίωση των ασθενών CRC επηρεάστηκε από θεραπεία 5-FU αν διέθεταν EMAST όγκους. Αυτό ήταν ένα σημαντικό ζήτημα ως ανοσοενισχυτικό 5-FU χημειοθεραπεία είναι η θεραπεία βάσης βασικό για ασθενείς με στάδιο ΙΙ /ΙΙΙ CRC, και το 60% των ασθενών που έχουν αποκτήσει δυσλειτουργία hMutSβ λόγω hMSH3 εσφαλμένος εντοπισμός.

Υλικά και Μέθοδοι

Τα δείγματα ασθενών και DNA εξόρυξη

Αναλύσαμε 230 ασθενείς με σταδίου ΙΙ /ΙΙΙ σποραδικών καρκίνων του παχέος εντέρου από το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια και Veterans Administration ιατρικά κέντρα στο Σαν Ντιέγκο, Καλιφόρνια (συλλέγεται 1982 – 1989) [14 ] και Γενικό Νοσοκομείο Universitario de Alicante, Αλικάντε, Ισπανία (EPICOLON, συλλέγονται 2000-2001) [15, 16]. Το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στο Σαν Ντιέγκο, VA Σαν Ντιέγκο, Γενικό Νοσοκομείο Universitario de Alicante, και το Πανεπιστήμιο του Michigan ανθρώπινα υποκείμενα επιτροπές ενέκριναν την έρευνα που χρησιμοποιούν αυτά τα υπάρχοντα παθολογικά δείγματα. φακέλους των ασθενών /πληροφορίες ήταν ανώνυμες και de-εντοπίστηκαν πριν από την ανάλυση των δεδομένων. Λόγω αυτής της χρήσης των υφιστάμενων παθολογικών δειγμάτων που έχουν απο-προσδιορίζονται, τα θεσμικά συμβούλια επανεξέταση παραιτηθεί από την ανάγκη για τον ασθενή ή την επόμενη της συγκατάθεσης συγγενείς. Οι ασθενείς συμπεριλήφθηκαν μόνο γι ‘αυτή την ομάδα, αν παθολογικό υλικό ήταν διαθέσιμο, χημειοθεραπευτικό σχήμα τους είναι γνωστή, καθώς και πληροφορίες επιβίωση ήταν διαθέσιμα. Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε θεραπευτική χειρουργική εκτομή. Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε 5-FU θεραπεία που βασίζεται ή χωρίς επεξεργασία από ομάδες φροντίδα τους πριν από τη μελέτη μας, και όγκου κατάσταση MSI είχε προσδιοριστεί προηγουμένως [14-16]. Πίνακας Α στο S1 λεπτομέρειες αρχείου όλα τα προφίλ των ασθενών και του όγκου στο σύνολο. θέση του όγκου, την ηλικία του ασθενούς, το φύλο του ασθενούς, το στάδιο του όγκου, τη χρήση της χημειοθεραπείας και της επιβίωσης προήλθαν από τη χειρουργική έκθεση παθολογίας, με δεδομένα παρακολούθησης που ανακτώνται από τα μητρώα του όγκου από τα αντίστοιχα ιδρύματα [14-16]. Φορμαλίνη σταθερό, μπλοκ εγκλεισμένο σε παραφίνη ελήφθησαν για κάθε ασθενή, και σειριακές τομές κόβονται για Η &? Χρώση Ε και μικροδιατομή. DNA απομονώθηκε από ορθοκολικό όγκο του κάθε ασθενούς και παρακείμενο φυσιολογικό ιστό. Κάθε περιοχή μικροτομή εντοπίστηκε σε μια αναφορά H & amp? Ε χρώση διαφάνεια. Ανατμηθέντες δείγματα ήταν αποπαραφινοποιήθηκαν σε ένα σωλήνα μικροφυγοκέντρου με ξυλόλιο, και το DNA καθαρίστηκε με αιθανόλη και QIAmp DNA ανακριτής Kit (Qiagen, Valencia, CA) μετά από προηγούμενη δημοσιευθέν πρωτόκολλο [22].

ενίσχυση του DNA, προσδιορισμός EMAST, και ανάλυση κομμάτι

κατάσταση EMAST προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας 5 πολυμορφικών δεικτών τετρανουκλεοτιδικές (

UT5037

,

D9S242

,

D20S85

,

D8S321

και

D20S82

) [22]. Γονιδιωματικό ϋΝΑ που εξάγεται από όγκους και ομόλογό φυσιολογικοί ιστοί PCR-ενισχύθηκε με ειδικούς εκκινητές για κάθε τετρανουκλεοτιδική δείκτη χρησιμοποιώντας Platinum PCR Supermix (Invitrogen, USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. PCR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας 6-FAM ή επισημαίνονται HEX εκκινητές. Οι συνθήκες κύκλων είχαν ως εξής: 95 ° C για 15 λεπτά για την αρχική ενεργοποίηση θερμότητας? 40 κύκλοι των 94 ° C για 1 λεπτό, 55 ° C -62C ° για 1 λεπτό, και 72 ° C για 30 δευτερόλεπτα? και μία τελική επέκταση στους 72 ° C για 10 λεπτά. Σημασμένα με φθορισμό θραύσματα που δημιουργούνται με PCR αναλύθηκαν σε ένα Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer με την GeneMarker (SoftGenetic LLC, ΡΑ). Τα προϊόντα PCR χρησιμοποιήθηκαν για ανάλυση DNA θραύσμα για τον εντοπισμό μετάλλαξη μετατόπισης πλαισίου στο τετρανουκλεοτιδική επαναλήψεις για κάθε τόπο. Όταν παρατηρήθηκαν παρεκκλίνουσα κορυφές +/- πολλαπλάσια του 4 νουκλεοτίδια στις ηλεκτροφορητόγραμμα από όγκο σε σύγκριση με εκείνη του ζεύγους μη-όγκου, ο δείκτης εισήχθη θετικό για μετατόπιση πλαισίου αστάθεια. Οι όγκοι που δείχνει πλαισιοτροποποιήσεις σε τουλάχιστον 2 δείκτες τετρανουκλεοτιδικές σε σύγκριση με ζεύγη φυσιολογικό ιστό κατηγοριοποιήθηκαν ως EMAST-θετικούς όγκους, ενώ όλοι οι άλλοι είχαν χαρακτηριστεί ως EMAST-αρνητικούς όγκους.

Η στατιστική ανάλυση

Οι στατιστικές αναλύσεις διεξάγεται με τη χρήση SPSS (έκδοση 20, IBM) και από το Τμήμα Βιοστατιστική, της Σχολής Δημόσιας Υγείας του Πανεπιστημίου του Michigan. αξιολογήθηκαν οι ακόλουθες μεταβλητές: ηλικία, φύλο, παχέος θέση του όγκου, το στάδιο, η χρήση του επικουρικού 5-FU θεραπεία, ο χρόνος παρακολούθησης και ζωτικής σημασίας κατάσταση (ζωντανό ή νεκρό). Θέση του όγκου είχε χαρακτηριστεί ως εγγύς (δεξιά) εάν ο όγκος ήταν στο ή κοντά στο σπληνική καμπή, και άπω (αριστερά όψης) εάν σε απόσταση προς την σπληνική καμπή. στάδιο της νόσου ταξινομήθηκε κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης. Vital κατάσταση είχε χαρακτηριστεί ως συνολική επιβίωση. Η στατιστική συσχέτιση μεταξύ EMAST και άλλες κατηγορικές μεταβλητές αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το ακριβές τεστ του Fisher. αναλύσεις επιβίωσης έγιναν μετά ασθενείς ταξινομήθηκαν με βάση την κατάσταση EMAST τους και εάν έχουν λάβει επικουρική 5-FU χημειοθεραπεία ως μέρος της θεραπείας τους. Να εξετάσει τις διαφορές στα ποσοστά επιβίωσης, καμπύλες Kaplan-Meier χαράχθηκαν και η λειτουργία Cox αναλογικών κινδύνων επέτρεψε τον υπολογισμό του σχετικού δείκτη κινδύνου κινδύνου. Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων, και

P

τιμές & lt?. 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές

Αποτελέσματα

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών και την κατάσταση EMAST

Χρησιμοποιήσαμε 230 στάδιο II /III ασθενείς CRC από EPICOLON [15, 16] και USA [14] πηγές για τις οποίες είχαμε αποτέλεσμα επιβίωση, ανοσοενισχυτικό χρησιμοποίηση 5-FU, και ιστών που διατίθενται για γενετική ανάλυση. Για όλους τους 230 ασθενείς που διαχωρίζονται από το στάδιο, 64 118 (54%) το στάδιο ΙΙΙ ασθενείς έλαβαν συμπληρωματική θεραπεία 5-FU, σε σύγκριση με 30 112 (27%) το στάδιο ΙΙ οι ασθενείς (

P

= 0,000023). Από τους 230 καρκίνους που αναλύθηκαν για EMAST, 102 (44,3%) ήταν EMAST-θετικά, που ορίζεται ως 2 ή περισσότερους δείκτες τετρανουκλεοτιδική δείχνει μετάλλαξη μετατόπισης πλαισίου [22]. Συγκρίναμε ασθενείς με καρκίνους EMAST με εκείνους που είχαν μη EMAST καρκίνων, όπως φαίνεται στον πίνακα Α σε S1 αρχείου. Εμείς δεν βρήκε σημαντικές διαφορές μεταξύ EMAST και-μη EMAST ασθενείς CRC για το φύλο, τη θέση του όγκου εντός του παχέος εντέρου, ή το στάδιο. Ωστόσο, οι ασθενείς με μη EMAST καρκίνοι συχνότερα σε επεξεργασία με 5-FU (

P

& lt? 0,05) (Πίνακας Α σε S1 File). Αυτή η παρατήρηση για ασθενείς με καρκίνους μη EMAST μπορούσε να προβλεφθεί να ευνοούν ενισχυμένη επιβίωση σε σύγκριση με ασθενείς με καρκίνους EMAST, καθώς αυτή η ομάδα ασθενών έχει DNA MMR-καλά καρκίνους. Βρήκαμε περισσότερα MSI-H όγκων στους ασθενείς EMAST CRC (Πίνακας Α σε S1 αρχείου). Αυτό το εύρημα είναι πιθανό να οφείλεται στην πλήρη απενεργοποίηση του DNA MMR (υπερμεθυλίωση

hMLH1

αδρανοποίηση του συμπλόκου hMutLα σε σποραδικά καρκινώματα MSI-H), η οποία μπορεί να προκαλέσει μεταλλάξεις μετατόπισης πλαισίου σε επαναλήψεις τετρανουκλεοτιδική, ή /και δευτερεύοντα αδρανοποίηση του

hMSH3

μέσω πλαισίου μετάλλαξη της κωδικοποίησης μικροδορυφόρων του ως συνέπεια της απώλειας της hMutLα λειτουργίας [12].

η συνολική επιβίωση των ασθενών με EMAST και μη EMAST CRCs

εξακριβωθεί εάν οι ασθενείς CRC με EMAST (των οποίων οι καρκίνοι τεκμαίρεται λείπουν λειτουργία hMutSβ) θα έχουν μια μείωση στην επιβίωση σε σύγκριση με το CRC ασθενείς των οποίων οι όγκοι διατηρούν MMR-επάρκειας (διατηρώντας τόσο hMutSα και λειτουργία hMutSβ, καθώς και η λειτουργία hMutLα) μετά από επικουρική 5-FU θεραπείας.

από το 230 το στάδιο II /III ασθενείς CRC, 94 (40,9%) ασθενείς έχασαν τη ζωή τους πάνω από το διάμεσο χρόνο παρακολούθησης 51,0 μήνες. Επειδή πραγματική σύγκριση μας ήταν για την επιβίωση των ασθενών CRC με υποτιθέμενη απώλεια hMSH3 λειτουργίας (hMutSβ) σε σύγκριση με τους ασθενείς CRC που διατηρούν hMutSα και hMutSβ και hMutLα λειτουργίας (πλήρη επάρκεια DNA MMR), αναλύσαμε τα δεδομένα επιβίωσή μας σε περίπτωση απουσίας τους 30 ασθενείς (13%) με την MSI-H CRCs (όλα με δυσλειτουργία hMutLα). Αφαίρεση ασθενείς με MSI-H CRCs μειώνει επίσης σύγχυση ζητήματα με αποτέλεσμα, όπως είναι καλά αποδεικνύεται ότι αυτοί οι ασθενείς δεν ανταποκρίνονται θετικά σε 5-FU επικουρική θεραπεία [14-19]. Επιπλέον, συγκρίνοντας τους ασθενείς 11 MSI-H CRC που έλαβαν ανοσοενισχυτικό 5-FU στους 19 MSI-H ασθενείς CRC που δεν έλαβαν ανοσοενισχυτικό 5-FU, δεν υπήρχε διαφορά στην επιβίωση (

P

& gt? 0,05 , τα δεδομένα δεν φαίνονται), συνεπές με προηγούμενες πολλαπλές εκθέσεις [14-19]. Αυτό άφησε ένα σύνολο 200 ασθενών (82 EMAST και 118 μη-EMAST) για την ανάλυση και τα χαρακτηριστικά τους παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Με την ένταξη των ασθενών MSI-H CRC, η διαφορά στη χρησιμοποίηση 5-FU μεταξύ EMAST και μη ασθενείς EMAST εξαφανίστηκε.

Η

Εμείς κατασκευάζονται καμπύλες Kaplan-Meier για να συγκρίνετε αθροιστική συνολική επιβίωση σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με και χωρίς ανοσοενισχυτικό 5-FU χημειοθεραπεία. Ανοσοενισχυτικό έκδοχο 5-FU βελτιώνει τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με σταδίου II /III CRC (

P

= 0,004, δοκιμασία log-rank) (Σχήμα 1Α), όπως έχει αναφερθεί στο παρελθόν [14,19]. Στη συνέχεια διαχωρίζονται τα δεδομένα από την κατάσταση CRC EMAST. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Β, οι ασθενείς των οποίων οι καρκίνοι αποδειχθεί EMAST (υποτιθέμενη hMSH3 ανεπάρκεια) είχε βελτιωθεί επιβίωση με επικουρική θεραπεία 5-FU (

P

= 0,034) στην ίδια έκταση όπως οι ασθενείς των οποίων ο καρκίνος δεν απέδειξε EMAST ( MMR-καλά) (

P

= 0,043) (σχήμα 1Γ). Έτσι, παρά την έλλειψη της λειτουργίας hMSH3 εντός του καρκίνου, υπάρχει βελτιωμένη επιβίωση στο στάδιο II /III ασθενείς CRC μετά από επικουρική 5-FU χημειοθεραπεία ανεξάρτητα από την κατάσταση EMAST όγκου.

(

A

) αθροιστική συνολική επιβίωση όλων των ασθενών χωρίς MSI-H (

P

= 0,004, δοκιμασία log-rank). (

Β

) Σωρευτική συνολική επιβίωση των ασθενών με μη-MSI-H EMAST-θετικούς όγκους (ελλειμματικό σε λειτουργία hMSH3) (

P

= 0,034, δοκιμή στρωμάτωσης log-rank). (

C

) Σωρευτική συνολική επιβίωση των ασθενών με μη-MSI-H, μη EMAST όγκους (πλήρης επάρκεια σε λειτουργία επιδιόρθωση του DNA αναντιστοιχία) (

P

= 0,043, δοκιμή στρωμάτωσης log-rank ).

η

παράγοντες κινδύνου που επηρεάζουν τη συνολική επιβίωση

ομάδα μας των ασθενών με CRC δεν δείχνουν χειρότερη επιβίωση εάν ο ασθενής είχε καρκίνο EMAST σε σύγκριση με καρκίνο μη EMAST, ανεξάρτητα από το παρουσία ή απουσία του επικουρικού θεραπεία 5-FU (Σχ. Α σε S1 File). Αυτή η αντίθεση σε προηγούμενη αναφορές ασθενών με καρκίνους EMAST δείχνει προχωρημένο στάδιο και χειρότερη πρόγνωση έναντι των ασθενών με καρκίνους μη EMAST [21, 25] θα μπορούσε να οφείλεται στο μεγάλο αριθμό των ασθενών σταδίου II εξετάστηκαν στη μελέτη μας. Για την επικύρωση αυτή την παρατήρηση στην ομάδα των ασθενών μας, πραγματοποιήσαμε μια πολυπαραγοντική Cox ανάλυση κινδύνων ποσοστό για τη συνολική επιβίωση (Πίνακας 2). Από την ανάλυση, παρατηρήθηκε καμία διαφορά επιβίωσης μεταξύ σταδίου ΙΙ /ΙΙΙ ασθενείς CRC με EMAST και καρκίνους μη EMAST στην ομάδα μας (

P

= 0,36). Παρατηρήσαμε επίσης καμία διαφορά ως προς το φύλο, ενδο-παχέος θέση του όγκου, καθώς και την πηγή του ασθενούς για την ομάδα μας. Κάναμε παρατηρούμε σημαντική χειρότερη επιβίωση για ασθενείς ηλικίας άνω των 70 ετών (

P

= 0,015), εάν ο ασθενής είχε έναν όγκο σταδίου ΙΙΙ σε σύγκριση με έναν όγκο σταδίου ΙΙ κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης (

P

= 0,0042), και εάν ο ασθενής δεν έχει λάβει επικουρική χημειοθεραπεία 5-FU (

P

= 0,0004).

η

Συζήτηση

τα στοιχεία μας για 230 Στάδιο II /III CRCs διαχωρίζονται με βάση την κατάσταση EMAST δείχνει ότι το 5-FU παραμένει επωφελής για τη συνολική επιβίωση σε ασθενείς με EMAST CRCs. Η απώλεια της λειτουργίας hMutSβ λόγω της ο εσφαλμένος εντοπισμός του hMSH3 [26] σε EMAST CRCs δεν φαίνεται να είναι αρκετά επιβλαβή για την τροποποίηση έκβαση του ασθενούς σε απόκριση προς επικουρική θεραπεία 5-FU. Προηγουμένως, έχουμε δείξει μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ hMutSα και hMutSβ πρόσδεση της 5-FU εντός του DNA και 5-FU κυτταροτοξικότητα, και όταν η λειτουργία του DNA MMR ήταν απούσα (είτε με απώλεια hMutSα και hMutSβ ή hMutLα), δεν υπήρχε δεσμευτική και όχι μεταγενέστερη εκτέλεση της κυτταροτοξικότητας [8-10]. Πολλαπλές μελέτες δείχνουν επικουρική θεραπεία 5-FU σε ασθενείς με MSI-H CRCs μεταφράσει το

in vitro

παρατήρηση έλλειψη κυτταροτοξικότητας σε μια έλλειψη βελτίωσε την επιβίωση των ασθενών με 5-FU θεραπεία [14-19]. Η αναγνώριση του 5-FU στο DNA φαίνεται να είναι κυρίως από hMutSα, με συγγένεια για πρόσδεση της 5-FU περισσότερο από το διπλάσιο του hMutSβ σε προσδιορισμούς συντονισμού επιφανειακών πλασμονίων [8, 9], παραλληλίζοντας μεγαλύτερο ρόλο hMutSα σε 5-FU επαγόμενη κυτταρικό θάνατο [9, 10]. Παρά το γεγονός ότι hMutSβ μπορεί να δεσμεύσει 5-FU στο DNA [9, 10] και η παρουσία του μπορεί να προκαλέσει ένα μέτριο επίπεδο της κυτταροτοξικότητας και μόνο, καθώς και συνέργεια με hMutSα μετά τη θεραπεία 5-FU [9], μη λειτουργική κατάσταση του, όπως καθορίζεται από EMAST μέσα CRCs ασθενή που εξακολουθούν να κατέχουν τη λειτουργία hMutSα δεν φαίνεται να είναι απολύτως κρίσιμη για την επιτυχία της 5-FU κυτταροτοξικότητα στην επιβίωση των ασθενών.

DNA MMR ελαττωματικό όγκοι μπορεί να συμβεί στον καθορισμό των σποραδικών CRCs (υπερμεθυλίωση

hMLH1

), καθώς και στο σύνδρομο Lynch, στην οποία μεταδίδεται βλαστικής σειράς μετάλλαξη ενός γονιδίου DNA MMR [12, 13, 29]. Οι MMR γονίδια

hMLH1

,

hPMS2

, και

hMSH2

(και

EpCAM

, η οποία στοχεύει δευτερευόντως αδρανοποίηση του

hMSH2

) όταν μεταλλαχθεί σε βλαστική γραμμή και το δεύτερο αλληλόμορφο σωματικά αδρανοποιηθεί στον όγκο αδρανοποιεί πλήρως DNA λειτουργία MMR, δημιουργεί ένα καρκίνο MSI-H [30], και οι ασθενείς δεν αντλούν όφελος από την επικουρική 5-FU θεραπεία [17]. Δεν έχει υπάρξει καμία περιγραφή των ασθενών σύνδρομο Lynch με βλαστικής γραμμής hMSH3 μετάλλαξη μέχρι σήμερα να δοκιμαστεί η επίδραση του ανοσοενισχυτικού θεραπεία 5-FU στην έκβαση για αυτήν την ομάδα, και ίσως το αποτέλεσμα τους θα αντικατοπτρίζει ασθενείς με EMAST CRCs επεξεργάστηκε με 5-FU λόγω της απομένει και λειτουργικό συγκρότημα hMutSα. Ωστόσο, θα προβλέψουμε ότι Lynch ασθενείς με σύνδρομο με

hMSH6

βλαστική μεταλλάξεις θα έχει σημαντική μείωση στην έκβαση της επιβίωσης με θεραπεία για CRC σε σύγκριση με τους ασθενείς που διατηρούν τη λειτουργία MMR στους όγκους τους, λόγω της απώλειας της hMutSα. Δεδομένου ότι

hMSH6

βλαστική ασθενείς Lynch διατηρεί τη λειτουργία hMutSβ, θα προβλέπουν μια υποτονική αντίδραση στην επικουρική 5-FU που ήταν καλύτερη από ό, τι οι ασθενείς των οποίων οι όγκοι στερούνται εντελώς τη λειτουργία MMR.

Εμείς δεν τήρησε τη διαφορά στην συνολική επιβίωση μεταξύ των ασθενών με EMAST και μη EMAST CRCs σε αντίθεση με άλλες εκθέσεις [25], από το στάδιο και ανεξάρτητα από την επικουρική θεραπεία 5-FU. Πιστεύουμε ότι αυτό οφείλεται σε μεγάλο βαθμό το υψηλότερο ποσοστό ασθενών σταδίου II στη μελέτη μας, σε σύγκριση με άλλες μελέτες, με σχεδόν το 50% των CRCs ασθενή του σταδίου ΙΙ και οι οποίοι έχουν καλύτερα αποτελέσματα επιβίωσης [3, 5]. Οι ημερομηνίες συλλογής για CRCs μας σε ομάδες μας μπορεί να έχουν ασύμμετρη το στάδιο, καθώς και τον αριθμό των ατόμων που λαμβάνουν επικουρική θεραπεία 5-FU. Είμαστε μόνο σε σύγκριση με τους ασθενείς EMAST εναντίον μη EMAST CRC, και δεν συνδυάζουν ασθενείς MSI-L CRC με τους ασθενείς EMAST CRC και άλλες μελέτες [25]. Πράγματι, η ανάλυση των ασθενών EMAST έναντι μη EMAST CRC και μόνο, χωρίς οι ασθενείς MSI-L CRC, δεν παρουσιάζουν διαφορές επιβίωσης [25]. Τέλος, εξετάσαμε τη συνολική επιβίωση σε σύγκριση με υποτροπή επιβίωση χωρίς [25]. Αν και EMAST εν μέρει συσχετίζεται με το στάδιο TNM [21], αλλά δεν έχει ειδικά συσχετιστεί με φλεβική, περινευρική, ή λεμφικό εισβολή, αυτό συσχετίζεται και έχει υψηλότερη συχνότητα με πρόοδο μέσω της εξέλιξης μορφολογία αδένωμα-to-καρκίνωμα, και ελκωτική καρκινώματα [22, 31]. Πραγματοποιήσαμε επίσης την ανάλυσή μας των ασθενών με EMAST CRCs χωρίς την επιρροή των ασθενών με MSI-H CRCs, που όλοι τους έχουν καλύτερη επιβίωση σε σύγκριση με ασθενείς με μη-MSI-H CRCs [12, 13], ακόμη και χωρίς τη χρήση του 5-FU θεραπείας.

Ένας περιορισμός της παρατήρησης μελέτης μας είναι ότι δεν ήμασταν σε θέση να καθορίσει χωρίς υποτροπή ή για συγκεκριμένες ασθένειες επιβίωσης λόγω της έλλειψης πλήρους ενημέρωσης για αυτή τη συνδυασμένη ομάδα. Ωστόσο, είμαστε σίγουροι σε σύγκριση EMAST έναντι μη EMAST μας για τη συνολική επιβίωση, όπως η δοκιμή στρωμάτωσης log-rank επιβεβαιώνει καμία διαφορά στην έκβαση έλεγχο για 5-FU κατάσταση θεραπείας (Πίνακας Β S1 File), καθώς και μια εναλλακτική μήκος της επιβίωσης ανάλυση δείχνει ομοιότητες κατανομή μεταξύ EMAST και μη EMAST ομάδες (Εικ. Β S1 αρχείου).

Εν κατακλείδι, το στάδιο II /III ασθενείς με EMAST CRCs ανταποκριθεί εξίσου καλά με ανοσοενισχυτικό 5-FU χημειοθεραπεία με τη βελτίωση στη συνολική επιβίωση τους, όπως κάνουν οι ασθενείς με όγκους μη EMAST. Αυτό ήταν ένα σημαντικό ζήτημα για να εξετάσουν πως θα μπορούσε να αλλάξει την προσέγγιση για την επικουρική χημειοθεραπεία για το 60% των ασθενών με CRC. Αυτό έρχεται σε αντίθεση με τους ασθενείς με MSI-H ΚΕΣ των οποίων οι όγκοι έχουν αναποτελεσματική hMutSα και hMutSβ ή hMutLα συμπλέγματα και οι οποίοι δεν βελτιώνει την επιβίωση τους με επικουρική θεραπεία 5-FU [14-19]. Η παρουσία του ανέπαφη τη λειτουργία hMutSα (μαζί με τη λειτουργία hMutLα) σε EMAST CRCs φαίνεται να είναι επαρκής για να συμβάλει προς μια βελτιωμένη συνολική έκβαση για τους ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με ανοσοενισχυτικό 5-FU.

Υποστήριξη Πληροφορίες

S1 αρχείου. Κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών CRC διαχωρίζονται με βάση την κατάσταση EMAST, συμπεριλαμβανομένων των ασθενών MSI-H (Πίνακας Α).

Στρωματοποιημένη δοκιμασία log-rank για τη σύγκριση EMAST και την κατάσταση της 5-FU (Πίνακας Β). Kaplan-Meier για τις σωρευτικές συνολική επιβίωση σε ασθενείς διαχωρίζονται από το καθεστώς EMAST (Εικ. Α). Εναλλακτικές οικόπεδα επιβίωσης για EMAST και μη EMAST ασθενείς

doi (Σχήμα Β.):. 10.1371 /journal.pone.0127591.s001

(PDF)