Αφηρημένο

Η ανώμαλη έκφραση καδερίνων και κατενίνες διαδραματίζει καίριο ρόλο στην ανάπτυξη καρκίνου των ωοθηκών και της εξέλιξης. Πλακοσφαιρίνη (PG, γ-κατενίνη) είναι ένα παράλογο του β-κατενίνης με διπλή κολλητική και τις λειτουργίες σηματοδότησης. Ενώ β-κατενίνης έχει γνωρίσει ογκογόνο λειτουργία, PG δρα γενικά ως καταστολέας όγκου /μεταστάσεως. Πρόσφατα έδειξε ότι PG αλληλεπίδρασε με ρ53 και ότι η λειτουργία του αναστολής αύξησης /μετάσταση μπορεί να προκαλείται από αυτήν την αλληλεπίδραση. Πολύ λίγα είναι γνωστά για το ρόλο της PG στον καρκίνο των ωοθηκών. Εδώ, ερευνήσαμε το

in vitro

όγκου /μετάσταση αποτελέσματα καταστολέα της PG σε κυτταρικές σειρές καρκίνου των ωοθηκών με μεταλλαγμένο p53 έκφραση και διαφορετικά προφίλ cadherin. Δείξαμε ότι το Ν-καντερίνης που εκφράζουν και Ε-καδερίνης και 2-ES κύτταρα με ανεπάρκεια PG ήταν άκρως μεταναστευτικών και επεμβατική, ενώ OV-90 κύτταρα που εκφράζουν Ε-καδερίνης, PG και πολύ λίγο /καθόλου N-cadherin δεν ήταν. Η εξωγενής έκφραση του PG ή Ε-καδερίνης ή Ν-καδερίνης knockdown σε ES-2 κύτταρα (ES-2-Ε-cad, ES-2-PG και ES-2-SHN-CAD) μείωσε σημαντικά τη μετανάστευση και εισβολή τους. Επίσης, η έκφραση ΡΟ ή Ν-καντερίνης knockdown μειώθηκε σημαντικά ES-2 ανάπτυξη κυττάρων. Περαιτέρω, PG αλληλεπιδράσει με τα δύο καντερινών και με άγριου τύπου και μεταλλαγμένα ρ53 σε φυσιολογικά ωοθηκών και κυτταρικές γραμμές ES-2-PG, αντίστοιχα

Παράθεση:. Alaee Μ, Danesh G, Pasdar Μ (2016) πλακοσφαιρίνη Μειώνει το

in vitro

ανάπτυξη, τη μετανάστευση και την εισβολή του καρκίνου των ωοθηκών κύτταρα που εκφράζουν Ν-καδχερίνη και Mutant p53. PLoS ONE 11 (5): e0154323. doi: 10.1371 /journal.pone.0154323

Επιμέλεια: Zhiqian Zhang, το Πανεπιστήμιο του Πεκίνου Αντικαρκινικό Νοσοκομείο & amp? Ινστιτούτο, ΚΙΝΑ

Ελήφθη: 9 Δεκεμβρίου του 2015? Αποδεκτές: 12 του Απρίλη του 2016? Δημοσιεύθηκε: 4η Μαΐου, 2016

Copyright: © 2016 Alaee et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. το έργο αυτό χρηματοδοτήθηκε από την καναδική μαστού Ίδρυμα Καρκίνου, λιβάδια /NWT (MP, λειτουργίας)? Ίδρυμα Αλμπέρτα του Καρκίνου (MA, απόφοιτος υποτροφίας)? Γυναίκες & amp? Παιδική Υγεία Research Institute (GD, Καλοκαίρι studentship)

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς δηλώνουν δεν ανταγωνιστικών συμφερόντων

Εισαγωγή

Ο καρκίνος των ωοθηκών (OVCA), η πέμπτη πιο διαδεδομένη. καρκίνο στις γυναίκες είναι η κύρια αιτία όλων των θανάτων γυναικών από καρκίνο του αναπαραγωγικού σε όλο τον κόσμο, με συνολικό ποσοστό πενταετούς επιβίωσης των ~ 45% [1]. Η κύρια μορφή του OVCA είναι το επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (EOC), η οποία αντιπροσωπεύει το ~ 80% όλων των νεοπλασμάτων των ωοθηκών [2]. EOCs ταξινομούνται σε τύπου Ι και τύπου II [3]. όγκοι τύπου Ι είναι γενετικά σταθερός, αργή ανάπτυξη, και να έχουν σχετικά καλή κλινική έκβαση. Ωστόσο, η πλειοψηφία των OVCA είναι τύπου II. Πάνω από το 90% των όγκων αυτών λιμάνι ρ53 μεταλλάξεις, είναι γενετικά ασταθής, εξαιρετικά επιθετική και έχουν κακή κλινική έκβαση [4-6].

Οι TP53

μεταλλάξεις που πιστεύεται ότι είναι μια πρώιμη εκδήλωση κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης των όγκων τύπου ΙΙ και να συμβάλει τόσο στην μεταστατική εξέλιξη και χημειοαντίσταση [7-12]. p53 είναι ένας παράγοντας μεταγραφής και ογκοκατασταλτικά που παίζει ουσιαστικό ρόλο στη ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, επιβίωσης, γήρανση, την απόπτωση και το μεταβολισμό [13]. Σε απάντηση στο στρες, p53 ενεργοποιεί απάντηση βλάβη του DNA, τη σύλληψη του κυτταρικού κύκλου και κυτταρικό θάνατο [14,15]. Διαφορετικές μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις και αλληλεπιδράσεων πρωτεΐνης-πρωτεΐνης ρυθμίζουν σταθερότητα p53 και των λειτουργιών [16]. Έχουμε εντοπίσει πλακοσφαιρίνης (PG, γ-κατενίνης) ως νέου αλληλεπιδρούν συνεργάτης τόσο του άγριου τύπου (WT) και μεταλλαγμένου p53 (mp53) [17,18].

πλακοσφαιρίνη είναι ένα μέλος της οικογένειας Armadillo της πρωτεΐνες και ένα παράλογο του β-κατενίνης [19,20]. Σε αντίθεση, β-κατενίνης, η οποία μόνο συνεργάτες με ενώσεις προσφύσεως και διαθέτει γνωστά ογκογόνο λειτουργίες, PG είναι ένας όγκος /πρωτεΐνη καταστολέα μετάστασης και συμμετέχει στο σχηματισμό και των δύο ενώσεων προσφύσεως και δεσμοσώματα [19,21]. PG μπορεί να προσδώσει ανασταλτικά αποτελέσματα αύξησης /μετάσταση μέσω αλληλεπιδράσεων με καδερίνων και επαγωγή της αναστολής επαφής της ανάπτυξης [19]. Επιπλέον, μπορεί να αλληλεπιδρά με έναν αριθμό ενδοκυτταρικών εταίρων συμπεριλαμβανομένων παραγόντων μεταγραφής [17-19,22-27]. Έχουμε δείξει ότι η PG αλληλεπιδρά με ρ53 και όγκου /μεταστάσεως καταστολέας λειτουργία της μπορεί, τουλάχιστον εν μέρει, μεσολαβείται από αυτήν την αλληλεπίδραση [17,18].

Ένας αριθμός μελετών έχουν δείξει ότι η απώλεια του cadherin- κατενίνης συγκρότημα και ενεργοποίηση των ογκογόνων λειτουργία β-κατενίνης παίζουν καθοριστικό ρόλο στην τοπική εισβολή των κυττάρων των ωοθηκών των όγκων και την επακόλουθη μετάσταση [28-31]. Επιπλέον, η απώλεια ετεροζυγωτίας του γονιδίου PG (JUP) έχει αναφερθεί σε σποραδικές OVCAs [32]. Ωστόσο, πολύ λίγα είναι γνωστά σχετικά με το ρόλο της PG στο OVCAs. Σε αυτή τη μελέτη, αξιολογήσαμε τις πιθανές λειτουργίες του όγκου /μεταστάσεως καταστολέα των πεπτιδογλυκανών στο OVCAs, χρησιμοποιώντας τις συνήθεις ωοθηκών κυτταρική γραμμή IOSE-364 και OVCA κυτταρικές σειρές OV-90 (PG και Ε-καδερίνης θετικό, mp53 εκφράζοντας), ES-2 ( PG και Ε-καδερίνη αρνητικό, Ν-cadherin θετικών και mp53 εκφράζουν), ES-2-PG (ES-2 μορφομετατροπείς που εκφράζουν PG), ES-2-Ε-CAD (ES-2 μορφομετατροπείς που εκφράζουν Ε-καδερίνης) και ES- 2-SHN-CAD (κύτταρα ES-2 στο οποίο Ν-cadherin έχει χτυπηθεί κάτω). Εξετάσαμε PG επίπεδα, εντοπισμός και τις αλληλεπιδράσεις με Ε- και Ν-καδερίνης και ρ53 και αξιολόγησε την ανάπτυξη, μεταναστευτικών και επεμβατική ιδιότητες διαφόρων κυτταρικών σειρών. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το PG αλληλεπίδρασε με τα δύο καντερινών και ρ53. Η εξωγενής έκφραση της Ε-καδερίνης ή PG ή knockdown του Ν-cadherin μείωσε σημαντικά την μετανάστευση και εισβολή των κυττάρων ES-2. Επιπλέον, η έκφραση ΡΟ και Ν-καδερίνης knockdown αλλά η έκφραση δεν Ε-καδερίνης μείωσε σημαντικά ανάπτυξη ES-2 κύτταρα.

Υλικά και Μέθοδοι

Κυτταρικές σειρές και συνθήκες καλλιέργειας

IOSE -364 (εφεξής IOSE) αναπτύχθηκαν σε ένα 1: 1 Μ199 και MCDB M105 μέσων συν 5% FBS και 1% PSK (πενικιλίνη, στρεπτομυκίνη, καναμυκίνη). OV90 κύτταρα διατηρήθηκαν στα ίδια μέσα Μ199 και MCDB M105 συν 15% FBS και 1% PSK. ES κύτταρα-2 αναπτύχθηκαν σε μέσα McCoy 5Α συμπληρωμένο με 10% FBS και 1% PSK. ES-2-Ε-CAD και τα κύτταρα ES-2-PG αναπτύχθηκαν σε ES-2 μέσα που περιέχουν 400 μg /ml (επιλογή) ή 200 μg /ml (συντήρηση) G418. ES-2-shNcad μυρμήγκια επιμόλυνση καλλιεργήθηκαν σε ES-2 μέσο με 1 μg /ml (επιλογή) ή 0,5 μg /ml (συντήρηση) πουρομυκίνη.

Η επιμόλυνση

Τα πλασμίδια που κωδικοποιούν Ε-καδερίνης και οι PG έχουν περιγραφεί [33, 34]. Καλλιέργειες κυττάρων ES-2 σε πιάτα 60 ή 100 mm επιμολύνθηκαν σε 50-75% συρροή με 10-25μg του DNA με τη χρήση φωσφορικού ασβεστίου. Είκοσι ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα ξεπλύθηκαν με PBS και αφέθηκαν να αναρρώσουν για 24 ώρες σε πλήρες μέσο ανάπτυξης. Για να επιλέξετε σταθερά επιμολυσμένα, 72 ώρες μετά την επιμόλυνση, μέσα που περιέχουν 400 μg /ml G418 (ES-2- PG και ES-2- μορφομετατροπείς Ε-CAD) προστέθηκαν στα κύτταρα και ανθεκτικές αποικίες επιλέγονται για 3-4 εβδομάδες. Ανθεκτικοί κλώνοι διατηρήθηκαν σε 200 μg /ml G418 και διαλογή για έκφραση PG και Ε-καδερίνης με προσδιορισμούς ανοσοφθορισμού και ανοσοκηλιδώσεως.

N-cadherin knockdown

Ανθρώπινο Ν-cadherin βραδέος shRNA πλασμίδιο [35 ] χρησιμοποιήθηκε για να διαμολύνει κύτταρα Φοίνιξ-αμφο χρησιμοποιώντας φωσφορικό ασβέστιο. Λεντοϊών σωματίδια συλλέγονται στις 48 και 72 ώρες μετά την επιμόλυνση συνενώθηκαν και διηθήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα δεσμευτικό 0.45μm χαμηλή σε πρωτεΐνες φίλτρο. Λεντοϊών σωματίδια δεν χρησιμοποιήθηκαν για την μεταγωγή κυττάρων ES-2, παρουσία 8μg /ml polyberene (Santa Cruz, Canada). Πουρομυκίνη ανθεκτικές σταθερές κυτταρικές σειρές που εκφράζουν το Ν-cadherin Τα siRNAs (ES-2-SHN-CAD) απομονώθηκαν και τα επίπεδα Ν-καντερίνης αξιολογούνται με ανοσοστύπωμα και ανοσοφθορισμό.

Ανάλυση ανοσοκηλιδώσεως

Συρρέοντα 100 πλάκες καλλιέργειας mm ξεπλύθηκαν με ψυχρό PBS και solubalized σε ρυθμιστικό δείγματος SDS (10 mM Tris-HCl ρΗ 6,8, 2% (w /v) SDS, 50 mM διθειοθρεϊτόλη, 2 mM EDTA, 0.5 mM PMSF, 1 mM NaF, 1 mM Na

3νο

4). Ίσες ποσότητες ολικού κυτταρικού πρωτεΐνες διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης (Biorad, Καναδάς). Οι μεμβράνες επωάστηκαν σε συγκεκριμένες πρωτογενή αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 °

C ακολουθούμενη από τις κατάλληλες δευτερεύοντα αντισώματα σε θερμοκρασία δωματίου (Πίνακας 1). Μεμβράνες σαρώθηκαν χρησιμοποιώντας ένα σύστημα υπέρυθρης απεικόνισης Οδύσσεια CLX.

Η

ανοσοφθορισμού

καλλιέργειες κυττάρων Συρρέουσες καθορίστηκαν με γυάλινες καλυπτρίδες και ξεπλένονται με κρύο PBS που περιέχει 1 mM το καθένα από NaF, Na

3νο

4 και CaCl

2. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με 3,7% φορμαλδεΰδη για 20 λεπτά και εκχυλίζεται με ρυθμιστικό CSK (50mM NaCl, 300 mM σακχαρόζη, 10 mM PIPES ρΗ 6.8, 3 mM MgCl

2, 0,5% Triton Χ-100, 1,2 mM PMSF, και 1 mg /ml DNase και RNase? [17]) για 10 λεπτά. Καλυπτρίδες αποκλείστηκαν με 4,0% ορό κατσίκας και 50mM NH

4Cl

4 σε PBS που περιέχει 0.2% BSA για 1 ώρα. Οι καλυπτρίδες στη συνέχεια επωάστηκαν στους ειδικούς πρωτογενή αντισώματα για 1 ώρα που ακολουθείται από τους δευτερογενή αντισώματα για 30 λεπτά σε συγκεντρώσεις που υποδεικνύονται στον Πίνακα 1. Οι πυρήνες βάφτηκαν αντίθετα με DAPI (1: 2000). Οι καλυπτρίδες τοποθετήθηκαν σε ΕΙνβηοΙ που περιέχει 0.2% (w /v) παραφαινυλενίου διαμίνη (PPD) και προβολές χρησιμοποιώντας ένα 63x αντικειμενικό φακό ενός μικροσκοπίου Zeiss συνεστιακού.

Ανοσοκαταβύθιση

Οι καλλιέργειες αναπτύχθηκαν σε συρροή σε 100 πιάτα mm και ξεπλένεται με ψυχρό PBS που περιέχει 1 mM NaF, Na

3νο

4 και CaCl

2. Τα κύτταρα εκχυλίσθηκαν σε 1 ml ρυθμιστικού λύσης (50 mM Tris-HCl ρΗ 7.5, 150mM NaCl, 1% ΝΡ-40, 0.5% δεοξυχολικό νάτριο, 0.7 μg /ml πεπστατίνη, 1 mM Na

3νο

4, 1 mM NaF, και κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης) για 20 λεπτά σε ένα ταλαντωτή στους 4 ° C. Τα κύτταρα ξύστηκαν και φυγοκεντρήθηκαν στα 48000xg για 10 λεπτά. Τα υπερκείμενα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για ανοσοκαθίζηση με ρ53 και αντισώματα ΡΟ (Πίνακας 1) και 40 μΙ αγαρόζης πρωτεΐνης G (Thermo Fisher Scientific, Canada) χάντρες τη διάρκεια της νύχτας σε ένα ταλαντωτή-στροφικού στους 4 ° C. Τα δείγματα στην συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν στα 14000xg για 2 λεπτά, τα σφαιρίδια απομακρύνθηκαν και τα υπερκείμενα υποβάλλονται σε επεξεργασία για δεύτερη ανοσοκατακρήμνισης για 3 ώρες. Χάντρες από τους δύο ανοσοκαταβυθίσεις συνενώθηκαν και πλύθηκαν τρεις φορές με το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης. Τα ανοσοσύμπλοκα διαλύθηκαν σε 60 μΐ ρυθμιστικού διαλύματος SDS δείγματος, διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE και υποβάλλονται σε επεξεργασία για ανοσοστυπώματος όπως περιγράφεται παραπάνω.

Ανάπτυξη, τη μετανάστευση και την εισβολή

δοκιμασία

Για δοκιμασία ανάπτυξης in vitro, 3×10

4 κύτταρα από ES-2, ES-2-Ε-cad, ES-2-PG και ES-2-SHN-CAD κύτταρα τοποθετήθηκαν σε 24 φρεατίων πλάκα. Σε 1, 3, 5 και 7 ημέρες μετά την επίστρωση, οι καλλιέργειες θρυψινοποιήθηκαν και μετρήθηκαν τα κύτταρα. Κάθε χρονικό σημείο παριστά το μέσο όρο τριών ανεξάρτητων πειραμάτων.

Για δοκιμασίες κυτταρικής μετανάστευσης, 2 × 10

5 κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 0.5 ml μέσου χωρίς ορό και τοποθετήθηκαν στον ανώτερο θάλαμο του παρεμβλημάτων Transwell (3 μm πόρων, 6,5 χιλιοστά διάμετρος? BD Biosciences, CA, USA). Κανονική μέσα που περιέχουν 10% FBS προστέθηκε στον κάτω θάλαμο και οι καλλιέργειες επωάστηκαν για 16 ώρες στους 37 ° C. Ένθετα στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε νέα τρυβλία και ξεπλένονται με PBS για την απομάκρυνση μη-προσκολλημένα κύτταρα. Εισάγει σταθεροποιήθηκαν με 3,7% φορμαλδεΰδη (σε PBS) για 2 λεπτά, διαπερατά με 100% μεθανόλη για 20 λεπτά και χρωματίστηκαν με χρώση Giemsa για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά τη χρώση, οι μεμβράνες δει κάτω από ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο χρησιμοποιώντας ένα 20x αντικειμενικό φακό και φωτογραφήθηκαν.

Για προσδιορισμούς εισβολής Matrigel, τα κύτταρα στερήθηκαν τροφής εντός μέσου χωρίς ορό για 24 ώρες πριν από τη δοκιμασία. Για κάθε κυτταρική γραμμή, 5 × 10

4 κύτταρα σε 0,2 ml μέσου χωρίς ορό καλλιεργήθηκαν στο επάνω διαμέρισμα του Matrigel επικαλυμμένων θάλαμοι εισβολής (8 μm πόρου μεμβράνης PETE? BD Biosciences). Ινοβλαστών ρυθμισμένα μέσα (0,8 ml) προστέθηκε στους θαλάμους πυθμένα και τα τρυβλία επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 37 ° C. Μετά από 16 ώρες, οι μεμβράνες ανακτήθηκαν και επεξεργασία όπως περιγράφεται για τη δοκιμασία μετανάστευσης. Τοποθετημένος μεμβράνες δει κάτω από 20x αντικειμενικό φακό του ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο και φωτογραφήθηκε.

Οι μετανάστευσαν /εισέβαλαν κύτταρα μετρήθηκαν σε 5 τυχαία πεδία για κάθε μεμβράνη με τη χρήση ImageJ πρόγραμμα Μετρητής κυττάρων. Αριθμοί για κάθε κυτταρική σειρά υπολογίστηκαν κατά μέσο όρο και ομαλοποιήθηκε ως προς εκείνες της κανονικής κυτταρικής γραμμής ή γονικό μη επιμολυσμένα κύτταρα και τα ιστογράμματα κατασκευάζεται. Ιστογράμματα αντιπροσωπεύουν το μέσο όρο τουλάχιστον 3 ανεξάρτητες δοκιμασίες για κάθε κυτταρική σειρά.

Στατιστική ανάλυση

Οι τιμές παρουσιάζονται ως μέσοι όροι ± SD. Οι στατιστικές διαφορές μεταξύ των ομάδων εκτιμήθηκαν με t-tests Student.

P

-τιμή & lt?. 0.05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

Πρωτεΐνη έκφραση των δεικτών των επιθηλιακών και μεσεγχυματικών και p53 σε διάφορες OVCA κυτταρικές σειρές

Πρωτεΐνη έκφραση της Ε-καδερίνης, Ν-cadherin, πλακοσφαιρίνης, κυτοκερατίνες, βιμεντίνη και ρ53 σε IOSE, ES-2 και OV-90 κύτταρα ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση ανοσοστυπώματος (Σχήμα 1). κύτταρα IOSE είχε πολύ μικρή, αν υπάρχει, Ε-καδερίνη και εξέφρασε Ν-καδερίνης και PG. Αυτά τα κύτταρα εξέφρασαν επίσης κερατίνες, βιμεντίνη και p53. Αυτές οι παρατηρήσεις ήταν σύμφωνες με προηγούμενα ευρήματα δείχνουν ότι τα φυσιολογικά κύτταρα ΟΣΕ εμφανίζεται τόσο δείκτες επιθηλιακής και μεσεγχυματικής [36]. Σε αντίθεση, OV-90 κύτταρα που εκφράζουν mp53 [37] δεν είχαν ανιχνεύσιμη Ν-καδερίνης, τα χαμηλά επίπεδα της βιμεντίνης και τα υψηλά επίπεδα των επιθηλιακών δεικτών συμπεριλαμβανομένης Ε-καδερίνης, PG και κυτοκερατίνες. κύτταρα ES-2, οι οποίες εκφράζουν επίσης mp53 [38, 39], εμφανίζεται μια πιο μεσεγχυματικά φαινότυπο, έλειπε Ε-καδερίνης και PG και εκφράζονται Ν-cadherin, βιμεντίνη και πολύ χαμηλά επίπεδα κυτοκερατίνες.

Συνολική κυτταρολύματα από IOSE-364, ES-2 και OV-90 κύτταρα σε επεξεργασία για ανάλυση ανοσοκηλίδος χρησιμοποιώντας Ν-cadherin, E-cadherin, πλακοσφαιρίνης, βιμεντίνη, κυτοκερατίνη και αντισώματα ρ53. Ίσες φορτώσεις επιβεβαιώθηκαν με την επεξεργασία των ίδιων προϊόντων λύσης με αντισώματα ακτίνης.

Η

Επίπεδα και εντοπισμός του Ε-καδερίνης, Ν-καδερίνης και της πλακοσφαιρίνης σε φυσιολογικά και καρκίνωμα ωοθηκών κυτταρικές σειρές

υποκυτταρική κατανομή και το δυναμικό συν-εντοπισμό του Ε- /N-cadherin με PG εξετάστηκαν από διπλή χρώση ανοσοφθορισμού (Σχήμα 2). Σε κύτταρα IOSE, σύμφωνα με τα αποτελέσματα ανοσοαποτυπώματος, τα επίπεδα Ε-καδερίνης ήταν μη ανιχνεύσιμες ενώ η Ν-καντερίνης και PG εκφράστηκαν σε υψηλά επίπεδα και συν-διανέμεται στη μεμβράνη (Εικόνα 2, IOSE). Σε OV-90 κύτταρα, τα υψηλά επίπεδα της Ε-καδερίνης και PG ήταν παρόντες και οι colocalized στη μεμβράνη. Μπορούμε επίσης να ανιχνεύονται σχεδόν διανέμεται μικρά μπαλώματα του Ν-cadherin θετικά κύτταρα στο OV-90 πολιτισμούς. Σε αυτά τα επιθέματα, Ν-καδερίνης colocalized με PG (Σχήμα 2, OV-90). Σε κύτταρα ES-2, δεν υπήρχε ανιχνεύσιμη Ε-καδερίνης ή PG, ενώ εξέφρασαν υψηλά επίπεδα του Ν-καδερίνης, η οποία διανέμεται σε όλο το κυτόπλασμα (Σχήμα 2, ES-2). Συνεπής με την απουσία του PG και κόλλας διασταυρώσεις, τα κύτταρα ES-2 εμφάνισαν σημαντικά μικρότερη κύτταρο-προς-κύτταρο επαφή και η μορφολογία τους ήταν σαφώς διαφορετική από IOSE και OV-90 κύτταρα.

IOSE-364, ES-2 και OV-90 κύτταρα αναπτύχθηκαν επί καλυπτρίδων και υποβάλλονται σε επεξεργασία για χρώση διπλό ανοσοφθορισμό. Ε-καδερίνη (Ε-cad, κόκκινο) ή Ν-καντερίνη (Ν-cad, κόκκινο) και η πλακοσφαιρίνη (PG, πράσινο) αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν σε συγκεντρώσεις που υποδεικνύονται στον Πίνακα 1. Οι πυρήνες βάφτηκαν με DAPI (μπλε). Bar, 25 μm.

Η

Η απουσία Ε-καδερίνης και της έκφρασης PG και η παρουσία του Ν-καντερίνης συνεισφέρει στις μεταναστευτικές και επεμβατική ιδιότητες των κυττάρων ES-2

Προηγουμένως, έχουμε δείξει ότι η έκφραση του PG σε κύτταρα PG-ανεπαρκή καρκίνωμα που στερούνται Ε-καδερίνης και εκφράζουν Ν-καντερίνης μειώνει τους

in vitro

ανάπτυξη, τη μετανάστευση και εισβολή [33, 34]. Να εξετάσει κατά πόσον PG είχε παρόμοια αποτελέσματα με OVCA κύτταρα, εξετάσαμε πρώτα τα μετανάστευση και την εισβολή ιδιότητες των IOSE, OV-90 και ES-2 κύτταρα. Στη συνέχεια, θα εξωγενώς εξέφρασε E-cadherin ή PG ή χτυπηθεί κάτω N-cadherin σε αυτά τα κύτταρα και να αξιολογηθούν οι αλλαγές στην ανάπτυξη, τη μετανάστευση και την εισβολή τους. Όπως απεικονίζεται στο Σχήμα 3Α, OV-90 κύτταρα έδειξαν σημαντικά χαμηλότερα μετανάστευση και εισβολή σε σχέση με IOSE κύτταρα (8,4% και 0,4%, αντίστοιχα). Σε αντίθεση με τα κύτταρα ES-2 ήταν σημαντικά πιο μεταναστευτικών και επεμβατικές σε σύγκριση με IOSE κύτταρα (138% και 196,4%, αντίστοιχα).

(Α) Μετανάστευση (αριστερά) και εισβολή (Δεξιά) του IOSE-364, OV -90, ES-2 κύτταρα. Οι καλλιέργειες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για in vitro δοκιμασίες μετανάστευσης και εισβολής όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Ο αριθμός των μετανάστευσαν /εισέβαλαν κυττάρων κανονικοποιήθηκε με εκείνα των κυττάρων IOSE-364. (Β) Έκφραση Ε-καδερίνης, Ν-καδερίνης και της πλακοσφαιρίνης σε ES-2 μορφομετατροπείς που εκφράζουν Ε-καδερίνης (ES-2-Ε-CAD) ή πλακοσφαιρίνη (ES-2-PG) ή Ν-καντερίνης Τα siRNAs (ES-2 -shN-cad). Σταθερά επιμολυσμένα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για ανοσοκηλίδωση χρησιμοποιώντας Ε-καδερίνης, πλακοσφαιρίνης και αντισώματα Ν-καδερίνης. Για να επιβεβαιώσετε ίσα φορτία, τα ίδια κυτταρολύματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ακτίνη αντισώματα. (Γ) υποκυτταρική κατανομή και συνεντόπισης Ε-καδερίνης, Ν-καδερίνης και της πλακοσφαιρίνης σε ES-2- E-cad, ES-2-PG και μορφομετατροπείς ES-2-SHN-cad. Σταθερά επιμολυσμένα καθορίστηκαν σε καλυπτρίδες και επεξεργάστηκαν για διπλό ανοσοφθορισμό με Ε-καδερίνης (Ε-cad, κόκκινο) ή Ν-καντερίνη (Ν-cad, κόκκινο) και η πλακοσφαιρίνη (PG, πράσινο) αντισώματα. Οι πυρήνες βάφτηκαν με DAPI (μπλε). Bar, 25 μm.

Η

Η εξωγενής έκφραση της Ε-καδερίνης και PG και σταθερή knockdown του Ν-καδερίνης σε ES-2 μορφομετατροπείς επιβεβαιώθηκε χρησιμοποιώντας ανοσοκηλίδας (Σχ 3Β) και αναλύσεις ανοσοφθορισμού (Σχ 3C). Στο ES-2-Ε-CAD κύτταρα (Σχ 3Β και 3C, ES-2-ECAD), Ε-καδερίνη εκφράζεται και κυρίως εντοπισμένη στην μεμβράνη, αν και ανιχνεύθηκε επίσης στο κυτόπλασμα των μορφομετατροπέων. Είναι ενδιαφέρον ότι, η έκφραση ΡΟ σε ES-2-PG κύτταρα (Σχ 3Β και 3C, ES2-PG) οδήγησε στην προς τα πάνω ρύθμιση του ενδογενούς Ε-καδερίνης. Σε αυτά τα κύτταρα, το εξωγενώς εκφράζεται PG colocalized τόσο με Ν-καντερίνης και της Ε-καδερίνης (Εικ 3Β και 3C, ES2-PG). Ν-cadherin knockdown μείωσε τα επίπεδα της ενδογενούς Ν-καντερίνης (& gt? 90%). Η χρώση αυτών των καλλιεργειών με αντισώματα Ν-καντερίνης ανιχνεύονται περιστασιακά κύτταρα που είχαν μόλις χρωματίστηκαν (σχήμα 3Β και 3C, ES2-SHN-cad).

Αξιολόγηση της μετανάστευσης και της εισβολής των ES-2 μορφομετατροπείς έδειξαν σημαντική μείωση τόσο τη μετανάστευση και την εισβολή του ES-2-ECAD και τα κύτταρα ES-2-PG σε σχέση με τη γονική ES-2 κύτταρα (Σχ 4Α, 4Β και 4D). έκφραση Ε-καδερίνης σε κύτταρα ES-2 μειώνεται μετανάστευση και εισβολή αυτών των κυττάρων κατά 39% και 42%, αντίστοιχα. έκφραση PG σε κύτταρα ES-2 μειώθηκαν μετανάστευση και εισβολή κατά 58% και 44%, αντίστοιχα. Η επίδραση της Ν-καντερίνης knockdown για τη μετανάστευση ήταν παρόμοια με εκείνη της έκφρασης PG, δηλαδή μείωση κατά 65% ενώ η εισβολή των κυττάρων ES-2-SHN-CAD ήταν σημαντικά μικρότερη από εκείνη του ES-2-Ε-CAD και ES -2-PG κύτταρα (μείωση 68%) (Σχ 4Α, 4Β και 4D).

IOSE-364, OV-90, ES-2 και ES-2 μορφομετατροπείς (ES-2-Ε-cad, ES-2-PG, ES-2-SHN-CAD) υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για τη μετανάστευση (Α) και την εισβολή (Β) δοκιμασίες όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Ο αριθμός των μετανάστευσαν /εισέβαλαν κυττάρων κανονικοποιήθηκε με εκείνα των κυττάρων IOSE-364. (C) Επαναληπτικές καλλιέργειες ES-2 κύτταρα και ES-2 επιμολύνσεων (E-cad, PG και SHN-CAD) απλώθηκαν σε μονό κύτταρο (3×10

4) πυκνότητα. Οι καλλιέργειες μετρήθηκαν την ημέρα 1, 3, 5 και 7. Κάθε χρονικό σημείο είναι ο μέσος όρος τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. (Δ) Περίληψη των αλλαγών στην ανάπτυξη, τη μετανάστευση και την εισβολή του ES-2 μορφομετατροπείς. Οι επιμολύνσεις τιμές ομαλοποιήθηκαν σε κύτταρα ES-2.

σ

αξίες, * & lt? 0,05, ** & lt? 0.001.

Η

Συγκρίναμε επίσης την ανάπτυξη των κυττάρων ES-2 με εκείνες των ES-2-Ε-cad, ES-2-PG και ES-2-SHN-CAD μορφομετατροπείς (Σχ 4C και 4D). Κατά την ημέρα 7, τα κύτταρα ES-2-Ε-CAD έδειξε παρόμοια ρυθμό ανάπτυξης να ES-2 κύτταρα ενώ ES-2-PG και ES-2-SHN-CAD κύτταρα έδειξαν σημαντικά μικρότερη ανάπτυξη από τα κύτταρα ES-2 (21% και 25 % μείωση, αντίστοιχα, (Εικόνα 4C και 4D). Ωστόσο, ενώ τα κύτταρα ES-2-SHN-CAD έδειξαν μειωμένη ανάπτυξη σε όλη την 7 ημέρες, ES-2-PG καλλιέργειες έδειξαν μειωμένο αριθμό κυττάρων μετά την ημέρα 5, πιθανό να οφείλεται στην επαγωγή της αναστολής επαφής κατά συρροή καλλιέργειας (Σχήμα 4C).

Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υπέδειξαν ότι η έκφραση της Ε-καδερίνης ή PG ή knockdown του Ν-καντερίνης μείωσε αποτελεσματικά τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων ES-2. Ωστόσο, μόνο έκφραση PG ή Ν-καντερίνης knockdown μείωσε σημαντικά την ανάπτυξη αυτών των κυττάρων.

Αλληλεπίδραση πλακοσφαιρίνη και ρ53 σε φυσιολογικά και ωοθήκης κυτταρικές γραμμές καρκινώματος

Έχουμε δείξει ότι PG αλληλεπίδρασε με τόσο WT και mp53 σε διάφορες κυτταρικές γραμμές καρκινώματος και οι δύο συνδέονται με προαγωγούς από έναν αριθμό γονιδίων στόχων p53 [17, 18, 40] αλληλεπιδράσεις. PG με mp53 που εκφράζουν κύτταρα καρκινώματος οδήγησε σε μειωμένη ανάπτυξη, τη μετανάστευση και εισβολή αυτών των κυττάρων. Για το σκοπό αυτό, εξετάσαμε αν PG συνδέονται με ρ53 σε OVCA κύτταρα. Σύνολο κυτταρικό εκχύλισμα του IOSE, ES-2 και ES-2-ΡΟ κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για την αμοιβαία Συνανοσοκατακρήμνιση (συν-ΙΡ) και ανοσοκηλίδωση με αντισώματα PG και ρ53 (Πίνακας 1). Σε κύτταρα IOSE PG αντισώματα συγκαθίζησης ρ53 και PG (Σχήμα 5). Οι αμοιβαίες συν-IP αντισωμάτων χρησιμοποιώντας p53 συγκαθίζησης PG, περαιτέρω επικύρωση της αλληλεπίδρασης μεταξύ των PG και ρ53 σε αυτά τα κύτταρα. Στα κύτταρα ES-2 που εκφράζει εξωγενή PG και ενδογενών mp53, PG αντισώματα συνκατακρημνιστούν p53 και PG. Στην αμοιβαία συν-IP των κυττάρων ES-2-PG, αντισώματα ρ53 μειωθεί τόσο PG και ρ53 (Σχήμα 5). Σε αντίθεση, στα κύτταρα ES-2 χωρίς έκφραση PG, αντισώματα ρ53 καταβυθίστηκε ρ53 μόνο (Σχήμα 5). ανοσοκαταβυθίσεις ελέγχου με p53 και αντισώματα προάνοση PG δεν εντόπισε ούτε πρωτεΐνη στα συνολικά κυτταρολύματα (σχήμα 5Β).

Ίσες ποσότητες των συνολικών κυτταρικών εκχυλισμάτων (TCE) από IOSE-364, ES-2 και ES-2 -PG κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για την αμοιβαία και διαδοχική ανοσοκαταβύθιση (ΙΡ) και ανοσοκηλίδωση (ΙΒ) με τη χρήση της ρ53 και αντισώματα πλακοσφαιρίνη (Α) ή προ-άνοσο αντισώματα (Β) όπως περιγράφεται στο Υλικά και Μέθοδοι. Τα ίδια προϊόντα λύσης υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με αντισώματα ακτίνης για να επιβεβαιώσετε την ίση φορτίσεις. PG, πλακοσφαιρίνης? Pi, προ-ανοσοποιητικό.

Η

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη, για πρώτη φορά, ερευνήσαμε το

in vitro

όγκου /μετάσταση αποτελέσματα καταστολέα της PG στο ΕΓΚ κυτταρικές σειρές με την έκφραση mp53 και διαφορετικά προφίλ cadherin. Δείξαμε ότι ES-2 κύτταρα που εκφράζουν Ν-cadherin και είναι ελλιπής σε E-cadherin και PG ήταν άκρως μεταναστευτικών και επεμβατική. Σε αντίθεση, OV-90 κύτταρα που εκφράζουν αμφότερα τα Ε-καδερίνης και PG και πολύ λίγο Ν-καντερίνης δεν ήταν μεταναστευτικών ή επεμβατική. Η εξωγενής έκφραση του PG ή Ε-καδερίνης ή knockdown του Ν-καντερίνης σε κύτταρα ES-2 μείωσε σημαντικά τη μετανάστευση και εισβολή τους. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι η PG colocalized τόσο με Ε-καδερίνης και Ν-καδερίνης σε συγκροτήματα συγκόλλησης. Σύμφωνα με αυτές τις παρατηρήσεις, ανιχνεύσαμε σημαντική μείωση ES-2-PG και ES-2-SHN-CAD ανάπτυξης σε σχέση με ES-2 και ES-2-Ε-cad κύτταρα. Περαιτέρω, PG αλληλεπίδρασε με WT ρ53 σε κύτταρα IOSE και mp53 σε ES-2-PG επιμολύνσεις.

καντερίνη μεταγωγή από Ε- προς Ν-καντερίνη είναι ένα κρίσιμο βήμα στην επιθηλιακή προς μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) μεσολάβηση κακοήθειες [41, 42]. EMT οδηγεί στην διασταύρωση αποσυναρμολόγηση κυττάρου-κυττάρου, απώλεια της κυτταρικής πολικότητας και κέρδος των μεταναστευτικών και επεμβατική ιδιότητες [30, 43, 44]. Ενώ E-cadherin είναι ένα επιθηλιακό δείκτη και ένα γνωστό καταστολέα όγκου, Ν-καντερίνης είναι ένας δείκτης μεσεγχυματικά και η έκφρασή της σχετίζεται με μια πιο μεταναστευτικών και επεμβατική φαινότυπο [44, 45]. Φυσιολογικά επιθηλιακά κύτταρα της επιφάνειας των ωοθηκών (ΟΣΕ) εκφράζουν έναν συνδυασμό των επιθηλιακών και μεσεγχυματικών δεικτών. Αυτά τα κύτταρα δεν έχουν Ε-καδερίνης αλλά εκφράζουν Ν-καδερίνης, κατενίνες, βιμεντίνη και κυτοκερατίνες [36, 46-50]. Σε συμφωνία με αυτές τις αναφορές, τα κύτταρα IOSE εξέφρασε Ν-cadherin και βιμεντίνης, καθώς και κατενίνες συμπεριλαμβανομένων PG, και κερατίνες. Ο ακριβής ρόλος του διακόπτη /N-cadherin Ε- στην έναρξη και την πρόοδο των ωοθηκικών καρκινωμάτων δεν είναι πολύ σαφής αφού και οι δύο καντερίνες μπορεί να εκφραστεί σε όγκους των ωοθηκών διαφόρων προελεύσεων και σε διαφορετικά στάδια [51, 52]. Ωστόσο, ενώ μερικές μελέτες δείχνουν ότι η E-cadherin απορυθμίζεται σε OVCA συλλογές [52, 53], η μεγάλη πλειοψηφία δείχνουν ότι η απώλεια ή μειωμένα επίπεδα της E-cadherin συμβάλει στη μετάβαση από καλοήθη σε οριακά ωοθηκών βλάβες, με ελάχιστα διαφοροποιημένο όγκους των ωοθηκών, και στην τοπική εισβολή και μετάσταση [28, 47, 54-58]. Συνεπής με τις δραστηριότητες ογκοκατασταλτικό Ε-καδερίνης, προς τα κάτω ρύθμιση /έλλειψη έκφρασης Ε-καδερίνης, λόγω των υψηλών επιπέδων μεταγραφικοί καταστολείς του σαλιγκαριού, Twist και Zeb-2 έχει συσχετιστεί με τα μεταναστευτικά και επεμβατική ιδιότητες των ES-2 και άλλων OVCA κύτταρα [59-71]. Επιπλέον, η Ε-καντερίνη καταστέλλει την ανάπτυξη και μετάσταση μέσω αναστολής της τυροσίνης του υποδοχέα σηματοδότηση κινάσης και ΡΙ3Κ /Akt οδών [72, 73]. Σε συμφωνία με αυτές τις μελέτες, δείξαμε ότι τα κύτταρα ES-2-Ε-CAD είχαν σημαντικά χαμηλότερα μετανάστευση και εισβολή (39% και 42%, αντίστοιχα) σε σύγκριση με τα κύτταρα ES-2.

Αν και Ν-cadherin είναι που εκφράζεται σε κανονικά ΟΣΕ, η έκφραση της είναι γενικά σχετίζεται με αυξημένη μετανάστευση και εισβολή του OVCA [74-76]. Τα επίπεδα Ν-καντερίνης έχουν δειχθεί ότι είναι αυξημένα σε κυτταρικές σειρές που εκφράζουν σαλιγκάρι και Zeb-1, καθώς και σε ασθενείς με υψηλότερο βαθμό του όγκου και της μετάστασης ΦΥΓΩ [51, 64, 77]. Η εξωγενής έκφραση του MUC4 σε κύτταρα SKOV3 οδήγησε στην αρνητική ρύθμιση της Ε-καδερίνης, προς τα πάνω ρύθμιση του Ν-καντερίνης και αυξημένη κινητικότητα. Ν-cadherin knockdown σε αυτά τα κύτταρα μειώνεται MUC4 επάγεται κινητικότητα, ταυτόχρονα με μειωμένη δραστικότητα ERK1 /2, ΑΚΤ και ΜΜΡ9 [78]. Υποστηρίζοντας αυτές τις μελέτες, ένα επιλεκτικό αντίσωμα αντι-Ν-cadherin (Exherin, ADH-1) δείχθηκε πρόσφατα ότι είναι αποτελεσματικό στην σταθεροποίηση των εξέλιξης της νόσου σε δύο OVCA ασθενείς σε ένα μικρό φάση Ι κλινική μελέτη, η οποία αξιολόγησε ασθενείς με διάφορους συμπαγείς όγκους [79 ]. Εδώ, δείξαμε ότι σε σχέση με το ES-2 κύτταρα, το μετανάστευση και εισβολή του ES-2-SHN-CAD μορφομετατροπείς μειώθηκαν κατά 65% και 68%, αντίστοιχα. Επιπλέον, να χτυπήσει κάτω Ν-καδερίνης ήταν πολύ πιο αποτελεσματικό στη μείωση της μετανάστευσης και της εισβολής από την έκφραση Ε-καδερίνης σε κύτταρα ES-2. Ομοίως, ενώ η έκφραση Ε-καδερίνης είχε πολύ μικρή επίδραση (5%) στη μείωση της ανάπτυξης, η έκφραση ΡΟ ή Ν-καντερίνης knockdown σημαντικά μειωμένη ES-2 κύτταρα αύξηση (20%, 25%, αντίστοιχα).

Σε αντίθεση καντερίνες, πολύ λίγα είναι γνωστά σχετικά με το ρόλο της PG στο OVCA. PG έχει δειχθεί ότι έχουν ανασταλτική λειτουργία αύξησης /μετάστασης, και τα δύο

in vitro

και

in vivo

[19]. Αυτή η λειτουργία του PG μπορεί να προκληθεί με τη σταθεροποίηση /απομόνωσης Ν-καντερίνης και επαγωγή της αναστολής επαφής της ανάπτυξης ή /και αλληλεπιδρούν με διαφορετικές κυτταρικές πρωτεΐνες συμπεριλαμβανομένων παραγόντων μεταγραφής [17-19, 27,34,40,80-82]. Εδώ, η εξωγενής έκφραση του PG μείωσε σημαντικά τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων ES-2 (58% και 44% αντίστοιχα). Η επίδραση της PG για την αναστολή της μετανάστευσης ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη του Ε-καδερίνης. Δεδομένου ότι η έκφραση ΡΟ είναι απαραίτητη για το σχηματισμό και των δύο ενώσεις προσφύσεως και δεσμοσώματα [19,33], αυτό μπορεί να υποδεικνύει ότι το PG μειωμένη μετανάστευση μέσω σύνδεσης με Ν-cadherin και σχηματισμός κόμβων, καθώς και την αλληλεπίδραση με παράγοντες μεταγραφής και ρύθμισης της γονιδιακής έκφρασης. Αλληλεπίδραση PG με αρκετούς παράγοντες μεταγραφής όπως TCF /LEF, CBP, SOX4 και ρ53 έχει αναφερθεί προηγουμένως [17, 22-26, 81]. Έχουμε δείξει ότι η PG αλληλεπίδρασε με mp53 σε διάφορες κυτταρικές γραμμές καρκινώματος και οι δύο συνδέονται με προαγωγούς από έναν αριθμό γονιδίων στόχων p53 συμπεριλαμβανομένων καταστολείς όγκων

SFN

(14-3-3s) και

NME1

και το ογκογόνο διοργανωτής γονιδίωμα

SATB1

. Επιπλέον, αυτές οι ενώσεις ήταν ταυτόχρονη με μειωμένη ανάπτυξη, τη μετανάστευση και την εισβολή [17,18]. PG ρυθμίζεται επίσης την έκφραση ΕΑΒ-1 και μειωμένη μετανάστευση με τρόπο που εξαρτάται από το ρ53 στα κύτταρα NSCLC [27]. Εδώ, δείξαμε ότι PG αλληλεπίδρασε με WT ρ53 σε κύτταρα IOSE και με mp53 σε ES-2-PG κύτταρα. p53 ρυθμίζει την έκφραση των δεικτών EMT, όπως Twist, σαλιγκάρι και γυμνοσάλιαγκα [82-86]. Διαπιστώσαμε χαμηλά επίπεδα Ε-καδερίνης σε κύτταρα ES-2-PG κατά την έκφραση PG. Είτε αυτή η έκφραση Ε-καδερίνης οφείλεται στην αρνητική ρύθμιση του Ε-καδερίνης μεταγραφικοί καταστολείς μέσω αλληλεπίδρασης PG-p53 ή σταθεροποίηση της πρωτεΐνης Ε-καδερίνης μέσω της αλληλεπίδρασής της με PG warrants περαιτέρω μελέτες.

Εν συντομία, αυτή είναι η πρώτη απόδειξη του ρόλου της PG σε OVCA κύτταρα. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι η εξωγενής έκφραση του PG ή knockdown του Ν-καδερίνης ήταν πιο αποτελεσματική από την έκφραση της Ε-καδερίνης στην αναστολή της ανάπτυξης, μεταναστευτικών και επεμβατική ιδιότητες των κυττάρων ES-2. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η έκφραση PG απορροφάται όγκου /μετάσταση προώθηση δραστηριοτήτων της Ν-cadherin. Η επαγωγή της έκφρασης Ε-καδερίνης σε κύτταρα ES-2 που εκφράζει εξωγενή PG, η οποία αλληλεπιδρά με το ενδογενές mp53, αυξάνει την πιθανότητα ότι η PG μπορεί επίσης να εμπλέκεται στη ρύθμιση των γονιδίων στόχων του ρ53 εμπλέκονται στη μετανάστευση και εισβολή. Συλλογικά, τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι το PG μπορεί να δρα ως καταστολέας όγκων /μετάσταση σε OVCA, όπως έχει αποδειχθεί για άλλους καρκίνους. Η μεγαλύτερη επίπτωση των μελετών μας είναι η δυνατότητα της PG ως θεραπευτικό στόχο για την πλειοψηφία των OVCAs με την έκφραση mp53 και Ν-cadherin.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε την Καναδική ωοθηκικού ιστού Τράπεζας κατά τη BC Cancer Agency του για την παροχή IOSE-364 κύτταρα. Η δουλειά μας υποστηρίζεται από την καναδική Καρκίνου του Μαστού Ίδρυμα λιβάδια /NWT κεφάλαιο (MP) και από την υποτροφία του καρκίνου Αλμπέρτα Ίδρυμα Μεταπτυχιακό (MA). GD υποστηρίχθηκε από ένα καλοκαίρι studentship από τις γυναίκες και τα παιδιά του Ινστιτούτου Ερευνών Υγείας (WCHRI).