Αφηρημένο

Ιστορικό

Αυτή η μελέτη είχε ως στόχο να κατανοήσουν το ρόλο της μυελοειδούς συστάδες κυττάρων στο μη εμπλεκόμενο περιφερειακό λεμφαδένες από τα πρώτα στάδια του μη μικροκυτταρικού ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα.

μέθοδοι

Αμέτοχοι περιφερειακές ενότητες λεμφαδένων από 67 ασθενείς με σταδίου Ι-ΙΙΙ εκτομή μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα είχαν ανοσοχρωματίστηκε για τον εντοπισμό μυελοειδή clusters, δραστηριότητα STAT3 και απόκρυφη μετάσταση. Ανθράκωση ένταση, μυελοειδή σύμπλεγμα διείσδυση που σχετίζονται με ανθράκωση και το επίπεδο pSTAT3 βαθμολογήθηκαν και συσχετίστηκε με την επιβίωση των ασθενών. ανάλυση παλινδρόμησης Η πολυπαραγοντική Cox εκτελέστηκε με προγνωστικές μεταβλητές. Ανθρώπινα μακροφάγα χρησιμοποιήθηκαν για

in vitro

θεραπεία νικοτίνης.

Αποτελέσματα

CD68

+ μυελοειδή συμπλέγματα που συνδέονται με την ανθράκωση και με ένα ανοσοκατασταλτικό και φαινότυπο μετάσταση-προώθηση και αυξημένα συνολική δραστηριότητα STAT3 παρατηρήθηκαν σε αμέτοχη λεμφαδένες. Σε ασθενείς με ιστορικό καπνίσματος, μυελοειδή βαθμολογία σύμπλεγμα συσχετίζεται σημαντικά με την ανθράκωση ένταση και το επίπεδο pSTAT3 (P & lt? 0,01). Η νικοτίνη ενεργοποιημένη STAT3 σε μακροφάγα σε μακροχρόνια καλλιέργεια. CD68

+ μυελοειδή clusters συσχετίζονται και colocalized με απόκρυφη μετάσταση. Μυελοειδή βαθμολογία cluster ήταν ένα ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντα (p = 0,049) και συσχετίστηκε με την επιβίωση από την εκτίμηση κατά Kaplan-Maier σε ασθενείς με ιστορικό καπνίσματος (P = 0,055). Ο συνδυασμός της μυελοειδούς βαθμολογίας σύμπλεγμα είτε με λεμφαδένες στάδιο κόμβο ή το επίπεδο pSTAT3 ορίζονται δύο πληθυσμούς με σημαντική διαφορά στην επιβίωση (P = 0.024 και P = 0,004, αντίστοιχα).

Συμπεράσματα

Μυελοειδής clusters διευκολύνει την προ-μεταστατική μικροπεριβάλλον στο αμέτοχος περιφερειακούς λεμφαδένες και να συνδεθούν με απόκρυφη μετάσταση σε πρώιμο στάδιο μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. Μυελοειδή σκορ σύμπλεγμα είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την επιβίωση σε ασθενείς με ιστορικό καπνίσματος, και μπορεί να παρουσιάσει μια νέα μέθοδο για να ενημερώσετε τις επιλογές θεραπείας στην επικουρική θεραπεία. Περαιτέρω μελέτες επικύρωσης δικαιολογείται

Παράθεση:. Zhang W, Pal SK, Liu Χ, Yang C, Allahabadi S, Bhanji S, et al. (2013) Μυελογενής Clusters σχετίζονται με Pro-Μεταστατικό το Περιβάλλον και την κακή πρόγνωση σε σχετιζόμενες με το κάπνισμα Early Stage μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 8 (5): e65121. doi: 10.1371 /journal.pone.0065121

Επιμέλεια: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanità, Ιταλία

Ελήφθη: 14 Φλεβάρη 2013? Αποδεκτές: 22 Απριλίου, 2013? Δημοσιεύθηκε: May 24, 2013

Copyright: © 2013 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Έρευνας αναφερθεί σε αυτή τη δημοσίευση υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας υπό τον αριθμό επιχορήγησης P30CA033572. Το περιεχόμενο είναι αποκλειστική ευθύνη των συγγραφέων και δεν αντιπροσωπεύουν απαραίτητα τις επίσημες απόψεις των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

καρκίνο εισαγωγή

του πνεύμονα είναι η πιο συχνή αιτία θανάτου από καρκίνο στις Ηνωμένες Πολιτείες. [1] Παρά τους μειωμένους συντελεστές του καπνίσματος, ο καπνός του τσιγάρου είναι ακόμα ο κύριος παράγοντας κινδύνου που συνδέεται με τον καρκίνο του πνεύμονα. [2] ο καπνός του τσιγάρου περιέχει χιλιάδες των χημικών ουσιών, περίπου 70 από τα οποία είναι γνωστοί καρκινογόνοι παράγοντες. [3] ανθράκωση, η οποία είναι η εναπόθεση του μαύρου ύλης σκόνης, έχει βρεθεί σε πνεύμονες και λεμφαδένες (LNs) εκείνων με ιστορικό καπνίσματος. [4] η έκθεση σε καπνό επάγει μεταλλαξογένεση που οδηγεί στην ανάπτυξη του καρκίνου του πνεύμονα, και συνέχισε το κάπνισμα προκαλεί αυξημένη θνησιμότητα και υποτροπή σε αρχικό στάδιο της νόσου. [5] Αν και θεραπείες είναι διαθέσιμες για την θεραπεία του μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα (NSCLC), οι περισσότεροι ασθενείς αναπτύσσουν υποτροπή λόγω της εξαιρετικά επεμβατική και μεταστατική ικανότητα του. Οι νέες στρατηγικές που απαιτούνται για την έγκαιρη πρόβλεψη των μικρομεταστατικών νόσου και διεισδυτική ικανότητα του NSCLC.

Εντός μικροπεριβάλλον του όγκου, κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος να παράγουν ανοσοκατασταλτικούς παράγοντες, όπως η ιντερλευκίνη (IL) -6, IL-10, αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού -β και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF), με αποτέλεσμα αναποτελεσματική κατά του όγκου ανοσοαποκρίσεων και την προώθηση της ανάπτυξης του όγκου, της αγγειογένεσης και εισβολή. [6], [7], [8], [9], [10] Η μικροπεριβάλλον κακοηθειών, συμπεριλαμβανομένων NSCLC μετατρέπει μυελοειδή κύτταρα, τα οποία είναι απαραίτητα τόσο για την έμφυτη και προσαρμοστική ανοσία, σε ανοσοκατασταλτικά κύτταρα που διευκολύνουν το ανοσοποιητικό φοροδιαφυγής. [6], [11], [12], [13] ιδρυτική ενεργοποίηση του μετατροπέα σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής 3 (STAT3) σε μυελοειδή κύτταρα είναι ζωτικής σημασίας για την ανάπτυξη της ανοσοκαταστολής σε πρωτογενείς όγκους και μικροπεριβάλλον τους. [7], [9], [14]

Η σημασία των μυελοειδών κυττάρων έχει περιγραφεί στο conditioning προ- μεταστατικού ιστού για το μέλλον σπορά των μεταστατικών κυττάρων του όγκου. [15], [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22], [23] Σε ορισμένα μοντέλα όγκων , διεισδύοντας μυελοειδή κύτταρα σε προ-μεταστατικό συστάδες μορφής ιστού, τα οποία είναι το λεγόμενο «προ-μεταστατικό κόγχες.» [16], [19], [20] σε μια πρόσφατη έκθεση, ο υποδοχέας σφιγγοσίνης-1-φωσφορικής 1 (S1PR1 ) -STAT3 άξονας σηματοδότηση σε μυελοειδή κύτταρα δείχθηκε ότι είναι κρίσιμης σημασίας για την μυελοειδή κυτταρική αποικιοποίηση σε προ-μεταστατικές θέσεις, την προώθηση της μετάστασης. [24] Η συσχέτιση μεταξύ διείσδυση του μυελοειδούς σύμπλοκα κυττάρων σε προ-μεταστατικές θέσεις και πρόγνωση του ασθενούς δεν έχει περιγραφεί προηγουμένως . Υποθέσαμε ότι διείσδυση των μυελοειδών κυττάρων και αυξημένα δραστηριότητα STAT3 εντός προ-μεταστατικό ιστό από ασθενείς με NSCLC θα μπορούσε να προβλέψει την έκβαση των ασθενών μετά από χειρουργική εκτομή. Οι περιφερειακές LNs συνήθως εισβάλλει από τα κύτταρα NSCLC στη διαδικασία της μετάστασης. Μελετήσαμε αμέτοχος περιφερειακό LNs από ασθενείς με χειρουργήσιμο ΜΜΚΠ να καθοριστεί η σχέση μεταξύ μυελοειδή συστάδες κυττάρων, την ενεργοποίηση της STAT3 και την πρόγνωση των ασθενών.

Υλικά και Μέθοδοι

Κλινικά δείγματα

δείγματα ασθενών συλλέχθηκαν σύμφωνα με το City of Hope συμβουλίου θεσμικής αναθεώρησης (IRB # 10062) και τον ασθενή λήφθηκε γραπτή συγκατάθεση. Αμέτοχη λεμφαδένα ιστού συλλέχθηκαν από 67 ασθενείς με παθολογικά επαληθεύεται διάγνωση NSCLC οι οποίοι υποβλήθηκαν είτε μεσοθωρακίου δειγματοληψία λεμφαδένων ή πλήρη λεμφαδενεκτομή και βρέθηκαν να έχουν παθολογικά αποφασισμένη νόσο N0, ή νόσο Ν1-Ν3. Οι ασθενείς είχαν τουλάχιστον 1 λεμφαδένων χαρακτηρίζεται ως αμέτοχος με όγκο, με τις διαθέσιμες ενσωματωμένες σε παραφίνη ιστού. Ένα αμέτοχος μπλοκ ιστού λεμφαδένα από κάθε ειδική ασθενούς ελήφθη και τέσσερις-μm τομές παρασκευάζονται για τις επόμενες αναλύσεις. Σταδιοποίηση προσδιορίστηκε από την αμερικανική μεικτής επιτροπής σχετικά με τις κατευθυντήριες γραμμές του καρκίνου, 7

ου έκδοση. [25] Τα δημογραφικά στοιχεία των ασθενών και κλινικά χαρακτηριστικά παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Κανονική LN τμήματα από 4 άτομα χωρίς καρκίνο αγοράστηκαν από Abcam, Imgenex και GeneTex, και όλα τα ηθικά και εξετάζεται και διαγνώστηκε με άδεια παθολόγους.

η

η ανοσοϊστοχημεία (IHC)

Ενότητες επωάστηκαν με αντισώματα έναντι CD68 (Abd Serotec, κλώνος 514H12, 1:50) , pY705-STAT3 (Cell Signaling, κλώνος D3A7, δύο παρα δέκα), CD33 (Leica, κλώνος PWS44, 1:200), CD163 (Abd Serotec, κλώνος EDHu-1, 1:200), IL-6 (Abcam, 1 :400), IL-10 (Serotec Abd, κλώνος JES3-12G8, 1:100), VEGF-A (Abcam, κλώνος VG-1, 1:200), μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας 9 (MMP-9, Cell Signaling, 1: 100), τον παράγοντα που προέρχεται από κύτταρα στρωματικά 1 /χημειοκίνης (CXC μοτίβο) συνδέτη 12 (SDF-1 /CXCL12, R &? D, κλώνος 79018, 1:100), λέμφωμα Β-κυττάρου-πολύ μεγάλο (Bcl-xL, κυτταρική σηματοδότηση , κλώνος 54H6, 1:200) ή παν-κυτοκερατίνη (παν-CK, eBioscience, κλωνοποιήσουν AE1 /AE3 [26], [27], 1:1000) όλη τη νύκτα στους 4 ° C. ABC ελίτ κιτ και 3,3′-Διαμινοβενζιδίνη (Vector Labs) χρησιμοποιήθηκαν σύμφωνα με τις προδιαγραφές. Οι εικόνες που έχουν ληφθεί με Nikon Eclipse TE2000-U μικροσκόπιο. Ο ποσοτικός προσδιορισμός πραγματοποιήθηκε με Image Pro Plus.

Ανοσοφθορισμός και συνεστιακή μικροσκοπία

Μετά την ανάκτηση αντιγόνου, οι τομές δεσμεύτηκαν με Image-iT FX Signal Enhancer (Invitrogen) που ακολουθείται από 10% ορό κατσίκας και επωάζονται με πρωτεύοντα αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C. Κυτταρικής ινωδονεκτίνης (CFN) αντίσωμα ήταν από Abcam. Τα πλακίδια στη συνέχεια ανιχνεύθηκαν είτε με δευτερογενές αντίσωμα επισημασμένο με φθοροφόρο ή βιοτινυλιωμένο δευτερογενές αντίσωμα που ακολουθείται από επισημασμένο με φθοροφόρο στρεπταβιδίνη. Εικόνες συλλήφθηκαν με Zeiss LSM 510 όρθια ομοεστιακό μικροσκόπιο.

μέθοδος βαθμολόγησης και η ανίχνευση των απόκρυφων μετάστασης

Διαφάνειες αξιολογήθηκαν κάτω από το μικροσκόπιο από δύο ανεξάρτητους παρατηρητές (WZ και CY) χωρίς τη γνώση των ασθενών «κλινικά στοιχεία. HE-χρωματισμένες τομές εξετάσθηκαν σε όλη υπό μεγέθυνση 100Χ να στείλει ανθράκωση ένταση επί ενός ακεραίου κλίμακα που κυμαίνεται από 1 ΤΟ3 ως εξής: 1, μικρό ανθρακωτική χρωστική διάσπαρτα στα κύτταρα και εμφανίστηκε νεφελώδες? 2, χρωστική άνθρακα εμφανίστηκε στερεά, αλλά διάσπαρτα (όχι ομάδες)? 3, παρατηρήθηκε συστάδες περισσότερο από περίπου 50 κύτταρα με στερεό χρωστική άνθρακα. Αντιπροσωπευτικές εικόνες παρουσιάζονται στο Σχ. 1. Για μυελοειδή αξιολόγηση διείσδυση συμπλέγματος, IHC διαφάνειες χρώση για CD68 εξετάστηκαν κάτω από μεγέθυνση 40x σε ολόκληρο το τμήματα και σκόραρε σε έναν ακέραιο κλίμακα 1-3 ως εξής: 1, μυελοειδή περιοχή του συμπλέγματος ήταν μικρότερο από το 5% του συνόλου της περιοχής του ιστού ? 2, μυελοειδή περιοχή σύμπλεγμα ήταν μεταξύ 5% και 50% του συνόλου της περιοχής LN ιστού? 3, μυελοειδή περιοχή σύμπλεγμα ήταν μεγαλύτερη από 50% της συνολικής έκτασης του ιστού LN (Εικ. 1). Συνολικό επίπεδο pSTAT3 βαθμολογήθηκε ως το ποσοστό των pSTAT3

+ κυττάρων σε 10 τυχαία πεδία κάτω από 100x μεγέθυνση (Εικ. 1). δραστηριότητα STAT3 σε μυελοειδή κύτταρα που συνδέονται με την ανθράκωση βαθμολογήθηκε σε μία κλίμακα ακέραιος αριθμός από 1 έως 3 σε 10 τυχαία πεδία υπό μεγέθυνση 200χ: 1, λιγότερο από 5% των κυττάρων ήταν ανθρακωτική pSTAT3

+? 2, 5% -50% ήταν pSTAT3

+? 3, πάνω από το 50% ήταν pSTAT3

+ (Εικ. 1). Σε περίπτωση διαφωνίας σχετικά με την ένταση ανθράκωση, μυελοειδή διείσδυση διασποράς και μυελοειδή κυτταρικό επίπεδο pSTAT3, οι τομές επαναξιολογούνται από τους δύο παρατηρητές μαζί και η τελική απόφαση ελήφθη. Σε περίπτωση διαφωνίας σχετικά με το συνολικό επίπεδο pSTAT3, η μέση αξία υπολογίστηκε ως το τελικό σκορ.

HE χρώση και χρώση IHC για CD68 ή pSTAT3 δείχνει αντιπροσωπευτικά εικόνες για τη βαθμολόγηση των ανθράκωση ένταση, ανθρακωτική μυελοειδή διείσδυση συμπλέγματος, η συνολική δραστηριότητα STAT3 και ανθρακωτική μυελοειδή κυτταρική δραστηριότητα STAT3. Ο αριθμός στην επάνω αριστερή γωνία κάθε εικόνας δείχνει το σκορ. (Bar Κλίμακα, 200 μm)

Η

Για την προγνωστική αξιολόγηση, οι ασθενείς διαχωρίστηκαν μεταξύ τους σε χαμηλές και υψηλές ομάδες για κάθε δείκτη: ανθράκωση ένταση: 1 ή 2 = χαμηλή, 3 = υψηλή? μυελοειδή διείσδυση σύμπλεγμα που σχετίζεται με ανθράκωση: 1 ή 2 = χαμηλή? 3 = υψηλή? Συνολικά δραστηριότητα STAT3: λιγότερο από ή ίσο με 50% = χαμηλή, πάνω από το 50% = υψηλό? δραστηριότητα STAT3 σε μυελοειδή κύτταρα που συνδέονται με την ανθράκωση: 1 = χαμηλή, 2 ή 3 = υψηλή

Διαφάνειες χρώση για παν-CK χρησιμοποιώντας IHC αξιολογήθηκαν για την παρουσία της απόκρυφης μετάστασης κάτω από 100 × και 200 ​​× μεγέθυνση.. Απόκρυφη μεταστατικά κύτταρα NSCLC είναι σχετικά μεγάλα σε μέγεθος, με υψηλή περιεκτικότητα σε αναλογία πυρηνικά κυτταροπλασματική, και δείχνουν σαφή και εντατική δακτυλίου όπως κυτταροπλασματική σκούρο καφέ 3,3′-διαμινοβενζιδίνη-χρώση. [28]

Κυτταρική καλλιέργεια

ΤΗΡ-1 αποκτήθηκε από την American Type Culture Collection και διαφοροποιήθηκαν σε μακροφάγους με φορβόλη 12-μυριστική 13-οξική διέγερση. Ανθρώπινα μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος από υγιείς δότες απομονώθηκαν με Histopaque 1077 (Sigma). Τα μονοκύτταρα εμπλουτίζονται με EsaySep CD14 κιτ

+ επιλογής (StemCell Technologies) και διαφοροποιήθηκαν σε μακροφάγους με καλλιέργεια σε παρουσία 10 ng /παράγοντα διέγερσης αποικιών κοκκιοκυττάρων-μακροφάγων mL (PeproTech) για 6 ημέρες και ανάπαυσης για 1 ημέρα. Τα μακροφάγα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με νικοτίνη (Sigma-Aldrich) με ή χωρίς 1 μΜ AZD1480 (που παρέχεται από την AstraZeneca), για τον υποδεικνυόμενο χρόνο.

κηλίδωση Western

Ίσες ποσότητες πρωτεϊνών κυτταρολύματος που παρασκευάστηκε με RIPA ρυθμιστικό υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση πηκτής πολυακρυλαμιδίου θειικού δωδεκυλο νατρίου και ανοσοστυπώθηκαν με αντισώματα προς pY705-STAT3 (Cell Signaling), συνολικός STAT3 (Santa Cruz) και β-ακτίνη (GE Healthcare).

Στατιστική ανάλυση

ποσοτικοί θετική περιοχές χρώση IHC αναλύθηκαν με Μαθητή

t-test

. Ζεύγη συσχετισμοί μεταξύ των μετρήσεων εργαστηριακών βιοδείκτη αξιολογήθηκαν με συντελεστή βαθμό συσχέτισης του Spearman του. Καμπύλες κατά Kaplan-Meier δημιουργήθηκαν για να αξιολογήσουν τις διαφορές μεταξύ των καμπυλών επιβίωσης και P-τιμές με βάση την δοκιμασία log-rank παρουσιάστηκαν. Μετρήσεις κάθε βιοδεικτών ήταν ταιριάζει με μονοπαραγοντική μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου του Cox. Για να διερευνήσουν επιπλέον δύναμη πρόβλεψη πέρα ​​από τις κλινικές μεταβλητές, πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox εκτελέστηκε επίσης για την επιλογή μοντέλου μεταξύ στάδιο, κομβικό στάδιο, ανθράκωση ένταση, μυελοειδή συμπλέγματα που συνδέονται με την ανθράκωση, το συνολικό επίπεδο pSTAT3, μυελοειδή επίπεδο pSTAT3 συμπλέγματος και απόκρυφη μετάσταση. Ένα αποτέλεσμα θεωρήθηκε ότι είναι στατιστικά σημαντική όταν η αντίστοιχη τιμή Ρ & lt? 0,05 (*, Ρ & lt? 0,05? **, Ρ & lt? 0,01? ***, Ρ & lt? 0.001). Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του λογισμικού Ε.

Αποτελέσματα

Μυελογενής συστάδες είναι εμφανή και συνολική δραστηριότητα STAT3 δραματικά αυξημένα σε αμέτοχος NSCLC περιφερειακή λεμφαδένες

Σε σύγκριση με την κανονική LNs από άτομα χωρίς καρκίνο, εξέχοντα εναπόθεση χρωστικής άνθρακα, δηλαδή ανθράκωση, παρατηρήθηκε στο μη εμπλεκόμενο LNs από ασθενείς με NSCLC, όπως φαίνεται στο Σχ. 2Α. Χρώση ανοσοφθορισμού απέδειξαν τα ανθρακωτική κύτταρα CD68

+ μυελοειδή κύτταρα (Εικ. 2Α). Σε σύγκριση με αμέτοχος περιφερειακή LNs από καρκίνο του προστάτη, μελάνωμα ή ασθενείς με καρκίνο του μαστού (τα δεδομένα δεν δείχνονται), η παρουσία των μυελοειδών κυττάρων που σχετίζονται με ανθράκωση ήταν μοναδικό στο μη εμπλεκόμενο περιφερειακό LNs NSCLC. Με χρώση IHC, βρήκαμε ότι τα μυελοειδή κύτταρα που σχετίζονται με ανθράκωση συνήθως σχηματίζονται συμπλέγματα, η οποία δεν παρατηρήθηκε σε κανονικούς LNs (Εικ. 2Β). Αυξημένα συνολική δραστηριότητα STAT3 στο μη εμπλεκόμενο LNs από ασθενείς με NSCLC ανιχνεύθηκε επίσης με χρώση IHC για pY705-STAT3 (σχήμα 2Β).

(Α) HE χρώση των φυσιολογικών LNs από άτομα χωρίς καρκίνο (n = 4?. Αριστερά δύο πάνελ) και αμέτοχη περιφερειακές LNs από ασθενείς με NSCLC (μέση δύο πάνελ) δείχνει ανθρακωτική χρωστική άνθρακα (υποδεικνύονται με βέλη? bar Κλίμακα, 20 μm) σε LNs ασθενή. χρώση ανοσοφθορισμού για CD68 (δεξιά πλευρά) αποδεικνύοντας ανθρακωτική χρωστική ουσία είναι κατά CD68

+ κύτταρα (Σημειώστε τις μαύρες κουκίδες υποδεικνύεται με μικρά βέλη στο CD68

+ κύτταρα? bar Κλίμακα, 20 μm). (Β) IHC χρώση δείχνει εξέχουσα CD68

+ μυελοειδή συστάδες συνδέονται με ανθράκωση και άκρως ενεργοποιημένο STAT3 στο μη εμπλεκόμενο περιφερειακό LNs NSCLC (δεξιά πάνελ) σε σύγκριση με την κανονική LNs (n = 4? Αριστερό πάνελ) (bar Κλίμακα, 200 μm).

Η

Θετικές συσχετίσεις μεταξύ ανθράκωση ένταση, μυελοειδή διείσδυση του συμπλέγματος και το επίπεδο pSTAT3 σε ασθενείς με NSCLC με ιστορικό καπνίσματος

σε ασθενείς με ιστορικό καπνίσματος, ανθράκωση ένταση, μυελοειδή clusters που σχετίζονται με ανθράκωση, η συνολική δραστηριότητα STAT3 και ανθρακωτική μυελοειδή κυτταρική δραστηριότητα STAT3 δεν συσχετίστηκαν με την εξέλιξη της νόσου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Ωστόσο, CD68

+ μυελοειδή διείσδυση σύμπλεγμα συσχετίζεται θετικά με ανθράκωση ένταση και τη συνολική δραστηριότητα pSTAT3 (Εικ. 3Α). ενεργοποίηση STAT3 στο ανθρακωτική μυελοειδή συστάδες συνδέονται επίσης με την ανθράκωση ένταση (Εικ. 3Α). Αντίθετα, σε ασθενείς χωρίς ιστορικό καπνίσματος, ανθράκωση ανιχνεύθηκε αλλά συσχετίσεις μεταξύ STAT3 και ανθράκωση ή μυελοειδή συστάδες συνδέονται με ανθράκωση δεν βρέθηκαν (Σχ. 3Α). Έτσι, εστιάσαμε την έρευνά μας σχετικά με το ρόλο της μυελοειδούς clusters και STAT3 σε ασθενείς με ιστορικό καπνίσματος.

(Α) Σε ασθενείς με ιστορικό καπνίσματος, αλλά όχι σε εκείνους που δεν έχουν ιστορικό καπνίσματος, μυελοειδή συμπλέγματος διείσδυση που συνδέονται με την ανθράκωση συσχετίζεται με την ένταση ανθράκωση και τη συνολική δραστηριότητα STAT3? ανθράκωση συσχετίζεται με δραστηριότητα STAT3 σε μυελοειδή συστάδες που σχετίζονται με ανθράκωση. Η συσχέτιση προσδιορίστηκε με δοκιμή βαθμό συσχέτισης Spearman μη παραμετρική του. Εμφανίζονται είναι μέσα ± SEM, ** P & lt? 0,01, *** P & lt? 0.001. (Β) Η νικοτίνη ενεργοποιεί STAT3 σε ανθρώπινα μακροφάγα. Western blotting δείχνει pSTAT3 και συνολική έκφραση STAT3 σε ανθρώπινα ΤΗΡ-1 που προέρχεται από τα μακροφάγα και τα ανθρώπινα πρωτογενή μακροφάγα προερχόμενα από μονοκύτταρα μετά τη θεραπεία νικοτίνης με ή χωρίς AZD1480.

Η

Η νικοτίνη ενεργοποιεί STAT3 σε ανθρώπινα μακροφάγα

το κάπνισμα είναι μια από τις κύριες αιτίες της ανθράκωσης εντός πνευμονικού ιστού. [4], [29] Δεδομένου ότι η συσχέτιση μεταξύ της ανθράκωσης δραστηριότητα έντασης και της STAT3 παρατηρήθηκε μόνο σε ασθενείς με NSCLC με ιστορικό καπνίσματος, αξιολογήσαμε εάν η εθιστική συστατικό του καπνού του τσιγάρου, η νικοτίνη, ενεργοποιεί STAT3 σε ανθρώπινα μακροφάγα. Όπως φαίνεται στο Σχ. δραστηριότητα 3Β, STAT3 ανυψώθηκε στα δύο μονοκυτταρική κυτταρική γραμμή ΤΗΡ-1 που προέρχεται από τα μακροφάγα και πρωτογενή μακροφάγα που προέρχονται από μονοκύτταρα μετά την επεξεργασία της νικοτίνης για 2 ημέρες, και η ενεργοποίηση ήταν εντελώς καταργήθηκε από μία κινάση Janus (JAK) αναστολέα, AZD1480, που δείχνει την ενεργοποίηση είναι μέσω της JAK-STAT3 οδού.

Pro-καρκίνου και προ-μεταστατικό φαινότυπο μυελοειδούς clusters

Εμείς χαρακτηρίζεται το φαινότυπο των CD68

+ μυελοειδή συμπλέγματα που συνδέονται με την ανθράκωση στην αμέτοχος περιφερειακές LNs από NSCLC ασθενείς με ιστορικό καπνίσματος με IHC (Εικ. 4). Από ανθρακωτική χρωστική παραμένει στον ιστό κατά τη διάρκεια της ανοσοχρώσης, χρησιμεύει ως μια κυτταροπλασματική δείκτης για την μυελοειδή κύτταρα που συνδέονται με την ανθράκωση. Η έκφραση του CD33 επιβεβαίωσε αυτά τα κύτταρα ήταν από μυελοειδή linage (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Για να διερευνηθεί κατά πόσο οι μυελοειδή συστάδες είχαν M2-πολωμένο, εκτελέσαμε χρώση CD163 και τα σμήνη έδειξαν ισχυρή χρώση. Διερεύνηση της μυελοειδούς φαινοτύπου σύμπλεγμα έδειξε έκφραση της IL-6 και IL-10, οι οποίες είναι και οι δύο ανοσοκατασταλτικά παράγοντες. Η έκφραση του VEGF-A και ΜΜΡ-9 έδειξε ένα ρόλο στην αγγειογένεση και ιστο-αναδιαμόρφωση. VEGF-Α είναι επίσης γνωστό ότι αναστέλλει την ωρίμανση δενδριτικών κυττάρων. [30] Η ενεργοποίηση της STAT3 up-ρυθμίζει την έκφραση Bcl-xL σε μυελοειδή κύτταρα, [24] και μυελοειδή συστάδες έδειξε θετική χρώση για Bcl-XL. SDF-1 /CXCL12 έχει ένα ρόλο στην πρόσληψη NSCLC μέσω του /CXCL12-CXC τύπου υποδοχέα χημειοκινών SDF-1 4 άξονα, [31], [32] και χρώση IHC έδειξε ότι SDF-1 ήταν ιδιαίτερα εκφράζονται από μυελοειδή συστάδες. Όλα αυτά τα μόρια είναι STAT3 κατάντη ρυθμιζόμενα γονίδια. [7] Επιπλέον, η IL-6, IL-10 και VEGF-A είναι ενεργοποιητές STAT3. [7] Η στατιστική ανάλυση έδειξε σημαντική διαφορά στην έκφραση αυτών των μορίων μεταξύ μυελοειδή συστάδες συνδέονται με ανθράκωση και άλλες περιοχές εντός του LN.

IHC χρώση καταδεικνύει την έκφραση του CD163, IL-6, IL-10, VEGF-A, ΜΜΡ-9, SDF-1 και Bcl-xL από τα μυελοειδή κύτταρα που συνδέονται με ανθράκωση. Για κάθε πρωτεΐνη, επιλέχθηκαν αντιπροσωπευτικές εικόνες που δείχνουν θετικά και αρνητικά περιοχές χρώσης από τον ίδιο πλακίδιο. Η ποσοτικοποίηση εκτελέστηκε με ανάλυση τυχαίες εικόνες μυελοειδούς περιοχών σύμπλεγμα που σχετίζεται με ανθράκωση και άλλες περιοχές (10 εικόνων για κάθε ομάδα) από 10 ασθενείς. Δίπλευρη Μαθητή

t-test

χρησιμοποιήθηκε για τη στατιστική ανάλυση. Εμφανίζονται είναι μέσα ± SEM, *** P & lt? 0.001. (Bar Κλίμακα, 200 μm για 100 × 400 ×? 25 μm για 1600 ×)

Η

μυελοειδή clusters συσχετίζονται και εντοπισμό με την LN απόκρυφη μετάσταση

Η παρουσία της απόκρυφης μετάσταση LN έχει έχουν συνδεθεί με κακή πρόγνωση σε μια μεγάλη σειρά ασθενών με χειρουργήσιμο ΜΜΚΠ. [28] με την αξιολόγηση παν-CK, ανιχνεύσαμε απόκρυφη μεταστατικών καρκινικών κυττάρων στα LNs από τους 8 ασθενείς από τους 49 ασθενείς με ιστορικό καπνίσματος (Εικ. 5Α) . Είναι ενδιαφέρον ότι, η πλειοψηφία των ασθενών θετικών για απόκρυφες μετάσταση LN (7 από 8) έδειξαν αυξημένη συστάδες μυελοειδή συνδέονται με ανθράκωση στα αμέτοχος LNs (Εικ. 5Α). Η παρουσία της απόκρυφης μετάστασης LN συσχετίστηκε θετικά με μυελοειδή συμπλέγματα που συνδέονται με την ανθράκωση (P = 0,012, r = 0.350) και ανθράκωση ένταση (P = 0,032, r = 0,310). Επιπλέον, οι απόκρυφες μεταστατικά καρκινικά κύτταρα συνήθως ανιχνεύεται εντός ή πολύ κοντά σε συστάδες μυελοειδή κύτταρα που συνδέονται με την ανθράκωση (6 από τους 8? Η Εικ. 5Α (α-β)). Διπλή χρώση για παν-CK και CD68 επιβεβαίωσε την colocalization (Εικ. 5Β).

(Α) χρώση IHC δείχνει απόκρυφων μετάσταση σε «αμέτοχος» LNs (δύο πινάκια κορυφής) και μεταστατικά κύτταρα όγκου σε ένα εμπλεκόμενους LN ως ο θετικός έλεγχος (κάτω αριστερό πλαίσιο) (bar Κλίμακα, 50 μm). Το ραβδόγραμμα δείχνει τη συσχέτιση μεταξύ μυελοειδή διείσδυση σύμπλεγμα που σχετίζεται με ανθράκωση και την παρουσία της απόκρυφης μετάσταση (OM). Η τιμή Ρ προσδιορίστηκε με δοκιμή βαθμού συσχέτισης Spearman μη παραμετρική του. (Β) Ομοεστιακή εικόνες που δείχνουν την συνεντόπισης της παν-CK κύτταρα

+ NSCLC (βέλη) και CD68

+ μυελοειδή συμπλέγματα που συνδέονται με την ανθράκωση. (Bar Κλίμακα, 50 μm) (C) Ομοεστιακή εικόνες που δείχνουν την συνεντόπισης μυελοειδούς clusters που σχετίζονται με ανθράκωση (βέλη) και CFN. (Ράβδος κλίμακας, 50 μm)

Η

Έχει δειχθεί ότι η έκφραση CFN στην προ-μεταστατικό ιστός είναι αυξημένη και αυτό παίζει σημαντικό ρόλο στο σχηματισμό του προ-μεταστατικό μυελοειδή συσπειρώσεων. [16] Σε Επιπλέον, STAT3 ρυθμίζει την έκφραση CFN σε προ-μεταστατικούς μυελοειδή κύτταρα. [24] LN τομές χρωματίστηκαν για CFN και CD68 έδειξαν ότι CFN είναι colocalized με μικρές συστάδες μυελοειδή κύτταρα που συνδέονται με την ανθράκωση (Εικ. 5C), υποδεικνύοντας ένα πιθανό ρόλο των CFN στην πρόσληψη μυελοειδή κύτταρα και το σχηματισμό συμπλέγματος στον NSCLC περιφερειακές αμέτοχη LNs.

μυελοειδή συσπειρώσεις και το συνολικό επίπεδο pSTAT3 προβλέψουμε την πρόγνωση των ασθενών με NSCLC με ιστορικό καπνίσματος

αξιολογηθεί η προγνωστική αξία της ανθράκωση ένταση, η διείσδυση CD68

+ μυελοειδή σύμπλεγμα που σχετίζεται με ανθράκωση και το επίπεδο pSTAT3. Σε μια μονοπαραγοντική ανάλυση, ανθρακωτική βαθμολογία μυελοειδή σύμπλεγμα έδειξε μια τάση προς τη σημασία για την πρόβλεψη της συνολικής επιβίωσης (P = 0,061, αναλογία κινδύνου (HR) = 2,22, 95% CI [0,96, 5,13]). Μια εκτίμηση επιβίωσης Kaplan-Meier με δοκιμασία log-rank κατέδειξε επίσης μια σχεδόν σημαντική διαφορά μεταξύ μυελοειδούς σύμπλεγμα που σχετίζεται με ανθράκωση-υψηλή και -Low ομάδα (P = 0,055? Εικ. 6Α). Τόσο η διάμεση επιβίωση και την επιβίωση 5 ετών βελτιώνονται σε χαμηλή μυελοειδή ομάδα συμπλεγμάτων (διάμεση επιβίωση: 116,1 μήνα, 95% CI [86.0, NA] έναντι 56,1 μήνες, 95% CI [35.1 – NA]? 5-ετή επιβίωση: 78,5%, 95% CI [63,3%, 97,3%] έναντι 38,0%, 95% CI [20,8%, 69,3%]). Επιπλέον, η συνολική pSTAT3 έδειξε μια τάση προς τη σημασία για την πρόβλεψη της συνολικής επιβίωσης (P = 0,093? Σχήμα 6Β).

Kaplan-Meier καμπύλες που δείχνουν την επιβίωση των ασθενών που ομαδοποιούνται από:. (Α) μυελοειδούς διείσδυση σύμπλεγμα που σχετίζεται με ανθράκωση, (Β) συνολικό επίπεδο pSTAT3, (Γ) ο συνδυασμός των κομβικών στάδιο και μυελοειδή συστάδες συνδέονται με ανθράκωσης, (D) ο συνδυασμός του μυελοειδούς συστάδες συνδέονται με ανθράκωση και το συνολικό επίπεδο pSTAT3 (n = 49).

σε μια πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox για την επιλογή μοντέλου ,, κομβικό στάδιο και ανθρακωτική μυελοειδή βαθμολογίας συμπλέγματος έμειναν στο τελικό μοντέλο (κομβικό στάδιο: P = 0.033, HR = 1,75, 95% CI [1,05, 2,94]? ανθρακωτική μυελοειδή βαθμολογία συμπλέγματος: P = 0.049, HR = 2,34, 95% CI [1,00, 5,43]), δείχνοντας ότι μυελοειδή clusters που σχετίζονται με ανθράκωση στην περιφερειακή αμέτοχος LNs παρέχει πρόσθετη ισχύ πρόβλεψη σε ασθενή συνολική επιβίωση πέρα ​​από τις συμβατικές κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές. Ως εκ τούτου, σε συνδυασμό κομβικών στάδιο και μυελοειδή συστάδες συνδέονται με ανθράκωση να βελτιώσει τη συνολική πρόβλεψη επιβίωση. Παρά τον περιορισμένο μέγεθος του δείγματος, οι ασθενείς με αρνητικό LNs και χαμηλή μυελοειδή σμήνη έδειξαν σημαντικά βελτιωμένη επιβίωση σε σύγκριση με εκείνους με θετικό LNs και υψηλή μυελοειδή clusters (P = 0,024? Διάμεση επιβίωση: 113,0 μήνες έναντι 44,0 μηνών? Επιβίωσης 5 ετών: 83,1% έναντι 15,0%? Εικ. 6C). Ο συνδυασμός των ανθρακωτική μυελοειδούς βαθμολογίας συμπλέγματος και το συνολικό επίπεδο pSTAT3 ορίζεται επίσης δύο πληθυσμοί των ασθενών με σημαντικά διαφορετική πρόγνωση (P = 0.0041? Εικ. 6D). Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι μυελοειδή clusters που σχετίζονται με ανθράκωση στην αμέτοχος LNs είναι ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες της κακής πρόγνωσης στο κάπνισμα ασθενείς με NSCLC.

Συζήτηση

Ανάπτυξη της μεταστατικής νόσου μετά από χειρουργική εκτομή του NSCLC απαιτεί πολύπλευρες αλληλεπιδράσεις διευκολύνονται από όγκου και στρωματικά κύτταρα εντός του μικροπεριβάλλοντος στο μεταστατικό θέση, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος. Διείσδυση των CD68

+ μυελοειδή συστάδες των κυττάρων που συνδέονται με την ανθράκωση ήταν εμφανής σε καλοήθεις LN από ασθενείς με NSCLC και ενεργοποίηση της STAT3 ήταν αυξημένα, σύμφωνα με τις προηγούμενες εκθέσεις σε πολλές κακοήθειες. [14], ο σχηματισμός [24] Προ-μεταστατική θέση έχει αποδίδεται σε μια ποικιλία μεσολαβητών, συμπεριλαμβανομένων VEGF, ΜΜΡ-9, STAT3 και SDF-1 /CXCL12. [16], [20], [21], [24] Η φαινοτυπική οριοθέτηση των μυελοειδούς συστάδων δει στο μη εμπλεκόμενο LN έδειξε έκφραση της IL -6, IL-10 και VEGF-A ως αναστολείς της αντικαρκινικής ανοσίας, VEGF-A και ΜΜΡ-9 ως προ-αγγειογόνων παραγόντων και SDF-1 ως χημειοελκτικό για τα κυκλοφορούντα κύτταρα NSCLC. Τα άφθονα μυελοειδή συστάδες συνδέονται με ανθράκωση στο μη εμπλεκόμενο LNs μπορεί να συμβάλλει στην ανοσοκατασταλτική περιβάλλον και να παίξουν ένα προ-καρκίνου και προ-μεταστατικό ρόλο. Έκφραση των αντι-αποπτωτικών γονιδίων Bcl-XL είναι επίσης συνεπής με την προηγούμενη έκθεση σχετικά με τις προ-μεταστατικό μυελοειδή clusters. [24]

Στο μικροπεριβάλλον του όγκου, STAT3 μεσολαβεί πολλαπλών κατευθύνσεων στιχομυθία μεταξύ των κυττάρων του μυελοειδούς σχετίζονται με τον όγκο και άλλα στρωματικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων ενδοθηλιακών κυττάρων. [10] Έτσι, πέρα ​​από την επίδραση των παραγόντων και το κάπνισμα όγκο εκκρίνεται, η αύξηση της δράσης της STAT3 σε προ-μεταστατικούς LNs μπορεί επίσης να συμβάλει στην μετάσταση και την εξέλιξη του όγκου μέσω της διείσδυσης των μυελοειδών κυττάρων. Πρόσφατες έρευνες δείχνουν ότι η αναστολή της STAT3, η οποία είναι μόνιμα ενεργοποιημένη σε προ-μεταστατικούς κόγχες, μπορεί να μειώσει μυελοειδή κυτταρική διήθηση σε μελλοντικές μεταστατικές θέσεις. [24], [33] STAT3 εξασθενίζει επίσης αντικαρκινική ανοσία για να διευκολύνει το σχηματισμό όγκου πνεύμονα καρκινογόνο που προκαλείται. [ ,,,0],34] Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι η νικοτίνη ήταν σε θέση να ενεργοποιήσει STAT3 σε ανθρώπινα μακροφάγα με επακόλουθη κατάργηση από την αναστολή JAK /STAT, υποδηλώνοντας ότι ο σχηματισμός των προ-μεταστατικές θέσεις και μεταστάσεων σε ασθενείς με NSCLC σχετίζονται με το κάπνισμα μπορεί να είναι ευαίσθητα σε αποκλεισμό STAT3.

Ανίχνευση λανθάνουσες μεταστάσεις σε ασθενείς με εκτομή NSCLC παρέχει επιπλέον προγνωστική κριτήρια, τα οποία μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τον προσδιορισμό επικουρική θεραπεία. [28] Όταν αξιολογήσαμε απόκρυφη μετάσταση σε καλοήθεις LNs, οι περισσότεροι βρέθηκαν σε εκείνους με υψηλά επίπεδα μυελοειδών συσπειρώσεων που συνδέονται με την ανθράκωση και τις απόκρυφες μεταστατικά καρκινικά κύτταρα colocalized μέσα σε αυτές τις ομάδες. Πρόσληψη αυτών μυελοειδούς ομίλων και μετέπειτα απόκρυφη μετάσταση μπορεί να οφείλεται σε CFN, η οποία ήταν επίσης παρούσα στη αμέτοχος LN στο χώρο των clusters.

Επειδή μυελοειδή κυτταρική δραστηριότητα STAT3 δεν επηρεάζει μόνο το ανοσοποιητικό ρύθμιση στο πλαίσιο του όγκου [14], αλλά επίσης παίζει σημαντικό ρόλο στην προ-μεταστατικό ιστό, [24] το σχηματισμό μυελοειδούς συσπειρώσεων και την ενεργοποίηση των STAT3 μπορεί να επηρεάσει την πρόγνωση των ασθενών. Σε ασθενείς χωρίς τη συμμετοχή των λεμφαδένων, τα άτομα με χαμηλά επίπεδα της μυελοειδούς συμπλέγματα που συνδέονται με την ανθράκωση έδειξε βελτιωμένη επιβίωση. Ο συνδυασμός του ανθρακίτη μυελοειδούς βαθμολογίας συμπλέγματος και το επίπεδο pSTAT3 περαιτέρω καθορισμένη πρόγνωση πέραν του όγκου και το στάδιο LN σε ασθενείς με χειρουργήσιμο ΜΜΚΠ.

Παρά το γεγονός ότι τα ευρήματά μας είναι πολλά υποσχόμενη, η παρούσα μελέτη έχει αρκετούς περιορισμούς. Πρώτον, τα συμπεράσματα περιορίζεται από τον μικρό αριθμό ασθενών που σχηματίζουν ομάδα μας. Μελλοντικές μελέτες με μεγαλύτερο αριθμό ασθενών θα πραγματοποιηθεί για την επικύρωση των συμπερασμάτων. Δεύτερον, η προηγούμενη δημοσίευση μας έδειξαν ότι η ενεργοποίηση STAT3 σε μυελοειδή συστάδες είναι ζωτικής σημασίας για τη δημιουργία αποικιών τους σε προ-μεταστατικές θέσεις για να διευκολύνουν τη μετάσταση σε μοντέλα ποντικών. [24] Ομοίως, η τρέχουσα μελέτη μας δείχνει ότι μυελοειδή σύμπλεγμα διείσδυση στην αμέτοχος LNs των ασθενών με NSCLC συσχετίζεται με απόκρυφη μετάσταση και την πρόγνωση. Ωστόσο, είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι η συσχέτιση δεν είναι ίσο με την αιτιώδη συνάφεια. Μυελοειδή συσσώρευση cluster στον NSCLC προ-μεταστατικό LNs μπορεί να συμβεί ως δευτερεύον συμβάν κατά τη διάρκεια μεταστατική εξέλιξη. Έτσι, άμεση απόδειξη θα ήταν αναγκαία για να αποδείξει ότι CD68

+ μυελοειδή συστάδες είναι υπεύθυνοι για την πλήρωση NSCLC κομβικό μετάσταση.

Παρά τους περιορισμούς, η μελέτη μας παρέχει στοιχεία που αποδεικνύουν ότι STAT3 και μυελοειδή διείσδυση συνεργάτης με την πρόωρη μεταστατική νόσο και μπορεί να είναι σημαντική σε προκαλούμενο από το κάπνισμα καρκίνων του πνεύμονα. Η συσχέτιση της μυελοειδούς συμπλέγματα που συνδέονται με την ανθράκωση και pSTAT3 με την επιβίωση των ασθενών προσφέρει πρόσθετες πληροφορίες όταν εξετάζουν το μέλλον της θεραπείας. Αναστολή των μονοπατιών που διεγείρει τον σχηματισμό προ-μεταστατική θέση μπορεί να αποδειχθεί πιο αποτελεσματική από την κλασική χημειοθεραπεία. Διερεύνηση σε μεγαλύτερες ομάδες για την επικύρωση και προοπτικές μελέτες θα καθορίσει περαιτέρω το ρόλο της μυελοειδούς clusters και STAT3 σε πρώιμο στάδιο NSCLC. Επιπλέον, η εξέταση του φρέσκου ιστού και απομόνωση των βιώσιμων μυελοειδούς συσπειρώσεις θα προσφέρουν πληροφορίες για τις κυτταρικούς μηχανισμούς που εμπλέκονται.

Ευχαριστίες

Θα θέλαμε να ευχαριστήσουμε τον Brian Armstrong, Ph.D. του Φωτός Μικροσκοπίας Imaging Core, Rebecca Nelson, Ph.D. του Τμήματος Επιστήμες της Πληροφορίας και τα μέλη του προσωπικού της Παθολογίας πυρήνα στο City of Hope Περιεκτική Κέντρο Καρκίνου, για τη βοήθειά τους στη μελέτη.