Αφηρημένο

FBP1, φρουκτόζη-1,6-διφωσφορικής-1, ένα γλυκονεογένεση ρυθμιστικό ένζυμο, καταλύει την υδρόλυση της φρουκτόζης 1, 6-διφωσφορική φρουκτόζη 6-φωσφορικό άλας και ανόργανο φωσφορικό. Ο μηχανισμός που λειτουργεί για να ανταγωνιστεί γλυκόλυση και επιγενετικώς αδρανοποιείται μέσω NF-κΒ οδού σε γαστρικό καρκίνο έχει αναφερθεί. Ωστόσο, ο ρόλος της στο ήπαρ καρκινογένεση παραμένει άγνωστη. Εδώ, ερευνήσαμε την έκφραση και μεθυλίωσης του DNA των FBP1 στην πρωτοβάθμια HCC και του όγκου του παχέος εντέρου. FBP1 ήταν ταπεινός εκφράζεται σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του ήπατος 80% (8/10) των ανθρωπίνων ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, 66,7% (6/9) και 100% (6/6) καρκίνο του κόλου κυτταρικές σειρές, αλλά ήταν υψηλότερη σε ζεύγη γειτονικών ιστών μη-όγκου και αθανατοποιημένες φυσιολογικές κυτταρικές σειρές, η οποία συσχετίζεται καλά με την κατάσταση μεθυλίωσης του υποκινητή. Η μεθυλίωση περαιτέρω ανιχνεύθηκε σε πρωτογενή HCCs, ιστών του στομάχου και του παχέος εντέρου όγκου, αλλά κανένας ή περιστασιακά σε ζεύγη γειτονικών ιστών μη-όγκου. Λεπτομερής ανάλυση μεθυλίωσης της 29ης CpG θέσεων σε μία περιοχή υποκινητή 327-bp με όξινο θειώδες γονιδιωματική αλληλούχιση επιβεβαίωσε μεθυλίωση του. FBP1 σίγηση μπορεί να αντιστραφούν από χημική επεξεργασία απομεθυλίωση με 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνη (Αζα), υποδεικνύοντας την άμεση επιγενετικές σίγηση. Αποκατάσταση έκφραση FBP1 σε χαμηλή εκφράζονται κύτταρα ικανότητα σχηματισμού ανέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη των κυττάρων και αποικιών μέσω της επαγωγής του G2-M διακοπή του κυτταρικού κύκλου φάση. Επιπλέον, οι παρατηρούμενες επιδράσεις συνέπεσε με την αύξηση της αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS). Συνοπτικά, επιγενετική αδρανοποίηση FBP1 είναι επίσης κοινά σε ανθρώπινο ήπαρ και τον καρκίνο του παχέος εντέρου. FBP1 φαίνεται να είναι ένα λειτουργικό ογκοκατασταλτικό εμπλέκονται στο ήπαρ και το παχύ έντερο καρκινογένεση

Παράθεση:. Chen Μ, Zhang J, Li Ν, Qian Ζ, Zhu Μ, Li Q, et al. (2011) Ανάδοχος υπερμεθυλίωση διαμεσολαβούμενη Ελάττωση της FBP1 στην Ανθρώπινη ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα και καρκίνος του παχέος εντέρου. PLoS ONE 6 (10): e25564. doi: 10.1371 /journal.pone.0025564

Επιμέλεια: Xin-γιουάν Guan, Το Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Κίνα

Ελήφθη: 13 του Ιούνη του 2011? Αποδεκτές: 5 Σεπτέμβρη του 2011? Δημοσιεύθηκε: 19 Οκτ του 2011

Copyright: © 2011 Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από Major Επιστήμης και Τεχνολογίας Ειδική Έργο της Κίνας ενδέκατη πενταετές σχέδιο (Αρ 2008ZX1002-004), το κινεζικό κράτος Βασικές Ίδρυμα Ερευνών Grant (2007CB512904), Σαγκάη Sci και Tech πρόγραμμα Έρευνας (08JC1403900), καθώς και το πρόγραμμα για τη σημαντική ιατρική Ακαδημαϊκό ηγέτης της Σαγκάης (08GWD19). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) παραμένει η τρίτη κυριότερη αιτία θανάτου από καρκίνο παγκοσμίως και η δεύτερη πιο συχνή κακοήθεια στην Κίνα. Η μοριακή παθογένεση του HCC παραμένει σε μεγάλο βαθμό άγνωστη. Έχει διατυπωθεί η υπόθεση ότι η ανάπτυξη και εξέλιξη του HCC είναι η συνέπεια της σωρευτικής γενετικών και επιγενετικών γεγονότα. CpG υπερμεθυλίωση δρα ως εναλλακτικό μηχανισμό με το γονίδιο αδρανοποίησης, και σήμερα αναγνωρίζεται ως ένας σημαντικός μηχανισμός κατά την έναρξη και την εξέλιξη του όγκου, συμπεριλαμβανομένων του καρκίνου του ήπατος [1], [2]. Είναι σημαντικό και ενδιαφέρον για τον εντοπισμό νέων γονιδίων σιγήσει υπερμεθυλίωση προαγωγού σε καρκίνο του ήπατος, λόγω ανώμαλης ογκοκατασταλτικό γονίδιο (ΕΠΠΕ) υπερμεθυλίωση είναι τόσο ένα μηχανισμό και ένα βιοδείκτη για την ογκογένεση [3].

FBP1, φρουκτόζη-1, 6-διφωσφορικής 1, ένα ρυθμιστικό ένζυμο γλυκονεογένεση, καταλύει την υδρόλυση του 1,6-διφωσφορικής φρουκτόζης σε 6-φωσφορική φρουκτόζη και ανόργανο φωσφορικό. ανεπάρκεια διφωσφατάση Φρουκτόζη-1,6- συνδέεται με την υπογλυκαιμία και μεταβολική οξέωση. Αναφέρθηκε [4] ότι FBP1 που λειτουργεί για να ανταγωνίζονται γλυκόλυση ήταν μειωτικά μέσω NF-κΒ οδού σε Ras-μετασχηματισμένα κύτταρα ΝΙΗ3Τ3. NF-κΒ λειτουργίες κατάντη της Ras για την προώθηση επιγενετική μειορρύθμιση του FBP1. Η αναστολή της NF-κΒ αντιστραφεί υποκινητή μεθυλίωση με μεσολάβηση FBP1 μειορύθμιση. Επιπλέον, η μεθυλίωση υποστηρικτής της FBP1 ήταν σχετική με γαστρική καρκινογένεση, για παράδειγμα, το φύλο, ΤΝΜ τα στάδια και το ποσοστό επιβίωσης ήταν σημαντικά σχετίζεται με μεθυλίωση προαγωγού FBP1. Εκτός αυτού, μελετήθηκε [5] ότι η μεθυλίωση FBP1 υποκινητή συμβάλλει στην μειωμένη έκφραση της ΡΒΡάσης στον καρκίνο του μαστού. Όταν μη-κακοήθη και κακοήθη δείγματα ιστού από τον ίδιο ασθενή συγκρίθηκαν μία συσχέτιση μεταξύ της αύξησης της μεθυλίωσης υποκινητή ΡΒΡάσης και μείωση των επιπέδων mRNA ΡΒΡάσης παρατηρήθηκε. Ωστόσο, δεν ευρήματα παρουσιάζονται για FBP1 επιγενετικές αδρανοποίηση στο ήπαρ καρκινογένεση.

Αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS), χημικά αντιδραστικό μόρια που περιέχουν οξυγόνο, περιλαμβανομένων και των ιόντων οξυγόνου και υπεροξείδια, είναι τα βασικά μεσολαβητές κυτταρικού οξειδωτικού στρες και απορρύθμισης οξειδοαναγωγής που εμπλέκονται στην έναρξη και εξέλιξη του καρκίνου. Είναι πλέον ευρέως αποδεκτό ότι τα ιδιοσυστατικά υψηλά επίπεδα κυτταρικής οξειδωτικού στρες και της εξάρτησης από μιτογόνο και αντι-αποπτωτικά ROS-σηματοδότηση σε καρκινικά κύτταρα που εμπλέκονται στην καρκινογένεση. Παραδόξως, εκτός από το να συμμετέχουν στην πολλαπλασιαστική, αντι-αποπτωτικά, μεταστατικό, και αγγειογόνων σηματοδότηση, ROS μπορούν επίσης να ασκήσουν κυτταροτοξική και προαποπτωτική λειτουργίες που θα περιόριζε την ογκογονικότητα και κακοήθη εξέλιξη [6], [7]. FBP1 είναι μια πολυλειτουργική πρωτεΐνη η οποία είναι, εκτός από την λειτουργία της στην γλυκονεογένεση, που εμπλέκονται στην παραγωγή ROS μετά από θεραπεία με MMS ή σε χρονολογικά ηλικίας κύτταρα [8]. Σε περίπτωση απουσίας των κυττάρων FBP1 επιβιώνουν θεραπεία MMS καλύτερα και ακόμα και πολλαπλασιάζονται μετά από μακροχρόνια θεραπεία. Αυτό θα μπορούσε να είναι το αποτέλεσμα της μειωμένης παραγωγής των ROS παρατηρούνται στο μεταλλαγμένο ΔFBP1 σε απόκριση προς τον παράγοντα μεθυλομεθάνιο σουλφονικό (MMS) θεραπεία αλκυλίωσης και τη γήρανση. Έλλειψη FBP1 βελτιωθεί επιζών της ηλικίας κυττάρων σε πλήρες μέσο και οδήγησε σε μια καθυστερημένη επαγωγή της παραγωγής ROS. Η υπερέκφραση του FBP1 μείωσε την ικανότητα να σχηματίζουν αποικίες ακόμη και μη επεξεργασμένων καλλιεργειών, συντομευμένη διάρκεια ζωής και αύξησε την επαγωγή του υποκινητή RNR2 μετά την επεξεργασία MMS.

Εδώ, αποδείξαμε ότι FBP1 υποβλήθηκε προαγωγού CpG υπερμεθυλίωση σχετιζόμενη σίγηση σε ανθρώπινο ήπατος και καρκίνο του παχέος εντέρου. Η ανάλυση των κυτταρικών σειρών και ιστών του ήπατος και του παχέος εντέρου έδειξε ότι FBP1 υπερμεθυλίωση ήταν μια κοινή εκδήλωση στο ανθρώπινο ήπαρ και τον καρκίνο του παχέος εντέρου. Δείξαμε επίσης ότι FBP1 λειτουργεί ως TSG να καταστέλλει την ανάπτυξη καρκινικών κυττάρων μέσω της επαγωγής του G2-M διακοπή του κυτταρικού κύκλου φάση και σε αύξηση των επιπέδων παραγωγής ROS. Επιγενετικές αλλαγές στην ομοιόσταση κυτταρική οξειδωτική και τα επίπεδα ROS θα επηρεάσει τη βιωσιμότητα μέσω της διαφοροποίησης οξειδοαναγωγής του μιτοχονδριακού άνοιγμα πόρου μετάβασης διαπερατότητα που οδηγούν στην απελευθέρωση κυτοχρώματος C, αποπτωσώματος συναρμολόγηση και την ενεργοποίηση των κασπασών δημίου, το οποίο είναι υποστηρικτική για ROS-σκηνοθεσία χημειοθεραπευτικά καρκίνου.

Υλικά και Μέθοδοι

γραμμές Cancer Cell, πρωτοπαθή όγκο ιστοί και RNA /DNA Extraction

Εννέα ανθρώπινο καρκίνο του ήπατος κυτταρικές σειρές (HepG2, Hep3B, Huh7, HCC-ΠΝ 3, BEL-7402, SMMC-7721, Sk-ΗΕΡ1, MHCC-97H και MHCC-97L) χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση ΕΑΣ. Ένα αθανατοποιημένο φυσιολογικό ανθρώπινο ήπαρ κυτταρικές γραμμές L02 χρησιμοποιήθηκε ως «κανονικά» μάρτυρες για ανάλυση HCCs. Έξι ανθρώπινου καρκίνου κόλου κυτταρικές γραμμές (ΗΤ29, SW480, SW620, HCT116, LoVo και RKO) χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση του καρκίνου του παχέος εντέρου και ανθρώπινο φυσιολογικούς ιστούς ενηλίκων κόλου χρησιμοποιήθηκαν ως «κανονικά» ελέγχους. Όλες οι κυτταρικές γραμμές ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, Va., USA). Εκτός αν υποδεικνύεται συγκεκριμένα, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μέσο DMEM (Invitrogen, Carlsbad, Calif., USA) συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό στους 37 ° C με

2 και 95% υγρασία 5% CO. Για φαρμακολογικές απομεθυλίωση, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 5 υΜ 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνη (Αζα) (Sigma, St. Louis, Μο, USA) για 3 διαδοχικές ημέρες. μέσο καλλιέργειας άλλαζε κάθε 24 ώρες. Μια ισοδύναμη συγκέντρωση του φορέα (DMSO) χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος

Πρωτογενής HCCs ελήφθησαν από ασθενείς με καρκίνο του ήπατος σε Huashan Νοσοκομείο κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης.? αντίστοιχα δείγματα μη-όγκου από ασθενείς με καρκίνο του ήπατος ελήφθησαν επίσης κατά τουλάχιστον 2 cm μακριά από τον όγκο. τμήματα Μη όγκου αποκόπτεται από τα κατεψυγμένα μπλοκ του όγκου και οι επιλεγμένες περιοχές του όγκου είχε καρκινικά κύτταρα περισσότερο από το 80%, όπως επιβεβαιώνεται από την ιστολογία. Ανθρώπινο γαστρικό, ιστούς όγκων του παχέος εντέρου και των φυσιολογικών ιστών του παχέος εντέρου ενηλίκων δόθηκαν από την κινεζική ιατρική νοσοκομείο της Zhejiang. Όλοι οι ασθενείς έδωσαν πληροφορημένη συναίνεση για τη λήψη των δειγμάτων της μελέτης.

Ολικό RNA και γονιδιωματικό DNA εκχυλίστηκαν χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι ολικές συγκεντρώσεις RNA και DNA ποσοτικοποιήθηκαν με NanoDrop 1000 (Nanodrop, Wilmington, Del., USA).

Real-Time ΚΤ-ΡΟΚ

Μια αντίδραση αντίστροφης μεταγραφής διεξήχθη χρησιμοποιώντας 1 μα ολικού RNA με υψηλής χωρητικότητας cDNA Reverse Transcription kit (Applied Biosystems, Foster City, Calif., USA). Τα επίπεδα έκφρασης του mRNA της FBP1 προσδιορίστηκαν από την Real-Time RT-PCR χρησιμοποιώντας SYBR Green Master Mix Kit και ΑΒΙ 7500 Real-Time RT-PCR System (Applied Biosystems, Foster City, Calif., USA). Γλυκεραλδεϋδο-3- φωσφορική αφυδρογονάση (GAPDH) χρησιμοποιήθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος της ακεραιότητας του RNA. Real-Time RT-PCR πραγματοποιήθηκε εις τριπλούν. Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για FBP1 ήταν:. FBP1-F 5′-ATCCCCTTGATGGATCTTCC-3 ‘και FBP1-R 5′-TCCAGCATGAAGCAGTTGAC-3’ (bp προϊόν 208)

κατεργασία όξινου θειώδους του DNA και ειδική της μεθυλίωσης PCR

Γενωμικό DNA κατεργασμένου με όξινο θειώδες με Zymo DNA Τροποποίηση Kit (Zymo Research, Orange, Calif., USA) σύμφωνα με το πρωτόκολλο που παρέχεται. Μεθυλίωσης-ειδική PCR (MSP) διεξήχθη για 40 κύκλους με θερμοκρασία αναδιάταξης στους 60 ° C. Μεθυλίωση-ειδικούς εκκινητές ήταν: FBP1-MF 5′-TGAAGATTTAAGTAGGCGGAGTC-3 ‘και FBP1-MR 5′-ATAAACACTAACCG CAAATACGAA-3′, και unmethylation-ειδικούς εκκινητές ήταν: FBP1-UF 5’-GAAGATTTAAGTA GGTGGA GTTGTG-3 ‘και FBP1 -UR 5’-CTAACAAAAAAACTAACAAACCAAC-3 ‘

Bisulfite γονιδιωματική αλληλούχιση

κατεργασμένου με όξινο θειώδες γονιδιακό DNA ενισχύθηκε με τη χρήση θειώδους γονιδιωματικής αλληλουχίας (BGS) εκκινητών, FBP1-BF:. 5′-TGATTTTGGAGGAAATAGTTATAGTTTTT- 3 ‘και FBP1-BR: 5′-TAATACAACTAAACCAAACCAAAC-3’. Τα προϊόντα PCR καθαρίστηκαν με Illustra GFX ™ PCR και κιτ καθαρισμού μπάντα γέλη (GE Healthcare Life Science, Uppsala, Sweden) και κλωνοποιήθηκε σε φορέα pCR4-ΤΟΡΟ για αλληλούχηση (Invitrogen). Τουλάχιστον τέσσερις αποικίες επιλέχθηκαν τυχαία για την εκχύλιση πλασμιδίου και ανάλυση ακολουθίας χρησιμοποιώντας την ΑΒΙ PRISM BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit στο sequencer ΑΒΙ 3100 (Applied Biosystems).

Κατασκευή του φορέα έκφρασης FBP1

Η FBP1 φορέα έκφρασης δομήθηκε με κλωνοποίηση του πλήρους μήκους FBP1 ανοιχτό πλαίσιο ανάγνωσης μέσα σε φορέα έκφρασης pcDNA3.1 θηλαστικού. Το ανοιχτό πλαίσιο ανάγνωσης FBP1 πλήρους μήκους ενισχύθηκε από cDNA φυσιολογικού στομάχι χρησιμοποιώντας υψηλής πιστότητας PFU πολυμεράση DNA (Invitrogen). Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για την κλωνοποίηση ήταν FBP1-CF: 5′-CGGAATTCCGATGGCTGACCAGGCGCCCTTCGA-3 ‘και FBP1-CR: 5′-GCAAGCTTCCTGGGCAGAGTGCTTCTCATACACC-3’ accomp- anied με θέσεις κοπής διπλό ένζυμο EcoRI και Hind III. Η αλληλουχία και ο προσανατολισμός του ενθέτου επιβεβαιώθηκε με ανάλυση αλληλουχίας DNA.

Αποικίας Δοκιμασία Σχηματισμού

Ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του ήπατος παροδικά επιμολυσμένα με άδειο φορέα pcDNA3.1 ή ροϋΝΑ-FBP1 φορέα έκφρασης χρησιμοποιήθηκαν για την δοκιμασία σχηματισμού αποικίας μονοστιβάδας για την αξιολόγηση κυτταρικής ανάπτυξης in vitro. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν όλη τη νύκτα σε 12-φρεατίων (5 χ 10

5 κύτταρα /φρεάτιο) και επιμολύνθηκαν με άδειο φορέα pcDNA3.1 ή ροϋΝΑ-FBP1 φορέα που εκφράζει χρησιμοποιώντας FuGENE 6 (Roche Applied Science, Mannheim, Germany). Σαράντα οκτώ ώρες αργότερα, τα επιμολυσμένα κύτταρα απλώνονται εκ νέου εις τριπλούν και καλλιεργήθηκαν για 10~15 ημέρες σε πλήρες DMEM μέσο που περιέχει G418 (400 μg /ml). Surviving αποικίες βάφτηκαν με γεντιανή βιολετί μετά μετρήθηκαν σταθεροποίηση μεθανόλη και ορατές αποικίες (≥50 κύτταρα). Τα πειράματα επαναλήφθηκαν τρεις φορές.

ΟβΙΙ Growth Δοκιμασία

ανάπτυξη κύτταρα προσδιορίζεται με μία δοκιμασία μη ραδιενεργό διάδοσης βασίζεται στην ικανότητα των μεταβολικώς δραστικών κυττάρων για τη μετατροπή 3- (4,5- διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -5 (3-carboxymethonyphenol) -2 – (4-σουλφοφαινυλ) -2Η-τετραζόλιο (MTS) (Promega, Madison, WI, USA) σε φορμαζάνη. Επιζώντα κύτταρα μετά από επιλογή G418 επαναεπιστρώθηκαν σε μια πλάκα 96 φρεατίων με διαφορετικό αριθμό κυττάρων και καλλιεργήθηκαν σε πλήρες DMEM μέσο που περιέχει G418 (400 μg /ml) για άλλες 72 ώρες. Η ποσότητα φορμαζάνης μετρήθηκε όπως παραπάνω. Η ποσότητα φορμαζάνης μετρήθηκε στα 490 nm η απορρόφηση μετά από μία ώρα επώαση με αντιδραστήριο One Solution CellTiter 96 υδατικά ακολουθώντας τις οδηγίες που παρέχονται.

Κυτταρικού Κύκλου Ανάλυση και προσδιορισμός της ROS παραγωγής

επιζώντα κύτταρα μετά από επιλογή G418 θρυψινοποιήθηκαν, πλύθηκαν σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό, και σταθεροποιήθηκαν σε παγωμένο 70% αιθανόλης-ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο διάλυμα. Μετά το πλύσιμο έξω αιθανόλη, τα στερεωμένα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0,01% RNase (10 mg /ml, Sigma, St. Louis, ΜΟ, USA) για 10 λεπτά στους 37 ° C και στη συνέχεια χρωματίζονται με 0,05% ιωδιούχο προπίδιο για 20 λεπτά στους 4 ° C στο σκοτάδι. Η κατανομή κυτταρικού κύκλου προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα FACScan κυτταρομετρία ροής (Becton Dickinson, Mountain View, CA, USA) και αναλύθηκαν με λογισμικό ΜΟϋΡΙΤ (Phoenix, San Diego, CA, USA). Κύτταρα που υφίστανται απόπτωση ανιχνεύεται ως υπο-G1 πληθυσμού λόγω της απώλειας του κατακερματισμένου DNA.

επίπεδα ROS μετρήθηκαν με τη χρήση 2′-7′-Dichlorodihydrofluorescein διοξική (DCFH-DA) (Invitrogen) σε κυτταρομετρία ροής δοκιμασίας όπως περιγράφεται [9].

Στατιστική Ανάλυση

Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± τυπική απόκλιση (SD). Student

t

δοκιμή χρησιμοποιήθηκε για να συγκριθούν οι διαφορές της έκφρασης FBP1 σχετικά με την επίδραση του σχηματισμού αποικίας και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Όλες οι στατιστικοί υπολογισμοί έγιναν χρησιμοποιώντας SPSS έκδοση 11.0 για Windows (SPSS, Inc., Chicago, IL). Αξία του

P

& lt?. 0.05 ελήφθη ως στατιστική σημαντικότητα

Αποτελέσματα

Ελάττωση της FBP1 στο ανθρώπινο ήπαρ και άλλα πεπτικά Καρκίνοι

Η έκφραση της FBP1 δραματικά προς τα κάτω σε 66,7% (6/9) καρκινικές κυτταρικές σειρές ανθρώπινου ήπατος HepG2 συμπεριλαμβανομένων, BEL-7402, SMMC-7721, Sk-ΗΕΡ1, MHCC-97H και MHCC-97L (Σχήμα 1Α), όταν συγκρίνεται με την ανθρώπινη φυσιολογική ηπατικά κύτταρα LO2. Ομοίως, downregualtion του FBP1 βρέθηκε επίσης σε 100% (6/6) των ανθρωπίνων γραμμών καρκινικών κυττάρων του κόλου ΗΤ29 συμπεριλαμβανομένων, SW480, SW620, HCT116, LoVo και RKO (Σχήμα 1Α), όταν συγκρίνεται με την ανθρώπινη φυσιολογικό ιστό ενήλικα κόλου. Για να ξέρω αν αρνητική ρύθμιση των FBP1 πρέπει να αποδοθεί στην μεθυλίωση του DNA, την έκφραση της FBP1 σε ανθρώπινο ήπαρ και καρκίνο του παχέος εντέρου κυτταρικές σειρές πριν και μετά τη θεραπεία Aza προσδιορίστηκαν από την Real-Time RT-PCR. Η έκφραση του FBP1 ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω σε καρκίνο του ήπατος κυτταρικές γραμμές HepG2, BEL-7402, SMMC-7721, Sk-ΗΕΡ1, MHCC-97H και MHCC-97L (6/9, 66,7%) μετά από θεραπεία Αζα (Εικόνα 1Β) και επίσης σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του κόλου ΗΤ29, SW620, LoVo και RKO (4/6, 66,7%) (Σχήμα 1Β), υποδεικνύοντας ότι είναι πιθανή FBP1 ρυθμίζεται προς τα κάτω μέσω υπερμεθυλίωση προαγωγού σε ανθρώπινα ηπατικά και του παχέος εντέρου.

(Α) έκφραση FBP1 σε ανθρώπινες σειρές ήπατος και καρκίνο του παχέος εντέρου κυττάρων και φυσιολογικών μαρτύρων προσδιορίστηκαν με Real-Time RT-PCR. GAPDH χρησιμοποιήθηκε για να ομαλοποιήσει το ποσό πρότυπο. (Β) Σχετική έκφραση FBP1 πριν και μετά τη θεραπεία Aza προσδιορίστηκαν από την Real-Time RT-PCR. GAPDH χρησιμοποιήθηκε για να ομαλοποιήσει το ποσό πρότυπο. Έχει αποδειχθεί ως μέσο αλλαγές φορές ± SD.

Η

Η μεθυλίωση του FBP1 Διοργανωτή σε ανθρώπινα ηπατικά και του κόλου

Μάλιστα ένα τυπικό Νησιά CpG (CGI) βρέθηκαν γύρω FBP1 εξόνιο 1 χρησιμοποιώντας τα ακόλουθα κριτήρια: GC περιεκτικότητα & gt? 55%, Obs CpG /Exp CpG & gt? 0,65, και το μήκος & gt? 500 bp (Εικόνα 2Α). Η κατάσταση μεθυλίωσης του παρόντος CGI σε ανθρώπινα κύτταρα του ήπατος και καρκίνο του παχέος εντέρου προσδιορίστηκε με MSP. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Β, η μεθυλίωση του FBP1 υποκινητή ανιχνεύθηκε εύκολα σε καρκίνο του ήπατος κυτταρικές γραμμές HepG2, ΗυΗ7, HCC-LM3, BEL-7402, SMMC-7721, Sk-ΗΕΡ1, MHCC-97H και MHCC-97L, και ανθρώπινου καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρικές σειρές ΗΤ29, SW480, SW620, HCT116, LoVo και RKO. Εκτός αυτού, BGS αποκάλυψε επίσης ότι FBP1 προαγωγός ήταν βαριά μεθυλιωμένο σε HepG2, Huh7, BEL-7402 κυττάρων και ιστών 8Τ όγκου, και όχι μεθυλίωσης dedtected σε 8Ν παρακείμενο μη καρκινικό ιστό (Σχήμα 2C).

(Α ) Σχηματική δομή του FBP1 CGI, με το εξόνιο 1 και MSP και BGS περιοχή ενδείκνυται. Κάθε μικρή κάθετη γραμμή αντιπροσωπεύει ένα χώρο CpG. Η θέση των εκκινητών MSP χαρακτηρίστηκαν ως βέλη. Η κατάσταση μεθυλίωσης του FBP1 CGI αναλύθηκε με MSP (Β) και BGS (C). MSP = μεθυλίωσης-ειδική PCR? USP = Unmethylation-ειδική PCR. Για BGS στο (C), κάθε κύκλος δείχνει ένα χώρο CpG και κύκλους συμπληρώθηκε με μαύρο αντιπροσωπεύουν μεθυλιωμένο CpG θέσεις. Μία σειρά από κύκλους αντιπροσωπεύει μια μοναδική αποικία.

Η

Ελάττωση και υποστηρικτής υπερμεθυλίωση των FBP1 σε ανθρώπινους ιστούς πρωτογενούς όγκου

Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω την καταλληλότητα του FBP1 CGI προαγωγός υπερμεθυλίωση στη διαμεσολάβηση αποσιώπηση της στην ανθρώπινου ήπατος, του στομάχου και του καρκίνου του παχέος εντέρου, η έκφραση FBP1 και μεθυλίωση προαγωγού σε πρωτογενή ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, γαστρικό και του παχέος εντέρου ιστούς όγκου και των παρακείμενων ιστών μη-όγκου αναλύθηκαν με πραγματικού χρόνου RT-PCR και MSP, αντίστοιχα. έκφραση FBP1 ήταν σημαντικά προς τα κάτω σε 80% (8/10) των ανθρώπινων ιστών ηπατικών όγκων, 100% (5/5) σε γαστρικό και 80% (4/5) ιστούς όγκων κόλου (Εικόνα 3Α) σε σύγκριση με παρακείμενες μη καρκινικούς ιστούς . Επιπλέον, η μεθυλίωση προαγωγού συχνά ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας MSP σε δείγματα όγκων, αλλά όχι μη καρκινικούς ιστούς (Εικόνα 3Β), δεικνύοντας ότι μειορρύθμιση του FBP1 συμμετείχε στην καρκινογένεση του ανθρώπινου ήπατος και άλλες πεπτικές καρκίνων.

( Α) Η έκφραση του FBP1 στο ήπαρ, γαστρικού και του όγκου του παχέος εντέρου ιστούς και των παρακείμενων ιστών μη-όγκου προσδιορίστηκαν με Real-Time RT-PCR. 1~10 T /N: καρκίνο του ήπατος, 11-15 T /N: γαστρικό καρκίνο, 16~20 T /N: καρκίνου του παχέος εντέρου. (Β) Η κατάσταση μεθυλίωσης του υποκινητή FBP1 στην πρωτοβάθμια ήπατος, γαστρικό και του παχέος εντέρου ιστούς όγκου και των παρακείμενων ιστών μη-όγκου ανιχνεύθηκε με MSP. Εκπρόσωπος αποτελέσματα φαίνονται. 1~3 T /N: καρκίνο του ήπατος, 4-5 T /N: ο καρκίνος του παχέος εντέρου, 6~9 Τ /N: καρκίνο του στομάχου. «Τ» δηλώνει καρκινικών ιστών και «Ν» αντιπροσωπεύει παρακείμενους ιστούς μη-όγκου.

Η

FBP1 υπερέκφραση Μειωμένη Cancer Cell Colony Ικανότητες Σχηματισμός και ανέστειλε την ανάπτυξη του ήπατος και του παχέος εντέρου κύτταρα

Η επίδραση της εξωγενούς έκφρασης FBP1 επί της ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων ανθρώπινου ήπατος ερευνήθηκε με προσδιορισμό σχηματισμού αποικίας μονοστιβάδας. Για να διερευνηθεί περαιτέρω το δυναμικό ρόλο της FBP1 σε καταστολή όγκου, καρκίνο του ήπατος κύτταρα SMMC-7721 και του παχέος εντέρου SW480 επιμολύνθηκε με pcDNA-FBP1 φορέα έκφρασης και την ικανότητα σχηματισμού αποικιών των κυττάρων εξετάστηκε κάτω από την επιλογή του G418. Σε σύγκριση με κύτταρα ελέγχου επιμολυσμένα με άδειο φορέα pcDNA3.1, τα καρκινικά κύτταρα επιμολυσμένα με ροϋΝΑ-FBP1 φορέα έκφρασης έδειξε μειωμένη ικανότητα σχηματισμού αποικιών (Σχήμα 4Β). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι FBP1 μπορεί να παίζει ρόλο στην καταστολή των όγκων. Εκτός αυτού, τα επίπεδα σταθερή έκφραση FBP1 σε αυτά τα κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων των SW480 και SMMC-7721 επιβεβαιώθηκε επίσης με πραγματικού χρόνου RT-PCR, όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α.

(Α) επίπεδο έκφρασης FBP1 στο επιμολυσμένα SW480 και SMMC- 7721 κύτταρα επιβεβαιώθηκε με Real-Time RT-PCR. (Β) Η επίδραση της έκτοπη έκφραση FBP1 επί της ανάπτυξης του καρκίνου του ήπατος των κυττάρων ερευνήθηκε με τη δοκιμασία σχηματισμού αποικίας μονοστιβάδας. Η σαρωμένη σχηματισμό αποικίας σε πλάκες έξι φρεατίων δίδεται στον πίνακα .. (C) Η ανάπτυξη του ήπατος και του καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρικές γραμμές (SW480 και SMMC-7721), με και χωρίς έκφραση FBP1 προσδιορίστηκε με δοκιμασία MTS της κυτταρικής ανάπτυξης. Σταθερή έκφραση του FBP1 κατέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων του ήπατος και του παχέος εντέρου. Τα αποτελέσματα εμφανίζονται ως τιμές μέσης ± SD. Οι τιμές Ρ υπολογίστηκαν με τη χρήση t-test του Student (* ρ & lt? 0,05).

Η

Όταν pcDNA-FBP1 επιμολύνθηκε σε SW480 και SMMC-7721 κύτταρα, η λειτουργία αναστολής αύξησης των FBP1 σε αυτά τα κύτταρα επιβεβαιώθηκε με τη δοκιμασία ανάπτυξη των κυττάρων MTS. PcDNA-FBP1 εκφράζουν φορέας επιμολύνθηκε σε αυτά τα κύτταρα, η ταχύτητα της ανάπτυξης των κυττάρων του ανθρώπινου ήπατος και του καρκίνου του παχέος εντέρου μετά FBP1 υπερέκφραση μειώθηκε δραματικά σε ΜΤΤ δοκιμασία κυτταρικής ανάπτυξης (ρ & lt? 0,05? Σχήμα 4C), που δείχνει μια αύξηση-κατασταλτική επίδραση του FBP1 επί καρκινικά κύτταρα.

έκτοπη έκφραση της FBP1 Induced G2-M Φάση Σύλληψη

για τον προσδιορισμό του μοριακού μηχανισμού με τον οποίο FBP1 κατασταλεί ο σχηματισμός αποικίας και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, διερευνήθηκε η επίδραση της FBP1 στην κατανομή του κυτταρικού κύκλου . Μετά χρώση με ιωδιούχο προπίδιο, ενεργοποιημένων με φθορισμό κυττάρων ανάλυση διαλογής του FBP1 υπερεκφράζεται SW480 και SMMC-7721 κύτταρα αποκάλυψε μια αύξηση στον αριθμό των κυττάρων φάσης G2-M και μια μείωση στον αριθμό των κυττάρων φάσης S (Σχήμα 5Α και 5Β).

Η κατανομή κυτταρικού κύκλου του ήπατος και του καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρική γραμμή (SW480 και SMMC-7721), με και χωρίς έκφραση FBP1 αξιολογήθηκε με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. (Α) και (Β) Αντιπροσωπευτική φθορισμό διαλογή κυττάρων ενεργοποιημένα ανάλυση των καρκινικών κυττάρων επιμολυσμένων με ή χωρίς FBP1.

Η

FBP1 υπερέκφραση αυξημένη ενδοκυτταρική

ROS παραγωγής

Τα επίπεδα ROS μετρήθηκαν καρκινικά κύτταρα μη επιμολυσμένα και επιμολυσμένα με ροϋΝΑ-FBP1 φορέα έκφρασης. Η εξωγενής έκφραση FBP1 σαφώς αυξημένα ενδοκυτταρικά επίπεδα ROS σε SMMC-7721 και τα κύτταρα SW480 (σχήμα 6Α και 6Β). Ως εκ τούτου, θα μπορούσε να αυξήσει FBP1 παραγωγή ROS οποία ασκούν κυτταροτοξική και προαποπτωτικά λειτουργίες και περιορίζουν ογκογονικότητα και κακοήθη πρόοδο.

Η επίδραση της έκτοπη έκφραση FBP1 στο οξειδωτικό στρες προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής δοκιμασίας, όπως φαίνεται στο (Α) και (Β ). Σταθερά κύτταρα χρωματίστηκαν με DCFH-DA και τότε η κατάσταση οξειδοαναγωγής των κυττάρων μετρήθηκε με κυτταρομετρία ροής.

Η

Συζήτηση

Όλο και περισσότερα νέα γονίδια καταστολέα όγκου έχει βρεθεί ότι είναι αδρανοποιημένο από υπερμεθυλίωση προαγωγού. Ο υποστηρικτής μεθυλίωση Έτσι προτείνεται ως σημαντικός δείκτης για την ταυτοποίηση νέων ογκοκατασταλτικών γονιδίων. Στην παρούσα μελέτη, έχουμε προσδιορίσει ότι FBP1 ήταν συχνά κάτω-ρυθμίζονται 66,7% HCC κυτταρικές γραμμές και ο καρκίνος του παχέος εντέρου κυτταρικές σειρές 100% (Σχήμα 1Α), και το 80% πρωτογενείς HCCs, 100% γαστρικών όγκων και 80 όγκων% του κόλου (Σχήμα 3Α). Η υπερμεθυλίωση περαιτέρω ανιχνεύθηκε στο 66,7% κυτταρικές σειρές HCC και 100% καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρικές σειρές (Σχήμα 2Β), καθώς επίσης και σε πρωτογενείς ιστούς όγκου (Σχήμα 3Β). Σε αντίθεση, FBP1 υπερμεθυλίωση ήταν σχεδόν ανιχνεύεται σε φυσιολογικό ήπαρ κυτταρικές σειρές και περιστασιακά σε ζεύγη γειτονικών ιστών μη-όγκου, γεγονός που υποδηλώνει ένα σημαντικό ρόλο του FBP1 στην παθογένεση της ηπατικής και άλλων πεπτικών καρκίνων. Δείξαμε επίσης ότι η θεραπεία με το αντιδραστήριο απομεθυλίωσης Αζα απορυθμίζεται FBP1 έκφραση σε ταπεινούς εκφράζονται καρκινικά κύτταρα (Εικόνα 1Β) και η κατάσταση μεθυλίωσης επιβεβαιώθηκε με γονιδιωματική αλληλούχιση, υποδεικνύοντας ότι το DNA υπερμεθυλίωση μεσολάβηση FBP1 αδρανοποίηση.

καρκίνος, ο δυναμική των γενετικών και επιγενετικών γονιδιακή σίγηση είναι πολύ διαφορετικά. Σωματικά γενετική μετάλλαξη οδηγεί σε ένα μπλοκ στην παραγωγή λειτουργικής πρωτεΐνης από το μεταλλαγμένο αλληλόμορφο. Εάν ένα επιλεκτικό πλεονέκτημα ανατίθεται στο κύτταρο, τα κύτταρα επεκτείνουν κλωνικά να οδηγήσει σε έναν όγκο στον οποίο όλα τα κύτταρα δεν έχουν την ικανότητα να παράγουν πρωτεΐνη. Σε αντίθεση, επιγενετικώς μεσολαβεί γονιδιακή σίγηση εμφανίζεται σταδιακά. Ξεκινά με μια λεπτή μείωση της μεταγραφής, ενισχύοντας μια μείωση στην προστασία του νησιού CpG από την εξάπλωση των συνοδευτικών ετεροχρωματίνη και μεθυλίωση στο νησί. Αυτή η απώλεια οδηγεί σε σταδιακές αυξήσεις των επί μέρους περιοχών CpG, οι οποίες ποικίλλουν μεταξύ των αντιγράφων του ίδιου γονιδίου σε διαφορετικά κύτταρα. Για παράδειγμα, υψηλότερο επίπεδο FBP1 ανιχνεύθηκε σε κύτταρα Huh7 και HCC-LM3 με υψηλό επίπεδο μεθυλίωσης στην περιοχή του υποκινητή (Σχήμα 1Α και 2Β). Παρά το γεγονός ότι η μεθυλίωση προαγωγού συχνά αδρανοποιούνται FBP1 στο ανθρώπινο ήπαρ και καρκίνο του παχέος εντέρου κυτταρικές σειρές, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε τη συμμετοχή άλλων μηχανισμών που ευθύνονται για την κατασταλτική ρύθμιση FBP1, όπως ελαττώματα ιστόνης αναδιαμόρφωση. Για παράδειγμα, στην Hep3B, Huh7, HCC-LM3, SW480 και κύτταρα HCT116, FBP1 υποκινητή απέτυχε να ρυθμίζεται προς τα πάνω πλήρως μετά τη θεραπεία Αζα (Εικόνα 1Β).

Επιπλέον, για να χρησιμεύσει ως νέος δείκτης για τον ορισμό νέων ογκοκατασταλτικών γονιδίων, υπερμεθυλίωση προαγωγού μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ως ένας ευαίσθητος δείκτης για τη διάγνωση του καρκίνου και πρόβλεψης πρόγνωση [10], [11]. Δυστυχώς, για την έλλειψη μεγάλων αριθμών ιστούς όγκων, δεν θα μπορούσαμε να δοκιμάσει FBP1 μεθυλίωση σε άφθονη ιστούς και περαιτέρω ανάλυση σύνδεσή του με τα κλινικά χαρακτηριστικά, όπως η ηλικία, το φύλο, το βαθμό του όγκου και το ποσοστό επιβίωσης. Έπρεπε να προσδιορίσει έκφραση FBP1 και την κατάσταση μεθυλίωσης σε μόνο 10 ζεύγη των πρωτογενών HCCs, 5 ζεύγη των γαστρικών καρκινικών ιστών και 5 ζεύγη ιστών όγκου κόλου (Σχήμα 3), υποδηλώνοντας ότι λειτουργεί FBP1 ως νέο υποψήφιο ογκοκατασταλτικό μειωτικά μέσω υπερμεθυλίωση προαγωγού στην ήπατος και καρκίνο του παχέος εντέρου. Αυτή είναι και η πρώτη έκθεση για να δείξει ότι FBP1 είναι επιγενετικώς σιγήσει στο ανθρώπινο ήπαρ και καρκινογένεση του παχέος εντέρου. Μόλις μεθυλίωση προαγωγού FBP1 ανιχνεύθηκε σε υψηλή συχνότητα σε ιστούς πρωτογενούς καρκινώματος αλλά όχι μη-καρκινική φυσιολογικό γαστρικό ιστούς, μεθυλίωση προαγωγού FBP1 μπορεί να είναι ένας πιθανός βιολογικός δείκτης για τη διάγνωση του καρκίνου.

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, αποκατάσταση έκφραση FBP1 αξιοσημείωτα κατέστειλε την ανάπτυξη καρκινικών κυττάρων. Ωστόσο, η υποκείμενη μοριακός μηχανισμός υπεύθυνος για FBP1 λειτουργεί ως καταστολέας όγκου παραμένει άγνωστη. Έχει επαληθευτεί [4] που λειτουργεί FBP1 να ανταγωνιστεί γλυκόλυση. Όπως είναι γνωστό, τα καρκινικά κύτταρα έχουν υψηλότερο ποσοστό της αερόβιας γλυκόλυσης, αλλά όχι οξειδωτική φωσφορυλίωση. Η φρουκτόζη-1,6-διφωσφορικής είναι ένα από τα πιο σημαντικά ενδιάμεσα στη γλυκόλυση και το επίπεδο του ελέγχεται κυρίως από την κινάση φρουκτόζης-6-φωσφορικής και φρουκτόζη-1,6-διφωσφορικής. Διαπιστώθηκε ότι η παραγωγή του γαλακτικού μετά την έκφραση FBP1 ήταν σημαντικά μειωμένη, καταδεικνύοντας την καταστολή της αερόβιας γλυκόλυσης με FBP1. Εκτός αυτού, τα σημεία ελέγχου του κυτταρικού κύκλου αποτελούν σημαντικούς μηχανισμούς ελέγχου που εξασφαλίζουν την ορθή εκτέλεση των γεγονότων του κυτταρικού κύκλου. Η καταστολή της ανάπτυξης που επάγεται από έκτοπη έκφραση FBP1 φαίνεται να προκαλείται από διακοπή του κυτταρικού κύκλου, δεδομένου ότι οι αριθμοί των κυττάρων με παρεμπόδιση του κυτταρικού κύκλου (G2-M σύλληψης φάσης) αυξήθηκαν μετά FBP1 επανέκφραση (Σχήμα 5).

Για μεγάλο χρονικό διάστημα, ROS θεωρήθηκαν ογκογόνο δεδομένου ότι εμπλέκεται στην εξέλιξη του καρκίνου και μετάσταση. Επίμονη οξειδωτικό στρες έχει συσχετισθεί με το καρκίνωμα του μαστού και πολλές επιθηλιακών καρκίνων όπως του παχέος εντέρου και τραχήλου [12]. Ωστόσο, πολλές μελέτες έχουν αποδείξει την αιτιολογικός εμπλοκή του σχηματισμού ROS στη μεσολάβηση του καρκινικού κυττάρου απόπτωση που προκαλείται από διάφορες πρότυπες χημειοθεραπευτικών παραγόντων συμπεριλαμβανομένης paclitaxel, cisplatin, bortezomib και ετοποσίδη. Αξιοσημείωτα, έχει αποδειχθεί ότι η σισπλατίνη apoptogenicity εξαρτάται από το σχηματισμό των ROS και εμφανίζεται ανεξάρτητη από βλάβη πυρηνικό DNA, γεγονός που υποδηλώνει ότι apoptogenic οξειδωτικό στρες είναι το κρίσιμο μηχανισμός θανάτου καρκινικών κυττάρων σισπλατίνη που προκαλείται από [13]. Εκτός από την πρόκληση διακοπή του κυτταρικού κύκλου στην φάση S, το σημαντικότερο σε αυτή τη μελέτη, η επίδραση αναστολής αύξησης του FBP1 ως καταστολέας όγκου μπορεί επίσης να προκαλείται μέσω ενίσχυσης της παραγωγής ενδοκυτταρικής ROS (Σχήμα 6). Τα ευρήματά μας ήταν σύμφωνα με τα προηγουμένως δημοσιευμένα δεδομένα [8] δείχνει φρουκτόζη-1,6-διφωσφορικής μεσολαβεί κυτταρικές αποκρίσεις σε βλάβη του DNA και της γήρανσης σε Saccharomyces cerevisiae. Αλλά πώς ROS ασκούν κυτταροτοξική και προαποπτωτική λειτουργίες που θα περιόριζε την ογκογονικότητα και κακοήθη εξέλιξη, προτάθηκε ότι οι μεταβολές στην ομοιόσταση κυτταρική οξειδωτική και τα επίπεδα ROS θα επηρεάσει τη βιωσιμότητα μέσω της διαφοροποίησης οξειδοαναγωγής του μιτοχονδριακού άνοιγμα πόρου μετάβασης διαπερατότητα που οδηγεί σε απελευθέρωση του κυτοχρώματος C, αποπτωσώματος συναρμολόγηση, και ενεργοποίηση των κασπασών δήμιος, αν κυτταρικά επίπεδα ROS φτάσουν σε ένα συγκεκριμένο όριο ασυμβίβαστες με την κυτταρική επιβίωση [7], [14].

Εν ολίγοις, βρήκαμε ότι FBP1 συχνά μειώνεται με υπερμεθυλίωση προαγωγού στην πιο ήπατος και του παχέος εντέρου καρκινικές κυτταρικές γραμμές και πρωτογενείς ιστούς όγκου. Τα αποτελέσματά μας πρότεινε ότι επιγενετικές αδρανοποίηση FBP1 ήταν ένας σημαντικός παράγοντας στο ανθρώπινο ήπαρ και καρκινογένεση του παχέος εντέρου. Δείξαμε επίσης ότι η προαγωγός υπερμεθυλίωση μεσολάβηση αποσιώπηση του FBP1 μπορούσε να αναστραφεί με φαρμακολογικές απομεθυλίωση και αποκατάσταση των FBP1 κατέστειλε την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων μέσω της επαγωγής G2-M κυττάρων φάση σύλληψης κύκλου και την αύξηση της παραγωγής ROS. Ως εκ τούτου, θα είναι χρήσιμο να διερευνηθεί η πιθανή εφαρμογή της FBP1 ως μοριακός δείκτης για την ανίχνευση και τη θεραπεία αυτών των κακοηθειών.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε κ Wang Cheng για τις χρήσιμες συζητήσεις και τεχνικά βοήθεια. Μπορούμε επίσης να ευχαριστήσω τον κ Jiang Jiukun για την παροχή HCC κυτταρικές σειρές MHCC-97H και MHCC-97L και ο Δρ Chen Qian για την παροχή ανθρώπινου στομάχου και του καρκίνου του παχέος εντέρου ιστούς.