Αφηρημένο

Cabozantinib είναι ένας αναστολέας πολλαπλών κινασών τυροσίνης, συμπεριλαμβανομένης της ΚΟΑ και VEGFR2. Σε μια κλινική δοκιμή φάσης ΙΙ σε προχωρημένο καρκίνο του προστάτη (PCA), cabozantinib θεραπεία βελτίωσε σαρώσεις οστού σε 68% των αξιολογήσιμων ασθενών. Οι μελέτες μας με στόχο να προσδιοριστεί η έκφραση των στόχων cabozantinib κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του προστάτη και να εκτιμήσει την αποτελεσματικότητα της στην ορμόνη ευαίσθητη και ευνουχισμός ανθεκτικά PCA σε προκλινικά μοντέλα ενώ οριοθετούν επιπτώσεις του στην όγκων και των οστών. Χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία και μικροσυστοιχίες ιστών που περιέχουν φυσιολογικό προστάτη, πρωτοβάθμια προστάτη και μεταστάσεις μαλακών ιστών και των οστών, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι τα επίπεδα της ΚΟΑ, Ρ-ΚΟΑ, και VEGFR2 αύξηση κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του προστάτη. Τα δεδομένα μας δείχνουν επίσης ότι η έκφραση των στόχων cabozantinib είναι ιδιαίτερα έντονες σε οστικές μεταστάσεις. Να εκτιμήσει την αποτελεσματικότητα cabozantinib για την ανάπτυξη του προστάτη στο περιβάλλον των οστών και των μαλακών ιστών που χρησιμοποιούνται ανδρογόνα-ευαίσθητο LuCaP 23.1 και τον ευνουχισμό ανθεκτικά όγκους C4-2B ΣΕΣΣ.

In vivo

, cabozantinib ανέστειλε την ανάπτυξη του προστάτη στα οστά, καθώς και την ανάπτυξη υποδόριων όγκων. Επιπλέον, η θεραπεία cabozantinib εξασθένησε την απόκριση του οστού στον όγκο και είχε ως αποτέλεσμα αυξημένη κανονικό όγκο των οστών. Συνοπτικά, το πρότυπο έκφρασης των στόχων cabozantinib στην πρωτοβάθμια και ευνουχισμός ανθεκτικά μεταστατικό PCa, και η αποτελεσματικότητά του σε δύο διαφορετικά μοντέλα του προστάτη υποδεικνύουν ότι αυτός ο παράγοντας έχει μια ισχυρή δυνατότητα για την αποτελεσματική θεραπεία του προστάτη σε διάφορα στάδια της νόσου.

Παράθεση: Nguyen HM, Ruppender Ν, Ζανγκ Χ, Μπράουν LG, Gross TS, Morrissey C, et al. (2013) Cabozantinib αναστέλλει την ανάπτυξη των ανδρογόνων-Ευαίσθητο και Ευνουχισμός-Resistant Καρκίνος του προστάτη και επηρεάζει την ανάπλαση του οστού. PLoS ONE 8 (10): e78881. doi: 10.1371 /journal.pone.0078881

Επιμέλεια: Daotai Nie, Southern Illinois University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 15, 2013? Αποδεκτές: 16, Σεπ 2013? Δημοσιεύθηκε: 25 Οκτωβρίου 2013

Copyright: © 2013 Nguyen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι μελέτες σε αυτό το χειρόγραφο ήταν εν μέρει χρηματοδοτείται από Exelixis Inc. Δύο από τους συν-συγγραφείς (DTA και FS) είναι υπάλληλοι της Εξέλιξη. Είχαν εμπλακεί στο σχεδιασμό της μελέτης, τα δεδομένα αναλύσεων και της χειρόγραφης προετοιμασία

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Η μελέτη αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από την Εξέλιξη Α.Ε., τον εργοδότη της Frauke Schimmoller και Dana Τ Aftab. Eva Corey έχει λάβει χρηματοδότηση της έρευνας από την Exelixis, Inc., μέσω συμφωνίας Σύνδεσμοι έρευνα με το Πανεπιστήμιο της Ουάσιγκτον. Δεν υπάρχουν διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα για την ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων που να δηλώνουν. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών, όπως περιγράφεται λεπτομερώς σε απευθείας σύνδεση στον οδηγό για τους συγγραφείς.

Εισαγωγή

Οι μεταστάσεις παραμένει η κύρια αιτία νοσηρότητας και θνησιμότητα σε άνδρες που πάσχουν από προχωρημένο καρκίνο του προστάτη (PCA). Παρά την υπάρχουσα παράγοντες που είναι αποτελεσματικοί έναντι advanced PCa, επιβίωση μετά την ανάπτυξη της ανθεκτικότητας ευνουχισμού παραμένει πολύ μικρή. Ως εκ τούτου, μυθιστόρημα, αποτελεσματικές θεραπείες κατά του μεταστατικού και τον ευνουχισμό ανθεκτική νόσο χρειάζονται επειγόντως.

Cabozantinib είναι ένας ισχυρός αναστολέας των κινασών τυροσίνης, συμπεριλαμβανομένης της ΚΟΑ και VEGF υποδοχέα 2 (VEGFR2). Άλλοι στόχοι αναστέλλεται από cabozantinib περιλαμβάνουν AXL, FLT-3, KIT και RET [1,2]. Οι επιδράσεις του cabozantinib έχουν αξιολογηθεί σε προκλινικό ρύθμιση σε πολλαπλές μορφές καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του γλοιώματος, του μαστού, του πνεύμονα, του παγκρέατος και καρκίνοι. Σε αυτές τις μελέτες, cabozantinib μειωμένη διεισδυτικότητα όγκου, τον πολλαπλασιασμό και την αγγειογένεση, αυξάνοντας παράλληλα την απόπτωση [1,2]. Προκλινικές μελέτες σε ένα μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος νευροενδοκρινείς έχουν δώσει κάποια στοιχεία σχετικά με τους μηχανισμούς της δράσης cabozantinib, γεγονός που υποδηλώνει μια λειτουργική ισορροπία μεταξύ ΚΟΑ και VEGFR2 μέσω της συμμετοχής της HIF1A [2-5]. Ωστόσο, οι μηχανισμοί που αφορούν άλλους στόχους cabozantinib, όπως RET, ένα σημαντικό στόχο στο μυελοειδές καρκίνωμα του θυρεοειδούς [6,7], και AXL ή KIT, δεν έχουν εξεταστεί διεξοδικά ή αναφερθεί. Λόγω των ρόλων αυτών των κινασών στη βιολογία του όγκου, αναστολή cabozantinib οποιασδήποτε ή όλων αυτών των στόχων μπορεί να είναι ευεργετική για τη θεραπεία του προστάτη από την επίθεση καρκινικά κύτταρα σε πολλαπλά μέτωπα. Αυτό το είδος της επίθεσης θα μπορούσε δυνητικά να στοχεύσει αποτελεσματικά ετερογενείς πληθυσμοί κυττάρων, όπως εκείνα του προστάτη.

Cabozantinib εγκρίθηκε πρόσφατα από το FDA για την κλινική θεραπεία της προοδευτικής, μεταστατικού μυελοειδούς καρκίνου του θυρεοειδούς. ακολούθησε η έγκριση από νωρίς τις παρατηρήσεις της δραστηριότητας cabozantinib κατά της νόσου αυτής στην αρχική φάση Ι κλινική μελέτη [5]. Cabozantinib έχει επίσης δείξει ενθαρρυντικά αποτελέσματα σε ασθενείς με μεταστατικό, ο ευνουχισμός ανθεκτικά προστάτη (CRPC) σε μια φάση ΙΙ προσαρμοστική τυχαιοποιημένη μελέτη διακοπή. Ουσιαστικές βελτιώσεις σε σπινθηρογραφήματα οστών παρατηρήθηκαν σε 68% των αξιολογήσιμων ασθενών. Επιπλέον, το 72% εμφάνισε υποχώρηση των βλαβών των μαλακών ιστών, και 67% παρουσίασαν βελτίωση του πόνου των οστών [3]. Ωστόσο, είναι σημαντικό να σημειωθεί ότι στις 12 εβδομάδες, το ποσοστό αντικειμενικής ανταπόκρισης ήταν 5% και 75% των ασθενών παρουσίασαν σταθερή νόσο [3]. Παρ ‘όλα αυτά, δεν υπάρχει άλλο μέσο έχει δείξει αυτό αστερισμό των επιδράσεων σε άνδρες με CRPC, υποδεικνύοντας μια δυνητικά μοναδικό μηχανισμό δράσης για cabozantinib σε αυτή τη ρύθμιση της νόσου.

ΚΟΑ και συνδέτη, αυξητικός παράγοντας ηπατοκυττάρων (HGF), έχουν ενοχοποιηθεί στην πρόοδο πολλών καρκίνων. MET σηματοδότηση προάγει την κυτταρική επιβίωση, τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή, τη μετάσταση, και την αγγειογένεση

in vivo

και

in vitro

[8]. Στο προστάτη, ΚΟΑ εκφράζεται στην πρωτοβάθμια προστάτη, και τα υψηλότερα επίπεδα έκφρασης ανιχνεύονται στον προστάτη μεταστάσεις στα οστά [9-11]. Επιπλέον, MET έκφραση σχετίζεται με προστάτη βαθμό, το σκορ Gleason, και φτωχή πρόγνωση [9], και αυξημένα επίπεδα HGF στο πλάσμα βρέθηκαν να είναι κακό προγνωστικό δείκτη σε ασθενείς προστάτη [12]. Επιπλέον, προκλινικά αποτελέσματα έχουν δείξει στιχομυθία μεταξύ του υποδοχέα ανδρογόνων (AR) και σηματοδότηση ΚΟΑ, με σηματοδότηση AR με αποτέλεσμα την άμεση αναστολή της έκφρασης ΚΟΑ [13,14]. Ως εκ τούτου, προς τα πάνω ρύθμιση του ΚΟΑ σηματοδότησης μπορεί να σχετίζεται με την εξέλιξη της PCA, ώστε να αντίσταση ευνουχισμό. Κατά συνέπεια, πολλαπλές μυθιστόρημα MET αναστολείς έχουν αναπτυχθεί έναντι διαφόρων μορφών καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του προστάτη [15]. Ωστόσο, μια ανασκόπηση της τρέχουσας βιβλιογραφίας έδειξε ανάμεικτα αποτελέσματα της αναστολής ΚΟΑ στον προστάτη. Οι αναστολείς της ΚΟΑ PHA-665752 και PF2341066 ανέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων του προστάτη [16], και νοκ ντάουν της έκφρασης ΚΟΑ από ιό ανέστειλε την ανάπτυξη του προστάτη και των λεμφαδένων (LN) μεταστάσεων [17]. Σε αντίθεση με BMS-777607, άλλο αναστολέα ΚΟΑ, δεν επηρέασε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του προστάτη, αλλά ανέστειλε εισβολής και της μετανάστευσης [18] τους. Στην κλινική, ένας αριθμός παραγόντων που επιλεκτικά στοχεύουν ΚΟΑ έχουν αποτύχει να δείξουν ένα ουσιαστικό κλινικό όφελος σε ασθενείς με CRPC [19,20].

VEGFR2 παίζει επίσης σημαντικό ρόλο σε πολλές μορφές καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του προστάτη. VEGFR σηματοδότησης είναι κεντρικό στη ρύθμιση της αγγειογένεσης και αυξάνεται σε μεταστατικό CRPC βλάβες [21]. Επιπλέον, αυξημένα επίπεδα του VEGF πλάσματος και ούρων που σχετίζεται με κακή πρόγνωση σε PCa [22,23]. Ως εκ τούτου, ο VEGF σηματοδότησης /VEGFR2 υπήρξε στόχος για νέες θεραπείες του καρκίνου. Η αναστολή της οδού της VEGF μειωμένη ανάπτυξη του όγκου και αγγείωση σε ένα μοντέλο καρκίνου του παγκρέατος νησιδίων, αν και αυτή η επίδραση δεν διατηρήθηκε και οι όγκοι τελικά επανεμφανίστηκαν [24]. Μια κλινική δοκιμή της bevacizumab, ένα ανασυνδυασμένο αντι-VEGF μονοκλωνικό αντίσωμα, σε συνδυασμό με χημειοθεραπεία, έδειξε αύξηση της επιβίωσης χωρίς εξέλιξη σε σύγκριση με το εικονικό φάρμακο συν χημειοθεραπεία. Ωστόσο, αυτός ο συνδυασμός θεραπείας δεν βελτίωσε σημαντικά τη συνολική επιβίωση σε σύγκριση με το σκέλος ελέγχου [25]. Οι περιορισμένες απαντήσεις και επίκτητη αντίσταση σε αντι-VEGF θεραπεία δείχνουν ότι ενώ η αγγειογένεση μέσω VEGF είναι ένας σημαντικός στόχος για θεραπείες του καρκίνου, η ανάπτυξη επιτυχών νέων φαρμάκων θα απαιτήσει μια βαθύτερη κατανόηση των παραγόντων που διευκολύνουν διαφυγή από αντι-αγγειογενετική θεραπεία και επιτρέπουν συνεχιζόμενη επιβίωση του όγκου και αγγείωση. Με αυτό κατά νου, οι αυξήσεις στη δραστικότητα ΜΕΤ έχουν ανιχνευθεί σε απόκριση σε αντι-αγγειογενετική θεραπεία και υποξία [26,27]. Η συνεχιζόμενη χορήγηση του sunitinib αναστολέα VEGF αυξημένη έκφραση HGF σε ένα μοντέλο όγκου ποντικού, και sunitinib ήταν αναποτελεσματική όταν HGF συγχορηγήθηκε [28,29]. Επιπλέον, ο VEGF έχει δειχθεί ότι ενεργοποιούν άμεσα MET σηματοδότηση μέσω νευροπιλίνη-1 σε προστάτη ανεξάρτητη από HGF [11]. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν μια συνεργική δράση μεταξύ των οδών σηματοδότησης VEGF και ΚΟΑ και δείχνουν ότι η θεραπεία στοχεύει τόσο από αυτά τα μονοπάτια, όπως cabozantinib, μπορεί να είναι ιδιαίτερα χρήσιμο σε προχωρημένο προστάτη.

Είμαστε με στόχο να προσδιοριστούν τα επίπεδα έκφρασης των πρωτογενών στόχους cabozantinib σε προχωρημένο προστάτη και να αξιολογήσει τις επιπτώσεις της στην υποδόριων όγκων του προστάτη και αυτών που αναπτύσσονται στα οστά, ειδικά σε σχέση με το φορτίο του όγκου και του κύκλου εργασιών των οστών. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι οι στόχοι της cabozantinib εκφράζονται σε προστάτη μεταστάσεις και ότι cabozantinib αναστέλλει την ανάπτυξη των όγκων στα οστά και μαλακούς ιστούς και παρουσιάζει ευεργετικές επιδράσεις στην οστική στις δύο ακέραια και ευνουχισμένα αρσενικά ποντίκια.

Υλικά και Μέθοδοι

Όλοι οι ανθρώπινοι ιστοί ελήφθησαν από ασθενείς που υπέγραψαν τη γραπτή συγκατάθεση και μετά από το Πανεπιστήμιο της έγκρισης της Ουάσιγκτον IRB. Όλες οι μελέτες σε ζώα που περιγράφονται σε αυτό το χειρόγραφο εγκρίθηκαν από και εκτελούνται σύμφωνα με το Πανεπιστήμιο της Ουάσιγκτον Θεσμικών Φροντίδα Ζώων και κατευθυντήριες γραμμές της επιτροπής Χρήσης και ΝΙΗ.

Η ανοσοϊστοχημεία (IHC)

μικροσυστοιχίες ιστών (TMAs) χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί το ΚΟΑ, P-ΜΕΤ, και VEGFR2 ανοσοαντιδραστικότητα σε κανονικό προστάτη (ΝΡ) και προστάτη: 1) UWTMA48: NP και της καλοήθους υπερπλασίας του προστάτη (60 ιστούς, δύο πυρήνες ανά ιστού) και πρωτογενείς PCa (61 ιστούς, δύο πυρήνες ανά ιστός); 2) UWTMA52: ταιριάζουν NP και προστάτη από επαναλαμβανόμενες και μη επαναλαμβανόμενες ασθενείς (63 επαναλαμβανόμενες και 64 μη-επαναλαμβανόμενες ασθενείς, δύο πυρήνες για κάθε NP και προστάτη)? 3) UWTMA21: προστάτη μεταστάσεις από 44 ασθενείς (μεταστάσεις 40 οστά? Μεταστάσεις στο ήπαρ 19? 27 μεταστάσεις LN? Και 7 άλλες μεταστάσεις μαλακών ιστών, δύο πυρήνες ανά ιστό)? και 4) UWTMA48: 24 LuCaP προστάτη μοντέλα ξένου μοσχεύματος από ανέπαφα, ευνουχισμένα και τα ζώα docetaxel έλαβαν (τρεις πυρήνες ανά ιστό). IHC διεξήχθη χρησιμοποιώντας τυπικές διαδικασίες με ανάκτηση αντιγόνου [30]. Ένα μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού αντι-ΜΕΤ αντίσωμα (δώρο από τον Dr. Knudsen [31]), ένα μονοκλωνικό αντίσωμα κουνελιού αντι-Ρ-ΜΕΤ αντίσωμα (Cell Signaling, Boston, ΜΑ), και ένα πολυκλωνικό κουνελιού αντι-VEGFR2 αντίσωμα (Cell Signaling, 55B11, Boston, ΜΑ) χρησιμοποιήθηκαν. Ειδικά ανοσοχρώση αξιολογήθηκε από έναν παθολόγο (ΧΖ) χρησιμοποιώντας μια κλίμακα τριών σημείων: 2 = έντονο, 1 = ελαφρά, και 0 = απουσιάζει, και το ποσοστό των κυττάρων σε κάθε ένταση εκτιμήθηκε.

Η στατιστική ανάλυση των IHC

Για κάθε πυρήνα σε κάθε TMA, ένας δείκτης χρώση κατασκευάστηκε ως σταθμισμένος συνδυασμός των εντάσεων χρώσης 3-σημείο, με βάρη δίνεται από το ποσοστό της χρώσης του ιστού σε κάθε ένταση? δείτε Μέθοδοι S1. Η υπολογισμένη δείκτης χρώσης είναι μία τιμή στο διάστημα [0, 1], όπου το 1 σημαίνει το 100% των κυττάρων χρωματίστηκαν εντατικά. Γραμμική μικτά μοντέλα ήταν ικανός να το δείκτη χρώσης εξαρτάται από την τοποθεσία μετάσταση με τυχαίες επιδράσεις για κάθε ασθενή ή ζώο. Μετά την αξιολόγηση των παραδοχών μοντέλων και τη μετατροπή των δεδομένων ανάλογα με τις ανάγκες, οι εντοιχισμένες μοντέλα που χρησιμοποιούνται για την ποσοτικοποίηση των διαφορών στην ανοσολογική αντίδραση μεταξύ του μεταστατικού τοποθεσίες και να δοκιμάσουν στατιστική σημαντικότητα. Γραφική προφίλ που απεικονίζει τις διανομές χρώση ένταση κατασκευάστηκαν από τον υπολογισμό απλοί μέσοι όροι σε όλες τις μη ελλείποντα τμήματα σε κάθε κατηγορία χρώση. Σύλλογοι μεταξύ της έκφρασης των πρωτεϊνών και κλινικές παράμετροι αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας γραμμικά μοντέλα παλινδρόμησης, και οι ενώσεις με το χρόνο για να PSA υποτροπή αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας την αδυναμία (τυχαίες επιδράσεις αναλογικών κινδύνων κατά Cox) μοντέλα.

Οι κυτταρικές σειρές

C4-2B κύτταρα (Urocor, Inc., Oklahoma City, ΟΚ) και τα κύτταρα MC3T3 (ATCC, Manassas, VA) διατηρήθηκαν υπό τυπικές συνθήκες καλλιέργειας ιστού. C4-2B κύτταρα αναπτύχθηκαν σε RPMI 1640 και 10% ορό εμβρύου βοός (FBS), και τα κύτταρα MC3T3 αναπτύχθηκαν σε DMEM με 10% FBS. Η LuCaP 23,1 προστάτη ξενομόσχευμα διατηρήθηκε και σειριακά σε ποντίκια CB17 SCID [32]

Μελέτες σε ζώα

Μελέτη 1:.. Intratibial LuCaP 23,1, 60 mg /kg cabozantinib

Άθικτα έξι εβδομάδων αρσενικούς μπεζ ποντίκια SCID (Charles River, Wilmington, ΜΑ) έλαβαν ένεση με ένα εναιώρημα μονοκύτταρους LuCaP 23.1 στη δεξιά εγγύς κνήμες όπως δημοσιεύθηκε προηγουμένως [33]. 200000 LuCaP 23.1 κύτταρα ενέθηκαν σε 20 μί RPMI 1640 εντός του δεξιού εγγύς κνήμη. Τα ζώα τυχαιοποιήθηκαν σε μια ομάδα ελέγχου (n = 5) ή cabozantinib ομάδα (n = 5), όταν τα επίπεδα του PSA στον ορό έφθασε ανιχνεύσιμα επίπεδα (0,6 ng /mL, δοκιμασία AxSYM Total PSA, Abbott Laboratories, Abbot Park, IL). Cabozantinib διαλύθηκε σε H

2O και χορηγήθηκαν με στοματικό καθετηριασμό σε 60 mg /kg, πέντε φορές την εβδομάδα για έξι εβδομάδες. Τα ζώα ελέγχου έλαβαν καθετηριασμό με H

μόνο 2O. Ορός επίπεδα PSA και τα βάρη σώματος μετρήθηκαν κάθε εβδομάδα. Μετά τη θυσία, με όγκουε κνήμες και φυσιολογικό ετερόπλευρο κνημών συλλέχθηκαν και επεξεργάστηκαν για αναλύσεις

Μελέτη 2:.. Intratibial C4-2B, 60 mg /kg cabozantinib

Ο σχεδιασμός της μελέτης ήταν η ίδια όπως και για Μελέτη 1, εκτός του ότι τα ζώα ευνουχίστηκαν και τα κύτταρα C4-2B ενέθηκαν σε κνήμες δύο εβδομάδες μετά την ευνουχισμό [34]. C4-2B κύτταρα συλλέχθηκαν όταν ~ 50% συρροή, και 200.000 κύτταρα εγχύθηκαν σε κάθε κνήμη. Τα ζώα τυχαιοποιήθηκαν σε μια ομάδα ελέγχου (n = 11) ή μια ομάδα cabozantinib (n = 10).

Μελέτη 3: Υποδόρια C4-2B, 60 mg /kg cabozantinib

C4-2B. (2×10

6, 1: 1 με Matrigel) κύτταρα εγχύθηκαν υποδορίως σε ευνουχισμένα αρσενικά ποντίκια . Τα ζώα τυχαιοποιήθηκαν σε μια ομάδα ελέγχου (n = 8) ή μία ομάδα cabozantinib (n = 12), όταν ο όγκος του όγκου έφθασε 100 mm

3. 60 mg /kg cabozantinib χορηγήθηκε από του στόματος καθετηριασμό πέντε φορές την εβδομάδα για διάστημα έως εννέα εβδομάδες. Τα ζώα θυσιάστηκαν όταν οι όγκοι έφτασαν τα 1000 mm

3 ή όταν διακυβεύεται ζώα.

Μελέτη 4:. Intratibial LuCaP 23,1, 30 mg /kg cabozantinib

Ο σχεδιασμός της μελέτης ήταν η ίδια όπως στη μελέτη 1, εκτός από το ότι μια χαμηλότερη δόση cabozantinib (30 mg /kg) ήταν χρησιμοποιείται και η θεραπεία διήρκεσε έως 15 εβδομάδες. Τα ζώα χωρίστηκαν τυχαία σε μια ομάδα ελέγχου (n = 10) ή μια ομάδα cabozantinib (n = 10).

μικρο-CT

Ένα Scanco vivaCT 40 υψηλής ανάλυσης σαρωτή μCT χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση ένα τμήμα 0,85 mm που καλύπτει την εγγύς κνήμη μετάφυση του όγκουε και μη όγκουε ετερόπλευρο κνήμες (LuCaP 23.1: n = 3-5? C4-2B: n = 5-10 ανά ομάδα). όγκος των οστών (BV), ο όγκος ιστού (TV), δοκιδωτού διαχωρισμού (Tb.Sp), πάχος δοκιδωτού (Tb.Th) και τον αριθμό δοκιδωτό (Tb.N) προσδιορίσθηκαν και ο BV /TV υπολογίστηκε.

Στατιστικές αναλύσεις των μελετών σε ζώα

Οι διαμήκεις μετρήσεις του όγκου και τα επίπεδα ορού PSA ήταν log-μετασχηματιστεί και να μοντελοποιηθεί χρησιμοποιώντας γραμμική μικτά μοντέλα εξαρτάται από την ομάδα θεραπείας με τυχαίες επιδράσεις για κάθε ζώο? δείτε Μέθοδοι S1. Μετά από μια πρότυπη διαγνωστική αξιολόγηση του μοντέλου ταιριάζει, μπορούμε προσομοιωθεί 1000 σύνολα δεδομένων από κάθε μοντέλο tted fi, υπολογίζεται η εμπειρική μέση και 95% όρια εμπιστοσύνης σε κάθε χρονικό σημείο, και την εκ νέου fi t τα μοντέλα σε αυτά τα σύνολα δεδομένων. Τα τελικά αποτελέσματα αντιπροσωπεύουν μέσο και 95% con fi όρια κατοικίας του 1000 επαναλήψεις εκκίνησης. Μετά πρότυπο έλεγχοι μοντέλου παραδοχές, εφαρμόστηκαν 2 όψεων t-tests για τη δοκιμή για τις διαφορές στο PSA ορού, ο όγκος του όγκου, το σωματικό βάρος και τα επίπεδα του δείκτη χρώσης IHC. Η στατιστική σημαντικότητα των διαφορών στις παραμέτρους των οστών προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα 2 όψεων t-test.

RT-PCR ανάλυση

εκχύλιση RNA, σύνθεση cDNA, και qPCR διεξήχθησαν όπως περιγράφεται προηγουμένως [ ,,,0],35]. Οι εκκινητές και οι συνθήκες ανόπτησης που παρατίθενται στον Πίνακα S1. RNA εκχυλίστηκε από υποδόριους όγκους. Σχετική έκφραση των μηνυμάτων στόχου προσδιορίσθηκε με βάση την τετραπλάσια αραίωση των cDNA βαθμονομητή. Χρησιμοποιήσαμε LNCaP cDNA για RET? PC-3 cDNA για ΚΟΑ, AXL και KIT, και LuCaP 23,1 cDNA για ποντικού VEGFR2 (VEGFR2m). Ειδικά σήματα ομαλοποιήθηκαν στα επίπεδα RPL13a.

Πειράματα in vitro

Εκτιμήθηκαν οι επιδράσεις της cabozantinib στον πολλαπλασιασμό, ανοργανοποίηση, αλκαλική φωσφατάση (ALP) δραστηριότητα, και AR μεταγραφική δραστηριότητα

in vitro

όπως περιγράφηκε προηγουμένως [36]? δείτε Μέθοδοι S1.

Αποτελέσματα

Τα επίπεδα της ΚΟΑ, P-ΚΟΑ και VEGFR2 κατά τη διάρκεια του προστάτη εξέλιξη

Για την αντιμετώπιση εάν οι στόχοι cabozantinib εκφράζονται σε προστάτη, αξιολογήσαμε τα επίπεδα ΚΟΑ, P-ΚΟΑ, και VEGFR2 σε ιστούς που εκπροσωπούν κανονικό προστάτη και τα διάφορα στάδια της εξέλιξης του προστάτη.

NP vs πρωτοβάθμια προστάτη

ΚΟΑ και P-ΚΟΑ:. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η ΚΟΑ είναι παρούσα σε υψηλά επίπεδα στο ΝΡ και πρωτογενή κύτταρα του προστάτη, αλλά υπήρχε μόνο οριακή απόδειξη των διαφορών μεταξύ των αυτοί οι ιστοί (μέση χρώση δείκτη NP: 0.96, 95% CI 0,93-0,98? προστάτη: 0.92, 95% CI 0,88 – 0,96? P = 0,06)? βλέπε Εικόνα S1. Παρά τα υψηλά επίπεδα της ΚΟΑ στο NP και προστάτη, ελάχιστη ανοσολογική αντίδραση του Ρ-ΚΟΑ ανιχνεύθηκε σε αυτούς τους ιστούς, και δεν υπήρχε καμία απόδειξη των διαφορών μεταξύ αυτών των ιστών (μέση χρώση δείκτη NP: 0.16, 95% CI 0,00 – 0,32? Προστάτη: 0,11? 95% CI 0,00 – 0,27? P = 0,49)? βλέπε Εικόνα S1. Δεν υπήρξε καμία ένδειξη ότι η ΚΟΑ ή P-ΚΟΑ ανοσολογική σχετίστηκε με τον κίνδυνο της βιοχημικής υποτροπής μετά τον έλεγχο για την ηλικία, το Gleason ποσό, και ο όγκος του όγκου

VEGFR2:. Κανονική επιθηλιακά κύτταρα του προστάτη και των κυττάρων του προστάτη οι οποίοι εμφάνισαν χαμηλή VEGFR2 ανοσολογική αντίδραση και υπήρξε οριακή απόδειξη της τριτοβάθμιας VEGFR2 στον προστάτη vs NP (μέση χρώση δείκτη NP: 0.03, 95% CI 0,00 – 0,05? προστάτη: 0.07, 95% CI 0,03 – 0,11? P = 0,02)? βλέπε Εικόνα S1. Ισχυρή χρώση ήταν παρούσα στο στρώμα και στο αγγειακό σύστημα των δύο ΝΡ και PCa. Παρόμοια με ΜΕΤ, δεν υπήρχε απόδειξη ότι η έκφραση VEGFR2 συσχετίστηκε με κίνδυνο υποτροπής PSA μετά τον έλεγχο για την ηλικία, Gleason άθροισμα, και ο όγκος του όγκου.

Πρωτοβάθμια του προστάτη vs μεταστάσεις.

Λόγω των αναφερθεί αυξήσεις της ΚΟΑ στον προστάτη μεταστάσεων [12], στόχος μας ήταν να αξιολογηθεί κατά πόσον η αύξηση αυτή μπορεί να ανιχνευθεί σε ιστούς από ομάδα των ασθενών μας. Για τη σύγκριση αυτή, χρησιμοποιήσαμε τα αποτελέσματα από μεταστάσεις σε TMA 21 και συνδυασμένα αποτελέσματα των ιστών προστάτη από UWTMA48 και UWTMA52 (127 ασθενείς). ΚΟΑ ανιχνεύθηκε σε προστάτη μεταστάσεις με πολύ ισχυρά στοιχεία της τριτοβάθμιας χρώση ανοσολογική αντίδραση σε οστικές μεταστάσεις (ΒΜ) σε σύγκριση με πρωτογενή προστάτη (μέση χρώση δείκτη πρωτογενούς προστάτη: 0.83, 95% CI 0,82 – 0,87? BM: 0.94, 95% CI 0,89 – 0,98 ? Ρ = 0.0002)? βλέπε Σχήμα 1. Σε αντίθεση, τα επίπεδα ΚΟΑ ήταν σημαντικά χαμηλότερα σε όλες τις μεταστάσεις μαλακών ιστών σε σύγκριση με πρωτογενή προστάτη (μέση χρώση του ήπατος δείκτη: 0.70, 95% CI 0,62 έως 0,77, P & lt? 0,0001? LN: 0.78, 95% CI 0,71 – 0,83 , Ρ & lt? 0,0001? άλλα μαλακά:. 0.79, 95% CI 0.67-0.93, P = 0.01)

IHC και αναλύσεις διεξήχθησαν όπως περιγράφεται στο τμήμα των Μεθόδων. Γραφική προφίλ που απεικονίζει διανομές χρώση ένταση κατασκευάστηκαν από τον υπολογισμό απλοί μέσοι όροι σε όλες τις μη ελλείποντα τμήματα σε κάθε κατηγορία χρώση. Σε κάθε χώρο, ο μέσος δείκτης χρώση χαρακτηρίζεται από μια γεμάτη πορτοκαλί κύκλο και πορτοκαλί μπάρες αντιπροσωπεύουν το 95% ΠΙ. Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα χρώση δείχνεται για κάθε πρωτεΐνη. Α ΚΟΑ εκφράζεται έντονα στην πρωτοβάθμια και στη μεταστατική προστάτη, αν και είναι σημαντικά αυξημένη σε ΒΜ και μειώθηκε σε μεταστάσεις μαλακών ιστών έναντι πρωτογενούς ΣΕΣΣ. επίπεδα Β Ρ-MET είναι υψηλότερες σε ΒΜ, LN και άλλες μεταστάσεις μαλακών ιστών, ενώ καμία αλλαγή δεν ανιχνεύθηκε σε μεταστάσεις στο ήπαρ σε σύγκριση με πρωτογενή ΣΕΣΣ. έκφραση Γ VEGFR2 είναι σημαντικά αυξημένη σε όλη προστάτη μεταστατικές βλάβες σε σύγκριση με πρωτογενή ΣΕΣΣ. Εικόνες ελήφθησαν σε 400 χ μεγέθυνση

Η

P-ΚΟΑ ανιχνεύθηκε σε προστάτη μεταστάσεις με ισχυρές ενδείξεις της τριτοβάθμιας ανοσολογική αντίδραση σε ΒΜ σε σύγκριση με πρωτογενή προστάτη (μέση χρώση του δείκτη πρωτογενών του προστάτη:. 0,22, 95% CI 0,17 -0.26? BM: 0,37, 95% CI 0.30-0.45? P = 0,003)? βλέπε Εικόνα 1. επίπεδα P-ΚΟΑ ήταν επίσης υψηλότερο σε όλες τις μεταστάσεις μαλακών ιστών σε σύγκριση με πρωτογενή προστάτη, αν και δεν είναι όλες οι διαφορές ήταν σημαντικές (μέσος όρος χρώση του ήπατος δείκτη: 0.28, 95% CI 0,13 έως 0,38, P = 0,35? LN: 0,46, 95% CI 0,35 έως 0,56, P = 0.0001? άλλα μαλακά:. 0,51, 95% CI 0,27 έως 0,70, P = 0,006)

VEGFR2 ανιχνεύθηκε σε προστάτη μεταστάσεις με πολύ ισχυρά στοιχεία της τριτοβάθμιας ανοσολογική αντίδραση σε ΒΜ σε σύγκριση στην πρωτοβάθμια προστάτη (μέση χρώση δείκτη πρωτογενούς προστάτη: 0.10, 95% CI 0,07 – 0,14? BM: 0.25, 95% CI 0,19 – 0,31? P = 0.0001)? βλέπε Εικόνα 1. Τα επίπεδα του VEGFR2 ήταν επίσης υψηλότερο σε όλες τις μεταστάσεις μαλακών ιστών σε σύγκριση με πρωτογενή προστάτη, αν και δεν είναι όλες οι διαφορές ήταν σημαντικές (μέσος όρος χρώση του ήπατος δείκτη: 0.29, 95% CI 0,17 έως 0,38, P = 0.0005? LN: 0,40, 95% CI 0,29 έως 0,46, P & lt? 0,0001? άλλο μαλακό: 0.19, 95% CI 0,04 έως 0,38, P = 0,28)

προστάτη μεταστάσεις

Από το μικροπεριβάλλον επηρεάζει την έκφραση του γονιδίου.. προφίλ των καρκινικών κυττάρων, αναλύσαμε επίσης τα MET επίπεδα έκφρασης με μεταστατικό ιστοσελίδα. Τα επίπεδα της ΚΟΑ ήταν σημαντικά υψηλότερα σε ΒΜ σε σύγκριση με το συκώτι, LN, και άλλες μεταστάσεις μαλακών ιστών (μέση χρώση δείκτη BM: 0.94, 95% CI 0,91 – 0,98? Σημαίνει χρώση του ήπατος δείκτη: 0.59, 95% CI 0,52 έως 0,66, P & lt? 0,0001? LN: 0.67, 95% CI 0,61 έως 0,73, P & lt? 0,0001? άλλα μαλακά:. 0,68, 95% CI 0,57 έως 0,83, P & lt? 0.0001)

Τα επίπεδα του P-ΚΟΑ ήταν ασθενώς ή μη-σημαντικά διαφορετική σε ΒΜ σε σύγκριση με το ήπαρ, LN, και άλλες μεταστάσεις μαλακών ιστών (μέση χρώση δείκτης BM: 0.37, 95% CI 0,32 – 0,44? ήπατος: 0.28, 95% CI 0,13 έως 0,36, Ρ = 0,10? LN : 0,46, 95% CI 0,34 έως 0,53, P = 0,05? μαλακό άλλων: 51%, 95% CI 0,27 – 0,69)? βλέπε Σχήμα 1. Ωστόσο, λόγω των διαφορετικών επεξεργασία των ΒΜ και μεταστάσεων μαλακών ιστών (επεξεργασία ΒΜ απαιτεί απασβέστωση) και χαμηλή σταθερότητα της φωσφορυλίωσης υπό όξινες συνθήκες, τα πραγματικά επίπεδα της Ρ-ΜΕΤ μπορεί στην πραγματικότητα να είναι υψηλότερη στο ΒΜ από τα δεδομένα μας υποδεικνύουν.

Τα επίπεδα VEGFR2 ήταν σημαντικά διαφορετικό σε ΒΜ σε σύγκριση με μεταστάσεις LN (μέση χρώση δείκτη BM: 0.25, 95% CI 0,21 – 0,31? LN: 0.40, 95% CI 0.30-0.45, P & lt? 0,0001), αλλά όχι το ήπαρ ή άλλο μεταστάσεις μαλακών ιστών.

Σύλλογοι μεταξύ του ΚΟΑ, Ρ-ΚΟΑ, και ο δείκτης χρώση VEGFR2 και AR, PSA και PSMA.

Παρεμβολή μεταξύ AR, ΚΟΑ και σηματοδότηση VEGFR2 έχει αναφερθεί σε CRPC (13,14 ). Ως εκ τούτου, αξιολογήσαμε τις ενώσεις μεταξύ ΚΟΑ, P-ΚΟΑ και χρώση VEGFR2 (που καθορίζεται στην παρούσα μελέτη) και AR, PSA, και χρώση PSMA (από τα ιστορικά δεδομένα) σε μεταστάσεις. Η ανάλυσή μας, η οποία βασίζεται σε ένα γραμμικό μικτό μοντέλο (βλέπε Methods S1), Δεν ανιχνεύθηκαν σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ οποιωνδήποτε από τα ζεύγη των επιλεγμένων πρωτεϊνών σε ΒΜ ή μεταστάσεις μαλακών ιστών (δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

στόχων Cabozantinib στον προστάτη ξενομοσχεύματα

qPCR.

Για να προσδιοριστεί η έκφραση των επιλεγμένων στόχων cabozantinib στη ΣΕΣ, αξιολογήσαμε τα επίπεδα της ΚΟΑ, VEGFR2 ποντικού, AXL, KIT, και RET mRNA σε 24 διαφορετικές ξενομοσχεύματα LuCaP προστάτη που το μοντέλο του σύνεγγυς την ετερογένεια του προστάτη στους ανθρώπους [37]. αποτελέσματα qPCR μας δείχνουν ότι όλοι οι στόχοι cabozantinib εκφράζεται σε αυτά τα μοντέλα σε διάφορα επίπεδα? βλέπε Εικόνα S2A. Διαστρωμάτωσης των μοντέλων με νευροενδοκρινείς όγκους (ΒΑ) και το αδενοκαρκίνωμα (AD) αποκάλυψε υψηλή έως μέτρια αποδείξεις υψηλότερα επίπεδα όλων των στόχων σε μοντέλα ΝΕ LuCaP (n = 4) σε σύγκριση με τα μοντέλα AD (n = 20), βλέπε Εικόνα S2B. Από στιχομυθία μεταξύ AR, ΚΟΑ, και σηματοδότηση VEGFR2 έχει αναφερθεί, εξετάσαμε επίσης αν η έκφραση των στόχων cabozantinib συσχετίζεται με την έκφραση του AR ή απαντήσεις σε ευνουχισμό. Για το σκοπό αυτό, θα ταξινομούνται ως ξενομοσχεύματα «ιδιαίτερα αποκρίνεται σε ευνουχισμό» αν ευνουχισμός οδήγησε σε περισσότερο από 3-φορές όφελος επιβίωσης. Οι αναλύσεις μας δεν αποκάλυψε σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ των επιπέδων AR και τους στόχους cabozantinib. Επιπλέον, ενώ τα μέσα επίπεδα mRNA των στόχων cabozantinib ήταν υψηλότερες σε μοντέλα που δεν ανταποκρίνονται καλά σε ευνουχισμό, οι διαφορές αυτές δεν φτάνουν σημασία.

IHC.

Για να αποκτήσουν μια καλύτερη κατανόηση των cabozantinib του πιθανές επιπτώσεις σε ασθενείς με προχωρημένο CRPC που βρίσκονται σε ADT ή /και υπό αγωγή με docetaxel, εξετάσαμε τα επίπεδα της ΚΟΑ, Ρ-ΚΟΑ, και VEGFR2 σε όγκους LuCaP από ανέπαφα, ευνουχίζεται, και docetaxel-μεταχείρισης των ζώων. Οι αναλύσεις μας δείχνουν μέτρια ενδείξεις ότι τα επίπεδα έκφρασης ΚΟΑ και P-MET συσχετίζονται αρνητικά σε όλους τους τύπους όγκου (R = 0,29? P = 0,02), και περιθωριακή απόδειξη ότι η μέση ΚΟΑ και P-MET δείκτες χρώση είναι 5-6% υψηλότερα σε όγκους μετά τη θεραπεία docetaxel σε σχέση με όγκους από άθικτα ζώα (Ρ = 0,08 και Ρ = 0,05, αντίστοιχα). Οι αναλύσεις μας δεν αποκάλυψε κανένα αποδεικτικό στοιχείο ότι τα επίπεδα έκφρασης για οποιοδήποτε άλλο ζεύγος των πρωτεϊνών συσχετίζονται σε ολόκληρη ή εντός τύπους όγκων (όλα τα P & gt? 0,14), που σημαίνει ΚΟΑ και P-MET δείκτες χρώσης είναι διαφορετικά μεταξύ τους όγκους που συλλέγονται από ανέπαφη και ευνουχίσει ζώα, ή ότι σημαίνει ΚΟΑ και P-MET δείκτες χρώση διαφέρουν σημαντικά μεταξύ ξενομοσχευμάτων LuCaP που εμφανίζουν υψηλή και χαμηλή ανταπόκριση σε ευνουχισμό? βλέπε Εικόνα S2C. VEGFR2 δεν παρουσίασαν καμία σημαντική ανοσοαντιδραστικότητα σε κύτταρα όγκου σε μοντέλα μας.

Τα προκλινικά Μελέτες Αποτελεσματικότητας

Για να αυξήσετε την κατανόηση των επιδράσεων cabozantinib για προστάτη και οστικές μεταστάσεις, εξετάσαμε τις επιπτώσεις της στην PSA ορού, το σωματικό βάρος, και ο κύκλος εργασιών των οστών σε μοντέλα ανάπτυξης προστάτη στα οστά. Ομοίως, αξιολογήσαμε αλλαγές στο PSA ορού, ο όγκος του όγκου, και το σωματικό βάρος σε απόκριση σε θεραπεία σε ζώα που φέρουν υποδόριους όγκους.

Cabozantinib αναστέλλει την ανάπτυξη των όγκων στα οστά.

Για να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα του cabozantinib για την ανάπτυξη του προστάτη στα οστά, θα αντιμετωπίζονται άθικτα ή να ευνουχίζεται τα ζώα που φέρουν intratibial LuCaP 23.1 ή C4-2B όγκων, αντίστοιχα. Επιλέξαμε αυτά τα δύο μοντέλα επειδή LuCaP 23.1 προκαλεί μια έντονη οστεοβλαστική αντίδραση και C4-2B προκαλεί μια μικτή απάντηση οστεοβλαστικά /οστεολυτικές. Επιπλέον, LuCaP 23,1 αντιπροσωπεύει ανδρογόνα-ευαίσθητο προστάτη, ενώ C4-2B αντιπροσωπεύει ευνουχισμό ανθεκτική νόσο. αποτελέσματα qPCR μας δείχνουν ότι η ΚΟΑ, VEGFR2m, KIT, RET και AXL εκφράζονται σε LuCaP 23.1. Σε C4-2B όγκων που ανιχνεύονται VEGFR2m, AXL και RET, πολύ χαμηλά επίπεδα της ΚΟΑ και κανένα σήμα για το ΚΙΤ (Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται στο Σχήμα 2Α). Η έκφραση αυτών των υποδοχέων σε LuCaP 23,1 και C4-2B όγκων υποστηρίζουν την υπόθεση ότι cabozantinib θα αλλάξει την βιολογία των όγκων αυτών. Cabozantinib (60 mg /kg) ανέστειλε την ανάπτυξη και των δύο όγκων στα οστά, όπως αποδεικνύεται από μειώσεις στα επίπεδα του PSA στον ορό? βλέπε Εικόνα 2Β. Εβδομαδιαίες αλλαγές στην PSA στον ορό ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των ομάδων ελέγχου και cabozantinib στο μοντέλο LuCaP 23.1 (P & lt? 0,0001), όπου PSA αυξήθηκε κατά 76% την εβδομάδα στην ομάδα ελέγχου, αλλά κατά 0,2% την εβδομάδα στην ομάδα cabozantinib. αλλαγές PSA ήταν επίσης σημαντικά διαφορετική μεταξύ των ομάδων ελέγχου και cabozantinib στο μοντέλο C4-2B (P = 0.0066), όπου PSA αυξήθηκε κατά 35% την εβδομάδα στην ομάδα ελέγχου, αλλά μειώθηκαν κατά 2,9% την εβδομάδα στην ομάδα cabozantinib. Cabozantinib επίσης ανέστειλε πολλαπλασιασμό των υπόλοιπων βιώσιμων κυττάρων στους όγκους με βάση την χρώση BrdU? βλέπε Εικόνα 2C. Η αναστολή της εξέλιξης του όγκου ήταν επίσης αισθητή όταν αξιολογείται AR και PSA ανοσολογική αντίδραση? LuCaP 23,1 και C4-2B όγκους από ζώα που υπέστησαν αγωγή με cabozantinib έδειξε λιγότερο έντονη AR και PSA χρώση στα υπόλοιπα κύτταρα όγκου καθώς και μεγάλες νεκρωτικές περιοχές? βλέπε Εικόνα 2D & amp? Κύτταρα Ε C4-2B εκφράζουν χαμηλότερα επίπεδα της PSA, όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Β και ότι αντικατοπτρίζεται επίσης σε πολύ μικρότερες ανοσοαντιδραστικότητα PSA σε αυτά τα κύτταρα όγκου.

Α. Τα επίπεδα των υποδοχέων cabozantinib στην LuCaP 23.1 και C4-2B υποδόρια όγκων. qPCR χρησιμοποιήθηκε για RNA που απομονώθηκε από υποδόρια όγκων για τον προσδιορισμό των επιπέδων έκφρασης της ΚΟΑ, VEGFR2m, AXL, RET και KIT. Για τη βαθμονόμηση του σήματος που χρησιμοποιείται τέσσερις φορές αραίωση των LNCaP cDNA (RET), PC-3 cDNA (ΚΟΑ, AXL, KIT) και LuCaP 23.1 (VEGFR2m). Η επιλογή του cDNA βαθμονομητή βασίστηκε σε σήμα για κάθε συγκεκριμένο μήνυμα. Σήμα ομαλοποιήθηκε στο γονίδιο καθαριότητας RPL13a. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι LuCaP 23,1 όγκοι εκφράζουν το σύνολο των στόχων cabozantinib και C4-2B όγκοι εκφράζουν VEGFR2m, AXL και RET, τα χαμηλά επίπεδα της ΚΟΑ, και δεν KIT. Σε αυτά τα πειράματα qPCR, μετρήσαμε τα σχετικά επίπεδα των μεταγραφών στόχου και όχι την πραγματική τους αριθμούς τους, ως εκ τούτου δεν μπορούμε να συγκρίνουμε τα επίπεδα έκφρασης των διαφορετικών στόχων προς το άλλο, και να σχολιάσει αν RET, η οποία έδωσε το υψηλότερο σήμα, μπορεί να εκφράζονται σε υψηλότερα αντίγραφο αριθμός vs ΚΟΑ, και ως εκ τούτου είναι πιο σημαντικό σε αυτά τα μοντέλα.

Β. Γραμμικά μοντέλα ανάπτυξης PSA δείχνουν ότι cabozantinib μειώνει τα επίπεδα του PSA και στα δύο μοντέλα C4-2B ανδρογόνα-ευαίσθητο LuCaP 23.1 και τον ευνουχισμό ανθεκτικά. Γ BrdU χρώση των κνημών δείχνει ότι cabozantinib μειώνει τον πολλαπλασιασμό των ανδρογόνων ευαίσθητη και ευνουχισμός ανθεκτικά κύτταρα όγκου στο οστό, 2 όψεων t-test χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η σημαντικότητα των διαφορών. D & amp? Ε AR και η PSA ανοσολογική αντίδραση είναι παρούσα σε όγκους ελέγχου. θεραπεία Cabozantinib οδήγησε σε μειώσεις στην AR και PSA ανοσοαντιδραστικότητα στα δύο μοντέλα (LuCaP 23.1 (D) και C4-2B (Ε)). C4-2B κύτταρα εκφράζουν χαμηλότερα επίπεδα του PSA σε σύγκριση με το 23,1 LuCaP, και η χρώση είναι ασθενέστερη σε αυτά όγκου. Επιπλέον, οι μεγάλες νεκρωτικές περιοχές του όγκου είναι παρόντες στο κατεργασμένο κνήμες (σημειώνονται με κόκκινο asterics). F. 60 mg /kg cabozantinib είναι καλά ανεκτή μέχρι και 4 εβδομάδες σε ανδρογόνο ευαίσθητα LuCaP 23,1 ζώα. Μετά την περίοδο αυτή σημαντική BW μειώνεται έναντι του ελέγχου ανιχνεύθηκαν (έως 17%), αλλά λόγω της διακύμανσης και του αριθμού των ζώων, αυτές οι μειώσεις δεν έφθασαν σημασία. 60 mg /kg cabozantinib είναι καλά ανεκτή μέχρι 5 εβδομάδες σε μοντέλο C4-2B ευνουχισμό ανθεκτικά, με μία σημαντική μείωση κατά 12% κατά την εβδομάδα 6. Η σημαντικότητα προσδιορίστηκε με σύγκριση εγγραφή BW να BW σε κάθε εβδομάδα χρησιμοποιώντας 2 όψεων t- δοκιμή. Η μέση ± SEM των ομάδων σχεδιάζεται.

Η

Cabozantinib μεταβάλλει την αναδιαμόρφωση των οστών σε όγκουε οστών.

Πραγματοποιήσαμε μια λεπτομερή ανάλυση των αποτελεσμάτων cabozantinib σχετικά με το μικροπεριβάλλον του οστού /όγκου από μCT. Έχουμε επιλέξει αυτό το είδος της ανάλυσης αντί για ανάλυση ιστομορφομετρία επειδή μCT αξιολογεί το σύνολο της κνήμης σε 3D, ενώ οι αναλύσεις ιστομορφομετρίας γίνεται συνήθως σε ένα μόνο 2D διαμήκεις τμήμα της κνήμης. Η ανάλυση του δοκιδώδους οστού έδειξαν ότι LuCaP 23,1 ανάπτυξη οδηγεί σε σημαντικές αυξήσεις του όγκου των οστών (με όγκουε κνήμες: 0.42 ± 0.06 (μέση τιμή ± SEM)? Κανονική κνήμες: 0,09 ± 0,01? 5-πλάσια αύξηση της BV /TV, Ρ = 0,02) . Οι αυξήσεις αυτές εξασθένησαν από cabozantinib, με αποτέλεσμα τη μείωση κατά 52% BV /TV σε σύγκριση με τον έλεγχο LuCaP 23,1 κνημών. Η μείωση αυτή αντανακλάται και σε διαφορετική σειρά δοκιδώδους (Tb.N), πάχος των δοκίδων (Tb.Th), και ο διαχωρισμός των δοκιδωτών (Tb.Sp)? βλέπε Πίνακα 1. Η αύξηση του C4-2B στα οστά είχε επίσης ως αποτέλεσμα μέτρια απόδειξη της BV /TV αυξήσεις (αύξηση κατά 40%, Ρ = 0,06).