Αφηρημένο

Ιστορικό

Τα microRNAs (miRNAs) είναι μια κατηγορία μικρό μη κωδικοποιητική RNAs να ρυθμίζουν κυτταρική διαφοροποίηση, τον πολλαπλασιασμό, την ανάπτυξη, και την απόπτωση. Η πολυμορφισμού ενός νουκλεοτιδίου (SNP) rs895819 βρίσκεται στο τερματικό βρόχο του

προ-miR-27a

. Εδώ, έχουμε ως στόχο να διερευνήσει κατά πόσον rs895819 SNP συνδέθηκε με την ανάπτυξη του καρκίνου των νεφρών (RCC) σε ένα κινεζικό πληθυσμό.

Μέθοδοι

Σε αυτή τη μελέτη ασθενών-μαρτύρων, που προσλαμβάνονται 594 RCC ασθενών και 600 του καρκίνου χωρίς ελέγχους με συχνότητα συνδυάζεται με την ηλικία και το φύλο. Εμείς γονότυπος αυτού του πολυμορφισμού χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία TaqMan και αξιολόγησε την επίδραση αυτού του πολυμορφισμού στην επιβίωση RCC. Μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για να αξιολογήσει τις γενετικές επιδράσεις στην ανάπτυξη του RCC και των αλληλεπιδράσεων μεταξύ rs895819 πολυμορφισμού και τους παράγοντες κινδύνου.

Αποτελέσματα

Σε σύγκριση με AA ομοζυγώτες, τα άτομα που μεταφέρουν γονότυπους AG /GG είχε στατιστικά σημαντική μειωμένη ευαισθησία στο RCC (προσαρμογή OR = 0,71, 95% CI = 0,56 – 0,90). Επιπλέον, γονότυποι AG /GG συσχετίστηκαν με μειωμένη ευαισθησία RCC σε εντοπισμένες κλινικό στάδιο (προσαρμογή OR = 0,71, 95% CI = 0,55 – 0,91), και παρόμοιες επιδράσεις παρατηρήθηκαν σε καλά διαφοροποιημένα και ελάχιστα διαφοροποιημένο RCC (προσαρμογή OR = 0,71, 95 % CI = 0,55 – 0,93 για τα καλά διαφοροποιημένο, προσαρμοσμένο OR = 0.51, 95% CI = 0,28 – 0,93 για τα φτωχά διαφοροποιημένα). Παρατηρήσαμε επίσης ότι rs895819 είχε πολλαπλασιαστική αλληλεπίδραση με την ηλικία και την υπέρταση. Ωστόσο, ο πολυμορφισμός δεν επηρέασε την επιβίωση του RCC.

Συμπέρασμα

Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμός μπορεί να προβλέψει RCC κίνδυνο σε κινεζικά πληθυσμός. Μεγαλύτερες με βάση τον πληθυσμό προοπτικές μελέτες θα πρέπει να χρησιμοποιείται για την επικύρωση ευρήματά μας

Παράθεση:. Shi D, Li P, Ma L, Zhong D, Chu Η, Γιαν F, et al. (2012) Μια γενετική παραλλαγή στο

προ-miR-27a

συνδέεται με μια μειωμένη νεφρική Κίνδυνος Cancer Cell σε ένα κινεζικό πληθυσμό. PLoS ONE 7 (10): e46566. doi: 10.1371 /journal.pone.0046566

Επιμέλεια: Rui Medeiros, IPO, Inst Λιμάνι Ογκολογίας, Πορτογαλία

Ελήφθη: 19 του Ιούνη 2012? Αποδεκτές: 31, Αυγούστου 2012? Δημοσιεύθηκε: 30 Οκτώβρη 2012

Copyright: © 2012 Shi et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη εν μέρει υποστηρίζεται από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (81230068, 30972444, 81102089 και 81201571), το Πρόγραμμα Κλειδί του Ιδρύματος Φυσικών Επιστημών της επαρχίας Jiangsu (BK2010080), και το Εθνικό Ίδρυμα Επιστημών της επαρχίας Jiangsu (BK2011773 και BK2011775), ο Τσιν Lan Πρόγραμμα της Jiangsu Provincial Υπουργείο Παιδείας, και η προτεραιότητα για την ανάπτυξη Ακαδημαϊκό Πρόγραμμα Jiangsu Ιδρυμάτων Ανώτατης Εκπαίδευσης (Δημόσιας Υγείας και προληπτικής Ιατρικής). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο νεφρών (RCC) αντιπροσωπεύει περισσότερο από το 90% του νεφρού καρκινωμάτων, καθώς και σαφείς-κυττάρων νεφρικό καρκίνωμα είναι ο πιο κοινός τύπος στο RCC [1], [2]. Οι συχνότητες εμφάνισης RCC ποικίλλουν σημαντικά σε όλο τον κόσμο, με τα υψηλότερα ποσοστά στην Ευρώπη και τη Βόρεια Αμερική και τα χαμηλότερα ποσοστά στην Ασία και τη Νότια Αμερική [1]. Ποσοστά για τις γυναίκες είναι γενικά το μισό περίπου από εκείνους στους άνδρες [1]. Αν και οι λίγοι παράγοντες κινδύνου που καθορίστηκε για RCC, υπάρχουν μια σειρά από προδιαθέτουν συνθήκες που είναι γνωστό ότι σχετίζονται με την ανάπτυξη του RCC, όπως το κάπνισμα, η παχυσαρκία, η υπέρταση, ο διαβήτης, το οικογενειακό ιστορικό καρκίνου, και άλλοι [3], [4], [5]. Ωστόσο, μόνο ένα μέρος των ατόμων που εκτίθενται σε αυτούς τους παράγοντες κινδύνου θα αναπτυχθούν RCC στο χρόνο ζωής τους, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι ατομικές διαφορές συμπεριλαμβανομένων παραγόντων γενετική ευαισθησία μπορεί να είναι μία από τις πιο κρίσιμες παράγοντες σε κελί καρκινογένεση νεφρική.

Τα microRNAs ( miRNAs) είναι μία κατηγορία ενδογενών μικρών και μη-κωδικοποίησης RNAs (~ 22 nt), τα οποία αρχικά μεταγράφεται από γονιδιακό DNA σε μεγάλες πρωτογενείς μεταγραφές (PRI-miRNAs) και στη συνέχεια διασπώνται με πυρηνικό Drosha σε 60-70 nt hairpin- σχήματος πρόδρομος RNAs (προ-miRNAs) [6], [7]. Τα προ-miRNAs εξάγονται στο κυτταρόπλασμα από Exportin-5 και υποβάλλονται σε περαιτέρω επεξεργασία στο -22 nt ωριμάζουν miRNA δίπολα με τη διάσπαση του Dicer [8], [9]. Σε συνεργασία με το RNA επαγόμενη φίμωση σύμπλοκο (RISC), miRNAs μπορούν να προκαλέσουν αποικοδόμηση του mRNA ή μεταφραστικά καταστολή με σύνδεση προς την 3′-αμετάφραστη περιοχή των γονιδίων στόχων τους στο μετα-μεταγραφικό επίπεδο [10]. Μέχρι σήμερα, έχει υπολογιστεί ότι miRNAs ρυθμίζουν την έκφραση του 30% περίπου των ανθρώπινων γονιδίων [11]. Τα miRNAs εμπλέκονται σε ένα ευρύ φάσμα των βιολογικών διεργασιών συμπεριλαμβανομένης της ρύθμισης του κυτταρικού κύκλου, απόπτωση και βλαστικών κυττάρων συντήρηση, την ανάπτυξη, το μεταβολισμό και τη γήρανση [11]. Έχει αποδειχθεί ότι συμμετέχουν σε miRNAs ανθρώπινη καρκινογένεση είτε ως καταστολείς όγκων ή ογκογονίδια [12], [13]. Σωρευτικά μελέτες έχουν δείξει ότι πολυμορφισμοί ενός νουκλεοτιδίου (SNPs) ή μεταλλάξεις θα μπορούσε να κάνει μια σημαντική συμβολή για την ευαισθησία της νόσου και την έκβαση. Γενετικές παραλλαγές ή μεταλλάξεις σε miRNAs ή προ-miRNAs μπορεί να μεταβάλλει την έκφραση των miRNAs και /ή ωρίμανση [14], [15].

Μία μελέτη έχει συστηματικά εντοπίστηκαν 323 SNP σε 227 γνωστές ανθρώπινες miRNAs, και 12 SNPs βρίσκεται εντός των προδρόμων miRNA [14]. Η rs895819 SNP βρίσκεται στη θηλιά του

προ-miR-27a

και περιλαμβάνει μια gt A &? G μετάβαση νουκλεοτιδίων. Sun

et al.

[16] ανέφεραν ο πολυμορφισμός μπορεί να οδηγήσει σε μεταβολή της διαδικασίας, υψηλότερη έκφραση του miR-27a και τελικά προδιάθεση του γαστρικού καρκίνου [16]. Ενώ Yang

et al.

[17] διαπίστωσε ότι το G αλληλόμορφο της rs895819 θα μπορούσαν να βλάψουν την ωρίμανση του miR-27a, έτσι, συνδέθηκε με μειωμένη οικογενή κίνδυνο καρκίνου του μαστού. Επιπλέον, Mertens-Τάλκοτ

et al.

Αναφερθεί ότι σε καρκινικά κύτταρα του μαστού, επιμόλυνση του αντιπληροφοριακού miR-27a οδηγούν σε αυξημένη έκφραση των δακτύλων ψευδαργύρου και το domain ΤΔΕ που περιέχει 10 (ZBTB10) (ένα υποθετικό Sp καταστολέας) και αυτά αποκρίσεις συνοδεύονται από μειωμένη έκφραση Sp-εξαρτώμενη επιβίωση και αγγειογόνων γονιδίων, συμπεριλαμβανομένων των

survivin

, αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (

VEGF

) και VEGF υποδοχέα 1 (

VEGFR1

) [18]. Ωστόσο, η υπερβολική έκφραση της survivin ήταν συχνά παρατηρήθηκε σε διαφορετικούς τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων RCC [19]. Μέχρι σήμερα, δεν υπάρχει καμία μελέτη για τη σύνδεση μεταξύ των

προ-miR-27a

πολυμορφισμό και RCC ευαισθησία.

Με βάση τις γνώσεις μας σχετικά με το νέο πολυμορφισμό και η βιολογική λειτουργία του

ΜΙΚ 27α

, υποθέσαμε ότι η

προ-miR-27a

πολυμορφισμός σχετίζεται με την ευαισθησία RCC. Για να ελέγξει την υπόθεση αυτή, είμαστε ο γονότυπος αυτό το συγκεκριμένο rs895819 SNP και αξιολόγησε τη συσχέτιση με τον κίνδυνο της RCC στην εν εξελίξει μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας σε ένα κινεζικό πληθυσμό.

Υλικά και Μέθοδοι

Τα άτομα της μελέτης

Αυτή η μελέτη περιελάμβανε 594 ασθενείς και 600 του καρκίνου χωρίς ελέγχους. Όλα τα υποκείμενα στη μελέτη μας είναι εθνοτικές Κινέζων Χαν χωρίς γενετική σχέση. Όλοι οι ασθενείς είχαν πρόσφατα διαγνωστεί με ιστοπαθολογικά επιβεβαίωσε το περιστατικό RCC. Αυτές οι περιπτώσεις που έλαβαν χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία πριν από τη χειρουργική επέμβαση ή είχε άλλο τύπο καρκίνου εξαιρέθηκαν από την παρούσα μελέτη. Συνεχόμενους ασθενείς RCC προσλήφθηκαν μεταξύ Μαΐου 2004 και Αυγούστου 2010 The First Affiliated Νοσοκομείο Ιατρικό Πανεπιστήμιο Nanjing, Nanjing, Κίνα. Ασθένεια που ταξινομούνται σύμφωνα με τα κριτήρια της Παγκόσμιας Οργάνωσης Υγείας και ανέβασε σύμφωνα με την αμερικανική μεικτής επιτροπής για την ταξινόμηση του καρκίνου ΤΝΜ. Η κλίμακα Fuhrman χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση του όγκου των πυρηνικών βαθμό [20]. Οι έλεγχοι είχαν προσληφθεί από εκείνους που αναζητούν υγειονομική περίθαλψη στα εξωτερικά ιατρεία στο ίδιο νοσοκομείο. Τα καρκινικά χωρίς ελέγχους αντιστοιχήθηκαν συχνότητα ανάλογα με το φύλο και την ηλικία (± 5 έτη) στις περιπτώσεις χωρίς ατομική ιστορικό καρκίνου και την οικογένεια που δεν σχετίζονται με τις υποθέσεις. Μια καθοδηγούμενη ερωτηματολόγιο σχετικά με τη δημογραφική και παράγοντες του τρόπου ζωής χορηγήθηκε μέσω πρόσωπο με πρόσωπο συνεντεύξεις από εκπαιδευμένους ερευνητές. Κάθε ασθενής δώρισε 5 ml αίματος για γενωμική εξαγωγή του DNA μετά από γραπτή συγκατάθεση απόκτηση από όλα τα άτομα. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της Nanjing Ιατρικό Πανεπιστήμιο.

Για την ανάλυση επιβίωσης, χρησιμοποιήθηκαν 296 περιπτώσεις RCC που εγγράφονται στο εν εξελίξει μελέτη κοόρτης μας από Μάης 2004-Οκτώβριος 2009. Οι ασθενείς παρακολουθήθηκαν προοπτικά κάθε 6 μήνες από την ημερομηνία λήψης επιβεβαιωμένη διάγνωση μέχρι το θάνατο ή την τελευταία στιγμή της παρακολούθησης. Ο μέγιστος χρόνος παρακολούθησης ήταν 72 μήνες (τελευταία παρακολούθηση, τον Αύγουστο του 2010) και ο μέσος χρόνος παρακολούθησης ήταν 19,3 μήνες.

Γονοτυπικές

Το γονιδιακό DNA απομονώθηκε από τα λευκοκύτταρα του φλεβικού αίματος με πέψη με πρωτεϊνάση Κ και εκχύλιση με φαινόλη /χλωροφόρμιο. Η γονοτύπηση εκτελέστηκε με τη Δοκιμασία TaqMan Γονοτυποποίηση SNP χρησιμοποιώντας το 384-φρεατίων 7900HT πραγματικού χρόνου PCR System και το λογισμικό SDS 2,3 για διάκριση αλληλόμορφων (Applied Biosystems, Foster City, CA). Η αλληλουχία των εκκινητών και ανιχνευτών συνοψίζονται στον Πίνακα S1. Γονιδιωματικό DNA από 50 ng και 0,5 × μείγμα (Takara Bio, JPN) χρησιμοποιήθηκε για κάθε αντίδραση και η ενίσχυση διεξήχθη υπό τις ακόλουθες συνθήκες: 50 ° C για 2 λεπτά, 95 ° C για 10 λεπτά που ακολουθείται από 45 κύκλους των 95 ° C για 15 δευτερόλεπτα, και 60 ° C για 1 λεπτό. Η ανάλυση του πολυμορφισμού διεξήχθη με δύο άτομα ανεξάρτητα με τυφλό τρόπο. Περίπου το 10% των δειγμάτων επιλέχθηκαν τυχαία για επαναλαμβανόμενη προσδιορισμό του γονότυπου για την επικύρωση, και τα αποτελέσματα ήταν 100% συγκλίνουσες. επιλέχθηκαν και επαληθεύτηκαν με άμεση αλληλούχιση (Σχήμα 1) Τα προϊόντα PCR του SNP με διαφορετικούς γονότυπους.

(Α) Διπλό κορυφές επισημαίνονται με ένα βέλος αντιπροσώπευε την ετερόζυγη TC γονότυπο (AG). (Β) Single κορυφή επισημασμένο με ένα βέλος που παριστάνεται το ομόζυγο γονότυπο ΤΤ (ΑΑ). (C) Ενιαία κορυφή επισημαίνονται με ένα βέλος εκπροσώπησε την ομόζυγο γονότυπο CC (GG).

Η

Ανάλυση της έκφρασης HSA-miR-27a

Για να αξιολογηθεί περαιτέρω συσχέτιση μεταξύ HSA-ΜΙΚ έκφραση 27α και rs895819 πολυμορφισμός

in vivo

, 25 αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα φυσιολογικού νεφρικού ιστού που περιέχει 100% τα φυσιολογικά κύτταρα που γειτνιάζουν με όγκους από ασθενείς διαφορετικών γονότυπων συλλέχθηκαν. Ολικό RNA εκχυλίστηκε από αυτά τα δείγματα χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA, Η.Π.Α.) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Applied Biosystems 7900HT Real Time PCR System χρησιμοποιήθηκε για να εκτελέσει σε πραγματικό χρόνο ποσοτικοποίηση PCR (Foster City, CA, Η.Π.Α.) με βάση την SYBR-Πράσινο μέθοδος (Takara Bio, JPN). Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για την ενίσχυση του mRNA της HSA-miR-27a ήταν 5′- ACACTCCAGCTGGGTTCACAGTGGCTAAG-3 ‘(προς τα εμπρός) και 5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′ (αντίστροφο), και οι εκκινητές για U6 ήταν 5’- CTCGCTTCGGCAGCACA-3 ‘(προς τα εμπρός ) και 5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3 ‘(αντίστροφο). Όλες οι αντιδράσεις διεξήχθησαν εις τριπλούν. Διπλώστε αλλαγές ομαλοποιήθηκαν στα επίπεδα έκφρασης της U6.

Η στατιστική ανάλυση

Οι διαφορές στις κατανομές των επιλεγμένων δημογραφικών μεταβλητών και οι συχνότητες των γονοτύπων μεταξύ των περιπτώσεων και των ελέγχων αξιολογήθηκαν με τη χρήση του μαθητή

t-test

(για τις συνεχείς μεταβλητές) ή του Pearson χ

2-test (για τις κατηγορικές μεταβλητές). Hardy-Weinberg ισορροπία (HWE) των συχνοτήτων γονοτύπου των μαρτύρων αξιολογήθηκε από χ

2 τεστ καλοσύνη-of-fit. Η συσχέτιση μεταξύ του SNP rs895819 πολυμορφισμός και τον κίνδυνο RCC εκτιμήθηκαν από τον υπολογισμό αναλογίες πιθανοτήτων (OR) και τα διαστήματα εμπιστοσύνης 95% τους (ΠΙ) από την άνευ όρων ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης με την προσαρμογή για πιθανούς συγχυτικούς παράγοντες. Η μέθοδος Kaplan-Meier, δοκιμασία log-rank, μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης κατά Cox χρησιμοποιήθηκαν για να αξιολογηθούν οι επιδράσεις των

προ-miR-27a

γονότυπους στη συνολική επιβίωση των ασθενών με RCC.

P

& lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις έγιναν με το λογισμικό του Συστήματος Στατιστικής Ανάλυσης (9.1.3? SAS Institute, Cary, NC, ΗΠΑ) με δύο όψεων

τιμές P. Η στατιστική ισχύς υπολογίστηκε με τη χρήση του λογισμικού PS (https://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize).

Results

Characteristics του πληθυσμού της μελέτης

Η συχνότητα είναι κατανομές των επιλεγμένων δημογραφικά χαρακτηριστικά των περιπτώσεων και των ελέγχων παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Δεν υπήρχαν διαφορές μεταξύ των ασθενών και των ελέγχων σχετικά με την ηλικία (

P

= 0.642) , το δείκτη μάζας σώματος (ΒΜΙ) (

P

= 0,074), το φύλο (

P

= 0,222), το κάπνισμα (

P

= 0,127), το πακέτο-χρόνια καπνίσματος (

P

= 0.251) και το ποτό κατάσταση (

P

= 0,714). Ωστόσο, υπήρχαν περισσότεροι ασθενείς υπέρταση (36,4%), και διαβητικούς (13,5%) μεταξύ των περιπτώσεων από ό, τι μεταξύ των μαρτύρων (όλα

P

& lt? 0,05). Η πλειοψηφία των ασθενών (84,0%) είχαν συμβατικό σαφές καρκίνωμα. Άλλοι ασθενείς οι οποίοι είχαν θηλώδες καρκίνωμα, καρκίνωμα χρωμόφοβο και αταξινόμητη μετρήθηκαν ενενήντα πέντε (16%). Περίπου το 63,5% των ασθενών ήταν στο στάδιο Ι, 18,4%, 6,7% και 11,4% βρέθηκε να είναι στο στάδιο ΙΙ, ΙΙΙ και IV, αντίστοιχα. Επιπλέον, οι συχνότητες των πυρηνικών βαθμών από Ι έως IV ήταν 18,2%, 48,0%, 24,7% και 9,1%, αντίστοιχα.

Η

σύνδεσης μεταξύ της

προ-miR-27a

πολυμορφισμό και κίνδυνος RCC

συχνότητες αλληλόμορφων και κατανομές γονότυπου

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμού σε ασθενείς και ελέγχους φαίνονται στον πίνακα 2. Οι παρατηρούμενες συχνότητες γονοτύπου στους ελέγχους ήταν σύμφωνες με ότι αναμένεται από το μοντέλο HWE (χ

2 = 0.795,

P

= 0,373). Η κατανομή συχνοτήτων των G αλληλόμορφο διαφοροποιείται σημαντικά από το Α αλληλόμορφο μεταξύ ασθενών και μαρτύρων (

P

= 0,019). Μετά από προσαρμογή για πιθανούς συγχυτικούς παράγοντες (ηλικία, φύλο, το κάπνισμα, το καθεστώς πόσιμο, η υπέρταση και ο διαβήτης), η ανάλυση λογιστικής παλινδρόμησης έδειξε ότι κατά τη σύγκριση με AA ομοζυγώτες, AG ετερόζυγο συσχετίστηκε με σημαντικά μειωμένο κίνδυνο RCC (προσαρμογή OR = 0,68, 95% CI = 0,53 – 0,87) και τα άτομα με AG /GG γονότυπο είχαν επίσης μειωμένη ευαισθησία σε RCC (προσαρμογή OR = 0,71, 95% CI = 0,56 – 0,90).

η

Επιπλέον, η στρωματοποιημένη ανάλυση ανά ηλικία, ΔΜΣ, το φύλο, το κάπνισμα, το ποτό κατάσταση, η υπέρταση και ο διαβήτης, βρήκαμε ότι ο μειωμένος κίνδυνος ήταν πιο έντονη σε νεαρά άτομα (προσαρμογή OR = 0.56, 95% CI = 0,40 – 0,78), άτομα με BMI≤ 24 (προσαρμογή OR = 0.67, 95% CI = 0,48 – 0,93), τα αρσενικά (προσαρμογή OR = 0,66, 95% CI = 0,49 – 0,88), μη-καπνιστές (προσαρμογή OR = 0,71, 95% CI = 0,53 – 0,95), μη-πότες (προσαρμογή OR = 0.72, 95% CI = 0,55 – 0,95), τα άτομα χωρίς υπέρταση (προσαρμογή OR = 0,61, 95% CI = 0,46 – 0,81) και άτομα χωρίς διαβήτη (προσαρμογή OR = 0.69, 95% CI = 0,54 -0.88) (Πίνακας 3).

η

σύνδεσης μεταξύ

προ-miR-27a

πολυμορφισμό και κλινικά χαρακτηριστικά του RCC

Επιπλέον, η σχέση μεταξύ

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμός και η Επιτροπή εξέτασε επίσης τα κλινικά χαρακτηριστικά του RCC. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι AG /GG γονότυπο συσχετίστηκε με μειωμένη ευαισθησία στην τοπική κλινικό στάδιο (προσαρμογή OR = 0,71, 95% CI = 0,55 – 0,91) και παρόμοιες επιδράσεις παρατηρήθηκαν σε καλά διαφοροποιημένα και ελάχιστα διαφοροποιημένο RCC (προσαρμογή OR = 0,71, 95% CI = 0,55 – 0,93 για τα καλά διαφοροποιημένο, προσαρμοσμένο OR = 0.51, 95% CI = 0,28 – 0,93 για τα φτωχά διαφοροποιημένα) (Πίνακας 4).

Η

Αλληλεπίδραση αναλύσεις rs895819 πολυμορφισμό και παράγοντες κινδύνου

Έχουμε αξιολογηθεί κατά πόσον υπήρχαν ύπαρξη αλληλεπιδράσεων μεταξύ rs895819 πολυμορφισμό και την ηλικία, το ΒΜΙ, το φύλο, το κάπνισμα, το καθεστώς πόσιμο, η υπέρταση και ο διαβήτης. Όπως φαίνεται στον Πίνακα S2, σε σύγκριση με τα άτομα που ήταν και οι δύο ≤57 ετών και φορείς ΑΑ, παρατηρήθηκε σημαντικά μειωμένο κίνδυνο σε αυτούς που ήταν ≤57 ετών με AG /GG γονότυπο (ρυθμισμένο OR = 0.57, 95% CI = 0,41 – 0,79) και εκείνοι που ήταν & gt? 57 με δύο μπαταρίες AA και γονότυπους AG /GG (προσαρμογή OR = 0.64, 95% CI = 0,46 – 0,89 για AA, προσαρμοσμένη OR = 0.60, 95% CI = 0,42 – 0,85 για το AG /GG). Παρόμοια αποτελέσματα βρέθηκαν σε φορείς AG /GG, που ήταν & lt? 24 kg /m

2, άνδρες, μη καπνιστές, nondrinkers, άτομα χωρίς υπέρταση και άτομα χωρίς διαβήτη, σε σύγκριση με φορείς ΑΑ. Εμείς επιπλέον παρατηρείται rs895819 είχε πολλαπλασιαστική αλληλεπίδραση με την ηλικία και την υπέρταση (

P

αλληλεπίδρασης = 0,035 για την ηλικία και το

P

αλληλεπίδρασης = 0,030 για την υπέρταση).

Επιπλέον, Kaplan-Meier καμπύλες και log-rank τεστ χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση της σύνδεσης μεταξύ των γονότυπων και την επιβίωση του RCC. Ωστόσο, δεν βρήκαμε τα γονότυπους rs895819 να συνδέεται με τη συνολική επιβίωση των ασθενών. Στην κλιμακωτή Cox παλινδρόμησης, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το κλινικό στάδιο ήταν ο καλύτερος προγνωστικός παράγοντας για την επιβίωση RCC ακολουθούμενη από βαθμό του όγκου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Σύλλογος rs895819 πολυμορφισμού με τα επίπεδα έκφρασης της HSA-miR-27a

Έχουμε συγκεντρώσει 25 αφαιρεθεί χειρουργικά δείγματα φυσιολογικού νεφρικού ιστού δίπλα σε όγκους με διαφορετικούς γονότυπους των rs895819, και την κατανομή συχνότητας του ΑΑ, AG, GG γονότυπους ήταν 13, 10, και 2, αντίστοιχα. Εκτιμήσαμε περαιτέρω τη συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων του πολυμορφισμού και της έκφρασης HSA-miR-27a χρησιμοποιώντας ποσοτική πραγματικού χρόνου RT-PCR. Τα δείγματα με GG γονότυπο προστέθηκε στα δείγματα του AG γονότυπο για ανάλυση. Ωστόσο, λόγω του μικρού δείγματα GG γονότυπους, δεν βρήκαμε καμία συσχέτιση μεταξύ rs895819 και την έκφραση της HSA-miR-27a (

P

= 0,08) (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Περαιτέρω λειτουργικές μελέτες δικαιολογούνταν όταν συλλέγονται μεγάλες δείγματα.

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη, διερευνήθηκε η σχέση μεταξύ του

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμό και RCC κίνδυνος. Λαμβάνοντας υπόψη σχετικά σπάνιο συχνότητες GG γονότυπο, και παρόμοιες κλίμακες των ΙΑΠ για ετεροζυγώτες (AG) και ομοζυγώτες (GG) την ισότητα που δοκιμάζονται να τηρήσει μια μη σημαντική

P

-τιμή των 0,568 προτείνοντας ένα κυρίαρχο μοντέλο, σε συνδυασμό AG και GG γονότυπους ως κυρίαρχο γενετικό μοντέλο με την ακόλουθη ανάλυση σύνδεσης. Βρήκαμε ότι τα άτομα με γονότυπους AG /GG συσχετίστηκαν με σημαντικά μειωμένο κίνδυνο RCC, σε σύγκριση με εκείνους που μεταφέρουν ΑΑ γονότυπο. Επιπλέον, η επίδραση ήταν ακόμη ισχυρότερη σε μη-καπνιστές, νεαρά άτομα, άνδρες και τα άτομα χωρίς υπέρταση ή διαβήτη. Εκτός αυτού, τα άτομα που μεταφέρουν το G αλληλόμορφο είχαν επίσης μειωμένη ευαισθησία στην τοπική κλινικό στάδιο, καλά διαφοροποιημένο και κακώς διαφοροποιημένα RCC. Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη μελέτη για τη διερεύνηση του ρόλου του

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμός του κινδύνου RCC.

Σήμερα, αυξάνοντας μελέτες έχουν δείξει ότι miRNAs, τα οποία παίζουν σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου καθώς τα ογκογονίδια όγκου ή καταστολείς όγκων που εμπλέκονται στην κρίσιμη βιολογικές διεργασίες, συμπεριλαμβανομένης της ανάπτυξης, της διαφοροποίησης, της απόπτωσης και του πολλαπλασιασμού [12], [21]. Οι γενετικές παραλλαγές σε miRNAs έχουν αναφερθεί να σχετίζεται με πολλούς όγκους, όπως ο καρκίνος του μαστού [22], γαστρικού καρκίνου [23], ορθοκολικό καρκίνο [24] και τον καρκίνο του πνεύμονα [15]. Αν SNPs σε miRNAs έχουν μελετηθεί ευρέως, η σύνδεση μεταξύ των SNPs σε miRNAs και νεφρικής τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου των κυττάρων παραμένει ακόμη άγνωστη. Horikawa

et al.

Ορίζεται 7 SNPs σε 7 προ-miRNAs, και 10 SNPs σε 8 pri-miRNAs, αλλά κανένα από αυτά δεν είχε σημαντική επίδραση στην RCC κίνδυνο [25]. Παρ ‘όλα αυτά, Horikawa

et al.

Πρότεινε ότι γενετικών πολυμορφισμών των γονιδίων miRNA-μηχανήματα θα μπορούσαν να επηρεάσουν την ευαισθησία RCC μεμονωμένα και από κοινού.

SNP rs895819 βρέθηκε σε προ-miRNA περιοχές της HSA-ΜΙΚ 27α, το οποίο ήταν σε χρωμόσωμα 19, και βρισκόταν στη θέση 40 σε σχέση με το πρώτο νουκλεοτίδιο. Έχει αναφερθεί ότι μια παραλλαγή που προκαλεί διαρθρωτική αλλαγή στην κρίσιμη περιοχή του miRNA θα μπορούσαν να επηρεάσουν την ωρίμανση και τη διαδικασία της miRNA [26], [27]. Χρησιμοποιήσαμε το RNA-πλάσια πρόγραμμα για την πρόβλεψη της πιο σταθερή δευτερεύουσα δομική του

προ-miR-27a

με δύο διαφορετικές αλληλουχίες, αλλά η διακύμανση G του rs895819 επηρεάζεται ούτε τη διαμόρφωση ούτε η ελεύθερη ενέργεια

pre -miR-27α

(τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Με μια λέξη, η επεξεργασία και την ωρίμανση των miRNA ήταν πιο περίπλοκη και λεπτή από ότι είχε προβλεφθεί. Zeng

et al.

Παρατήρησε ότι Drosha επιλεκτικά διασπά το RNA φουρκέτες που φέρει ένα μεγάλο βρόχο τερματικό. Όταν ο βρόχος βραχύνεται με μετάλλαξη ή διαγραφές, η διαδικασία ωρίμανσης θα απομειωθεί [28]. Σύμφωνα με την προβλεπόμενη δομή του

προ-miR-27a

, rs895819 βρίσκεται στο κέντρο του τερματικού βρόχου, το rs895819 A & gt? G μετάπτωση μπορεί να μειώσει το μέγεθος του βρόχου. Κατά συνέπεια, η διάσπαση από Drosha θα μπλοκαριστεί, και η διαδικασία ωρίμανσης με τον τρόπο αυτό παρεμποδίζεται. Εν κατακλείδι, rs895819 θα μπορούσε να διαδραματίσει ένα σημαντικό ρόλο στην ωρίμανση του miR-27a. Ωστόσο, λόγω είχαμε μόνο 2 άτομα με γονότυπους GG, δεν βρήκαμε καμία συσχέτιση μεταξύ rs895819 και την έκφραση της HSA-miR-27a, τα ευρήματα αυτά θα πρέπει να επιβεβαιωθεί με περαιτέρω μελέτες.

Για τις γνώσεις μας , πολλές ανθρώπινες μεταγραφές miRNA έχουν ακολουθίες στόχο στο 3′-UTR στα οποία συνδέονται miRNAs και ασκούν μεταγραφικούς καταστολή. Liu

et al.

Βρέθηκε

miR-27a

λειτουργεί ως ογκογονίδιο το γαστρικό αδενοκαρκίνωμα στοχεύοντας prohibitin [29] και Chintharlapalli

et al.

Πρότεινε ότι ογκογόνο

miR-27a

ήταν ένας στόχος για αντικαρκινικού παράγοντα στα καρκινικά κύτταρα του παχέος εντέρου [30]. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι η άγρια ​​γονότυπο ΑΑ των

προ

–

miR-27a

είχαν υψηλότερη συχνότητα στις περιπτώσεις από ό, τι στους μάρτυρες, ενώ τα άτομα που φέρουν την παραλλαγή G αλληλόμορφο είχαν μειωμένο κίνδυνο RCC, υποδεικνύοντας ότι

miR-27a

ήταν πιο πιθανό να είναι μια ογκογονίδιο, το οποίο ήταν σύμφωνο με προηγούμενες μελέτες [29], [30]. Mertens-Τάλκοτ

et al.

Αναφερθεί ότι σε καρκινικά κύτταρα του μαστού, επιμόλυνση του αντιπληροφοριακού miR-27a οδηγούν σε αυξημένη έκφραση ZBTB10 και αυτές οι απαντήσεις συνοδεύεται από μειωμένη έκφραση του

survivin

, Περισσότερο, survivin είναι ένα δομικά μοναδικό μέλος του αναστολέα της οικογένειας πρωτεϊνών απόπτωσης που καταστέλλει την απόπτωση και ρυθμίζει την κυτταρική διαίρεση. Παρά την απόλυση του οδούς κυτταρικού θανάτου, survivin φαίνεται ότι απαιτείται για την βιωσιμότητα των καρκινικών κυττάρων, και παρεμβολή με survivin έκφρασης /λειτουργία έχει συσχετιστεί με καταστροφικές ελαττώματα μιτωτικών μετάβασης και επαγωγή του κυτταρικού θανάτου που επάγεται μιτοχονδριακής-[31]. Υπερ-έκφραση του mRNA της survivin και της πρωτεΐνης ανιχνεύθηκαν σε κυτταρικές γραμμές RCC αλλά όχι σε φυσιολογικό νεφρό επιθηλιακή κυτταρική σειρά ανθρώπινου [19]. Αυξημένα έκφραση της survivin επίσης παρατηρήθηκε σε ιστούς RCC σε σύγκριση με παρακείμενες φυσιολογικούς ιστούς [19], [32]. ασθενείς RCC με υψηλά επίπεδα survivin είχαν σημαντικά μικρότερο συνολικό χρόνο επιβίωσης από ό, τι τα άτομα με χαμηλά επίπεδα [33], [34]. Με άλλα λόγια, μειωμένα επίπεδα miR-27a μπορεί να μειώσει τη συχνότητα εμφάνισης RCC μέσω καταστολή της έκφρασης του survivn έμμεσα. Αυτός ήταν ο λόγος που επικεντρώνονται στο

προ-miR-27a

πολυμορφισμού σε ασθενείς RCC.

Σε αυτή τη μελέτη, υπήρχαν περισσότεροι ασθενείς υπέρταση και διαβήτη μεταξύ των περιπτώσεων από ό, τι μεταξύ των ελέγχων, υποδεικνύοντας ότι υπήρχε πιθανή συσχέτιση μεταξύ των δύο παραγόντων και RCC. Βρήκαμε επίσης ότι rs895819 είχε πολλαπλασιαστική αλληλεπίδραση με υπέρταση. Έχει αναφερθεί ότι ορισμένοι τύποι νεφρικών όγκων και τη θεραπεία του καρκίνου θα μπορούσε να προκαλέσει υπέρταση [35], [36] και ένα ιστορικό διαβήτη έχει συνδεθεί με τη νεφρική κίνδυνο καρκίνου των κυττάρων σε διάφορες μελέτες κοόρτης [37], αλλά ο ρόλος της ανεξάρτητες από εκείνες της παχυσαρκίας και της υπέρτασης δεν έχει αποδειχθεί συμπερασματικά. Εκτός αυτού, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι τα άτομα με G αλληλόμορφο έχουν μειωμένο κίνδυνο RCC σε μη καπνιστές. Το κάπνισμα είναι η πιο σταθερά τεκμηριωμένο παράγοντα κινδύνου αιτιώδης για RCC, αντιπροσωπεύοντας περίπου το 20% των περιπτώσεων του RCC [38]. Σε σύγκριση με τους μη καπνιστές, ο κίνδυνος αυξάνεται περίπου 50% σε άνδρες και 20% στις γυναίκες καπνίστριες [39]. Επιπλέον, μετά από στρωματοποίηση για RCC κλινικό στάδιο, φάνηκε ότι rs895819 GG γονότυπο είχαν μειωμένο κίνδυνο RCC με εντοπισμένο κλινικό στάδιο. Έτσι, ήταν εύλογο ότι η διακύμανση συμμετείχε στις χαμηλότερες Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης στάδιο. Ωστόσο, η υπόθεση αυτή θα πρέπει να επιβεβαιωθεί με περαιτέρω μελέτες.

Όσον αφορά τη συσχέτιση μεταξύ των γονότυπων και τη συνολική επιβίωση του RCC, δεν υπήρξε σημαντικό αποτέλεσμα. Ο λόγος για αυτήν τη διαφορά μπορεί να είναι ότι το ποσοστό θνησιμότητας της ανάλυσης επιβίωσης μας είναι χαμηλή λόγω σύντομο χρονικό διάστημα παρακολούθησης μας και τους βιολογικούς μηχανισμούς που διέπουν τη συχνότητα της RCC μπορεί να είναι διαφορετική από εκείνες τις υποκείμενες πρόγνωση, και ακόμη και αν η

miR-27a

πολυμορφισμός εμπλέκεται στην αιτιολογία της RCC, αυτό δεν σημαίνει κατ ‘ανάγκην ότι επηρεάζει το αποτέλεσμα.

κατά την ερμηνεία αποτελεσμάτων μας, θα πρέπει να αφορά αρκετούς περιορισμούς. Πρώτον, μελέτη ασθενών-μαρτύρων μας ήταν μια μελέτη νοσοκομείο με βάση και δεν θα μπορούσε να αποτελέσει μια καλή αναπαράσταση του συνολικού πληθυσμού. Παρ ‘όλα αυτά, η συχνότητα αλληλόμορφο G στους ελέγχους μας ήταν παρόμοια με εκείνη στη βάση δεδομένων HapMap. Εκτός αυτού, οι κατανομές γονότυπου του πολυμορφισμού σε ελέγχους μας ήταν σύμφωνα με HWE. Έτσι, η προκατάληψη επιλογής ήταν απίθανο να είναι ουσιαστική. Δεύτερον, το μέγεθος του δείγματος μας ήταν σχετικά μικρό. Ωστόσο, είχαμε 83% ισχύ για να ανιχνεύσει μια ελάχιστη ή 0,68 με συχνότητα έκθεσης 30% σύμφωνα με το τρέχον μέγεθος του δείγματος. Τρίτον, δεν εκτελέσει την ανάλυση της αλληλεπίδρασης γονιδίων-περιβάλλοντος, λόγω της έλλειψης της λεπτομερούς πληροφόρησης του περιβάλλοντος παράγοντες, όπως η επαγγελματική έκθεση, τη διατροφή και τη σωματική δραστηριότητα. Ωστόσο, η μελέτη μας είχε επίσης αρκετά δυνατά. Πρώτον, ήταν η πρώτη μελέτη για τη διερεύνηση της συσχέτισης μεταξύ του

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμό και την ευαισθησία σε RCC. Δεύτερον, ταιριάζουν περιπτώσεις και τους ελέγχους κατά ηλικία και φύλο, και πήραμε τα αποτελέσματα από την προσαρμογή της ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα, το ποτό κατάσταση, υπέρταση και διαβήτη, η οποία θα μπορούσε να μειώσει την επιρροή των συγχυτικούς παράγοντες.

Συμπερασματικά, τα αποτελέσματά μας παρείχε την πρώτη εικόνα για τη συμβολή του

προ-miR-27a

rs895819 πολυμορφισμός στον κίνδυνο της RCC στην κινεζική πληθυσμό. Αν και η ένωση φάνηκε να είναι στατιστικά σημαντική στον πληθυσμό μας, τα ευρήματα αυτά θα πρέπει να αξιολογηθούν περαιτέρω από τις μεγαλύτερες, κατά προτίμηση προοπτικές μελέτες. Για πολυμορφισμούς συχνά διαφέρουν σε διαφορετικές εθνοτικές ομάδες, πρόσθετες μελέτες είναι επίσης αναγκαία για να διευκρινίσει τη σχέση αυτού του πολυμορφισμού με τον κίνδυνο RCC σε διάφορες πληθυσμιακές ομάδες.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

Οι αλληλουχίες των εκκινητών και ανιχνευτή που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του γονοτύπου του πολυμορφισμού rs895819.

doi: 10.1371 /journal.pone.0046566.s001

(DOC)

Πίνακας S2.

Αλληλεπίδραση αναλύσεις rs895819 πολυμορφισμού και τους παράγοντες κινδύνου.

doi: 10.1371 /journal.pone.0046566.s002

(DOC)