Αφηρημένο

Σε προηγούμενη μελέτη, είχαμε αναπτύξει ένα νέο σύστημα μαγνητικής παράδοση θερμοευαισθητοποιημένων βασίζονται σε λιποσώματα. Η μελέτη αυτή αποσκοπεί να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα αυτού του συστήματος για την συν-χορήγησης και των δύο φαρμάκων και γονιδίων στο ίδιο κύτταρο και κατά του όγκου αποτελέσματα της επί γαστρικού καρκίνου. Η δοξορουβικίνη (ϋΟΧ) και φορέα SATB1 shRNA φορτώθηκαν στο σύστημα συν-χορήγησης, και in vitro δραστικότητα θερμοευαίσθητο απελευθέρωση ϋΟΧ, στοχευμένη γονιδιακή αποσιώπηση αποδοτικότητα, στοχευμένη κυτταρική πρόσληψη, in vitro κυτταροτοξικότητα, καθώς και in vivo δραστικότητα κατά του όγκου προσδιορίστηκαν. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το σύστημα αυτό συν-χορήγησης είχαν επιθυμητή στοχευμένη αποτελεσματικότητα παράδοσης, DOX θερμοευαίσθητο απελευθέρωσης και γονιδιακή σίγηση SATB1. Επιπλέον, η συν-παροχή DOX και SATB1 shRNA παρουσίασαν αυξημένη δραστικότητα για την αναστολή της γαστρικής ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων in vitro και in vivo, σε σύγκριση με μόνο παράδοση. Εν κατακλείδι, το μυθιστόρημα θερμοευαίσθητο μαγνητικό σύστημα των ναρκωτικών και του γονιδίου συν-παράδοση έχει πολλά υποσχόμενη εφαρμογή στη συνδυασμένη χημειοθεραπεία και γονιδιακή θεραπεία για καρκίνο του στομάχου

Παράθεση:. Peng Ζ, Wang C, Fang Ε, Lu Χ, Wang G, Tong Ε (2014) Co-Παράδοση δοξορουβικίνη και SATB1 shRNA από Θερμοευαίσθητο Μαγνητική κατιονικά λιποσώματα για γαστρικός καρκίνος θεραπεία. PLoS ONE 9 (3): e92924. doi: 10.1371 /journal.pone.0092924

Επιμέλεια: Έλενα Α Rozhkova, Argonne National Laboratory, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 4 του Δεκέμβρη, 2013? Αποδεκτές: 26 Φεβρουαρίου 2014? Δημοσιεύθηκε: 27 του Μαρτίου 2014

Copyright: © 2014 Peng et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Νο 81172186). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

γαστρικός καρκίνος είναι η τέταρτη κοινή μορφή καρκίνου και η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σε όλο τον κόσμο [1]. Το 2008, υπήρχαν περίπου 989.000 νέες περιπτώσεις καρκίνου του στομάχου και 738.000 θανάτους στον κόσμο που συνέβη κυρίως στην Ανατολική, Νότια και την Κεντρική Ασία? Κεντρική και Ανατολική Ευρώπη? και Νότια Αμερική [2], [3]. Στην Κίνα, γαστρικό καρκίνο είναι ο τρίτος συχνότερος καρκίνος με εκτιμώμενη 380.000 νέες περιπτώσεις και ένα υψηλότερο ποσοστό θνησιμότητας περίπου 26,3 ανά πληθυσμό 100.000 κάθε χρόνο [4], [5]. Η χειρουργική εκτομή είναι η κοινή θεραπευτική επιλογή, αλλά δεν είναι κατάλληλο για τα περισσότερα από ασθενείς που βρίσκονται σε προχωρημένο στάδιο του καρκίνου του στομάχου. Άλλες θεραπείες όπως ραδιοθεραπεία και χημειοθεραπεία δείχνουν κάποια αποτελεσματικότητα, αλλά είναι συχνά μη ικανοποιητική [4], [6]. Επιπλέον, η συστηματική χορήγηση χημειοθεραπείας προκαλεί ανεπιθύμητες δράσεις [7], [8].

Λόγω της ανάπτυξης της αντίστασης στα φάρμακα στη χημειοθεραπεία, τα παραδοσιακά χημειοθεραπεία επίσης εξέθεσε περιορισμένη αποτελεσματικότητα κατά του όγκου [9]. Ως εκ τούτου, το σύστημα συν-χορήγησης πολλαπλών παραγόντων έχει αποκτήσει μεγαλύτερη προσοχή πρόσφατα, διότι θα μπορούσε να προσφέρει διάφορα είδη παραγόντων στα ίδια καρκινικά κύτταρα τα οποία εκδηλώνουν τότε συνεργιστικά αποτελέσματα κατά του όγκου. Για παράδειγμα, δύο διαφορετικές χημικές ουσίες μπορούν να συνδυαστούν ή ένα χημικό παράγοντα μπορεί να συνδυαστεί με μικρά RNA παρεμβολής (siRNA) κατά ενός ογκογονιδίου. Επιπλέον, η στοχευμένη παράδοση και ελεγχόμενης απελευθέρωσης του φαρμάκου μπορεί να ενισχύσει περαιτέρω αποτελέσματα κατά του όγκου και μείωση των αρνητικών επιπτώσεων.

Ειδικά πλούσια σε ΑΤ δεσμευτική πρωτεΐνη (SATB1) είναι μια παγκόσμια διοργανωτής χρωματίνης που ρυθμίζει την έκφραση του γονιδίου και ενέχεται στην διαφοροποίηση των κακοηθών βιολογική συμπεριφορά του καρκίνου [10]. Η ανώμαλη έκφραση των SATB1 έχει δειχθεί ότι προωθείται ο καρκίνος του μαστού, ο καρκίνος του πνεύμονα και λέμφωμα [11] – [13]. προηγούμενες μελέτες μας έχουν δείξει ότι SATB1 διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στον καρκίνο του στομάχου και μπορεί να είναι ένας ανεξάρτητος δείκτης πρόγνωσης για καρκίνο του στομάχου [14], [15]. Καταστολή της έκφρασης SATB1 παραδίδοντας siRNA ή πλασμίδιο που κωδικοποιεί ειδικό παρεμβολής σύντομο harpin RNA (shRNA) έναντι SATB1 θα μπορούσε να αναστείλει τον πολλαπλασιασμό και την εισβολή, και να προωθήσει την απόπτωση των καρκινικών κυττάρων [16], [17]. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι SATB1 είναι ένας πιθανός θεραπευτικός στόχος για τον καρκίνο του στομάχου.

Υποθέτουμε ότι ο συνδυασμός της γονιδιακής θεραπείας και της χημειοθεραπείας θα μπορούσε να ενισχύσει σημαντικά την θεραπευτική αποτελεσματικότητα έναντι του γαστρικού καρκίνου. Σε προηγούμενη μελέτη μας, έχουμε αναπτύξει ένα στοχοθετημένο σύστημα συν-παράδοσης θερμοευαισθητοποιημένων βασίζεται σε θερμοευαίσθητο μαγνητική κατιονικά λιποσώματα (TSMCL). Με καλκεΐνη δοκιμασία απελευθέρωσης, είχαμε βελτιστοποιηθεί το θερμοευαίσθητο λιποσωμικό σκεύασμα, και στη συνέχεια μέτρησαν την μαγνητικές ιδιότητες και την παράδοση του γονιδίου της αποτελεσματικότητας των TSMCL. Σε αυτή τη μελέτη, φορτώσαμε δοξορουβικίνη και διάνυσμα SATB1-shRNA σε αυτό το σύστημα για τον συνδυασμό της γονιδιακής θεραπείας και της χημειοθεραπείας, και αξιολογήθηκαν συνεργιστική δράση κατά του όγκου τους κατά του καρκίνου του γαστρικού in vitro και in vivo.

Υλικά και Μέθοδοι

Υλικά |

Χοληστερίνη, 1,2-διπαλμιτοϋλ-sn-γλυκερο-3-φωσφοχολίνη (DPPC), και 3β- [Ν- (Ν ‘, Ν’-διμεθυλαμινοαιθανο) -καρβαμοϋλ] χοληστερόλη (DC-Chol) αγοράστηκαν από την Avanti Polar Lipids (ΗΠΑ). Βρωμιούχο διμεθυλοδιοκταδεκυλαμμώνιο (DOAB) ελήφθησαν από την Sigma-Aldrich (USA). Μαγνητικό ρευστό Fe

3Ο

4 συντέθηκε από Galaxy Νανοτεχνολογία (Κίνα). FAM σημασμένο siRNA και πλασμίδιο pGFP-SATB1 shRNA δόθηκαν από GenePharma (Σαγκάη, Κίνα). Δοξορουβικίνη αγοράστηκε από Hisun Φαρμακευτική (Zhejiang της Κίνας). Ο ορός εμβρύου μόσχου (FBS), μέσα καλλιέργειας, πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη (PEST) και θρυψίνη παρασχέθηκαν από την Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). SATB1 μονοκλωνικό αντίσωμα κουνελιού ήταν από Epitomics (Abcam, UK). Όλα τα άλλα χημικά ήταν αναλυτικού βαθμού εμπορικής και χρησιμοποιήθηκαν χωρίς περαιτέρω καθαρισμό.

Παρασκευή σύστημα συν-χορήγησης

Αυτό το σύστημα συν-χορήγησης βασίστηκε σε θερμοευαίσθητο κατιονικά λιποσώματα, τα οποία παρασκευάστηκαν με ένα θερμοευαίσθητο κατιονικά σκεύασμα της DPPC, DC-χοληστερόλη, DOAB και χοληστερόλη σε γραμμομοριακή αναλογία 80:5:5:10 βελτιστοποιηθεί σε προκαταρκτικά πειράματα μας. Τα λιποσώματα (TsCl) παρασκευάστηκαν με την μέθοδο ενυδάτωσης λεπτού φιλμ, που ακολουθείται από εξώθηση [18]. Η μέθοδος βαθμίδωση θειικού αμμωνίου χρησιμοποιήθηκε για να φορτώσει DOX σε ΤδΟΙ (TsCl-DOX). Για την παρασκευή μαγνητικών λιποσώματα (TSMCL), μαγνητικό ρευστό Fe

3Ο

4 χρησιμοποιήθηκε ως ο πυρήνας και συν-ενθυλακωμένα με ρυθμιστικό διάλυμα θειικού αμμωνίου εντός των λιποσωμάτων. Μετά το σχηματισμό της λεπτής μεμβράνης εντός φιάλης με στρογγυλό πυθμένα, ένα χιλιοστόλιτρο εναιωρήματος θειικού σιδήρου και του αμμωνίου προστέθηκε για την ενυδάτωση του φιλμ, και κατόπιν εξωθήθηκε μέσα από τα φίλτρα πολυανθρακικού και φορτώθηκαν με DOX (TSMCL-ϋΟΧ) με την μέθοδο βαθμίδωσης θειικού αμμωνίου . Τέλος, τα προϊόντα από την διήθηση πήγματος φυγοκεντρήθηκαν στα 1000 g για 15 λεπτά για να απομακρυνθεί το μη εγκαψιδιωμένο Fe

3Ο

4.

pGFP-SATB1-shRNA (shSATB1) διάνυσμα επωάστηκε με διαφορετικές λιποσώματα σε μέσο ελεύθερο ορού σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά, για να παρασκευασθεί ΤδΟΙ-shSATB1, ΤδΟΙ-DOX-shSATB1, TSMCL-shSATB1 και TSMCL-DOX-shSATB1, αντίστοιχα.

Προσδιορισμός του δυναμικού ζήτα, το μέγεθος των σωματιδίων, και πολυδιασπορά

το μέσο μέγεθος των σωματιδίων και η πολυδιασπορά της κατανομής μεγέθους σωματιδίων των λιποσωμάτων προσδιορίσθηκαν στους 25 ° C με δυναμική σκέδαση φωτός χρησιμοποιώντας ένα ZetaPALS σωματίδιο μεγέθους όργανο (Brookhaven Instruments Corporation, USA). Το δυναμικό ζήτα των λιποσωματικών διασπορών μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τον ίδιο μέσο στους 25 ° C με την ηλεκτροφορητική κινητικότητα.

Προσδιορισμός της Δοξορουμπισίνης φορτώνονται αποδοτικότητα

συγκέντρωση DOX στα λιποσώματα μετρήθηκε με φθοριόμετρο ( Perkin Elmer, USA) με 485 nm διέγερση και 590 nm φίλτρα εκπομπής με μία σειρά αραίωσης των ελεύθερων DOX ως πρότυπο. DOX φορτωμένο αποδοτικότητα υπολογίστηκε με βάση τη συγκέντρωση DOX.

διαφορική θερμιδομετρία σάρωσης (DSC)

DSC διεξήχθη για να αξιολογηθεί η θερμοευαισθησία λιποσωμάτων με προσδιορισμό της θερμοκρασίας μετάπτωσης φάσης (Tm). Tm αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα νανο DSC (ΤΑ Instruments, USA) με ρυθμό θέρμανσης 20 ° C /h με 20 mg /ml φωσφολιπιδίου.

In vitro θερμοευαίσθητο δοκιμασία απελευθέρωσης ϋΟΧ

20 μl DOX φορτωμένα λιποσώματα επωάστηκαν σε 1 ml PBS και PBS με ορό 50% εμβρυϊκό ορό (FBS), η οποία μιμείται την ίη νίνο περιβάλλον ξεχωριστά σε σωλήνες Eppendorf. Τα δείγματα θερμάνθηκαν σε υδατόλουτρο στους 37 ° C και 42 ° C για 1 ώρα, αντίστοιχα. Στη συνέχεια, η ένταση φθορισμού του DOX μετρήθηκε σε φθοριόμετρο (Perkin Elmer, USA) χρησιμοποιώντας 485 nm διέγερση και 590 nm φίλτρα εκπομπής. Για την απελευθέρωση του 100%, τα δείγματα επωάστηκαν σε 1 ml PBS με 1% Triton Χ-100 για 1 λεπτό. Τα ποσοστά απελευθέρωση ϋΟΧ υπολογίστηκαν ως ακολούθως: όπου F

ήταν ο φθορισμός των δειγμάτων μετά από θέρμανση, F

0 ήταν η αρχική φθορισμού των δειγμάτων πριν από τη θέρμανση, και F

100 ήταν ο φθορισμός των δειγμάτων που έλαβαν θεραπεία με Triton Χ-100.

κυτταρική καλλιέργεια

Ανθρώπινο γαστρικό αδενοκαρκίνωμα ΜΚΝ-28 κυτταρική σειρά αγοράστηκε από keygen Biotech (Nanjing, Κίνα) και καλλιεργήθηκαν σε DMEM υψηλής γλυκόζης συμπληρωμένο με 10% FBS, 100 U /mL πενικιλλίνη και 100 μg /mL στρεπτομυκίνη σε μία υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2 στους 37 ° C.

In vitro μορφομετατροπή κυττάρου

ΜΚΝ-28 κύτταρα σπάρθηκαν σε 12-φρεατίων σε πυκνότητα 4 Χ 10

5 κύτταρα /φρεάτιο και αναπτύχθηκαν όλη τη νύκτα σε περίπου 80% συρροή. Την επόμενη ημέρα, τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με προθερμασμένο PBS, στη συνέχεια, ΤδΟΙ-shSATB1 και TSMCL-shSATB1 προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο και επωάστηκαν για 6 ώρες. Τα κύτταρα επωάστηκαν με TSMCL-shSATB1 τοποθετήθηκαν σε 12 φρεατίων μαγνητική πλάκα κατά τη διάρκεια των πρώτων 30 λεπτών για να προσφέρει ένα μαγνητικό πεδίο. Στη συνέχεια, το μέσο επώασης αντικαταστάθηκε με ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 10% FBS και τα κύτταρα επωάστηκαν για 24 ώρες. επίπεδο έκφρασης GFP αξιολογήθηκε κάτω από μικροσκόπιο φθορισμού (Nikon 80i) και κυτταρόμετρο ροής (BD FACS Canto ΙΙ).

Σε πραγματικό χρόνο αλυσιδωτής αντίδρασης ποσοτικής πολυμεράσης (RT-qPCR)

Ολικό RNA εξήχθη από ΜΚΝ-28 κύτταρα χρησιμοποιώντας ΤΚΙζοΙ αντιβασιλέας (Invitrogen, Carlsbad, CA) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή και cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας PrimeScript RT Master Mix (Takara, Dalian). PCR πραγματοποιήθηκε με τη χρήση SYBR Προμίγματα Ex Taq II (Takara, Dalian) σε StepOne Plus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, USA). Οι αλληλουχίες των εκκινητών ήταν ως εξής: SATB1 νόημα 5′-ACAGAACCCTGTGGGAGAAC-3 ‘, και αντινόημα 5′-GCGTTGCTCTCCTGTTCATA-3′ GADPH αίσθηση 5’-ACAGAACCCTGTGGGAGAAC-3 ‘, και αντινόημα 5′-GCGTTGCTCTCCTGTTCATA-3’. επίπεδο SATB1 mRNA ομαλοποιήθηκε με εκείνη του GAPDH.

Western ανάλυση κηλίδος

ΜΚΝ-28 κύτταρα συλλέχθηκαν και λύθηκαν σε ρυθμιστικό RIPA. Τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν μετά από φυγοκέντρηση σε 10,000 g για 10 λεπτά. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης του υπερκειμένου προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα BCA Protein Assay Kit. Στη συνέχεια, 40 μg δειγμάτων έτρεξαν σε 15% SDS-PAGE και οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF. Στη συνέχεια, οι μεμβράνες επωάστηκαν σε 5% άπαχο γάλα για 1 ώρα για τον αποκλεισμό της μη ειδικής σύνδεσης και στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με SATB1 ή αντίσωμα β-ακτίνης (1:500 αραίωση). Οι μεμβράνες μετά ανιχνεύθηκαν με δευτερογενές αντίσωμα αντι-κουνελιού συζευγμένο με HRP κατσίκας για 30 λεπτά. Τέλος, οι μεμβράνες οπτικοποιήθηκαν με ένα ενισχυμένο σύστημα χημειοφωταύγειας (ECL, Pierce) και εκτέθηκαν σε φιλμ ακτίνων Χ.

In vitro αξιολόγηση της κυτταρικής πρόσληψης

Για να αξιολογηθεί η ενδοκυτταρική τοποθεσία του παραδίδεται DOX και pGFP-SATB1 shRNA και η ενισχυμένη διείσδυση των λιποσωμάτων στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα από τα μαγνητικά στοχευμένες, ένα FAM σημασμένο siRNA (πράσινος φθορισμός) χρησιμοποιήθηκε για να μιμηθούν pGFP-SATB1 shRNA, και DOX από μόνη της έχει ένα ένστικτο κόκκινο φθορισμό να παρακολουθείται κυτταρική πρόσληψη . ΜΚΝ-28 κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκα 12 φρεατίων στους 4 × 10

5 κύτταρα /φρεάτιο και αναπτύσσονται όλη τη νύκτα. Στη συνέχεια, τα κύτταρα επωάστηκαν με δωρεάν siRNA, ΤδΟΙ-siRNA, TSMCL-siRNA, ΤδΟΙ-DOX, TSMCL-DOX, ΤδΟΙ-ϋΟΧ-siRNA ή TSMCL-DOX-siRNA για 6 ώρες. Για μαγνητική λιποσώματα, οι πλάκες τοποθετούνται σε μια 12 φρεατίων μαγνητική πλάκα κατά τη διάρκεια της πρώτης ώρας επώασης. Τα κύτταρα έγιναν ορατά με μικροσκόπιο φθορισμού για να εντοπίσετε τις φθορίζουσες ετικέτες των DOX και siRNA. Οι πυρήνες βάφτηκαν με DAPI (μπλε φθορισμός).

ΜΤΤ δοκιμασία

ΜΚΝ-28 κύτταρα σπάρθηκαν σε πυκνότητα 2 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο σε πλάκες 96 φρεατίων και αναπτύχθηκαν όλη τη νύκτα. Τα κύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν με διαφορετικές λιποσώματα σε 37 ° C για 2 ώρες σε CO

2 θερμοκοιτίδα. Για μαγνητική λιποσώματα, οι πλάκες τοποθετήθηκαν κάτω από 96 φρεατίων μαγνητική πλάκα κατά τη διάρκεια των πρώτων 1 h επώασης. Επόμενη τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με PBS και επωάστηκαν για 46 ώρες σε φρέσκο ​​μέσο. Στη συνέχεια, η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με δοκιμασία ΜΤΤ. Το μέσο σε κάθε φρεάτιο αντικαταστάθηκε με διάλυμα ΜΤΤ 20 μΐ (Sigma-Aldrich, USA) και επωάστηκαν για 4 ώρες στους 37 ° C, στη συνέχεια τα υπερκείμενα απορρίφθηκαν και κρύσταλλοι φορμαζάνης διαλύθηκαν με 200 μΙ DMSO. Οι πλάκες μετρήθηκε στα 490 nm σε αναγνώστη μικροπλάκας, και η βιωσιμότητα των κυττάρων υπολογίστηκε σύμφωνα με τον ακόλουθο τύπο:

Η κυτταρομετρία ροής

Η απόπτωση ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ ανίχνευσης Annexin V-FITC απόπτωση (eBioscience, USA). ΜΚΝ-28 κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 12-φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία όπως περιγράφηκε ανωτέρω. Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν, πλύθηκαν δύο φορές με PBS και εναιωρήθηκαν σε 500 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος δέσμευσης. Επόμενη τα κύτταρα χρωματίστηκαν με διπλό Annexin V-FITC και ιωδιούχο προπίδιο (ΡΙ). Κύτταρα σε πρώιμο στάδιο απόπτωσης βάφονται με Annexin V-FITC, αλλά δεν βάφονται με ΡΙ ποσοτικοποιήθηκαν με cytometery ροής.

μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού

παλιό Πέντε έως έξι εβδομάδες αρσενικών Balb /c γυμνών ποντικών ήταν που παρέχονται από το Κέντρο για τα πειράματα σε ζώα των Tongji Medical College. Κάθε ποντικός εμβολιάσθηκε υποδορίως στο δεξιό πλευρό με 5 χ 10

6 ΜΚΝ-28 κύτταρα. Αρκετές εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό του όγκου, 36 ποντίκια που φέρουν όγκο χωρίστηκαν τυχαία σε έξι ομάδες (n = 6). Τα ποντίκια ενέθηκαν μέσω της φλέβας της ουράς με Ελεύθερη ϋΟΧ, TSMCL-DOX, TSMCL-shSATB1, ΤδΟΙ-DOX-shSATB1, TSMCL-ϋΟΧ-shSATB1 ή φυσιολογικό αλατούχο ως έλεγχο. Η δόση του DOX ήταν 2,5 mg /kg και εκείνη της pGFP-SATB1 shRNA ήταν 10 μg ανά ποντικό. Η θεραπεία χορηγήθηκε μία φορά κάθε 3 ημέρες και όγκου μέγεθος μετρήθηκε μέσω ενός calipering και, στη συνέχεια, θα μπορούσε να υπολογιστεί ο όγκος του όγκου από τον ακόλουθο τύπο: όγκος = (D

Min)

2 × D

Max /2, όπου D

Max ήταν η μεγαλύτερη διάμετρος του όγκου και D

Ελάχιστη ήταν η συντομότερη. Για TSMCL-DOX, TSMCL-shSATB1 και TSMCL-DOX-shSATB1, η μαγνητική στόχευση επιτεύχθηκε χρησιμοποιώντας μια συνεχή εξωτερικό μαγνητικό πεδίο του 5000 Gauss για 30 λεπτά με επίκεντρο τον όγκο μετά τη χορήγηση του φαρμάκου. Όλα τα πειράματα που εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Tongji Medical College και όλα τα ζώα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ανώδυνο τρόπο σύμφωνα με τις οδηγίες φροντίδας ζώων και την Επιτροπή Χρήσης.

Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± τυπική απόκλιση (SD). Η στατιστική σημαντικότητα μεταξύ των διαφόρων ομάδων εκτιμήθηκε με t-test του Student και ανάλυση ενός παράγοντα διασποράς δοκιμής (ANOVA). Για τον χρόνο επιβίωσης των ζώων, καθορίστηκαν οι καμπύλες Kaplan-Meier της κάθε ομάδας και να συνδεθείτε τεστ rank διεξήχθη για να συγκρίνει το ποσοστό επιβίωσης. ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Χαρακτηρισμός των λιποσωμάτων

Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, η διάμετρος του ΤδΟΙ ήταν 83.6 ± 5.7 nm, ενώ εκείνο του ΤδΟ. -ΟΟΧ αυξήθηκε σε 118.5 ± 7.9 nm λόγω της ενθυλάκωση της ΔΟΞ. Εν τω μεταξύ, οι διάμετροι των ΤδΟΙ-shSATB1 και ΤδΟΙ-DOX-shSATB1 αυξήθηκαν σημαντικά σε 161,1 ± 11,8 nm και 238.1 ± 20.6 nm, αντίστοιχα, λόγω της προσκόλλησης και σύντηξης του πλασμιδιακού DNA σε λιποσώματα. Για μαγνητική λιποσώματα, τα μεγέθη των σωματιδίων του TSMCL, TSMCL-DOX, TSMCL-shSATB1 και TSMCL-DOX-shSATB1 ήταν 135,0 ± 11,6 nm, 157,2 ± 14,3 nm, 221,3 ± 15,7 nm και 319.4 ± 20.1 nm, αντίστοιχα, σημαντικά μεγαλύτερη από εκείνη του TsCl, ΤδΟΙ-DOX, ΤδΟΙ-shSATB1 και ΤδΟΙ-DOX-shSATB1 λόγω της παγίδευσης των μαγνητικών νανοσωματιδίων. Επιπλέον, το μέγεθος του TSMCL-shSATB1 και TSMCL-DOX-shSATB1 ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από ότι TSMCL και TSMCL-DOX, αντίστοιχα (ρ & lt? 0,05). Όλα τα λιποσώματα είχε στενή κατανομή μεγέθους, επειδή πολυδιασπαρσιμότητες τους ήταν όχι περισσότερο από 0,3.

Η

Ζέτα δυνατότητες της ΤδΟΙ, ΤδΟΙ-DOX, ΤδΟΙ-shSATB1 και ΤδΟΙ-DOX-shSATB1 ήταν 52,0 ± 7,3 mV, 50,1 ± 7.7 mV, 31,3 ± 5,2 mV και 26,7 ± 4,5 mV, αντίστοιχα. Μετά την επώαση με pGFP-SATB1- shRNA, τα επιφανειακά φορτία μειώθηκαν σημαντικά (ρ & lt? 0,05), λόγω της ηλεκτροστατικής αλληλεπίδρασης μεταξύ των κατιονικά λιπίδια και το πλασμίδιο DNA. Ωστόσο, η παγίδευση των μαγνητικών νανοσωματιδίων δεν είχε ως αποτέλεσμα σημαντική μείωση του δυναμικού Ζήτα στο μαγνητικό λιποσώματα.

Για DOX φορτωθεί αποτελεσματικότητας, το ποσοστό ενθυλάκωσης DOX ήταν 89 ± 3% και 78 ± 8% (n = 3) για TsCl-DOX και TSMCL-DOX, αντίστοιχα, και ήταν 85 ± 7% και 73 ± 9% (η = 3) για ΤδΟΙ-DOX-shSATB1 και TSMCL-DOX-shSATB1, αντίστοιχα. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η αλληλεπίδραση μεταξύ λιποσωμάτων και το πλασμίδιο δεν οδήγησε σε διαρροή DOX.

Η θερμοευαισθησία του λιποσωμάτων

Θερμιδομετρία Διαφορικής Σάρωσης πραγματοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η θερμοκρασία μετάπτωσης φάσης του ΤδΟ. Όπως φαίνεται στο Σχ. 1, ΤδΟΙ αποτελείται από DPPC, DC-χοληστερόλη, DOAB και χοληστερόλη σε γραμμομοριακή αναλογία 80:5:5:10 είχε Tm 40,8 ° C με ένα σχετικά ευρύτερη κορυφή μετάβαση που μπορεί να είναι η μετάβαση σύντηξης κορυφή του DPPC και DOAB .

η

In vitro θερμοευαισθητοποιημένων DOX απελευθέρωση από τα λιποσώματα

Όπως φαίνεται στο Σχ. 2, DOX ρυθμός απελευθέρωσης από ΤδΟΙ-DOX και TSMCL-DOX ήταν μόνο 12% και 16% μετά από επώαση με PBS στους 37 ° C, και αυξήθηκε σε 20% και 19% μετά από επώαση με 50% FBS, αντίστοιχα. Για TsCl-DOX-shSATB1 και TSMCL-DOX-shSATB1, DOX ρυθμός απελευθέρωσης ήταν 12% και 15% μετά από επώαση με PBS στους 37 ° C, και ήταν και οι δύο το 16% μετά από επώαση με 50% FBS, υποδεικνύοντας ότι η ενσωμάτωση του πλασμιδίου είχε καμία σημαντική επίδραση στη σταθερότητα των λιποσωμάτων (ρ & gt? 0,05).

Η απελευθέρωση ϋΟΧ από διαφορετικές λιποσώματα σε 37 ° C (Α) και 42 ° C (Β) μετά από επώαση με PBS ή 50% FBS. Οι τιμές εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± SD (η = 3).

Η

DOX ρυθμός απελευθέρωσης από ΤδΟΙ-DOX και TSMCL-ϋΟΧ αυξήθηκε στο 37% μετά την επώαση με PBS στους 42 ° C, και η αυξημένη σε 45% και 49% μετά από επώαση με 50% FBS, αντίστοιχα. Για TsCl-DOX-shSATB1 και TSMCL-DOX-shSATB1, DOX ρυθμός απελευθέρωσης ήταν 35% και 43% μετά από επώαση με PBS και FBS στους 42 ° C, αντιστοίχως, και τα δύο σημαντικά υψηλότερο από ότι στους 37 ° C (ρ & lt? 0,05). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι TsCl-DOX, TSMCL-DOX, ΤδΟΙ-DOX-shSATB1 και TSMCL-DOX-shSATB1 έχουν επιθυμητή θερμοευαισθησία, και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για την υπερθερμία πυροδότησε την απελευθέρωση του ελέγχου της DOX.

κατασιγάσει της έκφρασης SATB1 σε ΜΚΝ-28 κύτταρα επιμολυσμένα με λιποσώματα

στη συνέχεια εκτιμήσαμε την αποτελεσματικότητα των λιποσωμάτων για να παραδώσει διάνυσμα shSATB1 σε ΜΝΚ-28 κύτταρα. Τυπικές εικόνες φθορισμού των κυττάρων που επιμολύνθηκαν με ΤδΟΙ-shSATB1 και TSMCL-shSATB1 δείχθηκε στο Σχ. 3Α. Κυτταρομετρίας ροής ανάλυση έδειξε ότι η αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης του ΤδΟΙ-shSATB1 ήταν μόνο 15.4 ± 0.15%. Ωστόσο, μετά την εφαρμογή του προσανατολισμού του μαγνητικού πεδίου, η αποτελεσματικότητα επιμόλυνσης του TSMCL-shSATB1 ήταν 34,3 ± 0,93%, σημαντικά υψηλότερη από εκείνη των ΤδΟΙ-shSATB1 (Σχ. 3Β).

(Α) φθορισμού απεικόνιση ΜΚΝ -28 κύτταρα επιμολυσμένα με ΤδΟΙ-shSATB1 και TSMCL-shSATB1. (Β) Ποσοτική ανάλυση της αποτελεσματικότητας επιμόλυνσης του ΤδΟΙ-shSATB1 και TSMCL-shSATB1 με FACS. (C) Ανάλυση Western blot της πρωτεΐνης επίπεδο SATB1 σε ΜΚΝ-28 κύτταρα επιμολυσμένα με ΤδΟΙ-shSATB1 και TSMCL-shSATB1. (D) σε πραγματικό χρόνο PCR ανάλυση του επιπέδου mRNA SATB1 σε ΜΚΝ-28 κύτταρα επιμολυσμένα με ΤδΟΙ-shSATB1 και TSMCL-shSATB1. Οι τιμές εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± SD από τρία ανεξάρτητα πειράματα. * P & lt? 0,05 σε σύγκριση με κοροϊδεύει τον έλεγχο? # P & lt?. 0.05 σε σύγκριση με ΤδΟΙ-shSATB1

Η

Για να καθοριστεί αν η παραδοθεί φορέας shSATB1 θα μπορούσε να μεσολαβήσει αποσιώπηση της έκφρασης SATB1 σε ΜΚΝ-28 κύτταρα, πραγματοποιήσαμε σε πραγματικό χρόνο ποσοτική PCR και ανάλυση Western blot. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι και τα δύο επίπεδα SATB1 mRNA και της πρωτεΐνης μειώθηκαν σε κύτταρα επιμολυσμένα με ΤδΟΙ-shSATB1 και TSMCL-shSATB1, σε σύγκριση με κύτταρα ελέγχου. Επιπλέον, TSMCL-shSATB1 με τη βοήθεια του μαγνητικού πεδίου ήταν πιο ισχυρό από ΤδΟΙ-shSATB1 να αναστέλλουν την έκφραση SATB1 σε ΜΚΝ-28 κύτταρα (Σχ. 3C, D).

μαγνητική στόχευση in vitro κυτταρική πρόσληψη

Για να συγκρίνουμε τις διεισδύσεις στα κύτταρα μεταξύ μη μαγνητικά και μαγνητικά λιποσώματα με την εφαρμογή της μαγνητικής συγκεκριμένες οδηγίες, καθώς και την ενδοκυτταρική τοποθεσία του παραδίδεται DOX και shSATB1, ένα FAM-σημασμένο siRNA χρησιμοποιήθηκε ως δείκτης. Η απουσία πράσινου φθορισμού σε κύτταρα κατεργασμένα με δωρεάν siRNA ανέφερε ότι δεν μπορούσε να διεισδύσει μέσα στα κύτταρα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Παρατηρήσαμε ότι περισσότερα κύτταρα κατεργασμένα με TSMCL-siRNA εμφάνισαν πράσινος φθορισμός από κύτταρα επεξεργασμένα με ΤδΟΙ-siRNA (Σχ. 4Α). Επιπλέον, περισσότερα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με TSMCL-DOX έδειξε κόκκινο φθορισμό από τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με ΤδΟΙ-DOX (Εικ. 4Β). Σε κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με TSMCL-DOX-siRNA, υψηλή ένταση φθορισμού παρατηρήθηκε, και τα κύτταρα εμφανίστηκαν ροζ λόγω της συγχώνευσης των μπλε, κόκκινο και πράσινο χρώμα (Εικ. 4C). Αυτές οι παρατηρήσεις υποδεικνύουν ότι TSMCL είναι πιο ισχυρό στην παράδοση siRNA και DOX στα κύτταρα από ΤδΟΙ, μετά την εφαρμογή του μαγνητικού πεδίου.

(Α) Απεικόνιση των κυττάρων μετά από θεραπεία με ΤδΟΙ-siRNA και TSMCL-siRNA. (Β) Απεικόνιση των κυττάρων μετά από θεραπεία με ΤδΟΙ-DOX και TSMCL-DOX. (Γ) Απεικόνιση των κυττάρων μετά από θεραπεία με ΤδΟΙ-DOX-siRNA και TSMCL-DOX-siRNA. (D) Τυπικές λεπτομερής απεικόνιση της θέσης της ΔΟΞ και siRNA σε κύτταρα μετά από κατεργασία με TSMCL-DOX-siRNA.

Η

Επιπλέον, εξετάσαμε τον ενδοκυτταρικό εντοπισμό παραδίδεται DOX και siRNA. Red φθορισμός παρατηρήθηκε τόσο στους πυρήνες και το κυτταρόπλασμα, υποδεικνύοντας ότι παραδίδεται DOX βρισκόταν και στις δύο πυρήνες και κυτταρόπλασμα. Σε αντίθεση, πράσινο φθορισμό εμφανίστηκε κυρίως στο κυτταρόπλασμα, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι siRNAs παραδόθηκαν στο κυτταρόπλασμα (Εικ. 4D). Η συγχώνευση του κόκκινου και του πράσινου εμφανίστηκε κίτρινο στο κυτταρόπλασμα, και η συγχώνευση των μπλε και το κόκκινο εμφανίστηκε λεβάντας στους πυρήνες. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα δεικνύουν ότι τόσο ΤδΟΙ και TSMCL μπορούν να διεισδύσουν σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα και να παραδώσει το περιεχόμενό τους στο κυτταρόπλασμα (ΔΟΞ και siRNA) και οι πυρήνες (DOX).

Σε χημικό περιβάλλον αποτελέσματα κατά του όγκου της λιποσώματα

Είμαστε αξιολόγησε τα in vitro αποτελέσματα αντι-όγκου αυτού του συστήματος συν-παράδοσης από τη δραστηριότητα επαγωγής κυτταροτοξικότητας και της απόπτωσης. Η κυτταροτοξικότητα των λιποσωμάτων εκτιμήθηκε με ανάλυση ΜΤΤ. Για τον προσδιορισμό των επιδράσεων των συγκεντρώσεων DOX και πλασμίδιο για την κυτταροτοξικότητα των λιποσωμάτων, εξετάσαμε λιποσώματα φορτωμένα με διάφορες συγκεντρώσεις DOX και διαφορετικές ποσότητες SATB1 shRNA. Με την αύξηση της συγκέντρωσης DOX, η κυτταροτοξικότητα των λιποσωμάτων αυξήθηκε (Εικ. 5Α). Ωστόσο, η προσθήκη της συγκέντρωσης SATB1 shRNA δεν οδήγησε σε αυξημένη κυτταροτοξικότητα, και υπήρχαν μόνο ελαφρά αύξηση κυτοτοξικότητα όταν η συγκέντρωση SATB1 shRNA ήταν περίπου 4 μg (Εικ. 5Β). Έτσι χρησιμοποιήσαμε 25 μΜ ϋΟΧ και 4 μg SATB1 shRNA να συγκρίνει την κυτταροτοξικότητα μεταξύ Δωρεάν DOX, Δωρεάν shRNA, ΤδΟΙ, TSMCL, ΤδΟΙ-DOX, TSMCL-DOX, ΤδΟΙ-shSATB1, TSMCL-shSATB1, ΤδΟΙ-DOX-shSATB1 και TSMCL- DOX-shSATB1.

(Α) Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετά από θεραπεία με λιποσώματα φορτωμένα με διαφορετικές συγκεντρώσεις DOX. (Β) Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετά από θεραπεία με λιποσώματα φορτωμένα με διαφορετικές συγκεντρώσεις shSATB1. (Γ) Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετά από θεραπεία με λιποσώματα όπως υποδεικνύεται. Οι τιμές εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± SD (η = 3). (Δ) Η απόπτωση των κυττάρων μετά από θεραπεία με λιποσώματα όπως υποδεικνύεται.

Η

Όπως φαίνεται στο Σχ. 5C, δωρεάν shRNA, ΤδΟΙ και TSMCL είχαν μικρή κυτταροτοξικότητα. Η βιωσιμότητα των κυττάρων ήταν 40,3 ± 3,4%, 73,6 ± 3,5% και 51,3 ± 4,5% για την ελεύθερη DOX, ΤδΟΙ-DOX και TSMCL-DOX, αντίστοιχα, γεγονός που υποδηλώνει ότι η κυτταροτοξικότητα της TSMCL-DOX ήταν υψηλότερη από ό, τι TsCl-DOX, αλλά χαμηλότερο από ελεύθερη ϋΟΧ . Η βιωσιμότητα των κυττάρων ήταν 79,2 ± 6,9% και 71,6 ± 4,7% για ΤδΟΙ-shSATB1 και TSMCL-shSATB1, αντίστοιχα, δείχνει καμία στατιστική σημαντικότητα (p & gt? 0,05). Για φαρμάκων και γονιδίων συν-χορήγησης, η βιωσιμότητα των κυττάρων ήταν μόνο 35.0 ± 3.2% και 22.3 ± 3.4% για ΤδΟΙ-DOX-shRNA και TSMCL-DOX-shRNA, αντίστοιχα, σημαντικά χαμηλότερη από εκείνη της ελεύθερης ϋΟΧ, ΤδΟΙ-DOX, TSMCL- φορτωμένα λιποσώματα DOX και SATB1shRNA (ρ & lt? 0,05). Επιπλέον, η κυτταρική βιωσιμότητα TSMCL-DOX-shRNA ήταν σημαντικά χαμηλότερη από εκείνη των ΤδΟΙ-DOX-shRNA (ρ & lt? 0,05). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι μία συνεργική δράση κυτταροτοξικότητα επιτυγχάνεται με συν-χορήγηση DOX και SATB1 shRNA. Επιπλέον, με την εφαρμογή της μαγνητικής στοχευμένες, μπορεί να ληφθεί ένα περαιτέρω ενισχυμένη κυτταροτοξικότητα.

Για να προσδιοριστεί η πρόσθετος μηχανισμός κατά του όγκου εκτός από την κυτταροτοξικότητα του συστήματος συν-χορήγησης, εξετάσαμε το ποσοστό απόπτωσης των ΜΚΝ-28 κύτταρα κατεργασμένα με Ελεύθερη ϋΟΧ, ΤδΟΙ-DOX, TSMCL-DOX, ΤδΟΙ-shSATB1, TSMCL-shSATB1, ΤδΟΙ-DOX-shSATB1 και TSMCL-DOX-shSATB1 με κυτταρομετρία ροής. Όπως έδειξε στο Σχ. 5D, το ποσοστό απόπτωσης ήταν 22.3% σε κύτταρα κατεργασμένα με ελεύθερη DOX, ήταν 8,9% σε κύτταρα κατεργασμένα με ΤδΟΙ-ϋΟΧ, αλλά αυξήθηκε σε 13,4% σε κύτταρα κατεργασμένα με TSMCL-DOX και μαγνητικό πεδίο. Ομοίως, το ποσοστό απόπτωσης ήταν 9,4% σε κύτταρα κατεργασμένα με ΤδΟΙ-shSATB1, αλλά αυξήθηκε σε 17,4% σε κύτταρα κατεργασμένα με TSMCL-shSATB1 και μαγνητικό πεδίο. Αντίθετα, ο ρυθμός της απόπτωσης ήταν 27.7% σε κύτταρα κατεργασμένα με ΤδΟΙ-DOX-shSATB1, υψηλότερο από ότι σε κύτταρα κατεργασμένα με ΤδΟΙ φορτωμένο με ΔΟΞ ή shSATB1 μόνο. Το ποσοστό απόπτωσης ήταν 32.4% σε κύτταρα κατεργασμένα με TSMCL-DOX-shSATB1, το υψηλότερο μεταξύ όλων των ομάδων. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η συν-χορήγηση DOX και SATB1 shRNA οδηγεί σε συνδυασμένα αποτελέσματα επαγωγής απόπτωσης. Με μια λέξη, αυτό το σύστημα συν-χορήγησης εμφανίζει ισχυρή κατά του όγκου αποτελέσματα in vitro.

Εν ζωή αντικαρκινική δραστικότητα των λιποσωμάτων

Για να προσδιοριστεί η in vivo δραστικότητα κατά του όγκου του συστήματος συν-παράδοσης, ιδρύσαμε ΜΚΝ-28 μοντέλα ξενομοσχεύματος ποντικού και ενίεται Δωρεάν DOX, TSMCL-DOX, TSCML-shSATB1, ΤδΟΙ-ϋΟΧ-shSATB1 ή TSMCL-DOX-shSATB1 στα ποντίκια μέσω της φλέβας της ουράς. Η θεραπεία χορηγήθηκε μία φορά κάθε 3 ημέρες, και οι όγκοι ανατμήθηκαν (Σχ. 6Α). Την ημέρα 15, ο όγκος του όγκου ήταν 0.44 ± 0,05 cm

3 σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με TSMCL-DOX-shSATB1, σημαντικά χαμηλότερη από ότι στην ομάδα φυσιολογικού ορού (2,14 ± 0,23 cm

3), ομάδα Ελεύθερη ϋΟΧ (1.08 ± 0.13 cm

3), ομάδα TSMCL-DOX (0,68 ± 0,10 εκατοστά

3), ομάδα TSCML-shSATB1 (1,43 ± 0,21 εκατοστά

3), και η ομάδα ΤδΟΙ-DOX-shSATB1 (0,77 ± 0,12 εκατοστά

3) (Σχ. 6Β).

(Α) Τυπική απεικόνιση ξενομοσχευμένων όγκων. (Β) Το μέγεθος του όγκου μετά από αγωγή με ελεύθερη DOX, TSMCL-DOX, TSMCL-shSATB1, ΤδΟΙ-DOX-shSATB1, ή TSMCL- DOX-shSATB1, θεραπεία με φυσιολογικό ορό χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέση τιμή ± SD (η = 6). (Γ) Η επιβίωση καμπύλες των ποντικών που φέρουν όγκο σε επεξεργασία με Ελεύθερη ϋΟΧ, TSMCL-DOX, TSMCL-shSATB1, ΤδΟΙ-DOX-shSATB1, ή TSMCL- DOX-shSATB1, θεραπεία με φυσιολογικό ορό χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος.

Η

Επιπλέον, όπως φαίνεται στο Σχ. 6 (C), ο μέσος χρόνος για τον όγκο του όγκου να φτάσει 2 cm

3 ήταν 30 ημέρες σε ομάδα TSMCL-DOX-shSATB1, περισσότερο από ότι σε φυσιολογικό ορό, ομάδα Ελεύθερη ϋΟΧ, ομάδα TSMCL-DOX, ομάδα TSCML-shSATB1 και ομάδα TsCl-DOX-shSATB1 (Εικ. 6C). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η συν-χορήγηση DOX και shSATB1 με TSMCL επιδεικνύει συνεργική δράση κατά του όγκου in vivo.

Συζήτηση

Παρά τις πρόσφατες ανάπτυξη σε χειρουργική επέμβαση, ακτινοθεραπεία και στοχεύουν θεραπεία, η χημειοθεραπεία είναι εξακολουθεί να είναι ένα από τα σημαντικά προσεγγίσεις για γαστρικό θεραπεία του καρκίνου. Ωστόσο, τα θεραπευτικά αποτελέσματα της χημειοθεραπείας είναι συχνά ανικανοποίητοι και δεν θα μπορούσε να βελτιώσει σημαντικά την πρόγνωση των ασθενών με καρκίνο [19]. Ένας κύριος λόγος είναι η ογκογένεση και την εξέλιξη του καρκίνου του στομάχου περιλαμβάνει μια ποικιλία διαφορετικών μηχανισμών? το μοναδιαίο αντι μηχανισμός του όγκου των παραδοσιακών χημειοθεραπείας έχει περιορίσει τα θεραπευτικά τους αποτελέσματα, έτσι ο συνδυασμός χημειοθεραπείας με γονιδιακή θεραπεία μπορεί να βελτιώσει κατά του όγκου αποτελέσματα. Ένα άλλο εμπόδιο της χημειοθεραπείας είναι ότι η συστηματική χορήγηση του φαρμάκου οδηγεί σε περιορισμένη συγκέντρωση του φαρμάκου στο καρκινικές θέσεις ενώ προκαλούν πολλές αρνητικές επιπτώσεις [8]. Το κλειδί για την επίλυση αυτών των προβλημάτων βασίζεται στην νέα ήθη της χορήγησης φαρμάκων, ως εκ τούτου, την ανάπτυξη στοχοθετημένων πολλαπλών παραγόντων σύστημα παροχής που μπορεί να καθοδηγείται κατευθείαν στην θέση του όγκου με ελεγχόμενη απελευθέρωση μπορεί να ξεπεράσει αυτά τα προβλήματα και να ενισχύσουν θεραπευτικά αποτελέσματα [20] – [25] .

Μεταξύ των διαφόρων συστημάτων χορήγησης φαρμάκων, τα λιποσώματα είναι πιο ελπιδοφόρα για την καλή biocompatibilities που προκαλούν ελάχιστα ή καθόλου αντιγονική, αλλεργικές και τοξικές αντιδράσεις, και εύκολα να υποστούν βιοαποικοδόμηση. Καθώς τα δύο φορείς φαρμάκων και γονιδίων, τα λιποσώματα μπορούν όχι μόνο να προστατεύσει τον ξενιστή από ανεπιθύμητες επιδράσεις του έγκλειστου φαρμάκου, αλλά επίσης εμποδίζει τα παγιδευμένα περιεχόμενα από πρόωρη απενεργοποίηση από το φυσιολογικό μέσο [26]. Επιπλέον, λιπόσωμα είναι μία δυνητικά στοχευμένο σύστημα παροχής φαρμάκου, είτε αυτό επιτυγχάνεται με αυξημένη διαπερατότητα και επίδραση κατακράτησης (EPR) (παθητική στόχευση), ή με μαγνητικό πεδίο καθοδήγηση και η ανοσολογική σύνδεση (Active στόχευση) [27]. Επιπλέον, ορισμένες λιποσώματα διαθέτουν ελεγχόμενη πυροδότησε χαρακτηριστικά αποδέσμευσης του φαρμάκου, όπως θερμο ευαισθησία, ευαισθησία στο ρΗ και την ευαισθησία των μικροκυμάτων.

Πρόσφατα είχαμε αναπτύξει μια νέα στοχευμένη μαγνητικό σύστημα θερμοευαίσθητο φαρμάκων και γονιδίων συν-παράδοσης (TSMCL). Βασισμένο σε ένα ηλεκτρικά ουδέτερη θερμοευαισθητοποιημένων διαμόρφωση (DPPC:Cholesterol = 80:20), θα είχε προσθέσει διαφορετικά κατιονικά συστατικά και να βελτιστοποιηθεί η θερμοευαισθησία λιποσωμάτων με προσδιορισμό απελευθέρωσης καλσεΐνης. Τα αποτελέσματα είχε δηλώσει ότι θα μπορούσαμε να πάρουμε ένα επιθυμητό θερμοευαισθησία με την αντικατάσταση 10 μέρη mol χοληστερόλη 5 μέρη mol DC-χοληστερόλη και 5 μέρη mol DOAB (DPPC:DC-Cholesterol:DOAB:Cholesterol = 80:5:5:10), και απελευθέρωση calcein από τα λιποσώματα θα ήταν μικρότερη στους 37 ° C, αλλά σημαντικά υψηλότερο στους 42 ° C σε αυτό το σκεύασμα. Στη συνέχεια, μαγνητικό ρευστό Fe

3Ο

4 είχε χρησιμοποιηθεί ως τον πυρήνα και λειτούργησε ως μαγνητική στόχευση και πηγή θέρμανσης του TSMCL. Μαγνητόμετρο δονούμενου δείγματος (VSM) μέτρηση είχε δηλώσει ότι τα μαγνητικά υγρό Fe

3Ο

4 ήταν υπερπαραμαγνητικά, έτσι TSMCL θα έχουν καλή μαγνητική στοχευμένες επιδράσεις. Εν τω μεταξύ, η καμπύλη θέρμανσης χρονο-εξαρτώμενη επίσης είχαν δείξει ότι τόσο μαγνητικό ρευστό Fe

3Ο

4 και TSMCL θα μπορούσε να θερμαίνεται από 25 ° C έως 42 ° C μέσα σε 20 λεπτά. Με τη βοήθεια του μαγνητικού ρευστού Fe

3Ο

4, και τα δύο μαγνητικά στόχευση και ενεργοποιούμενη από τη θερμοκρασία απελευθέρωσης φαρμάκου TSMCL θα μπορούσε να πραγματοποιηθεί. Τέλος, τόσο ΤδΟΙ και TSMCL είχαν εκτεθεί τυπικό λιποσωμική μορφολογίες και καλές διανομές υπό TEM.