Abstract

Ο ΑΠΦ ογκοκατασταλτικό δρα ως αισθητήρας του ογκογόνα σήματα, καταπολεμώντας ανώμαλο πολλαπλασιασμό σε μεγάλο μέρος μέσω της ενεργοποίησης του προγράμματος ρ53 μεταγραφικό, αν και ένας αριθμός από ρ53-ανεξάρτητη λειτουργίες έχουν περιγραφεί. Τοποθέτηση στοιχεία δείχνουν ότι, εκτός από την προώθηση ογκογένεση μέσω διαταραχές στην ομοιοστατική ισορροπία μεταξύ κυτταρικού πολλαπλασιασμού και απόπτωσης φανερής καρκινικά κύτταρα, γενετικές αλλοιώσεις που οδηγούν σε καρκινικά απώλεια καταστολέας της λειτουργίας ή ογκογονιδίου κέρδος της λειτουργίας μπορεί επίσης να υποκινήσει την ανάπτυξη του όγκου μέσω επιδράσεις στον όγκο μικροπεριβάλλον. Σε ένα διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού πολλαπλών σταδίων παγκρεατικών νευροενδοκρινικών καρκινογένεση (ΡΝΕΤ) που κινείται από την αναστολή της κανονικής ρ53 και καταστολείς όγκων Rb με SV40 μεγάλου Τ-αντιγόνου (Tag), στοχαστική εξέλιξη σε όγκους περιορίζεται εν μέρει από την απαίτηση για την έναρξη της μια αγγειογενετική διακόπτη. Παρά την αναστολή της ρ53 με Tag σε αυτό το μοντέλο ΡΝΕΤ ποντικού, η ταυτόχρονη διάσπαση του ΑΠΦ μέσω γενετικής νοκ-άουτ οδήγησε σε σημαντικά επιταχυνόμενη πορεία για σχηματισμό όγκου που είχε απροσδόκητα δεν οδηγείται από μεταβολές στον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων ή απόπτωση, αλλά μάλλον μέσω νωρίτερα ενεργοποίησης του αγγειογόνου διακόπτης. Στον καθορισμό μιας συνταγματικής γονιδίου p53 νοκ-άουτ, η απώλεια της Arf επιταχύνθηκε επίσης την ανάπτυξη των όγκων, αν και σε μικρότερο βαθμό. Τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι Arf απώλεια της λειτουργίας μπορεί να προωθήσει ογκογένεση μέσω της διευκόλυνσης της αγγειογένεσης, τουλάχιστον εν μέρει, μέσω μηχανισμών p53-ανεξάρτητη

Παράθεση:. Ulanet DB, απώλεια της ρ19

ΑΠΦ Διευκολύνει Hanahan D (2010) η αγγειογενετική Switch και όγκων μύηση σε ένα Multi-Stage Καρκίνου Μοντέλο μέσω p53-εξαρτώμενη και ανεξάρτητους μηχανισμούς. PLoS ONE 5 (8): e12454. doi: 10.1371 /journal.pone.0012454

Επιμέλεια: Nils Cordes, Dresden University of Technology, Γερμανία

Ελήφθη: 2 Ιούνη 2010? Αποδεκτές: 3, Αυγ του 2010? Δημοσιεύθηκε: 27 Αυγούστου του 2010

Copyright: © 2010 Ulanet, Hanahan. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από το Εθνικό Ίδρυμα Καρκίνου (DH? R01CA45234) και το Ίδρυμα AP Giannini Ιατρικής Έρευνας (ΟΒϋ? https://www.apgianninifoundation.org/). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο ARF (εναλλακτική πλαίσιο ανάγνωσης? ρ14

ARF σε ανθρώπινο, ρ19

ΑΠΦ σε ποντικό) ογκοκατασταλτικό χρησιμεύει ως αισθητήρας σημάτων υπερ-πολλαπλασιαστικές, με αποτέλεσμα ρ53-εξαρτώμενη αναστολή της ανάπτυξης και την απόπτωση [1], [2], [3]. Ενώ ARF δεν εκφράζεται σε σημαντικά επίπεδα στους περισσότερους φυσιολογικούς ιστούς, ογκογονιδίου ενεργοποίηση πυροδοτεί έκφραση του [4], με αποτέλεσμα την αναστολή της ουμπικουϊτίνης λιγάσης MDM2 και σταθεροποίηση της ρ53 [5]. Αναστολή της οδού p53, συνηθέστερα μέσω μεταλλάξεων στο

p53

ίδια, αδρανοποίηση του

ARF

, ή ενίσχυση των

MDM2

πιστεύεται ότι είναι ένα κρίσιμο βήμα στην παθογένεση των περισσότερων ανθρώπινων καρκίνων [6]. Παρά το γεγονός ότι η μετάλλαξη του

p53

και

ΤΑΠ

σε όγκους είναι ως επί το πλείστον αλληλοαποκλείονται εκδηλώσεις [7], την τοποθέτηση στοιχεία δείχνουν ότι η σχέση μεταξύ της p53 και ARF δεν είναι αυστηρά γραμμική και σημεία για p53 ανεξάρτητη από τις λειτουργίες ογκοκατασταλτικό του ΤΑΠ [8], [9]. Οι αρχικές in vivo ενδείξεις για μια πιθανή αποσύνδεση μεταξύ ARF και p53 προήλθε από τη διαπίστωση ότι η συνδυασμένη

p19

ΑΠΦ

και

ανεπάρκεια p53

σε ποντίκια έχει ως αποτέλεσμα την εμφάνιση ενός φάσματος όγκων που αποτελείται από ένα ευρύτερο φάσμα τύπων όγκου σε σχέση με τα ποντίκια που στερούνται είτε γονίδιο μόνος [9]. Στη συνέχεια, μια μελέτη σε δύο-βήμα μοντέλο καρκινογένεσης δέρμα ποντικού ϋΜΒΑ /ΤΡΑ αποκάλυψε μια επιτάχυνση του ρυθμού αύξησης των θηλωμάτων σε ένα

p19

ΑΠΦ

ελλιπή ως σύγκριση με ένα

p53

ελλιπή ως γενετικό υπόβαθρο [10]. Ομοίως,

p19

ΑΠΦ

αλλά όχι

p53

ανεπάρκεια διευκόλυνε την ανάπτυξη μελανώματος σε ένα διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού με ανάγλυφη p53-ανεξάρτητη γήρανση οδού [11]. Μια πιο πρόσφατη μελέτη προτείνει ένα πλαίσιο εξάρτηση του αποτελέσματος της

p19

ΑΠΦ

απώλεια κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης στη ρύθμιση του

PTEN

-deficiency, ότι

p19

ΑΠΦ

απώλεια μετέδωσε μια μερική ανασταλτική λειτουργία κατά τη διάρκεια της καρκινογένεσης του προστάτη, αλλά καταργήθηκε γήρανση και προωθείται υπερπλασία και μετατροπή των ινοβλαστών εμβρύου ποντικού. Και στις δύο ρυθμίσεις το διαφορικό αποτέλεσμα του

p19

ΑΠΦ

ζημία χωρίς επιπτώσεις στη δραστηριότητα p53 [12].

Σε ένα διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού των πολλαπλών σταδίων παγκρεατικών νευροενδοκρινικών καρκινογένεση (ΡΝΕΤ) , RIP-TaG2, η έκφραση του SV-40 Τ-αντιγόνο (Tag) σε παγκρεατικά κύτταρα β οδηγεί σε αναστολή της καταστολείς όγκων ρ53 και Rb, προωθώντας μια χρονικά ορίζεται ακόμη στοχαστική πολλαπλών σταδίων οδός για ογκογένεση. Παρά ογκογονιδίου έκφραση σε όλα τα παγκρεατικά νησίδια ~ 400 ποντικού, οι δευτερογενείς γεγονότων που απαιτούνται για εξέλιξη σε κάθε βήμα του μονοπατιού σε όγκους [13], [14]. Η πλειοψηφία, αλλά όχι όλες οι κανονικές νησίδες εξελιχθεί σε υπερπλασίας /δυσπλαστικών βλαβών σε όλη την κατά προσέγγιση 14 εβδομάδες διάρκεια ζωής των ποντικών RIP-TaG2. Ομοίως, μόνο ένα υποσύνολο (~15-20%) των υπερπλαστικών αλλοιώσεων νησιδίων υποβάλλονται σε αγγειογενετική διακόπτη, και μόνο ένα κλάσμα (~ 25%) αυτών των αγγειογόνων νησιδίων στη συνέχεια προχωρούν σε συμπαγείς όγκους. Προώθηση της υπερπλαστικών διακόπτη πιστεύεται ότι είναι εν μέρει διαμεσολαβείται από τον αυξητικό παράγοντα /επιβίωσης, IGF-ΙΙ, όπως η έκφρασή του επάγεται ταυτόχρονη με την έναρξη της β-κυττάρων υπερ-πολλαπλασιασμού [15]. Μια πιο πρόσφατη μελέτη εντόπισε μια συσχέτιση μεταξύ υπογραφές έκφραση microRNA και τα διάφορα στάδια της ογκογένεσης RIP-TaG2, με την επίπτωση που οι μεταβολές στην έκφραση αυτών των miRNAs θα μπορούσε να παίζει ένα ρόλο στην προώθηση αυτών των «διακόπτες» [16].

Επιδιώξαμε σε αυτή την έρευνα για να διαπιστωθεί αν ΑΠΦ είχε p53-ανεξάρτητες λειτουργίες στην καταστολή της εξέλιξης του όγκου σε μοντέλο RIP-TaG2 ΡΝΕΤ, μέσω σταυρούς σε ποντίκια που φέρουν μια γενετική νοκ-άουτ του

ΤΑΠ.

μια προηγούμενη μελέτη έδειξε ότι η γενετική knockout του

p53

σε αυτό το μοντέλο δεν είχε ως αποτέλεσμα μια ταχεία πορεία προς σχηματισμό όγκων, και στην πραγματικότητα, βήτα πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων μειώθηκε, πιθανότατα λόγω της αποσταθεροποίησης του SV-40 μεγάλο Τ ογκογονίδιο αντιγόνο, με το οποίο δεσμεύεται [17]. Αντίθετα, δείχνουμε εδώ ότι η απώλεια του

ΑΠΦ

επιταχύνει σημαντικά τον σχηματισμό όγκου, μέσω διευκολύνοντας την αγγειογενετική διακόπτη. Αυτές οι μελέτες παρέχουν

in vivo

απόδειξη για ρ53-ανεξάρτητο λειτουργίες Arf και προτείνουν ένα νέο ρόλο για ΑΠΦ ως καταστολέας της αγγειογένεσης του όγκου.

Αποτελέσματα

Knockout του

ΑΠΦ

επιταχύνει την εξέλιξη του όγκου RIP-TaG2 χωρίς σημαντικές επιπτώσεις στο καρκινικό κύτταρο απόπτωσης /πολλαπλασιασμό

Σύμφωνα με τη γνωστή επαγωγή της p19

ΑΠΦ σε απάντηση σε ογκογόνους σήματα [4],

ΑΠΦ έκφραση

mRNA βρέθηκε να προκαλείται σε SV-40 Tag εκφράζουν υπερπολλαπλασιαστικών νησίδες σύγκριση με τα φυσιολογικά νησίδια, με περαιτέρω αύξηση με την εξέλιξη σε αγγειογόνο αλλοιώσεις και στερεών όγκων σε ποντικούς RIP-TaG2 (Σχήμα 1). Για να προσδιορίσετε αν ΑΠΦ μπορεί να καταστέλλει ογκογένεση στη ρύθμιση της αναστολής p53, αξιολογήσαμε τα αποτελέσματα των γενετικών νοκ-άουτ του

ΑΠΦ

σε αυτό το μονοπάτι. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η απώλεια της Arf οδήγησε σε μια πολύ σημαντική, σχεδόν 5-φορές αύξηση σε φορτίο του όγκου (Σχήμα 2Α, ρ & lt? 0.0001)? υπήρχε, επιπλέον, μια αύξηση 1.8 φορές του αριθμού των όγκων (Σχήμα 2Β, p = 0,002). Ετερόζυγος απώλεια Arf επίσης είχε σαν αποτέλεσμα σημαντική αύξηση του φορτίου του όγκου (ρ & lt? 0.001) και τον αριθμό των όγκων (p = 0.02) σε σύγκριση με

ΑΠΦ

ποντικούς άγριου-τύπου RIP-TaG2. Απώλεια του άγριου τύπου

ΑΠΦ

αλληλόμορφο δεν εμφανίζονται σε καμία από τις

ΑΠΦ

+/-

όγκους που εξετάστηκαν (Σχήμα S1).

Τα επίπεδα mRNA του

ΑΠΦ

αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ποσοτική RT-PCR επί του cDNA που παράγεται από δεξαμενές RNA κανονικών μη διαγονιδιακά νησίδες, και υπερπλαστική νησίδες, αγγειογενετική νησιδίων (νησίδια απομονώνονται από 5-10 ποντικούς ομαδοποιήθηκαν), και όγκους (ίση ποσότητες RNA απομονώθηκε από 10 όγκους από τουλάχιστον 5 ποντίκια ομαδοποιήθηκαν) από ποντικούς RIP-TaG2. γονιδιακής έκφρασης κανονικοποιούνται και απεικονίζονται σε σχέση με την έκφραση MGUS

Η

(Α, Β) Επιπτώσεις της ομόζυγα και ετερόζυγα νοκ-άουτ του

ΑΠΦ

σχετικά με το βάρος του όγκου (Α?. * ρ & lt? 0.001, * * p & lt? 0,0001 σε σύγκριση με το

ΑΠΦ + /+

? η διαφορά μεταξύ του

ΑΠΦ +/-

και

ΑΠΦ – /-

ποντίκια δεν ήταν στατιστικά σημαντική) και ο αριθμός των όγκων (Β ? * p = 0.02, ** p = 0,002) σε 12 εβδομάδων ποντίκια RIP-TaG2. Μέσες τιμές +/- SEM από 15 (

ΑΠΦ + /+

), 17 (

ΑΠΦ +/-

) ή 20 (

ΑΠΦ – /-

) ποντίκια /ομάδα υποδεικνύονται. Mann-Whitney test για στατιστική σημαντικότητα. (C) απόπτωση, όπως καθορίζεται από την επισήμανση TUNEL σε υπερπλασίας νησίδες (Hyp), αγγειογενετική νησίδες (Ang), και όγκους (Tum) από το

ΑΠΦ

+ /+

ή

ΑΠΦ

– /-

RIP-TaG2 ποντίκια. Οι μέσες τιμές +/- SEM από διαβαθμισμένη αλλοιώσεις 6-7 μεμονωμένα ποντίκια από κάθε γονότυπο υποδεικνύεται. Ο αριθμός των συνολικών βλαβών αναλύονται για κάθε γονότυπο /στάδιο αλλοίωσης έχουν ως εξής:

ΑΠΦ + /+

(Ηγρ: n = 27? Ang: n = 33? Tum: n = 14)?

ΑΠΦ – /-

(Hyp: n = 18? Ang: n = 25: Tum: n = 22). (D) πολλαπλασιασμός, όπως μετράται με την% των κυττάρων με ενσωμάτωση BrdU στα διάφορα στάδια των βλαβών των νησιδίων από 4 επιμέρους

ΑΠΦ + /+

(Ηγρ: n = 21? Ang: n = 24? Tum: n = 12) και

ΑΠΦ – /-

(Hyp: n = 18? Ang:. n = 22? Tum: n = 24) ποντίκια RIP-TaG2

η

Με δεδομένη την ήδη αποδεδειγμένη ικανότητα του ARF να επάγει αναστολή του κυτταρικού κύκλου και την απόπτωση ανεξαρτήτως της ρ53 [9], [18], [19], [20], [21], εξετάσαμε για μεταβολές στην απόπτωση και τον πολλαπλασιασμό, όπως εκτιμάται από την επισήμανση TUNEL και ενσωμάτωση BrdU , αντίστοιχα, σε προ-νεοπλασματικές και όγκου αλλοιώσεις από το

RIP-TaG2? ΑΠΦ

+ /+

και

ΤΑΠ

– /-

ποντίκια. Παραδόξως, δεν μπορέσαμε να ανιχνεύσει οποιαδήποτε σημαντική επίδραση της απώλειας του ΑΠΦ σε οποιαδήποτε από αυτές τις παραμέτρους σε οποιοδήποτε από τα στάδια RIP-TaG2 (Σχήμα 2C, D). Για να διασφαλιστεί ότι δεν παραβλέπουμε ανεπαίσθητες επιδράσεις επί του κυτταρικού κύκλου ρύθμιση /πολλαπλασιασμού, εκτός από τη δοκιμασία ενσωμάτωσης BrdU, η οποία μετρά το ποσοστό των κυττάρων στη φάση S, αξιολογήσαμε επίσης την πολλαπλασιαστική δείκτη με ανοσοχρώση για φωσφο-ιστόνης Η3, μια δείκτη για κύτταρα σε φάση Μ. Σε συμφωνία με την δοκιμασία BrdU-ενσωμάτωση, δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στο ποσοστό των κυττάρων σε Μ-φάση παρατηρήθηκε μετά την απώλεια του ΑΠΦ (Εικόνα S2). Επιπλέον, σταθερή knockdown του

ΑΠΦ

χρησιμοποιώντας ένα

ΑΠΦ

στόχευση shRNA σε μία κυτταρική σειρά που προέρχεται από ένα άγριου τύπου RIP-TaG2 όγκου δεν είχε καμία επίδραση στην ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων in vitro (Εικόνα 3).

τα καρκινικά κύτταρα σταθερά μεταγωγή με ένα μη-αποσιώπησης (NS) ή

ΑΠΦ

φίμωση shRNA. (Α) Νοκ ντάουν του ΑΠΦ έκφραση της πρωτεΐνης από το

ΑΠΦ

στόχευση shRNA. β-ακτίνης επιπέδων πρωτεΐνης υποδεικνύονται ως έλεγχος για φορτίο πρωτεΐνης. (Β) Επίδραση των

ΑΠΦ

νοκ ντάουν στην ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων

in vitro

. Μέσες τιμές +/- SEM από τρία ανεξάρτητα πειράματα πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν υποδεικνύεται.

Η

Η απώλεια της Arf διευκολύνει την αγγειογενετική διακόπτη

Για να διερευνήσουν πώς νοκ-άουτ του

ΑΠΦ

θα μπορούσε να επιταχύνεται η ανάπτυξη του όγκου χωρίς μεταβολές στον πολλαπλασιασμό β-κυττάρου ή απόπτωση, αξιολογήσαμε κατά πόσο η απώλεια της Arf θα μπορούσαν να επηρεάζουν οποιοδήποτε από τα εγγενή εμπόδια που περιορίζουν τη μετάβαση του ογκογονιδίου που εκφράζουν β-κυττάρων σε παγκρεατικά νησίδια μέσα από τα διάφορα στάδια του σχηματισμού όγκων. Παρά την έκφραση του ογκογονιδίου Tag στον αναπτυσσόμενο πάγκρεας αρχίζει από εμβρυϊκή ημέρα 9, υπάρχει μια καθυστέρηση στην έναρξη της σποραδική υπερπολλαπλασιασμού νησιδίων από αρκετές εβδομάδες. Για να καθοριστεί εάν η απώλεια του ΑΠΦ θα μπορούσε να διευκολύνει μια προηγούμενη έναρξη της υπερπλαστικών διακόπτη, εξετάσαμε το ποσοστό των υπερπολλαπλασιαστικών νησιδίων αλλοιώσεων (όπως προσδιορίζεται με χρώση με το δείκτη πολλαπλασιασμού Ki67) τόσο σε 3- και 5-εβδομάδων σε

RIP -Tag2? ΑΠΦ

+ /+

και

ΤΑΠ

– /-

ποντίκια. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά στο ποσοστό των υπερπολλαπλασιαστικών νησίδων παρατηρήθηκε σε οποιοδήποτε από αυτά τα στάδια (Σχήμα 4Α), αν και σε 5-εβδομάδων ηλικίας, νησίδια από

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

– /-

ποντίκια ήταν κατά μέσο όρο μεγαλύτερες σε μέγεθος (Σχήμα S3A? 1,5-πλάσια αύξηση? P = 0,007). Το αυξημένο μέγεθος της βλάβης δεν ήταν αποτέλεσμα της αύξησης του μεγέθους των κυττάρων, καθώς ο αριθμός των κυττάρων /περιοχή ήταν σχεδόν πανομοιότυπες μεταξύ των δύο ομάδων (Σχήμα S3b).

(Α) Επιδράσεις στο υπερπλαστικών διακόπτη. Τα νησίδια από Κί67-χρωματισμένες τομές από 3- ή 5-εβδομάδων ποντίκια βαθμολογήθηκαν ως «κανονική» (χωρίς υπερπολλαπλασιασμός) ή υπερπλαστικό. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν την κατανομή των διαφόρων υποκατηγοριών νησιδίων εντός των υποδεικνυόμενων γονότυπους. Για τους ποντικούς 3 εβδομάδων, 60 (

ΑΠΦ + /+

) και 58 (

ΑΠΦ – /-

) νησίδα αλλοιώσεις βαθμολογήθηκαν σε τομές από 3 ποντίκια /ομάδα? για 5 εβδομάδων ποντίκια, 166 (

ΑΠΦ + /+

) και 231 (

ΑΠΦ – /-

) νησίδα αλλοιώσεις βαθμολογήθηκαν σε τμήματα 3-4 ποντίκια /ομάδα. Η κατανομή των νησιδίων τύπων δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των δύο γονότυπων είτε χρονικό σημείο (ακριβής δοκιμασία του Fisher? 5 εβδομάδα χρονικό σημείο: p = 0.06). Εκπρόσωπος Ki67-βάφονται υπερπλασίας βλάβες (από 3-εβδομάδων ποντίκια RIP-TaG2) του έδειξε

ΑΠΦ

γονότυπους απεικονίζονται στα δεξιά. (Β, C) Επιδράσεις στο αγγειογενετική έναρξη διακόπτη και όγκου. Ο αριθμός των ερυθρών, αγγειογόνου αλλοιώσεις (Β) και όγκων (C) υπολογίστηκε από 11 (

ΑΠΦ + /+

) ή 15 (

ΑΠΦ – /-

) ηλικίας 8 εβδομάδων RIP- ποντίκια TaG2 των υποδεικνυόμενων γονότυπους. Οι μέσες τιμές ± SEM υποδεικνύεται. δοκιμή για στατιστική σημασία Mann-Whitney? * P = 0.01, ** p & lt?. 0.0001

Η

επόμενο αξιολόγησε τα αποτελέσματα των

ΑΠΦ

νοκ-άουτ από τη συχνότητα των αγγειογενετικών μεταγωγής. Σε αντίθεση με την αμελητέα επίπτωση επί τη συχνότητα των νησιδίων υπερπλασίες, ο αριθμός των ερυθρών, αιμορραγικού αγγειογενετική νησίδων αυξήθηκε σημαντικά (κατά περίπου 30%) σε 8 εβδομάδων

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

– /-

ποντίκια σε σύγκριση με το

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

+ /+

αδερφάκια (Εικόνα 4Β? P = 0.01). Επιπλέον, ενώ η εμφάνιση των συμπαγών όγκων ήταν πολύ σπάνιο στις 8 εβδομάδες στο

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

+ /+

ποντίκια (όγκοι που υπάρχουν στο 4/11 ποντίκια? Όρο & lt? 1 όγκου /ποντίκι), μικροί όγκοι βρέθηκαν σχεδόν σε όλες τις

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

– /- ποντίκια

αναλύονται σε αυτή την ηλικία (μέσος όρος περίπου 2,5 όγκων /ποντίκι? Σχήμα 4C, σ & lt? 0,0001). Αξίζει να σημειωθεί ότι, στο βαθμολόγησης για υπερπλαστικών βλαβών στο χρονικό σημείο 5 εβδομάδων, περιστασιακή νησίδες παρουσιάζουν τα τυπικά χαρακτηριστικά του αιμορραγικού /νησιά του αίματος των αγγειογενετικών νησίδων [22], [23] παρατηρήθηκαν, με μια τάση προς μια υψηλότερη συχνότητα εμφάνισης στην

ΑΠΦ

– /-

σε σύγκριση με το

ΑΠΦ

+ /+

ποντίκια? Ωστόσο, η διαφορά αυτή δεν ήταν στατιστικά σημαντική σε αυτό το χρονικό σημείο (Σχήμα S3C). Έτσι, σε αυτό το μοντέλο πολλαπλών σταδίων, η απώλεια της Arf επιταχύνει το σχηματισμό όγκων, τουλάχιστον εν μέρει, μέσω διευκολύνοντας την αγγειογενετική διακόπτη.

ΑΠΦ knockout δεν οδηγεί σε σημαντικές αλλαγές στο αγγειακό φαινότυπο

Για να διερευνήσουν περαιτέρω τη φύση της αυξημένης αγγειογενετική φαινότυπο στο

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

– /- ποντίκια

, έχουμε την επόμενη αξιολόγησε το φαινότυπο του αγγειογόνα αγγεία. Παρά την αύξηση του αριθμού των αγγειογενετικών βλαβών στο

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

– /- ποντίκια

, οι προκύπτοντες βλάβες δεν διέφεραν σημαντικά σε αγγειακά πυκνότητα ή τη μορφολογία (πάχος σκάφος, βαθμός διακλάδωσης) (Σχήμα 5Α και τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται), ή ως προς το βαθμό του περικύτταρο κάλυψη (Σχήμα 5Β). Δεδομένου προηγούμενα ευρήματα καταδεικνύουν ένα ρόλο για το ΜΜΡ-9 που εκφράζουν ουδετερόφιλα στην προώθηση της αγγειογόνου διακόπτη [24], εξετάσαμε επίσης αν η απώλεια Arf έκφρασης είχε ως αποτέλεσμα μεταβολές στη συχνότητα εμφάνισης στρατολόγηση ουδετερόφιλων να «προ-αγγειογόνος» υπερπλαστικές αλλοιώσεις. Και στις δύο

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

+ /+

και

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

– /- ποντίκια

, διπλή ανοσοχρώση για το δείκτη πολλαπλασιασμού Κί67 και ο δείκτης 7/4 ουδετερόφιλων έδειξε ότι περίπου το 25% των υπερπλαστικών αλλοιώσεων που εξετάστηκαν (σε 5 εβδομάδες ηλικίας) περιείχε διηθητικά ουδετερόφιλα ( στις περισσότερες περιπτώσεις δεν υπερβαίνει πλέον 7/4 + κυττάρων /νησιδίων? δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Επιπλέον, δεν υπάρχουν σημαντικές αλλαγές στον αριθμό των διηθητικών ΜΜΡ-9 και 7/4 διπλών θετικών κυττάρων παρατηρήθηκε σε αγγειογενετική αλλοιώσεις από 8 εβδομάδων παλιό

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

+ /+

και

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

– /- ποντίκια

(τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται)

(Α) Απεικόνιση του αγγειακού συστήματος σε αγγειογενετική βλάβες από 8 εβδομάδων ποντικούς ηλικίας RIP-TaG2 των υποδεικνυόμενων γονότυπων με. ανοσοχρώση για Meca32 (κόκκινο). Εκπρόσωπος Meca32 /DAPI (μπλε) συγχωνεύθηκαν οι εικόνες. πυκνότητα σκάφος υπολογίστηκε με τη μέτρηση της περιοχής που καταλαμβάνεται από σκάφη Meca32 +? τιμές αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± SEM υπολογίζονται από την ανάλυση 16-20 αγγειογενετική βλάβες από 4 ξεχωριστά ποντίκια από κάθε γονότυπου. (Β) Διπλή ανοσοβαφή για Meca32 (ενδοθηλιακά κύτταρα, κόκκινο) και NG2 (περικύτταρα, πράσινο) διεξήχθη για να αναλυθεί ο βαθμός κάλυψης περικύτταρο εντός της αγγειογόνα αγγεία από 8-εβδομάδων RIP-TaG2 ποντικούς των υποδεικνυόμενων γονότυπους. Μπαρ, 20 μm.

Η

Επιλεκτική

ΑΠΦ

νοκ-άουτ σε στρωματικά διαμέρισμα δεν ενισχύσει σημαντικά όγκου ανάπτυξης

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι

ΑΠΦ

– /- ποντίκια

είναι τυφλοί λόγω ελαττώματος σε παλινδρόμηση του υαλοειδούς αγγείωσης στο μάτι κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης, που προκύπτουν από τη συσσώρευση των περιαγγειακών κυττάρων Pdgrfrβ + [25], [26]. Δεδομένα εμπλέκονται τα δύο κύτταρο αυτόνομα και μη αυτόνομα επιπτώσεις της απώλειας της ΑΠΦ σε αυτό το φαινότυπο [27]. Δεδομένου ότι

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

– /- ποντίκια

στερούνται ΑΠΦ έκφρασης σε όλο το σώμα και όχι μόνο στα καρκινικά κύτταρα, ρωτήσαμε αν η απώλεια της Arf σε ένα είδος μη-β-κυττάρων θα μπορούσε εν μέρει να διευκολύνουν την αγγειογενετική διακόπτη και σχηματισμό όγκων. Για να ξεκινήσετε την εξερεύνηση αυτής της δυνατότητας, πρέπει πρώτα να εξεταστεί κατά πόσον θα μπορούσε να ανιχνεύσει

ΑΠΦ

έκφραση στο διαμέρισμα στρωματικά του άγριου τύπου

RIP-TaG2

όγκους. Σε πραγματικό χρόνο ποσοτική ανάλυση RT-PCR σε ταξινομημένη κύτταρο διαμερισμάτων από

RIP-TaG2

όγκων αποδεικνύεται

ΑΠΦ

έκφραση, όπως αναμενόταν, στο διαμέρισμα των καρκινικών κυττάρων, αλλά όχι στα ενδοθηλιακά κύτταρα (CD31 +) , κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος (CD45 +), ή περικύτταρα (PDGFRβ +) (Σχήμα 6Α και S4). Αυτά τα αποτελέσματα συμφωνούν με την έννοια ότι η επαγωγή της έκφρασης είναι Arf, ως επί το πλείστον, περιορισμένη σε απόκριση σε ογκογόνα σήματα [4]? Ωστόσο, η ανάλυση αυτή δεν απέκλεισε το ενδεχόμενο της παροδικής επαγωγή της έκφρασης Arf στους τύπους στρωματικών κυττάρων που αναλύθηκαν, ούτε έκφραση σε άλλες κατηγορίες που διηθούν όγκο κυττάρων [π.χ. PDGFRβ αρνητικά περικύτταρα [28]].

(Α) Έκφραση

ΑΠΦ

στα διάφορα συστατικά τύπους καρκινικών κυττάρων RIP-TaG2. Πραγματικού χρόνου ποσοτική RT-PCR πραγματοποιήθηκε σε mRNA απομονωμένο από FACS ταξινομημένα κύτταρα από RIP-TaG2 όγκους [ECs (ενδοθηλιακά κύτταρα), ICs (κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος), T /συνθήκες λειτουργίας (όγκος /άλλα κύτταρα)]. Τα επίπεδα έκφρασης χαράσσεται σε σχέση με την έκφραση L19. (Β) Επίδραση των

ΑΠΦ

νοκ-άουτ για την ανάπτυξη του όγκου των μεταμοσχεύεται ορθοτοπικά καρκινικών κυττάρων. 1 × 10

5 καρκινικά κύτταρα προέρχονται από ένα

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

+ /+

όγκου εγχέεται στο πάγκρεας

ΑΠΦ

+ /+

ή

ΑΠΦ

– /-

ποντίκια και επέτρεψε να αναπτυχθούν για 4 εβδομάδες. Οι τιμές αντιπροσωπεύουν το μέσο μέγεθος όγκου (+ SEM) που υπολογίζεται από όγκους που απομονώθηκαν από 12 επιμέρους ποντίκια καθενός από τα υποδεικνυόμενα γονότυπους. Η διαφορά μεταξύ των τιμών δεν ήταν στατιστικά σημαντική (Mann-Whitney test? P = 0.1).

Η

Για να εκτιμηθεί άμεσα τον πιθανό ρόλο των

ΑΠΦ

νοκ-άουτ στον μη-όγκου κυτταρικό διαμέρισμα στον επηρεασμό της εξέλιξης του όγκου, πραγματοποιήσαμε ορθοτοπική πειράματα όπου τα καρκινικά κύτταρα προέρχονται από ένα

RIP-TaG2

?

ΑΠΦ

+ /+

όγκου εγχέεται στο πάγκρεας ανοσοεπαρκών

ΑΠΦ

+ /+

ή

ΑΠΦ

– /-

ποντίκια, και το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε τέσσερις εβδομάδες αργότερα. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο μέσο μέγεθος του όγκου μεταξύ των όγκων που σχηματίζονται στο

ΑΠΦ

+ /+

έναντι

ΑΠΦ

– /-

ποντίκια (Εικόνα 6Β). Σε συνδυασμό με την αδυναμία μας να ανιχνεύσουμε

ΑΠΦ

έκφραση σε ένα τύπο κυττάρου στρωματικών όγκων, αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι knockout του

ΑΠΦ

στο διαμέρισμα στρωματικά όγκου δεν είναι πιθανό να είναι το κυρίαρχο οδηγός του επιτάχυνε την ανάπτυξη του όγκου που παρατηρείται κατά την

ΑΠΦ

νοκ-άουτ σε ποντίκια RIP-TaG2. Δεδομένου ότι δεν είναι σαφές αν ο μηχανισμός της επαγωγής αγγειογένεσης σε ορθοτοπικώς ένεση καρκινικά κύτταρα ακολουθεί παρόμοια πορεία όπως την αγγειογένεση που επάγεται σε ενδογενείς προ-νεοπλασματικές αλλοιώσεις, παραμένει η πιθανότητα ότι η έλλειψη παρατηρούμενη επίδραση θα μπορούσε εν μέρει να αντανακλά αυτές τις διαφορές.

Knockout του

ΑΠΦ

επιταχύνει το σχηματισμό όγκων μέσω δύο ρ53-εξαρτώμενη και ανεξάρτητους μηχανισμούς

β-κύτταρα των ποντικών RIP-TaG2 [17], εμείς ύποπτα την πλειοψηφία των επιπτώσεων που παρατηρήθηκαν μετά knockout του

ΑΠΦ

να είναι ρ53-ανεξάρτητη. Παρ ‘όλα αυτά, προχωρήσαμε στην επαλήθευση της p53-ανεξαρτησίας του

ΑΠΦ

φαινότυπο νοκ-άουτ από την ανάλυση των αποτελεσμάτων των

ΑΠΦ

νοκ-άουτ σε p53-null γενετικό υπόβαθρο. Όπως και στο παρασκήνιο p53-άγριου τύπου,

ΑΠΦ

νοκ-άουτ στο

RIP-TaG2? p53

– /-

ποντίκια οδήγησε σε σημαντικά αυξημένη (2,4 φορές) το φορτίο του όγκου στις 12 εβδομάδες της ηλικίας σε σύγκριση με το

ΑΠΦ

+ /+

αδερφάκια (Εικόνα 7Α? p & lt? 0,001), καθώς και μια σημαντική αύξηση κατά 30% στον αριθμό αγγειογονικών βλαβών (σχήμα 7C? p = 0.04) και μικρών όγκων (Σχήμα 7D? p = 0,002) στις 8 εβδομάδες ηλικίας, επιβεβαιώνοντας ότι αυτά τα αποτελέσματα είναι τουλάχιστον σε μέρος ρ53-ανεξάρτητη. Ωστόσο, πρέπει να σημειωθεί ότι το μέγεθος των επιπτώσεων της

ΑΠΦ

νοκ-άουτ για το βάρος του όγκου (στις 12 εβδομάδες) και ο αριθμός των όγκων (σε 8 εβδομάδες) δεν ήταν τόσο δραματική όπως και στο

RIP-TaG2

?

ποντίκια p53

-wild-τύπου (Σχήμα 2). Επιπλέον, αν και την έναρξη του όγκου συνέβη νωρίτερα στο

RIP-TaG2? p53

– /-? ΑΠΦ

– /-

σε σύγκριση με το

RIP-TaG2? p53

– /-? ΑΠΦ

+ /+

ποντίκια, με ηλικία των 12 εβδομάδων, δεν παρατηρήθηκε διαφορά σε αριθμό όγκων ανιχνεύθηκε μεταξύ ποντικών αυτών των γενοτύπων (Σχήμα 7Β), υποδηλώνοντας ότι και οι δύο ρ53-εξαρτώμενη και ανεξάρτητες λειτουργίες της ΑΠΦ συνεργάζονται για να καταστείλει την αγγειογενετική διακόπτη και την εξέλιξη του όγκου σε αυτό το μοντέλο καρκινογένεσης πολλαπλών σταδίων

(Α, Β)

ΑΠΦ

νοκ-άουτ στο

RIP-TaG2.? p53

– /- ποντίκια

οδηγεί σε αυξημένη φορτίο του όγκου (Α? ρ & lt? 0,0001) χωρίς να επηρεάζει τον αριθμό των όγκων (Β) στις 12 εβδομάδες της ηλικίας. Μέσες τιμές +/- SEM από 19 (

p53 – /-? ΑΠΦ + /+

), ή 14 (

p53 – /-? ΑΠΦ – /-

) ποντίκια /ομάδα υποδεικνύονται. Mann-Whitney test για στατιστική σημαντικότητα. (C, D) Αυξημένη αγγειογενετική νησάκι αριθμούς (C? P = 0.04) και όγκων (D? P = 0,002) σε

RIP-TaG2? p53

– /-

?

p19

ΑΠΦ – /-

ποντίκια σε ηλικία 8 εβδομάδων. Μέσες τιμές +/- SEM από 15 (

p53 – /-? ΑΠΦ + /+

) ή 13 (

p53 – /-? ΑΠΦ – /-

) ποντίκια /ομάδα υποδεικνύονται. Mann-Whitney test για στατιστική σημαντικότητα.

Η

Σε μια προσπάθεια να εντοπίσει ένα μοριακό μηχανισμό για την αυξημένη αγγειογενετική συχνότητα μεταγωγής στο

Arf-

null ποντίκια RIP-TaG2, αναλύσαμε την έκφραση της μια σειρά γονιδίων που σχετίζονται με αγγειογένεση με πραγματικού χρόνου PCR. Δεν είχαμε, ωστόσο, τον εντοπισμό τυχόν αγγειογενετική ρυθμιστικά γονίδια που πειστικά μεταβληθεί στο μεταγραφικό επίπεδο σε ολόκληρη όγκους ή αγγειογενετική νησίδες μετά την απώλεια του ΑΠΦ (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα και στο Σχήμα S5A). Υπό το φως των πρόσφατων μελετών που καταδεικνύουν ένα ρόλο για ΑΠΦ στο ριβόσωμα βιογένεση [29] και σε μετα-μεταγραφικό έλεγχο της έκφρασης του VEGF [30], θα αξιολογούνται οι πιθανές αλλαγές στην έκφραση του VEGF στο επίπεδο της πρωτεΐνης μετά την απώλεια του ΤΑΠ. Αν και τα επίπεδα της πρωτεΐνης VEGF ήταν ελαφρώς αυξημένα σε όγκους RIP-TaG2 στο

p53

-null γενετικό υπόβαθρο (αύξηση 35%? P = 0.02), βρήκαμε ότι σε αυτή τη γενετική πλαίσιο, απώλεια

ΑΠΦ

δεν οδήγησε σε μεταβολή των επιπέδων της ολικής πρωτεΐνης VEGF (Σχήμα S5B). Επιπλέον, ανοσοχρώση για τον VEGF δεν αποκάλυψε οποιεσδήποτε εμφανείς αλλαγές στην έκφραση του VEGF /εντόπιση στις διάφορες προ-νεοπλασματικές αλλοιώσεις νησάκι στο

ΑΠΦ

-null RIP-TaG2 ποντίκια (Σχήμα S5c). Έτσι, δεν υπάρχει καμία ένδειξη ότι η επιταχυνόμενη αγγειογένεση που προκύπτει από την απώλεια των Arf περιλαμβάνει μεταβολή στη βιοσύνθεση VEGF.

Συζήτηση

Η αδρανοποίηση της οδού ARF /ρ53 είναι ένα κρίσιμο γεγονός στην πλειονότητα των ανθρώπινων καρκίνους, που χρησιμεύει για την άρση περιορισμών για ογκογόνο σηματοδότηση [31]. Εκτός από τις κανονικές δραστηριότητες ογκοκατασταλτικών του ρ53 στην διαμεσολάβηση κύκλου κυττάρου, απόπτωση και γήρανση, ρ53 μπορούν επίσης να λειτουργήσουν στην διατήρηση ληθάργου όγκου μέσω καταστολής της αγγειογένεσης [32]. Σε ένα μοντέλο καρκινογένεσης πολλαπλών σταδίων στις οποίες ρ53 είναι λειτουργικώς αναστέλλεται από SV-40 Tag, έχουμε αποδείξει ότι ρ19

ΑΠΦ μπορεί επίσης να ρυθμίζουν το πρόγραμμα αγγειογένεσης, τουλάχιστον εν μέρει, μέσω μηχανισμών ρ53-ανεξάρτητη. Γενετική κατάλυση του

ΑΠΦ σε

RIP-TaG2 ποντίκια οδήγησε σε σημαντική επιτάχυνση της οδού ογκογένεση, η οποία σχετίζεται με αυξημένη συχνότητα των νησίδων που υποβάλλονται σε μια αγγειογενετική διακόπτη και νωρίτερα σχηματισμό όγκων. Αξίζει να σημειωθεί ότι, η υπερπολλαπλασιαστική διακόπτης δεν επηρεάστηκε ούτε είχαν πολλαπλασιασμός /δεικτών απόπτωσης σε οποιοδήποτε στάδιο της οδού προς σχηματισμό όγκων.

Παρά την αυξημένη συχνότητα της αγγειογόνου μεταγωγής, το αγγειακό σύστημα εντός των προκυπτόντων αγγειογενετική αλλοιώσεις δεν διέφερε σημαντικά φαινοτυπικά μεταξύ

RIP-TaG2? ΑΠΦ

+ /+

και

ΤΑΠ

– /-

ποντίκια, σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες σε αυτό το μοντέλο, όπου αλλαγμένη αγγειογενετική συχνότητες μεταγωγής συνέβη χωρίς ταυτόχρονη αλλαγές στη μορφολογία πλοίου ή των καρκινικών κυττάρων απόπτωση /πολλαπλασιασμός σε γενετικούς knockout του ΜΜΡ-9 [33] ή εκτομή των ουδετερόφιλων [24]. Η απουσία της παγκόσμιας διαφορές στο βαθμό της πρόσληψης ουδετερόφιλων να προ-αγγειογενετική βλάβες στο

RIP-TaG2? ΑΠΦ

– /-

σε σύγκριση με το

ΤΑΠ

+ /+

ποντίκια δείχνει ότι ARF μπορεί να ρυθμίζουν την αγγειογένεση μέσω ενός εναλλακτικού μηχανισμού. Ωστόσο, λόγω του πολυ-εστιακή και στοχαστική φύση αυτού του μοντέλου όγκου, στο οποίο μόνο περίπου το 15-20% (με βάση ένα σύνολο 400 νησίδων /ποντικό) υπερπλαστικών αλλοιώσεων θα γίνει «αγγειογόνος» (αυτή η συχνότητα αυξάνεται κατά μόλις λίγες% στο

ΑΠΦ

– /-.

ποντίκια) παραμένει η πιθανότητα ότι απαρατήρητα παροδικές μεταβολές στα ουδετερόφιλα σε ένα μικρό υποσύνολο των βλαβών θα μπορούσαν να αντιπροσωπεύουν την αύξηση της συχνότητας των αγγειογενετικών μεταγωγής

Αν και είναι προς το παρόν σαφές ποιο συγκεκριμένο σήμα (ες) οδηγεί την αρχική πρόσληψη των φλεγμονωδών κυττάρων και την έναρξη της αγγειογενετικής διακόπτη, η τρέχουσα παράδειγμα δείχνει ότι μια διαταραχή στην ισορροπία μεταξύ της ενδογενούς προ- και αντι-αγγειογενετικών παραγόντων είναι ζωτικής σημασίας [34] . Αξιοσημείωτα, από τα πολλά ρ53-ανεξάρτητη λειτουργίες του ARF που έχουν περιγραφεί μέχρι σήμερα [8], αρκετές μπορούν να προβλεφθούν σε δυνητικά να επηρεάσουν την αγγειογενετική διακόπτη. Ειδικότερα, NF-κΒ και c-Myc, και οι δύο εκ των οποίων έχουν εμπλακεί στη ρύθμιση της αγγειογένεσης μέσω αποτελέσματά τους στην έκφραση των προ-φλεγμονωδών μεσολαβητών [35], [36], [37], έχουν αναγνωριστεί ως ρ53-ανεξάρτητη στόχων του ΤΑΠ [38], [39]. Επιπλέον, πυρηνισκικό παγίδευση του μείζονος επαγωγέα αγγειογένεσης, HIF-1α με ARF έχει καταδειχθεί να ρυθμίζει την μεταγραφική δραστικότητα του [40]. Επιπλέον, μια πρόσφατη συμπληρωματική μελέτη από Kawagishi et al. πρότειναν έναν ρόλο ρ53-ανεξάρτητη για ARF στην καταστολή της αγγειογένεσης όγκου μέσω μετα-μεταγραφικό έλεγχο του VEGF-A έκφραση [30]? Ωστόσο, στους όγκους PNET RIP-TaG2, τα επίπεδα της πρωτεΐνης VEGF δεν είχαν μεταβληθεί σημαντικά από την απώλεια του ΤΑΠ. Έτσι, μπορούμε να συμπεράνουμε ότι τα αυξημένα επίπεδα έκφρασης του VEGF δεν αποτελούσε τη βάση της νωρίτερα αγγειογενετική μεταγωγής, αν και δεν μπορούμε να αποκλείσουμε πιθανές μεταβολές στην βιοδιαθεσιμότητα του VEGF, με τη μεσολάβηση για παράδειγμα με την αύξηση της διάσπασης της θεμέλιας ουσίας πρωτεολυτική δραστηριότητα.

Ένας πιθανός ρόλος για ARF σε η διαδικασία της αγγειακού συστήματος ή /και της αγγειογένεσης είχε προηγουμένως υποτεθεί [8], που προκύπτουν από την απόδειξη ότι ΑΠΦ μπορούν να ρυθμίζουν την ανάπτυξη αγγειακής στο μάτι ποντίκι [25], ένα από τα λίγα που περιγράφονται λειτουργίες του ARF εκτός από την καταστολή του όγκου. Ένας μηχανισμός με τον οποίο η απώλεια του ΑΠΦ ενισχύει PDGF σηματοδότηση, με αποτέλεσμα την υπερβολική πολλαπλασιασμό και τη συσσώρευση των περιαγγειακών κυττάρων PDGFRβ + προτάθηκε για να εξηγήσει την αγγειακή βλάβη με αποτέλεσμα την τύφλωση σε

ΑΠΦ

– /- ποντίκια

. Ενώ δεν υπήρχαν μετρήσιμες μεταβολές στη συσσώρευση περικύτταρο στο αγγειακό σύστημα του

RIP-TaG2? ΑΠΦ

– /-

αγγειογενετική βλάβες, η πιθανότητα παραμένει ότι η αρχική πρόσληψη Pdgrβ + περιαγγειακών κυττάρων στην νεοαγγείωση μπορεί να διεγερθεί είτε άμεσα είτε έμμεσα (π.χ. μέσω της έκκρισης ενός ακόμη να προσδιοριστούν προ-αγγειογενετική παράγοντα από ΑΠΦ-null προ-νεοπλασματικών κυττάρων /όγκο) από την απώλεια του ΤΑΠ.

Επεκτατική όγκου ανάπτυξη /ανάπτυξη απαιτεί όχι μόνο την απορύθμιση της κυτταρικής ανάπτυξης και σήματα επιβίωσης, αλλά περιλαμβάνει επίσης σημαντικές αλλαγές στην αρχόμενη μικροπεριβάλλον του όγκου. Ειδικότερα, ο σχηματισμός μιας παροχής αίματος είναι κρίσιμης σημασίας για την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση. Αναδυόμενες στοιχεία δείχνουν ότι ογκογονίδια και καταστολείς των όγκων μπορεί να επηρεάσει την ανάπτυξη του όγκου, όχι μόνο μέσω των κυττάρων-αυτόνομες λειτουργίες στη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού /απόπτωση, αλλά και μέσω της άμεσης διαμόρφωσης των ρυθμιστών της αγγειογένεσης. Το ογκογονίδιο Myc έχει δειχθεί ότι ρυθμίζουν την αγγειογένεση μέσω άμεσης επαγωγής του προ-φλεγμονώδους μεσολαβητή, IL-1β, το οποίο προωθεί ΜΜΡ ενεργοποίηση και απελευθέρωση απομονωμένου VEGF από την εξωκυττάρια μήτρα [41]. Ras, μέσω ενεργοποίησης του Myc, μπορεί να ενεργοποιήσει την αγγειογένεση μέσω καταστολής του αναστολέα αγγειογένεσης, θρομβοσπονδίνη-1 [42]. Ομοίως, ογκοκατασταλτικό ρ53 έχει δειχθεί ότι ρυθμίζει θετικά θρομβοσπονδίνη-1 έκφραση [43], [44], καθώς και η παραγωγή των αντι-αγγειογενετική θραυσμάτων κολλαγόνου που προέρχεται ενδοστατίνη και tumstatin [45]. Εμείς εδώ αποκαλύψει ένα ρόλο για την ρ19

ΑΠΦ για τον περιορισμό του όγκου αγγειογενετική διακόπτη, αποδεικνύοντας ότι η απώλεια της Arf έκφρασης προωθεί την αγγειογενετική διακόπτη και επισπεύδει την ανάπτυξη του όγκου, μέσω δύο p53-εξαρτώμενη και ανεξάρτητους μηχανισμούς, σε ένα μοντέλο πολλαπλών σταδίων καρκινογένεση .