Αφηρημένο

Οι μεταλλάξεις στο

MCPH1

(μικροκεφαλίνης) και

ASPM

(που σχετίζεται ανώμαλη ατρακτοειδόμορφα μικροκεφαλία) γονίδια προκαλούν πρωτογενείς μικροκεφαλία. Και οι δύο είναι που συνδέονται centrosomal πρωτεΐνες που εμπλέκονται στην μίτωση. Μικροκεφαλίνης παίζει σημαντικό ρόλο στην απόκριση βλάβης DNA και ASPM απαιτείται για τη σωστή κατανομή των πολλαπλασιαστικών νευρο-επιθηλιακά κύτταρα του αναπτυσσόμενου εγκεφάλου. Μειωμένη

MCPH1

mRNA έκφραση και

ASPM

mRNA υπερ-έκφρασης έχουν ενοχοποιηθεί για την ανάπτυξη των ανθρώπινων καρκινωμάτων. Επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (EOC) χαρακτηρίζεται από υψηλά ανευπλοειδικών όγκους. Προηγουμένως έχουμε αναφερθεί χαμηλά μικροκεφαλίνης και τα υψηλά επίπεδα της πρωτεΐνης ASPM και ενώσεις με κλινικο-παθολογικών παραμέτρων σε κακοήθη κύτταρα από τα υγρά ασκίτη. Για να επιβεβαιώσουν αυτά τα προηγούμενα ευρήματα σε μεγαλύτερη κλίμακα τα επίπεδα έκφρασης μικροκεφαλίνης και ASPM και εντοπιότητας αξιολογήθηκαν με ανοσοϊστοχημεία σε δύο ομάδες? ένα σύνολο εκπαίδευσης των 25 δειγμάτων και ένα σύνολο επικύρωσης των 322 δειγμάτων ιστού ΕΓΚ. Τα αποτελέσματα συσχετίστηκαν με τις σχετικές ιστοπαθολογικά δεδομένα. Σε φυσιολογικούς ιστούς των ωοθηκών η μικροκεφαλίνης πυρηνικής χρώσης ήταν σταθερά ισχυρή. Στους ιστούς του καρκίνου, εντοπίσαμε χαμηλή έκφραση της πυρηνικής μικροκεφαλίνης σε υψηλό βαθμό και προχωρημένους όγκους σταδίου (

σ

& lt? 0,0001 και p = 0,0438, αντίστοιχα). ASPM είχε μέτρια έως υψηλή πυρηνικά και χαμηλή έως μέτρια κυτταροπλασματική έκφραση σε φυσιολογικό ιστό. Κυτταροπλασματική έκφραση ASPM μειώθηκε με το βαθμό του όγκου και το στάδιο στο ορώδες υπότυπο του ΕΓΚ (p = 0,023 και p = 0,011 αντίστοιχα). Κυτταροπλασματική ASPM αυξάνεται με το στάδιο του όγκου στον υπότυπο ενδομητριοειδές (p = 0,023). Αύξηση εισβολή όγκου (Τ3) και η εμπλοκή λεμφαδένα (Ν1) συσχετίζεται επίσης με μια μείωση στην κυτταροπλασματική ASPM σε EOC (ρ = 0,02 και ρ = 0,04 αντίστοιχα). Έχουμε επικυρωθεί προηγούμενα ευρήματα της απελευθερωμένης έκφρασης μικροκεφαλίνης και ASPM στην EOC, επιβεβαιώνοντας τις ενώσεις για τα χαμηλά επίπεδα πυρηνική μικροκεφαλίνης και υψηλά κυτταροπλασματικά επίπεδα ASPM σε μεγαλύτερη κλίμακα μελέτη ιστό του όγκου. Μικροκεφαλίνης και ASPM μπορεί να αποδειχθεί χρήσιμη βιοδείκτες στην EOC

Παράθεση:. Alsiary R, ​​Bruning-Richardson Α, Bond J, Morrison EE, Wilkinson Ν, Bell SM (2014) Απελευθέρωση των μικροκεφαλίνης και ASPM Έκφραση συσχετίζονται με επιθηλιακό Καρκίνος των ωοθηκών εξέλιξη. PLoS ONE 9 (5): e97059. doi: 10.1371 /journal.pone.0097059

Επιμέλεια: Xifeng Wu, MD Anderson Cancer Κέντρο, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 15 Φεβρουαρίου του 2013? Αποδεκτές: 14 Απριλίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: May 15, 2014

Copyright: © 2014 Alsiary et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το παρόν έργο και ο Δρ Bruning-Richardson χρηματοδοτήθηκαν από το Yorkshire Cancer Research [L328] δρχ Morrison, Bond και το κουδούνι. Το Πανεπιστήμιο του Leeds υποστηρίζει ο Δρ Bell, ο Δρ Bond και ο Δρ Morrison. Ο Δρ Alsiary με υποτροφία από την Σαουδική Υπουργείο Ανώτατης Εκπαίδευσης, Δρ Wilkinson Arabian από Λιντς Διδασκαλία Νοσοκομεία NHS Trust. Ο Δρ Wilkinson κατέχει χρηματοδότηση από την ευημερία των Γυναικών. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Περίπου 225.000 νέες περιπτώσεις καρκίνου των ωοθηκών διαγνώστηκαν το 2008 σε όλο τον κόσμο, που περιλαμβάνει 4% του συνόλου των γυναικείων καρκίνων [1], [2]. Η πλειονότητα των καρκίνων των ωοθηκών είναι επιθηλιακά, συχνά παρούσα σε προχωρημένα στάδια και σχετίζονται με υψηλά ποσοστά θνησιμότητας [3]. Ως εκ τούτου, η διερεύνηση της λειτουργίας και την έκφραση των πιθανών προγνωστικών πρωτεϊνών είναι σημαντική για την πρόοδο της κατανόησης μας της μοριακής παθογένεσης του επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών (EOC). Αυτό είναι ιδιαίτερα επιθυμητή σε σχέση με την ταυτοποίηση των διαγνωστικών βιοδεικτών για τη διαχείριση των ασθενών [4].

Το

MCPH1

και

MCPH5

γονίδια κωδικοποιούν μικροκεφαλίνης και την ανώμαλη ατρακτοειδόμορφα μικροκεφαλία σχετιζόμενη πρωτεΐνη (ASPM) αντίστοιχα [5], [6].

MCPH1

και

MCPH5

είναι δύο στους δέκα μικροκεφαλία γονίδια εντοπίστηκαν, τα οποία εμπλέκονται στην αυτοσωματικό υπολειπόμενο πρωτογενή μικροκεφαλία (MCPH) [7] – [13]. Μικροκεφαλία χαρακτηρίζεται από μειωμένη ανάπτυξη του εγκεφάλου του εμβρύου που προκύπτει από μιτωτική ελαττώματα κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης εμβρυϊκών εγκεφάλου [14]. Μικροκεφαλίνης είναι μια πυρηνική και κυτταροπλασματική πρωτεΐνη που αποτελείται από 835 αμινοξέα. Η πρωτεΐνη περιέχει τρεις τομείς BRCA1 C-τελικό άκρο (ΒΑΟΤ), ένα

Ν

τερματικά που βρίσκονται και δύο στο

C

-τελικό άκρο [5]. Μικροκεφαλίνης εμπλέκεται στην απόκριση του DNA βλάβη με μια περαιτέρω ρόλο ως ρυθμιστής της συμπύκνωσης χρωμοσώματος πρόληψη των κυττάρων να εισέλθουν μίτωση πριν την αντιγραφή του DNA έχει ολοκληρωθεί [15] – [17]. Μικροκεφαλίνης είναι επίσης γνωστή ως BRIT1 (

ΒΑΟΤ

-Επανάληψη αναστολέας της έκφρασης hTERT), η οποία αρχικά αναγνωρίστηκε ως μεταγραφικός καταστολέας της ανθρώπινης τελομεράσης ανάστροφης μεταγραφάσης (hTERT), την καταλυτική υπομονάδα ανθρώπινης τελομεράσης [18]. Η πρωτεΐνη ASPM αποτελείται από 3477 αμινοξέα [6] οργανώνονται σε ένα υποθετικό

N

πεδίο σύνδεσης-τερματική μικροσωληνίσκων [19], [20], δύο Calponin ομολογία επαναλαμβανόμενα μοτίβα, πάνω από 80 ισολευκίνη-γλουταμίνη (IQ) επαναλήψεις [6], [21] οι οποίες δεσμεύουν τυπικώς καλμοδουλίνης και ένα

C-τελικό άκρο

αποτελείται από ένα μόνο Armadillo σαν ακολουθία και μια περιοχή που εμπλέκονται στην κυτοκίνηση [8], [22]. ASPM παίζει έναν ρόλο στον έλεγχο μιτωτικής ατράκτου λειτουργία [6], [22]. ASPM βρίσκεται στους πόλους της ατράκτου σε μετάφαση και στο πυρήνα και κεντρόσωμα κατά τη μεσόφαση [6], [22] – [27]. Επιπλέον, ASPM εντοπίζεται στο μέσου σώματος κατά τη διάρκεια της κυτοκίνησης, γεγονός που υποδηλώνει ότι παίζει ρόλο στην πτώση του καρπού [22], [27].

Αρκετές γραμμές των αποδεικτικών στοιχείων δείχνουν ότι μικροκεφαλίνης και ASPM παίζουν ρόλο στην καρκινογένεση. Σε επίπεδο DNA, Rai

et al.

Ανέφερε ότι

MCPH1

αριθμός αντιγράφων μειώθηκε στο 40% (35/87) των προηγμένων ΕΓΚ και στο 72% (39/54) των στήθους περιπτώσεων καρκίνου [16]. Ομοίως, σε επίπεδο mRNA

MCPH1

mRNA μειώθηκε στο 63% (19/30) των EOCs [16]. Έχουμε αναφέρει μειωμένα επίπεδα της πρωτεΐνης μικροκεφαλίνης σε 29% (93/319) των διηθητικά καρκινώματα μαστού πορογενές, με την έκφραση μικροκεφαλίνης μειώνεται με την αύξηση του βαθμού του καρκίνου του μαστού. Είναι σημαντικό, μικροκεφαλίνης ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης της συνολικής καρκίνου του μαστού συγκεκριμένες επιβίωσης [28]. Πρόσφατα δύο ακόμη μικρές μελέτες για τον καρκίνο του μαστού έχουν επιβεβαιώσει την συσχέτιση της μειωμένης έκφρασης μικροκεφαλίνης με την εξέλιξη του όγκου και την πρόγνωση [29], [30]. Μειωμένη έκφραση μικροκεφαλίνης αναφέρθηκε επίσης σε μια μικρή μελέτη για τον καρκίνο του προστάτη [16], η οποία προτείνει ότι υπάρχει αρνητική συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων μικροκεφαλίνης, γονιδιωματική σταθερότητα και χρωμοσωμική ανωμαλία. Πρόσφατα αδρανοποίηση του

MCPH1

από τη διαγραφή, μεθυλίωση προαγωγού και η μετάλλαξη εντοπίστηκε σε προφορική μελέτη καρκίνο εκ πλακωδών κυττάρων [31]. Αυτή η μελέτη έδειξε επίσης ότι μικροκεφαλίνης υπερέκφραση ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό, την εισβολή και την αγκύρωση ανεξάρτητη ανάπτυξη της ανάπτυξης και του όγκου σε γυμνά ποντίκια που υποστηρίζουν τη λειτουργία καταστολής όγκου των μικροκεφαλίνης [31].

Αντίθετα,

ASPM

mRNA επίπεδα αυξήθηκαν σε όγκο και μετασχηματισμένα ανθρώπινα κύτταρα [26], [32]. Αυξημένη

ASPM

επίπεδα mRNA και πρωτεΐνης εντοπίστηκαν επίσης στη πολύμορφο γλοιοβλάστωμα (GBM), όπου συνδέθηκαν με την αύξηση του βαθμού του όγκου [32], [33]. Επιπλέον,

ASPM

mRNA προς τα πάνω ρύθμιση εντοπίστηκε στο 66% (162/247) του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος, μια παρατήρηση που σχετίζεται με αυξημένη εισβολή, υψηλής στάδιο και στις αρχές της υποτροπής του όγκου [34]. Πρόσφατα προς τα πάνω ρύθμιση ASPM συσχετίζεται με μειωμένη επιβίωση των ασθενών έχει επίσης εντοπιστεί σε καρκίνο του παγκρέατος [35].

πρόσφατη μελέτη μας ΕΓΚ καθοριστεί ένας συσχετισμός μεταξύ των επιπέδων μικροκεφαλίνης και ASPM με το βαθμό του όγκου και επιβίωσης σε κυτταρικές σειρές και σε πρωτογενείς καλλιέργειες κακοήθων κυττάρων που προέρχονται από τα δείγματα ωοθήκης ασκίτη [36]. Στην παρούσα εργασία έχουμε επικυρωθεί αρχικές διαπιστώσεις μας σε μια μελέτη μεγαλύτερης κλίμακας χρησιμοποιώντας δείγματα ιστού EOC και έχουν διερευνήσει το ρόλο των μικροκεφαλίνης και ASPM στην εξέλιξη της EOC. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι μικροκεφαλίνης και ASPM μπορεί να είναι χρήσιμη βιοδείκτες στη διαχείριση του ΕΓΚ.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Κατάλληλο δεοντολογική έγκριση ελήφθη από την Τοπική Επιτροπή Ερευνητικής Δεοντολογίας του η Λιντς πανεπιστημιακά νοσοκομεία NHS Trust, Leeds, UK, (REC αναφορά 09 /H1306 /96). Όλοι οι συμμετέχοντες παρείχαν ενυπόγραφη ενημερωμένη συγκατάθεση και όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν ανώνυμα.

Δείγματα Ασθενών

Μια ομάδα από 25 αρχειακές όγκου, φορμόλη σταθερό, έχει εμπεδωθεί με παραφίνη (FFPE) τμήματα ελήφθησαν από την ιστοπαθολογική Τμήμα του Αγίου Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο, Λιντς και χρησιμοποιούνται James να δημιουργήσει το σύνολο εκπαίδευσης. Το δείγμα που σε αυτή την ομάδα εκπροσωπούνται τέσσερις μεγάλες (που απαντώνται συχνότερα) υποτύπους EOC (ορώδες, ενδομητριοειδές, βλεννώδες και καρκινοσάρκωμα) και ήταν κατά κύριο λόγο βαθμού 3 όγκους. Όλες οι μονάδες σε αυτό ομάδα στη συνέχεια συνδυάζονται σε ένα in-house μικροσυστοιχιών ιστού (TMA). Μια κανονική ομάδα αποτελούνταν από 16 δείγματα ωοθηκικού ιστού που λαμβάνονται είτε από κανονική ωοθήκη ή από φυσιολογικό ιστό δίπλα σε όγκο συν 4 κανονική σάλπιγγας και 4 φυσιολογικό ενδομήτριο δείγματα ήταν επίσης διαθέσιμα.

Μια άλλη ανεξάρτητη ομάδα από 322 δείγματα ΕΓΚ λήφθηκε από τα δίκτυα ιστών Array και ορίστηκε το σύνολο επικύρωσης. Το σύνολο επικύρωσης αποτελείται από 294 διαφορετικά δείγματα των πέντε μεγάλων υποτύπων EOC (ορώδες, ενδομητριοειδές, αδενοκαρκίνωμα, βλεννώδες και σαφή κυττάρων), συν 8 φυσιολογικούς ιστούς των ωοθηκών που λαμβάνονται από την κανονική ωοθήκη και 20 από το φυσιολογικό ιστό δίπλα σε όγκο. Οι 322 περιπτώσεις που εκπροσωπούνται στο 616 πυρήνες, με διπλή πυρήνες για τις περιπτώσεις καρκίνου και ένα ενιαίο πυρήνα για φυσιολογικό ιστό. πυρήνων ιστού 0,6 mm σε διάμετρο με ένα πάχος 5 μm. Κλινικά δεδομένα (βαθμός, η διάγνωση της παθολογίας, της Διεθνούς Ομοσπονδίας Γυναικολογίας και Μαιευτικής (FIGO) στάσης και ΤΝΜ σταδιοποίηση [37]) ήταν διαθέσιμα για αυτό ομάδα. Η μέση ηλικία των ασθενών ήταν 294 48 ετών (εύρος: 19 τα 76 έτη). Τα αποτελέσματα για την ένωση με την ηλικία ελήφθησαν μετά από τα δεδομένα διαχωρίστηκαν μεταξύ τους σε δύο ομάδες (& gt? 50 και ≤50). Τα λεπτομερή χαρακτηριστικά του συνόλου επικύρωσης ασθενή συνοψίζονται στον Πίνακα 1.

Η

Ιστός μικροσυστοιχιών Κατασκευή

Μια in-house ΤΜΑ κατασκευάστηκε από 25 δείγματα ΕΓΚ στο Leeds Ινστιτούτο Καρκίνου και Παθολογίας εγκατάσταση ακολουθώντας ένα πρωτόκολλο που περιγράφεται από τους Ellis

et al

[38]. Εγχειρίδιο διατρήσεις arrayer ιστού με διάμετρο 0,6 mm (Beecher Instruments, Inc) χρησιμοποιήθηκαν για τη δημιουργία των πυρήνων. πυρήνες ιστού επιλέχθηκαν από την πιο αντιπροσωπευτική περιοχή του όγκου σε κάθε μπλοκ όγκου μετά από επανεξέταση του σχετικού αιματοξυλίνη και ηωσίνη χρωματισμένο διαφάνειες από τον ειδικό γυναικολογικές παθολογοανατόμο (ΒΔ).

Η ανοσοϊστοχημεία Ανίχνευση μικροκεφαλίνης και ASPM

Για να βελτιστοποιήσετε το πρωτόκολλο χρώσης μικροκεφαλίνης και ASPM, η στο σπίτι τμήματα του ΕΓΚ TMA βάφτηκαν χρησιμοποιώντας μια σειρά από αραιώσεις αντισώματος και μεθόδων ανάκτησης αντιγόνου. Μικροκεφαλίνης και ASPM βάφτηκαν ξεχωριστά κάτω από τις ίδιες συνθήκες, εκτός από την ανάκτηση του αντισώματος και αραίωση. Διαφάνειες ήταν αφαιρείται η παραφίνη και επανυδατώθηκαν χρησιμοποιώντας ξυλόλιο και αιθανόλη σειρά. Για να αποκλείσετε δραστηριότητα υπεροξειδάσης υδρογόνου, πλάκες εμποτισμένο με 3% H

2O

2 σε μεθανόλη. Το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη χρησιμοποιώντας Vector ρυθμιστικό ανάκτηση αντιγόνου (Vector Laboratories Ltd) σε μια χύτρα ταχύτητας για 4 λεπτά για μικροκεφαλίνης και 2 λεπτά για ASPM. Οι τομές αποκλείσθηκαν με διάλυμα καζεΐνης 1:10 διάνυσμα (Vector Laboratories) για να μειωθεί η μη ειδική χρώση. Στα τμήματα TMA το αντι-μικροκεφαλίνης ab2612 αντίσωμα κουνελιού (Abcam) χρησιμοποιήθηκε σε 1/300 και το κουνέλι αντι-

N-τερματική

ASPM αντίσωμα 216.1 [36] που χρησιμοποιείται στο 1/400. Τα πλακίδια επωάστηκαν στους 4 ° C όλη τη νύχτα σε υγροποιημένο θάλαμο. Μετά από τρεις πλύσεις με TBS Tween (0,1%) τα πλακίδια επωάστηκαν για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου με το κουνέλι /δευτερεύον, συζευγμένο με υπεροξειδάση πολυμερές EnVision ποντικού (ϋΑΚΟ). Μετά από περαιτέρω πλύσεις, η αντίδραση έγινε ορατή με την προσθήκη 2% diaminobenzine + Chromogen σε DAP ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος για 10 λεπτά (ϋΑΚΟ). Τα τμήματα βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη Mayer του (VWR International Ltd). Οι αρνητικοί έλεγχοι, χωρίς πρωτογενές αντίσωμα και θετικοί έλεγχοι φυσιολογικού ιστού ωοθηκών συμπεριλήφθηκαν σε κάθε παρτίδα ανοσοϊστοχημεία.

μικροκεφαλίνης και ASPM Antibody Validation

Προκειμένου να προσδιοριστεί η ειδικότητα χρώση του αντισώματος μικροκεφαλίνης επί δείγματα FFPE, μία ανοσοποιητικά πεπτίδιο μπλοκαρίσματος πείραμα εκτελέστηκε σε τομές ιστών EOC και στις 25 πυρήνα in-house ΤΜΑ. Το αντίσωμα εξουδετερώθηκε με προ-απορρόφηση με το πεπτίδιο BRIT1 ab13737 (Abcam). Το αντίσωμα αραιώθηκε σε προκαθορισμένη συγκέντρωση εργασίας της (που περιγράφεται παραπάνω) και επωάστηκε με δεκαπλάσια περίσσεια του πεπτιδίου όλη τη νύκτα στους 4 ° C πριν από την εφαρμογή στον ιστό. τμήματα ιστού με εξουδετερωμένο αντισώματος συγκρίθηκαν με αντίστοιχα τμήματα ιστού βάφονται με αντίσωμα μόνο. ​​

Είχαμε ήδη προσδιοριστεί η ειδικότητα του αντισώματος του ASPM αντισώματος 216.1 στο προηγούμενο έργο από πειράματα αποκλεισμού πεπτίδιο ανοσοφθορισμό [36]. Επιβεβαιώσαμε περαιτέρω το πρότυπο χρώσης του αντισώματος που παρατηρούνται στην IHC με χρώση το ίδιο in-house ΕΓΚ TMA με ένα άλλο αντίσωμα (279.3) που παράγεται κατά την

C

-τελικό άκρο της ASPM. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν χρώση με αμφότερα τα αντισώματα με μόνο πολύ μικρές διαφορές μεταξύ των επιπέδων κυτταροπλασματική χρώση.

Για περαιτέρω επικύρωση της εξειδίκευσης και ευαισθησίας των αντισωμάτων και για τον έλεγχο για τις επιπτώσεις της στερέωσης φορμαλίνη και ανάκτηση αντιγόνου,

MCPH1

και

ASPM

ήταν γκρέμισε στο OS κυτταρική γραμμή U-2 (ATCC, Manassas, VA, USA) με siRNA όπως περιγράφηκε προηγουμένως [17], [36], [22]. Μετά από 72 ώρες τα κύτταρα συλλέχθηκαν, κατακρημνίστηκαν, φορμαλίνη και αιωρούνται σε 1% άγαρ έπειτα σε παραφίνη και χρησιμοποιούνται ως μάρτυρες για την επικύρωση του αντισώματος.

Ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση

Όλα τα τμήματα TMA σαρώθηκαν με τη χρήση του Aperio σάρωσης Πεδίο σαρωτή διαφανειών (Aperio Technologies) σε μεγέθυνση 40x, χρησιμοποιώντας εργαλεία μορφομετρίας στο λογισμικό Imagescope (Aperio). Τόσο για μικροκεφαλίνης και ASPM οι επαναληπτικές δοκίμια για κάθε δείγμα βαθμολογήθηκαν για εντάσεις χρώση της πυρηνικής και κυτταροπλασματικής χρώσης (βαθμολογία έντασης, 0 = καμία χρώση, 1 = ασθενής χρώση, 2 = μέτρια χρώση και 3 = έντονη χρώση), καθώς και η αναλογία κυττάρων με θετική πυρηνική ή κυτταροπλασματική χρώση εντός των πυρήνων (βαθμολογία αναλογία). Για να αναλύσει την μικροκεφαλίνης χρώση χρησιμοποιήθηκε η Allred σύστημα ημι-ποσοτική (γρήγορη) 8-μονάδα [39]. Το ποσοστό των θετικών πυρηνικών ή κυτταροπλασματικών προετοιμασμένα κύτταρα μέσα σε κάθε πυρήνα ορίστηκε ως 0 = καμία χρώση, 1 = & lt? 1% χρώση, 2 = 1-10 χρώση%, 3 = 11-33 χρώση%, 4 = 34-66% χρώση, χρώση 5 = 67-100%. Το τελικό σκορ ήταν λαμβάνεται με την προσθήκη των βαθμολογιών έντασης στις βαθμολογίες ποσοστό, επιτυγχάνοντας μια ελάχιστη βαθμολογία των 0 και μέγιστη βαθμολογία των 8. Περιπτώσεις με σκορ 4 ή χαμηλότερη κλήθηκαν χαμηλό, ενώ περιπτώσεις με σκορ 5 ή 6 ήταν χαρακτηρίζονται ως μέτρια και τα δείγματα με σκορ 7 ή 8 θεωρήθηκαν ως εκφράζουν υψηλά επίπεδα μικροκεφαλίνης. Για την ανάλυση των δεδομένων της έκφρασης ASPM χρησιμοποιήθηκε ένα ελαφρώς πιο ευαίσθητο σύστημα ανάλυσης δεδομένων, στην οποία η ένταση χρώσης ήταν πολλαπλασιαζόμενο με το ποσοστό των κυττάρων με πυρηνική ενέργεια ή κυτταροπλασματική χρώση [40]. Έτσι, το χαμηλότερο σκορ ήταν 0 και τα υψηλότερα 300. Δείγματα με σκορ 0 κλήθηκαν αρνητικά, τα δείγματα με σκορ 1-100 χαμηλή, τα δείγματα με σκορ 101-200 μέτρια και τα δείγματα με σκορ 201-300 ήταν βαθμολογήθηκαν ως υψηλά επίπεδα έκφρασης. Για ασυνεχείς ανάλυση των δεδομένων όλα τα αρνητικά και τα χαμηλά δείγματα χαρακτηρίστηκαν χαμηλή και όλα τα μεσαία και υψηλά δείγματα χαρακτηρίστηκαν υψηλά επίπεδα ASPM.

Στατιστική Ανάλυση

Η μη παραμετρική Kruskall-Wallis (KW) και Wilcoxon -Mann-Whitney test (WMW) χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιορίσουν τη σχέση μεταξύ μικροκεφαλίνης και ASPM με τις κλινικές μεταβλητές (στάδιο της νόσου, την ποιότητα, το είδος ιστολογία, μεταστάσεις, η συμμετοχή λεμφαδένων και την ηλικία των ασθενών). Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν δύο όψεων, και

P

≤0.05 τιμές θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

μικροκεφαλίνης και ASPM αντισωμάτων Χαρακτηρισμός

Η μικροκεφαλίνης και ASPM αντισώματα αρχικά βελτιστοποιημένο για χρήση σε παραφίνη-ενσωματωμένες ενότητες ΤΜΑ. Η ανοσοϊστοχημεία με αυτά τα αντισώματα έδειξαν ότι μικροκεφαλίνης και ASPM εντοπίστηκαν στον πυρήνα και στο κυτταρόπλασμα τόσο της κανονικής (Σχήμα 1) και δείγματα ιστού EOC (Σχήμα 2). Το πρότυπο χρώσης πυρηνικής μικροκεφαλίνης καταργήθηκε όταν το αντίσωμα προ-επωάστηκε παρουσία του πεπτιδίου. Ωστόσο, ορισμένα ομοιόμορφο χαμηλό υπόβαθρο επίπεδο κυτταροπλασματική χρώση ήταν ακόμη παρούσα σε όλους τους πυρήνες (Σχήμα S1). Ως εκ τούτου, δεν έχουμε συμπεριλάβει την κυτταροπλασματική χρώση μικροκεφαλίνης σε οποιαδήποτε περαιτέρω ανάλυση

Κανονικό ωοθηκών επιθήλιο καταδεικνύοντας ισχυρή έκφραση μικροκεφαλίνης τόσο στους πυρήνες και το κυτταρόπλασμα (Α & amp? D). Και ισχυρή πυρηνική και κυτταροπλασματική μέτρια έκφραση ASPM (G & amp? J). Κανονική σάλπιγγα αποδεικνύοντας ετερογενή μέτρια πυρηνική και η ασθενής χρώση κυτταροπλασματική μικροκεφαλίνης (Β & amp? Ε) και χρώση ASPM επιδεικνύοντας ισχυρή πυρηνική και μέτρια κυτταροπλασματική έκφραση (H & amp? Κ). Κανονική ενδομήτριο δείχνει ετερογενή ισχυρή χρώση των πυρηνικών και κυτταροπλασματικών μικροκεφαλίνης (C & amp? F) και ισχυρή πυρηνική και η ασθενής κυτταροπλασματική χρώση ASPM (Ι & amp? L). Όλες οι εικόνες είναι x15 μεγέθυνση.

Η

υδαρής αδενοκαρκίνωμα TMA πυρήνες δείχνει πυρηνική και κυτταροπλασματική μικροκεφαλίνης (Α και Β) και την έκφραση ASPM (Γ και Δ), αντίστοιχα. Λευκό βέλος δείχνει πυρηνική χρώση και το μαύρο βέλος δείχνει κυτταροπλασματική χρώση. Α και Β είναι 20x, C και D είναι 40x μεγέθυνση.

Η

Το πρότυπο χρώσης για ASPM αντίσωμα 279.3 που εκτελούνται παράλληλα με τη χρώση με αντίσωμα 216.1 αποκάλυψε ότι κυτταροπλασματική χρώση ήταν παρόμοια για τα δύο αντισώματα. Ωστόσο, 216.1 έδειξε μια πιο έντονη μοτίβο πυρηνική χρώση από 279,3 και συνεπώς αυτό το αντίσωμα χρησιμοποιήθηκε για τη χρώση του συνόλου επικύρωσης EOC. Τα αποτελέσματα για τα πρότυπα χρώσης των αντιπροσωπευτικών πυρήνες και μια περίληψη των αποτελεσμάτων χρώσης φαίνεται στο σχήμα S2 και S1 πίνακα.

Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η ισχύς των αντισωμάτων για τη χρώση ιστούς παραφίνης, τα αντισώματα ελέγχθηκαν σε παραφίνη -embedded U-2 OS κύτταρα με και χωρίς siRNA νοκ ντάουν για μικροκεφαλίνης ή ASPM. Knockdown κύτταρα και για τα δύο γονίδια έδειξαν πολύ ασθενή χρώση σε σχέση με τον έλεγχο siRNA (Σχήμα S3).

μικροκεφαλίνης Έκφραση σε κανονική και EOC δείγματα ιστού

Κανονικό ωοθηκών, του ενδομητρίου και δείγματα σάλπιγγα tissue, προέκυψε ισχυρή χρώση των πυρηνικών μικροκεφαλίνης. Η πλειοψηφία (90%) των φυσιολογικών επιθηλιακών κυττάρων των ωοθηκών αποδειχθεί θετική χρώση μικροκεφαλίνης ενώ αυτό ήταν ελαφρά χαμηλότερη (70-80%) στο ενδομήτριο και τα δείγματα σάλπιγγα (Σχήμα 1Α-Ρ). Αρχικά, η έκφραση της μικροκεφαλίνης αξιολογήθηκε στο στο σπίτι κατάρτισης που TMA. Διχοτομικής ανάλυση στο σύνολο εκπαίδευσης αποδεικνύεται η απώλεια της έκφρασης μικροκεφαλίνης σε 16/22 περιπτώσεις (73%) (Πίνακας 2). Στο σετ επικύρωσης EOC, χαμηλή έκφραση μικροκεφαλίνης ταυτοποιήθηκε σε 30% (89/294) των δειγμάτων EOC (Πίνακας 3). Από τη στιγμή που έδειξαν ιδιαίτερο ενδιαφέρον για τα επίπεδα έκφρασης μικροκεφαλίνης και η σύνδεσή της με την ογκογένεση, εξετάσαμε τα στοιχεία μας IHC για τον εντοπισμό πιθανών συσχετίσεων με τα συναφή κλινικά δεδομένα. Είναι ενδιαφέρον, διχοτομική ανάλυση στο σύνολο εκπαίδευσης αποδεικνύεται η απώλεια της έκφρασης μικροκεφαλίνης βαθμού 3 όγκους EOC (Πίνακας 2). Η διαπίστωση αυτή επιβεβαιώθηκε στο σύνολο επικύρωσης με χαμηλή πυρηνική χρώση βρίσκεται κυρίως στα βαθμού 3 όγκους (48%? 53/110 p & lt? 0,0001). Σε όγκους χαμηλής κακοήθειας, παρατηρήθηκε μέτρια ή υψηλή πυρηνική χρώση (

ρ

& lt? 0.0001) (Σχήμα 3). Μικροκεφαλίνης πυρηνική έκφραση μειώθηκε επίσης με αυξημένο το στάδιο του όγκου (

σ

= 0.0438) (Σχήμα 4). Ασθενείς άνω των 50 ετών απέδειξαν χαμηλότερα επίπεδα πυρηνικής μικροκεφαλίνης (πίνακας 3), αλλά η διαφορά δεν ήταν στατιστικά σημαντική (

σ

= 0,0581). Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές μεταβολές στην έκφραση μικροκεφαλίνης ταυτοποιήθηκαν μεταξύ των διαφόρων παθολογικών υποτύπων (

σ

= 0,486) (Πίνακας 3). Ωστόσο, η πλειοψηφία (8/10, 80%) των σαφές καρκίνωμα εμφανίζεται μέτρια ή έντονη ανοσοχρώση μικροκεφαλίνης. Αυτό μπορεί να αντανακλά το γεγονός ότι 6/8 από αυτές τις περιπτώσεις ήταν σταδίου Ι ή ότι οι διάφορες υποκατηγορίες του ΕΓΚ ακολουθούν διαφορετικές μοριακές οδούς. Σημειώσαμε επίσης υψηλά ποσοστά απώλειας της μικροκεφαλίνης στο ορώδες και βλεννώδες αδενοκαρκίνωμα (68/207, 33% και 15/44, 34%, αντίστοιχα, Πίνακας 3). Σχήμα 5A-D δείχνει την έκφραση των μικροκεφαλίνης στα διάφορα επιθηλιακά υποτύπων καρκίνου των ωοθηκών.

Ai. Κανονική ωοθηκών επιθηλιακού ιστού με υψηλή έκφραση μικροκεφαλίνης. ΑΙΙ iv. Αδενοκαρκίνωμα TMA πυρήνες που δείχνουν ισχυρή έκφραση μικροκεφαλίνης σε χαμηλής ποιότητας όγκου (ΠΑΙ), μέτρια μικροκεφαλίνης βαθμού 2 (AIII) και χαμηλά επίπεδα έκφρασης πυρηνικών μικροκεφαλίνης σε υψηλό βαθμό όγκου (AIV). Όλες οι εικόνες είναι 40x μεγέθυνση. B. Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των πυρηνικών μικροκεφαλίνης μειώνεται με την αύξηση της ποιότητας του όγκου (

σ

& lt? 0,0001 με τη χρήση ενός τεστ ANOVA)

Η

Ai.. Κανονική ωοθηκών επιθηλιακού ιστού επιδεικνύοντας υψηλή μικροκεφαλίνης επίπεδα έκφρασης. ΑΙΙ-4iv αδενοκαρκίνωμα ΤΜΑ πυρήνες που εμφανίζουν ισχυρή μικροκεφαλίνης (ΑΙΙ), μέτρια μικροκεφαλίνης (AIII) και τα χαμηλά επίπεδα της έκφρασης πυρηνικών μικροκεφαλίνης (AIV) στο στάδιο 1, 2 και 3 όγκων αντίστοιχα. Όλες οι εικόνες είναι 40x μεγέθυνση. Οι Β Ασθενής επίπεδα μικροκεφαλίνης στον πυρήνα σχετίζεται με προχωρημένο στάδιο του όγκου (

σ

= 0,0438 με τη χρήση ενός τεστ ANOVA).

Η

Α. Σαφείς καρκίνωμα και το αδενοκαρκίνωμα Β ενδομητριοειδές τόσο που δείχνουν ισχυρή έκφραση μικροκεφαλίνης. αδενοκαρκίνωμα Γ βλεννώδες και υδαρής αδενοκαρκίνωμα Δ τόσο παρουσιάζοντας ασθενή έκφραση μικροκεφαλίνης. Όλες οι εικόνες είναι x40 μεγέθυνση.

Η

Η

ASPM Έκφραση σε κανονική και EOC δείγματα ιστών

Το φυσιολογικό επιθήλιο των ωοθηκών, του ενδομητρίου και σάλπιγγα έδειξε μεταβλητή έκφραση ASPM, με μέτρια έως υψηλή πυρηνικής έκφρασης και χαμηλή έως μέτρια κυτταροπλασματική χρώση ASPM (Σχήμα 1G-L). Το πρότυπο έκφρασης ASPM σε EOC προσδιορίστηκε με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας το σύνολο εκπαίδευσης 25 τομών εγκλεισμένων σε παραφίνη. Το πρότυπο χρώσης σε αυτά τα δείγματα όγκων ήταν πυρηνικά και κυτταροπλασματικά. Στο σύνολο εκπαίδευσης, τα υψηλά πυρηνική χρώση (σε συνδυασμό μεσαίου και ισχυρή πρότυπο χρώσης) παρατηρήθηκε σε όγκους υψηλής ποιότητας (9/14, 64,3%), ενώ υψηλά κυτταροπλασματικά ASPM ήταν παρούσα σε όλα τα δοκίμια, ανεξάρτητα από το βαθμό. Ωστόσο, υποδιαίρεση χρώση σε αδύναμο, μεσαίες και ισχυρή αποκάλυψε μια αύξηση σε υψηλή πυρηνική επίπεδα ASPM στα βαθμού 3 όγκους. Συνολικά, το ποσοστό των θετικών πυρηνική χρώση κατηγοριοποιήθηκε σε ισχυρό (21%, 4/19), μέσης (31,6%, 6/19) και ασθενή (47,4%, 9/19) (Πίνακας 4). Η ανάλυση έδειξε ότι το 10,5% (2/19) των δειγμάτων είχαν ισχυρές κυτταροπλασματική χρώση και 89,5% (17/19) είχε μέτρια κυτταροπλασματική χρώση. Δεν παρατηρήθηκε χαμηλό κυτταροπλασματική χρώση. Περαιτέρω ανάλυση αποκάλυψε μια τάση για αυξημένη κυτταροπλασματική και πυρηνική χρώση με ASPM βαθμού (Πίνακας 4).

Η

Στην επικύρωση Παρατηρήθηκε επίσης οριστεί πυρηνικά και κυτταροπλασματική χρώση. Τα πρότυπα χρώσης διέφεραν μεταξύ των δειγμάτων όγκου και παραδείγματα χαμηλής και υψηλής έκφρασης ASPM παρουσιάζεται στο Σχήμα 6Α-D. Δεν στατιστικά σημαντικές συσχετίσεις διαπιστώθηκαν μεταξύ της έκφρασης των πυρηνικών ASPM και τα κλινικά δεδομένα. Αν και, κατά τρόπο ενδιαφέροντα 52/294 (18%) των περιπτώσεων έδειξαν υψηλή έκφραση της πυρηνικής ASPM, η οποία αυξήθηκε με βαθμό. Ανάλυση του συνόλου επικύρωσης χρησιμοποιώντας συνεχή ανάλυση των δεδομένων αποκάλυψε χαμηλά επίπεδα κυτταροπλασματικής ASPM συσχετίστηκε σημαντικά με υψηλής ποιότητας όγκους στο ορώδες υπότυπο (p & lt? 0.001) (Σχήμα 7Α). Ασυνεχής ανάλυση έδειξε ότι υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ χαμηλής ποιότητας κυτταροπλασματική ASPM και υψηλή όγκου (p = 0.0138), αλλά και το στάδιο της νόσου του όγκου (p = 0,032) (Πίνακας 5). Περαιτέρω ανάλυση των ασυνεχών δεδομένων από υποδιαίρεση σε υποτύπους του καρκίνου αποκάλυψε ότι εκτός από τη συσχέτιση του χαμηλού κυτταροπλασματικής ASPM με βαθμό υψηλής όγκου, υπήρχε επίσης μια ένωση μειώνοντας ASPM κυτταροπλασματικά επίπεδα με αυξανόμενη βαθμό της ορώδης υπότυπο (ρ & lt? 0,0001) ( Σχήμα 7Β) και αύξηση των επιπέδων έκφρασης ASPM με αυξανόμενη φάση όγκου στον υπότυπο ενδομητριοειδές (p = 0.0229) (Σχήμα 7C). Μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ της μείωσης κυτταροπλασματική χρώση ASPM και το στάδιο στο ορώδες υπότυπο επίσης εντοπιστεί (p = 0,0017) (Σχήμα 7D). Μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ κυτταροπλασματικά επίπεδα ASPM και την ηλικία των ασθενών δεν παρατηρήθηκε (Πίνακας 5).

Α και Β πυρήνα TMA με χαμηλή πυρηνική και κυτταροπλασματική έκφραση ASPM. Γ και Δ TMA πυρήνα με υψηλή πυρηνική και κυτταροπλασματική έκφραση ASPM. Λευκό βέλος δείχνει πυρηνική χρώση, μαύρο βέλος δείχνει κυτταροπλασματική χρώση. Α και C είναι 6,2 φορές και Β, D είναι μεγέθυνση 20x αντίστοιχα.

Η

Α. Κυτταροπλασματικά επίπεδα ASPM μειώνονται με βαθμό στο ορώδες EOC (συνεχής δεδομένων, σ & lt? 0,0001). επίπεδα Β Cytoplasmic ASPM μειώνονται με το βαθμό του όγκου στο ορώδες υπότυπο (ασυνεχή στοιχεία, p = 0,0239). επίπεδα Γ Cytoplasmic ASPM αυξάνουν με το στάδιο της νόσου σε ενδομητριοειδές EOC (ασυνεχή στοιχεία, p = 0,0229). επίπεδα Δ Cytoplasmic ASPM μειώνονται με το στάδιο της νόσου στο ορώδες υπότυπο (ασυνεχή στοιχεία, p = 0,0017). επίπεδα Ε Cytoplasmic ASPM μειώνεται με την εισβολή του όγκου (ασυνεχή στοιχεία, p = 0.02). ΣΤ Υψηλή κυτταροπλασματικά επίπεδα ASPM συσχετίζονται με καμία συμμετοχή λεμφαδένων (p = 0.04). Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση ενός τεστ ANOVA.

Η

Σχέση μεταξύ ιστοπαθολογικών σταδιοποίηση έκφρασης (ΦΥΓΩ και ΤΝΜ σταδιοποίηση) και μικροκεφαλίνης και ASPM

Στην επικύρωση που μικροκεφαλίνη βρέθηκε να μειώνεται με την αύξηση το στάδιο του όγκου κατά τη χρήση του συστήματος στάσης FIGO (

σ

= 0,0438) (Πίνακας 3). Ομοίως ASPM κυτταροπλασματική χρώση μειώθηκε με την αύξηση το στάδιο του όγκου κατά τη χρήση του συστήματος στάσης FIGO (

σ

= 0,0032) (Πίνακας 5). επίπεδα μικροκεφαλίνης και έκφραση ASPM περαιτέρω αξιολογήθηκε στο πλαίσιο της σοβαρότητας της νόσου, όπως καθορίζεται από το επίπεδο της διηθητικότητας του όγκου (Τ1, Τ2 και Τ3). επίπεδα έκφρασης Πυρηνική μικροκεφαλίνης μειώθηκε ακόμη και αν ο όγκος περιορίστηκε στις ωοθήκες (Τ1? p = 0,0021). Κατά τη σύγκριση της έκφρασης μικροκεφαλίνης σε Τ2 με την ομάδα ελέγχου, το αποτέλεσμα έγινε πιο σημαντική (ρ = 0,0009). Ωστόσο, δεν υπήρξε σημαντική διαφορά στην έκφραση μικροκεφαλίνης όταν τα δείγματα στις ομάδες Τ1, Τ2 και Τ3 συγκρίθηκαν μεταξύ τους. Επιπλέον, η έκφραση μικροκεφαλίνης δεν συσχετίζονται σημαντικά με την περιφερειακή συμμετοχή λεμφαδένων (p = 0,1162) ή μακρινή μετάσταση (p = 0,5251) (Πίνακας 3).

Για ASPM, μια συσχέτιση μεταξύ της κυτταροπλασματικής επίπεδα χρώση και εισβολής των όγκων ήταν αναγνωρισθείς. Υψηλά κυτταροπλασματικά επίπεδα ASPM βρέθηκαν σε Τ1, η οποία μειώθηκε σημαντικά με Τ2 και Τ3 (p = 0,0198) (Σχήμα 7Ε). Υψηλή κυτταροπλασματική ASPM συσχετίζονται επίσης χωρίς τη συμμετοχή λεμφαδένων (N0) και μειώθηκε με τη συμμετοχή λεμφαδένων (Ν1) (p = 0,04) (Σχήμα 7F) (Πίνακας 5).

Συζήτηση

EOC συχνά πρώτα διαγιγνώσκονται σε προχωρημένο στάδιο, λόγω της έλλειψης συμπτωμάτων και αξιόπιστων μεθόδων έγκαιρης ανίχνευσης. Κατά συνέπεια, η ταυτοποίηση των διαγνωστικών και προγνωστικών βιοδεικτών για EOC είναι μείζονος κλινικής σημασίας. Στην παρούσα μελέτη διερευνήθηκε η έκφραση των δύο πρωτεϊνών MCPH, μικροκεφαλίνης και ASPM, σε δείγματα καρκινικού ιστού ΕΓΚ. ΕΓΚ εμφανίζει υψηλό βαθμό ανευπλοειδισμών. πρωτεΐνες απόκριση βλάβη του DNA είναι ένα ζωτικής σημασίας άμυνα έναντι γενωμική αστάθεια και ελαττώματα σε αυτές τις πρωτεΐνες μπορεί να οδηγήσει σε καρκίνο. Μικροκεφαλίνης έχει ένα γνωστό ρόλο στην επιδιόρθωση του DNA και ASPM για ατράκτου λειτουργία κατά τη διάρκεια της μίτωσης. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να προσδιορίσει αν μικροκεφαλίνης και έκφραση ASPM συνδέονται με κλινικοπαθολογικών παραμέτρων σε ασθενείς με EOC. Και οι δύο πρωτεΐνες είχαν δειχθεί ότι απορρυθμισμένη σε άλλους καρκίνους κατά τρόπο που συνδέθηκε με την εξέλιξη του όγκου [16], [28] -. [30], [36]

Πρόσφατα έχουμε αναφερθεί μια ένωση μικροκεφαλίνης και επίπεδα ASPM σε κακοήθη κύτταρα που προέρχονται από ασκητικά υγρά από το ΕΓΚ ασθενείς με διάφορες παραμέτρους κλινική-παθολογική [36]. Στην παρούσα, μελέτη μεγαλύτερη κλίμακα, χρώση των πυρηνικών και /ή κυτταροπλασματικές μικροκεφαλίνης ταυτοποιήθηκε στα κύτταρα του όγκου. Τα αποτελέσματά μας στο σύνολο εκπαίδευσης αποκάλυψε μείωση στην έκφραση της πυρηνικής μικροκεφαλίνης στο 73% (16/22) των όγκων ΕΓΚ? το ποσοστό αυτό μειώνεται στο 30% (89/294) στην ομάδα επικύρωσης. Αυτή η διαφορά μεταξύ των δύο ομάδες αντανακλά ενδεχομένως τον υψηλότερο αριθμό βαθμού 3 περιπτώσεις στο σύνολο εκπαίδευσης (73%? 16/22) σε σύγκριση με το σύνολο επικύρωσης (37%? 110/294). Σε αυτή τη μελέτη χαμηλή έκφραση μικροκεφαλίνης εντοπίστηκε σε υψηλής ποιότητας και προχωρημένους όγκους σταδίου (

σ

& lt? 0,0001 και p = 0,0438, αντίστοιχα). Τα ευρήματα αυτά ταιριάζουν με προηγούμενη μελέτη μας σχετικά με τα δείγματα των ωοθηκών ασκίτη που έδειξε ότι η έκφραση μικροκεφαλίνης μειώθηκε σε καλλιέργειες κυττάρων που προέρχονται από ασκίτη των ασθενών ΕΓΚ με προχωρημένους όγκους [36]. Τα αποτελέσματά μας είναι συμβατά με μελέτες ότι η αναφορά μειώνεται

MCPH1

αριθμό αντιγράφων του DNA σε 72% (39/54) των καρκίνων του μαστού [16], καθώς και με τις δικές μας διαπιστώσεις της μειωμένης έκφρασης μικροκεφαλίνης σε 93/319 (29%) των δειγμάτων καρκίνου του μαστού, ιδιαίτερα στις υψηλότερες όγκους βαθμού [28].

Προηγουμένως, ταυτοποιήσαμε μία συσχέτιση μεταξύ της ανώμαλης εντοπισμό του μικροκεφαλίνης με βαθμό του όγκου σε πρωτογενείς καλλιέργειες των κακοηθών κυττάρων που προέρχονται από ασκητικά υγρά από ασθενείς με EOC . Σε αυτά τα κύτταρα, κυτταροπλασματική μικροκεφαλίνης αυξήθηκε με το βαθμό του όγκου. Εμείς πρότεινε ότι θα μπορούσε να είναι λόγω της

MCPH1

μεταλλάξεις διαγραφής στα C-τελικές περιοχές ΒΑΟΤ που έχουν προηγουμένως αποδειχθεί ότι οδηγεί σε μικροκεφαλίνης τη μετάβαση από ένα πυρηνικό να κυτταροπλασματική εντόπιση παρόμοια με

BRCA1

[41 ], [42], [43]. Μια πρόσφατη μελέτη που χαρακτηρίζουν διαφορετικά

MCPH1

παραλλαγές ματίσματος αναφερθεί μετάλλαξη ή διαγραφή των σημάτων πυρηνικού εντοπισμού εντός του

MCPH1

γονιδίου οδήγησε σε μια αλλαγή εντοπισμού από την πυρηνική στην κυτταροπλασματική [43]. Σε αυτή τη μελέτη ασθενής έως μέτρια κυτταροπλασματική χρώση μικροκεφαλίνης παρατηρήθηκε σε όλες τις βαθμού 2 και 3 δείγματα και αυξημένη κυτταροπλασματική έκφραση μικροκεφαλίνης συσχετίστηκε με αυξημένο βαθμό όγκου (

σ

= 0,0051).