Αφηρημένο

Ένα επαρκές επίπεδο της αργινίνης στο μικροπεριβάλλον του ιστού είναι απαραίτητη για τη δραστηριότητα των Τ κυττάρων και την επιβίωση. Τα επίπεδα αργινίνης ρυθμίζεται από την αργινίνη-καταβολισμού του ενζύμου, αργινάση (ARG). Έχει αναφερθεί ότι αργινάσης II (ARG2), ένα από τα δύο args, εκφράζεται μη φυσιολογικά σε καρκινικά κύτταρα του προστάτη, τα οποία μετατρέπουν την αργινίνη σε ορνιθίνη, με αποτέλεσμα την έλλειψη αργινίνης που αποδυναμώνει ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα και τα καθιστά δυσλειτουργική. Ωστόσο, ανοσοκαταστολής που προκαλείται από ARG2-καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν στον καρκίνο του πνεύμονα δεν έχει παρατηρηθεί. Εδώ μελετήσαμε την έκφραση της ARG2 σε παγκρεατικά πορογενές καρκίνωμα (PDC) ιστού clinicopathologically εξετάζοντας πάνω από 200 περιπτώσεις PDC. Σε αντίθεση με τον καρκίνο του προστάτη, η έκφραση ARG2 σπάνια αποδείχθηκε σε PDC κύτταρα με ανοσοϊστοχημεία, και αντ ‘αυτού ARG2 ήταν χαρακτηριστικά εκφράζεται σε α-λείου μυός ακτίνη θετικό καρκίνο που σχετίζεται με ινοβλάστες (CAFS), ιδιαίτερα εκείνων που βρίσκονται μέσα και γύρω από νεκρωτικές περιοχές PDC. Η παρουσία του CAFS ARG2 εκφράζουν ήταν συσχετίζεται στενά με μικρότερη συνολική επιβίωση (OS?

P

= 0,003) και την ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS?

P

= 0,0006). ανάλυση παλινδρόμησης Η πολυπαραγοντική Cox έδειξε ότι η παρουσία της ARG2 εκφράζουν CAFS στο PDC ιστού ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης των φτωχότερων OS (αναλογία κινδύνου [HR] = 1.582,

P

= 0,007) και DFS (HR = 1.715,

P

= 0,001) σε ασθενείς PDC. Εκτός από τη χαρακτηριστική κατανομή του CAFS ARG2 εκφράζουν, όπως CAFS συν-εκφράζεται καρβονικής ανυδράσης IX, SLC2A1, ή HIF-1α, δείκτες υποξία σε PDC ιστό. Επιπλέον,

in vitro

πειράματα αποκάλυψαν ότι καλλιεργημένους ινοβλάστες που προέρχονται από το PDC ιστό εξέφρασε την μεταγραφή ARG2 μετά από έκθεση σε υποξία, η οποία είχε αργινάσης δραστηριότητα. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ο καρκίνος κυτταρική ανοσολογική καταστολή μέσω της έκφρασης ARG2 δεν είναι μια γενική εκδήλωση και ότι η παρουσία του ARG2 εκφράζουν CAFS είναι ένας δείκτης κακής πρόγνωσης, καθώς και υποξία σε PDC ιστό.

Citation : Ινώ Υ, Yamazaki-Itoh R, Oguro S, Shimada Κ, Kosuge Τ, Zavada J, et al. (2013) αργινάση II εκφράζεται σε καρκινικά-Associated ινοβλάστες Υποδεικνύει ιστών υποξία και Προβλέπει κακή έκβαση σε ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 8 (2): e55146. doi: 10.1371 /journal.pone.0055146

Επιμέλεια: Hana Algul, Τεχνικό Πανεπιστήμιο του Μονάχου, Γερμανία

Ελήφθη: 11η, Απριλίου 2012? Αποδεκτές: 19 Δεκεμβρίου, 2012? Δημοσιεύθηκε: 12η, Φεβρουαρίου 2013

Copyright: © 2013 Ινώ et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση-in-ενισχύσεις για την Τρίτη θητεία συνολικής στρατηγικής 10 ετών για τον έλεγχο του καρκίνου από το Υπουργείο Υγείας, Εργασίας και Πρόνοιας της Ιαπωνίας (NH), μια Grant-in-Aid για την Επιστημονική Έρευνα από το Υπουργείο Παιδείας, Πολιτισμού, Αθλητισμού, Επιστημών και Τεχνολογίας της Ιαπωνίας (ΝΗ), Ίδρυμα Princess Τακαμάτσου (10 με 24.216) (ΝΗ), και Cancer Research και το Ταμείο Ανάπτυξης (ΝΗ). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

το μικροπεριβάλλον του όγκου παίζει σημαντικούς ρόλους στην βιολογική συμπεριφορά οποιουδήποτε όγκου, η οποία περιλαμβάνει το ανοσοαπόκριση ξενιστή, τάση οξυγόνου ιστού, και του καρκίνου που σχετίζεται με ινοβλάστες (CAFS) [1].

επαρκείς επίπεδα αργινίνης στο εξωκυτταρικό περιβάλλον είναι ζωτικής σημασίας για τον πολλαπλασιασμό των Τ κυττάρων και δραστικότητα. [2], [3] Η αργινίνη είναι ένα από τα ημι-απαραίτητα αμινοξέα και τα επίπεδα αργινίνης ρυθμίζονται από αργινάσης (ARG), [4] το οποίο υδρολύει την αργινίνη για ορνιθίνης και ουρίας. Υπάρχουν δύο ισοένζυμα της ARG, ΠΑΡΑΜ1 και ΠΑΡΑΜ2. ARG1, ένα κυτταροπλασματικό ένζυμο, εκφράζεται κυρίως στο ήπαρ και αποτοξινώνει αμμωνία. ARG2 εκφράζεται ως μιτοχονδριακή πρωτεΐνη σε μια ποικιλία ιστών, όπως νεφρών, του προστάτη και το λεπτό έντερο. Αργινίνη χρησιμεύει επίσης ως υπόστρωμα για συνθάσης νιτρικού οξειδίου (NOS), αποδίδοντας το νιτρικό οξείδιο (ΝΟ) και άλλα ενδιάμεσα προϊόντα αντιδραστικού άζωτο.

Έχει αναφερθεί ότι ARG2 εκφράζεται μη φυσιολογικά σε κύτταρα καρκίνου του προστάτη, που εμπλέκονται σε όγκο ανοσολογική διαφυγή διαμεσολαβείται από αργινίνη κατανάλωση, με αποτέλεσμα την έλλειψη αργινίνης που αποδυναμώνει ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα και τα καθιστά δυσλειτουργική. [5] Ο καρκίνος του προστάτη εκφράζει ταυτόχρονα NOS2, μειώνοντας έτσι προοδευτικά αργινίνη και σχηματίζοντας υπεροξεινιτρικό που ενεργοποιεί την απόπτωση των κυττάρων Τ με αναστολή της μεταγωγής σήματος που απαιτούνται για κυτταρική ενεργοποίηση. [5] Ωστόσο, αυτές οι ανοσοκατασταλτικές δράσεις μέσω της έκφρασης ARG2 σε καρκινικά κύτταρα δεν ήταν εμφανείς στην επόμενη μελέτη για τον καρκίνο του πνεύμονα. Περισσότερο από το 80% (99/120 περιπτώσεις) των καρκίνων του πνεύμονα εκφράζεται ARG2 να ποικίλους βαθμούς, αν και η έκφραση του ARG2 είχε καμία επίδραση στην κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικών, συμπεριλαμβανομένου του όγκου ανοσοαπόκριση ξενιστή. [6] Τώρα είναι αμφιλεγόμενη, ο αντίκτυπος των ARG2 για τα κλινικά χαρακτηριστικά των ανθρώπινων καρκίνων.

Ο καρκίνος του παγκρέατος [παγκρέατος πορογενές καρκίνωμα (PDC)] είναι η τέταρτη και η πέμπτη κύρια αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με το θάνατο στην Ηνωμένες Πολιτείες και την Ιαπωνία, αντίστοιχα. [7], [8] Το συνολικό ποσοστό επιβίωσης 5 ετών για ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος είναι 3-5%, [7], [9], [10], [11] Εν όψει της επιθετικής ανάπτυξης και νωρίς μεταστατική διάδοση . Το ποσοστό της θνησιμότητας λόγω καρκίνου αυτού έχει δείξει καμία προφανή βελτίωση εδώ και δεκαετίες. Η ανάπτυξη της έξυπνης βιοδεικτών για να βοηθήσει στην επιλογή των υποσυνόλων των ασθενών είναι χρήσιμο για τις μελέτες με στόχο τη μείωση της θνησιμότητας των ασθενών PDC, ιδιαίτερα σε κλινικές μελέτες φάσης σχεδιασθεί για να αξιολογεί διάφορες θεραπευτικές προσεγγίσεις [12].

Στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε την έκφραση και κλινικοπαθολογικών σημασία της ARG2 στο PDC. Βρήκαμε ότι μόνο λίγες PDC κύτταρα εξέφρασαν ARG2, αλλά παρατήρησα ότι ARG2 εκφράστηκε σε ορισμένα στρωματικά κύτταρα που υπάρχουν στο PDC ιστό. Βρήκαμε επίσης ότι η παρουσία της ARG2 εκφράζουν στρωματικά κύτταρα PDC ιστό ήταν μια clinicopathologically σημαντική μεταβλητή, που σχετίζεται με φτωχότερη έκβαση, καθώς και ως δείκτης της υποξίας.

Αποτελέσματα

ARG2 έκφραση είναι σπάνιες στην PDC κύτταρα, αλλά εκφράζεται χαρακτηριστικά στην ατρακτοειδή στρωματικά κύτταρα μέσα και γύρω από νεκρωτικές περιοχές σε PDC ιστών

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση ARG2 ήταν παρούσα σε ένα μικρό αριθμό PDC περιπτώσεις, όπου εκφράστηκε εστιακά στο PDC κύτταρα. Σε αντίθεση, ARG2 εκφράστηκε σε ατρακτοειδή στρωματικά κύτταρα εντός και γύρω από νεκρωτικές περιοχές (Σχήμα 1Α). ARG2 βάφτηκε με μία τελεία που μοιάζει ή χονδροειδείς πρότυπο κοκκώδες στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων ατράκτου, συμβατό με το γεγονός ότι ARG2 εντοπίζεται στα μιτοχόνδρια (Εικόνα 1Β). ARG2 εκφράστηκε επίσης σε κύτταρα νησίδων Langerhans και γαγγλιακά κύτταρα στο πάγκρεας ιστό υπό μη παθολογικές καταστάσεις. Η έκφραση του ARG1 ανιχνεύθηκε μόνο στο κυτταρόπλασμα των ουδετερόφιλων με ανοσοϊστοχημεία, και όχι σε καρκινικά κύτταρα (Σχήμα 1 C).

(Α) Ιστολογία του PDC ιστού σε χαμηλές (άνω στήλες) και προβολή υψηλής ισχύος ( χαμηλότερες στήλες). HE χρώση (αριστερά στήλες) και ανοσοϊστοχημεία για ARG2 (στήλες κέντρο) και κερατίνες (δεξιά στήλη) σε διαδοχικές τομές ιστού. Οι νεκρωτικές περιοχές που περιβάλλονται από σήματα αστέρων (μεγάλη περιοχή της νέκρωσης βρίσκεται στο κάτω δεξιά) στην φωτογραφία επάνω HE και το ορθογώνιο (γαλάζιο) αντιστοιχεί στην περιοχή της κάτω στήλη. (Β) Η ανοσοϊστοχημεία για ARG2 (αριστερά επάνω στήλη) και για τα μιτοχόνδρια (αριστερά κάτω στήλη) σε προβολές υψηλής ισχύος. Θετική χρώση ARG2 οπτικοποιείται ως ένα dot-σαν ή χονδροειδείς πρότυπο κοκκώδες στο κυτταρόπλασμα των κυττάρων ατράκτου. Αυτή η θετική πρότυπο χρώσης ήταν συμβατή με μιτοχονδριακή αντιγόνο. Διπλό ανοσοφθορισμού (δεξιά στήλη) δείχνει ARG2 (πράσινο), μιτοχόνδρια (κόκκινο), και πυρήνες (λευκό). Σχεδόν όλα ARG2-θετική χρώση είναι συν-εντοπισμένα με μιτοχόνδρια (κίτρινο). (Γ) Ανοσοϊστοχημική έκφραση του ARG1 παρατηρήθηκε μόνο σε ουδετερόφιλα. Άνω και κάτω στήλες είναι μέσης και υψηλής ισχύος απόψεις, αντίστοιχα.

Η

προγνωστική σημασία της έκφρασης ARG2 σε στρωματικά κύτταρα

ανάλυση

επιβίωσης έδειξαν μια σύνδεση μεταξύ της παρουσίας ARG2 εκφράζουν στρωματικά κύτταρα και μικρότερη OS (

P

= 0,003) και DFS (

P

= 0.0006) (Σχήμα 2), αν και δεν διαπιστώθηκε καμία συσχέτιση μεταξύ της παρουσίας της ARG2 εκφράζουν τα καρκινικά κύτταρα και οποιοδήποτε παράμετρος επιβίωσης των ασθενών. Όταν ο μέσος αριθμός των θετικών κυττάρων ήταν μηδέν, 1 έως 80, και πάνω από 80, οι βαθμοί χρώσεως ανατεθεί ήταν μηδέν (απουσία), ένα (χαμηλότερη έκφραση) και 2 (υψηλότερη έκφραση), αντίστοιχα. Καθώς η αυξημένη έκφραση ARG2, η επιβίωση έγινε σημαντικά μικρότερη από την άποψη τόσο OS και DFS (Σχήμα 2).

(A, C) καμπύλη επιβίωσης Kaplan-Meier παρουσιάζει μια σύγκριση της συνολικής επιβίωσης μεταξύ της παρουσίας (βαθμοί 1 και 2) και απουσία (βαθμός 0) έκφρασης ARG2 σε στρωματικά κύτταρα (

P

= 0,003) σε Α και ότι μεταξύ των τάξεων έκφραση (βαθμοί 0 έως 2) του ARG2 σε στρωματικά κύτταρα (βαθμός 0 vs. βαθμού 1 , δοκιμασία log-rank,

P

= 2,08? βαθμός 0 εναντίον βαθμού 2,

P

& lt? 0,0001? βαθμού 1 έναντι κατηγορίας 2,

P

= 0,0009 ) στο Γ (Β, καμπύλη επιβίωσης D) Kaplan-Meier παρουσιάζει μια σύγκριση της επιβίωσης ελεύθερης νόσου μεταξύ της παρουσίας (βαθμοί 1 και 2) και απουσία (βαθμός 0) έκφρασης ARG2 στα στρωματικά κύτταρα (

P

= 0,0006) σε Β και ότι μεταξύ των τάξεων έκφρασης (βαθμοί 0-2) της ARG2 στα στρωματικά κύτταρα (βαθμός 0 εναντίον βαθμού 1,

P

= 0,069? βαθμός 0 εναντίον βαθμού 2,

P

& lt? 0,0001? βαθμού 1 βαθμό έναντι 2,

P

= 0,013) σε Δ Μαύρο κύκλο και άσπρο κύκλο αντιπροσωπεύουν τη λογοκρισία και την αποτυχία, αντίστοιχα

Η

Η. μέσο όρο επιβίωσης των ασθενών με PDC με ή χωρίς στρωματικά κύτταρα ARG2 εκφράζουν ήταν 22,71 ± 1,77 μήνες και 37,13 ± 2,41 μήνες αντίστοιχα. Τα ποσοστά επιβίωσης ενός έτους για τους ασθενείς που έχουν PDC με ή χωρίς στρωματικά κύτταρα ARG2 εκφράζουν ήταν 66,9 ± 5,2% και 78,7 ± 3,7%, αντίστοιχα? Τα ποσοστά επιβίωσης 2-ετών ήταν 36,1 ± 5,4% και 51,6 ± 4,6%, και τα ποσοστά επιβίωσης 5 ετών 17,1 ± 4,4% και 34,5 ± 4,5%, αντίστοιχα.

ανάλυση παλινδρόμησης πολυπαραγοντική Cox συμπεριλαμβανομένου του μεγέθους του όγκου, κατάσταση κόμβου, την κατάσταση της μετάστασης, όγκος ιστολογικού βαθμού, την κατάσταση περιθώριο, νευρικό πλέγμα εισβολή, λεμφικό εισβολή, φλεβική εισβολή, ενδοπαγκρεατική νευρικά εισβολή, και η έκφραση της ARG2 σε στρωματικά κύτταρα έδειξαν ότι η έκφραση του ARG2 σε στρωματικά κύτταρα, μεταστατική κατάσταση, λεμφικό εισβολή, και φλεβική εισβολή ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες του OS (Πίνακας 1), και ότι η έκφραση του ARG2 στα στρωματικά κύτταρα, μεταστατική κατάσταση, νευρικού πλέγματος εισβολή, και φλεβική εισβολή ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες της DFS (Πίνακας 2). Όταν η έκφραση των ARG2 στα στρωματικά κύτταρα κατηγοριοποιήθηκε σε κανένα και χαμηλότερη έκφραση σε σχέση με υψηλότερη έκφραση (βλέπε Υλικά και μέθοδοι), μονοπαραγοντική ανάλυση της OS και DFS έδειξε (

P

& lt? 0,0001? Αναλογία κινδύνου [HR] = 2.505? 95% διάστημα εμπιστοσύνης [CI], 1,649 – 3,804) και (

P

& lt? 0,0001? HR = 2.519? 95% CI, 1,658 – 3,827), αντίστοιχα. Πολυπαραγοντική ανάλυση του OS και DFS έδειξε (

P

& lt? 0,0001? HR = 2.687? 95% CI, 1,759 – 4,103) και (

P

& lt? 0,0001? HR = 2.451? 95% CI, 1,608 – 3,736), αντίστοιχα.

η

συσχέτιση μεταξύ της παρουσίας της ARG2 εκφράζουν στρωματικά κύτταρα και άλλα κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές

ο πίνακας 3 καταγράφει τα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά των ασθενών με PDC. Όταν αυτά τα χαρακτηριστικά αναλύθηκαν για συσχετισμούς, η παρουσία του στρωματικά κύτταρα ARG2 εκφράζουν βρέθηκε να είναι πιο πιθανό σε περιπτώσεις με φτωχότερες διαφοροποίηση του όγκου σε σχέση με την ιστολογική βαθμίδα, παρουσία νέκρωση, και παρουσία στρωματικών κυττάρων που εκφράζουν CAIX και SLC2A1 (εναλλακτικά γνωστή ως γλυκόζη μεταφορέας τύπου 1, GLUT1), που είναι δείκτες της υποξίας. Επιπλέον, η παρουσία του στρωματικά κύτταρα ARG2 εκφράζουν ήταν στενά συσχετίζονται με υψηλότερο CD68

+ μακροφάγα που διηθούν όγκο και CD66b

+ ουδετερόφιλα, και κάτω ογκο-διηθητικά CD4

+ Τ κύτταρα και CD8

+ Τ κύτταρα. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της παρουσίας ARG2 εκφράζουν τα καρκινικά κύτταρα και οποιοδήποτε από αυτά τα κλινικοπαθολογικών παραμέτρων.

Η

Η πλειοψηφία των ARG2 εκφράζουν στρωματικά κύτταρα είναι καρκινικά σχετίζονται με ινοβλάστες (CAFS) σε κατάσταση υποξίας

Για να προσδιορίσετε τι είδους στρωματικά κύτταρα εξέφρασαν ARG2, πραγματοποιήσαμε διπλή ανοσοϊστοχημική και τρίκλινα ανοσοφθορισμού. ARG2 κύτταρα που εκφράζουν ατράκτου ήταν συχνά θετικά για α-SMA, βιμεντίνη, και κολλαγόνο τύπου Ι, σπάνια θετικά για CD31 και CD68 (τα δεδομένα δεν φαίνονται), και αρνητικές για δεσμίνη, κυτοκερατίνες, και D2-40 (Σχήμα 3), υποδεικνύοντας ότι η πλειοψηφία των στρωματικών κυττάρων ARG2 εκφράζουν ήταν CAFS και μια μειοψηφία ήταν ενδοθηλιακά κύτταρα ή τα μακροφάγα. Ωστόσο, οι περισσότερες από τις CAFS στο PDC ιστού δεν εκφράζουν ARG2, εκτός από αυτά που βρίσκονται μέσα και γύρω από νεκρωτικό και μυξοειδές εκφυλιστικές περιοχές. Παραδόξως, ARG2 δεν ήταν προφανώς εκφράζεται στο στρωματικά ή επιθηλιακά κύτταρα που περιβάλλουν νεκρωτικό ιστό ή μυξοειδές εκφυλιστικές περιοχές ενδοπορικού θηλώδη-βλεννώδες νεοπλάσματα του παγκρέατος και νεκρωτικού ιστού σε πεπτικά έλκη (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

(Α) Τρίκλινο ανοσοφθορισμό δείχνει ότι το μεγαλύτερο μέρος του dot-όπως χρώση ARG2 (κόκκινο) είναι παρούσα σε α-SMA-θετικό ινοβλάστες (πράσινο). Τα καρκινικά κύτταρα είναι θετικά στις κερατίνες (μπλε). Οι πυρήνες χρωματίζονται με DAPI (λευκό). (Β) Ιστολογία και ανοσοϊστοχημεία του PDC ιστού σε χαμηλή (επάνω φωτογραφία κάθε ζεύγος φωτογραφιών) και προβολή υψηλής ισχύος (κάτω φωτογραφία κάθε ζεύγους των φωτογραφιών). HE χρώση και ανοσοϊστοχημεία για πολλά αντιγόνα σε διαδοχικές τομές ιστού. Οι νεκρωτικές περιοχές που περιβάλλονται από τα σήματα αστέρων στην χαμηλής ισχύος HE φωτογραφία και το ορθογώνιο (γαλάζιο) αντιστοιχεί στην περιοχή της προβολής υψηλής ισχύος.

Η

Από CAFS ARG2 εκφράζουν ήταν παρόντες εντός και γύρω από νεκρωτικές περιοχές, έχουμε την επόμενη εξέτασε τη σχέση μεταξύ της έκφρασης ARG2 και υποξία σε καρκινικό ιστό χρησιμοποιώντας διπλή ανοσοχρώση. Έκφραση των CAIX, SLC2A1, ή HIF-1α παρατηρήθηκε σε CAFS γύρω περιοχές νέκρωσης. ARG2 έκφραση βρέθηκε σε αυτά τα CAIX-, SLC2A1-, ή μόνα τους, ή σε CAFS βρίσκεται δίπλα στο CAIX-, SLC2A1-, ή κύτταρα HIF-1α που εκφράζουν (Σχήμα 4) CAFS HIF-1α που εκφράζουν. ARG2 έκφραση σε καρκινικά κύτταρα δεν περιορίστηκε σε περιοχές γύρω από νέκρωση ή κοντά CAIX-, SLC2A1-, ή κύτταρα HIF-1α που εκφράζουν (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η έκφραση του ARG2 προκλήθηκε στις CAFS υπό συνθήκες υποξίας, και επίσης ότι δεν υπήρχε καμία εμφανής συσχέτιση μεταξύ υποξία και την έκφραση του ARG2 σε καρκινικά κύτταρα.

Ιστολογία του PDC ιστού σε χαμηλή (ανώτερο στήλες) και προβολή υψηλής ισχύος (κάτω στήλες). HE χρώση και ανοσοϊστοχημεία για ARG2, CAIX, και SLC2A1 σε διαδοχικές τομές ιστού. Οι νεκρωτικές περιοχές που περιβάλλονται από τα σήματα αστέρων στην επάνω φωτογραφία HE και το ορθογώνιο (γαλάζιο) αντιστοιχεί στην περιοχή της κάτω στήλη. Διπλή ανοσοχρώση (τα δεξιά στήλες) αποκαλύπτει ότι τα περισσότερα από τα κοκκώδη χρώση ARG2 (καφέ) είναι παρούσα στην ατρακτοειδή κύτταρα βάφονται για CAIX (μοβ). Κύριο θέμα είναι μια άποψη πολύ υψηλής ισχύος.

Η

Η υποξία επάγει την έκφραση της ARG2 σε CAFS Απόσπασμα από PDC ιστοί

Για να επιβεβαιωθεί αν η έκφραση του

ARG2

γονίδιο είναι που προκαλείται από υποξία σε CAFS, θα πραγματοποιηθεί

in vitro

πειράματα χρησιμοποιώντας CAFS που προέρχονται από ιστούς PDC. Επαγωγή

ARG2

έκφρασης γονιδίου από υποξικό στρες βρέθηκε σε CAFS σε επίπεδα τόσο η μεταγραφή και η πρωτεΐνη, και η προκαλούμενη ARG2 είχε αργινάσης δραστικότητα (Σχήματα 5A-C). Έκφραση της ΠΑΡΑΜ2 συνεχίστηκε υπό συνθήκες υποξίας, και η επαγωγή της ARG2 από υποξικό στρες ήταν αναστρέψιμη. Re-οξυγόνωση μείωσε την επάνω ρυθμισμένη έκφραση του

ARG2

γονιδίου σε ένα επίπεδο συγκρίσιμο με αυτό CAFS καλλιεργήθηκαν υπό συνθήκες ορθοξικές (Σχήμα 5Α). Υποξικό στρες που προκαλείται από τη συσσώρευση του HIF-1α σε CAFS (Σχήμα 5D). Σύμφωνα με την βάση δεδομένων γονίδιο, το 5 ‘πλευρική περιοχή του πρώτου εξονίου του γονιδίου ARG2 έχει πιθανές θέσεις πρόσδεσης για HIF-1 (5′-RCGTG-3’) [13]: ACGTG σε -425 έως -421 και GCGTG στο -234 – -230. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η έκφραση του ARG2 επάγεται μέσω της οδού σηματοδότησης HIF-1.

(Α) έκφραση του γονιδίου Σχετική μετράται με πραγματικού χρόνου RT-PCR σε ινοβλάστες που προέρχονται από το PDC ιστού μετά από 48 ώρες από την έκθεση σε υποξία (υποξία) ή τον πολιτισμό υπό ορθοξικές συνθήκες ελέγχου (φυσιολογική οξυγόνωση). Η έκφραση των γονιδίων στους ινοβλάστες μετά από 48 ώρες καλλιέργειας υπό συνθήκες υποξίας που ακολουθείται από 48 ώρες καλλιέργειας υπό συνθήκες ορθοξικές (Re-οξυγόνωση) αναλύθηκε επίσης. Κάθε στήλη δεδομένων αντιπροσωπεύει τη μέση σχετική έκφραση τυποποιηθεί με 18SrRNA ± SE για τριπλούς προσδιορισμούς. Η

SLC2A1

(εναλλακτικά γνωστή ως μεταφορέα γλυκόζης τύπου 1 ή GLUT1) γονίδιο είναι υποξία-επαγόμενη. τιμή σημαντικότητας (

t

test του Student) του

P

& lt? 0,01 (*). Ορισμένα γονίδια εκφράζονται σε CAFS σε εξαιρετικά χαμηλότερο επίπεδο από ό, τι σε ένα κανονικό ιστό που είναι ο κύριος ιστός έκφρασης του γονιδίου. Σε τέτοιες περιπτώσεις, η σύγκριση της έκφρασης του γονιδίου απεικονίζεται στα ένθετα με 1/50 έως 1/10000 κλίμακες. (Β) Ανάλυση Western blot (άνω στήλη) αποκαλύπτει ότι η έκφραση πρωτεΐνης ARG2 επάγεται σε CAFS χρησιμοποιείται στο (Α) κατά την έκθεση σε υποξία. Ν και Η υποδεικνύουν τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν υπό νορμοξικές και υποξικές συνθήκες, αντίστοιχα. ARG2 πρωτεΐνη που επάγεται σε CAFS έχει δραστηριότητα αργινάσης (κάτω στήλη). Μία μονάδα αργινάσης μετατρέπει 1 μπιοί Ε-αργινίνης σε ορνιθίνης και ουρίας ανά λεπτό σε ρΗ 9,5 και 37 ° C. Κάθε στήλη δεδομένων αντιπροσωπεύει τη μέση δραστικότητα ± SE για τριπλούς προσδιορισμούς. τιμή σημαντικότητας (

t

test του Student) του

P

& lt? 0,05 (*) και

P

& lt? 0.01 (**). (Γ) έκφραση των γονιδίων σε CAFS από PDC ιστό κατά την καλλιέργεια υπό συνθήκες υποξίας που εντοπίστηκε με πραγματικού χρόνου RT-PCR. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν ένα από τρία ανεξάρτητα πειράματα. τιμή σημαντικότητας (

t

test του Student) του

P

& lt? 0,01 (*) και

P

& lt? 0.001 (**). (D) ανάλυση κηλίδας Western των πρωτεϊνών HIF-1α. Συσσώρευση της πρωτεΐνης HIF-1α παρατηρείται σε CAFS μετά από 6 ώρες από την έκθεση σε συνθήκες υποξίας. Ν και Η υποδεικνύουν τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν υπό ορθοξικές και συνθήκες υποξίας, αντίστοιχα.

Η

Η έκφραση του

ARG1

,

NOS1, NOS2

, και

NOS3

γονίδια δεν προκλήθηκε σημαντικά από υποξία (Σχήματα 5Α). Έκφραση του

ARG1

και

NOS3

γονίδια φάνηκε να επάγεται από υποξία, αν και τα επίπεδα έκφρασης τους ήταν πολύ χαμηλή, σχεδόν 1/1000 έως 1/10000 από όσους είναι σε φυσιολογικό ιστό, η οποία είναι ένας από τους σημαντικότερους ιστούς που εκφράζουν το γονίδιο. Δεδομένου ότι όλα αυτά τα γονίδια κωδικοποιούν ένζυμο μόρια, είναι απίθανο ότι αυτές οι μικρές ποσότητες που επάγεται μετεγγραφής θα είναι βιολογικά σημαντική. Μάλλον, πιθανολογείται ότι μικρές ποσότητες μολυσματικών κυττάρων όπως τα ενδοθηλιακά κύτταρα θα μπορούσε να ανταποκριθεί στις συνθήκες υποξίας. Peroxynitrite είναι ένα αντιδραστικό ενδιάμεσο που παράγεται όταν τόσο NOS και ARG υπάρχουν αζώτου. Δεδομένου ότι αυτά τα κύτταρα δεν εκφράζουν νιτροτυροσίνης εξετάστηκαν με ανοσοϊστοχημεία (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα), που παράγεται από την νίτρωση των υπολειμμάτων τυροσίνης από υπεροξυνιτρώδη,

NOS2

έκφραση δεν επάγεται σε CAFS εντός και γύρω από νεκρωτικές περιοχές σε PDC ιστό. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι

NOS2

δεν προκαλείται σε

ARG2

εκφράζοντα CAFS.

CAFS ARG2 εκφράζουν ενδεχομένως να επηρεάσουν το

ανοσολογική αντίδραση

Η κανονική φυσιολογική συγκέντρωση της L-αργινίνης στον ορό είναι περίπου 100 μΜ (50-150 μΜ). Προσδιορίσαμε θα απαιτείται ότι 12-15 μΜ L-αργινίνης για πολλαπλασιασμό Τ κυττάρων που προκαλείται από διέγερση του υποδοχέα των κυττάρων Τ υπό τις πειραματικές συνθήκες χρησιμοποιήσαμε (Σχήματα 6Α και 6Β). Στη συνέχεια, προσπαθήσαμε να εξετάσουμε αν ARG2 που προκαλείται από την έκθεση σε υποξία επηρεάζει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων Τ

in vitro

. Σε αντίθεση με την προσδοκία, το ρυθμισμένο μέσο που είχε χρησιμοποιηθεί για την καλλιέργεια CAFS υπό υποξικές συνθήκες δεν καταστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των Τ κυττάρων σημαντικά σε σύγκριση με μέσο που είχε χρησιμοποιηθεί για την καλλιέργεια CAFS υπό νορμοξικές συνθήκες (Εικόνα 6Α και Β). Η απόκλιση των ευρημάτων με τα αποτελέσματα μας της επαγωγής ARG2 πρωτεΐνης με μια ορισμένη ενζυματική δραστικότητα σε CAFS από υποξικά η έκθεση μπορεί να προκαλείται από την έκκριση του απροσδιόριστου μορίων που μπορεί να υποστηρίξει τον πολλαπλασιασμό των Τ κυττάρων από την CAFS.

( Α) δοκιμασία πολλαπλασιασμού των Τ κυττάρων. CFSE σημασμένο CD3

+ Τ κύτταρα διεγέρθηκαν με χάντρες αντίσωμα συζευγμένο με αντι-CD3 /CD28 σε φρέσκο ​​μέσο συμπληρωμένο με την ένδειξη L-αργινίνη (έλεγχος) ή σε ρυθμισμένο μέσο μετά από καλλιέργεια CAFS υπό ορθοξικές συνθήκες (νορμοξία) ή υποξικές συνθήκες (υποξία) στο μέσο με την ένδειξη L-αργινίνη (συμπεριλαμβανομένων 2.0 μΜ αργινίνης περιεχομένων ορού) για τέσσερις ημέρες, και τα προφίλ πολλαπλασιασμό τους αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Μη πολλαπλασιάστηκαν κύτταρα έδειξαν την υψηλότερη ένταση φθορισμού και η ένταση των επισημασμένων Τ κυττάρων μειώθηκε κατά το ήμισυ σε κάθε κυτταρική διαίρεση. Οι αριθμοί αντιπροσωπεύουν το ποσοστό των αριθμών κυττάρων που έχουν υποστεί πολλαπλά τμήματα σε σχέση με τον αρχικό αριθμό των κυττάρων. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μία από τις έξι ανεξάρτητων πειραμάτων. (Β) Τα ποσοστά των κυττάρων που έχουν υποστεί διαιρέσεις κυττάρων. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μία από τις έξι ανεξάρτητων πειραμάτων. (C, D) Σύγκριση του απόλυτου αριθμού των διηθούν όγκο CD3

+ Τ κύτταρα (C) με δείκτη πολλαπλασιαζόμενα τους (το ποσοστό των Ki-67-θετικά πολλαπλασιαστικά κύτταρα μεταξύ των CD3

+ Τ κύτταρα) (D ) μεταξύ της περιοχής γύρω από ARG2 εκφράζουν CAFS (λευκό) και την περιοχή εντός του όγκου, εκτός από νεκρωτικό ιστό (διάστικτα). Μετρήσαμε διηθούν όγκο CD3

+ Τ κύτταρα και Ki-67 θετικότητα τους σε κάθε είκοσι διαφορετικά πεδία υψηλής ισχύος ανά κατηγορίες περιοχή χρησιμοποιώντας δύο PDC περιπτώσεις. Κάθε στήλη δεδομένων αντιπροσωπεύει τη μέση ± SE για τριπλούς προσδιορισμούς. τιμή σημαντικότητας (Μαθητή

t

test) του

P

& lt? 0,05 (*) και

P

& lt?. 0.001 (**)

Η

για να καθοριστεί αν CD3

+ Τ κύτταρα πολλαπλασιάζονται γύρω CAFS ARG2 εκφράζουν το PDC ιστό, πραγματοποιήσαμε διπλή ανοσοϊστοχημική για CD3 και Ki-67 και σύγκριση διηθούν όγκο CD3

+ Τ κυττάρων με πολλαπλασιαστική τους δείκτη στην περιοχή γύρω από CAFS ARG2 εκφράζουν στην περιοχή εντός του όγκου, εκτός από νεκρωτικό ιστό. Ήταν έκπληξη το γεγονός ότι υπήρχαν λίγες CD3

+ Τ κύτταρα γύρω από CAFS ARG2 εκφράζουν. Τόσο ο απόλυτος αριθμός των διηθούν όγκο CD3

+ Τ κύτταρα (Σχήμα 6C) και το ποσοστό των Ki-67-θετικά πολλαπλασιαστικά κύτταρα μεταξύ των CD3

+ Τ κύτταρα (Σχήμα 6D) που παρατηρείται στην περιοχή γύρω ARG2- εκφράζοντας CAFS ήταν σημαντικά χαμηλότερες από εκείνες που παρατηρούνται σε άλλη περιοχή. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η προσαρμοστική ανοσολογική αντίδραση καταστέλλεται σε περιοχές γύρω από CAFS ARG2 εκφράζουν.

Το άμεσο αποτέλεσμα του ARG2 που προκαλείται από την έκθεση σε υποξία σε CAFS κατά των καρκινικών κυττάρων μελετήθηκε χρησιμοποιώντας ένα

in vitro

σύστημα στο οποίο CAFS εξάγεται από PDC ιστούς συν-καλλιεργήθηκαν με καρκίνο του παγκρέατος κύτταρα MiaPaCa-2. Ο πολλαπλασιασμός των καρκινικών κυττάρων δεν επηρεάστηκε σημαντικά από ARG2 επάγεται από υποξία (Σχήμα 7Α), και το οξειδωτικό στρες που προκαλείται από απόπτωση των καρκινικών κυττάρων αλλά CAFS ίδιοι δεν εμποδίστηκε από πολυαμίνης που παράγεται από ARG2 σε απόκριση σε υποξία (Σχήμα 7C).

(Α) ARG2 εκφράζουν CAFS δεν υποστηρίζουν τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος. CAFS εκχυλίζεται από ιστούς και τα κύτταρα PDC MiaPaCa-2 συν-καλλιεργήθηκαν σε μέσο με ή χωρίς 2 mM DFMO υπό ορθοξικές ή υποξικές συνθήκες επί 48 ώρες και ο αριθμός των ζωντανών κυττάρων υπολογίστηκαν με βάση τα στοιχεία που λαμβάνονται με κυτταρομετρία ροής. Ο απόλυτος αριθμός των κυττάρων MiaPaCa-2 καλλιεργήθηκαν υπό συνθήκες υποξίας μειώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με νορμοξικές συνθήκες, αν και αυτή η επίδραση δεν επηρεάστηκε σημαντικά από την παρουσία του DFMO στο μέσο καλλιέργειας. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν ένα από τρία ανεξάρτητα πειράματα. τιμή σημαντικότητας (

t

test του Student) του

P

& lt? 0,05 (*) και

P

& lt? 0.01 (**). (Β) Το οξειδωτικό στρες που προκαλείται από απόπτωση προκλήθηκε σε κύτταρα MiaPaCa-2 από την έκθεση σε διάφορες συγκεντρώσεις (0-500 μΜ) H

2O

2 επί 7 ώρες. Τα νεκρά κύτταρα και τα ζωντανά κύτταρα ανιχνεύθηκαν με κυτταρομετρία ροής μετά από χρώση με Annexin V και ΡΙ. (C) ARG2 εκφράζουν CAFS δεν προστάτευσε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα από το οξειδωτικό επαγόμενη απόπτωση. Μετά από 48 ώρες συν-καλλιέργειας του CAFS εξάγεται από PDC ιστών και κυττάρων MiaPaCa-2 σε μέσο με ή χωρίς 2 mM DFMO υπό ορθοξικές ή υποξικές συνθήκες, όλα τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για άλλες 4 ώρες κάτω από οξειδωτικό στρες (50 μΜ H

2O

2) χρησιμοποιώντας τις ίδιες συνθήκες όπως και πριν. Τα ποσοστά των ζωντανών κυττάρων μετρήθηκε με κυτταρομετρία ροής (αριστερή στήλη). Προκειμένου να αξιολογηθεί η επίδραση του οξειδωτικού στρες, τα ποσοστά των ζωντανών κυττάρων μετά από έκθεση σε οξειδωτικό στρες διαιρέθηκαν με τα ποσοστά των ζωντανών κυττάρων που καλλιεργήθηκαν κάτω από τις ίδιες συνθήκες, πριν το οξειδωτικό στρες (δεξιά στήλη). Η αναλογία των ζωντανών κυττάρων πριν και μετά από το οξειδωτικό στρες μειώθηκαν σημαντικά σε αμφότερες τις MiaPaCa-2 κύτταρα και CAFS καλλιεργήθηκαν υπό συνθήκες υποξίας. Ο αποκλεισμός της συνθέσεως των πολυαμινών με DFMO αύξησε σημαντικά το βαθμό του οξειδωτικού στρες που προκαλείται από απόπτωση στα CAFS. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν ένα από τρία ανεξάρτητα πειράματα. τιμή σημαντικότητας (Φοιτητική

t

test) του

P

& lt? 0,05 (*) και

P

& lt?. 0.01 (**)

Η

Συζήτηση

ARG παίζει βασικό ρόλο στη ρύθμιση περισσότερες πτυχές του μεταβολισμού αργινίνης στην υγεία και την ασθένεια, η αργινίνη είναι ένας πρόδρομος για πολλά μόρια με βάση σημαντικές βιολογικές λειτουργίες, όπως η ουρία, το νιτρικό οξείδιο, πολυαμίνες, προλίνη, κρεατίνη, γλουταμινικό, και αγματίνη. [2], [4] Αν και ARG2 φέρεται να είναι εμπλέκεται στους μηχανισμούς του ανοσοποιητικού διαφυγή του όγκου, [5] ρόλους στον ανθρώπινο καρκίνο μένει να διευκρινιστεί πλήρως. Εδώ δείξαμε ότι η πλειοψηφία των ΠΠΚ δεν εκφράζουν ARG2 και ότι η παρουσία του ΠΠΚ ARG2 που εκφράζουν δεν συσχετιζόταν σημαντικά με αποτέλεσμα ασθενή. Αντ ‘αυτού, η παρουσία του CAFS ARG2 εκφράζουν βρέθηκε να είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός δείκτης των φτωχότερων OS (HR = 1,582,

P

= 0,007) και DFS (HR = 1.715,

P

= 0.001 ) σε PDC ασθενείς. Η παρουσία ARG2 CAFS σε PDC ιστός συσχετίζεται στενά με ανώτερο βαθμό του όγκου, η παρουσία των ιστολογικών νέκρωση, η παρουσία CAIX εκφράζουν στρωματικά κύτταρα, και η παρουσία του στρωματικά κύτταρα SLC2A1 εκφράζουν σε PDC ιστό. CAFS ARG2 εκφράζουν εντοπίστηκαν μέσα και γύρω από νεκρωτικές περιοχές σε PDC ιστό και συν-εκφράζεται CAIX, SLC2A1 και HIF-1α. Επιπλέον,

in vitro

πειράματα αποκάλυψαν ότι καλλιεργημένους ινοβλάστες που προέρχονται από το PDC ιστό εξέφρασε την ARG2 μετά από έκθεση σε υποξία. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ο καρκίνος κυτταρική ανοσολογική καταστολή μέσω της έκφρασης ARG2 δεν είναι μια γενική εκδήλωση και ότι η παρουσία του CAFS ARG2 που εκφράζουν είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για PDC ασθενείς, και επίσης αντικατοπτρίζει υποξία των ιστών.

Μειωμένη οξυγόνου ένταση έχει αναφερθεί να επηρεάζει ARG δραστηριότητα σε διάφορους ιστούς και τύπους κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των πνευμόνων, του εγκεφάλου, ενδοθηλιακά κύτταρα, και μακροφάγα, [14], [15], [16] αν και οι επιδράσεις στην args διαφέρουν μεταξύ τους ιστούς, τα κύτταρα και τα είδη. Στους ανθρώπους, έχει αποδειχθεί ότι η υποξία επάγει την έκφραση του ARG2 στην πνευμονική αρτηρία λείων μυϊκών κυττάρων (PASMC) [17] και των πνευμόνων μικροαγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα. [18], [19] Για τις γνώσεις μας, τα αποτελέσματα της υποξίας στην έκφραση ARG σε ιστούς ή ινοβλάστες του καρκίνου δεν έχουν αποδειχθεί προηγουμένως. Η μελέτη μας σε συνδυασμό με τη μελέτη ότι η υποξία επάγει την έκφραση της ΠΑΡΑΜ2 αλλά δεν ΠΑΡΑΜ1 στο PASMCs δείχνει ότι ARG2 είναι η υποξία ισομορφή. [17] Είναι συνεπής με τα ευρήματά μας ότι η συσσώρευση του HIF-1α βρέθηκε σε CAFS υπό συνθήκες υποξίας και επίσης ότι η 5 ‘πλευρική περιοχή του πρώτου εξονίου του γονιδίου ARG2 έχει πιθανές θέσεις πρόσδεσης για HIF-1.

Ορνιθίνη παράγεται από ARG μπορεί να μεταβολιστεί περαιτέρω για πολυαμίνες και προλίνη, τα οποία είναι κρίσιμα για τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, τη διαφοροποίηση και την επισκευή των ιστών, αποτρέποντας έτσι πιθανώς κυτταρικό θάνατο. [20], [21], [22] Ως εκ τούτου, η επαγωγή της ARG2 μπορούσε να είναι μια αμυντική αντίδραση του CAFS στο PDC ιστό κάτω από σοβαρή υποξυγοναιμία στρες ενδέχεται να οδηγήσει σε κυτταρικό θάνατο. Πράγματι, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι CAFS ARG2 εκφράζουν βελτιωθεί το οξειδωτικό στρες που προκαλείται απόπτωση των ίδιων των CAFS (Σχήμα 7C). Αυτό είναι συνεπές με το γεγονός ότι οι εν λόγω CAFS έδειξαν ένα υψηλό επίπεδο ARG και ένα χαμηλό επίπεδο NOS, που δείχνει εκτεταμένη παραγωγή πολυαμινών και προλίνη σε αυτές. Αυτά CAFS μπορεί επίσης να προκαλέσει ίνωση, αφού προλίνη είναι ένα βασικό συστατικό του κολλαγόνου. Όπως έχει παρατηρηθεί ότι νεκρωτικός ιστός συχνά αναδιαμορφώνεται σε ινώδη ιστό ως μορφή θεραπείας απόκρισης, [23], προτείνεται ότι η επαγωγή ARG2 εμπλέκεται στην ίνωση σε υποξικές περιοχές για να διευκολυνθεί η μετα-νεκρωτική ίνωση. Αν και είναι ακόμα ασαφές αν ARG2 εκφράζουν CAFS προωθούν την εξέλιξη του όγκου, δεν υπάρχουν σημαντικές επιπτώσεις στον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και την προστασία του οξειδωτικού στρες που προκαλείται απόπτωση των καρκινικών κυττάρων βρέθηκαν σε μας

in vitro

πειράματα (Εικόνες 7Α και 7C).

τα περισσότερα από τα κύτταρα PDC δεν εκφράζουν ARG2. Ο καρκίνος του πνεύμονα εκφράζει ARG2, αν και δεν έχει παρατηρηθεί ανοσοκαταστολή που προκαλείται από ARG2 εκφράζουν τα καρκινικά κύτταρα. [6] Έτσι, προτείνεται ότι ο καρκίνος κυτταρική ανοσολογική καταστολή από ARG2 (και NOS2) στον καρκίνο του προστάτη [5] είναι μάλλον ιστού που εξαρτάται, και όχι μια γενική εκδήλωση στο μικροπεριβάλλον του καρκίνου. Η έρευνά μας των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος που διηθούν όγκο στα ΠΠΚ έδειξαν ότι η παρουσία του CAFS ARG2 εκφράζουν συσχετίστηκε σημαντικά με υψηλότερο διείσδυση των CD68

+ μακροφάγα (

P

= 0,05) και CD66b

+ ουδετερόφιλα (

P

& lt? 0.0001) και χαμηλότερη διείσδυση των CD4

+ Τ κύτταρα (

P

= 0,003) και CD8

+ Τ κύτταρα (

P

= 0.036). Επιπλέον, ογκο-διηθητικά CD3

+ Τ κύτταρα γύρω CAFS ARG2 εκφράζουν ήταν λίγες και έδειξε μικρότερο πολλαπλασιασμό (Σχήμα 6). Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι η παρουσία του CAFS ARG2 εκφράζουν είναι στενά συνδεδεμένη με την ανοσοκατασταλτική μικροπεριβάλλον. Η κατάσταση αυτή μπορεί να εξηγηθεί από την άποψη της υποξίας των ιστών, [24] αν και ο βαθμός στον οποίο οι τοπικές έκφραση ARG2 σε CAFS συμβάλλει σε αυτό ανοσοκαταστολή είναι ακόμα ασαφής.