Αφηρημένο

Ιστορικό

Ένας μεγάλος αριθμός ανθρώπινων έχουν αντιγόνα που σχετίζονται με όγκο που αναγνωρίζονται από CD8

+ Τ κύτταρα σε μια τάξη ανθρώπινου αντιγόνου λευκοκυττάρων Ι (HLA-I) -περιορισμένη μόδα έχουν ταυτοποιηθεί. Ειδικές ΑΤ-πλούσια σε πρωτεΐνη που δεσμεύεται με αλληλουχία 1 (SATB1) εκφράζεται έντονα σε πολλούς τύπους ανθρώπινων καρκίνων, ως μέρος των νεοπλασματικών φαινότυπο τους, και προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης SATB1 είναι απαραίτητη για την επιβίωση του όγκου και τη μετάσταση, έτσι αυτή η πρωτεΐνη μπορεί να χρησιμεύσει ως μια ορθολογική στόχος για εμβόλια καρκίνου.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Δώδεκα SATB1 πεπτίδια προερχόμενα είχαν προβλεφθεί από ανοσο-πληροφορική προσέγγιση με βάση το μοτίβο δέσμευσης HLA-A * 02. Αυτά τα πεπτίδια εξετάσθηκαν για την ικανότητά τους να επάγουν το πεπτίδιο-ειδικές αποκρίσεις Τ κυττάρων σε μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) που λαμβάνονται από HLA-A * 02

+ υγιείς δότες και /ή HLA-A * 02

+ ασθενείς με καρκίνο . Η αναγνώριση των HLA-A * 02

+ SATB1-καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν ελέγχθηκε επίσης. Μεταξύ των δώδεκα SATB1-πεπτίδια που προέρχονται, SATB1

565-574 συχνά επάγεται πεπτιδίου-ειδικές αποκρίσεις Τ κυττάρων σε PBMCs από δύο υγιείς δότες και ασθενείς με καρκίνο. Σημαντικά, SATB1

565-574-ειδικών Τ κυττάρων αναγνωρίζονται και σκότωσε HLA-A * 02

+ SATB1

+ καρκινικά κύτταρα σε ένα HLA-Ι-περιορισμένο τρόπο.

Συμπεράσματα /Σημασία

Έχουμε αναγνωρίσει μία νέα HLA-A * 02 περιορισμένων SATB1-πεπτίδιο προερχόμενο επίτοπο που αναγνωρίζεται από τα CD8

+ Τ κύτταρα, τα οποία, με τη σειρά του, αναγνωρίζει και σκοτώνει HLA-A * 02

+ SATB1 κύτταρα

+ όγκου. Η SATB1 προερχόμενο επίτοπο που ταυτοποιήθηκε μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως διαγνωστικός δείκτης όσο και ως στόχος για άνοση ανάπτυξη εμβολίων κατά του καρκίνου

Παράθεση:. Wang Μ, Yin Β, Matsueda S, Deng L, Li Υ, Zhao W , et al. (2013) Ταυτοποίηση των Ειδικών AT-πλούσια αλληλουχία πρόσδεσης πρωτεΐνης 1 ως ένα νέο αντιγόνο όγκου που αναγνωρίζεται από CD8

+ κύτταρα Τ: Επιπτώσεις για τον καρκίνο ανοσοθεραπεία. PLoS ONE 8 (2): e56730. doi: 10.1371 /journal.pone.0056730

Επιμέλεια: Silke Appel, Πανεπιστήμιο του Μπέργκεν, Νορβηγία

Ελήφθη: 26η Οκτωβρίου 2012? Αποδεκτές: 14η Ιανουαρίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 21 Φεβρουαρίου 2013

Copyright: © 2013 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο ήταν εν μέρει χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, National Institutes of Health and Cancer Research Institute, και το The Methodist Hospital Research Institute. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ένα από τα πιο υποσχόμενες προσεγγίσεις στη θεραπεία του καρκίνου βασίζεται στην αξιοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος για την εξάλειψη κακοήθων κυττάρων [1], η επιτυχία των οποίων εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τον εντοπισμό των κατάλληλων αντιγόνων που σχετίζονται με όγκο (ΤΑΑ) για τη δημιουργία αποτελεσματικών εμβόλια καρκίνου. Εχει καλώς αποδειχθεί ότι τα καρκινικά κύτταρα εκφράζουν ΤΑΑ που μπορεί να αναγνωριστεί από τα CD8

+ Τ κύτταρα στο πλαίσιο της ανθρώπινης τάξης αντιγόνου λευκοκυττάρων Ι μόρια (HLA-I). έχουν ταυτοποιηθεί ένας μεγάλος αριθμός ΤΑΑ και επιτόπων ΤΑΑ προερχόμενο [2], [3], με κάποιες από αυτές τις πρωτεΐνες και πεπτιδικά παράγωγα ήδη στις κλινικές μελέτες εμβολίων. Πρόσφατες εγκρίσεις του εμβολίου /φαρμάκου sipuleucel-T (Provenge) και ipilimumab (Yervoy) από την Υπηρεσία Τροφίμων και Φαρμάκων (FDA) αντιπροσωπεύουν ορόσημα ανοσοθεραπείας που βασίζεται στον τομέα της ανοσοθεραπείας του καρκίνου [4], [5]. Και μια κλινική μελέτη φάσης ΙΙΙ του πεπτιδίου gp100 για το μελάνωμα απέδωσε επίσης ιδιαίτερα ενθαρρυντικά αποτελέσματα [6]. Επιπλέον, η εργασία από δύο ανεξάρτητες ομάδες υπογράμμισε τη σημασία του όγκου-ειδικά αντιγόνα στην πρόκληση ανοσολογικών αποκρίσεων εναντίον ενός αναπτυσσόμενου όγκου [7], [8], αναμφίβολα εντείνοντας περαιτέρω τις προσπάθειες για να αναζητήσετε νέες καρκινικά αντιγόνα για την ανοσοθεραπεία του καρκίνου.

Παρά τα ενθαρρυντικά αποτελέσματα, η επιτυχία σε δοκιμές το εμβόλιο του καρκίνου στο σύνολό υπήρξε σποραδική [9] – [11]. Κατά τα τελευταία δύο χρόνια, έχουν αρκετές ΤΑΑ που εκφράζονται σε διάφορους τύπους νεοπλασιών έχουν εντοπιστεί [2], [3]. Ωστόσο, η πλειονότητα των αντιγόνων που περιγράφονται μέχρι τώρα δεν είναι απαραίτητα για την επιβίωση και την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων, με την εξαίρεση λίγων ΤΑΑ όπως τελομεράσης [12], survivin [13] και αντι-αποπτωτικά μέλη της οικογένειας Bcl-2 οικογένεια (Bcl-2, Bcl-X (L) και Mcl-2) [14]. Καρκινικά κύτταρα μπορεί επομένως να έχουν διαφύγει επιτήρηση από το ανοσοποιητικό σύστημα μέσω της απώλειας ή /και προς τα κάτω ρύθμιση αντιγόνων όγκου [15]. Κατά συνέπεια, η στόχευση ΤΑΑ που είναι απαραίτητες για την επιβίωση και την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων μπορεί να αποτρέψει την καλύτερη ανοσοεπιλογή παραλλαγών αντιγόνου ζημιών ως αποτέλεσμα του εμβολιασμού και να βελτιωθεί η αποτελεσματικότητα της ανοσοθεραπείας του καρκίνου [15], [16]. Συνεπώς, τέτοια ανοσογόνα αντιγόνα όγκου τα οποία προκαλούν την ελάχιστη ανοσολογική διαφυγή αντιπροσωπεύουν τις πιο ιδανικοί υποψήφιοι εμβολίων για την ανοσοθεραπεία του καρκίνου.

Ειδικά πλούσια σε ΑΤ αλληλουχία πρωτεΐνης δέσμευσης 1 (SATB1) είναι ένας πυρηνικός παράγοντας που λειτουργεί ως ένα παγκόσμιο οργανωτής χρωματίνης. Ρυθμίζει την γονιδιακή έκφραση με αναδίπλωση χρωματίνη σε περιοχές βρόχου, και πρόσδεση περιοχές DNA με τη δομή του δικτύου SATB1 [17]. SATB1 φάνηκε να υπερ-εκφράζεται σε επιθετικές κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού αλλά απουσιάζει ή μη ανιχνεύσιμη σε φυσιολογικούς και αθανατοποιημένα ανθρώπινα μαστικά επιθηλιακά κύτταρα, υποδηλώνοντας ένα ρόλο SATB1 στην οργάνωση επαναπρογραμματισμό της χρωματίνης και τελικά μεταγραφικό προφίλ των όγκων του μαστού για την προώθηση της ανάπτυξης και της μετάστασης [18] . Επιπλέον, υψηλότερα επίπεδα έκφρασης SATB1 συνδέθηκαν με πολλούς άλλους τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων του λάρυγγα καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων [19], ενδομητριοειδές καρκίνο του ενδομητρίου [20], ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [21], του καρκίνου του ορθού [22], δερματικό κακόηθες μελάνωμα [23 ], γαστρικό καρκίνο [24], [25], τον καρκίνο των ωοθηκών [26], του καρκίνου του προστάτη [27], ο καρκίνος του πνεύμονα [28] και του γλοιώματος [29]. Up-ρύθμιση του SATB1 σε αυτούς τους τύπους των καρκίνων μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση. Δεδομένου SATB1 είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη όγκου /επιβίωση και τη μετάσταση, το ανοσοποιητικό διαφυγή από την απώλεια ή προς τα κάτω ρύθμιση έκφρασης SATB1 μπορεί να βλάψει την ανάπτυξη παρατεταμένης κυττάρων όγκου ή /και της μετάστασης, καθιστώντας έτσι SATB1 έναν ελκυστικό στόχο για αντικαρκινική εμβόλια έναντι διαφόρων τύπων καρκίνων που εκφράζουν SATB1.

Στην έκθεση αυτή, περιγράφουμε την ταυτοποίηση των SATB1 που προέρχονται από Τ-κυττάρων επιτόπων για αναγνώριση Τ κυττάρων χρησιμοποιώντας μια προσέγγιση ανοσο-βιοπληροφορικής. Επιλέξαμε δώδεκα πεπτίδια που προβλέφθηκαν να συνδεθούν με το HLA-A * 02 μόριο. Αυτά συντέθηκαν και αξιολογήθηκαν

in vitro

για την ικανότητά τους να διεγείρουν τα Τ κύτταρα σε ΜΚΠΑ από υγιή άτομα και /ή ασθενείς με καρκίνο βασίζεται σε ιντερφερόνη-γ (ΙΡΝ-γ) απελευθέρωσης. Ένα από αυτά τα πεπτίδια, SATB1

565-574, βρέθηκε να επάγει ΙΡΝ-γ απελευθέρωσης σε περιφερικά Τ κύτταρα από υγιή άτομα και σε ασθενείς με καρκίνο. Σημαντικά, SATB1

565-574-ειδικά Τ κύτταρα ήταν σε θέση να αναγνωρίσει και να σκοτώσει HLA-A * 02

+, SATB1-κύτταρα που εκφράζουν όγκου σε ένα HLA-Ι-εξαρτώμενο τρόπο. Αυτά τα αποτελέσματα αποδεικνύουν την εγκυρότητα της προσέγγισης ανοσο-βιοπληροφορική και προτείνουν SATB1

565-574 μπορεί να αντιπροσωπεύει ένα νέο όγκο-ειδικό επιτόπιο για ανοσοθεραπεία του καρκίνου.

Υλικά και Μέθοδοι

υγιείς δότες και Καρκινοπαθών

HLA-A * 02

+ προστάτη ή των ωοθηκών τους ασθενείς και δέκα HLA-A * 02

+ υγιή άτομα εγγράφηκαν στη μελέτη αυτή μετά λήφθηκε γραπτή συγκατάθεση. Όλα τα πρωτόκολλα έχουν εγκριθεί από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review (IRB) στο Baylor College of Medicine πριν από την έναρξη των σπουδών. 20 ml περιφερικού αίματος ελήφθησαν από κάθε άτομο, και μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) απομονώθηκαν με φυγοκέντρηση βαθμίδωσης πυκνότητας με χρήση Lymphoprep (Nycomed Pharma AS? Όσλο, Νορβηγία). Προσφάτως απομονωθέντα PBMCs κρυοσυντηρήθηκαν για μελλοντική χρήση σε 1 mL κατάψυξη μέσο που περιέχει 90% σουλφοξείδιο FCS και 10% διμεθυλο (DMSO) στους -140 ° C. HLA-A * 02 έκφραση σε ΜΚΠΑ που λαμβάνονται από ασθενείς με καρκίνο και σε υγιή άτομα επαληθεύθηκε με κυτταρομετρία ροής με FITC-επισημασμένο ΗΙΑ-Α * 02 mAb ΒΒ7.2 (BD Pharmingen? San Diego, CA, USA).

κυτταρικές γραμμές

Όλες οι κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού (MCF-7, CAMA-1, MDA-MB-134VI, MDA-MB-175VII, MDA-MB-361, DU4475, MDA-MB-231, MDA -ΜΒ-436, MDA-MB-453, ΜϋΑ-ΜΒ-468), κύτταρα Τ2 (ένα HLA-A * 02

+ ανεπαρκές ΤΑΡ κυτταρική γραμμή), κυτταρικές σειρές καρκίνου του προστάτη (PC3, LNCaP και DU145), καρκίνο ωοθηκών κυτταρική γραμμή Ovcar-3 και λέμφωμα κυττάρων γραμμή Jeko-1 αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection (ATCC? Manassas, VA, USA). Μια κυτταρική σειρά καρκίνου των ωοθηκών Skov-1 [30], [31] ήταν ένα δώρο από τον Dr. Kunle Odunsi (Roswell Park Cancer Institute, ΝΥ, USA)? μια κυτταρική γραμμή λεμφώματος L1236 [32], [33] ήταν ένα δώρο από τον Δρ Αικατερίνη Μ πρόσδεσης (Baylor College of Medicine, Houston, USA). Όλες οι κυτταρικές γραμμές διατηρήθηκαν σε μέσο RPMI-1640 (Mediatech? Manassas, VA, USA), συμπληρωμένο με 10% FBS, 1% Ε-γλουταμίνη και 1% πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη

Πεπτίδια

Δώδεκα SATB1 προερχόμενα πεπτίδια (Πίνακας 1) είχαν προβλεφθεί χρησιμοποιώντας BIMAS (https://www-bimas.cit.nih.gov/molbio/hla_bind/), SYFPEITHI (https://www.syfpeithi.de/), και Rankpep (https://bio.dfci.harvard.edu/Tools/rankpep.html) με βάση την μοτίβο δέσμευσης HLA-A * 02. Επελέγησαν επίτοπους που προβλέφθηκαν από τουλάχιστον δύο από αυτούς τους αλγορίθμους για περαιτέρω δοκιμές. Τα πεπτίδια συντέθηκαν με μια μέθοδο στερεάς φάσης χρησιμοποιώντας συσκευή σύνθεσης πεπτιδίου (AApptec, Inc .; Louisville, ΚΥ, USA), καθαρίστηκε με χρωματογραφία υγρού υψηλής απόδοσης αντίστροφης φάσης και επικυρωμένες με φασματομετρία μάζας. Τα συντιθέμενα πεπτίδια διαλύθηκαν σε DMSO σε συγκέντρωση 10 mg /mL και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C μέχρι την περαιτέρω χρήση. Ένα πεπτίδιο (SATB1

544-552) εξαιρέθηκε από την μελέτη λόγω της δυσκολίας της σύνθεσης πεπτιδίων.

Η

In vitro

διέγερση πεπτιδίου-ειδικών Τ κυττάρων σε PBMCs

PBMCs (1 × 10

5 κύτταρα /φρεάτιο) είτε από υγιή άτομα ή ασθενείς με καρκίνο επωάστηκαν με πρότυπες συγκεντρώσεις πεπτιδίου 20 μg /mL ανά πεπτίδιο [34] – [37] σε 96-φρεατίων U-bottom μικροπλάκες (BD? Franklin Lakes, NJ, USA) σε 200 μι μέσου Τ-κυττάρων (TCM), που αποτελείται από RPMI 1640 (Mediatech? Manassas, VA, USA), 10% ανθρώπινο ορό ΑΒ (Valley Biomedical, Winchester , USA), 50 μΜ 2-μερκαπτοαιθανόλη, 100 IU /mL της ιντερλευκίνης-2 (IL-2), και διάλυμα μη απαραίτητο αμινοξύ 0,1 mM ΜΕΜ (Invitrogen? grand Island, ΝΥ, USA). Το ήμισυ του TCM απομακρύνθηκε και αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​TCM που περιείχε πεπτίδια (20 μg /mL) για κάθε 5 ημέρες. Μετά από 14 ημέρες καλλιέργειας, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και εξετάστηκαν για την ικανότητά τους να παράγουν IFN-γ σε απόκριση προς κύτταρα Τ2 (1 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο), τα οποία προ-φορτωμένο με είτε SATB1 πεπτίδιο (5 μg /mL) ή ένα πεπτίδιο ελέγχου (ένα δεσμευτικό άσχετο HLA-A * 02 EBV πεπτίδιο: GLCTLVAML) ως αρνητικός έλεγχος. Μετά από 18 ώρες επώασης, τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν, και IFN-γ απελευθέρωση προσδιορίστηκε με δοκιμασία ELISA.

Rapid Expansion Protocol (REP) για SATB1 Πεπτίδιο-ειδικά Τ κύτταρα

SATB1 πεπτιδίου-ειδική Τ κύτταρα επεκτάθηκαν με πρωτόκολλο ταχεία επέκταση (REP) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [38] με ελαφρά τροποποίηση. Εν συντομία, την ημέρα 0, 0,1-0,5 × 10

6 SATB1 πεπτιδίου-ειδικά Τ κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μία φιάλη Τ25 με 20 κ.εκ. RPMI-1640 συμπληρωμένο με 10% ανθρώπινο ορό ΑΒ, 50 μΜ 2-μερκαπτοαιθανόλη, 30 ng /mL αντίσωμα ΟΚΤ3 (Ortho Biotech? Bridgewater, NJ, USA) και 30 ng /αντίσωμα mL αντι-CD28 (R St. Louis, ΜΟ, USA) προστέθηκε ανά φρεάτιο. Η χρωματομετρική αντίδραση διεκόπη χρησιμοποιώντας 2Ν H

2SO4 και οι πλάκες αναγνώστηκαν στα 450 nm χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη πλάκας ELISA.

RNA Εκχύλιση και RT-PCR

εξαγωγή RNA και RT-PCR ήταν διεξάγεται όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [39]. Εν συντομία, ολικό RNA εκχυλίστηκε από τα καρκινικά κύτταρα με 1 ml αντιδραστηρίου ΤπζοΙ (Invitrogen? Carlsbad, CA, USA). Τρία μικρογραμμάρια του RNA μεταγράφηκε αντίστροφα σε cDNA σε 30 μΐ όγκο και 1 μΐ από κάθε cDNA χρησιμοποιήθηκε σε μετέπειτα αντίδραση PCR με ένα ζεύγος SATB1 ειδικών εκκινητών: Αστάρι 1:5′-TGCAAAGGTTGCAGCAACCAAAAGC-3 ‘? 5’-AACATGGATAATGTGGGGCGGCCT-3 ‘. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης: αστάρι 1:5’-TGATGACATCAAGAAGGTGGTGAAG-3 ‘? Primer 2:5’-TCCTTGGAGGCCATGTGGGCCAT-3 ‘. Η αντίδραση PCR διεξήχθη υπό τις ακόλουθες συνθήκες: 95 ° C για 1 λεπτό, 95 ° C για 40 s, 60 ° C για 30 s, 72 ° C για 40 s, συνολικά 40 κύκλους, 72 ° C για 5 λεπτά, και GAPDH διεξήχθη για 25 κύκλους. Ίσες ποσότητες των προϊόντων της PCR στη συνέχεια φορτώθηκαν και ανιχνεύθηκαν με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα.

Western Blot

εκχυλίσματα ολόκληρου κυττάρου παρασκευάστηκαν και επιλύονται σε πηκτές SDS-PAGE. Οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη PVDF (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) και επωάστηκαν περαιτέρω με το αντίσωμα SATB1 (BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Σύστημα LumiGlo Χημειοφωταυγές υπόστρωμα από KPL (Gaithersburg, MD, USA) χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση των πρωτεϊνών.

FACS Ανάλυση

Τα κύτταρα (0.5 × 10

6) βάφτηκαν με είτε FITC-anti -CD8, PE-Cy5-αντι-CD4 (αμφότερα από eBioscience, San Diego, CA, USA) ή ΡΙΤΟ-αντι-HLA-A * 02 (BD Pharmingen? San Diego, CA, USA) σε PBS που περιέχει 2% FBS επί πάγου για 30 λεπτά, και μετά πλύθηκαν δύο φορές σε PBS. Στη συνέχεια, τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 500 μΙ PBS και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μία μηχανή FACScalibur. Για DimerX HLA-A * 02: Ig χρώση, SATB1 αντιδραστικά CD8

+ Τ κύτταρα επωάστηκαν με καθαρισμένο HLA-A * 02: Ig διμερές (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) φορτωμένο με ένα δεδομένο πεπτίδιο, και στη συνέχεια χρωματίζονται με FITC IgG 1 αντι-ποντικού (BD Biosciences, San Jose, CA, USA). Η κυτταρομετρία ροής πραγματοποιήθηκε σε ένα μηχάνημα FACScalibur.

κυτταροτοξικότητας Δοκιμασία

SATB1 πεπτίδιο προερχόμενο-ειδικά Τ κύτταρα ελέγχθηκαν για κυτταροτοξικότητα εναντίον κυττάρων Τ2 φορτωμένα με πεπτίδιο, δύο HLA-A * 02

+ SATB1

+ καρκινικές κυτταρικές σειρές (Skov-1 και Jeko-1) και ένα HLA-A * 02 αρνητικός SATB1

+ κυτταρική σειρά PC3 ως αρνητικός έλεγχος από γαλακτικής αφυδρογονάσης (LDH) δοκιμασία (Promega? Madison, WI, USA). Η δοκιμασία διεξήχθη σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. απελευθέρωση LDH υπολογίστηκε με βάση τον ακόλουθο τύπο:.

Η κυτταροτοξικότητα (%) = (Πειραματική – τελεστή Αυθόρμητη – Target αυθόρμητη απελευθέρωση LDH) /(Target Μέγιστη – απελευθέρωση Target Αυθόρμητη LDH) × 100

η αυθόρμητη απελευθέρωση προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το υπερκείμενο των κυττάρων στόχων μόνα ή κύτταρα τελεστές και μόνο, και η μέγιστη απελευθέρωση προσδιορίστηκε με τη χρήση του υπερκειμένου των κυττάρων στόχων επωάζεται με ένα διάλυμα λύσης περιλαμβάνεται στο κιτ LDH.

Στατιστικά

t-test

Student χρησιμοποιήθηκε για να αναλύσει ποσοτικές διαφορές μεταξύ των πειραματικών φρεάτια και οι έλεγχοι σε δοκιμασίες ELISA. P & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

SATB1 mRNA εκφράζεται σε μια ποικιλία καρκίνων

Για να εξεταστεί κατά πόσον SATB1 εκφράζεται στα καρκινικά κύτταρα, η έκφραση του mRNA για SATB1 στο. διαφόρων τύπων κυττάρων όγκου πραγματοποιήθηκε με RT-PCR. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1, SATB1 το mRNA εκφράζεται έντονα σε μια ποικιλία καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού, καρκίνος των ωοθηκών, ο καρκίνος του προστάτη καθώς και λέμφωμα. Ενώ η κανονική κυτταρική γραμμή επιθηλιακού προστάτη, PNT1A δεν εξέφρασαν SATB1 mRNA.

Η έκφραση mRNA για SATB1 σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές προσδιορίστηκε με RT-PCR. Τα καρκίνου του μαστού κυτταρικές γραμμές (MCF-7, CAMA-1, MDA-MB-134VI, MDA-MB-175VII, MDA-MB-361, DU4475, MDA-MB-231, ΜϋΑ-ΜΒ-436, MDA-MB- 453 και MDA-MB-468), ο καρκίνος του προστάτη (PC) κυτταρικές σειρές (PC3, LNCaP και DU145), καρκίνο ωοθηκών (OC) κυτταρικές σειρές (Ovcar-3 και Skov-1), κυτταρικές σειρές λεμφώματος (Jeko-1 και L1236 ) και ένα φυσιολογικό προστάτη επιθηλιακή κυτταρική γραμμή PNT1A συμπεριλήφθηκαν ως μάρτυρας. Τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων πειραμάτων.

Η

Πρόκληση SATB1-πεπτίδιο που προέρχεται από-ειδικά CTL σε υγιείς δότες

Κατ ‘αρχάς, λάβαμε PBMCs από 10 HLA-A * 02

+ υγιείς δότες να καθοριστεί αν SATB1-αντιδρώσα πρόδρομοι των Τ κυττάρων ήταν παρόντες σε αυτά τα υγιή άτομα. Τα κύτταρα διεγέρθηκαν

in vitro

για δύο εβδομάδες με κάθε μία από τις SATB1 προερχόμενων πεπτίδια που περιέχουν HLA-A * 02-μοτίβο σύνδεσης (Πίνακας 1). Στο τέλος του πεπτιδίου διέγερση, τα υπερκείμενα από τις καλλιέργειες αναλύθηκαν με ELISA για την ανίχνευση ΙΡΝ-γ απελευθέρωση σε απόκριση σε κύτταρα Τ2 παλλόμενα με ή χωρίς αντίστοιχες πεπτίδια. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, σχεδόν το σύνολο των 11 SATB1 προερχόμενα πεπτίδια (10/11) ήταν ικανή να επάγει πεπτιδίου-ειδικές αποκρίσεις Τ κυττάρων σε τουλάχιστον ένα από τα υγιή άτομα. Ειδικότερα, το πεπτίδιο SATB1

565-574 επαγόμενη υψηλότερο επίπεδο απελευθέρωσης ΙΡΝ-γ (& gt? 900 pg /mL) σε 4 από τα 10 υγιή άτομα, υποδεικνύοντας υψηλή ανοσογονικότητα και το δυναμικό της στην επέκταση αντιγονο-ειδικών Τ κυττάρων σε υγιή άτομα.

η

Παρουσία SATB1 προερχόμενων πεπτιδίων ειδικών CTLs σε ασθενείς με καρκίνο

η ανάλυσή μας έδειξε ότι το πεπτίδιο-ειδικά Τ κύτταρα έναντι SATB1

565-574 βρέθηκαν σε ~ το 60% των υγιών ατόμων, μπορούμε επομένως αιτιολογημένη ότι οι πρόδρομοι CTL που μπορούσε να αναγνωρίσει αυτό το πεπτίδιο μπορεί επίσης να είναι άφθονο σε ΜΚΠΑ από ασθενείς με καρκίνο. Για να ελεγχθεί η υπόθεση μας, εξετάσαμε αν πεπτίδιο SATB1

565-574 θα μπορούσε να επάγει πεπτιδίου-ειδικά CTLs από PBMCs του HLA-A * 02

+ ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών. PBMCs από τρεις HLA-A ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών * 02

+ συλλέχθηκαν και διεγείρονται

in vitro

με πεπτίδιο SATB1

565-574. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, το πεπτίδιο SATB1

565-574 ήταν ικανό να επάγει ειδικά για πεπτίδια CTLs από ΜΚΠΑ ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών, υποδεικνύοντας ότι το πεπτίδιο είναι άκρως ανοσογόνο όχι μόνο σε υγιή άτομα αλλά επίσης και σε ασθενείς με καρκίνο. Προσδιορίσαμε επίσης το κατά πόσον αυτό το πεπτίδιο υποψήφιος θα μπορούσε να επάγει πεπτιδίου-ειδικά CTLs από PBMCs του HLA-A * 02 ασθενείς

+ καρκίνο του προστάτη. Όπως συνέβη και με τους ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών, το πεπτίδιο SATB1

565-574 ομοίως επάγεται πεπτιδίου-ειδικά CTLs από ΜΚΠΑ των ασθενών με καρκίνο του προστάτη 5, καθώς και (Πίνακας 3), υποδεικνύοντας πρόδρομοι CTL που αναγνωρίζουν αυτό το πεπτίδιο είναι άφθονα σε PBMCs από καρκίνο ασθενών.

Η

SATB1-πεπτίδιο που προέρχεται από την επαγόμενη από CD8

+ Τ κυττάρων που εξαρτάται απαντήσεις

Για την περαιτέρω ανάλυση SATB1

565-574 πεπτίδιο-ειδικά Τ κύτταρα, είμαστε δίπλα επεκτάθηκε SATB1

565-574 πεπτιδίου-ειδικών Τ κυττάρων που προσδιορίζονται στους πίνακες 2 και 3, προκειμένου να ληφθεί ένας επαρκής αριθμός αυτών των κυττάρων. Για το σκοπό αυτό, εκτελέσαμε πειράματα τιτλοδότησης πεπτιδίου για να καθοριστεί η βέλτιστη συγκέντρωση πεπτιδίου για φόρτωση των κυττάρων Τ2 για αναγνώριση Τ κυττάρων. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α, τα κύτταρα Τ2 θα μπορούσαν να ευαισθητοποιούνται με πεπτίδιο SATB1

565-574, αλλά όχι ένα πεπτίδιο ΕΒν ελέγχου για αναγνώριση Τ κυττάρων σε συγκέντρωση 0,08 μg /mL, και οι θέσεις σύνδεσης των HLA-A * 02 μόρια στην Τ2 κύτταρα κατέστησαν κορεσμένες σε 5 μg /mL. Η περαιτέρω αύξηση των συγκεντρώσεων των SATB1

565-574 απέτυχε να ενισχύσει την παραγωγή της IFN-γ. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιείται με συνέπεια την συγκέντρωση πεπτιδίου 5 μg /mL για τα κύτταρα Τ2 προφόρτισης σε δοκιμασίες ELISA μας. Τα διεσταλμένα Τ κύτταρα διατηρήθηκαν αντιγόνου ειδικότητα και εκκρίνονται σημαντικές ποσότητες ΙΡΝ-γ μετά από διέγερση με κύτταρα Τ2 παλλόμενα με τα αντίστοιχα πεπτίδια, αλλά όχι με ένα πεπτίδιο ΕΒν ελέγχου (Σχήματα 2Α και Β). Για να ληφθεί άμεση απόδειξη για τα υποσύνολα των ανταποκρίνεται Τ κυττάρων απεικονίζεται στο Σχήμα 2Β, οι διογκωμένες SATB1 πεπτίδιο-αντιδραστικά PBMCs είχαν εξαντληθεί είτε CD4

+ Τ κύτταρα (Σχήμα 2C) ή CD8

+ Τ κυττάρων (Σχήμα 2D ) πριν από την επώαση με πεπτίδια για προσδιορισμούς ELISA. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Ε, CD8

+ Τ κύτταρα, όχι CD4

+ Τ κύτταρα (Σχήμα 2F), που ελήφθη από επεκτάθηκε PBMCs ανταποκρίθηκαν στην SATB1

565-574 παλμικά κύτταρα Τ2, υποδεικνύοντας ότι η Τ κυτταρική απόκριση που προκαλείται από SATB1

565-574 εξαρτιόταν από CD8

+ Τ κύτταρα. Επιπλέον, dimerX HLA-A * 02: Ig χρώση (Σχήμα 2G και Η) και ΙΡΝ-γ ενδοκυτταρική χρώση (Σχήμα S1) έδειξαν επίσης ότι SATB1

565-574 επάγεται πεπτίδιο ειδικό, HLA-A * 02 περιορίζεται CD8

+ κυττάρων που εξαρτώνται από αποκρίσεις Τ.

επάγεται CD8

+ κυττάρων Τ που εξαρτώνται από αποκρίσεις. Η αναγνώριση των κυττάρων Τ2 προ-φορτωμένο με τιτλοποιείται συγκεντρώσεις πεπτιδίων (0-20 μg /ml) με διευρυμένη SATB1

565-574-ειδικών Τ κυττάρων από υγιή δότη # 1 δοκιμάστηκε με ELISA δοκιμασίας (Α). Οι διευρυμένες SATB1 αντιδραστικά PBMCs (Β) συν-επωάστηκαν με τα κύτταρα Τ2 (1 × 10

4 κύτταρα /φρεάτιο) μόνο σε πλήρες μέσο (CM), ή με κύτταρα Τ2 προ-φορτωμένο με είτε SATB1

565 -574 (5 μg /mL) ή ένα πεπτίδιο ΕΒν ελέγχου ως αρνητικός έλεγχος. Τα κύτταρα επωάστηκαν για 18-24 ώρες, η έκκριση IFN-γ στο υπερκείμενο προσδιορίστηκε με ανάλυση ELISA. SATB1-αντιδρώσα PBMCs εξαντλημένο του CD4

+ Τ κύτταρα (C) και SATB1 αντιδραστική PBMCs εξαντλημένο από CD8

+ Τ κύτταρα (D) επιβεβαιώθηκαν με κυτταρομετρία ροής. Οι αναγνωρίσεις των κυττάρων Τ2 παλλόμενα με SATB1

565-574 από SATB1 αντιδραστική PBMCs εξαντλημένο είτε CD4

+ Τ κύτταρα (Ε) ή CD8

+ Τ κύτταρα (F) προσδιορίστηκαν με ELISA. SATB1 αντιδραστικά CD8

+ Τ κύτταρα επωάστηκαν με καθαρισμένο HLA-A2: Ig διμερές φορτωμένα με πεπτίδιο ΕΒν ελέγχου (G) ή με το πεπτίδιο SATB1

565-574 (H), και στη συνέχεια χρωματίστηκαν με FITC αντι-ποντικού IgG1. Τα κύτταρα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μία μηχανή FACScalibur. Τα δεδομένα (από Α, Β, Ε και ΣΤ) απεικονίζονται ως μέσοι ± SD. Τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τουλάχιστον τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01, ***

P

& lt? 0,001 έναντι του ελέγχου (Τ2 κύτταρα μόνα τους ή Τ2 κύτταρα πάλλονται με ένα πεπτίδιο EBV ελέγχου).

η

Αναγνώριση και τη θανάτωση των καρκινικών κυττάρων από το SATB1-πεπτίδιο που προέρχεται από ειδικά CD8

+ Τ κύτταρα σε ένα HLA-Ι περιορισμένο τρόπο

με βάση την τα αποτελέσματά μας μέχρι τώρα, SATB1

565-574 ειδικό CD8

+ Τ κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν σε επόμενα πειράματα. Για να καθοριστεί εάν SATB1 πεπτίδιο προερχόμενο-ειδικά Τ κύτταρα ήταν σε θέση να αναγνωρίσει και να σκοτώσει HLA-A * 02

+, SATB1 εκφράζουν τα καρκινικά κύτταρα, χρησιμοποιήσαμε ένα HLA-A * 02

– SATB1 mRNA θετικού καρκίνου του προστάτη PC3 κυτταρική γραμμή (ως αρνητικός έλεγχος) και * 02

+ mRNA SATB1 θετικού καρκίνου κυτταρικές σειρές πέντε HLA-A. Η έκφραση του mRNA SATB1 σε αυτές τις 6 κυτταρικές σειρές προηγουμένως εξετάστηκε με RT-PCR (Σχήμα 1) και HLA-A * 02 έκφραση επιβεβαιώθηκε με κυτταρομετρία ροής (Εικόνα 3Α). Επιπλέον, ελέγξαμε επίσης την έκφραση της πρωτεΐνης SATB1 μεταξύ αυτών των κυτταρικών σειρών (Σχήμα 3Β), και διαπιστώθηκε ότι όλοι οι καρκινικές κυτταρικές γραμμές εξέφρασαν SATB1 πρωτεΐνη εκτός PC3 και Ovcar-3. Ως εκ τούτου, Ovcar-3 θεωρείται επίσης ως αρνητικός έλεγχος. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Α, SATB1

565-574-ειδικά Τ κύτταρα θα μπορούσαν να αναγνωρίσουν * 02

+ SATB1 κύτταρα που εκφράζουν HLA-A Skov-1 και Jeko-1, αλλά όχι PC3 κύτταρα ή Ovcar-3. Τα άλλα δύο HLA-A * 02

+ SATB1 εκφράζουν καρκινικές κυτταρικές σειρές (CAMA-1, MDA ΜΒ-231-) θα μπορούσε να αναγνωριστεί μόνο όταν είχαν προ-επεξεργασμένα με IFN-γ (Εικόνα 4Β), υποδεικνύοντας ότι είτε ενισχυμένη HLA-A * 02 έκφραση στις επιφάνειες των κυττάρων (Εικόνα S2) ή επαγωγή ανοσοπρωτεασώματα από την ΙΡΝ-γ, μπορεί να διευκολύνει την παρουσίαση της σωστής επιτόπου στις κυτταρικές επιφάνειες για έλεγχο των Τ κυττάρων. Αντίθετα, τα φυσιολογικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων των PNT1A και αυτόλογα PBMCs, δεν θα μπορούσε να αναγνωριστεί από SATB1

565-574-ειδικά Τ κύτταρα (Σχήμα 4Α). Επιπλέον, SATB1

565-574-ειδικών Τ κυττάρων δεν αναγνωρίζουν in vitro διαχωριζόμενες Th υποσύνολα, συμπεριλαμβανομένων των Th1, Th2 και κυττάρων Th17 (Σχήμα S3).

(Α) Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με FITC -αντι-HLA-A * 02 σε PBS που περιείχε 2% FBS. Στη συνέχεια, τα κύτταρα πλύθηκαν και επανα-αιωρήθηκαν σε PBS και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μία μηχανή FACScalibur. (Β) Η έκφραση της πρωτεΐνης SATB1 σε διάφορα κύτταρα όγκου προσδιορίστηκε με κηλίδα western. Η ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.

Η

(Α) SATB1

565-574-ειδικών Τ κυττάρων από υγιή δότη # 1 καλλιεργήθηκαν σε μέσο μόνα ή συν-επωάστηκαν με διάφορους τύπους όγκων κύτταρα καθώς και τα φυσιολογικά κύτταρα (PNT1A και PBMC)? (Β) Τα κύτταρα του όγκου υπέστησαν προαγωγή με ή χωρίς ΙΡΝ-γ (10 ng /mL) για 48 ώρες πριν από την επώαση με SATB1

565-574-ειδικών Τ κυττάρων. SATB1

565-574-ειδικά Τ κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μέσο μόνο ως αρνητικός έλεγχος (κόκκινο στήλη)? Για τον αποκλεισμό HLA-εξαρτώμενες αποκρίσεις, είτε αντι-HLA-Ι mAb (W6 /32) ή HLA-II mAb προστέθηκε σε κυτταρικές καλλιέργειες κατά την διάρκεια της επώασης του SATB1

565-574-ειδικών Τ κυττάρων με Skov-1 (C) ή Jeko-1 κύτταρα (D). Τα κύτταρα επωάστηκαν για 18 -24 ώρες, η έκκριση IFN-γ στο υπερκείμενο προσδιορίστηκε με ανάλυση ELISA. SATB1

565-574-ειδικά CD8

+ Τ κύτταρα ελέγχθηκαν για κυτταροτοξικότητα εναντίον κυττάρων Τ2 παλλόμενα με ή χωρίς πεπτίδια (Ε), Skov-1 (F) και Jeko-1 (G) με τον προσδιορισμό LDH. HLA-A * 02 αρνητικά κύτταρα PC3 χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικός μάρτυρας στην δοκιμασία LDH. Τα δεδομένα από μια-G χαράσσεται ως μέσο ± SD. Τα αποτελέσματα είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. *

P

& lt? 0,05, **

P

& lt? 0,01, ***

P

& lt?. 0.001 έναντι ελέγχου

Η

Για να προσδιορίσετε αν η αναγνώριση των καρκινικών κυττάρων από SATB1

565-574 ειδικών CD8

+ Τ κύτταρα ήταν HLA-Ι περιορισμένη, είμαστε συν-καλλιεργημένα SATB1

565-574-ειδικά Τ κύτταρα είτε με Skov- 1 ή Jeko-1 κύτταρα παρουσία είτε αντι-HLA-Ι mAb (W6 /32) ή αντι-HLA-II mAb. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 4C και D, αποκρίσεις Τ κυττάρου παρεμποδίστηκε πλήρως με την προσθήκη του αντι-HLA-Ι mAb, αλλά όχι αντι-HLA-ΙΙ (HLA-DP mAb), γεγονός που υποδηλώνει ότι η αναγνώριση των κυττάρων του όγκου με SATB1

565-574 ειδικών CD8

+ Τ κυττάρων είναι HLA-Ι περιορισμένη.

για να εξετασθεί περαιτέρω κατά πόσον SATB1

565-574 ειδικών CD8

+ Τ κύτταρα ήταν σε θέση να σκοτώσει HLA-A * 02

+, SATB1 εκφράζουν τα καρκινικά κύτταρα, πραγματοποιήσαμε προσδιορισμούς κυτταροτοξικότητας. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4Ε, SATB1

565-574-ειδικά Τ κύτταρα θανατώνονται κύτταρα Τ2 παλλόμενα με SATB1

565-574, αλλά όχι τα κύτταρα Τ2 μόνο ή σε αυτούς πάλλονται με ένα πεπτίδιο EBV ελέγχου. Σημαντικά, SATB1

565-574-ειδικά Τ κύτταρα ήταν ικανά να σκοτώσουν HLA-A * 02

+, SATB1 εκφράζουν Skov-1 και Jeko-1 κύτταρα, αλλά όχι το HLA-A * 02

– PC3 κύτταρα (Σχήμα 4F και G). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι SATB1

565-574-ειδικά Τ κύτταρα αναγνωρίζουν ένα επιτόπιο Τ κυττάρων που ενδογενώς επεξεργάζονται και παρουσιάζονται από τα καρκινικά κύτταρα.

Συζήτηση

Είναι καθιερωμένη ότι CD8

+ Τ κύτταρα παίζουν έναν κρίσιμο ρόλο στον έλεγχο της ανάπτυξης και εξέλιξης του όγκου. επίτοπα πεπτιδίων που προέρχονται από ΤΑΑ μπορούν να αναγνωριστούν ως αντιγόνα από τα Τ κύτταρα στο πλαίσιο των μορίων MHC-I [40], [41]. Ταυτοποίηση ιδανικό ΤΑΑ και πεπτιδίων τους που αναγνωρίζονται από τα Τ κύτταρα είναι απαραίτητα για την ανάπτυξη αποτελεσματικών εμβολίων καρκίνου. Ιδανικό ΤΑΑ όπως αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών [14], τελομεράση [12] και σουρβιβίνη [13], που είναι υποχρεωτικές για την ανάπτυξη του όγκου /την επιβίωση, μπορούν να αντιπροσωπεύουν στόχους για βέλτιστη εμβόλιο μεσολάβηση ανοσοθεραπεία του καρκίνου. SATB1 εκφράζεται έντονα σε πολλούς τύπους ανθρώπινων καρκίνων και προς τα πάνω ρύθμιση της έκφρασης SATB1 είναι απαραίτητη για την επιβίωση του όγκου και τη μετάσταση, έτσι SATB1 αντιπροσωπεύει ένα από τέτοια ιδανική ΤΑΑ.

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να προσδιοριστούν HLA -Α * 02 δεσμευτικός SATB1 προερχόμενο επιτόπια που αναγνωρίζονται από CD8

+ Τ κύτταρα σε PBMCs από υγιή άτομα και ασθενείς με καρκίνο. Δώδεκα SATB1 προερχόμενα πεπτίδια προβλεφθεί χρησιμοποιώντας BIMAS, SYFPEITHI, και Rankpep με βάση το μοτίβο δέσμευσης HLA-A * 02. Επελέγησαν πεπτίδια που προβλέφθηκαν από τουλάχιστον 2 από τα 3 προγράμματα για περαιτέρω δοκιμές για την ικανότητά τους να διεγείρουν PBMCs από υγιή άτομα και /ή ασθενείς με καρκίνο. Περαιτέρω μελέτες έδειξαν ότι 10 από τους 11 συντίθεται SATB1 προερχόμενα πεπτίδια ήταν ικανά να επάγουν πεπτιδίου-ειδικές αποκρίσεις Τ κυττάρων σε τουλάχιστον ένα από τα 10 υγιή άτομα. Συγκεκριμένα, SATB1

565-574 βρέθηκε ότι επάγει υψηλότερο επίπεδο IFN-γ απελευθέρωσης (& gt? 900 pg /mL) σε 4 από τα 10 υγιή άτομα, υποδεικνύοντας ότι αυτό το πεπτίδιο μπορεί να είναι ανοσογόνα και δυνητικά μπορεί να εκτείνεται αντιγόνου ειδικά Τ κύτταρα σε υγιή άτομα. Επιπλέον, SATB1

565-574 επάγεται συχνά ειδικές αποκρίσεις Τ κυττάρων σε ΜΚΠΑ ασθενών με καρκίνο των ωοθηκών καθώς και σε ΜΚΠΑ από ασθενείς με καρκίνο του προστάτη. Σημαντικά, SATB1

565-574 πεπτιδίου-ειδικών Τ κυττάρων αναγνωρίζονται και σκότωσε HLA-A * 02

+ SATB1 εκφράζουν Jeko-1, κύτταρα Skov-1 καθώς επίσης και IFN-γ-θεραπεία καρκίνου του μαστού κυτταρικές γραμμές ( CAMA-1 και MDA-MB-231), γεγονός που υποδηλώνει αυτό το πεπτίδιο με φυσικό τρόπο σε επεξεργασία από τα καρκινικά κύτταρα.

SATB1 είναι ένας παράγοντας παγκόσμιας οργάνωσης της χρωματίνης και μεταγραφή και έχει αναδειχθεί ως ένα βασικό παράγοντα ενσωμάτωσης ανώτερης τάξης χρωματίνης αρχιτεκτονική με γονιδιακής ρύθμισης [42]. SATB1 προάγει την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση με τον επαναπρογραμματισμό οργάνωση της χρωματίνης και της μεταγραφής προφίλ, και εκφράζεται έντονα σε μια ποικιλία καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού [18], του λάρυγγα καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων [19], ενδομητριοειδές καρκίνο του ενδομητρίου [20], ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [21] , του ορθού καρκίνος [22], δερματικό κακόηθες μελάνωμα [23], γαστρικού καρκίνου [24], [25], τον καρκίνο των ωοθηκών [26], του καρκίνου του προστάτη [27], ο καρκίνος του πνεύμονα [28] και του γλοιώματος [29]. Σε καρκινικά κύτταρα με υψηλά επίπεδα SATB1, τα γονίδια που προάγουν την εξέλιξη του όγκου και της μετάστασης ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω, ενώ είχαν κατασταλεί γονίδια που αναστέλλουν μετάσταση όγκου [17]? ενώ φίμωση του SATB1 μείωσε σημαντικά τον επεμβατική και μεταστατικό ικανότητα των καρκινικών κυττάρων [43].