Αφηρημένο

Πολλές μελέτες αναδεικνύουν το ρόλο των δεικτών φλεγμονής στην θρόμβωση όσο και στον καρκίνο. Ωστόσο, σε συνδυασμό ρόλο τους στον καρκίνο που σχετίζεται με εν τω βάθει φλεβική θρόμβωση (DVT) και των μοριακών μηχανισμών που εμπλέκονται στην παθοφυσιολογία της, χρειάζεται περαιτέρω έρευνες. Στην παρούσα μελέτη, η C-αντιδρώσα πρωτεΐνη, ιντερλευκίνη-6 (IL-6), Παράγοντα Νέκρωσης Όγκου-α (TNF-α), ιντερλευκίνη-1 (IL-1β), μεταλλοπρωτεάσες-9 μήτρας (ΜΜΡ-9), αγγειακές ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF), παράγοντα ιστού (TF), ινωδογόνο και διαλυτές Ρ-σελεκτίνης, αναλύθηκαν στο πλάσμα και σε δείγματα μονοκυττάρων από 385 ασθενείς με καρκίνο, από τους οποίους 64 επηρεάστηκαν ταυτόχρονα με DVT (+). Όλοι αυτοί οι δείκτες ήταν υψηλότερες σε ασθενείς με καρκίνο DVT + σε σύγκριση με αυτούς DVT-. Κατά συνέπεια, σημαντικά υψηλότερη δραστηριότητα NF-kB παρατηρήθηκε σε ασθενείς με καρκίνο DVT + από DVT-. Παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ των δεδομένων που λαμβάνονται στα δείγματα πλάσματος και μονοκυττάρων. NF-kB αναστολή συσχετίστηκε με μειωμένα επίπεδα όλων των μορίων στα δύο καρκίνο DVT + και DVT-. Για να καταδειχθεί περαιτέρω η εμπλοκή της ενεργοποίησης του ΝΡ-κΒ από τους προαναφερθέντες μόρια, υποβάλλαμε σε αγωγή μονοκυττάρων που προέρχονται από υγιείς δότες με πισίνα ορών από ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς DVT. Αυτά που πειραμάτων περαιτέρω προτείνουν το σημαντικό ρόλο ορισμένων μορίων, που ρυθμίζεται από NF-kB, και ανιχνεύονται σε ασθενείς με καρκίνο με DVT. Τα δεδομένα μας υποστηρίζουν την ιδέα ότι NF-kB μπορούν να θεωρηθούν ως θεραπευτικός στόχος για τους ασθενείς με καρκίνο, ειδικά εκείνοι περιπλέκεται από DVT. Η θεραπεία με αναστολείς του NF-kB μπορεί να αντιπροσωπεύει μια πιθανή στρατηγική για την πρόληψη ή τη μείωση του κινδύνου της DVT σε ασθενείς με καρκίνο

Παράθεση:. Malaponte G, Signorelli SS, Bevelacqua V, Polesel J, Taborelli Μ, Guarneri C, et al. (2015) αυξημένα επίπεδα της NF-kB που εξαρτώνται Μαρκαδόροι στον Καρκίνο-Associated τω βάθει φλεβικής θρόμβωσης. PLoS ONE 10 (7): e0132496. doi: 10.1371 /journal.pone.0132496

Επιμέλεια: Yves St-Pierre, INRS, Καναδάς

Ελήφθη: 14 Μάρτη 2015? Αποδεκτές: 15 Ιουν 2015? Δημοσιεύθηκε: 20 του Ιούλη 2015

Copyright: © 2015 Malaponte et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι ελεύθερα διαθέσιμο στο χαρτί και σε υποστηρικτικά αρχεία πληροφοριών

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο σχετικός κίνδυνος ανάπτυξης τω βάθει φλεβική θρόμβωση (DVT) είναι περίπου επτά φορές υψηλότερη σε ασθενείς με καρκίνο [1,2] προτείνοντας μια αμφίδρομη σχέση μεταξύ θρόμβωσης και φλεγμονής στον καρκίνο. Η χημειοθεραπεία είναι ένας από τους πιο σημαντικούς παράγοντες κινδύνου για αυξημένο κίνδυνο DVT [3,4]. Thrombosis and καρκίνος συνδέονται με πολλές παθοφυσιολογικών μηχανισμών που είναι γενικά σχετίζονται με την απόκριση του ξενιστή σε καρκίνο. Αυτοί οι μηχανισμοί περιλαμβάνουν την ενεργοποίηση των συστημάτων πήξης και ινωδολυτικών, αντίδραση οξείας φάσης, φλεγμονή, και την παραγωγή κυτοκίνης [5]. Η συστηματική ενεργοποίηση της πήξης που εμφανίζεται σε κακοήθεια είναι καλά γνωστή και έχει περιγραφεί με την ονομασία του συνδρόμου Είδη του [6,7]. Η συστημική φλεγμονή είναι ένας ισχυρός προθρομβωτικών ερέθισμα που οδηγεί σε μία ανοδική ρύθμιση της προπηκτικής παραγόντων, προς τα κάτω ρύθμιση των αντιπηκτικών και η αναστολή της ινωδολυτική δράση [8,9]. Η χρόνια φλεγμονή σχετίζεται συχνά με αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του [10,11]. Rudolf Virchow κατέδειξε την παρουσία λευκοκυττάρων σε όγκους και πρότεινε ότι οι όγκοι προκύπτουν σε θέσεις χρόνιας φλεγμονής και ότι φλεγμονώδεις διαμεσολαβητές, ενισχύοντας τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, μπορεί να χρησιμεύσει ως υποκινητές όγκου [12]. Τα φλεγμονώδη κύτταρα, κυτοκίνες σε κακοήθεις όγκους επηρεάζει το μικροπεριβάλλον στρωματικών, γεγονός που υποδηλώνει ότι η φλεγμονή και ο καρκίνος μπορεί να συσχετίζονται με τη αγγειογενετική διαδικασία [13-15]. Κατά τη διάρκεια της φλεγμονής, η αγγειογένεση συχνά συμπίπτει με την διήθηση των φλεγμονωδών κυττάρων όπως ουδετερόφιλα, μονοκύτταρα /μακροφάγα, τα οποία εκκρίνουν κυτοκίνες και αυξητικούς παράγοντες [13,16,17]. Αποδείχθηκε ότι πολυάριθμα μεσολαβητές παίζουν έναν κρίσιμο ρόλο στη φλεγμονή, καρκίνο και θρόμβωση όπως η C-αντιδρώσα πρωτεΐνη, ιντερλευκίνη-6 (IL-6) και παράγοντα νέκρωσης όγκων-α (TNF-α), ιντερλευκίνη-1β (IL-1β ) (δείκτες φλεγμονής), μεταλλοπρωτεάσες-9 μήτρας (ΜΜΡ-9), αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) (που αντανακλά την αγγειογένεση), παράγοντα ιστού (TF) και του ινωδογόνου (δείκτες πήξης) και διαλυτά Ρ-σελεκτίνης (σήμανση ενεργοποίησης αιμοπεταλίων) . Φλεγμονώδεις κυτοκίνες ρυθμίζουν διάφορες αγγειογόνους παράγοντες, όπως ο VEGF και ΜΜΡ-9, σε αγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα, τα καρκινικά κύτταρα, και μονοκύτταρα /μακροφάγα [18-35]. Τα μονοκύτταρα συμμετέχουν στις παθολογικές διαδικασίες της φλεγμονής και θρόμβωσης μέσω της ικανότητάς τους να συνθέτουν TF και που εκφράζουν Ρ-σελεκτίνη μετά από διέγερση [36-38]. παράγοντα ιστού (TF), η οποία είναι η κύρια κυτταρική εκκινητή της πήξης του αίματος, συμβάλλει στον όγκο που σχετίζονται με παθολογικές διεργασίες, όπως υπερπηκτικότητα, ανάπτυξη όγκου, αγγειογένεση, μετάσταση και [39-40]. Περιέργως, όλα αυτά τα μόρια ρυθμίζονται από ΝΡ-κΒ [41,42]. Αυτή είναι μια επαγώγιμη παράγοντας μεταγραφής που ελέγχεται από τις εν σειρά ενεργοποίησης σήματος. NF-kB ελέγχει ένα αριθμό γονιδίων που εμπλέκονται σε φλεγμονώδεις αποκρίσεις, την εξέλιξη του κυτταρικού κύκλου, η αναστολή της απόπτωσης και κυτταρικής προσκόλλησης, προωθώντας έτσι την αγγειογένεση των όγκων, καρκινογένεση και της εξέλιξης του καρκίνου. Πρόληψη και διαχείριση DVT σε ασθενείς με καρκίνο μπορούν να επηρεάσουν σημαντικά τη θεραπεία του ασθενούς, την πρόγνωση και την ποιότητα ζωής. Ως εκ τούτου, υπάρχει μια ανάγκη για την ταυτοποίηση νέων βιο-μοριακών δεικτών που μπορούν να αναγνωρίσουν τους ασθενείς με καρκίνο με υψηλό κίνδυνο DVT. Παρά το γεγονός ότι αρκετές μελέτες διερευνήθηκε σχετικά με το ρόλο των διαφόρων βιο-δείκτες ή /και κυτοκινών σε καρκίνο και /ή θρόμβωση, καμία από τις προηγούμενες μελέτες έχουν αναλύσει εντελώς αυτά τα ΝΡ-κΒ-ρυθμίζονται δεικτών που με τη σειρά τους ρυθμίζουν το ίδιο NF-kB σε ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς θρόμβωση. Η ταυτοποίηση αυτών των δεικτών μπορούν να αναγνωρίζουν NF-kB ως ένα ελκυστικό στόχο για θεραπευτική παρέμβαση.

Στην παρούσα μελέτη ένα κλάσμα του NF-kB ρυθμιζόμενες δείκτες έχουν μετρηθεί σε περιφερικό αίμα από ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς DVT . Επιπλέον, τα αποτελέσματα της dehydroxymethylepoxyquinomicin (DHMEQ), ένα ΝΡ-κΒ αναστολέα [43,44], αξιολογήθηκαν για να αποδειχθεί η άμεση ρόλο των NF-kB ρυθμιζόμενες δεικτών σε ανάπτυξη θρόμβωσης μεταξύ ασθενών με καρκίνο. Επιπλέον, ο προσδιορισμός της βιομοριακής δείκτες της DVT σε ασθενείς με καρκίνο μπορεί να υποστηρίξει τη σημασία της φαρμακολογικής θρομβοπροφύλαξης.

Μέθοδοι

πληθυσμός Μελέτη

Περιφερειακά δείγματα αίματος από τρεις ομάδες των ατόμων που ήταν συλλέγονται τα τελευταία 10 χρόνια στο Τμήμα Βιο-ιατρικών Επιστημών, Πανεπιστήμιο της Κατάνια, Κατάνια, Ιταλία. Οι ομάδες αυτές περιλαμβάνονται: 64 ασθενείς με καρκίνο με ταυτόχρονη DVT (DVT +) (μέση ηλικία 64 ± 10 έτη)? 321 ασθενείς με καρκίνο χωρίς ιστορικό DVT (DVT-) (μέση ηλικία 62 ± 9 έτη)? 100 υγιείς μάρτυρες (μέση ηλικία 61 ± 12 έτη), σε συνδυασμό με το φύλο και την ηλικία (Πίνακας 1). Οι ασθενείς διαγνώστηκαν ότι επηρεάζονται από την DVT με βάση την χωρίς συμπίεση μιας βαθιάς φλέβας των κάτω άκρων με ανιχνευτή Doppler ή /και η με την παρουσία του ηχογόνου σχήμα σε μια εν τω βάθει φλέβες των κάτω άκρων. ασθενείς DVT προσλήφθηκαν κατά τη στιγμή της εμφάνισης DVT. Περιφερικό δείγματα αίματος από αυτούς τους ασθενείς ελήφθησαν πριν από την ανάληψη οποιασδήποτε συγκεκριμένης αντιθρομβωτικό φάρμακο. Λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με τη μελέτη δόθηκαν στους ασθενείς. Όλοι οι ασθενείς έδωσαν γραπτή συγκατάθεση πριν από την εγγραφή. Η μελέτη μας εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου της Κατάνια. Όλες οι διαδικασίες διεξήχθησαν σύμφωνα με τις αρχές που περιγράφονται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι. Όλα τα άτομα σε αυτό το χειρόγραφο έχουν δώσει τη γραπτή συγκατάθεσή τους (όπως περιγράφεται στο έντυπο συγκατάθεσης PLoS) να συμμετέχουν σε αυτή τη μελέτη. εξαιρέθηκαν ασθενείς που λαμβάνουν θεραπεία με αντι-φλεγμονώδη φάρμακα, στατίνες και αντικαρκινικές ενώσεις όπως, bevacizubam, θαλιδομίδη, η λεναλιδομίδη και /ή ακτινοθεραπεία. Άλλα κριτήρια αποκλεισμού που περιλαμβάνονται: ΔΜΣ & gt? 35 kg /m

2, σοβαρή συστηματική κατάθλιψη, ο διαβήτης, δυσλιπιδαιμίες, η υπέρταση, οι χρόνιες φλεγμονώδεις παθήσεις, καρδιακή ανεπάρκεια σε διαφορετικό στάδιο, ήπια ή σοβαρή νεφρική ανεπάρκεια (κρεατινίνη ≥ 2,0 mg /dl), πανκυτταροπενία και πιο πρόσφατη χειρουργική επέμβαση ( ≤ 3 μήνες). Δείγματα φλεβικού αίματος συλλέχθηκαν τουλάχιστον μετά από 3 μήνες από την τελευταία αντικαρκινικής θεραπείας τόσο για τον καρκίνο ασθενείς DVT + και DVT-

Συντομογραφίες:. DVT, τω βάθει φλεβική θρόμβωση? ΔΜΣ, δείκτη μάζας σώματος.

Η

διαδικασίες συλλογής αίματος και εργαστηριακές

Το αίμα συλλέχθηκε από τον κάθε ασθενή και υγιείς μάρτυρες που στο σωληνάρια συλλογής αίματος ελεύθερο πυρετογόνων με και χωρίς πρόσθετα. Κιτρικούχο φτωχό σε αιμοπετάλια πλάσμα έγινε χρησιμοποιώντας δύο φυγοκέντρησης βήματα: 5 λεπτά στις 4000 σ.α.λ. και 10 λεπτά σε 11.000 r.p.m. Πολλαπλές δείγματα ορού και πλάσματος αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C. Τα δείγματα αίματος χρησιμοποιήθηκαν για τις ακόλουθες αναλύσεις: 1) CRP, ινωδογόνο, IL-6, TNF-α, IL-1β, ΜΜΡ-9, VEGF, αντιγόνο TF και τα επίπεδα στο πλάσμα SP-σελεκτίνης? 2) μονοκύτταρα απομόνωση. επίπεδα ινωδογόνου πλάσματος και C-αντιδρώσας πρωτεΐνης υψηλής ευαισθησίας μετρήθηκαν με πρότυπες τεχνικές που χρησιμοποιούνται στο Κεντρικό Εργαστήριο του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου Κατάνια. IL-6, TNF-α, IL-1β, ΜΜΡ-9, VEGF και SP-σελεκτίνης μετρήθηκαν με δοκιμασίες ενζυμική ανοσοπροσροφητική (ELISAs? R &? D Ευρώπη Systems, Abingdon, Oxfordshire, UK). επίπεδο αντιγόνο TF πλάσματος μετρήθηκε με ELISA χρησιμοποιώντας ένα εμπορικά διαθέσιμο κιτ, IMUBIND (American Diagnostica Inc, Stamford, CT). Όλες οι διαδικασίες προσδιορισμού διεξήχθησαν σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. δείγματα ελέγχου αναλύθηκαν ταυτοχρόνως σε κάθε πλάκα για κάθε δείκτη.

Αντιδραστήρια

Ficoll Histopaque 1077, μέσο RPMI 1640, πενικιλλίνη-streptomicin λύση, L-γλουταμίνη, ορό εμβρύου bovin (FBS), φωσφορικό -buffered αλατούχο διάλυμα (PBS), Percoll, λιποπολυσακχαρίτη (LPS) από

Escherichia coli

ορότυπος 0128: Β12, ΜΤΤ (3- [4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ] -2,5-διφαινυλτετραζολίου ? θειαζολυλ μπλε) και διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) αγοράστηκαν από την Sigma Chemical (St. Louis, ΜΟ, USA). μέσον του Iscove και πολυμιξίνη Β από την Gibco, Life Technologies Inc (Μιλάνο, Ιταλία).

DHMEQ (dehydroxymethylepoxyquinomicin), που συντίθεται όπως περιγράφεται προηγουμένως, [43] διαλύθηκε σε διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) σε συγκέντρωση 10 μg /mL και αποθηκεύτηκε στους 20 ° C. Αυτό το απόθεμα διαλύματος αραιώθηκε σε μέσο καλλιέργειας σε μια τελική συγκέντρωση του & lt? 0,1%. Πράκτορες. DHMEQ παρασχέθηκε ευγενώς από τον Dr Kazuo Umezawa, Τμήμα Εφαρμοσμένης Χημείας, Σχολή Θετικών Επιστημών και Τεχνολογίας του Πανεπιστημίου Keio, Γιοκοχάμα της Ιαπωνίας.

Απομόνωση ανθρώπινων μονοκυττάρων

μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMC) απομονώθηκαν από κιτροποιημένο αίμα Καρκινοπαθών DVT + και DVT- και υγιείς μάρτυρες από Ficoll-Paque. Για την απομόνωση μονοκυττάρων, PBMC τοποθετήθηκαν επί 2 ώρες σε πλάκα καλλιέργειας, και τα μη προσκολλημένα κύτταρα απομακρύνθηκαν με τρεις αλλαγές θερμού PBS. Καθαρά μονοκύτταρα στη συνέχεια θετικώς επιλεγμένων από αντι-CD14-επικαλυμμένα μαγνητικά μικροσφαιρίδια (στήλη διαχωρισμού Mini MACS? Milteny Biotec, Bergisch Gladbach, Γερμανία) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. καθαρότητα μονοκυττάρων ήταν & gt? 98%, όπως αξιολογήθηκε με κυτταρομετρία ροής (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα κύτταρα συγκεντρώθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε μία τελική συγκέντρωση 1×10

6 κύτταρα /ml σε ένα μέσο κατάψυξης που αποτελείται από 30% αυτόλογο πλάσμα με κιτρικό, το 60% του Iscove και 10% DMSO. Επόμενη τα κύτταρα καταψύχθηκαν σε κλάσματα του 1 ml σε αποστειρωμένο κρυοφιαλίδια (Greiner, Germany) χρησιμοποιώντας μια πρότυπη διαδικασία ελεγχόμενης κατάψυξης και στη συνέχεια αποθηκεύεται σε υγρό άζωτο.

Επεξεργασία και καλλιέργεια ανθρώπινων μονοκυττάρων

Μετά την απόψυξη σε θερμοκρασία δωματίου, τα κρυοσυντηρημένα μονοκύτταρα είχαν βιωσιμότητα 85%, όπως φαίνεται με εξαίρεση κυανούν τρυπανίου. Ανθρώπινα μονοκύτταρα αναλύθηκαν για την ενεργοποίηση NF-kB, για την παραγωγή κυτοκινών και για δοκιμασία δραστικότητας TF (βλέπε επόμενες κείμενο). Εν συντομία, μονοκύτταρα (5 x10

5 /mL) συλλέχθηκαν, πλύθηκαν, και σπάρθηκαν πάνω φρεάτια σε RPMI 1640 συμπληρωμένο με 10% θερμο-απενεργοποιημένο FBS, L-γλουταμίνη (2 mM), πενικιλλίνη (100 IU /ml), στρεπτομυκίνη (100 μg /mL), και προκατεργάστηκαν με DHMEQ (10 μg /mL) για 2 ώρες και μετά το οποίο επωάστηκαν για 24 ώρες. Στη συνέχεια, τα υπερκείμενα κυτταρικής καλλιέργειας συλλέχθηκαν για ποσοτικοποίηση του επιπέδου της πρωτεΐνης της κυτοκίνης με ανοσορροφητική δοκιμασία συνδεδεμένη με ένζυμο (ELISA). μόλυνση από ενδοτοξίνη των κυτταρικών καλλιεργειών ήταν συνήθως αποκλείονται με το χρωμογόνο δοκιμασία Limulus Amebocyte Lysate (Sigma). Επιπλέον, σε όλες τις κυτταρικές καλλιέργειες προσετέθησαν 10 μg /ml του πολυμιξίνη Β να εξουδετερώσει οποιαδήποτε πιθανή μόλυνση LPS.

ELISA για την ενεργή υπομονάδα ρ65 του NF-kB

Για την ενεργοποίηση p65 υπομονάδα ΝΡ-κΒ μέτρηση , πυρηνικά εκχυλίσματα παρασκευάστηκαν από 5×10

5 μονοκύτταρα, προκατεργασμένο και όχι με DHMEQ (10 μg /mL) για 2 ώρες και μετά την οποία διεγείρονται με 100 ng /LPS ml για το επιθυμητό χρονικό διάστημα, χρησιμοποιώντας ένα πυρηνικό εκχύλισμα Kit ( Ενεργός Motif, Rixensart, Belgium), σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Επίπεδα των συγκεντρώσεων πυρηνικών p65 προσδιορίσθηκαν με μία ευαίσθητη δοκιμασία ELISA (TRANS-ΑΜ, Active Motif, Rixensart, Belgium).

Ανίχνευση δραστηριότητας ΤΡ σε μονοκύτταρα με μία χρωμογόνο ανίχνευση

κυτταρολύματα η δραστικότητα του ΤΡ μετρήθηκε με κιτ actichrome1 δραστηριότητα TF (American διαγνωστικές, Pfungstadt, Γερμανία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία. δείγματα συν-επωάστηκαν με τον παράγοντα VII και Spectrozyme fVIIa. TF-Fvlla συγκρότημα διασπά Spectrozyme fVIIa ως ένα πολύ συγκεκριμένο χρωμογόνο υπόστρωμα απελευθερώνοντας ένα paranitroanilin-χρωμοφόρο με μία συγκεκριμένη αλλαγή της απορρόφησης στα 405 nm. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε picomoles ανά λίτρο (ρΜ) δραστικότητας πεπτιδυλίου λιπιδιωμένης TF διάσπαση του Spectrozyme συγκρότημα fVIIa.

Serum-εξαρτώμενη ενεργοποίηση των κυτοκινών και NF-kB σε μονοκύτταρα

μονοκύτταρα (5×10

5) από 25 υγιείς δότες καλλιεργήθηκαν για 20 ώρες σε μέσο (RPMI 1640) συμπληρωμένο είτε με 40% ορό από 64 ασθενείς με καρκίνο του DVT + και 257 DVT- με τα υψηλότερα επίπεδα κυτοκινών στο πλάσμα (≥ 75

ο εκατοστημόριο) ή 40% ορού από 100 υγιείς δότες με τις χαμηλότερες τιμές των κυτοκινών (≤ 25

ο εκατοστημόριο). Για την επεξεργασία του ορού, 80 μΐ ορού από κάθε ασθενή καρκίνο DVT + και DVT- και από κάθε υγιή δότη προστέθηκε στο μέσο καλλιέργειας μονοκυττάρων αμέσως μετά την απόψυξη. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με DHMEQ (10 μg /mL) για 2 ώρες, και μετά την οποία διεγείρονται με 100 ng /mL LPS για την επιθυμητή χρονική περίοδο. Η θεραπεία των μονοκυττάρων με LPS χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος. Στα πειράματα LPS δεν προστέθηκε πολυμιξίνη Β. Μετά την επώαση, τα υπερκείμενα της κυτταρικής καλλιέργειας συλλέχθηκαν επίσης για τον ποσοτικό προσδιορισμό του επιπέδου της πρωτεΐνης κυτοκίνης και την ενεργοποίηση του NF-kB με ELISA.

ΜΤΤ δοκιμασία

Επιδράσεις της DHMEQ στη βιωσιμότητα των κυττάρων προσδιορίστηκαν από το 3- ( 4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ) -2,5-διφαινυλο βρωμιούχο τετρανάτριο (ΜΤΤ) μέθοδος [45]. Τα μονοκύτταρα (3×10

5) σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων για 48 ώρες για κυτταροστατική DHMEQ. Διαδοχικές αραιώσεις DHMEQ (στα 2 μg /ml, 5 μg /ml, 10 μg /mL) δημιουργήθηκαν και προστέθηκαν στα κύτταρα. Μετά την επώαση με DHMEQ ή DMSO στις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις και χρονικά σημεία. Κύτταρα κατεργασμένα με διάλυμα ΜΤΤ (1 mg /mL) για 4 ώρες μετρήθηκαν με έναν αναγνώστη μικροπλάκας (Bio-Rad, Richmond, CA) σε ένα μήκος κύματος αναφοράς 630 nm και δοκιμαστικό μήκος κύματος 570 nm. Η βιωσιμότητα των κυττάρων εκφράστηκε ως ποσοστό των δειγμάτων ελέγχου DMSO-αγωγή.

Στατιστική ανάλυση

Για τις συνεχείς μεταβλητές, διαφορά στη μέση μεταξύ των ομάδων μελέτης αξιολογήθηκε μέσω της ανάλυσης της διακύμανσης (ANOVA, στην περίπτωση των τριών ομάδων) ή t-test (δύο ομάδες). Για διακριτών μεταβλητών, η διαφορά στην κατανομή μεταξύ των ομάδων μελέτης αξιολογήθηκε μέσω της δοκιμής χ

2 τεστ. Η συσχέτιση μεταξύ συνεχείς μεταβλητές αξιολογήθηκε μέσω του ο συντελεστής Spearman

r

.

Αποτελέσματα

Baseline χαρακτηριστικά υγιών ελέγχων και ασθενών με καρκίνο με και χωρίς DVT παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων σε σχέση με την ηλικία, το φύλο, κάπνισμα, και δείκτη μάζας σώματος. Η συχνότητα των εντοπισμένων καρκίνων ήταν παρόμοια μεταξύ των ασθενών με καρκίνο με και χωρίς DVT, καθώς και η κατανομή των τύπου του καρκίνου /θέση (Πίνακας 1).

επίπεδα φλεγμονής, αγγειογένεσης και πήξης σε ασθενείς με καρκίνο DVT + βιοδεικτών πλάσμα και DVT-

Mean πλασματικά επίπεδα των διαφορετικών βιοδεικτών, συμπεριλαμβανομένων εκείνων της φλεγμονής, της αγγειογένεσης και της πήξης, που αναλύθηκαν στην ομάδα ελέγχου και σε ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς DVT αναφέρονται στον πίνακα 2. σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, τα υψηλότερα πλάσμα επίπεδα CRP, ινωδογόνο, IL-6, TNF-α, IL-1β, ΜΜΡ-9, VEGF, αντιγόνο TF, και sP-σελεκτίνης παρατηρήθηκαν σε ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς DVT (Ρ & lt? 0,01). Όπως ήταν αναμενόμενο, η συγκέντρωση όλων των δεικτών στο DVT + ομάδα ήταν σημαντικά υψηλότερη από ό, τι σε DVT- (ρ & lt? 0,01) με μόνη εξαίρεση του ινωδογόνου (p = 0.35). Συσχέτιση όλους τους δείκτες με το άλλο αναφέρονται στον (S1 πίνακα). Θετικές συσχετίσεις (| R | & gt? 0,45) μεταξύ των CRP, IL-6, TNF-α, IL-1β, ΜΜΡ-9, VEGF, και το αντιγόνο TF βρέθηκαν και στις δύο ομάδες των ασθενών με καρκίνο, ενώ το ινωδογόνο συσχετίζεται μόνο στην DVT + ομάδα. Καμία συσχέτιση μεταξύ των δεικτών παρατηρήθηκαν σε υγιείς μάρτυρες (S1 πίνακα)

Συντομογραφίες:. DVT, τω βάθει φλεβική θρόμβωση? IL-6, ιντερλευκίνη-6? ΤΝΡ-α, παράγοντας νέκρωσης όγκων-α? IL-1β, της ιντερλευκίνης-1β? CRP, C-αντιδρώσα πρωτεΐνη? ΜΜΡ-9, μεταλλοπρωτεϊνάση μήτρας-9? VEGF, αγγειακός ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα? TF, ιστικό παράγοντα? διαλυτή Ρ-σελεκτίνη (SP-σελεκτίνης). Σημαντικές διαφορές μεταξύ φλεγμονώδεις, αγγειογόνες και πήξη σημειωτές ήταν εμφανείς σε ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς DVT σε σύγκριση με ελέγχους με περαιτέρω αυξήσεις σε ασθενείς με καρκίνο DVT. τιμή Ρ δίνονται χρησιμοποιώντας ανάλυση της διακύμανσης (ANOVA τεστ, στην περίπτωση των τριών ομάδων) ή t-test (δύο ομάδες).

Η

Οι κυτοκίνες και έκκριση ΜΜΡ-9 σε ανθρώπινα μονοκύτταρα

Η έκκριση αυτών των δεικτών αναλύονται στο υπερκείμενο μονοκυττάρων έδειξε τάση παρόμοια με εκείνη που παρατηρήθηκε στο πλάσμα. Αυθόρμητη παραγωγή κυτοκινών, όπως IL-6, TNF-α, IL-1β και VEGF ήταν σημαντικά υψηλότερα στις δύο ομάδες ασθενών με καρκίνο με και χωρίς DVT από εκείνα από υγιείς μάρτυρες (ρ & lt? 0.0001) (Σχήμα 1). Σε σύγκριση με DVT- ασθενείς με καρκίνο, DVT + έδειξαν αυξημένη φορές μεταβολής 1,28 (95% CI: 1.20-1.37? P & lt? 0,0001), 1,34 (95% CI: 1,23 – 1,46? P & lt? 0,0001), 1.41 (95% CI: 1,30-1,54? ρ & lt? 0,0001), και 1,61 (95% CI: 1,45 – 1,78? ρ & lt? 0,0001) για IL-6, TNF-α, IL-1β, και VEGF, αντίστοιχα. Εκτός από κυτοκίνες, επίσης ΜΜΡ-9 δραστηριότητα παραγωγής και TF ήταν υψηλότερη σε ασθενείς DVT + καρκίνο σε σύγκριση με αυτούς DVT- και σε υγιείς μάρτυρες (μέση τιμή ± SD, 103 ± 23, 73 ± 24, 8.8 ± 4, για ΜΜΡ-9 και σημαίνουν ± SD, 35.6 ± 6.4, 28 ± 5, ± 3.3 0.7 για δραστικότητα TF, αντίστοιχα). Όπως ήταν αναμενόμενο, η ισχυρή συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων της IL-6, TNF-α, IL-1β, VEGF, ΜΜΡ-9 και ΤΡ σε πλάσμα από ασθενείς με καρκίνο DVT + και DVT- και εκείνων που απελευθερώνονται από μονοκύτταρα από τα ίδια ασθενείς παρατηρήθηκαν (Πίνακας 3 ).

επίπεδα της IL-6, TNF-α, IL-1β, και VEGF μετρήθηκαν σε υπερκείμενα καθαρισμένων μονοκυττάρων από ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς DVT από ένα ευαίσθητο ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA). Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσες τιμές ± SD.

Η

DVT, τω βάθει φλεβική θρόμβωση. Μια θετική ισχυρή συσχέτιση μεταξύ των κυτοκινών πλάσματος, αγγειογόνες και πήξη δείκτες και την έκκριση

in vitro

των ίδιων δεικτών σε δύο ομάδες των ασθενών με καρκίνο με και χωρίς DVT.

Η

Επίδραση της DHMEQ επί της δραστικότητας ρ65 υπομονάδα ΝΡ-κΒ σε μονοκύτταρα

η ενεργοποίηση της υπομονάδας p65 ΝΡ-κΒ σε μη διεγερμένα μονοκύτταρα, από ασθενείς με καρκίνο DVT + και DVT- και από υγιείς έλεγχος, αναλύθηκε με έναν ευαίσθητο προσδιορισμό ELISA. Αυτή η δοκιμασία έχει το πλεονέκτημα ότι είναι 10 φορές πιο ευαίσθητη από δοκιμασία μετατόπισης κινητικότητας ηλεκτροφόρησης (EMSA) και επιτρέπει μεγαλύτερη ευελιξία στο πειραματικό στάδιο. Όπως φαίνεται στο σχήμα 2, NF-kB δραστικότητα ρ65 υπομονάδας σε μονοκύτταρα κυμαίνονταν σε όλες εξετάστηκαν ομάδες. Υψηλότερη δραστικότητα ρ65 υπομονάδα ΝΡ-κΒ παρατηρήθηκε σε ασθενείς με καρκίνο DVT + και DVT- ό, τι σε υγιείς ελέγχους (ρ & lt? 0,0001). Σημαντικές διαφορές της δραστηριότητας p65 NF-kB ανιχνεύθηκαν επίσης μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του DVT + και DVT- (p & lt? 0,0001). Έχει ήδη αποδειχθεί ότι NF-kB ρυθμίζει αρκετά μόρια συμπεριλαμβανομένων εκείνων που αναλύθηκαν στην παρούσα μελέτη [41,42]. Ως εκ τούτου, όλοι αυτοί οι δείκτες συσχετίζεται θετικά με την δραστικότητα ΝΡ-κΒ (Πίνακας 4). Η ταυτοποίηση αυτών των δεικτών μπορούν να αναγνωρίζουν NF-kB ως ένας ελκυστικός στόχος για θεραπευτική παρέμβαση. Ως εκ τούτου, σκεφτήκαμε να αναστέλλει NF-kB από DHMEQ, ένα γνωστό αναστολέα της NF-kB [46,47]. Η επίδραση της DHMEQ, στη δόση των 10 μg /ml, για NF-kB ρ65 υπομονάδας αναστολή δραστικότητας σε μονοκύτταρα από τις δύο ομάδες των ασθενών με καρκίνο, διερευνήθηκε (Σχήμα 2). έχουν Πειράματα ελέγχου με DMSO περιελήφθησαν (Σχήμα 2). Αξίζει να σημειωθεί ότι, DHMEQ δεν ήταν αποτελεσματική στην μονοκύτταρα από υγιείς μάρτυρες σε διαφορετικές δόση και το χρόνο (S1 Σχήμα). Παρά το γεγονός ότι, DHMQ προκάλεσε τη μείωση του βιωσιμότητα κυττάρου των μονοκυττάρων που προέρχονται από ασθενείς με καρκίνο DVT + και DVT-, αυτή η επίδραση δεν παρατηρήθηκε σε μονοκύτταρα από υγιείς ελέγχους (S2 Εικ).

Η ενεργοποιημένη υπομονάδα ρ65 του NF-kB ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ασθενείς με καρκίνο DVT + και DVT- από ό, τι στους υγιείς μάρτυρες (P & lt? 0,0001). (Δοκιμή ANOVA). NF-kB ρ65 υπομονάδας ήταν σημαντικά υψηλότερη σε καρκινοπαθείς ασθενείς, DVT + σε σύγκριση με αυτούς DVT- (Ρ & lt? 0.001) (t-test). Για να εξετασθούν οι επιδράσεις της DHMEQ, μονοκύτταρα υποβλήθηκαν σε αγωγή με 10 μg /mL DHMEQ. Όπως πειράματα ελέγχου, DMSO χρησιμοποιήθηκε αντί του DHMEQ. Μονοκύτταρα από ασθενείς με καρκίνο DVT + ήταν να ανταποκρίνεται περισσότερο στις DHMEQ από εκείνα DVT-. Περιέργως, καμία επίδραση της DHMEQ υπήρχε σε υγιείς μονοκύτταρα. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσο ± SD. OD, οπτική πυκνότητα? DVT, εν τω βάθει φλεβική θρόμβωση? DMSO, διμεθυλοσουλφοξείδιο? . DHEMQ, dehydroxymethylepoxyquinomicin

Η

Συντομογραφίες: DVT, τω βάθει φλεβική θρόμβωση. Μια θετική συσχέτιση βρέθηκε μεταξύ της δραστηριότητας p65 υπομονάδας του NF-kB και όλα τα μόρια σε ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς DVT. Χρησιμοποιήθηκε Spearman Rank ανάλυση συσχέτισης.

Η

Επίδραση της LPS και DHMEQ επί ρ65 πυρηνικό παράγοντα-κΒ σε μονοκύτταρα

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, η επεξεργασία των μονοκυττάρων με LPS στα 100 ng /ml ενεργοποιημένης έντονα NF-kB ρ65 του 46%, 73% και 35% σε σχέση με την βασική αξία σε σύγκριση με μη διεγερμένα κύτταρα σε ασθενείς με καρκίνο DVT +, DVT- και σε υγιείς ελέγχους, αντίστοιχα (ρ & lt? 0,0001). Προεπώαση με DHMEQ, πριν από την LPS διέγερση, μειώθηκαν σημαντικά δραστηριότητα υπομονάδας ρ65 του NF-kB από 4,5 φορές, 3 φορές και 3,2-φορές στον καρκίνο DVT + και DVT- και σε υγιείς μάρτυρες (ρ & lt? 0,0001), αντιστοίχως, σε σύγκριση μόνο με LPS. Για να ενισχύσει τα ευρήματα μας την NF-kBp65 ρύθμιση προς τα κάτω από DHMEQ σε LPS-ενεργοποιημένα μονοκύτταρα, το ποσό της δραστηριότητας p65 υπομονάδας του NF-kB σε πυρηνικά εκχυλίσματα από τα ίδια πειράματα στη συνέχεια μετρήθηκαν με ELISA. Όπως ήταν αναμενόμενο, η θεραπεία με DHMEQ σε LPS διεγερμένο μονοκύτταρα επαγόμενη τη μείωση της δραστικότητας του ΝΡ-κΒ μεταξύ των τριών ομάδων που αναλύθηκαν (Σχήμα 3).

Πυρηνικά εκχυλίσματα παρασκευάστηκαν από μονοκύτταρα, προκατεργασμένο και όχι με DHMEQ (10 μg /mL) για 2 ώρες και μετά την οποία διεγείρονται με 100 ng /ml LPS για 24 ωρών, χρησιμοποιώντας ένα πυρηνικό εκχύλισμα Kit. Η διέγερση των μονοκυττάρων με LPS στα 100 ng /mL επάγουν un σημαντική αύξηση του επιπέδου της πρωτεΐνης ρ65 πυρηνικό NF-kB σε όλες τις ομάδες ή τους ασθενείς με καρκίνο DVT +, DVT- και σε υγιείς μάρτυρες, σε σύγκριση με μη διεγερμένα κύτταρα, (Ρ & lt? 0,0001). NF-kB ρ65 υπομονάδας ήταν σημαντικά υψηλότερη σε καρκινοπαθείς ασθενείς, DVT + σε σύγκριση με αυτούς DVT- (Ρ & lt? 0,0001) (t-test). DVT, εν τω βάθει φλεβική θρόμβωση.

Η

Επιδράσεις της DHMEQ στους δείκτες απελευθέρωση από μονοκύτταρα

θεραπεία DHMEQ χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμήσουν αν NF-kB συνδέεται άμεσα με την απελευθέρωση όλων των δεικτών, ανιχνεύονται παραπάνω, από τα μονοκύτταρα του καρκίνου ασθενών DVT + και DVT-. Το Σχήμα 4 δείχνει ότι η θεραπεία με DHMQ μειώνεται δραματικά τα επίπεδα της IL-6, TNF-α, IL-1 βήτα και VEGF σε αμφότερες τις ομάδες των ασθενών με καρκίνο σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα. Παρόμοια τάση παρατηρήθηκε για ΜΜΡ-9 και TF. Αντίθετα, δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στην ομάδα ελέγχου στην οποία συστατική ενεργοποίηση του NF-kB απουσιάζει.

Τα μονοκύτταρα υποβλήθηκαν σε θεραπεία ή όχι με 10 μg /mL DHMEQ, μετά την οποία οι ποσότητες του ιντερλευκίνες (IL) -6 , παράγοντα άλφα νέκρωσης όγκου (TNF-α), IL-1β και αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) που εκκρίνεται μετρήθηκαν με ανοσορροφητική δοκιμασία συνδεδεμένη με ένζυμο (ELISA). Τα μονοκύτταρα επωάστηκαν για 24 ώρες. Η θεραπεία με DHMEQ επάγει τη μείωση όλων των μορίων και στις δύο ομάδες των ασθενών με καρκίνο με και χωρίς DVT σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα (Ρ & lt? 0,0001), (t-test). Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως μέσο ± SD. DVT, εν τω βάθει φλεβική θρόμβωση?

Η

Serum-εξαρτώμενη ενεργοποίηση του NF-kB σε υγιείς μονοκύτταρα

Όπως φαίνεται στο σχήμα 5, η επώαση των υγιών μονοκυττάρων με συνενωμένους ορούς, που προέρχεται από το καρκινοπαθείς DVT + ή DVT- με τις υψηλότερες τιμές των κυτοκινών, προκάλεσε μια σημαντική αύξηση της ενεργοποίησης του ΝΡ-κΒ σε σύγκριση με συγκεντρωμένα ορούς, που προέρχονται από τις υγιείς ελέγχους με τις χαμηλότερες τιμές των ίδιων κυτοκινών, (ρ & lt? 0,0001). Επιπλέον, μια υψηλότερη ενεργοποίηση του NF-kB παρατηρήθηκε σε μονοκύτταρα διεγερμένα με ορούς που λαμβάνονται από ασθενείς με καρκίνο DVT + σε σύγκριση με εκείνη που διεγείρεται από ορούς που προέρχονται από DVT- (ρ & lt? 0.001) (Σχήμα 5). Προκειμένου να αποκλειστεί περαιτέρω η πιθανότητα ότι κάποια μόλυνση LPS θα μπορούσε να συμβάλει στην ενεργοποίηση NF-kB, 10 μg /ml του πολυμιξίνη Β προστέθηκε σε όλες τις κυτταρικές καλλιέργειες για να εξουδετερώσει οποιαδήποτε πιθανή μόλυνση LPS. Αντ ‘αυτού, ως θετικός έλεγχος της ενεργοποίησης του ΝΡ-κΒ, LPS θεωρήθηκε. LPS-διεγερμένες καλλιέργειες που προκαλείται από μια υψηλότερη δραστικότητα ΝΡ-κΒ στατιστικά σημαντική σε σύγκριση με τον καρκίνο που προέρχεται καλλιέργειες ορούς που διεγείρεται (ρ & lt? 0.001), ενώ καμία σημαντική διαφορά ήταν εμφανής μεταξύ LPS-διεγερμένες καλλιέργειες και καρκίνος DVT προέρχονται sera- διεγερμένες καλλιέργειες. Στα πειράματα LPS δεν προστέθηκε πολυμιξίνη Β. Η ενεργοποίηση NF-kB, διεγερμένα με τους ορούς που λαμβάνονται από ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς DVT ή LPS, μερικώς μπλοκαριστεί από DHMEQ (10 μg /mL) όταν προστίθενται σε αμφότερες τις καλλιέργειες και LPS-διεγερμένες καλλιέργειες.

Τα μονοκύτταρα από 25 υγιείς μάρτυρες αξιολογήθηκαν για την ενεργοποίηση του NF-kB μετά καλλιεργήθηκαν για 20 ώρες σε μέσο συμπληρωμένο με είτε 40% ορό από τρεις ομάδες. Τα μονοκύτταρα (5×10

5) από 25 υγιείς δότες καλλιεργήθηκαν για 20 ώρες σε μέσο (RPMI 1640) συμπληρωμένο με είτε 40% ορό προερχόμενο από 64 ασθενείς με καρκίνο DVT + και 257 DVT- με τα υψηλότερα επίπεδα κυτοκινών πλάσματος (& gt? Εκατοστημόριο 75η ) ή 40% ορό που προέρχεται από 100 υγιείς δότες με τις χαμηλότερες τιμές των κυτοκινών (& lt? 25ο εκατοστημόριο). Η επώαση των υγιών μονοκυττάρων με συνενωμένων ορών που προέρχονται από ασθενείς με καρκίνο DVT + (sCADVT +) ή DVT- (sCADVT-) προκάλεσε μια σημαντική αύξηση της δραστικότητας ΝΡ-κΒ σε σύγκριση με εκείνη που προέρχεται από υγιείς ελέγχους (HM) μετά από θεραπεία με ορούς από υγιείς ελέγχους ( SH) (P & lt? 0,0001). Μια υψηλότερη ενεργοποίηση p65 υπομονάδα ΝΡ-κΒ παρατηρήθηκε σε μονοκύτταρα διεγερμένα με ορούς από ασθενείς με καρκίνο DVT + σε σύγκριση με εκείνη που διεγείρεται από ορούς που προέρχονται από DVT- (Ρ & lt? 0.001) (t-test). Αριθ ενεργοποίηση p65 υπομονάδα ΝΡ-κΒ παρατηρήθηκε σε μονοκύτταρα διεγερμένα με ορούς που λαμβάνονται από υγιείς ελέγχους.

Η

Serum-εξαρτώμενη ενεργοποίηση της παραγωγής κυτοκινών σε υγιείς μονοκύτταρα

Εκτός από ΝΡ-κΒ δραστηριότητα, διερευνήσαμε την ενεργοποίηση των κυτοκινών σε υγιή μονοκύτταρα επεξεργάστηκε με συγκεντρωμένους ορρούς που ελήφθησαν από ασθενείς με καρκίνο DVT + και DVT- και από υγιείς ελέγχους. Υψηλότερες μέσα επίπεδα της IL-6, TNF-α, IL-1β, VEGF, ΜΜΡ-9 και TF εκκρίθηκαν από υγιείς μονοκύτταρα επεξεργάστηκε με τους ορούς που λαμβάνονται από ασθενείς με καρκίνο DVT σε σύγκριση με εκείνες από DVT- (ρ & lt? 0,01). Αντίθετα, υγιή μονοκυττάρων σε επεξεργασία με ορούς από υγιείς ελέγχους, δεν έδειξε σημαντικές επιδράσεις (Πίνακας 5). Όταν υγιή μονοκύτταρα επωάστηκαν με τους ορούς που λαμβάνονται από ασθενείς με και χωρίς DVT παρουσία DHMEQ, η παραγωγή κυτοκινών έντονα μειώθηκε σε σύγκριση με τα μη επεξεργασμένα κύτταρα (ρ & lt? 0,0001). (Πίνακας 6)

ΗΜ, μονοκύτταρα από υγιή άτομα? SH, οροί από υγιή άτομα? LPS, λιποπολυσακχαρίτη? sCaDVT-, ορό από ασθενείς με καρκίνο, χωρίς εν τω βάθει φλεβική θρόμβωση? sCADVT +, ορός από ασθενείς με καρκίνο με εν τω βάθει φλεβική θρόμβωση? IL-6, ιντερλευκίνη-6? ΤΝΡ-α, παράγοντας νέκρωσης όγκου άλφα? IL-1β, ιντερλευκίνη-1 βήτα? VEGF, Vascular ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα? ΜΜΡ-9, μεταλλοπρωτεϊνάση μήτρας-9? TF, ιστικό παράγοντα. Όλες οι τιμές p υπολογίστηκαν με Wilcoxon συνδυασμένα ζεύγη Υπεγράφη-Βαθμοί Test

Η

HM, μονοκύτταρα από υγιή άτομα.? SH, οροί από υγιή άτομα? LPS, λιποπολυσακχαρίτη? sCaDVT-, ορό από ασθενείς με καρκίνο, χωρίς εν τω βάθει φλεβική θρόμβωση? sCADVT +, ορός από ασθενείς με καρκίνο με εν τω βάθει φλεβική θρόμβωση? IL-6, ιντερλευκίνη-6? ΤΝΡ-α, παράγοντας νέκρωσης όγκου άλφα? IL-1β, ιντερλευκίνη-1 βήτα? VEGF, Vascular ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα? ΜΜΡ-9, μεταλλοπρωτεϊνάση μήτρας-9? TF, ιστικό παράγοντα. Όλες οι τιμές p υπολογίστηκαν με Wilcoxon συνδυασμένα ζεύγη Υπεγράφη-Βαθμοί Test.

Η

Τα πειράματα ελέγχου, η οποία διεξήχθη με LPS, ανέφερε ότι μια αξιοσημείωτη σημαντική βελτίωση όλων των δεικτών παραγωγής, σε σύγκριση με εκείνες που διεγείρονται με τους ορούς που προέρχεται από ασθενείς με καρκίνο DVT- (ρ & lt? 0,0001). Όπως ήταν αναμενόμενο, παρατηρήθηκαν στην παραγωγή όλων των δεικτών μεταξύ της ομάδας των υγιών μονοκυττάρων σε επεξεργασία με LPS και ότι αντιμετωπίζονται με τους ορούς που λαμβάνονται από ασθενείς με καρκίνο DVT + (S2 Πίνακα) δεν υπάρχουν σημαντικές διαφορές.

Συζήτηση

Οι ασθενείς με καρκίνο μπορούν να παρουσιάσουν επιπλοκές συμπεριλαμβανομένης της θρόμβωσης, αιμορραγία και διάχυτη ενδαγγειακή πήξη. Η ταυτοποίηση νέων θεραπευτικών στόχων σε καρκινοπαθείς ασθενείς με υψηλό κίνδυνο DVT μπορεί να ενθαρρύνει την περαιτέρω προστατευτικά μελέτες για τη βελτίωση της διαχείρισης των ασθενών αυτών. Για τις γνώσεις μας, αυτή είναι η πρώτη έκθεση που αναλύει πολλαπλά δείκτες NF-κΒ-εξαρτώμενη σε ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς DVT.

Επιπλέον, η έκκριση της πρωτεΐνης ελέγχθηκε επίσης, προκειμένου να διαπιστωθεί κατά πόσον οι αλλαγές στην επίπεδα στο πλάσμα κυτοκίνης που συνδέεται με τις αλλαγές στην παραγωγή κυτοκινών. Όπως αναμενόταν, τα επίπεδα των δεικτών που αναλύθηκαν πλάσματος ρυθμίζεται αυξητικά στις ασθενείς με καρκίνο με και χωρίς DVT σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες, αν και ήταν στατιστικά υψηλότερη στην DVT +, με την εξαίρεση του ινωδογόνου η οποία ήταν παρόμοια και στις δύο ομάδες. Οι κυτοκίνες μετρήθηκαν στα πειράματά μας εμπλέκονται σε μεγάλο βαθμό στην προς τα πάνω ρύθμιση των φλεγμονωδών αντιδράσεων και έτσι σε πολλές κακοήθειες. Όταν ερευνήσαμε την έκκριση της πρωτεΐνης, η ίδια τάση στο πλάσμα παρατηρήθηκε επίσης σε μονοκύτταρα των ασθενών.