Αφηρημένο

Ο προσδιορισμός των νέων βιοδεικτών για προνεοπλασματικής παγκρεατικών αλλοιώσεων (PanINs, IPMNs) και στις αρχές του αδενοκαρκινώματος παγκρεατικού πόρου (PDAC) είναι ζωτικής σημασίας λόγω των ασθενειών υψηλό ποσοστό θνησιμότητας κατά τα τέλη ανίχνευσης. Για την αντιμετώπιση αυτού του καθήκοντος χρησιμοποιήσαμε την νέα τεχνική της υποβοηθούμενης από μήτρα εκρόφησης λέιζερ /ιονισμού (MALDI) απεικόνιση φασματομετρία μάζας (IMS) σχετικά με γενετικά μοντέλα ποντικών (GEM) του καρκίνου του παγκρέατος. Διάφορα GEM αναλύθηκαν με MALDI IMS να ερευνήσει το μοτίβο πεπτιδίου /πρωτεΐνης-έκφραση της προδρόμου αλλοιώσεων σε σύγκριση με το φυσιολογικό πάγκρεας και PDAC με κυτταρική ανάλυση. Η στατιστική ανάλυση έδειξε αρκετά διακριτική

m /z

-Είδη μεταξύ φυσιολογικού και παθολογικού ιστού. Ενδοεπιθηλιακής νεοπλασίας (PanIN) και ενδοπορικού θηλώδη βλεννώδες νεόπλασμα (IPMN) θα μπορούσε να διακριθεί από την κανονική παγκρεατικό ιστό και PDAC κατά 26 σημαντικές

m /z

-Είδη. Μεταξύ αυτών

m /z

-Είδη, εντοπίσαμε αλβουμίνη και θυμοσίνη-βήτα 4 με υγρή χρωματογραφία και διαδοχική φασματομετρία μάζας (LC-MS /MS), οι οποίες περαιτέρω επικυρωθεί με ανοσοϊστοχημεία, κηλίδα western, ποσοτική RT- PCR και ELISA σε αμφότερα ποντικού και ανθρώπινο ιστό. Θυμοσίνη-βήτα 4 βρέθηκε σημαντικά αυξημένη σε ορούς ποντικών με PanIN αλλοιώσεις. Προς τα πάνω ρυθμισμένη έκφραση του PanIN αλβουμίνη συνοδεύτηκε από αυξημένη έκφραση του ήπατος-περιορισμένων γονίδια που υποδηλώνει μια ηπατική πρόγραμμα δια-της προ-νεοπλασματικών κυττάρων. Συμπερασματικά δείχνουμε ότι GEM ενδογενούς PDAC είναι ένα κατάλληλο σύστημα μοντέλο για MALDI-IMS και επακόλουθη ανάλυση LC-MS /MS, επιτρέποντας

in situ

ανάλυση μικρών πρόδρομες βλάβες και την ταυτοποίηση των διαφορικά εκφρασμένων πεπτιδίων και πρωτεϊνών.

Παράθεση: Grüner BM, Hahne Η, Mazur PK, Τράικοβιτς-Άρσιτς M, Maier S, Esposito I, et al. (2012) MALDI Απεικόνιση Φασματομετρίας Μάζας για

In Situ

πρωτεομική ανάλυση των προνεοπλασματικής αλλοιώσεις στο καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 7 (6): e39424. doi: 10.1371 /journal.pone.0039424

Επιμέλεια: Frank T. Kolligs, Πανεπιστήμιο του Μονάχου, Γερμανία

Ελήφθη: 15, Ιαν, 2012? Αποδεκτές: 20η Μάη 2012? Δημοσιεύθηκε: 26, Ιουνίου 2012

Copyright: © 2012 Grüner et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το γερμανικό Ίδρυμα Ερευνών (SFB824-C4), το γερμανικό Ομοσπονδιακό Υπουργείο Παιδείας και Έρευνας (BMBF? # 01GS08115) και του Συνδέσμου Έρευνας για τον Καρκίνο (AICR? # 07-0543)? όλα για να JTS. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

παγκρέατος αδενοκαρκίνωμα του πόρου (PDAC) είναι η τέταρτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στον δυτικό κόσμο [1]. Λόγω του προχωρημένου σταδίου κατά τη διάγνωση και την υψηλή εγγενή αντίσταση στη θεραπεία, η συχνότητα εμφάνισης της PDAC αντιστοιχεί με τη θνησιμότητα του με διάμεση επιβίωση μικρότερη από 6 μήνες και από ένα συνολικό ποσοστό 5-ετή επιβίωση κάτω από 5% [2]. Ταυτοποίηση των πρωτεϊνών που εκφράζονται σε προνεοπλασματικές βλάβες μπορεί να βοηθήσει στον εντοπισμό της νόσου σε preinvasive κατάσταση, μια κλινικά πολύ σχετικό στόχο, όπως εκτομή παραμένει η μόνη θεραπευτική προσέγγιση συχνά απογοητεύονται από νωρίς απαρατήρητα μετάσταση ή τοπικά προχωρημένη νόσο [2].

Κλινική και ιστοπαθολογικές μελέτες έχουν εντοπίσει τρεις PDAC προκαρκινικές αλλοιώσεις: παγκρέατος ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (PanIN), ενδοπορικού θηλώδες νεόπλασμα βλεννώδες (IPMN) και βλεννώδες κυστική νεόπλασμα (MCN). Οι κατά πολύ πιο κοινές πρόδρομες ουσίες Panin αλλοιώσεις, αν και λόγω της βελτιωμένης μορφές απεικόνισης κυστική νεοπλάσματα όπως IPMNs και, σε μικρότερο βαθμό, τα MCN όλο διαγνωστεί [3], [4]. Ο προσδιορισμός και η ταξινόμηση των PanINs ως πρόδρομοι της PDAC [5] επέτρεψε την ανάπτυξη ενός μορφολογικά και γενετικό μοντέλο εξέλιξης (επισκόπηση στο [3]). Αυτές οι πρόοδοι έχουν συμβάλει στην ανάπτυξη εξελιγμένων

Cre /Ιοχ

-με βάση γενετικά τροποποιημένα ποντίκια (GEM) για ενδογενή PDAC [6]. Μια καθιερωμένη μοντέλο ποντικού ανακεφαλαίωση των μοριακών και μορφολογικών στάδια της ανθρώπινης PDAC ανάπτυξης είναι το

Kras

G12D

μοντέλο, στο οποίο ογκογόνο

Kras

G12D

δραστηριοποιείται στην ενδογενή

Kras

τόπο. Τα ποντίκια αναπτύσσουν τοπικά επεμβατικές και μεταστατικό PDAC μέσω ορίζεται PanIN βλάβες εξελίσσονται από PanIN1 να PanIN3 [7]. Πρόσθετη ενεργοποίηση της σηματοδότησης EGFR οδηγεί σε μια επιταχυνόμενη ανάπτυξη των PDAC μέσω PanIN και IPMN βλάβες, επεκτείνοντας το φάσμα των κλινικά σχετικές PDAC μοντέλα ποντικών [8]. Λόγω της ορίζεται το γενετικό υπόβαθρο και την πειραματικά διευθυνσιοδοτούμενα χρονική πορεία της προνεοπλασματικών ανάπτυξης βλάβης και εξέλιξης σε PDAC, υποθέσαμε αυτά τα μοντέλα να είναι πολύτιμα εργαλεία μελέτης για τη δημιουργία ενός προκλινικές προσέγγιση ταυτοποίηση βιοδεικτών έγκαιρη ανίχνευση.

Matrix με τη βοήθεια λέιζερ εκρόφησης /ιοντισμού (ΜΑΙΟΙ) απεικόνιση φασματομετρία μάζας (IMS) έχει εξελιχθεί ως νέα τεχνική και πολλά υποσχόμενο εργαλείο ανακάλυψης βιοδεικτών και μεταφραστικά ογκολογία [9]. Παραδείγματα περιλαμβάνουν Πάρκινσον [10] και [11] της νόσου του Alzheimer καθώς και αρκετές καρκίνους συμπεριλαμβανομένων γλοιώματα [12], [13], [14], [15], των ωοθηκών [16], του προστάτη [17], του μαστού [18] και καρκίνο του παχέος εντέρου [19]. Παρέχοντας ένα μοριακό

ex vivo

ενόψει της εκτομή ιστού, η ετικέτα δωρεάν παρακολούθησης των ενδογενών ενώσεων με χωρική ανάλυση και μοριακή ειδικότητα είναι ενεργοποιημένη (επισκόπηση στο [9], [20]).

σε αυτή τη μελέτη, εφαρμόσαμε MALDI-IMS να εξετάσει τη σκοπιμότητα αυτής της τεχνικής για τον εντοπισμό των πιθανών νέων βιοδεικτών σε PanIN βλάβες. Εμείς χαρακτηρίζεται δύο PanIN συγκεκριμένες κορυφές, οι οποίες προσδιορίζονται ως ALB1 και TMSB4X. Έχουμε τεκμηριώσει περαιτέρω ALB1 έκφραση ως μέρος ενός ηπατικού πρόγραμμα δια-πρόδρομων αλλοιώσεων και να παρέχει αποδεικτικά στοιχεία για την αύξηση των επιπέδων της TMSB4X ορού σε ποντίκια με PanIN βλάβες.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Η μελέτη εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας της Ιατρικής Σχολής του Τεχνικού Πανεπιστημίου του Μονάχου. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς πριν από την ένταξη στη μελέτη.

Όλα τα ζωικά πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με το Γερμανικό Ομοσπονδιακό Νόμους περί Προστασίας των Ζώων και εγκριθεί από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Θεσμικών ζώων στο Τεχνικό Πανεπιστήμιο του Μονάχου .

ποντίκι Στελέχη

Kras

+ /LSL-G12D, Ptf1a

+ /Cre, Ela-TGFa

και

Trp53

οι + /LSL-R172H

στελέχη έχουν περιγραφεί προηγουμένως [7], [8], [21], [22], [23]. Τα ποντίκια διασταυρώθηκαν για να λάβουν οι γραμμές του ποντικιού

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D? Ela-ΤΟΡα? Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

και

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D? Ela-ΤΟΡα? Trp53

+ /LSL- R172H

και διασταυρώθηκαν με C57BL φόντο /6J για τουλάχιστον τέσσερις γενιές. C57BL /6J ποντίκια χρησίμευσαν ως έλεγχος.

ανθρώπινα δείγματα

Ελήφθησαν δείγματα ορού από 57 άτομα με ιστολογικά αποδεδειγμένο διάγνωση του πορογενούς αδενοκαρκινώματος του παγκρέατος (21 γυναίκες, 26 άνδρες, μέση ηλικία 67,1 έτη) . Πλήρες αίμα συλλέχθηκε πριν από το χειρουργείο. Τα δείγματα ελέγχου ορού λήφθηκαν από 10 υγιή άτομα (2 γυναίκες, 8 άνδρες, μέση ηλικία 66,2 χρόνια) και από 12 ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα (3 γυναίκες, 9 άνδρες, μέση ηλικία 55,8 χρόνια).

MALDI-IMS σε τομές ιστών από ποντίκι παγκρέατα

για αποκόπηκαν MALDI-IMS πάγκρεας και snap-καταψύχεται σε υγρό άζωτο, χωρίς καμιά επεξεργασία. 10 μm κρυοτομές κόπηκαν και μεταφέρθηκαν σε πλακίδια ίνδιο-κασσιτέρου-οξείδιο (ΙΤΟ) επιστρωμένο γυαλί προεπεξεργασία με πολυ-λυσίνη 1:01 σε νερό με 0.1% ΝΡ-40. Οι τομές σταθεροποιήθηκαν σε 70% αιθανόλη και 100% αιθανόλη για ένα λεπτό. Matrix (10 g /l σιναπινικό οξύ σε 60% ακετονιτρίλιο και 0,2% τριφθοροξικό οξύ) ομοιόμορφα εναποτίθεται επί της πλάκας με τη χρήση της συσκευής ImagePrep (Bruker Daltonics). φάσματα μάζας μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας το MALDI TOF /TOF Analyzer Ultraflex III (Bruker Daltonics) με χωρική ανάλυση των 70 μm σε γραμμικό τρόπο. Ιόντα ανιχνεύθηκαν σε ένα εύρος μάζας

m /z

2.500 έως 25.000, με ρυθμό δειγματοληψίας των 0,1 GS /s. Μια έτοιμα προτύπου πρωτεΐνης (Bruker Daltonics) χρησιμοποιήθηκε για τη βαθμονόμηση των φασμάτων, η οποία έγινε εξωτερικά στον ίδιο στόχο πριν από κάθε μέτρηση. Μετά τη μέτρηση τα πλακίδια πλύθηκαν σε 70% αιθανόλη για την αφαίρεση της μήτρας και με αιματοξυλίνη /ηωσίνη (Η &? Ε). εικόνες υψηλής ανάλυσης από χρωματισμένο τομές ελήφθησαν με τη χρήση του συστήματος Mirax σάρωσης (Carl Zeiss) και συν-καταχωρηθεί με τα δεδομένα MALDI-IMS να συσχετίζονται φάσματα μάζας με τα ιστολογικά χαρακτηριστικά του ίδιου τμήματος.

Στατιστική Ανάλυση λήφθηκαν MALDI-IMS δεδομένων

δεδομένα MALDI-IMS και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το FlexControl 3.0, FlexImaging 3.0 και το ClinProTools 2.2 του λογισμικού (Bruker). Με τις περιοχές λογισμικού FlexImaging ενδιαφέροντος (ROI) ορίστηκαν σύμφωνα με την μορφολογία (PanIN, IPMN, PDAC, WT) και 40 επιλεγεί τυχαία μόνο φάσματα ανά ποντίκι ανά ROI-ομάδα εξήχθησαν στην ClinProTools για περαιτέρω ανάλυση. Αντίστοιχες βλάβες ταξινομήθηκαν από έναν εμπειρογνώμονα του παγκρέατος παθολόγο (Ι.Ε.). Οι εξάγεται φάσματα μάζας επαναρυθμιστεί σε κοινά «φόντο» κορυφές (φασματική ευθυγράμμιση) και κανονικοποιημένο στο συνολικό αριθμό ιόντων τους. Σε όλες τις αναλύσεις, τα φάσματα των δύο ομάδων ROIs συγκρίθηκαν και

σ τιμές

υπολογίστηκαν με τη συνδυασμένη Wilcoxon τεστ rank-sum για δύο μη-παραμετρικές, τακτικός, ανεξάρτητα δείγματα και Benjamini-Hochberg διορθωθεί.

P

τιμές ≤0.05 θεωρήθηκαν σημαντικές.

Για την επικύρωση της διακριτικής κορυφές η Ανάλυση Σημασία των μικροσυστοιχιών δοκιμής (SAM) πραγματοποιήθηκε και τα χαρακτηριστικά με ένα ποσοστό εσφαλμένης ανακάλυψη λιγότερο από 0.001 θεωρήθηκαν σημαντικές. Το βέλτιστο όριο διακρίσεις προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας την ανάλυση Δέκτης Λειτουργικά Χαρακτηριστικά (ROC). Η επαλήθευση εκτελέστηκε με ένα ανεξάρτητο σύνολο δειγμάτων (Fisher ακριβής t-test,

ρ

& lt? 0.001).

Peptide and Protein Ταυτοποίηση με υγρή χρωματογραφία και Tandem Φασματομετρίας Μάζας (LC-MS /MS)

τα πεπτίδια και πρωτεΐνες εξήχθησαν απευθείας από σιναπινικό οξύ παρασκευάζεται τομές ιστών. Για την εκχύλιση, 1 μΙ 30% ακετονιτρίλιο σε 0.1% τριφθοροξεικό οξύ εφαρμόσθηκε επί του τεμαχίου, τότε απομακρύνονται και είτε αναμιγνύεται με ένα ίσο όγκο-α-κυανο-4 υδροξυ-κινναμωμικού διάλυμα οξέος (10 mg /ml σε 30% ακετονιτρίλιο , 0,1% τριφθοροοξικό οξύ) σε έναν ανοξείδωτο ατσάλι στόχο MALDI για την αρχική μέτρηση MALDI MS ή αραιωμένο σε 10 μΐ 0.1% μυρμηκικό οξύ για μετέπειτα μετρήσεις LC-MS /MS.

για να ληφθούν ακριβή

m /z

τιμές για το

m /z

είδη ενδιαφέροντος, αποσπάσματα μήτρα από γειτονικά τμήματα του παγκρέατος ποντικού με υψηλή ένταση των αντίστοιχων ειδών m /z αναλύθηκαν με θετικό τρόπο ανακλαστήρα ιόντων MALDI MS. Οι μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν σε ένα φασματόμετρο μάζας ultrafleXtreme MALDI-TOF /TOF εξοπλισμένο με 1 kHz Smartbeam-ΙΙ λέιζερ (Bruker Daltonics). Κάθε φάσμα ήταν εξωτερικά βαθμονομηθεί χρησιμοποιώντας το πεπτίδιο βαθμονόμησης Πρότυπο II (Bruker Daltonics) και το «κυβικά βελτιωμένη» λειτουργία βαθμονόμησης, συνήθως δίνοντας μάζα ακρίβεια & lt?. 20 ppm

διεξήχθησαν LC-MS /MS ανάλυση των εκχυλισμάτων μήτρας σε ένα φασματογράφο μάζας LTQ Orbitrap (Thermo Fisher Scientific) συνδέεται με ένα νανο-HPLC (nanoLC Ultra, Eksigent Technologies). Τα πεπτίδια διαχωρίστηκαν επί αυτο-συσκευασμένη 75 μm χ 40 cm στήλη ανάστροφης φάσης (Reprosil, Dr. Maisch) με τη χρήση 25 λεπτά γραμμική βαθμίδωση (2-35% ακετονιτρίλιο σε 0.1% μυρμηκικό οξύ, ρυθμός ροής 300 nl /min). Άθικτο μάζες έκλουσης πεπτιδίων προσδιορίστηκαν σε 30.000 ανάλυση και επιλέχθηκαν οι τρεις πιο έντονες κορυφές για περαιτέρω κατακερματισμό από σύγκρουση που προκαλείται διαστάσεως (CID) και την απόκτηση των φασμάτων θραύσματος με χαμηλή ανάλυση (1.000). Μεμονωμένα φορτισμένα ιόντα καθώς και ιόντα με άγνωστη κατάσταση φόρτισης απορρίφθηκαν. Δυναμική αποκλεισμού ήταν ενεργοποιημένη και δυναμική διάρκεια του αποκλεισμού ορίστηκε σε 10 δευτερόλεπτα. Peaklist αρχεία δημιουργήθηκαν με τη χρήση μασκότ Distiller έκδοση 2.2.1.0 (Matrix Science) και αναζητήσεις σε βάσεις δεδομένων πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση της μασκότ έκδοση της μηχανής αναζήτησης 02.02.04 (Matrix Science) με τη βάση δεδομένων του ποντικιού IPI (έκδοση 3.26). Αναζήτηση αρχείων αποτέλεσμα εισήχθησαν ικριωμάτων (Proteome λογισμικού).

ανοσοφθορισμού και ανοσοϊστοχημείας

ανοσοφθορισμού ή ανοσοϊστοχημεία διεξήχθησαν σύμφωνα με τυποποιημένα πρωτόκολλα. Τα ακόλουθα αντισώματα χρησιμοποιήθηκαν: ALB1 (Santa Cruz Biotechnology, και Thermo Fisher Scientific), HepPar1 (ϋΑΚΟ), TMSB4X [24], [25] (Immundiagnostics, Bensheim) και CK19 (Troma-III? Αναπτυξιακών Μελετών Hybridoma Bank)

Ποσοτική RT-PCR

Real-Time PCR πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται previsouly [8]. Η κυκλοφιλίνη χρησιμοποιήθηκε για ομαλοποίηση.

P τιμές

υπολογίστηκαν με τη δοκιμασία Wilcoxon. Οι ακόλουθοι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν:

Cyclophillin-F /-R ATGGTCAACCCCACCGTGT /TTCTGCTGTCTTTGGAACTTTGTC

Tmsb4x-F /-R CCTCTGCCTTCAAAAGAAACA /GGGCAGCACAGTCATTTAAAC

Alb1-F /-R TTGGTCTCATCTGTCCGTCA /GGCAGCACTCCTTGTTGACT

τρανσφερίνης-F /-R ATCAAGGCCATTTCTGCAAGT /GGTTCAGCTGGAAGTCTGTTCC

α-εμβρυϊκής πρωτεΐνης-F /-R GGAGGCTATGCATCACCAGT /CATGGTCTGTAGGGCTTTGC

Η απολιποπρωτεΐνη Α4-F /-R AGAGCCTGAGGGAGAAGGTC /AGGTGTCTGCTGCTGTGATG

ELISA -Enzyme Linked ανοσορροφητική δοκιμασία

Το κιτ ELISA για τον ποσοτικό προσδιορισμό των συγκεντρώσεων στον ορό TMSB4X ελήφθη από Immundiagnostics (Bensheim). ELISA πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τους κατασκευαστές πρωτόκολλο.

Western Blot

ανάλυση Western Blot πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με πρότυπα πρωτόκολλα με αντισώματα έναντι ALB1 (Santa Cruz Biotechnology) και HSP90 (Cell Signaling).

Αποτελέσματα

MALDI-IMS στην προνεοπλασματικών αλλοιώσεις και PDAC μοντέλων GEM

για την αναγνώριση νέων βιοδεικτών για τις δύο πιο κοινές προνεοπλαστική παγκρεατικών αλλοιώσεων, PanIN και IPMN, εμείς εκτομή πάγκρεας από την έδρα GEM της PDAC: 13

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

, 8

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D? Ela-ΤΟΡα

και 5

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D? Ela-TGFa? Trp53

+ /LSL-R172H

ποντίκια μικτών ηλικία (3 έως 18 μήνες, ανάλογα με το γονότυπο). Αυτά τα ποντίκια αναπτύσσουν PanIN και IPMN αλλοιώσεις εξελίσσονται σε διηθητικό και μεταστατικό PDAC με διαφορετική εμφάνιση και επιθετικότητα [7], [8], [23]. Τέσσερις C57Bl /6J ποντίκια υπηρέτησε ως αυτοφυής μάρτυρας. Όλα πάγκρεας μετρήθηκαν σε ένα Ultraflex ΙΙΙ MALDI TOF /TOF Analyzer με χωρική ανάλυση των 70 μm. Η ροή εργασιών MALDI-IMS απεικονίζεται στο Σχήμα 1Α. Για να δοκιμαστεί η ακρίβεια της μεθόδου πρέπει πρώτα εκ νέου οπτικοποιείται το ήδη γνωστό μοριακό ιόν της ινσουλίνης [Μ + Η

+] εις 5808 επί παγκρέατα από ποντικούς άγριου τύπου. Το σήμα ινσουλίνη, η οποία δίνεται ως απεικόνιση χάρτη θερμότητας (όπου μπλε σημαίνει χαμηλότερη και κόκκινο υψηλότερη σχετική ένταση), όμορφα συν-εντοπισμένη με τις νησίδες του Langerhans (Σχήμα 1 Β), αποδεικνύοντας τη σωστή συσχέτιση των μετρούμενων

m /z

-Είδη με μορφολογικά χαρακτηριστικά με MALDI-IMS.

(Α) Επισκόπηση της ροής εργασίας MALDI-IMS. (Β) Εκ νέου οπτικοποίηση του μοριακού ιόντος της ινσουλίνης [Μ + Η

+] στο 5808 (κόκκινη γραμμή) στην μέση φάσμα ενός παγκρεατικού τμήμα από ένα C57BL /6 ποντίκι μετρήθηκε σε MALDI-IMS. Η ένταση του μετρούμενου σήματος είναι χρωματικά κωδικοποιημένο, όπου το κόκκινο χρώμα σημαίνει υψηλότερη ένταση στο σχετικά με τη θέση στο τμήμα. Η κορυφή της ινσουλίνης συν-εντοπίζεται με τα παγκρεατικά νησίδια (μεγεθύνονται σε απόσπασμα). (Γ) Ορισμός των ROIs στην H & amp? Ε τομές μετά από μέτρηση MALDI-IMS. Άνω πίνακα: H & amp? Ε τομές του

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

(

CK

) και ένα

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D? TGFa

(

CKT

) του ποντικιού. Μαύρες γραμμές κύκλο εξωκρινή ιστό, πράσινες γραμμές PanIN1, κίτρινες γραμμές PanIN2, τις γραμμές πορτοκαλί PanIN3, μπλε γραμμές IPMN και κόκκινες γραμμές PDAC διαγνωστεί περιοχές στο αντίστοιχο τμήμα. μπαρ κλίμακας αντιπροσωπεύει το 1 cm. Κάτω πίνακας: παραδείγματα των διαφόρων μορφολογικών τα ROI όπως υποδεικνύεται παρακάτω. Κλίμακα μπάρες αντιπροσωπεύουν 50 μm.

Η

Για να συγκρίνετε τα φάσματα των διαφορετικών μορφολογικών περιοχές, περιοχές ενδιαφέροντος (ROI) για PanIN, IPMN, PDAC, και φυσιολογικό εξωκρινή ιστό ορίστηκαν από έναν εμπειρογνώμονα σε παγκρεατικά παθολογία σε ο παγκρέατα χρησιμοποιώντας το λογισμικό FlexImaging και χρησιμοποιήθηκαν για τη σύγκριση των φασμάτων των αντίστοιχων περιοχών από το ίδιο τμήμα, καθώς και από άλλα τμήματα μεταξύ τους. Εικόνα 1Γ δίνει παραδείγματα του ορισμού των περιοχών στις μετριέται τμήματα (Σχήμα 1C άνω τμήμα) και τις διακριτές μορφολογικά χαρακτηριστικά (σχήμα 1Γ, κάτω πάνελ). Η ενιαία φάσματα αυτών των ROIs εξήχθησαν στο λογισμικό ClinProTools ανάλυση. Ως πρώτο πείραμα ελέγχου συγκρίναμε τα φάσματα των κανονικών παγκρεατικού ιστού (acini και αγωγών) από αγρίου τύπου (WT) ποντίκια με φαινοτυπικά φυσιολογικά εμφανίζονται acinar και πόρου ιστού από

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

ποντίκια που φέρουν το ογκογόνο

Kras

G12D

μετάλλαξη. Δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στα φάσματα μεταξύ αυτών των δύο ομάδων ήταν ανιχνεύσιμα, ως εκ τούτου εξασφαλίζει ότι δεν υπάρχουν ανιχνεύσιμες διαφορές στα φάσματα των WT και GEM (Πίνακας 1). Για περαιτέρω ανάλυση, φαινοτυπικά φυσιολογικά τα ROI από δύο γονότυπους ταξινομήθηκαν ως «κανονική»

Η

επόμενο ανέλυσε τα φάσματα από το φυσιολογικό ιστό της C57Bl /6J και

Ptf1a

+ /Cre?. Kras

+ /G12D

ποντίκια (n = 11) κατά φάσματα από προνεοπλασματικές βλάβες του

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

και

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D? Ela-ΤΟΡα

ποντίκια (PanINs και IPMNs, n = 24). Αυτές οι δύο ομάδες θα μπορούσαν να διακριθούν από 76 στατιστικά σημαντικές κορυφές (Wilcoxon τεστ rank-sum,

σ

τιμές Benjamini-Hochberg διορθωμένη) εκ των οποίων οι 26 ήταν βλάβης ειδικά (δηλαδή ειδικά για IPMNs και PanINs) και 50 κανονικοποιημένο ειδικά με το

σ

τιμές μεταξύ 0.000001 και 0.05. Για PanINs βρήκαμε 25 (

σ

= 0,000001 να

σ

= 0,05) και για IPMNs 18 (

σ

= 0,03 έως

σ

= 0,05 ) ειδικές

m /z

-Είδη αντίστοιχα, οι οποίες θα μπορούσαν να τους διακρίνουν από το φυσιολογικό ιστό. Επίσης, IPMNs και PanINs μπορούσε να διακριθεί από το άλλο με 6 PanIN ειδικές κορυφές (

σ

= 0.02 έως

σ

= 0.05, n = 19 έναντι 13 ποντίκια). Κατά τη σύγκριση των προ-νεοπλασματικών βλαβών με PDAC (n = 24 έναντι 10 ποντίκια) που ανιχνεύθηκαν 57 αλλοίωσης συγκεκριμένες και 11 PDAC-ειδική μάζα (

σ

= 0,00169 για

σ

= 0.038). Ο Πίνακας 1 παρέχει μια επισκόπηση όλων των ομάδων σε σύγκριση, ο αριθμός των διακρίσεις

m /z

-Είδη, οι αντίστοιχες

σ

αξίες και ο αριθμός των ζώων που χρησιμοποιούνται. Συμπληρωματικό πίνακα S1 παρέχουν λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με όλα τα σημαντικά προσδιορίζονται

m /z

-Είδη από τις πιο σημαντικές συγκρίσεις.

m /z

-Είδη 2790, 2812 και 2829 είναι συγκεκριμένα Βρέθηκαν σε PanIN βλάβες

Μια προσεκτικότερη εξέταση των PanIN συγκεκριμένες κορυφές αποκάλυψε ότι οι

m /z

-Είδη 2790, 2812 και 2829 έγιναν διακρίσεις PanINs από φυσιολογικό ιστό (Εικόνα 2Α). Η επικάλυψη του μέσου φασμάτων από PanINs και φυσιολογικό παγκρεατικού ιστού αποκάλυψε ότι στην τελευταία οι κορυφές ήταν σχεδόν μη ανιχνεύσιμα (Εικόνα 2Α). Περαιτέρω στατιστική εξέταση αυτών των κορυφών (δοκιμή Wilcoxon, διόρθωση Bonferroni) αποκάλυψε

σ

τιμές κάτω από 0,00001. Το Κουτί διανομής οικοπέδου και Αρχή Component Analysis (PCA) των PanINs και εξωκρινών ιστού απεικονίζονται σαφή διάκριση μεταξύ των δύο ομάδων (Σχήμα 2Β + C).

(Α) Επικάλυψη του ένα απόσπασμα από το μέσο όρο φασμάτων από το ROI -ομάδα «PanIN» (μπλε) και το ROI-ομάδα «WT» (ροζ). Η εξάπλωση των μεμονωμένων εντάσεων φάσματα υποδεικνύεται στο μπαρ? Α.υ. (Αυθαίρετες μονάδες). (Β) Dot Plot της έντασης της διανομής του

m /z

-Είδη 2829 στο PanINs (μπλε) και WT (ροζ) κάθε μεμονωμένου φάσματος. (C) PCA Βασισμένο διαφοροποίηση των εξωκρινών (ροζ) και PanIN (μπλε) του ιστού. (D) Re-οπτικοποίηση των σημαντικών κορυφών. Η

m /z

-Είδη 2829 σαφώς εκ νέου αποτυπώνει επί PanIN βλαβών (άνω πάνελ, μεγεθύνονται σε απόσπασμα), ενώ η κορυφή στα 6645 είναι ειδικό για το διαμέρισμα εξωκρινείς του παγκρέατος (κάτω πάνελ, μεγεθύνεται στη δεξιά πλευρά). Παρακάτω είναι ο μέσος όρος του φάσματος του μετρούμενου τμήματος.

Η

επόμενο ορατό

m /z

2829 για τα τμήματα του ιστού που αποδεικνύουν την εξειδίκευση αυτής της αιχμής για τις περιφέρειες PanIN στην εικόνα χάρτη θερμότητας ( Σχήμα 2D, άνω φωτογραφία), ενώ μια κορυφή σε

m /z

6645, η οποία ήταν μοναδική για τον φυσιολογικό ιστό ειδικά εκ νέου οπτικοποιούνται σε περιοχές με μορφολογικά φυσιολογικό παγκρεατικό ιστό (Εικόνα 2D, κάτω πίνακας).

επικύρωση Σημαντική Διάκριση Peaks σε μια ανεξάρτητη δείγμα Ρύθμιση

Για να επικυρώσετε τη σημασία του

m /z

είδη 2790 και 2829 σε ένα ανεξάρτητο σύνολο του δείγματος, πραγματοποιήσαμε δέκτης Λειτουργικά Χαρακτηριστικά (ROC ) ανάλυση με αυτές τις κορυφές για να καθορίσουν τις βέλτιστες διακρίσεις όρια. Με αυτά τα όρια δεν ήταν δυνατόν να γίνει διάκριση των ιστών από τις 10 ανεξάρτητες πάγκρεας ποντικών (4

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

και 6 άγριο αδερφάκια τύπου σε ηλικία των 6 μηνών) με ακρίβεια 100% (δοκιμή Fisher,

σ

& lt? 0.001).

πρωτεΐνη ταυτοποίηση των τριών πιο σημαντικό είδος με LC-MS /MS

Για την αναγνώριση της πρωτεΐνης διακρίσεις PanIN ειδικών σημαντική

m /z

είδη, πεπτίδια άμεσα εξάγεται από MALDI-IMS διαφάνειες και αρχικά αναλύονται με τη λειτουργία ανακλαστήρα MALDI MS να αποκτήσει ακριβείς μάζες (& lt? 20 ppm) για τα είδη MALDI IMS πριν με LC-MS αναλύσεις /MS. Ακολουθία αναζήτηση της βάσης δεδομένων των αποτελεσμάτων LC-MS /MS χρησιμοποιώντας τη μηχανή αναζήτησης μασκότ επέτρεψε τον εντοπισμό των τριών πολύ σημαντικών

m /z

είδη που δείχνουν σε δύο διαφορετικές πρωτεΐνες. Η

m /z

2790 είδη ταυτοποιήθηκε ως ένα πεπτίδιο που αντιπροσωπεύει το αμινο-άκρο της ώριμης μορφής του ορού αλβουμίνης (ALB1), ενώ τα δύο, το

m /z

2812 και το

m /z

2829 είδη αντιπροσωπεύονται δύο διαφορετικά πεπτίδια που ανήκουν στο καρβοξυ-άκρο της Θυμοσίνης βήτα-4 (TMSB4X). Η ταυτοποίηση των TMSB4X υποστηρίχθηκε περαιτέρω από την αναγνώριση των επιπλέον τέσσερα διαφορετικά πεπτίδια της καρβοξυ-τερματική περιοχή της πρωτεΐνης. Οι επαληθεύονται με το χέρι πεπτίδιο ταυτοποιήσεις ALB1 και TMSB4X και την αντίστοιχη MS /MS φάσματα παρατίθενται στον Πίνακα 2 και είναι διαθέσιμη στο συμπληρωματικό υλικό (Σχήμα S1).

Η

προσεκτικότερη έρευνα και την επικύρωση της προσδιορισμένης υποψήφιοι

για να διερευνηθεί αν ALB1 και TMSB4X είναι επίσης παρούσα σε μεταγραφικό επίπεδο σε ογκογόνο πάγκρεας, απομονώσαμε συνολικό παγκρέατος RNA από 8

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

και 6 άγριου τύπου νεογνά στη μικτή ηλικία μεταξύ 4,5 και 9 μήνες και πραγματοποιήθηκε ποσοτική ανάλυση RT-PCR για τα δύο αυτά υποψηφίους. Η έκφραση και των δύο μεταγραφές ήταν σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω στο

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

σε σύγκριση με ποντίκια άγριου τύπου (

σ

≤0.05, Εικόνα 3Β και . 4Α)

(Α) Ανοσοϊστοχημική ανάλυση των ALB1 παρουσιάζει ειδική χρώση των PanIN βλαβών του

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

(

CK

) ποντικούς αλλά όχι πόρου κύτταρα (n = 10 ποντικοί). χρώση ανοσοφθορισμού για ALB1 και το πορογενές δείκτη CK19 καταδεικνύει συν-εντοπισμό των δύο πρωτεϊνών. Όλες οι μπάρες κλίμακας αντιπροσωπεύουν 50 μm. (Β) mRNA της

Alb1

και των ηπατικών γονιδίων

α-εμβρυϊκής πρωτεΐνης (AFP)

,

Η απολιποπρωτεΐνη Α4 (APOa4)

και

τρανσφερίνης (Tfn)

όλα σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω στο πάγκρεας από το

CK

ποντίκια σε σύγκριση με τα άγρια ​​έλεγχο τύπου (

σ

= 0.04 για το

Alb1

,

σ

= 0.008 για

Afp

,

σ

= 0.04 για το

APOa4

,

p = 0,004

για

Tfn

, n = 7 εναντίον 5 ποντικοί). Τα επίπεδα έκφρασης κανονικοποιούνται σε δείγματα των ποντικών άγριου τύπου. Όλες οι γραμμές σφάλματος υποδεικνύουν τις τυπικές αποκλίσεις κανονικοποιήθηκαν προς τη μέση τιμή του άγριου τύπου. (Γ) Western Blot για ALB1 σε ολόκληρα προϊόντα λύσης από παγκρεατικά άγριου τύπου και

CK

ποντίκια (η = 3). ALB1 έκφραση στο προ-νεοπλασματικών ιστών σθεναρά αυξημένη σε σύγκριση με την κανονική πάγκρεας. (D) Ανοσοϊστοχημική ανάλυση της ηπατικής δείκτη HepPar1 σε έναν άνθρωπο αλλοίωση PanIN3

Η

(Α) TMSB4X mRNA αυξάνεται σημαντικά σε

Ptf1a

+ /Cre?. Kras

+ /G12D (CK)

ποντίκια σε σύγκριση με τα άγρια ​​έλεγχο τύπου (

σ

= 0.01, n = 8 έναντι 6 ποντίκια). Τα επίπεδα έκφρασης κανονικοποιούνται σε άγριου τύπου. Οι ράβδοι σφάλματος δείχνουν τις τυπικές αποκλίσεις κανονικοποιήθηκαν προς τη μέση τιμή του άγριου τύπου. (Β) Χρώση για TMSB4X σε δείγματα ιστού από 10-30 εβδομάδων

CK

ποντικών (η = 10) δείχνει έκφραση σε PanINs (κεφαλή βέλους) αλλά όχι σε κύτταρα κυψελιδικά (αστερίσκος) (i). Υψηλής ποιότητας mPanIN3 εκφράζουν TMSB4X (ii). Έκφραση σε ανθρώπινο PanIN3 (iii) και ανθρώπινη PDAC (IV) είναι επίσης ανιχνεύσιμα. Κλίμακα μπάρες αντιπροσωπεύουν 50 μm. (Γ) ELISA για TMSB4X από δείγματα ορού του άγριου τύπου και

CK

ποντικών (n = 7 έναντι 14 ποντίκια). Η συγκέντρωση των TMSB4X ορού είναι σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω στο

CK

ποντίκια (

σ

= 0,043, δοκιμή Wilcoxon). (D) ELISA για TMSB4X από δείγματα ορού των PDAC και των ασθενών CP, καθώς και υγιείς δότες. Οι διάμεσοι χαρακτηρίζεται από κόκκινες γραμμές.

Η

Για να επικυρώσετε την ορθή ταυτοποίηση ALB1 ανοσοϊστολογική χρώση και ανάλυση Western Blot για ALB1 έγιναν. ALB1 έκφραση σε τομές από

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

ποντικών παρατηρήθηκε σε PanIN αλλοιώσεις αλλά όχι σε φυσιολογικό παγκρεατικό αγωγούς και λοβιώδη κύτταρα (n = 10). Επίσης, η ανάλυση ανοσοφθορισμού για ALB1 και το πορογενές δείκτη CK19 σε κρυοτομές από

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

και

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D? Ela-TGFa

ποντίκια απέδειξαν συν-εντοπισμό των δύο πρωτεϊνών σε βλάβες PanIN (Σχήμα 3Α). Είναι σημαντικό, οι

m /z

είδη 2790 δεν εκ νέου να απεικονίσει σε μικρά και μεγάλα σκάφη MALDI-IMS μετριέται τμήματα (Εικόνα S2). Επίσης Western Blot ανάλυση ολόκληρου του παγκρέατος λύματα αποκάλυψε αυξημένη έκφραση της πρωτεΐνης ALB1 στο

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

και

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

ποντίκια σε σύγκριση με τους ελέγχους άγριου τύπου (Σχήμα 3C).

προηγουμένως αναφερθεί ότι παγκρεατικά εξωκρινή κύτταρα μπορούν να transdifferentiate ηπατοκύτταρα και ότι οι ηπατικές εστίες μπορεί να βρεθεί στο ενήλικο πάγκρεας και σε PDAC [26], [27], [28], [29]. Ως εκ τούτου, ήμασταν περιέργεια να μάθω αν το εξαιρετικά αυξημένο σήμα ALB1 προσδιορίζονται από MALDI-IMS θα μπορούσε να οφείλεται σε ηπατική διαδικασία δια-του

Kras

G12D

-ενεργοποιημένου παγκρεατικά κύτταρα. Για να ελέγξει την υπόθεση αυτή απομονώσαμε RNA από ολόκληρο το πάγκρεας του

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D άγρια ​​ποντίκια τύπου μεταξύ 4,5 και 9 μήνες και πραγματοποιήθηκε ποσοτική RT-PCR για το συκώτι

και ειδικούς δείκτες

τρανσφερίνης

(Tfn),

Alfa-εμβρυϊκής πρωτεΐνης

(AFP) και

Η απολιποπρωτεΐνη Α4

(APOa4). Το επίπεδο έκφραση αυτών των δεικτών ήταν σημαντικά αυξημένα σε

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

σε σύγκριση με ποντίκια άγριου τύπου που υποδεικνύει μια πιθανή διαδικασία δια-συμβαίνουν σε PanINs (

p

≤0.05, Σχήμα 3Β). Επιπλέον πραγματοποιήσαμε ανοσοϊστοχημική ανάλυση για το συκώτι-ειδικό δείκτη HepPar1 στις 14 PanIN1, 4 PanIN2 και 4 αλλοιώσεις PanIN3. Δύο PanIN3 αλλοιώσεις θετικώς βάφτηκαν για HepPar1 (Σχήμα 3D), υποδεικνύοντας ηπατική χαρακτηριστικά των κυττάρων σε υψηλής ποιότητας PanINs.

Όσον αφορά τη δεύτερη προσδιορίζονται πρωτεΐνη, μπορούμε επικυρωθεί έκφραση TMSB4X σε ποντικού και ανθρώπου PanIN βλαβών και PDAC αλλά όχι σε acinar, πόρου και κύτταρα νησιδίων (Εικ. 4Β). Για τον ποσοτικό προσδιορισμό που χρωματίζονται τμήματα από 10

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

ποντίκια με PanINs και βρήκε όλα αυτά να είναι θετική για TMSB4X. Αξίζει να σημειωθεί ότι η έκφραση ήταν υψηλή σε ήδη χαμηλού βαθμού PanINs και έμεινε σε κακοήθεις αλλοιώσεις, υποστηρίζοντας τα αποτελέσματα της προσέγγισης μας MALID-IMS-based για την αναγνώριση του προ-νεοπλασματικών δεικτών βλάβης που εξακολουθούν να υπάρχουν στο PDAC. Δεδομένου TMSB4X είναι ένα μικρό μόριο και έχει ανιχνευθεί στα σωματικά υγρά προηγουμένως, έχουμε την επόμενη διερευνήθηκε κατά πόσο μπορεί να είναι ανιχνεύσιμα με ELISA σε δείγματα ορού ποντικών με PanIN αλλοιώσεις. Είναι ενδιαφέρον, βρήκαμε σημαντικά ρυθμισμένη προς τα πάνω τα επίπεδα του αίματος σε

Ptf1a

+ /Cre? Kras

+ /G12D

σε σύγκριση με τον έλεγχο ποντίκια WT, υποστηρίζοντας την κύρια αξία του παρουσίασε τη στρατηγική ανίχνευσης δείκτη (Σχ 4C. ). Ωστόσο, όταν πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση χρησιμοποιώντας ένα σύνολο από ανθρώπινα δείγματα από δότες και ασθενείς με χρόνια παγκρεατίτιδα και PDAC, καμία σημαντική διαφορά ήταν αξιοσημείωτη μεταξύ αυτών των ομάδων (Εικ. 4D).

Συζήτηση

Λόγω της συνεχιζόμενης αποτυχίας των θεραπευτικών προσεγγίσεων για τη βελτίωση της επιβίωσης σε ασθενείς PDAC, η έγκαιρη διάγνωση είναι καθοριστικής σημασίας για την καλύτερη έκβαση σε αυτή την διαφορετικά θανατηφόρο ασθένεια. Σε αυτή τη μελέτη, εφαρμόσαμε MALDI Απεικόνιση Φασματομετρίας Μάζας (ΜΑΙ_ϋΙ-IMS) με χωρική ανάλυση για

in situ

πρωτεομική ανάλυση των προ-νεοπλασματικών αλλοιώσεων του παγκρέατος σε GEM με ενδογενή PDAC. Εμείς ειδικώς το ζήτημα κατά πόσον είναι δυνατόν να προσδιοριστούν οι πρωτεΐνες ή πεπτίδια που μπορεί να διακρίνει μεταξύ μορφολογικά φυσιολογικό παγκρεατικό ιστό, PanIN /IPMN προκαρκινικές αλλοιώσεις και PDAC.

Ενώ η ανάγκη για την έγκαιρη ανίχνευση της PDAC, ιδανικά σε ένα preinvasive κατάσταση, έχει προφανή σημασία, πρωτεομική ανάλυση στον άνθρωπο εμποδίζονται από εγγενείς ατομικές και εντός του όγκου γενετικές παραλλαγές, καθώς και συνεισφερόντων παραγόντων, συμπεριλαμβανομένων των περιβαλλοντικών και διατροφικών συνθηκών. Επιπλέον, η απόκτηση του παγκρέατος ιστού με προνεοπλασματικής PanIN ή IPMN βλάβες δεν είναι εφικτή για προφανείς λόγους. Έτσι, GEM ανακεφαλαιώνοντας ανθρώπινης παγκρεατικής καρκινογένεση παρέχουν μια εξαιρετική πλατφόρμα μελέτη και έχουν χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση των βιοδεικτών του ορού χρησιμοποιώντας ανάλυση SELDI-TOF [7]. Σε μια άλλη μελέτη,

Pdx1-Cre? Kras

+ /G12D? ΙΝΚ4 & /ΤΑΠ

LOX /LOX

ποντίκια χρησιμοποιήθηκαν για το πλάσμα πρωτεομική ανάλυση και οι υποψήφιοι επικυρώθηκαν στο αίμα των ασθενών με PDAC [ ,,,0],30]. Μια πρόσφατη μελέτη από Taguchi συνέκρινε τα προφίλ των πρωτεϊνών του πλάσματος από τέσσερα μοντέλα ποντικών με καρκίνο του πνεύμονα με προφίλ των μοντέλων του παγκρέατος, των ωοθηκών, του παχέος εντέρου, του προστάτη, και του καρκίνου του μαστού και δύο μοντέλα φλεγμονής. Έδειξαν ενδιαφέρον για ανθρώπινο καρκίνο του πνεύμονα των πρωτεϊνικών υπογραφών που προσδιορίζονται βάσει των μοντέλων ποντικού [31]. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε αυτά GEM να είναι μια κατάλληλη πλατφόρμα για ταυτοποίηση βιοδεικτών χρήση MALDI-IMS.

MALDI-IMS είναι μια ταχέως αναπτυσσόμενη προσέγγιση για την ανάλυση των μοριακών ιστού με υψηλό δυναμικό για κλινικά σχετικές ερωτήσεις συμπεριλαμβανομένου του προσδιορισμού των βιοδεικτών, ταξινόμηση των όγκων , παρακολούθησης απόκρισης θεραπεία και απεικόνισης των ναρκωτικών [14], [16], [32], [33], [34], [35], [36].