Αφηρημένο

καρκίνος του παχέος εντέρου είναι μία από τις πιο κοινές κακοήθεις καρκίνους παγκοσμίως, αλλά οι τρέχουσες θεραπευτικές προσεγγίσεις για τον προχωρημένο καρκίνο του παχέος εντέρου είναι λιγότερο αποτελεσματική. Αυτή η μελέτη διερεύνησε τις ενώσεις μεταξύ της έκφρασης του παράγοντα πυρηνικής μεταγραφής SOX4 και διάφορα κλινικοπαθολογική παραμέτρους καθώς και την επιβίωση των ασθενών. Τα επίπεδα έκφρασης του πυρηνικού SOX4 αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία? τα δεδομένα αποτελούνται ιστοί κόλου από 263 ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. Ζεύγη

t

δοκιμές χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση των διαφορών στην έκφραση πυρηνικών SOX4 μεταξύ όγκου και μη όγκου ιστών από κάθε ασθενή. Δίπλευρη Χ

2 δοκιμές έγιναν για να προσδιοριστεί εάν οι διαφορές στην έκφραση των πυρηνικών SOX4 και κλινικοπαθολογική παραμέτρους ήταν σημαντικές. Time-to-event τελικά σημεία για κλινικοπαθολογική παραμέτρων καταγράφηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier και η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίσθηκε με τη χρήση μονοπαραγοντική δοκιμές log-rank. Cox αναλογικό μοντέλο κινδύνου χρησιμοποιήθηκε για την πολυπαραγοντική ανάλυση για να προσδιοριστεί η ανεξαρτησία των προγνωστικών αποτελεσμάτων της έκφρασης πυρηνικών SOX4. Η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 συσχετίστηκε σημαντικά με το βάθος της εισβολής (

P

= 0,0041), μακρινή μετάσταση (

P

& lt? 0,0001), και το στάδιο (

P

= 0,0001 ). Οι ασθενείς που εμφανίζονται υψηλά επίπεδα έκφρασης των πυρηνικών SOX4 πέτυχε σημαντικά φτωχότερη επιβίωση ελεύθερη νόσου, σε σύγκριση με τους ασθενείς με επίπεδα έκφρασης χαμηλά SOX4 (

P

& lt? 0.001). ανάλυση παλινδρόμησης μονοπαραγοντική Cox έδειξε ότι η υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 ήταν ένα σαφές προγνωστικό δείκτη για τον καρκίνο του παχέος εντέρου (

P

= 0,001). Η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως δείκτης για την πρόβλεψη της έκβασης ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου

Παράθεση:. Lin C-M, Fang C-L, Hseu Y-C, Chen C-L, Wang J-W, Hsu S-L, et al. (2013) Κλινική και προγνωστική Επιπτώσεις του μεταγραφικού παράγοντα SOX4 σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 8 (6): e67128. doi: 10.1371 /journal.pone.0067128

Επιμέλεια: Irina V. Λεμπέντεβα, Enzo Life Sciences, Inc., Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 21 Μαρ, 2013? Αποδεκτές: 14 Μαΐου 2013? Δημοσιεύθηκε: 27 Ιουνίου του 2013

Copyright: © 2013 Lin et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση από Chi Mei Ιατρικό Κέντρο (Grant Νο 101CM-ΤΜΣ-03) (https://www.chimei.org.tw). Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνος του παχέος εντέρου είναι ένας από τους πιο συχνούς καρκίνους και μια κοινή αιτία των θανάτων από καρκίνο σχετίζονται [1]. Στην Ταϊβάν, ο καρκίνος του παχέος εντέρου κατατάσσεται ως η πιο συχνά διαγιγνώσκεται κακοήθεια και προκαλεί περισσότερους από 4900 θανάτους ετησίως (https://www.doh.gov.tw/statistic/index.htm? Προσπελαστεί τον Σεπτέμβριο του 2012). Παρά τις τρέχουσες χειρουργικές τεχνικές και χημειοθεραπείας που έχουν γίνει σημαντικές βελτιώσεις, λόγω της κακής πρόγνωσης και μακρινή εισβολή και η μετανάστευση, η συνολική επίπτωση του καρκίνου του παχέος εντέρου είναι περίπου 5% και το ποσοστό επιβίωσης 5-χρόνια των ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου είναι πολύ χαμηλή [2]. Έτσι, ο προσδιορισμός νέων στόχων για την ανάπτυξη των μη-συμβατικές θεραπείες είναι επείγον και θα επωφεληθούν από την πρόοδο στην ευρεία και βαθιά κατανόηση της μοριακής παθογένεσης του καρκίνου του παχέος εντέρου.

Ανάμεσα στους προγνωστικούς δείκτες τώρα διαθέσιμο για καρκίνο του παχέος εντέρου, το πιο σημαντικό είναι η αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον καρκίνο (AJCC) στάδιο καθορίζεται από το βάθος της εισβολής, τη συμμετοχή των λεμφαδένων, και μακρινή μετάσταση. Ωστόσο, η πρόγνωση ποικίλλει ακόμα και μεταξύ των ασθενών στο ίδιο στάδιο. Τις τελευταίες δεκαετίες, αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι οι γενετικές αλλοιώσεις μπορεί να παίζει ένα ρόλο στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου του παχέος εντέρου [3], [4]. Μελέτες στη μοριακή παθολογία μπορεί να βοηθήσει στην κατανόηση της παθογένειας της νόσου και μπορεί επίσης να αποκαλύψει χρήσιμο προγνωστικό μοριακών δεικτών. Ορισμένες προτεινόμενες βιολογικών προγνωστικούς δείκτες περιλαμβάνουν υπερέκφραση της CK2 πρωτεΐνης κινάσης, του αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF), ενισχυτής του Zeste ομολόγου 2 και τρανσγλουταμινάση 2 [5] – [8].

Στους ανθρώπους, η περιοχή φύλο καθορισμού Y (SRY) οικογένεια κουτί, που αναφέρεται επίσης ως οικογένεια SOX, περιλαμβάνει 20 άκρως συντηρημένη παράγοντες μεταγραφής που παίζουν σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη. Αυτοί οι παράγοντες μεταγραφής που ορίζεται από μία διατηρημένη αλληλουχία υπογραφή στο πεδίο σύνδεσης ϋΝΑ ομάδα υψηλής κινητικότητας (HMG) (DBD) [9], [10]. SOX4 είναι μια πρωτεΐνη 47-kDa που κωδικοποιείται από ένα μόνο γονίδιο εξόνιο, το οποίο διατηρείται σε υψηλό βαθμό στα σπονδυλωτά. Στα ποντίκια, SOX4 εκφράζεται ειδικά στην ωοθήκη, όρχεις, μαστικού αδένα, και θύμο και σε Τ ποντικού και προ-Β λεμφοκυτταρική κυτταρικές γραμμές [11]. Επιπλέον, SOX4 είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη της καρδιάς, λεμφοκύτταρα, και θυμοκύτταρα, και SOX4-null ποντίκια πεθαίνουν από καρδιακές ανωμαλίες [12]. Η πολλαπλασιαστική ικανότητα των Β-κυττάρων προγόνων είναι σοβαρά μειωμένη σε κύτταρα από ποντίκια knockout SOX4 [13].

Η κλινική σημασία της SOX4 έχει αποκτήσει ιδιαίτερη προσοχή τα τελευταία χρόνια, με πολυάριθμες αναφορές που υποδηλώνει ότι η SOX4 μπορεί να συνεισφέρει στον όγκο προχώρηση. Τρεις ανεξάρτητες μελέτες προσυμπτωματικού ελέγχου για σημαντικό ογκογονίδια έδειξε ότι SOX4 συχνά μεταβάλλεται μέσω ρετροϊικής ενθέσεις [14] – [16]. Ο ιός λευχαιμίας ποντικού τυπικά στοχευμένη SOX4, και σταθεροποιήθηκε το μήνυμα SOX4 να παράγουν Β-κυτταρικά λεμφώματα που επέδειξαν αυξημένα επίπεδα μήνυμα SOX4 [16]. Η αυξημένη έκφραση SOX4 σχετίζεται με όγκους της ουροδόχου κύστης, του προστάτη, και με όγκους του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου [17] – [19]. Ωστόσο, ο ρόλος του SOX4 σε τέτοιες όγκους δεν είναι πλήρως κατανοητός και τα αναφερόμενα στοιχεία έχουν δείξει ορισμένες αντιφάσεις. Ενώ SOX4 knockdown είχε σαν αποτέλεσμα την απόπτωση των κυττάρων ACC3 αδενοειδών κυστική καρκινώματος, SOX4 υπερέκφραση προωθείται διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης των κυττάρων καρκινώματος κόλου HCT116 [20], [21]. Η microRNA (miRNA) miR-335 ανέστειλε μεταστατικό εισβολή των κυττάρων και ενήργησε, τουλάχιστον εν μέρει, μέσω της στόχευσης

sox4

και υποθετικό στόχο του

TNC

, το οποίο κωδικοποιεί ένα εξωκυτταρικό συστατικό μήτρας εμπλέκεται στην κυτταρική μετανάστευση [22]. Αντίθετα, όσο υψηλότερο είναι το επίπεδο της έκφρασης SOX4, τόσο καλύτερη είναι η πρόγνωση για τους ασθενείς με μυελοβλαστώματα και άλλους τύπους όγκων [23]. Έτσι, SOX4 μπορεί να ασκεί διαφορετικές επιδράσεις σε κύτταρα όγκου ανάλογα με το πλαίσιο και πρωταρχικός μηχανισμός μετασχηματισμού? Οι περαιτέρω μελέτες δικαιολογείται να διευκρινιστεί αυτό το θέμα.

Μέχρι σήμερα, η προγνωστική σημασία των επιπέδων έκφρασης των πυρηνικών SOX4 στον ανθρώπινο καρκίνο του παχέος εντέρου δεν έχει τεκμηριωθεί. Αυτή η μελέτη διερεύνησε τις συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης των πυρηνικών SOX4 και κλινικοπαθολογική παραμέτρους, και αξιολόγησε τη σημασία της πυρηνικής SOX4 στην πρόβλεψη την πρόγνωση για τους ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική Δήλωση

Η επιτροπή δεοντολογίας σε Chi Mei Ιατρικό Κέντρο ενέκρινε το πρωτόκολλο απόκτηση ιστού για την ανοσοϊστοχημική και ανοσοαποτύπωση μελέτη. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε συμμετέχοντα πριν την απόκτηση του ιστού.

Οι συμμετέχοντες και οι δείγματα

Συλλέξαμε 263 περιπτώσεις συνεχόμενες καρκίνου του παχέος εντέρου από τα ιατρικά αρχεία του Chi Mei Ιατρικό Κέντρο στην Ταϊβάν. Όλοι οι ασθενείς που περιλαμβάνονται στην ομάδα μελέτης μας αντιμετωπίστηκαν μεταξύ των ετών 1998 και 2005, και είχε λάβει κολεκτομή με λεμφαδένων. Όλες οι περιπτώσεις πήρε την απόδειξη ιστού αδενοκαρκινώματος μέσω κολονοσκοπικής βιοψία πριν από τη λειτουργία. Πληρότητα των χειρουργική εκτομή επιτεύχθηκε σε όλες τις περιπτώσεις, και παθολογική εξέταση αποκάλυψε καμία εμπλοκή του όγκου των περιθωρίων εκτομής σε χειρουργικά δείγματα. Κανένας από τους ασθενείς της μελέτης μας είχαν λάβει προεγχειρητική χημειοθεραπεία και /ή ακτινοθεραπεία. Το τμήμα μη-όγκου ελήφθη από χονδροειδώς φυσιολογικό βλεννογόνο του παχέος εντέρου, ξεχωριστό από τον όγκο, σε εκτομή δείγμα κόλον. Κλινικοπαθολογικοί παράμετροι του καρκίνου του παχέος εντέρου προσδιορίστηκαν σύμφωνα με την ταξινόμηση AJCC. Η διάρκεια παρακολούθησης για την επιβίωση ελεύθερη νόσου ορίστηκε ως το χρονικό διάστημα μεταξύ της ημερομηνίας λειτουργία και την ημέρα της υποτροπής, σύμφωνα με το διάγραμμα του ασθενούς. Για κάθε ασθενή, αναλύσαμε ένα ζευγάρι όγκου και του παχέος εντέρου μη καρκινικών ιστών για τον προσδιορισμό της έκφρασης πυρηνικών SOX4.

ανοσοϊστοχημική ανάλυση

έκφραση Πυρηνική SOX4 αναλύθηκε με ανοσοϊστοχημεία. μπλοκ ιστού εγκλεισμένες σε παραφίνη τομές των 5 μm και μεταφέρθηκαν σε πλακίδια μικροσκοπίου (Muto Pure Chemicals Co. Ltd., Tokyo, Japan). ιστός του μαστού χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος για SOX4. Ο αρνητικός έλεγχος συνεπάγεται παράλειψη του πρωτογενούς αντισώματος και επώαση με φωσφορικό ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα. Οι τομές αποκηρωμένα με ξυλόλιο, που ακολουθείται από επανενυδάτωση σε διαβαθμισμένες αλκοόλες. Αποπαραφινωθείσες τομές επωάστηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα ρΗ 6.0 κιτρικού για 40 λεπτά στους 95 ° C σε ηλεκτρική εστία για να ανακτήσετε αντιγόνα. Περαιτέρω μπλοκάρισμα αντιγόνο διεξήχθη χρησιμοποιώντας Dako REAL υπεροξειδάση Ανασταλτικό Διάλυμα (Dako North America Inc., Carpinteria, CA) για 5 λεπτά. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα: πολύκλωνο αντι-SOX4 (Life-Span, Βικτώρια, Καναδάς) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, σε αραίωση 1:3200. Η ανίχνευση του ανοσοαντιδραστικού χρώση διεξήχθη με τη χρήση του συμπλόκου μέθοδο αβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ένα ευαίσθητο Dako REAL EnVision Σύστημα Ανίχνευσης (Dako North America Inc., Carpinteria, CA) χρησιμοποιήθηκε. Μετά την επώαση με διαμινοβενζιδίνη για 5 λεπτά, οι τομές βάφτηκαν αντίθετα με αιματοξυλίνη και συναρμολογείται σε Dako Faramount Υδατικό Τοποθέτηση Medium (Dako North America Inc., Carpinteria, CA) για μικροσκοπική ερμηνεία. Ανοσοαντιδραστικότητα ημιποσοτικά σκόραρε με βάση την ένταση της ανοσοχρώσης: 0, καμία χρώση? 1, ασθενής χρώση? 2, μέτρια χρώση? 3, ισχυρή χρώση. Τμήματα με σκορ 0 ή 1 εμφανίζεται χαμηλή έκφραση του SOX4, ενώ εκείνοι που σημείωσε 2 ή 3 ορίστηκαν ως έχει υψηλή έκφραση ή υπερέκφραση SOX4. Κλινικά συλλογή δεδομένων και ανοσοϊστοχημική ανάλυση διεξήχθησαν ανεξάρτητα το ένα από το άλλο, σε μια μελέτη ερευνητή τυφλή.

Cell Culture

Ανθρώπινη φυσιολογική (FHC) και καρκίνου του παχέος εντέρου κυτταρικές γραμμές (DLD-1 και WiDr ) λήφθηκαν από την American Type Culture Collection (ATCC? Manassas, VA, USA). Οι κυτταρικές σειρές που είχαν επικυρωθεί από το πρόγραμμα κυτταρικής βιολογίας ATCC, και διαβιβάστηκαν για όχι περισσότερο από 6 μήνες πριν από τη νέα κύτταρα εξέρχονται από το παγωμένη κατάσταση ή ένα νέο δείγμα κυττάρων αγοράστηκε από την ATCC. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε DMEM /F-12 (FHC), RPMI-1640 (DLD-1), ή ΜΕΜ (WiDr) μέσα συμπληρωμένα με 10% ορό εμβρύου μόσχου, 100 μονάδες /ml πενικιλλίνη G, 100 μg /mL θειική στρεπτομυκίνη, και 250 ng /mL αμφοτερικίνη Β

πυρηνικής πρωτεΐνης Παρασκευή

πυρηνικές πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο NE-PER Nuclear Extraction (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα δείγματα αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι να χρησιμοποιηθούν. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας ένα BCA Protein Assay Kit (Pierce Biotechnology) με αλβουμίνη βόειου ορού ως πρότυπο.

ανοσοαποτύπωσης

μετουσιωμένα δείγματα πρωτεΐνης υποβλήθηκαν σε 12% SDS-PAGE. Οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης, και μπλοκάρει κηλίδες επωάστηκαν στους 4 ° C όλη τη νύκτα με αντι-SOX4 πολυκλωνικό αντίσωμα (1:1000 αραίωση). πρωτεΐνη σύνδεσης ΤΑΤΑ χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος για την ίση φόρτωσης πρωτεΐνης. Τα στυπώματα επωάστηκαν περαιτέρω με δευτερογενή αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση (Sigma, St. Louis, ΜΟ) για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Αυτά στη συνέχεια επωάστηκαν με SuperSignal West Femto Μέγιστο Ευαισθησία Υπόστρωμα (Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL), και εκτέθηκαν σε Fuji Film ιατρική ακτίνων Χ (Fuji Photo Film Co., Tokyo, Japan). Επεξεργασία εικόνας πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του λογισμικού Image Gauge Fuji.

Στατιστική Ανάλυση

Paired

t

δοκιμασίες χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση της διαφοράς στην έκφραση πυρηνικών SOX4 μεταξύ όγκου και μη όγκου ιστούς για κάθε ασθενή. Εξετάσαμε διάφορες κλινικοπαθολογική παραμέτρους: την ηλικία, το φύλο, το βάθος της εισβολής, κομβική θέση, μακρινή μετάσταση, το στάδιο, το βαθμό διαφοροποίησης, αγγειακή διαπερατότητα και περινευρικό εισβολή. Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης των πυρηνικών SOX4 και κάθε κλινικοπαθολογική παράμετρος εξετάστηκε χρησιμοποιώντας χ

2 τεστ. Τα τελικά σημεία time-to-εκδήλωση για όλους τους κλινικοπαθολογική παραμέτρων καταγράφηκε με τη μέθοδο Kaplan-Meier, και ο βαθμός της σημασίας υπολογίστηκε με το τεστ μονοπαραγοντική log-rank. Παραμέτρους που προέκυψαν ως σημαντική (

P

≤0.05) στην μονοπαραγοντική ανάλυση ενεγράφησαν ως μεταβλητές στο μοντέλο παλινδρόμησης Cox πολυμεταβλητή, και η αναλογία κινδύνου (HR) και η ανεξαρτησία των προγνωστικών αντίκτυπο θα μπορούσε να προσδιοριστεί σε μια σταδιακή πίσω της μόδας. Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας SPSS έκδοση λογισμικού 17.0 (SPSS, Chicago, IL). Ένα

P

αξία των & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

Δημογραφικά

Αυτή η μελέτη συμμετείχαν 263 ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου, 154 από τους οποίους ήταν. άνδρες και 109 ήταν γυναίκες (Πίνακας 1). τις ηλικίες των ασθενών κυμαίνονταν 21-92 ετών κατά την πρώτη διάγνωση (μέση τιμή ± standarad απόκλιση (Τ.Α.): 68,0 ± 12,9 χρόνια). Με βάση την ταξινόμηση AJCC, 25 ασθενείς ήταν στο στάδιο I, 91 ήταν σε στάδιο II, 108 ήταν στο στάδιο ΙΙΙ, και 39 ήταν σε στάδιο IV. Η περίοδος παρακολούθησης για όλους τους ασθενείς κυμαίνεται από 0 έως 146 μηνών (μέση τιμή ± Τ.Α .: 58,6 ± 40,2 μήνες). Κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης, 116 ασθενείς πέθαναν από καρκίνο του παχέος εντέρου.

Η

Έκφραση Πυρηνική SOX4 ρυθμίζεται αυξητικά και των συνδεδεμένων με κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους σε Colon Cancer

Χρησιμοποιήσαμε ανοσοϊστοχημική ανάλυση για τη διερεύνηση της έκφρασης των πυρηνικών SOX4 σε ιστούς που λαμβάνονται από τους ασθενείς της μελέτης μας (Σχήματα 1Α έως C). έκφραση Πυρηνική SOX4 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ιστούς όγκων σε σχέση με το μη καρκινικούς ιστούς (

P

& lt? 0.001). Η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 (βαθμολογίες 2 ή 3) παρατηρήθηκε σε 119 του 263 ασθενείς (45,2%). Η ανάλυση στυπώματος Western κατέδειξε επίσης ότι η έκφραση του SOX4 αυξήθηκε σημαντικά σε καρκίνο του παχέος εντέρου κύτταρα και ιστούς σε σύγκριση με τα φυσιολογικά κύτταρα και τους ιστούς (Σχήμα 1 D). Επιπλέον, η ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR ανάλυση έδειξε ότι η έκφραση του mRNA SOX4 αυξήθηκε σημαντικά σε ιστούς όγκων σε σύγκριση με τα μη καρκινικούς ιστούς (Πίνακας 2). Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, η υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 συσχετίζεται σημαντικά με τις ακόλουθες παραμέτρους: το βάθος της εισβολής (

P

= 0,0041), μακρινή μετάσταση (

P

& lt? 0,0001), και το στάδιο (

P

= 0,0001). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση προέκυψε μεταξύ υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 και την ηλικία, το φύλο, κομβική θέση, τον βαθμό διαφοροποίησης, αγγειακή εισβολή, ή περινευρικό εισβολή

Πίνακες Α έως Γ:. Colon δείγματα καρκίνου αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία με ένα αντίσωμα ενάντια SOX4 . Πίνακας Α δείχνει ένα δείγμα χωρίς έκφραση SOX4? Πίνακας Β δείχνει ένα δείγμα με χαμηλό επίπεδο έκφρασης της SOX4? Πίνακας Γ δείχνει ένα δείγμα με υψηλό επίπεδο έκφρασης της SOX4. Πίνακας D: έκφραση πρωτεΐνης Πυρηνική SOX4 εξετάστηκε σε 3 κύτταρα του παχέος εντέρου και τα ζεύγη 3 μη-όγκου /όγκου των ιστών του παχέος εντέρου. Μεγέθυνση:. 200 ×

Η

Η

Η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 ως προγνωστικός δείκτης για τον καρκίνο του παχέος εντέρου

Σύλλογοι των κλινικών αποτελεσμάτων με την έκφραση της πυρηνικής SOX4 παρουσιάζονται στο Σχήμα 2 . η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 συσχετίστηκε σημαντικά με μικρότερη ελεύθερη νόσου επιβίωση (

P

& lt? 0.001). Οι ασθενείς με υψηλά επίπεδα έκφρασης των πυρηνικών SOX4 επιτευχθεί ένα ποσοστό επιβίωσης ελεύθερης νόσου 5 ετών 58,3% σε σύγκριση με 76,6% για τους ασθενείς με χαμηλά επίπεδα έκφρασης. Επιπλέον, υψηλής στάδιο GC (σταδίου III και IV) χρησιμοποιήθηκε για να μάθετε το αποτέλεσμα της υπερέκφρασης των πυρηνικών SOX4 για την πρόγνωση. Η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 συσχετίστηκε σημαντικά με μικρότερη ελεύθερη νόσου επιβίωση (

P

= 0.016, Εικόνα 3). Οι ασθενείς με υψηλά επίπεδα έκφρασης των πυρηνικών SOX4 επιτευχθεί ένα ποσοστό επιβίωσης ελεύθερης νόσου 5 ετών 44,8% σε σύγκριση με 63,8% για τους ασθενείς με χαμηλά επίπεδα έκφρασης.

Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν αμφίδρομες και το επίπεδο σημαντικότητας ήταν

P

& lt?. 0.05

η

Όλες οι στατιστικές δοκιμασίες ήταν αμφίδρομες και το επίπεδο σημαντικότητας ήταν

P

& lt?. 0.05

η

τα αποτελέσματα της μονοπαραγοντική ανάλυση των δεικτών πρόγνωσης του καρκίνου του παχέος εντέρου φαίνεται στον πίνακα 4. η ελεύθερη νόσου επιβίωση συσχετίστηκε σημαντικά με κάθε ένα από τα ακόλουθα: το βάθος της εισβολής (

P

= 0,029), κομβικό κατάσταση (

P

& lt? 0.001), μακρινή μετάσταση (

P

& lt? 0.001), το στάδιο (

P

& lt? 0.001), αγγειακή εισβολή (

P

& lt? 0.001), περινευρικό εισβολή (

P

& lt? 0.001), και η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 (

P

= 0,001). Ωστόσο, η σχέση μεταξύ υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 και η επιβίωση δεν ήταν σημαντική μετά τον έλεγχο για άλλες γνωστές προγνωστικοί δείκτες σε πολυπαραγοντική ανάλυση (

P

= 0,425, Πίνακας 5). Στην πολυπαραγοντική ανάλυση, μακρινή μετάσταση (HR = 0,052, 95% CI = 0,024 – 0,111,

P

= & lt? 0.001). Ήταν προγνωστικά ανεξάρτητη

Η

Συζήτηση

Καρκίνος του παχέος εντέρου παραμένει ένα σημαντικό πρόβλημα δημόσιας υγείας παγκοσμίως [1]. Παρά τις τρέχουσες χειρουργικές τεχνικές και η χημειοθεραπεία που έχουν κάνει σημαντικές βελτιώσεις, το ποσοστό θεραπεία για τον προχωρημένο καρκίνο του παχέος εντέρου παραμένει χαμηλή και η νοσηρότητα παραμένει σε υψηλά επίπεδα [2]. Μεγαλύτερη γνώση των μοριακών μηχανισμών που διέπουν την ανάπτυξη αυτής της θανάσιμης νεόπλασμα απαιτείται εάν πρόκειται να αναπτυχθούν νέες στρατηγικές για την πρόληψη και τη θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου. Ειδικότερα, η ταυτοποίηση μορίων που έχουν αλλοιωθεί κατά την έναρξη και την πρόοδο του καρκίνου μπορούν να παρέχουν πολύτιμα εργαλεία ως προγνωστικοί δείκτες ή θεραπευτικούς στόχους.

Η έκφραση της SOX4 σε ανθρώπινους καρκίνους ποικίλλει ανάλογα με τον τύπο του καρκίνου. Το επίπεδο SOX4 είναι αυξημένα σε πολλές ανθρώπινους καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου της ουροδόχου κύστης, του προστάτη, ενδομητρίου, και το ήπαρ, ενώ μειώνεται σε μελάνωμα και τον καρκίνο της χοληδόχου κύστης [17], [18], [24] – [27]. Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε τα επίπεδα έκφρασης των πυρηνικών SOX4 σε ιστούς κόλου ελήφθη από 263 ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. Τα αποτελέσματά μας ήταν σύμφωνα με αυτά σε καρκίνους της ουροδόχου κύστης και του προστάτη, και έδειξε ότι η έκφραση της πυρηνικής SOX4 ανυψώθηκε σε ιστούς όγκων του παχέος εντέρου σε σχέση με τους ιστούς του κόλον μη-όγκου. Τα αποτελέσματα ανοσοκηλιδώσεως επιβεβαίωσαν ότι η έκφραση της πυρηνικής SOX4 ήταν υψηλότερη σε κύτταρα καρκίνου κόλου σε σχέση με τα φυσιολογικά κύτταρα του παχέος εντέρου.

εύρημα μας έδειξαν επίσης ότι η υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 στο παχύ έντερο καρκινικούς ιστούς ήταν συσχετίζεται στενά με την εισβολή όγκου και μετάσταση. Ο μηχανισμός με τον οποίο SOX4 ασκεί επεμβατική και μεταστατική δραστηριότητα της παραμένει ασαφής. Στην πρώτη γραμμή των αποδείξεων, miRNAs (RNAs μικρό μη κωδικοποιητική με ρυθμιστικές λειτουργίες) έχουν δειχθεί ότι συνδέονται με εισβολή και μετάσταση όγκου [28], [29]. Προηγούμενη εργασία από Tavazoie et al. έδειξε ότι το miR-335 καταστέλλει την μετάσταση μέσω ρύθμισης προς τα κάτω της SOX4 [22]. Αυτό το αποτέλεσμα πρότεινε ότι SOX4 συνδέεται με την επιθετικότητα του όγκου.

Η δεύτερη γραμμή του παρασχέθηκαν αποδείξεις από μελέτες σε επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT), το οποίο είναι ένα βασικό βήμα κατά τη διάρκεια της εμβρυογένεσης [30]. Συσσωρευμένα στοιχεία δείχνουν ότι ακατάλληλη χρήση των EMT μπορεί να είναι ένα συστατικό της εισβολής πολλών όγκων των επιθηλιακών ιστών. Τα χαρακτηριστικά των κυττάρων επηρεάζονται έντονα κατά τη διάρκεια της ΕΜΤ, με αποτέλεσμα μεταβολές κυττάρου-κυττάρου και των αλληλεπιδράσεων κυττάρου-μήτρας, κυτταρική κινητικότητα και διεισδυτικότητα [31], [32]. Πρόσφατη μελέτη των Zhang et al. έδειξε ότι η υπερέκφραση του SOX4 σε ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα μαστού οδήγησε στην απόκτηση μεσεγχυματικών γνωρίσματα, και ενισχυμένη κυτταρική μετανάστευση και εισβολή. Επιπλέον, SOX4 θετικά ρυθμίζεται η έκφραση των γνωστών επαγωγέων ΕΜΤ και ενεργοποιείται το μονοπάτι ΤΟΡ-β να συμβάλει στην EMT. Η έκφραση του SOX4 προκλήθηκε με ΤΟΡ-β και ήταν απαραίτητο για τον ΤΟΡ-β επαγόμενη EMT. Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι η SOX4 παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του καρκίνου του μαστού, με τη μεθόδευση EMT [33]. Αυτές οι μελέτες μπορεί να ευθύνεται εν μέρει για τη σύνδεση των υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 με εισβολή και μετάσταση όγκων.

Ακριβής πρόβλεψη του κινδύνου επανεμφάνισης θα βοηθούσε στην ελαχιστοποίηση των αρνητικών επιπτώσεων του καρκίνου του παχέος εντέρου και μεγιστοποιώντας το θεραπευτικό αποτέλεσμα της αγωγής . Από τις διαθέσιμες προγνωστικοί δείκτες για τον καρκίνο του παχέος εντέρου, ο AJCC στάδιο είναι το πιο σημαντικό. Ωστόσο, η πρόγνωση ποικίλλει ακόμα και μεταξύ των ασθενών στο στάδιο ίδια ασθένεια? ως εκ τούτου, οι εναλλακτικές προγνωστικοί δείκτες επιδιώκεται. Λίγες μελέτες έχουν διερευνήσει την προγνωστική αξία των πρωτεϊνών SOX4. Aaboe et al. έδειξε ότι υπήρχε μία ισχυρή συσχέτιση μεταξύ της αυξημένης έκφρασης SOX4 και αυξημένη επιβίωση των ασθενών στις περιπτώσεις του καρκίνου της ουροδόχου κύστης [17]. Παρομοίως, Kim et al. έδειξε ότι η υπερέκφραση της πρωτεΐνης SOX4 σε ασθενείς με ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα συσχετίσθηκε με βελτιωμένη έκβαση των ασθενών [25]. Επιπλέον, Jafarnejad et al. έδειξαν ότι σε ασθενείς με μελάνωμα, μια ισχυρή συσχέτιση υπήρχε μεταξύ μειωμένη έκφραση SOX4 και κακή επιβίωση των ασθενών [26]. Εμείς δεν βρήκε δημοσιευμένες εκθέσεις συζητούν την προγνωστική σημασία των SOX4 στον ανθρώπινο καρκίνο του παχέος εντέρου. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης έδειξαν ότι η πυρηνική SOX4 υπερέκφραση ήταν αντιστρόφως ανάλογη με την επιβίωση των ασθενών? Το εύρημα αυτό αντικρούεται τα προηγούμενα αναφερθεί θετικές συσχετίσεις. Η μελέτη μας ήταν η πρώτη που δείχνει ότι η υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 μπορεί να προβλέψει φτωχότερα αποτελέσματα για τους ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. Η υπερέκφραση των πυρηνικών SOX4 φαίνεται να είναι ένας χρήσιμος δείκτης για την πρόβλεψη των αποτελεσμάτων σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου οι οποίοι έχουν λάβει χειρουργική εκτομή του όγκου. Έτσι, οι ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου οι οποίοι εμφανίζουν υπερέκφραση της πυρηνικής SOX4 θα πρέπει να παρακολουθούνται προσεκτικά. Επειδή η ομάδα μας ασθενή ήταν μικρή, μελλοντικές μελέτες θα πρέπει να περιλαμβάνει ένα μεγαλύτερο καρκίνου του παχέος εντέρου ομάδα ασθενών για τη διαλεύκανση της προγνωστικής σημασίας της πυρηνικής SOX4 σε αυτή τη νόσο.

Εν ολίγοις, αυτή η μελέτη παρείχε στοιχεία για την κλινική σημασία των υπερεκφράζεται SOX4 σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. Τα ευρήματά μας υποδεικνύουν ότι η στόχευση SOX4 μπορεί να παρέχει μία νέα θεραπευτική μορφή για τη θεραπεία του καρκίνου του παχέος εντέρου.