Αφηρημένο

Μοριακοί δείκτες στο βρογχικό υγρών μπορεί να συνεισφέρει στην διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα. Έχουμε ήδη παρατηρείται σημαντική αύξηση του C4d περιέχει συμπλήρωμα θραύσματα υποβάθμιση στο βρογχοκυψελιδικό έκπλυμα (BAL) υπερκείμενα από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα σε μία ομάδα από 50 περιπτώσεις και 22 μάρτυρες (Κανκούν ομάδα). Η παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε για να προσδιοριστεί η διαγνωστική απόδοση αυτών των θραυσμάτων του συμπληρώματος (εφεξής αναφέρονται από κοινού ως C4d) στο βρογχικό υγρά. επίπεδα C4d προσδιορίστηκαν σε BAL υπερκείμενα από δύο ανεξάρτητες ομάδες: την ομάδα CU (25 περιπτώσεις και 26 ελέγχους) και την ομάδα HUVR (60 περιπτώσεις και 98 ελέγχους). Μια σειρά από αυθόρμητη δείγματα πτυέλων από 68 ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα και 10 ελέγχους χρησιμοποιήθηκε επίσης (LCCCIO κοόρτη). Συνολική περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες, συμπληρώνουν C4, συμπληρώνουν C5a, και Cyfra 21-1 μετρήθηκαν επίσης σε όλες τις ομάδες. επίπεδα C4d ήταν σημαντικά αυξημένα σε δείγματα BAL από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC ήταν 0,82 (95% CI = 0,71 – 0,94) και 0,67 (95% CI = 0,58 – 0,76) για το CU και ομάδες HUVR, αντίστοιχα. Επιπλέον, σε αντίθεση με τους άλλους δείκτες, επίπεδα C4d σε δείγματα BAL ήταν πολύ συνεπής σε όλες τις ομάδες Κανκούν, CU και HUVR. Είναι ενδιαφέρον, δοκιμή C4d σημαντικά αυξημένη την ευαισθησία της βρογχοσκόπησης στις δύο ομάδες στις οποίες κυτταρολογικά δεδομένα ήταν διαθέσιμα (Κανκούν και HUVR ομάδες). Τέλος, στην κοόρτη LCCCIO, τα επίπεδα C4d ήταν υψηλότερα σε υπερκείμενα πτυέλων από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα (περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC: 0,7? 95% CI = 0,56 – 0,83). Εν κατακλείδι, C4d είναι αυξημένα σταθερά στο βρογχικό υγρά από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να βελτιώσει τη διάγνωση της νόσου

Παράθεση:. Ajona D, Razquin C, Pastor MD, Pajares MJ, Γκαρσία J, Cardenal F, et al. (2015) Αυξημένα επίπεδα του Συμπληρώματος ενεργοποίησης C4d προϊόντων στο βρογχικό Υγρά για τη διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα. PLoS ONE 10 (3): e0119878. doi: 10.1371 /journal.pone.0119878

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Cordula Μ Stover, Πανεπιστήμιο του Leicester, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 20 Νοεμβρίου του 2014? Αποδεκτές: 2 του Φεβρουαρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 23 Μαρτίου, 2015

Copyright: © 2015 Ajona et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι μέσα στα αρχεία του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το «έργο UTE CIMA», η ισπανική κυβέρνηση (Red Tematica de Investigación Cooperativa en Καρκίνου RD12 /0036/0028, RD12 /0036/0040, RD12 /0036/0045, και RD12 /0036/0062? και Fondo de Investigación Sanitaria-Fondo Europeo de Desarrollo Περιφερειακή (ΕΤΠΑ) PI08 /1156, CD09 /00148, PI10 /01652, PI10 /00166, PI11 /00618, PI11 /02688, PI13 /00806, και PI14 /01.686), και του έβδομου προγράμματος-πλαισίου της Ευρωπαϊκής Κοινότητας (ΥΓΕΙΑ-F2-2010-258677-CURELUNG). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Έχω διαβάσει την πολιτική του περιοδικού και τους συγγραφείς αυτού του χειρογράφου έχουν τα ακόλουθα ανταγωνιστικά συμφέροντα : Μια προσωρινή αίτηση διπλώματος ευρεσιτεχνίας έχει γεμίσει από Digna Biotech για Drs. Ajona, Pajares, Montuenga και Pio ως εφευρέτες της «Νέας καρκίνο του πνεύμονα μοριακών δεικτών.» (Patent Application Ευρωπαϊκής Ένωσης Προσωρινή αρ. EP12382113.) Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων να PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο σχετίζονται με όλο τον κόσμο [1]. Το συνολικό ποσοστό πενταετούς επιβίωσης για καρκίνο του πνεύμονα είναι περίπου 15-20%, και λιγότερο από 5% σε μεταστατικό περιπτώσεις [2]. Ένας από τους λόγους για μια τέτοια θλιβερή έκβαση είναι η έλλειψη αποτελεσματικών τεχνικών για την έγκαιρη διάγνωση της νόσου. Επί του παρόντος, η διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα περιλαμβάνει το συνδυασμό των ακτινολογικών και ιστολογικών αναλύσεων των βλαβών. Ευέλικτες βρογχοσκόπηση αποτελεί μια σχετικά μη επεμβατικό αρχική διαγνωστική δοκιμή σε άτομα με υποψία, και είναι το κύριο διαγνωστικό εργαλείο σε ασθενείς με κεντρικό καρκίνο του πνεύμονα. Βρογχοσκοπική τεχνικές για τη διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα περιλαμβάνουν κυτταρολογική εξέταση δειγμάτων βιοψίας από βρογχικό, βρογχικό βούρτσα, βρογχικό έκπλυμα, και βρογχοκυψελιδική πλύση (BAL) [3, 4]. Ιδιαιτερότητα της κυτταρολογίας του υλικού βρογχοσκοπικών είναι 100%? Ωστόσο, η ευαισθησία παραμένει χαμηλή, ιδιαίτερα σε πιο περιφερειακές βλάβες, για τις οποίες περισσότερο επεμβατικές διαγνωστικές διαδικασίες ρουτίνας που απαιτούνται [5]. Έτσι, υπάρχει μια κλινική απαίτηση του παρεπόμενο δείκτες που μπορεί να βελτιώσει την ευαισθησία των διαγνωστικών διαδικασιών καρκίνου του πνεύμονα.

Πολλαπλές βιοδείκτες ανιχνεύσιμη σε βρογχικά υγρά από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα έχουν προταθεί [6, 7, 8, 9, 10 , 11, 12]. Πρόσφατα, έχουμε δείξει ότι ο καρκίνος του πνεύμονα κύτταρα ενεργοποιούν αποτελεσματικά την κλασική οδό του συμπληρώματος. Κατά συνέπεια, C4d, μια σταθερή διάσπαση προϊόν αυτής της οδού, βρίσκεται αυξημένα σε δείγματα πλάσματος και BAL από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα [13]. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να επικυρώσει προηγούμενη παρατήρηση μας σε ανεξάρτητες ομάδες ασθενών-μαρτύρων. Έχουμε ως στόχο να συγκρίνουν τη διαγνωστική απόδοση του C4d με άλλους πιθανούς διαγνωστικούς βιοδείκτες: Cyfra 21-1, ολική πρωτεΐνη, C4, και C5a. Cyfra 21-1 έχει από καιρό προταθεί ως βιοδείκτη καρκίνου του πνεύμονα σε βρογχικά ρευστά [7, 14], οι πρωτεΐνες του πλάσματος αυξήθηκε στα υγρά BAL από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα [15], C4 είναι μία άφθονη πρωτεΐνη πλάσματος από το οποίο C4d παράγεται μετά συμπληρώματος ενεργοποίηση [16], και C5a είναι ένα ενεργό θραύσμα του συμπληρώματος αυξήθηκε σε δείγματα πλάσματος από ασθενείς με μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [17]. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι ο προσδιορισμός της C4d σε υγρά αεραγωγών ξεπεράσει τους άλλους δείκτες και μπορεί να είναι χρήσιμα στην διαγνωστική κατεργασία των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα.

Υλικά και Μέθοδοι

Κλινικά δείγματα

Η μελέτη συμπεριέλαβε τρεις ομάδες δειγμάτων BAL και ένα από τα πτύελα δείγματα. BAL υγρά ελήφθησαν από άτομα που υποβάλλονται σε διαγνωστικές βρογχοσκόπηση και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C. Η διαδικασία για τη συλλογή BAL έχει περιγραφεί προηγουμένως [15]. Η ομάδα από την Clinica Universidad de Navarra (Κανκούν) περιλαμβάνονται δείγματα BAL από 50 ασθενείς με κακοήθειες του πνεύμονα και 22 ασθενείς με καλοήθη νοσήματα των πνευμόνων. Περισσότερες λεπτομέρειες αυτής της σειράς έχουν αναφερθεί στο παρελθόν [15]. Η ομάδα από το Charité-Universitätsmedizin (CU) περιλαμβάνεται BAL δείγματα από 25 ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα και 26 άτομα της ομάδας ελέγχου. Αυτά τα άτομα ελέγχου υποβλήθηκαν σε βρογχοσκόπηση για μη κακοήθεις ασθένειες των αναπνευστικών οδών, όπως η μόλυνση, καλοήθης στένωση των αεραγωγών ή σαρκοείδωση. Δεν υπάρχουν πρόσθετα δεδομένα ήταν διαθέσιμα από αυτή την ομάδα. Η τρίτη ομάδα ελήφθη στο Νοσοκομείο Universitario Virgen del Rocio (HUVR) και περιλαμβάνονται BAL υγρά από 60 ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα και 98 ασθενείς της ομάδας ελέγχου. Τα χαρακτηριστικά αυτών των ασθενών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1. Η βρογχοσκόπηση απαιτήθηκε σε ασθενείς ελέγχου λόγω της παρουσίας του αιμόπτυση ή πνευμονική βλάβη στο στήθος-ακτινογραφία ή αξονική τομογραφία. Τέλος, η Καρκίνο του Πνεύμονα Κλινική καταλανικά Ινστιτούτο Ογκολογίας (LCCCIO) ομάδα των πτυέλων δειγμάτων περιελάμβανε 68 δείγματα από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα και 10 δείγματα από υγιή άτομα. Δείγματα συλλέχθηκαν μετά από αυθόρμητη απόχρεμψη, αραιώνεται σε 10 ml φυσιολογικού ορού, εκτενώς στροβιλίζεται, και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C. Όλα τα πρωτόκολλα μελέτης πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τη Διακήρυξη του Ελσίνκι, εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ερευνών Ηθικής του Πανεπιστημίου της Ναβάρα (Institutional Review Board # 015-2014), και όλοι οι ασθενείς έδωσαν γραπτή συγκατάθεση. όγκων του πνεύμονα ταξινομήθηκαν με βάση την ταξινόμηση του ΠΟΥ του 2004 και το Διεθνές Σύστημα Σταδιοποίηση του καρκίνου του πνεύμονα [18, 19].

Η

μετρήσεις δείκτης

C4d που περιέχουν θραύσματα μετρήθηκαν με ένζυμα συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (Quidel). Αυτή η δοκιμασία αναγνωρίζει όλα C4d περιέχει θραύσματα ενεργοποιημένου C4 (C4b, IC4B και /ή C4d), που μαζί αναφέρονται στο παρόν έγγραφο ως C4d. Ποσοτική ανοσορροφητικές δοκιμασίες συνδεδεμένου ενζύμου χρησιμοποιήθηκαν επίσης για τους προσδιορισμούς της C4 (Assaypro), C5a (R &? D), και Cyfra 21-1 (DRG International). δείγματα BAL αραιώθηκαν 1:10, 1: 1000, 1: 100, και 1:25 για την ανάλυση των C4d, C4, C5a και Cyfra 21-1, αντίστοιχα. δείγματα πτυέλων αραιώθηκαν 1: 4 για C4d ποσοτικοποίηση. Η συνολική πρωτεΐνη μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία πρωτεΐνης BCA (Pierce). Όλες οι μετρήσεις βιοδεικτών έγιναν εκ των υστέρων από εργαστηριακό προσωπικό δεν γνωρίζει την διάγνωση. Όλες οι διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν σε ένα μόνο εργαστήριο σύμφωνα με τις οδηγίες των κατασκευαστών.

Στατιστικές αναλύσεις

SPSS 15.0 λογισμικό χρησιμοποιήθηκε για τη στατιστική ανάλυση. Ομαλότητα αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το τεστ Shapiro-Wilk. Δύο όψεων Mann-Whitney U ή δοκιμή Kruskal-Wallis H χρησιμοποιήθηκαν για τη σύγκριση μη κανονική κατανομή των δεδομένων από δύο ή περισσότερες ομάδες, αντίστοιχα. Τα επίπεδα των δεικτών παρουσιάζονται ως διάμεση τιμή (διατεταρτημοριακό εύρος). χαρακτηριστικό λειτουργίας (ROC) καμπύλη Δέκτης δημιουργήθηκαν προκειμένου να αξιολογηθεί η διαγνωστική απόδοση των βιοσημειωτών. Στατιστικές διαφορές μεταξύ της περιοχής κάτω από τις καμπύλες ROC και μια περιοχή αναφοράς κάτω από την καμπύλη ROC 0,5 υπολογίστηκαν με τεστ z-score. διαστήματα τοις εκατό εμπιστοσύνης ενενήντα πέντε ήταν υπολογίζονται επίσης. Οι τιμές Ρ μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

επίπεδα C4d σε BAL υπερκείμενα από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα

Σε μια προηγούμενη μελέτη βρήκαμε ότι τα επίπεδα της C4d- που περιέχει θραύσματα αποικοδόμησης του συμπληρώματος (που αναφέρονται από κοινού ως C4d) αυξήθηκαν σε δείγματα BAL από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα σε σύγκριση με δείγματα από ασθενείς με μη κακοήθεις παθήσεις του πνεύμονα [13]. Εν συντομία, τα επίπεδα C4d, δείχνεται ως διάμεση τιμή (διατεταρτημοριακό εύρος), ήταν 0,26 (0,11 – 0,54) μg /ml στην ομάδα του καρκίνου του πνεύμονα και 0,11 (0,11 – 0,23) μg /ml στην ομάδα ελέγχου (Ρ & lt? 0.001). Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC ήταν 0,73 (95% CI = 0,61 – 0,84? Ρ = 0,002). Αυτή η ανάλυση πραγματοποιήθηκε σε δείγματα BAL από μια σειρά ασθενών ονομαζόμενη ενταύθα CUN ομάδας. Τα χαρακτηριστικά αυτών των ασθενών έχουν ήδη δημοσιευθεί [15]. Στην παρούσα μελέτη, επιδιώξαμε να επικυρώσει αυτό το αποτέλεσμα, χρησιμοποιώντας δύο ανεξάρτητες ομάδες των δειγμάτων BAL: η HUVR και οι ομάδες CU. Σε αυτή την τελευταία ομάδα, τα επίπεδα C4d στον πνεύμονα δείγματα και τους ελέγχους του καρκίνου ήταν 0,19 (0,11 έως 0,84) και 0,11 (0,11 – 0,13) μg /ml, αντίστοιχα (Ρ & lt? 0,001? Εικ. 1Α). Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC ήταν 0,82 (95% CI = 0,71 – 0,94? P & lt? 0.001). Στην ομάδα HUVR, τα επίπεδα C4d στην ομάδα του καρκίνου ήταν 0,18 (0,15-0,26) μg /ml, και στην ομάδα ελέγχου ήταν 0,16 (0,14-0,18) μg /ml (Ρ & lt? 0,001? Εικ. 1Β). Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC ήταν 0,67 (95% CI = 0,58 – 0,76? P & lt? 0.001). Σε αυτή την ομάδα, τα επίπεδα C4d έτεινε να είναι υψηλότερη σε BAL υγρά από μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (SCLC) ασθενείς ή πρώην καπνιστές, αν και οι διαφορές δεν ήταν στατιστικά σημαντική (Πίνακας 1). Σύμφωνα με αυτήν την παρατήρηση, σε προηγούμενη μελέτη μας (Κανκούν ομάδα) βρήκαμε μια σημαντική αύξηση του C4d σε πρώην καπνιστές στην ομάδα του καρκίνου, καθώς και μια τάση προς υψηλότερα επίπεδα C4d σε ασθενείς με μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [13].

Α) τα επίπεδα C4d και η καμπύλη ROC από BAL υπερκείμενα της κλάσης CU. Β) τα επίπεδα C4d και η καμπύλη ROC από δείγματα BAL της κλάσης HUVR. Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας την Mann-Whitney U. Οι περιοχές κάτω από τις καμπύλες ROC (AUC) και τις αντίστοιχες τιμές τους Ρ υποδεικνύεται.

Η

σύγκριση των επιδόσεων των C4d με άλλους μοριακούς δείκτες

Για να εκτιμηθεί η χρησιμότητα του C4d ως διαγνωστικών βιοδεικτών στα υγρά BAL, συγκρίναμε την απόδοση της με άλλες πιθανές διαγνωστικές μοριακών δεικτών. Για το σκοπό αυτό, μετρήσαμε τα επίπεδα Cyfra 21-1, C4 και C5a στις ομάδες CUN, CU, και HUVR. Εκτός από Cyfra 21-1 και C5a στην κοόρτη CUN, και για C5a στην κοόρτη HUVR, τα επίπεδα όλων των δεικτών ήταν σημαντικά αυξημένα σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα (Πίνακας 2).

Η

Η συσσώρευση των πρωτεϊνών του πλάσματος στον διάμεσο όγκο είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό των συμπαγών όγκων [20]. Στην πραγματικότητα, οι πρωτεΐνες του πλάσματος μπορούν να βρεθούν σε υγρά BAL από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα [15]. Σε συμφωνία με αυτήν την παρατήρηση, στις τρεις ομάδες, τα επίπεδα των συνολικών πρωτεϊνών βρέθηκαν αυξήθηκαν σε BAL υγρά από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα σε σύγκριση με τους ελέγχους (Πίνακας 2). Για να αξιολογηθεί η δυνατότητα που C4d, Cyfra 21-1, C4, και C5a βρέθηκαν σε δείγματα BAL ως απλή συνέπεια της εξαγγείωση τους από το αίμα, αναλύσαμε τον εμπλουτισμό αυτών των δεικτών σε δείγματα BAL από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα σε σχέση με το αίμα, χρησιμοποιώντας συνολική περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη ως αναφορά (Πίνακας 3). Πολύ παρόμοια ποσοστά C4 βρέθηκαν σε δείγματα BAL και το αίμα, γεγονός που υποδηλώνει ότι η παρουσία αυτού του συμπληρώματος πρωτεΐνης στο μικροπεριβάλλον του όγκου οφείλεται κυρίως στην εξαγγείωση της. Ωστόσο, Cyfra 21-1, C4d, και C5a παρουσίασαν σημαντικά μεγαλύτερο ποσοστό στα υγρά BAL, προτείνοντας μια τοπική παραγωγή αυτών των μορίων μέσα στο μικροπεριβάλλον του όγκου.

Η

Ένας παράγοντας που επηρεάζει σε μεγάλο βαθμό την απόδοση και τη χρησιμότητα ενός διαγνωστικού δείκτη είναι η συνέπεια της σε διαφορετικούς πληθυσμούς ασθενών. Ως εκ τούτου, συνέκριναν τα επίπεδα των τεσσάρων μοριακών δεικτών στις τρεις ανεξάρτητες ομάδες. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2, παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των ασθενών με καρκίνο του πνεύμονα στις ομάδες Κανκούν, CU, και HUVR για Cyfra 21-1, C5a, C4, και συνολικής πρωτεΐνης (Ρ & lt? 0.001, P & lt? 0.001, P & lt? 0.001 και P = 0.029, αντίστοιχα). Παρατηρήσαμε τα υψηλότερα επίπεδα αυτών των δεικτών στην κοόρτη CUN, αν και ο λόγος για αυτή τη διαφορά είναι ασαφής. Παρ ‘όλα αυτά, τα επίπεδα του C4d ήταν αξιοσημείωτα παρόμοια σε όλη την τρεις σειρές χωρίς σημαντικές διαφορές μεταξύ τους (P = 0.922). Η συνοχή των επιπέδων C4d μας επέτρεψε να προτείνει C4d τιμές cut-off με ικανοποιητική ευαισθησία και ειδικότητα στις τρεις ομάδες. Για παράδειγμα, με μια τιμή αποκοπής 0,18 μg /ml, η ευαισθησία στη διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα ήταν 62%, 52% και 53%, με ειδικότητα 73% (αναλογία πιθανοτήτων (OR) = 4.35, 95 % CI = 1,45 – 13,05, P = 0.009), 100% και 80% (OR = 4,46, 95% CI = 02.20 – 09.03, Ρ & lt? 0.001) στις ομάδες Κανκούν, CU, και HUVR, αντίστοιχα. Όταν συνένωση των τριών μελετών, η ευαισθησία ήταν 56% και η ειδικότητα ήταν 82% (OR = 5.94, 95% CI = 3,45 – 10,24, P & lt? 0.001). Συνοψίζοντας, καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι C4d παράγεται εντός του μικροπεριβάλλοντος όγκου πνεύμονα, με αποτέλεσμα μια σταθερή αύξηση αυτού του μορίου στη BAL υγρά από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα.

Α) C4d (δεδομένα από την κοόρτη CUN δημοσιεύτηκαν προηγουμένως [ ,,,0],13]). Β) Cyfra 21-1. Γ) C5a. Δ) C4. Ε) Η συνολική πρωτεΐνη. Ρ τιμές υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ Kruskal-Wallis.

Η

Προσδιορισμός του C4d σε BAL υπερκείμενα ως συμπλήρωμα της κυτταρολογίας για τη διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα

Είμαστε δίπλα αξιολόγησε την ικανότητα προσδιορισμού C4d να βελτιωθεί η διαγνωστική απόδοση του κυτταρολογική εξέταση του υλικού βρογχοσκοπικών, μια τεχνική με υψηλή εξειδίκευση αλλά χαμηλή ευαισθησία. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιήθηκαν οι δύο ομάδες από τις οποίες είχαμε στοιχεία κυτταρολογίας: Κανκούν και HUVR ομάδες. Στην ομάδα Κανκούν, κυτταρολογική εξέταση των δειγμάτων BAL έδωσε ειδικότητα 100% και ευαισθησία 32%. Εξετάζοντας την διαγνωστική αξία των πληροφοριών που παρέχονται από C4d, βρήκαμε ότι ο δείκτης αυτός θα ήταν σημαντικά αυξημένη στις δύο κυτταρολογικά θετικών και αρνητικών υπερκείμενα BAL από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα (Εικ. 3). Τα επίπεδα του C4d στην ομάδα ελέγχου ήταν 0,11 (0,11 – 0,23) μg /ml και αυξήθηκε σε 0,33 (0,23 έως 0,5) μg /ml σε κυτταρολογικά θετικά δείγματα (Ρ & lt? 0.001), και σε 0,24 (0,11 – 0,62) μg /ml σε κυτταρολογικά αρνητικά δείγματα (P = 0,018). Οι περιοχές κάτω από τις καμπύλες ROC ήταν 0,85 (95% CI = 0,71 – 0,98? P & lt? 0.001) και 0,67 (95% CI = 0,53 – 0,81? P = 0,033), αντίστοιχα. Η διαγνωστική απόδοση της C4d ήταν καλύτερα σε κυτταρολογικά θετικών BAL δείγματα, αν και δεν βρέθηκαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των δύο ομάδων (P = 0,187). Το αποτέλεσμα αυτό υποδεικνύει ότι ο προσδιορισμός των επιπέδων C4d μπορεί να είναι χρήσιμη ακόμη και σε περιπτώσεις στις οποίες η κυτταρολογική εξέταση των υγρών BAL αναφέρεται ως αρνητική. Στην πραγματικότητα, χρησιμοποιώντας την τιμή αποκοπής που είχαν καθοριστεί προηγουμένως (0,18 μg /ml), 18 από 34 καρκίνους του πνεύμονα αναφέρονται ως αρνητικό με κυτταρολογική εξέταση ταξινομήθηκαν ως θετικά με προσδιορισμό C4d, αυξάνοντας την ευαισθησία στη διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα από 32% στο 68%, με ειδικότητα 73%. Η παρατήρηση αυτή επικυρώθηκε με την ανάλυση της κοόρτης HUVR. Κυτταρολογική εξέταση σε αυτήν την ομάδα απέδωσε ευαισθησία 32% και ειδικότητα 100%. Το περιεχόμενο του C4d σε BAL υπερκείμενα σημαντικά αυξημένη στις δύο κυτταρολογικά θετικών και αρνητικών υπερκείμενα BAL καρκίνο του πνεύμονα σε σύγκριση με άτομα ελέγχου (Εικ. 4). C4d επίπεδα στην ομάδα ελέγχου ήταν 0,16 (0,14-0,18) μg /ml, και αυξήθηκε σε 0,22 (0,16 – 0,40) μg /ml σε κυτταρολογικά θετικά δείγματα (Ρ & lt? 0.001), και σε 0,18 (0,15 – 0,23) μg /ml σε κυτταρολογικά αρνητικά δείγματα (P = 0,017). Οι περιοχές κάτω από τις καμπύλες ROC ήταν 0,76 (95% CI = 0,63 – 0,88? P & lt? 0.001) και 0,63 (95% CI = 0,52 – 0,74? P = 0,011), αντίστοιχα. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στα επίπεδα C4d μεταξύ κυτταρολογικά θετικών και αρνητικών δειγμάτων BAL (Ρ = 0,123). Με μια τιμή αποκοπής 0,18 μg /ml, 19 από τις 41 καρκίνων αναφέρονται ως αρνητικό με κυτταρολογίας ταξινομήθηκαν ως θετικά από C4d, αυξάνοντας την ευαισθησία στη διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα από 32% έως 63%, με ειδικότητα 80 %.

οι τιμές Ρ υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney U. Οι περιοχές κάτω από τις καμπύλες ROC (AUC) και τις αντίστοιχες τιμές τους Ρ υποδεικνύεται.

Η

Οι τιμές Ρ υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney U. Οι περιοχές κάτω από τις καμπύλες ROC (AUC) και τις αντίστοιχες τιμές τους Ρ υποδεικνύεται.

Η

επίπεδα C4d σε υπερκείμενα πτυέλων από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα

Η διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα με εξέταση των πτυέλων είναι μια ελκυστική εναλλακτική λύση για βρογχοσκόπηση. Προκειμένου να αξιολογηθεί η προκαταρκτική χρησιμότητα του C4d ως διαγνωστικός δείκτης σε αυτό το βιολογικό δείγμα, τα επίπεδα C4d προσδιορίστηκαν στην αυθόρμητη δείγματα πτυέλων από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα (n = 68) από την ομάδα LCCCIO. C4d επίπεδα κυμαίνονταν από 0,04 να 0,56 μg /ml, με μέση τιμή (IQR) 0.06 (0,06 – 0,07) μg /ml. Δεν σημαντικές συσχετίσεις βρέθηκαν μεταξύ των επιπέδων του δείκτη και κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένων, όπως το φύλο, το κάπνισμα, η ιστολογία (NSCLC εναντίον SCLC) ή το στάδιο (Ι-ΙΙΙ έναντι IV). Τέλος, συγκρίναμε τα επίπεδα C4d σε αυτά τα πτύελα δείγματα με τα επίπεδα σε 10 υγιείς μάρτυρες. Όπως φαίνεται στο Σχ. 5, τα επίπεδα C4d ήταν ελαφρά υψηλότερες σε υπερκείμενα πτυέλων από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα από ό, τι εκείνων που προέρχονται από άτομα ελέγχου (Ρ = 0,047). Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC ήταν 0,7 (95% CI = 0,56 – 0,83, P = 0,047). Με 0,06 μg /ml αποκοπής, ευαισθησία και ειδικότητα ήταν 54% και 80%, αντίστοιχα. Συμπερασματικά, τα επίπεδα C4d είναι σημαντικά υψηλότερα στην αυθόρμητη δείγματα πτυέλων από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα από ό, τι στα δείγματα εκείνα από καρκίνο χωρίς υποκείμενα.

Οι τιμές Ρ υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας το Mann-Whitney U. Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC) και συνδέονται τιμή Ρ του υποδεικνύονται.

Η

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε αποδείξει ότι C4d που περιέχουν θραύσματα υποβάθμιση του συμπληρώματος (εφεξής από κοινού ως C4d) είναι αυξημένα στα βρογχικά υγρά από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα και την αποφασιστικότητά τους αποδίδει καλύτερα από ό, τι στο παρελθόν πρότεινε πρωτεΐνη βιοδεικτών για τη διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα. Τα συμπεράσματα μας υποστηρίζονται από τέσσερις σημαντικές παρατηρήσεις: i) έχουμε επικυρωθεί, σε δύο ανεξάρτητες ομάδες, η αύξηση του C4d παρατηρήθηκε προηγουμένως σε μια ομάδα δειγμάτων BAL από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα [13]? ii) δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στα επίπεδα του δείκτη απέναντι δείγματα BAL από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα από τρεις ανεξάρτητες ομάδες? iii) C4d ποσοτικοποίηση βελτίωσε την ευαισθησία του κυτταρολογική εξέταση των υγρών BAL? και iv) τα επίπεδα C4d ήταν ελαφρώς αυξημένη σε υπερκείμενα πτυέλων από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα.

Μέχρι στιγμής, οι προσπάθειες για τον εντοπισμό κλινικά πολύτιμες διαγνωστικοί δείκτες για τον καρκίνο του πνεύμονα, είτε έχουν αποτύχει ή είχαν περιορισμένη επιτυχία. Αυτό μπορεί να εξηγηθεί εν μέρει από το χαμηλό βαθμό αναπαραγωγιμότητας απέναντι ανεξάρτητες μελέτες λόγω της υψηλής γενετικής και φαινοτυπική ετερογένεια των όγκων του πνεύμονα [21]. Για να ξεπεραστεί αυτός ο περιορισμός, έχει προταθεί ότι συνδέονται με το ανοσοποιητικό δείκτες μπορεί να είναι πιο ομοιογενής και ευαίσθητη από καρκίνο που προέρχεται δείκτες [22]. Υπό την έννοια αυτή, κατά τη διάρκεια νεοπλασματικό μετασχηματισμό, πνεύμονα καρκινικά κύτταρα από διαφορετικούς υποτύπους ιστολογική μπορούν να αναγνωριστούν από το σύστημα του συμπληρώματος [17], [23, 24]. Συμπλήρωμα είναι ένα σημαντικό μέρος της έμφυτης ανοσολογικής απόκρισης που υπερασπίζεται τον ξενιστή κατά των μη-εαυτού στοιχεία. Είναι ενδιαφέρον ότι, λόγω της αυξημένης έκφρασης των αναστολέων του συμπληρώματος, ο καρκίνος του πνεύμονα κύτταρα ελέγχου ενεργοποίηση συμπληρώματος και είναι ανθεκτικά στην διαμεσολαβούμενη από συμπλήρωμα κυτταροτοξικότητα [23, 24, 25, 26, 27]. Αυτή η ελεγχόμενη ανοσολογική απόκριση μπορεί να οδηγήσει σε μόνιμη απελευθέρωση θραυσμάτων συμπλήρωμα στο μικροπεριβάλλον του όγκου, η οποία θα μπορούσε να εξηγήσει γιατί C4d, ένα θραύσμα προήλθε από συμπλήρωμα C4, είναι αυξημένη σε βιολογικά υγρά από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα [13]. Είναι ενδιαφέρον, παρατηρήσαμε εντυπωσιακά παρόμοιες συγκεντρώσεις του C4d σε όλη δείγματα BAL από τις τρεις που μελετήθηκαν ομάδες. Αυτό είναι ένα σχετικό σημείο, δεδομένου ότι η τυποποίηση των μετρήσεων μεταξύ διαφορετικών μελετών είναι ένα σημαντικό πρόβλημα στην ανακάλυψη βιοδεικτών [28, 29]. Σε σχέση με την πρωταρχική πηγή του C4d, αυτό το μόριο είναι ένα πρωτεολυτικό θραύσμα του συμπληρώματος C4 δημιουργούνται μετά την ενεργοποίηση της κλασσικής οδού συμπληρώματος [16]. Ως εκ τούτου, η πιο πιθανή εξήγηση για την παρουσία του μέσα στο μικροπεριβάλλον του όγκου θα είναι τοπική παραγωγή της μετά την ενεργοποίηση αυτής της κανονικής οδού. Ωστόσο, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε άλλους μηχανισμούς. Για παράδειγμα, εξωπρωτεάσες υπάρχουν σε βιολογικά υγρά από ασθενείς με καρκίνο μπορεί να δημιουργήσει πεπτίδια από πρωτεΐνες συμπληρώματος [30]. Από την άλλη πλευρά, αν και τα επίπεδα C4d είναι επίσης αυξημένη σε πλάσμα από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα [13], τα επίπεδα του δείκτη στο βρογχικό ρευστά είναι αισθητά υψηλότερες από εκείνες που αναμένεται από εξαγγείωση, η οποία ευνοεί την τοπική προέλευση του C4d.

Βρήκαμε επίσης ότι C4d καλύτερες επιδόσεις από άλλους δείκτες συμπλήρωμα που σχετίζονται με C4 και C5a, ή το προτεινόμενο δείκτη όγκου Cyfra 21-1. Στην περίπτωση της C4, η πρόδρομο μόριο για C4d, καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι η παρουσία του στα υγρά αεραγωγού είναι ως επί το πλείστον οφείλεται σε εξαγγείωση του από το αίμα. Παρομοίως, τα αυξημένα επίπεδα των άλλων εξαγγειωμένα πρωτεΐνες του πλάσματος, όπως ο παράγοντας συμπληρώματος Η ή λευκωματίνη, είχαν προηγουμένως παρατηρηθεί σε βρογχικά υγρά από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα [15]. Από την άλλη πλευρά, τα δεδομένα μας υποδηλώνουν μια τοπική παραγωγή του C5a, μια αναφυλατοξίνης που μπορούν να παραχθούν από τον καρκίνο του πνεύμονα κυττάρων [17]. Ωστόσο, ο δείκτης αυτός βρέθηκε σημαντικά αυξημένη σε δείγματα BAL από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα σε μόνο μία από τις τρεις ομάδες. Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν με Cyfra 21-1, ένα από τα πιο μελετημένα βιοδείκτες του καρκίνου του πνεύμονα στην βιβλιογραφία [7, 14]. Τα δεδομένα μας πρότεινε μια τοπική παραγωγή Cyfra 21-1 εντός μικροπεριβάλλον του όγκου, αλλά τα επίπεδα του κατά μήκος των κοορτών ήταν ελάχιστα συνεπής και τις διαφορές μεταξύ κακοήθεις και μη κακοήθεις δείγματα δεν βρέθηκαν σε μία από τις σειρές. Αυτές οι παρατηρήσεις υποδεικνύουν ότι C5a και Cyfra 21-1 παράγονται με την παρουσία των όγκων του πνεύμονα, αλλά επίσης και με την παρουσία του μη-κακοήθη κοινά σε ασθενείς που υποβάλλονται σε βρογχοσκόπηση φλεγμονώδεις καταστάσεις.

Λόγω του σχετικά χαμηλή ευαισθησία της κυτταρολογικής εξέταση των δειγμάτων βρογχοσκοπικών, πιο επεμβατικές διαγνωστικές εξετάσεις είναι συνήθως απαιτούνται. Σε αυτό το πλαίσιο, μια διαγνωστική διαδικασία χρήσιμο να καθορίσει ποιοι ασθενείς με υποψία καρκίνου του πνεύμονα, αλλά αρνητική βρογχοσκοπήσεις, πρέπει να υποστούν πρόσθετες διαγνωστικές εξετάσεις θα είναι κλινικά σημαντική. Σε αυτή τη μελέτη, η προσθήκη του C4d ποσοτικοποίηση με τη διαγνωστική διαδικασία αύξησε την ευαισθησία της βρογχοσκόπησης, αν και μειωμένη εξειδίκευση του. Η μείωση της ειδικότητα μπορεί να περιορίσει την έγκρισή της ως καθημερινή κλινική διαγνωστικό εργαλείο. Ωστόσο, η συνοχή του δείκτη απέναντι ανεξάρτητη κοόρτεις των βρογχικών υγρών δειγμάτων και την καλύτερη απόδοση του ό, τι προηγουμένως πρότεινε βιοδείκτες ενθαρρύνει την ενσωμάτωση της C4d σε ένα πάνελ βιοδεικτών για να συμπληρώσει κυτταρολογίας στη διάγνωση της νόσου. Αυτό είναι ένα σημαντικό σημείο από το νέο πάνελ βιοδεικτών, όπως αυτοαντισώματα, microRNAs ή πρωτεομική ταξινομητές έχουν αποφέρει ελπιδοφόρα αποτελέσματα σε δείγματα αίματος από καρκίνο του πνεύμονα κλινικές ομάδες [31, 32, 33]. Επιπλέον, τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η αξιολόγηση C4d σε μη επεμβατικές δείγματα πτυέλων μπορεί επίσης να είναι ένα χρήσιμο εργαλείο για τη διάγνωση του καρκίνου του πνεύμονα. Η παρατήρηση αυτή, που βασίζεται σε μια μικρή ομάδα από δείγματα πτυέλων, χρήζει περαιτέρω αξιολόγησης σε μεγαλύτερες σειρές χρησιμοποιώντας περισσότερα κλινικά σχετικοί έλεγχοι με μη κακοήθη νόσο των πνευμόνων. Άλλες πτυχές που πρέπει να αποσαφηνιστούν είναι η απόδοση της δοκιμασίας στις διάφορες ιστολογικές υποτύπους, καθώς και την επίδραση του καπνίσματος, καθώς και συγκεκριμένες μη-κακοήθεις ασθένειες του αναπνευστικού συστήματος και θεραπείες για τα επίπεδα C4d. Προς το παρόν, μπορούμε να συμπεράνουμε ότι τα επίπεδα C4d αυξήθηκαν σταθερά στο βρογχικό υγρά από ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα και μπορεί να συμπληρώνει κυτταρολογική εξέταση για τη διάγνωση της νόσου.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Amaya Lavin, usua Montes και Ana Remirez για τεχνική βοήθεια.