Αφηρημένο

Περίπου το 30-40% των ασθενών με πρώιμο στάδιο μη καρκίνο του -μικρό του πνεύμονα (NSCLC) θα παρουσιάσει με υποτροπή της νόσου εντός δύο ετών από την εκτομή. Εδώ, πραγματοποιήσαμε εκτεταμένες προφίλ έκφρασης γκαλεκτίνη σε μια αναδρομική μελέτη χρησιμοποιώντας κατεψυγμένα και ενσωματωμένα σε παραφίνη ιστούς όγκων από 87 στο στάδιο Ι ασθενείς /ΙΙ NSCLC. Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι η έκφραση του mRNA γαλεκτίνη σε NSCLC περιορίζεται σε γαλεκτίνη-1, -3, -4, -7, -8 και -9. Δίπλα στο στάδιο, μονοπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox προσδιορίζονται γκαλεκτίνη-1, γκαλεκτίνη-9FL και γκαλεκτίνη-9Δ5 όσο το δυνατόν προγνωστικοί δείκτες. εκτιμήσεις επιβίωσης Kaplan-Meier έδειξε ότι η συνολική επιβίωση ήταν σημαντικά μικρότερη σε ασθενείς που εκφράζουν γαλεκτίνη-1 παραπάνω διάμεσα επίπεδα, δηλαδή, 23,0 (2,9 έως 43,1) έναντι 59,9 (47,7 έως 72,1) μηνών (ρ = 0,020), καθώς και σε ασθενείς ότι η ρητή γκαλεκτίνη-9Δ5 ή γκαλεκτίνη-9FL κάτω από τη μέση, αντίστοιχα. 59,9 (41,9 – 75,9) έναντι 32,8 (8,7 έως 56,9) μήνες (p = 0,014) ή 23.2 (-0,4 έως 46,8) έναντι 58,9 (42,9 – 74,9) μήνες (p = 0,042). Και οι τρεις γαλεκτίνες ήταν επίσης προγνωστικά για τη νόσο επιβίωση ελεύθερη. ανάλυση παλινδρόμησης πολυπαραγοντική Cox έδειξε ότι για το OS, το πιο σημαντικό προγνωστικό μοντέλο περιλαμβάνονται στάδιο, την ηλικία, gal-1 και gal-9Δ5 ενώ το μοντέλο για την DFS περιλαμβάνονται στάδιο, την ηλικία και gal-9Δ5. Συμπερασματικά, η παρούσα μελέτη επιβεβαιώνει την προγνωστική αξία της γκαλεκτίνη-1 και προσδιορίζει γκαλεκτίνη-9Δ5 ως νέο δυναμικό προγνωστικοί δείκτες σε πρώιμο στάδιο NSCLC. Τα ευρήματα αυτά θα μπορούσαν να βοηθήσουν στην αναγνώριση ασθενών πρώιμο στάδιο NSCLC που θα μπορούσαν να ωφεληθούν περισσότερο από την επικουρική χημειοθεραπεία

Παράθεση:. Schulkens ΙΑ, Heusschen R, van den Boogaart V, van Suylen RJ, Dingemans A-MC, Griffioen AW, et al. (2014) Έκφραση γκαλεκτίνη Profiling Προσδιορίζει γκαλεκτίνη-1 και γκαλεκτίνη-9Δ5 ως προγνωστικοί παράγοντες στη φάση Ι /ΙΙ μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 9 (9): e107988. doi: 10.1371 /journal.pone.0107988

Επιμέλεια: Pierre Busson, Gustave Roussy, Γαλλία

Ελήφθη: 7, Απρίλη του 2014? Αποδεκτές: 21 του Αυγούστου 2014? Δημοσιεύθηκε: 26η Σεπτεμβρίου, 2014

Copyright: © 2014 Schulkens et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι μέσα στο χαρτί και Υποστήριξη αρχείων δεδομένων της

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από την ολλανδική Εταιρεία Καρκίνου (www.kwfkankerbestrijding.nl:UM2008-4101? VU2009-4358) να AWG και VLT. Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

σε μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC), κλινικοπαθολογοανατομικές στάσης σύμφωνα με την ταξινόμηση ΤΝΜ εξακολουθεί να είναι η κύρια οριοθέτησης για την ταξινόμηση των ασθενών με μια ξεχωριστή αποτέλεσμα. Δυστυχώς, από τους ασθενείς που διαγνώστηκαν με νόσο πρώιμο στάδιο σχεδόν το 30% έως 40% θα παρουσιάσει υποτροπή του όγκου, εντός δύο ετών μετά τη χειρουργική εκτομή [1]. Δεδομένου ότι έχει αποδειχθεί ότι επικουρική χημειοθεραπεία μπορεί να βελτιώσει την επιβίωση των ασθενών με εκτομή σταδίου ΙΙ-ΙΙΙ & NSCLC, ταυτοποίηση των ασθενών πρώιμο στάδιο με κακή επιβίωση είναι κλινικά σημαντικές [1].

γαλεκτίνες είναι μια οικογένεια πρωτεϊνών των οποίων τα μέλη ορίζονται από την παρουσία ενός τομέα αναγνώρισης υδατάνθρακα συντηρημένες [2]. Μέχρι στιγμής, έχουν δεκαπέντε γαλεκτίνες έχουν ταυτοποιηθεί, έντεκα από τα οποία εκφράζονται επίσης σε διαφορετικούς ανθρώπινους ιστούς και κύτταρα [3], [4]. Ασκούν πολλές διαφορετικές λειτουργίες, με ρύθμιση και τελειοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος είναι το καλύτερο που μελετήθηκαν. Κατά συνέπεια, η απορρύθμιση της έκφρασης γαλεκτίνη συνδέεται συχνά με ανεπαρκή ανοσολογική απόκριση η οποία συμβάλλει σε διάφορες παθολογικές καταστάσεις, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου [5], [6]. Επιπλέον, έχουν γαλεκτίνες βρεθεί να διαμεσολαβούν των καρκινικών κυττάρων της μετάστασης [7] – [9] και για την πρόκληση και τη διατήρηση της αγγειογένεσης των όγκων [10] – [15], το οποίο προσθέτει περαιτέρω εξέλιξης του καρκίνου. Όλο αυτό έχει ως αποτέλεσμα την αναγνώριση των γαλεκτίνες ως διαγνωστικοί και προγνωστικοί δείκτες σε διαφορετικούς τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του πνεύμονα. Για παράδειγμα, η αυξημένη γαλεκτίνη-3 έκφρασης έχει περιγραφεί ως δείκτης κακής πρόγνωσης σε ασθενείς με NSCLC [16], [17]. Παρόμοιες παρατηρήσεις έχουν αναφερθεί για γαλεκτίνης-1 έκφραση [16] – [18]. Επιπλέον, γαλεκτίνη-1 έκφραση είναι αυξημένη σε ιστό καρκίνου του πνεύμονα, σε σύγκριση με φυσιολογικό πνεύμονα [19]. Πιο πρόσφατα, τα αυξημένα επίπεδα της γαλεκτίνης-1 έκφραση βρέθηκαν να προωθήσει πνεύμονα εξέλιξης του καρκίνου και χημειοαντίσταση [20] ενώ η αυξημένη έκφραση γαλεκτίνης-4 δείχθηκε να προβλέψουμε λέμφου μετάσταση στους λεμφαδένες σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα [21]. Όλα αυτά τα ευρήματα δείχνουν την προγνωστική δυναμικό της γαλεκτίνες στον καρκίνο του πνεύμονα. Ωστόσο, αν η έκφραση γαλεκτίνη μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τη διάκριση μεταξύ ασθενών πρώιμο στάδιο NSCLC με καλή ή κακή πρόγνωση δεν έχει εδραιωθεί. Ως εκ τούτου, ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να καθοριστεί εάν η μέτρηση της έκφρασης του mRNA γκαλεκτίνη θα μπορούσε να χρησιμεύσει ως προγνωστικός δείκτης της κλινικής έκβασης σε ασθενείς με σταδίου Ι /ΙΙ NSCLC χρησιμοποιώντας ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθικοί κανόνες

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την τοπική εσωτερική επιτροπή δεοντολογίας (Συλλογή ιστών του Μάαστριχτ Παθολογίας, https://www.pathologymumc.nl/research/external-projects/maastricht-pathology-tissue-collection- mptc) και είναι σύμφωνη με τις συστάσεις που καθοδηγεί τους γιατρούς στον τομέα της βιοϊατρικής έρευνας στον άνθρωπο, όπως ορίζεται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι. Σύμφωνα με την ισχύουσα δεοντολογία, η χρήση ανώνυμων ιστού από την τράπεζα ιστών δεν απαιτούν ειδική γραπτή συγκατάθεση.

Ασθενείς

Η τρέχουσα μελέτη περιλάμβανε δείγματα όγκων σε ασθενείς με σταδίου Ι /ΙΙ NSCLC που υποβλήθηκε σε μια ανατομική θεραπευτική εκτομή στο Πανεπιστημιακό νοσοκομείο του Μάαστριχτ μεταξύ 1994 και 2004 [22]. Κριτήρια αποκλεισμού ήταν 1) Προηγούμενη άλλη κακοήθεια, 2) Ανάπτυξη μια άσχετη κακοήθειας κατά τη διάρκεια παρακολούθησης τουλάχιστον 4 χρόνια, ή 3) Νεο-επικουρική θεραπεία.

χαρακτηριστικών δειγμάτων

διαχωρισμένοι υλικό αποθηκεύθηκε στους -80 ° C ως μέρος της Συλλογής ιστών Maastricht Pathology. Μόνο ιστών από ασθενείς με νόσο σταδίου Ι /ΙΙ και με μια περιοχή του όγκου & gt? 50% (μέσος όρος 65,9%, 95% CI: 59,9 – 71,9), όπως αξιολογήθηκε σε αιματοξυλίνη /ηωσίνη τομές από έναν έμπειρο παθολογοανατόμο (R-ΚΕ), θεωρήθηκαν επιλέξιμα για περαιτέρω έρευνες.

σχεδιασμός μελέτης

αναδρομική ανάλυση ιστού του όγκου από το στάδιο I /II ασθενείς με NSCLC που υποβλήθηκαν σε θεραπευτική χειρουργική εκτομή μεταξύ του 1994 και του 2004 στο Πανεπιστημιακό νοσοκομείο του Μάαστριχτ. Συνολικά, περιελήφθησαν 87 ασθενείς. Οι ασθενείς που δεν έλαβαν προηγούμενη θεραπεία και δεν έχουν ιστορικό ή να αναπτύξουν άσχετα κακοήθειες έως και 4 χρόνια μετά την επέμβαση. Η παρακολούθηση ήταν τουλάχιστον 5 έτη κατά τα οποία οι ασθενείς εξετάστηκαν συστηματικά κάθε 3 μήνες τα πρώτα 2 έτη και στη συνέχεια κάθε 6 μήνες. Κλινικά τελικά σημεία συμπεριλάμβαναν τη συνολική επιβίωση (OS) και απαλλαγμένα από ασθένειες επιβίωση (DFS). Η συνολική επιβίωση ήταν ο χρόνος σε μήνες από την ημέρα της χειρουργικής επέμβασης, μέχρι την ημέρα του θανάτου από οποιαδήποτε αιτία. Ελεύθερο νόσου επιβίωση ήταν ο χρόνος σε μήνες από την ημέρα της χειρουργικής επέμβασης μέχρι την ημέρα της υποτροπής του όγκου, είτε τοποπεριοχική ή μακρινό. Οι υποψήφιες μεταβλητές που θεωρήθηκαν για να συμπεριληφθούν σε μοντέλα περιλαμβάνονται τα επίπεδα έκφρασης του mRNA της κάθε γκαλεκτίνη (σε 2∧-deltaCt), την ηλικία (σε έτη), το στάδιο (Ι ή ΙΙ), το φύλο, ιστολογία (πλακώδες ή άλλο), το κάπνισμα ( πρώην ή άλλες). Ο αριθμός των ασθενών που συμπεριλήφθηκαν προσδιορίστηκε με τη διαθεσιμότητα των δειγμάτων όγκου. Μέσα σε αυτό το μέγεθος του δείγματος, περίπου 50 γεγονότα συνέβησαν το οποίο επέτρεψε την ένταξη των 5 μεταβλητών για την πολυμεταβλητή ανάλυση για να αποφευχθεί ο κίνδυνος της υπερ-τοποθέτηση

χρησιμοποιήθηκαν καλλιέργειες κυττάρων

Οι ακόλουθες κυτταρικές σειρές:. Α549 καρκίνωμα ανθρώπινου κυψελιδικού (ATCC CCL-185), καρκίνωμα Η460 ανθρώπινο μεγάλων κυττάρων (ATCC ΗΤΒ-177), H1650 ανθρώπινου καρκινώματος βρογχοκυψελιδικό (ATCC CRL-5883), ανθρώπινη μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα H1975 (ATCC CRL-5908), H3255 ανθρώπινη μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (ATCC CRL-2882, έχει διακοπεί). Όλες οι κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν σε RPMI (Invitrogen) συμπληρωμένου με 10% ορό εμβρύου μόσχου, πενικιλλίνη (50 U /ml) και στρεπτομυκίνη (50 μικρογραμμάρια /ml). Τα κύτταρα διατηρήθηκαν στους 37 ° C και 5% CO

2 σε υγροποιημένο επωαστή.

απομόνωση RNA και σύνθεση cDNA

Ολικό RNA απομονώθηκε από 10 χ 10 μm τομές πάχους κατεψυγμένου ιστού ή από καλλιεργημένα κύτταρα χρησιμοποιώντας το κιτ RNeasy (Qiagen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Σε περίπτωση καρκινικό ιστό, ένα επιπλέον τμήμα λήφθηκε πριν και μετά τη σειρά των 10 για H /χρώση Ε και αξιολόγηση του ποσοστού της επιφάνειας του όγκου. Γονιδιωματικό DNA μόλυνση απομακρύνθηκε με επί στήλης DNAse θεραπεία. Η συγκέντρωση και η καθαρότητα του RNA αναλύθηκε με τη χρήση της NanoDrop ND-1000 (NanoDrop Technologies). Στη συνέχεια, το cDNA σύνθεση πραγματοποιήθηκε με την iScript cDNA Synthesis Kit (Biorad) χρησιμοποιώντας 0,5 έως 1,0 μικρογραμμάρια ολικού RNA.

σε πραγματικό χρόνο qPCR

qPCR διεξήχθη σε iQ5 Πολύχρωμο Real-Time Σύστημα ανίχνευσης PCR (BioRad) ή ο CFX96 (BioRad) χρησιμοποιώντας το κύριο μείγμα iQ SYBR Green PCR (BioRad) χρησιμοποιώντας 400 nmol /L των κατάλληλων εκκινητών που έχουν περιγραφεί πριν από την [23]. Για να γίνει διάκριση μεταξύ των διαφόρων γκαλεκτίνη-9 παραλλαγές ματίσματος χρησιμοποιήθηκαν οι ακόλουθοι εκκινητές: gal-9FL μπροστά GCAGACAAAAACCTCCCG, gal-9FL αντίστροφη CCCAGAGCACAGGTTGATG, gal-9Δ5 μπροστά ATCAGCTTCCAGCCTCCC, gal-9Δ5 αντίστροφη CCCAGAGCACAGGTTGATG, gal-9Δ5 /6 προς τα εμπρός CTACATCAGCTTCCAGACCCA, gal- 9Δ5 /6 αντίστροφη CCCAGAGCACAGGTTGATG. qPCR για αυτές τις παραλλαγές ματίσματος διεξήχθη χρησιμοποιώντας Sensimix (Quantace) στους Tm = 61 ° C. Όλοι οι εκκινητές συντέθηκαν με Eurogentec.

κηλίδος Western

κηλίδος Western πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τυποποιημένα πρωτόκολλα. Εν συντομία 5 έως 10 πάχους 10 μm crysections αιωρήθηκαν σε 60 μι ρυθμιστικού διαλύματος δείγματος Laemlli (Biorad) συμπληρωμένο με 1:20 β-μερκαπτο-αιθανόλη. Τα δείγματα έβρασαν για 5 λεπτά και αμέσως διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση πηκτής επί πηκτής πολυακρυλαμιδίου 15% και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF (Millipore). Οι μεμβράνες μπλοκαρίστηκαν με Oddyssey ρυθμιστικό αποκλεισμού (LI-COR Biosciences) για 1 ώρα και επωάστηκε όλη τη νύκτα στους 4 ° C είτε με κουνελιού αντι-γαλεκτίνης-1 αντίσωμα (Peprotech) ή γίδινο αντίσωμα αντι-γαλεκτίνης-9 (R &? Συστήματα D). Φόρτωση των γελών ελέγχθηκε με α-ακτίνη ανίχνευση χρησιμοποιώντας αντι-α-ακτίνης ποντικού (1:10000, ΜΡ Biomedicals). Οι μεμβράνες πλύθηκαν τρεις φορές με PBS /0.1% Tween και στη συνέχεια επωάστηκαν με τα κατάλληλα δευτερεύοντα αντισώματα IRDye (LI-COR Biosciences) σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Τέλος, οι μεμβράνες πλύθηκαν με PBS /0,1% Tween και ξεπλύθηκαν με PBS μετά την οποία εικόνες αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας το σύστημα Οδύσσεια υπέρυθρης απεικόνισης (LI-COR Biosciences).

Ανοσοϊστοχημεία

Ανοσοϊστοχημεία για galectin- 1 και γαλεκτίνη-9 διεξήχθη επί τομών ιστού ενσωματωμένα σε παραφίνη σύμφωνα με τυποποιημένες διαδικασίες χρησιμοποιώντας κουνελιού αντι-γαλεκτίνης-1 (1:500? Peprotech) και γίδινο αντι-γαλεκτίνης-9 (1:500? συστημάτων D? Ε & amp) αντισωμάτων των οποίων η εξειδίκευση προσδιορίστηκε πριν [23]. Η χρώση απεικονίστηκαν χρησιμοποιώντας το κιτ StreptABComplex /HRP (Dako). Οι τομές με αιματοξυλίνη (Merck), αφυδατωμένα, και τοποθετούνται σε Depex (BDH Prolabo). Τυφλές βαθμολόγησης του γαλεκτίνης-1 και γαλεκτίνη-9 διεξήχθη σε τρία διαφορετικά διαμερίσματα του όγκου, δηλαδή τα καρκινικά κύτταρα, το στρώμα του όγκου και τα ενδοθηλιακά κύτταρα όγκου. Για βαθμολόγησης του γαλεκτίνης-1 και γαλεκτίνη-9 η συχνότητα της χρώσης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας την ακόλουθη κλίμακα: 0 = καθόλου ή σχεδόν καθόλου κύτταρα θετικά, 1 = μικρό κλάσμα των κυττάρων θετικών, 2 = περίπου το ήμισυ των κυττάρων που είναι θετικά, 3 = περισσότερο τότε το ήμισυ των κυττάρων που είναι θετικά, 4 = το σύνολο ή το μεγαλύτερο μέρος των κυττάρων θετικών. Όλες οι χρώσεις βαθμολογήθηκαν από δύο τουλάχιστον ανεξάρτητες προσωπικότητες.

Η στατιστική ανάλυση

συντελεστές συσχέτισης Bivariable Pearson υπολογίστηκαν για τη μελέτη των σχέσεων μεταξύ των επιπέδων έκφρασης του mRNA γκαλεκτίνη (2

-ΔCt), η κλινική παραμέτρων, ή /και ανοσοϊστοχημική χρώση βαθμολογίες. Να εντοπίσει τις πιο σημαντικές προγνωστικούς παράγοντες για την έκβαση των ασθενών χρησιμοποιήθηκε μια προσέγγιση σε δύο στάδια. Κατ ‘αρχάς, μονοπαραγοντική συσχετίσεις μεταξύ OS ή DFS με κλινικές παραμέτρους ή κάθε γκαλεκτίνη εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας την ανάλυση παλινδρόμησης Cox. Στη συνέχεια, πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox με τα εμπρός επιλογής διεξήχθη στις πιο σημαντικοί προγνωστικοί γκαλεκτίνη εντοπίζονται στην μονοπαραγοντική ανάλυση, δηλαδή gal-1 (κατηγορηματική), gal-9FL (κατηγορηματική), gal-9Δ5 (κατηγορηματική), σε συνδυασμό με την ηλικία (συνεχή ) και το στάδιο (κατηγορηματική), είτε με λειτουργικό σύστημα ή DFS ως το αποτέλεσμα. Η ανάλυση περιελάμβανε το επιβίωσης Kaplan-Meier εκτιμήσεις με το τεστ rank Σύνδεση έγιναν για να καθοριστεί διάμεση OS ή DFS. Διάμεση επίπεδα έκφρασης του mRNA χρησιμοποιήθηκαν ως τιμή αποκοπής για να χωρίζουν τους ασθενείς σε μια ομάδα υψηλής έκφρασης (πάνω μεσαίο) και χαμηλή ομάδα έκφρασης (κάτω μέση). διαστήματα εμπιστοσύνης για διάμεση επιβίωση υπολογίστηκαν σύμφωνα με Bonnet et al. [24]. Όλες οι στατιστικές υπολογισμοί έγιναν σε SPSS20.0.0.

Αποτελέσματα

Η έκφραση του mRNA γκαλεκτίνη σε πρώιμο στάδιο κυτταρικές σειρές NSCLC και του καρκίνου του πνεύμονα

Πραγματοποιήσαμε εκτενή ανάλυση της γονιδιακής έκφρασης γκαλεκτίνη στην μια αναδρομική μελέτη σχετικά με εκτομή ιστούς όγκων που προέρχονται από 87 ασθενείς που διαγιγνώσκονται με πρώιμο στάδιο (στάδιο I /II) NSCLC. Η μέση ηλικία των ασθενών ήταν 65,5 χρόνια (εύρος 37,4 – 85,5) και η παρακολούθηση ήταν τουλάχιστον 5 ετών κατά την οποία 47 ασθενείς (54,0%) παρουσίασαν υποτροπή της νόσου και 50 ασθενείς απεβίωσαν (57,5%). Η διάμεση συνολική επιβίωση (OS), ορίζεται ως ο χρόνος μεταξύ της ημέρας της επέμβασης μέχρι την ημέρα του θανάτου του, ήταν 48,7 μήνες (95% CI 33,1 έως 64,2 μήνες). Ελεύθερο νόσου επιβίωση (DFS), ορίζεται ως ο χρόνος μεταξύ της ημέρας της επέμβασης μέχρι την ημέρα της τοποπεριοχική ή απομακρυσμένη υποτροπή, ήταν 33,3 μήνες (95% CI 34,8 έως 49,6 μήνες). Τα συνολικά δημογραφικά και πρότυπο προγνωστικές μεταβλητές της ομάδας των ασθενών που παρατίθενται στον Πίνακα 1.

Η

Για να πάρετε εικόνα στην προγνωστική αξία της έκφρασης γκαλεκτίνη στο στάδιο I /II NSCLC πρώτα καθοριστεί ποια γαλεκτίνες εκφράζονται σε NSCLC ιστό του όγκου. ανάλυση qPCR με προηγουμένως επικυρωθεί εκκινητές στοχεύουν εναντίον όλων των γνωστών ανθρώπινων γαλεκτίνες [23] έδειξε ότι έξι γαλεκτίνες, δηλαδή γαλεκτίνη-1, -3, -4, -7, -8, -9 και, η έκφραση του mRNA θα μπορούσε να ανιχνευθεί (Σχήμα 1Α ). Επειδή εκτεταμένες μάτισμα έχει αναφερθεί για γαλεκτίνης-9 [23], [25], [26], προσδιορίσαμε επίσης την έκφραση του mRNA από τα πιο κοινά παραλλαγές ματίσματος γαλεκτίνης-9, δηλαδή γαλεκτίνης-9 πλήρους μήκους (FL), galectin- 9 με μία διαγραφή του εξονίου 5 (Δ5), και γαλεκτίνη-9 με μία διαγραφή των εξωνίων 5 και 6 (Δ5 /6). Και οι τρεις παραλλαγές ήταν ανιχνεύσιμα με gal-9Δ5 ως κυρίαρχη παραλλαγή (Σχήμα 1Α, ένθετο). Πρωτεΐνη έκφραση των διαφορετικών μελών της οικογένειας γαλεκτίνη επιβεβαιώθηκε με διαλογή ανοσοϊστοχημική χρώσεις διατίθεται στα ανθρώπινα άτλαντα πρωτεΐνη [27] (Εικόνα 1Β). Πρωτεΐνη έκφραση των διαφόρων ισομορφών γαλεκτίνης-9 ματίσματος επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με ανάλυση στυπώματος Western (Εικόνα 1 C). Επιπλέον, η έκφραση προφίλ σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα επιβεβαίωσε ότι η έκφραση περιορίστηκε σε γαλεκτίνη-1, -3, -4, -7, -8 και -9 (Σχήμα S1). Αυτό επιβεβαιώνει με μια μελέτη από Lahm et al. ο οποίος ανέλυσε την έκφραση πολλαπλών γαλεκτίνες σε ένα ευρύ πάνελ καρκινικών κυτταρικών σειρών [28]. Όλα αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι η γαλεκτίνη-1, γαλεκτίνη-3, και γαλεκτίνη-8 είναι τα πιο άφθονα εκφραζόμενο γαλεκτίνες ενώ η έκφραση του γαλεκτίνης-4, γαλεκτίνη-7, και γαλεκτίνη-9 είναι σχετικά χαμηλό, τόσο σε καρκινικούς ιστούς και σε διαφορετικά πνεύμονα καρκινικές κυτταρικές σειρές.

το ένθετο δείχνει την έκφραση των τριών παραλλαγών γαλεκτίνης-9 ματίσματος. (Β) Εικόνες ανοσοϊστοχημική χρώση των γαλεκτίνες με έκφραση ανιχνεύσιμο mRNA σε NSCLC [27]. (Γ) ανάλυση κηλίδας Western των γαλεκτίνης-9 έκφραση ισομορφή στον ιστό του όγκου NSCLC από 5 διαφορετικούς ασθενείς. Τρεις ζώνες στο αναμενόμενο μοριακό βάρος των γκαλεκτίνη-9FL, γκαλεκτίνη-9Δ5 και γκαλεκτίνη-9Δ5 /6 παρατηρήθηκαν σε διάφορες εντάσεις.

Η

Σχέση ανάμεσα στην έκφραση του mRNA γκαλεκτίνη και κλινικές παραμέτρους σε πρώιμο στάδιο NSCLC

Ανάλυση της σχέσης μεταξύ των διαφόρων επιπέδων έκφρασης του mRNA γαλεκτίνη έδειξαν μια σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ της ολικής γαλεκτίνης-9 και τις ειδικές παραλλαγές ματίσματος γαλεκτίνης-9, δηλαδή gal-9FL (r = 0.48), gal-9Δ5 (r = 0,85 ), και gal-9Δ5 /6 (r = 0.52). Εντός αυτών παραλλαγές ματίσματος υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ gal-9FL και gal-9Δ5 (r = 0.44), καθώς και μεταξύ gal-9Δ5 και gal-9Δ5 /6 (r = 0.53). Σημαντικές συσχετίσεις παρατηρήθηκαν επίσης μεταξύ γαλεκτίνης-3 και gal-9FL (r = 0,34) και μεταξύ gal-4 και gal-9Δ5 /6 (r = 0.31). Καμία σημαντική συσχετίσεις βρέθηκαν μεταξύ των επιπέδων έκφρασης του mRNA των άλλων γαλεκτίνες. Όσον αφορά τη σχέση μεταξύ της έκφρασης του mRNA γκαλεκτίνη και τις κλινικές παραμέτρους, δηλαδή την ηλικία, το στάδιο, το φύλο, την ιστολογία, και το κάπνισμα, παρατηρήσαμε μια ασθενώς σημαντική συσχέτιση μεταξύ του φύλου και gal-9Δ5 (r = 0.24) και μεταξύ της ηλικίας και αντίστοιχα gal-1 (r = 0.26), gal-9 (r = -0,25) και gal-9Δ5 (r = -0,30). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του mRNA γκαλεκτίνη και τις υπόλοιπες παραμέτρους, δηλαδή ιστολογία, το στάδιο και το κάπνισμα, βρέθηκε.

Σύνδεσης μεταξύ της έκφρασης του mRNA γκαλεκτίνη και πρόγνωση σε πρώιμο στάδιο NSCLC

Στη συνέχεια, μονοπαραγοντική αναλύσεις παλινδρόμησης Cox διεξήχθησαν για την επιλογή των δεικτών με την ισχυρότερη συσχέτιση με OS (Πίνακας 2) και DFS (Πίνακας 3). Αυτό που προσδιορίζονται στάδιο, gal-1, gal-9FL και gal-9Δ5 όσο το δυνατόν προγνωστικοί παράγοντες τόσο για OS και DFS σε πρώιμο στάδιο ασθενείς με NSCLC. Στη συνέχεια, Kaplan-Meier αναλύσεις χρησιμοποιήθηκαν για να εκτιμηθεί διάμεση OS και DFS σε ασθενείς που εκφράζουν ένα συγκεκριμένο γαλεκτίνη κάτω ή πάνω από το μέσο επίπεδο έκφρασης του mRNA. Ασθενείς που εξέφραζαν γαλεκτίνης-1 πάνω από τα διάμεσα επίπεδα είχε σημαντική μικρότερη OS και DFS (Σχήμα 2Α και Πίνακας 4). Η μονοπαραγοντική μοντέλο Cox εντοπίστηκαν επίσης δύο παραλλαγές ματίσματος του γκαλεκτίνη-9, δηλαδή gal-9FL και gal-9Δ5, να πιθανώς σχετίζονται τόσο με το λειτουργικό σύστημα και DFS. Πράγματι, οι ασθενείς είτε με επίπεδα έκφρασης gal-9FL ή gal-9Δ5 κάτω από τη μέση είχαν σημαντική βραχύτερη OS συντομότερες DFS (Σχήμα 2Β + C και Πίνακας 4). Κανένα από τα άλλα γαλεκτίνες συσχετίστηκε σημαντικά με το OS ή DFS.

Η

Η

Τέλος, πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox εκτελέστηκε με τα εμπρός επιλογή για τους πιο σημαντικούς παράγοντες που προσδιορίζονται στην μονοπαραγοντική ανάλυση, δηλαδή το στάδιο, την ηλικία, γκαλεκτίνη-1 galctin-9FL και γκαλεκτίνη-9Δ5. Οι αναλύσεις έδειξαν ότι για το OS, το πιο σημαντικό προγνωστικό μοντέλο περιλαμβάνονται στάδιο, την ηλικία, gal-1 και gal-9Δ5 ενώ το μοντέλο για την DFS περιλαμβάνονται στάδιο, την ηλικία και gal-9Δ5 (Πίνακας 5).

Η

εντοπισμός και διανομή γκαλεκτίνη-1 και την έκφραση της πρωτεΐνης γκαλεκτίνη-9 σε πρώιμο στάδιο NSCLC ιστού

για να πάρετε περισσότερες γνώσεις στον εντοπισμό και τη διανομή των γκαλεκτίνη-1 και πρωτεΐνη γκαλεκτίνη-9 πραγματοποιήσαμε ανοσοϊστοχημικές χρώσεις σε αντιπροσωπευτικό υποσύνολο των όγκων (n = 45). Γαλεκτίνη-1 ήταν ευρέως εκφράζονται στους περισσότερους ιστούς όγκων. Η έκφραση στα κύτταρα όγκου κυμαινόταν μεταξύ όγκων, καθώς και στους όγκους, με μερικούς ιστούς που δεν παρουσιάζει θετικά καρκινικά κύτταρα ενώ σε άλλους ιστούς, τα κύτταρα όγκου ήταν ισχυρώς θετικά. Οι περισσότεροι ιστοί έδειξαν θετική χρώση στο στρώμα καθώς και στα ενδοθηλιακά κύτταρα όγκου (Σχήμα 3Α). χρώση γαλεκτίνης-9 ήταν λιγότερο εμφανή σε σύγκριση με γαλεκτίνης-1. Στην πραγματικότητα, τα θετικά καρκινικά κύτταρα μόνο σπάνια παρατηρήθηκαν αν και μερικές ιστούς φαίνεται να εμφανίζει μια βαθμίδα με την αύξηση των επιπέδων γαλεκτίνης-9 στα κύτταρα όγκου πλησιέστερα προς τον ιστό στρωματικό (Σχήμα 3Β). Τόσο το στρώμα και τα ενδοθηλιακά κύτταρα όγκου χρωματίζονται θετικά συχνότερα (Σχήμα 3Β).

Η χρώση παρατηρήθηκε σε διαμέρισμα των καρκινικών κυττάρων (Τ), στρωματικό διαμέρισμα (S) και στα ενδοθηλιακά κύτταρα όγκου (βέλη). Το ένθετο στα αριστερά δείχνει τη χρώση ελέγχου ισοτύπου. Μπάρα κλίμακας = 50 μικρόμετρα. Τα γραφήματα ράβδων που δείχνει την ποσοτικοποίηση των IHC βαθμολογίες για γαλεκτίνης-1 και γαλεκτίνη-9 σε διάφορα διαμερίσματα του όγκου.

Η

Μεταγενέστερη ανάλυση συσχέτισης Pearson των βαθμολογιών χρώση έδειξε ότι υπήρχε σημαντική αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ της βαθμολογίας του γκαλεκτίνη-1 και γκαλεκτίνη-9 στα καρκινικά κύτταρα (διορθ. συντ. -0,36), ενώ υπήρξε μια θετική συσχέτιση μεταξύ γκαλεκτίνη-1 και γκαλεκτίνη-9 βαθμολογίας πρωτεΐνη στα ενδοθηλιακά κύτταρα του όγκου (διορθ. συντ. 0,44). Ωστόσο, ούτε οι βαθμολογίες χρώσης γκαλεκτίνη-1 ή γκαλεκτίνη-9 πρωτεΐνης που σχετίζεται με το OS ή DFS. Επιπλέον, δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ IHC βαθμολογιών και των επιπέδων mRNA.

Συζήτηση

Αξιολογήσαμε την προγνωστική σημασία της έκφρασης mRNA γαλεκτίνη σε ασθενείς με σταδίου Ι /ΙΙ μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. Μονοπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης κατά Cox χρησιμοποιήθηκαν για να επιλέξετε μια σειρά από τα πιο προγνωστικών κλινικές παραμέτρους και γαλεκτίνες. Αυτά χρησιμοποιήθηκαν ακολούθως σε μία πολυπαραγοντική ανάλυση για να δημιουργήσει ένα μοντέλο που θα μπορούσε να χρησιμεύσει για να προβλέψει OS ή DFS σε ασθενείς με σταδίου Ι /ΙΙ NSCLC. Το κύριο εύρημα της μελέτης αυτής είναι ότι για την πρόβλεψη OS, το πιο σημαντικό προγνωστικό μοντέλο περιλαμβάνονται στάδιο, την ηλικία, gal-1 και gal-9Δ5 ενώ το μοντέλο για την DFS περιλαμβάνονται στάδιο, την ηλικία και gal-9Δ5.

γαλεκτίνες έχουν προηγουμένως συσχετιστεί με την εξέλιξη του καρκίνου του πνεύμονα [16], [17], [29]. Η παρατήρησή μας ότι οι ασθενείς που εκφράζουν γαλεκτίνη-1 πάνω από τα διάμεσα επίπεδα έχουν σημαντική μικρότερη συνολική συμφωνεί με αυτές τις μελέτες [16], [17], καθώς και με μελέτες σε άλλους τύπους καρκίνου [30]. Η προγνωστική αξία της γκαλεκτίνη-1 επιβεβαιώθηκε στην πολυπαραγοντική ανάλυση. Γαλεκτίνη-3, η οποία έχει επίσης συνδεθεί με την κακή έκβαση της νόσου σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα [16], [17], δεν φθάνουν στατιστική σημασία στην ομάδα μας ασθενή. Αυτό επιβεβαιώνει με δύο πρόσφατες μελέτες [31], [32]. Από την άλλη πλευρά, έχει προταθεί ότι κυτταρικό εντοπισμό του γαλεκτίνη-3, δηλ κυτταροπλασματική πυρηνική εναντίον μπορούσε να είναι προγνωστική αξία για την επανάληψη [33]. Το μόνο που μετριέται γκαλεκτίνη-3 επίπεδα έκφρασης του mRNA και δεν καθορίζουν την κυτταρική εντόπιση της πρωτεϊνικής έκφρασης γκαλεκτίνη-3 στην ομάδα μας των ασθενών. Έτσι, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε ότι αυτές οι παράμετροι θα μπορούσαν να είναι προγνωστική αξία στο στάδιο I /II ασθενείς με NSCLC.

Ένα νέο εύρημα της παρούσας μελέτης ήταν ο προσδιορισμός μιας συγκεκριμένης παραλλαγής συρραφής gal-9, δηλαδή γκαλεκτίνη-9Δ5 ως προγνωστικός δείκτης σε NSCLC. Χρησιμοποιώντας πολυπαραγοντική ανάλυση Cox παλινδρόμησης τώρα παρατηρηθεί ότι η έκφραση χαμηλή γκαλεκτίνη-9Δ5 συσχετίστηκε με κακή OS και DFS σε ασθενείς πρώιμο στάδιο NSCLC. Οι παρατηρήσεις αυτές είναι σύμφωνες με άλλες αναφορές στις οποίες γαλεκτίνης-9 έκφραση αντιστρόφως ανάλογη με την εξέλιξη του καρκίνου και της επιβίωσης ασθενών σε ένα αριθμό διαφορετικών τύπων καρκίνου, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του δέρματος, καρκίνο του ήπατος, και του καρκίνου του μαστού [34] – [36]. Πιο πρόσφατα, Jiang et al. προσδιορίζονται έκφραση γκαλεκτίνη-9 ως ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας σε μια αναδρομική μελέτη σε 305 ασθενείς με καρκίνο του στομάχου. Και πάλι, χαμηλή έκφραση γαλεκτίνης-9 συσχετίστηκε με κακή επιβίωση [37].

γαλεκτίνης-9Δ5 είναι ένα από τα τρία πιο συχνά εντοπίζονται γαλεκτίνης-9 παραλλαγές. Αυτά ματίσματος παραλλαγές κωδικοποιούν πρωτεΐνη ισομορφές που διαφέρουν ως προς το μήκος της περιοχής συνδετήρα μεταξύ των δύο περιοχών CRD που επηρεάζει πολυμερές σχηματισμού και σθένος [38], [39]. Προηγούμενα δεδομένα δείχνουν ότι οι διάφορες γαλεκτίνης-9 ισομορφών έχουν μια αποκλίνουσα ρόλο σε καρκινικά κύτταρα, π.χ. επηρεάζουν διαφορετικά την προσκόλληση των κυττάρων στην ECM και στο ενδοθήλιο [40]. Σε γενικές γραμμές, αλλοιωμένη έκφραση γαλεκτίνης-9 έχει συνδεθεί με ανώμαλη κυτταρική προσκόλληση, ανάπτυξη και μετανάστευση [39]. Άλλοι περιέγραψαν ότι γαλεκτίνης-9 μπορεί να επηρεάσει την επιβίωση των κυττάρων, καθώς και ομο- και συσσωμάτωση ετεροτυπικές κυττάρου [9], [34], [40] – [43]. Η απώλεια της έκφρασης γκαλεκτίνη-9 θα μπορούσαν να θέσουν σε κίνδυνο την ακεραιότητα του ιστού που επιτρέπει τα καρκινικά κύτταρα να intravasate σε κυκλοφορία και μεταστάσεις. Πράγματι, στον καρκίνο του μαστού χαμηλή έκφραση γκαλεκτίνη-9 ήταν καλύτερος προγνωστικός δείκτης των μακρινών μεταστάσεων σε σύγκριση με την κατάσταση των λεμφαδένων [42]. Παρόμοιες παρατηρήσεις έγιναν σε μελάνωμα και καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας πλακωδών κυττάρων [34], [44]. Ωστόσο, οι επιδράσεις αυτές εξαρτώνται από πολλές παραμέτρους, συμπεριλαμβανομένου του ειδικού παραλλαγή γαλεκτίνης-9, τον τύπο του κυττάρου και του συστατικού μήτρας προσκόλληση στους οποίους προσδένονται τα κύτταρα [45]. Εάν και πώς όλες αυτές οι παράμετροι επηρεάζουν την εξέλιξη του καρκίνου του πνεύμονα απαιτεί περαιτέρω μελέτες. Ενδεχομένως, γαλεκτίνη-9 μπορεί να λειτουργήσει ως χημειοελκτικό για καρκίνο του πνεύμονα κύτταρα, παρόμοια όπως περιγράφεται για τα ηωσινόφιλα [46], [47] ή ενδοθηλιακά κύτταρα [26]. Μαζί με την παρατήρηση μας ότι στρωματικά έκφραση γκαλεκτίνη-9Δ5 παραμένει αυξημένη σε όγκους του πνεύμονα αυτή η δραστηριότητα χημειοέλξης δείχνει ότι γκαλεκτίνη-9Δ5 θα μπορούσε να λειτουργήσει ως σύνθημα καθοδήγηση για τη μεταστατική καρκινικά κύτταρα να μεταναστεύουν προς την περιοχή της ενδαγγείωση, δηλαδή το αγγειακό σύστημα. Αυτό θα μπορούσε να προωθήσει μετάσταση όγκου ειδικά εάν η απώλεια του γαλεκτίνης-9 σε καρκινικά κύτταρα οδηγεί σε απώλεια της ακεραιότητας των ιστών [45]. Τέλος, έχει αναφερθεί ότι σε ζωικά μοντέλα και τους ασθενείς με καρκίνο, καρκινικά κύτταρα μπορεί να απελευθερώσει γαλεκτίνης-9 που περιέχει εξωσώματα που μπορεί να επάγει Τ-κυττάρων απόπτωση [48], [49]. Είτε ενδοθηλιακά καρκινικά κύτταρα εκκρίνουν επίσης γκαλεκτίνη-9 που περιέχουν εξωσώματα πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω, αλλά ένας τέτοιος μηχανισμός θα μπορούσε να συμβάλει στην πρόοδο του όγκου, παρέχοντας έναν τρόπο να ξεφύγουν από το ανοσοποιητικό επιτήρησης.

Η ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση της γκαλεκτίνη-1 και galectin- 9 έκφραση πρωτεΐνης έδειξε διαφορές στον εντοπισμό και την κατανομή μέσα στον ιστό του όγκου. Οι παρατηρήσεις αυτές είναι σύμφωνες με τα προηγούμενα ευρήματα σε διαφορετικούς όγκους όπου θα μπορούσαν να ανιχνευθούν αμφότερες οι πρωτεΐνες γαλεκτίνης-1 και γαλεκτίνη-9 σε διάφορα διαμερίσματα του όγκου, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων του όγκου, στρώματος του όγκου και τα ενδοθηλιακά κύτταρα όγκου [17], [23], [ ,,,0],30], [42], [44]. Παρ ‘όλα αυτά, η έκφραση της πρωτεΐνης δεν είχαν προγνωστική αξία στην ομάδα μας των ασθενών. Το πιο πιθανό, αυτό σχετίζεται με το γεγονός ότι η ανοσοϊστοχημική χρώση αντιπροσωπεύει περισσότερο ποιοτική αξιολόγηση και όχι ποσοτική ανάλυση. Έτσι, τα πραγματικά επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης δεν μπορεί να ποσοτικοποιηθεί με ακρίβεια με χρώση IHC. Επιπλέον, δεν γαλεκτίνης-9 αντισώματα είναι διαθέσιμα τα οποία αναγνωρίζουν ειδικές παραλλαγές ματίσματος. Αυτό σημαίνει ότι στην περίπτωση των ασθενών με πρώιμο στάδιο NSCLC, τον καθορισμό των επιπέδων mRNA γκαλεκτίνη έχει μεγαλύτερη αξία για τις εκτιμήσεις πρόγνωση σε σύγκριση με ανοσοϊστοχημική χρώση.

Ο κύριος περιορισμός της παρούσας μελέτης είναι η σχετικά μικρό μέγεθος του δείγματος των 87 σχέση με τον μεγάλο αριθμό των παραμέτρων που αναλύθηκε. Το μέγεθος του δείγματος επέτρεπαν την ένταξη μόνο 5 συμμεταβλητές στο μοντέλο παλινδρόμησης για να ελαχιστοποιηθεί ο κίνδυνος της υπερ-τοποθέτηση. Επιπλέον, συμπεριλάβαμε μόνο πρώιμο στάδιο ασθενείς με NSCLC. Έτσι, επιπλέον μελέτες που χρησιμοποιούν μεγαλύτερες ομάδες ασθενών και, επίσης, συμπεριλαμβανομένων μεταγενέστερα στάδια της NSCLC, δηλαδή το στάδιο III /IV, θα μπορούσε να παράσχει περισσότερες πληροφορίες στην προγνωστική αξία του προφίλ έκφρασης του mRNA γκαλεκτίνη.

Εν ολίγοις, η εκτεταμένη έκφραση γκαλεκτίνη διαμόρφωση της γενικής εικόνας επιβεβαίωσε η προγνωστική αξία της γκαλεκτίνη-1 και προσδιορίζονται gal-9Δ5 ως ένα δυνητικό νέο προγνωστικοί δείκτες σε πρώιμο στάδιο NSCLC. Ταυτοποίηση τέτοιων δεικτών είναι σημαντικό να προσδιοριστούν οι ασθενείς που θα ωφεληθούν από επικουρική χημειοθεραπεία. Επιπλέον, τα ευρήματα μας εξηγούν τη σημασία των χαρακτηριστικών επιμέρους παραλλαγές συναρμολόγησης της γκαλεκτίνη-9. Απομένει να καθοριστεί αν ματίσματος παραλλαγή ειδικά προφίλ έχει παρόμοια οφέλη σε άλλους τύπους καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων και εκείνων στις οποίες συνολική έκφραση γκαλεκτίνη-9 είναι ένας προγνωστικός δείκτης.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

γκαλεκτίνη mRNA προφίλ έκφρασης σε διαφορετικές γραμμές NSCLC. Το ένθετο δείχνει την έκφραση των τριών παραλλαγών γκαλεκτίνη-9 συναρμογής

doi:. 10.1371 /journal.pone.0107988.s001

(ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς θα ήθελα να ευχαριστήσω τον Δρ Φ Galindo Garre για στατιστικούς συμβουλές και Ε Aanhane για τεχνική βοήθεια.