Αφηρημένο

Σκοπός

επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών έχει το υψηλότερο ποσοστό θνησιμότητας από όλες τις γυναικολογικές κακοήθειες. Έχουμε δείξει ότι η έκφραση υψηλού RAN συσχετίζεται έντονα με υψηλής ποιότητας και την κακή της επιβίωσης ασθενών σε επιθηλιακού καρκίνου των ωοθηκών. Ωστόσο, όπως RAN είναι ένα μικρό ΘΤΡάσης συμμετέχει σε δύο βασικές βιολογικές λειτουργίες, πυρηνο-κυτταροπλασματικής μεταφοράς και μίτωση, είναι ακόμα άγνωστο σε ποια από αυτές τις λειτουργίες συνεργάτης με κακή πρόγνωση.

Μέθοδοι

Για να εξετάσει η αξία των βιοδεικτών των στοιχείων του δικτύου RAN στο ορώδες επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών, πρωτεΐνη έκφραση έξι συγκεκριμένων εταίρων RAN αναλύθηκε με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστό που εκπροσωπούν 143 ασθενείς που σχετίζεται με κλινικές παραμέτρους. Ο κύκλος /GTP ΑΕΠ RAN αξιολογήθηκε από την έκφραση των RANBP1 και RCC1, μιτωτικής λειτουργίας από TPX2 και IMPβ, και της λειτουργίας της εμπορίας πυρηνο-κυτταροπλασματική από XPO7, XPOT και IMPβ.

Αποτελέσματα

με βάση Kaplan-Meier αναλύσεις, RAN, κυτταροπλασματική XPO7 και TPX2 ήταν σημαντικά σχετίζονται με την κακή συνολική επιβίωση των ασθενών, και έτρεξε και TPX2 συσχετίστηκαν με χαμηλότερες νόσου επιβίωση χωρίς σε ασθενείς με υψηλής ποιότητας ορώδες καρκίνωμα. ανάλυση παλινδρόμησης Cox αποκάλυψε ότι RAN και η έκφραση TPX2 ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες τόσο για τη συνολική και επιβίωσης χωρίς νόσο, και ότι η έκφραση κυτταροπλασματική XPO7 ήταν ένας προγνωστικός παράγοντας για τη συνολική επιβίωση των ασθενών.

Συμπεράσματα

Σε αυτό το συστηματική μελέτη, δείχνουμε ότι RAN και δύο πρωτεϊνών εταίρων που συμμετέχουν στο πυρηνο-κυτταροπλασματική και μιτωτικές λειτουργίες του (XPO7 και TPX2, αντίστοιχα) μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως βιοδείκτες για τη διαστρωμάτωση των ασθενών με βάση την πρόγνωση. Ειδικότερα, αναφέρθηκε για πρώτη φορά την κλινική σημασία του XPO7 exportin και έδειξε ότι η έκφραση TPX2 είχε την ισχυρότερη προγνωστική αξία. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η πρωτεΐνη εταίροι σε κάθε μία από τις λειτουργίες RAN που μπορεί να διακρίνει μεταξύ των διαφορετικών αποτελεσμάτων σε υψηλής ποιότητας ασθενείς ορώδες επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών. Επιπλέον, αυτές οι πρωτεΐνες δείχνουν κυτταρικές διεργασίες που μπορεί τελικά να έχουν ως στόχο τη βελτίωση της επιβίωσης σε ορώδες επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών

Παράθεση:. Cáceres-Gorriti KY, Καρμόνα Ε, μπάρες V, Rahimi Κ, Letourneau IJ, Tonin PN , et al. (2014) RAN Nucleo-Cytoplasmic Μεταφορών και μιτωτικής ατράκτου Συνέλευση Συνεργάτες XPO7 και TPX2 καινούριος Πρόγνωσης βιοδείκτες στην υδαρής επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών. PLoS ONE 9 (3): e91000. doi: 10.1371 /journal.pone.0091000

Συντάκτης: Eric Asselin, Πανεπιστήμιο του Κεμπέκ στο Trois-Rivieres, Καναδάς

Ελήφθη: 26 Ιουλ 2013? Αποδεκτές: 6 Φλεβάρη 2014? Δημοσιεύθηκε: 13 Μαρτίου 2014

Copyright: © 2014 Κάθερες-Gorriti et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από μια επιχορήγηση (MOP # 36056) από τις καναδικές Ινστιτούτα Ερευνών Υγείας (CIHR) σε Α-ΜΜ-Μ, PNT και DP. Όγκου τραπεζικών υποστηρίχθηκε από την Banque de TISSUS et données του Réseau de recherche sur le καρκίνο του Fond de recherche du Québec – Santé (FRQS), που σχετίζεται με την καναδική όγκου Repository Network (CTRNet). KYC-G υποστηρίχθηκε εν μέρει από υποτροφίες από το Ίδρυμα Carole Epstein και το ταμείο CANDEREL του καρκίνου του Institut du de Montréal. IJL υποστηρίχθηκε από ένα βραβείο μεταδιδακτορική εκπαίδευση FRQS. Α-ΜΜ-Μ και DMP είναι ερευνητές του Centre de Recherche du Centre νοσοκομειακό de l’Université de Montréal (CRCHUM) και PNT είναι ερευνητής στο Ινστιτούτο Έρευνας του Κέντρου Υγείας του Πανεπιστημίου McGill (MUHC), δύο από τα οποία λαμβάνουν στήριξη από τις FRQS. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή καρκίνο των ωοθηκών

τα επιθηλιακά (ΕΓΚ) είναι η πιο θανατηφόρα όλων των γυναικολογικών κακοηθειών στη Βόρεια Αμερική [1] και σε όλο τον κόσμο. Αυτό αποδίδεται στην ασυμπτωματική φύση της νόσου συνεπάγεται η καθυστερημένη διάγνωση με ποσοστό πενταετούς επιβίωσης κατά 30% [2], [3]. Κατά τα τελευταία 30 χρόνια, εξελίξεις στη χειρουργική επέμβαση και χημειοθεραπεία είχαν ελάχιστη επίδραση στη συνολική επιβίωση των ασθενών [4], [5] και η τρέχουσα θεραπευτική αγωγή οδηγεί σε υποτροπή στην πλειονότητα των ασθενών. Περίπου το 80% των ασθενών ΕΓΚ παρουσιάζει ένα ορώδους histotype [6], [7], η οποία κατηγοριοποιείται σύμφωνα με βαθμό του όγκου και την κλινική φάση, που αντιπροσωπεύει το βαθμό της κυτταρικής διαφοροποίησης και της εξάπλωσης της νόσου [8], αντίστοιχα. Μοριακή αποδείξεις υποστηρίζει μια κατάταξη που χωρίζει τους ασθενείς με αυτές τις ορώδες καρκίνωμα σε δύο τύπους: τους ασθενείς με όγκους χαμηλού βαθμού (LG, καλά διαφοροποιημένο) και με όγκους υψηλού βαθμού (HG, κακώς διαφοροποιημένο) [9], [10]. Οι ασθενείς με την LG ορώδες όγκοι συνήθως έχουν καλή πρόγνωση, αλλά αντιπροσωπεύουν το 5% του συνόλου των ορώδες EOCs. Ασθενείς με HG ορώδες καρκίνωμα έχουν μια κακή πρόγνωση με την επιβίωση σε πέντε χρόνια λιγότερο από το 40% [11]. Έρευνα σε αυτές τις δύο διαφορετικές ασθένειες, LG και HG ορώδες EOC, θα προσφέρει έτσι μια καλύτερη κατανόηση της βιολογίας του καρκίνου των ωοθηκών και να συμβάλει στη βελτίωση των κλινικών αποτελεσμάτων. Επιπλέον, ανακάλυψη βιοδεικτών διακρίσεις HG ΕΓΚ ασθενείς ορώδες έχει καλή ή κακή πρόγνωση μπορεί να συμβάλει σε ασθενή θεραπευτική διαστρωμάτωση και μπορεί να αυξήσει τη συνολική επιβίωση.

Σε προηγούμενες μελέτες, έχουμε αποδείξει ότι RAN (ΑΕ που σχετίζονται με την πυρηνική πρωτεΐνη), σε ΕΓΚ, είναι πάνω εκφραζόμενη ως όγκος βαθμό αυξάνει και συνδέεται στενά με κακή επιβίωση των ασθενών [12], [13]. Ως εκ τούτου, RAN λειτουργίες μπορούν να απελευθερωθεί σε καρκινώματα ωοθηκών και έτρεξε πρότυπα έκφρασης μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικό εργαλείο σε ασθενείς με προχωρημένη EOC.

In vitro

, η χρήση ενός μικρού φουρκέτας RNA (shRNA) που στοχεύουν έκφραση RAN εμποδίζει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων EOC, υποδηλώνοντας RAN ως δυνητικό επιδεκτική θεραπευτικός στόχος για τη θεραπεία της ασθένειας αυτής [14]. Επιπλέον, η μείωση της έκφρασης RAN στο

in vivo

πειράματα ξενομοσχεύματος ποντικού οδήγησε στη σύλληψη της ανάπτυξης του όγκου ΕΓΚ [14]. Αυτές οι παρατηρήσεις δείχνουν ότι RAN εμπλέκεται στην εξέλιξη του καρκίνου των ωοθηκών και θα μπορούσε να εμπλέκεται στην ογκογένεση και /ή κυτταρικής επιβίωσης. Αυτά τα ευρήματα συσχετίζονται καλά με παρόμοιες μελέτες σε διάφορους τύπους καρκίνου [15] – [19].

Σε κυτταρικό επίπεδο, RAN εκτελεί δύο κύριες και διακριτές λειτουργίες. Στην ενδιάμεση φάση, RAN ρυθμίζει πυρηνο-κυτταροπλασματική μεταφορά των μορίων μέσα από το συγκρότημα των πυρηνικών πόρων [20], [21]. Κατά τη μίτωση, RAN εκτελεί μια διαφορετική λειτουργία και ελέγχει την πρόοδο του κυτταρικού κύκλου μέσω της ρύθμισης της μιτωτικής ατράκτου σχηματισμό [22]

Ο κύκλος RAN-GTP ρυθμίζεται από τρεις πρωτεΐνες.? RCC1, RAN-GAP1, και RANBP1 [23], [24]. ανταλλαγές RCC1 ΑΕΠ για το GTP, μετατρέποντας RAN-ΑΕΠ RAN-GTP [23]. Σε αντίθεση, RANBP1 και το έργο RAN-GAP1 να αυξηθεί η υδρόλυση του GTP [24] και ως εκ τούτου την ανασύσταση του πισίνα RAN-ΑΕΠ [25], [26]. RAN χρησιμοποιεί την ίδια GTP κύκλο /ΑΕΠ για τη ρύθμιση τόσο των φυσιολογικών λειτουργιών του. Ωστόσο, η κλίση GTP /ΑΕΠ επιτυγχάνεται με αυτές τις ρυθμιστικές αρχές είναι μοναδική για κάθε λειτουργία του RAN. Για πυρηνική μεταφορά, η κλίση είναι εγκατεστημένος σε ολόκληρη την πυρηνική μεμβράνη με ασύμμετρη κατανομή των πρωτεϊνών ρυθμιστή [27]. Κατά τη διάρκεια της μίτωσης, παρότι δεν μεμβράνη διαχωρίζει τις ρυθμιστικές αρχές, η κλίση επιτυγχάνεται σε γειτνίαση με το χρωμόσωμα με RCC1 που συνδέεται με χρωμοσώματα [27].

Αν και RAN χρησιμοποιεί τις ίδιες ρυθμιστικές αρχές για την ανταλλαγή GTP /ΑΕΠ, χρησιμοποιεί το μοναδικό πρωτεΐνες εταίρος κατά τη μεσόφαση και τη μίτωση να εκτελέσει διάφορες φυσιολογικές λειτουργίες (μεταφορές έναντι συναρμολόγηση ατράκτου). Κατά τη διάρκεια της ενδιάμεσης φάσης, ο εμπλουτισμός του RAN-GTP στον πυρήνα συνδέεται με exportins όπως exportin-t (XPOT) [28], [29] και exportin-7 (XPO7 ονομάζεται επίσης RANBP16) [30], [31], η οποία χρησιμεύουν ως προσαρμοστές με προσάρτηση tRNAs και πρωτεΐνες, αντίστοιχα, για να επιτρέψει πυρηνική εξαγωγή των φορτίων τους. Σε αντίθεση, RAN-ΑΕΠ στο κυτταρόπλασμα συνδέεται με importins, όπως importin β (IMPβ) [32], [33], η οποία αναγνωρίζει την αλληλουχία πυρηνικού εντοπισμού (NLS) των πρωτεϊνών για τη διευκόλυνση της κυκλοφορίας τους μέσα από το πυρηνικό φάκελο. Κατά τη διάρκεια της μίτωσης, RAN-GTP προωθεί τη συναρμολόγηση ατράκτου με έναν τρόπο που είναι ανεξάρτητος της πυρηνικής μεταφοράς [34]. IMP δεσμεύει β και αναστέλλει άξονα παράγοντες συναρμολόγησης, όπως TPX2 (Στόχευση Πρωτεΐνη για Xklp2). Κοντά σε χρωμοσώματα, TPX2 στη συνέχεια απελευθερώνεται διευκολύνοντας την ρύθμιση της οργάνωσης μικροσωληνίσκων και τη δυναμική [35].

Ο στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνήσει ποια λειτουργία του RAN θα εμπλακεί περισσότερο σχετική αναφορά στη HG ορώδες κακοήθεια ΕΓΚ και κακή επιβίωση του ασθενούς. Για να διαπιστωθεί η επίπτωση της μια λειτουργία

έναντι

την άλλη, η έκφραση των μοριακών τους εταίρους, ειδικά για nucleo-κυτταροπλασματική μεταφορά και τη μίτωση, αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία σε μια μικροσυστοιχία ιστό των 143 ορώδες καρκίνωμα που περιλαμβάνει 131 περιπτώσεις HG και 12 της LG όγκων. Αξιολογήσαμε την έκφραση των επιμέρους πρωτεϊνών σε συσχέτιση με κλινικές παραμέτρους και καθόρισε τη σχέση τους με την εξέλιξη της EOC και την έκβαση. Ελπιδοφόρα αποτελέσματα ελήφθησαν για δύο εταίροι RAN, XPO7 και TPX2, με δυνατότητα να είναι κλινικά σημαντική στη σταδιοποίηση HG EOC ασθενείς ορώδες.

Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

Η CHUM θεσμικό επιτροπή δεοντολογίας (Comité d’éthique de la recherche du Centre νοσοκομειακό de l’Université de Montréal) ενέκρινε τη μελέτη αυτή και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από τους ασθενείς πριν από τη συλλογή του δείγματος.

ασθενείς και ιστών Δείγματα

δείγματα όγκων ελήφθησαν από ασθενείς που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση για τον καρκίνο των ωοθηκών στο Τμήμα Γυναικολογικής Ογκολογίας – νοσοκομειακό κέντρο de l’Université de Montréal (CHUM). Ένα στάδιο αποφασισμένη νόσο γυναικολόγο-ογκολόγο, όπως ορίζεται από τη Διεθνή Ομοσπονδία Γυναικολογίας και Μαιευτικής (FIGO). Ένας ανεξάρτητος παθολόγος αναθεωρηθεί ιστοπαθολογία και όγκου βαθμού. κριτήρια επιλογής των ιστών για τη μελέτη αυτή βασίζεται σε ανεξάρτητη επιβεβαίωση των ορώδες ιστοπαθολογική εξέταση σε δείγματα από ασθενείς είχαν λάβει προηγουμένως χημειοθεραπεία. Τα δείγματα συλλέχθηκαν μεταξύ 1990 και 2006. Ο ασθενής συνολική επιβίωση ορίστηκε ως ο χρόνος από τη χειρουργική επέμβαση στο θάνατο από καρκίνο των ωοθηκών ή τελευταία παρακολούθηση. Ασθενής ασθένεια επιβίωσης χωρίς υπολογίστηκε από το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης μέχρι την πρώτη εξέλιξη. Ως εκ τούτου, μόνο οι ασθενείς που προχώρησαν συμπεριλήφθηκαν στην ανάλυση μας. Κλινικά δεδομένα για διάστημα χωρίς εξέλιξη ορίστηκαν ανάλογα με το επίπεδο του CA125 αίματος και το μέγεθος του όγκου αξιολογήθηκε με απεικόνιση. Οι ασθενείς που είναι γνωστό ότι είναι ακόμα ζωντανός κατά τη στιγμή της ανάλυσης περικόπηκαν κατά το χρόνο της τελευταίας παρακολούθησή τους. Οι ηλικίες της διάγνωσης των ασθενών με όγκους LG κυμάνθηκε από 27 έως 71 ετών (μέσος όρος = 48,5 χρόνια) και ακολούθησαν 50,6 μήνες κατά μέσο όρο. Οι ηλικίες των ασθενών με όγκους HG κυμαίνονταν από 34 έως 87 ετών (μέσος όρος = 62,6 έτη) και το μέσο παρακολούθησης τους ήταν 37,2 μήνες. Η ομάδα αυτή περιγράφεται στον Πίνακα S1.

Τα επιθηλιακά υδαρής ωοθηκών όγκου ιστών μικροσυστοιχιών (TMA)

Όλες οι περιπτώσεις εξετάστηκαν από ένα γυναικολογικό παθολόγο. Ο βαθμός και ο τύπος καρκίνου των ωοθηκών [9], [10], εντοπίστηκαν και τομείς ενδιαφέροντος χαρακτηρίστηκαν σε διαφάνειες. Δύο πυρήνες 1 mm για κάθε δείγμα ιστού παρατάσσονται σε δύο τετράγωνα αποδέκτη παραφίνης. Αυτή η σειρά ιστός αποτελείται από πυρήνες από 12 LG και 131 όγκους HG (2 πυρήνες ανά δείγμα ασθενούς) της ορώδες ιστοπαθολογικών υποτύπου και έξι παραφίνη-ενσωματωμένες ΕΓΚ σφαιρίδια κυτταρική γραμμή ως μάρτυρες χρώση (292 συνολικές πυρήνες). Το ΤΜΑ ακολούθως τομή, χρώση με αιματοξυλίνη-ηωσίνη και υποβλήθηκε σε μια άλλη αναθεώρηση της παθολογίας του ιστού για την επαλήθευση της παρουσίας του υλικού του όγκου σε κάθε πυρήνα.

Ανάλυση Western Blot

Η ποιότητα και ειδικότητα της μεμονωμένα αντισώματα όπου επαληθεύεται με ανάλυση κηλίδας Western. εκχυλίσματα συνολική πρωτεΐνη (30 μg) φορτώθηκαν και ηλεκτροφορήθηκαν σε SDS-πολυακρυλαμιδίου συνέχεια μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5% (1 ώρα) και στη συνέχεια ανιχνεύθηκαν με πρωτογενή αντισώματα (2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου) στο βέλτιστο αραιώσεις (1:500 για RAN PBS γάλακτος, XPO7, XPOT και TPX2? 1:200 για IMPβ? 1:300 για RCC1? 1:75 για RANBP1). Κάθε κύριο αντίσωμα ανιχνεύθηκε με ένα συζευγμένο με HRP δευτερογενές αντίσωμα (Santa Cruz Biotechnology Inc.) και οπτικοποιήθηκαν με τη μέθοδο ενισχυμένης χημειοφωταύγειας (ECL) (GE Healthcare, UK). Βήτα-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης (1:50,000) (Abcam, Cambridge, ΜΑ).

Η ανοσοϊστοχημεία (IHC)

Για τη χειροκίνητη μέθοδο χρώσης, το μπλοκ TMA ήταν χωρισμένο σε 4 μm σε διαφάνειες SuperFrost + γυαλί μικροσκοπίου (Fisher Scientific Limited, Nepean, ON, Καναδάς). Τα πλακίδια θερμάνθηκαν στους 60 ° C για 15 λεπτά, αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο, επανυδατώθηκαν σε μια κλίση αιθανόλη, και πλύθηκαν σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS). Για να ξεσκεπάσει αντιγόνα, τα πλακίδια τοποθετήθηκαν επί 20 λεπτά σε υψηλή θερμοκρασία υπό υψηλή πίεση σε κιτρικό ρυθμιστικό διάλυμα (10 mM κιτρικό νάτριο, 0,05% Tween 20, ρΗ 6,0) για χρώση με αντι-RCC1 (1/50, SC-1161, Santa Cruz ρυθμιστικό Biotechnology Inc.), αντι-IMPβ (1/25, SC-1863, Santa Cruz Biotechnology Inc.) και αντι-TPX2 (1/100, NBP1-01041, Novus Biologicals), ή σε κιτρικό-EDTA (10 mM νάτριο κιτρικό, 1 mM EDTA, 0,05% Tween 20, ρΗ 8,0) για χρώση με αντι-RANBP1 (1/25, SC-1159, Santa Cruz Biotechnology Inc.), αντι-XPOT (1/50, LS-C80366, διάρκεια ζωής Biosciences Inc.) και αντι-XPO7 (1/200, LS-C55360, διάρκεια ζωής Biosciences Inc.) αντισώματα. Τα πλακίδια στη συνέχεια επωάστηκαν με 3% υπεροξείδιο υδρογόνου σε PBS (να εμποδίσει ενδογενούς υπεροξειδάσης), και πλύθηκαν σε PBS. Τομές ιστού αποκλείστηκαν με ένα αντιδραστήριο μη-ορό πρωτεΐνη-αποκλειστές (DakoCytomation Inc., Mississauga, ΟΝ, Canada) για 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και επωάστηκαν με πρωτογενές αντίσωμα επί 60 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου σε υγρό θάλαμο. Υποκατάσταση του πρωτογενούς αντισώματος με PBS χρησίμευσε ως αρνητικός έλεγχος. Τα πλακίδια στη συνέχεια πλύθηκαν σε PBS, επωάστηκαν με δευτερεύοντα αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA). Τα προϊόντα της αντίδρασης αναπτύχθηκε με τη χρήση διαμινοβενζιδίνης (DAB) που περιέχει 0,3% υπεροξείδιο του υδρογόνου μέχρι και 5 λεπτά. πυρήνες κυττάρων βάφτηκαν αντίθετα με αραιωμένο αιματοξυλίνη για 1 λεπτό.

Για την αυτοματοποιημένη μέθοδο χρώσης, τμήματα της φορμόλης σταθερών όγκων τομές παραφίνης (4 μm) βάφτηκαν χρησιμοποιώντας το σημείο αναφοράς XT αυτοματοποιημένη χρώσης (Ventana Medical System Inc., Tucson , AZ). ανάκτησης αντιγόνου για RAN διεξήχθη με Κυττάρων Ρύθμιση 1 (Ventana Medical System Inc.) για 30 λεπτά. Διαφάνειες επωάστηκαν με αντίσωμα αντι-RAN (1/100, SC-1156, Santa Cruz Biotechnology Inc.) για 40 λεπτά, και αναπτύχθηκε από το κιτ ανίχνευσης iView DAB (Ventana Medical System Inc.). Αιματοξυλίνη και αντιδραστήριο λουλάκι χρησιμοποιήθηκαν για αντικηλίδωση (Ventana Medical System Inc.). TMAs παρατηρήθηκαν με μικροσκόπιο φωτεινού και ψηφιακά απεικόνιση (Aperio ScanScope, Vista, Καλιφόρνια, ΗΠΑ).

χρώσης Ποσοτικοποίηση

Η πρωτεΐνη έκφρασης από την IHC βαθμολογήθηκε σύμφωνα με τον υποκυτταρικό εντοπισμό και την ένταση χρώσης των κακοήθων κύτταρα. Πυρηνική και κυτταροπλασματική έκφραση των πρωτεϊνών δικτύου RAN σε ιστούς καρκίνου των ωοθηκών παρατηρήθηκε χρησιμοποιώντας ψηφιακά απεικονίστηκαν σαρώσεις του κάθε βάφονται ΤΜΑ και βαθμολογήθηκε σύμφωνα με την ένταση της χρώσης. Για κάθε πρωτεΐνη δίκτυο RAN σε επιθηλιακά ζώνες των πυρήνων του όγκου, η ένταση χρώσης του DAB ορίστηκε ως 0 (καμία χρώση), 1 (ασθενής χρώση), 2 (μέτρια χρώση) και 3 (ισχυρή χρώση). Όλα TMAs αναλύθηκαν σε μια τυφλή μελέτη από δύο ανεξάρτητους παρατηρητές. συσχέτιση μεταξύ αξιολόγησης (ICC) ήταν μεγαλύτερη από 75% για όλες τις δοκιμασίες. Ο μέσος όρος όλων των πυρήνων με τον καρκίνο από τον ίδιο ασθενή χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση. Όταν συνέβη μεγάλες διαφορές στο σκορ μεταξύ των δύο παρατηρητές ο πυρήνας επαναξιολογούνται για την επίτευξη συναίνεσης μεταξύ των δύο παρατηρητές.

Στατιστική Ανάλυση

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS έκδοση λογισμικού 16.0 ( SPSS Inc., Chicago, IL, USA) όπου p & lt? 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές. πρότυπα έκφρασης πρωτεΐνης των εταίρων RAN συσχετίστηκαν (δοκιμασία συσχέτισης Pearson, two-tailed) με την πρωτεΐνη έκφραση του RAN και το στάδιο της νόσου (Ι έως IV). Οι καμπύλες επιβίωσης (συνολική επιβίωση και επιβίωσης χωρίς νόσο) χαράχθηκαν από τον εκτιμητή Kaplan-Meier, σε σύγκριση με τη χρήση του τεστ log rank και αναλύθηκαν για σημαντικές διαφορές. Για κάθε εταίρο RAN, ο αριθμός των ασθενών σε κάθε καμπύλη επιβίωσης αναθεωρείται στον Πίνακα S2. Μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική Cox αναλογικά μοντέλα κινδύνου χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί η αναλογία κινδύνου για κάθε δείκτη. Πολυπαραγοντικές αναλύσεις έγιναν χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο κινδύνου με μια μέθοδο enter. Ένα μέγιστο τέσσερις ανεξάρτητες μεταβλητές περιλήφθηκαν στο πολυπαραγοντικό μοντέλο παλινδρόμησης κατά Cox για να αποφευχθεί η υπερβολική τοποθέτηση.

Αποτελέσματα

Έκφραση των RAN και Δικτύων Πρωτεΐνες συνεργατών της στην υδαρής ΕΓΚ ιστοί

Για να προσδιορίσετε εάν κάποιο από τους εταίρους της RAN εμπλέκονται στην βιολογία του ΕΓΚ, πραγματοποιήσαμε μια ανάλυση IHC χρησιμοποιώντας ένα TMA που περιέχει συνολικά 286 πυρήνες των δειγμάτων καρκίνου που εκπροσωπεί 143 ασθενείς. RAN και οι έξι πρωτεΐνες RAN-εταίρο (RANBP1, RCC1, IMPβ, XPO7, XPOT και TPX2), αναλύθηκαν με τη χρήση αυτής της συστοιχίας ιστού. Εξειδίκευση για κάθε αντίσωμα αξιολογήθηκε πρώτα με ανάλυση κηλίδας Western χρησιμοποιώντας κυτταρικά εκχυλίσματα των τεσσάρων EOC κυτταρικές σειρές (Σχήμα S1) και από την IHC χρησιμοποιώντας σφαιρίδια κυττάρου εγκλεισμένα σε παραφίνη από τις ίδιες κυτταρικές σειρές (Σχήμα S2). Η ένταση και ο εντοπισμός της χρώσης στη συνέχεια αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας ψηφιακά απεικονίστηκαν σαρώσεις του κάθε βάφονται ΤΜΑ. Παρατηρήθηκαν και ταξινομούνται Πυρηνικής και κυτταροπλασματική έκφραση των πρωτεϊνών δικτύου RAN σε ιστούς EOC σύμφωνα με τη μέση ένταση της χρώσης ως χαμηλή (βαθμολογίες & lt? 1), μέσης (βαθμολογίες = 1 & lt? 2) και υψηλή (βαθμολογίες ≥2) (Σχήμα 1) , εκτός από την TPX2, η οποία είχε χαρακτηριστεί ως απών (βαθμολογία = 0) ή του παρόντος (βαθμολογίες & gt? 0)., λόγω της μοναδικής πρότυπο χρώσης αυτής της πρωτεΐνης (εικόνες 1-2)

Εκπρόσωπος εικόνες της immunoperoxydase πρότυπο χρώσης σε έναν πυρήνα TMA παρουσιάζονται για κάθε βαθμό πρωτεΐνη και όγκου (μεγέθυνση 20 ×). Ποσοτικοποίηση του RAN (Α-Β), RANBP1 (C-D) και IMPβ (G-Η) ήταν αποκλειστικά για κυτταροπλασματική χρώση. RCC1 (Ε-Ρ) και TPX2 (Μ-Ν) έχουν εντοπισμένη αποκλειστικά στον πυρήνα. XPO7 (Ι-Ι) και XPOT (K-L) ποσοτικοποιήθηκαν για αμφότερα πυρηνικά και κυτταροπλασματικά έκφρασή τους.

Η

Για κάθε πρωτεΐνη, η ένταση χρώσης ορίστηκε ως 0 (καμία χρώση), 1 ( ασθενής χρώση), 2 (μέτρια χρώση) ή 3 (σκούρο χρώση) εντός του επιθηλιακού διαμέρισμα από δύο ανεξάρτητους παρατηρητές. Η μέση τιμή του ένταση χρώσης για κάθε πρωτεΐνη συγκρίθηκε μεταξύ χαμηλής ποιότητας (λευκές ράβδοι) και όγκων υψηλού βαθμού (γκρι ράβδοι) χρησιμοποιώντας ένα τεστ Student. * P & lt? 0,05 ** p≤0.005

Η

Η έκφραση του RANBP1 (ΑΕΠ) και RCC1 (GTP), τα οποία είναι γενικά πρωτεΐνες που σχετίζονται με τον κύκλο RAN-GTP, αρχικά διερευνάται.. έκφραση IMPβ αναλύθηκε για να αξιολογήσει ταυτόχρονα και τα δύο κύριες λειτουργίες του RAN. Τότε θα διερευνηθούν ειδικά την πυρηνο-κυτταροπλασματική λειτουργία του RAN αξιολογώντας την έκφραση των δύο exportins: XPO7 και XPOT. Τέλος, εξετάσαμε την έκφραση TPX2 προκειμένου να αξιολογηθεί το συγκρότημα ατράκτου κατά την διάρκεια της μίτωσης, μια άλλη σημαντική λειτουργία του RAN. Το Σχήμα 1 δείχνει αντιπροσωπευτικές εικόνες για την χρώση κάθε πρωτεΐνης σε HG ορώδες καρκίνωμα των ωοθηκών. Η έκφραση του RAN (Σχήμα 1Α-C), RANBP1 (Σχήμα 1 D-F) και IMPβ (Σχήμα 1J-L) εντοπίστηκαν τόσο στο κυτταρόπλασμα και τον πυρήνα, αν και η ποσοτικοποίηση του σήματος επικεντρώθηκε αποκλειστικά στο κυτταρόπλασμα με βάση την υψηλότερη έκφραση του σε αυτό κυτταρικό διαμέρισμα. Έκφραση των RCC1 (Σχήμα 1G-I) και TPX2 (Σχήμα 1Y-Ζ) ήταν τα πυρηνικά. Πυρηνική και κυτταροπλασματική χρώση παρατηρήθηκε για XPO7 (Σχήμα 1Μ-R) και XPOT (Σχήμα 1 S-Χ) πρωτεΐνες, και οι δύο προσδιορίστηκαν ποσοτικά.

RAN δικτύου Πρωτεΐνες συσχετίζονται με Tumor βαθμού

Έχοντας καθιέρωσε το πρότυπο χρώσης για κάθε μία από τις πρωτεΐνες του δικτύου RAN, μπορούμε στη συνέχεια αξιολόγησε την ένταση χρώσης ανάλογα με τον βαθμό του όγκου (Σχήμα 2). Σε προηγούμενη μελέτη, ανέφεραν την παρατήρηση που έτρεξε χρώση θετικά σχετίζεται με αυξημένο βαθμό όγκου σε ορώδες ΕΓΚ [13]. Στην παρούσα μελέτη, χρησιμοποιώντας ένα εμπλουτισμένο κοόρτη ασθενών, έχουμε επιβεβαιώσει την αρχική μας περαιτέρω εύρημα δείχνει ότι τα επίπεδα των κυτταροπλασματικών RAN ήταν σημαντικά υψηλότερα σε όγκους σε σύγκριση με HG LG όγκους (ρ & lt? 0.001) (Σχήμα 2Α). Η κυτταροπλασματική ένταση χρώσης του RANBP1 (ρ & lt? 0.001), IMPβ (p = 0.048), και πυρηνικό εντοπισμό του RCC1 (p = 0.004) ήταν σημαντικά υψηλότερα στην HG έναντι LG όγκους (Σχήμα 2Β-D). Για τις πρωτεΐνες του δικτύου RAN πυρηνο-κυτταροπλασματική, πυρηνική XPO7 ήταν σημαντικά λιγότερο εκφράζεται σε HG από lg όγκους (ρ = 0,005), ενώ δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές σε κυτταροπλασματική χρώση XPO7 ή κυτταροπλασματική /χρώση πυρηνικών XPOT (Σχήμα 2Ε-2Η). Είναι ενδιαφέρον ότι, σε αντίθεση με διερευνώνται όλες οι άλλες πρωτεΐνες δίκτυο RAN, χρώση για την μιτωτική TPX2 συνεργάτη RAN βρέθηκε αποκλειστικά εντός των πυρήνων του HG ορώδες καρκίνωμα (p & lt? 0.001) (Σχήμα 2Θ). έκφραση του ήταν διαχωρίστηκαν μεταξύ τους είτε ως θετικά ή απουσιάζει, λόγω της μοναδικής πρότυπο χρώσης αυτής της πρωτεΐνης σε όγκους των ασθενών. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η απορρύθμιση του δικτύου RAN είναι χαρακτηριστικό του HG ορώδες EOC, και ως εκ τούτου είναι σύμφωνη με την πρόσφατη ιδέα ότι HG και η LG ορώδες ΕΓΚ είναι διαφορετικές νοσολογικές οντότητες [9], [10].

επόμενη επαλήθευσε τη συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης RAN και καθενός από τους εταίρους του δικτύου RAN χρησιμοποιώντας το τεστ συσχέτισης Pearson (two-tailed) (Πίνακας 1). Όπως ήταν αναμενόμενο, οι πρωτεΐνες που εμπλέκονται στην GTP-κύκλου και IMPβ, ήταν συσχετίζεται θετικά με RAN (RANBP1, ρ & lt? 0,001? RCC1, ρ = 0.026? IMPβ, ρ & lt? 0.001), γεγονός που υποδηλώνει μια αρμόδια κύκλος RAN ΟΤΡάσης (Πίνακας 1). Για την πυρηνο-κυτταροπλασματική ρόλος του RAN, μια σημαντική θετική συσχέτιση αποτελέσματα για κυτταροπλασματική XPO7 (p = 0,028), καθώς και την έκφραση της πυρηνικής XPOT (p = 0,050) (Πίνακας 1). Ωστόσο, δεν παρατηρήθηκε συσχέτιση μεταξύ των εντάσεων χρώση RAN και TPX2, η οποία θα μπορούσε να εξηγηθεί από την έμμεση φύση της αλληλεπίδρασης τους στη μίτωση [35].

Η

Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του RAN ή οποιαδήποτε των εταίρων του δικτύου RAN με το στάδιο της νόσου διερευνήθηκε επίσης με τη χρήση του τεστ συσχέτισης Pearson (two-tailed) (Πίνακας 1). Μια σημαντική συσχέτιση παρατηρήθηκε μόνο για χρώση RANBP1 (p = 0,034), παρουσιάζοντας μικρή αρνητική συσχέτιση (συντελεστής Pearson = -0.181) (Πίνακας 1).

RAN, XPO7 και TPX2 σχετίζονται με κακή επιβίωση των ασθενών

Θα διερευνηθεί η σχέση μεταξύ της έκφρασης των πρωτεϊνών εταίρου RAN και τη συνολική επιβίωση στην ομάδα των 143 ασθενών. Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier προήλθαν και σε σχέση με τη δοκιμασία log-rank μόνο για περιπτώσεις HG (Σχήμα 3, Πίνακες S2-S3). LG περιπτώσεις που δεν συμπεριλήφθηκαν λόγω μικρού αριθμού ασθενών, αντανακλώντας την σπανιότητας της ασθένειας, και λόγω της ιδιαίτερα χαρακτηριστικά της νόσου τους σε σύγκριση με τις περιπτώσεις HG. Μια οριακή τιμή δεν θα μπορούσε να ληφθεί από τις καμπύλες ROC αναλύσεις, και να αποφευχθεί η μεροληψία στην επιλογή ενός cut-off για κάθε πρωτεΐνη, ελήφθησαν υπόψη όλες οι βαθμολογίες χρώσης (ομαδοποιημένα όπως φαίνεται στο Σχήμα 1) κατά τον υπολογισμό των Καμπύλες κατά Kaplan-Meier για κάθε πρωτεΐνης.

η έκφραση των πρωτεϊνών του δικτύου RAN αξιολογήθηκε ως προγνωστικοί δείκτες μόνο στα υψηλής ποιότητας ορώδες καρκίνωμα με ανάλυση Kaplan-Meier. Η επιβίωση ορίζεται ως ο χρόνος από τη χειρουργική επέμβαση στο θάνατο από καρκίνο των ωοθηκών ή τελευταία παρακολούθηση. Η δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για να προσδιορίσει στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων. Για πίνακες Α-Η, χαμηλή χρώση (μπλε γραμμή) που ορίζεται από τις τιμές & lt? 1, μέσο χρώσης (πράσινη γραμμή) που ορίζεται από = 1 & lt? 2 και υψηλή χρώση (ροζ γραμμή) ορίζεται ως ≥2. Για τον πίνακα Ι, τα δείγματα βαθμολογούνται ως αρνητική (μαύρη γραμμή) ή θετικά (γκρι γραμμή) για χρώση TPX2. Στην Α-Ι, ρ δηλώνει σημασία μεταξύ όλων των ομάδων. Για πάνελ J-K, αρνητική χρώση TPX2 με χαμηλή ένταση χρώσης του RAN (γραμμή J-μαύρο) ή XPO7 (K – μαύρη γραμμή)? αρνητική χρώση TPX2 με μέσο + υψηλή χρώση RAN (J – line κυανό) ή XPO7 (K – μοβ γραμμή)? θετική χρώση TPX2 με μέσο + υψηλή χρώση RAN (J – γκρι γραμμή) ή XPO7 (K – γκρι γραμμή). Στην J-K, p (πάνω δεξιά γωνία) υπολογίζεται για μαύρο έναντι κυανό (RAN, πίνακας J) ή βιολετί (XPO7, πάνελ K). Στην J-K, p (κάτω αριστερή γωνία) υπολογίζεται για γκρι έναντι κυανό (RAN, πίνακας J) ή βιολετί (XPO7, πάνελ K). Α-Κ, ρ & lt? 0,05 σημειώνονται με έντονα γράμματα

Η

Η αύξηση των επιπέδων της κυτταροπλασματικής χρώσης RAN στο HG ορώδες ΕΓΚ σχετίζεται σημαντικά με μια φτωχότερη συνολική επιβίωση (p = 0.016?. Σχήμα 3Α, Πίνακας S3 ). Αυτές οι παρατηρήσεις είναι συνεπείς με την αρχική μας ευρήματα [13]. Των εταίρων του δικτύου RAN, η υψηλή κυτταροπλασματική έκφραση της XPO7 (p = 0,02? Σχήμα 3Ε) και υψηλή έκφραση των πυρηνικών TPX2 (p = 0,002, σχήμα 3θ) συσχετίστηκαν με τη συνολική επιβίωση μικρότερη

Για να διερευνήσει περαιτέρω το. δυνητική προγνωστική σημασία της RAN και των πρωτεϊνών εταίρου της στην συνολική επιβίωση των ασθενών, μονοπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox πραγματοποιήθηκαν (Πίνακας 2). Κυτταροπλασματική RAN και χρώση XPO7 και εντοπισμού πυρηνικών TPX2 στο HG ορώδες ΕΓΚ συσχετίζονταν σημαντικά με κακή συνολική επιβίωση (p = 0,008, p = 0,027, p = 0,002, αντίστοιχα). Αυτές οι πρωτεΐνες ήταν σημαντικές ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για την επιβίωση με αναλογίες κινδύνου (HR = 1,82 για RAN, HR = 1,58 για XPO7 και HR = 2,66 για TPX2) συγκρίσιμη με εκείνη της υπολειμματικής νόσου (HR = 1,82), ένα γνωστό προγνωστικός παράγοντας [3] .

η

στο σύνολό τους, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι XPO7, που εμπλέκονται στην πυρηνο-κυτταροπλασματική εξαγωγή RAN των πρωτεϊνών, και TPX2, εταίρος του RAN στη μίτωση, καθώς και η ίδια RAN, μπορεί να συμβάλει στην κακοήθη δυναμικό της συνολικής επιβίωσης ορώδες EOC και την επιρροή του ασθενούς.

Σύλλογος RAN και TPX2 με υποτροπή στο υδαρής ΕΓΚ ασθενείς

εκτιμήθηκε Η σημασία των πρωτεϊνών του δικτύου RAN στην επανεμφάνιση, στο πλαίσιο της ελεύθερης νόσου επιβίωσης με καμπύλη Kaplan-Meier και Cox παλινδρόμησης αναλύσεις όπως περιγράφεται παραπάνω. Η αύξηση των επιπέδων της κυτταροπλασματικής χρώσης RAN στο HG ορώδες EOCs συσχετίστηκε σημαντικά με μικρότερη νόσου επιβίωση χωρίς από την ανάλυση Kaplan-Meier (p = 0,014? Εικόνα 4Α, Πίνακας S3). Των πρωτεϊνών του δικτύου RAN, καμπύλη Kaplan-Meier αναλύσεις βρεθεί μόνο εντοπισμού πυρηνικών TPX2 όπως αυτές σχετίζονται σημαντικά με υποτροπή στο HG ορώδες EOC (p = 0,004? Σχήμα 4I, Πίνακας S3). Οι αναλύσεις μονοπαραγοντική Cox παλινδρόμησης επικυρώνονται τα ευρήματα αυτά όπου RAN (p = 0.006) και TPX2 (p = 0.006) πρωτεΐνες έδειξε σημαντική συσχέτιση με υποτροπή της νόσου (Πίνακας 2). Αυτά τα ευρήματα ήταν επίσης συγκρίσιμη με αναλογίες κινδύνου που προσδιορίζεται για υπολειμματικής νόσου (Πίνακας 2).

Η αξιολόγηση της έκφρασης της πρωτεΐνης του δικτύου RAN μόνο υψηλής ποιότητας ορώδες καρκίνωμα με ανάλυση Kaplan-Meier. Progression επιβίωση χωρίς αντιστοιχεί στο χρόνο σε μήνες υπολογίζεται από τη στιγμή της πρώτης χειρουργικής μέχρι την πρώτη πρόοδο. Η δοκιμασία log-rank χρησιμοποιήθηκε για να προσδιορίσει στατιστικά σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων. (Βλέπε Εικόνα 3 θρύλος για λεπτομέρειες).

Η

Ως εκ τούτου, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η λειτουργία της μιτωτικής RAN είναι ειδικά, μέσω TPX2 εταίρο της, φαίνεται να σχετίζεται με την επανάληψη του HG ορώδες ΕΓΚ.

η πολυπαραγοντική αναλύσεις επιβεβαιώνει την ισχυρή συσχέτιση της έκφρασης TPX2 στην επιβίωση των ασθενών και την ασθένεια Επανεμφάνιση

για την περαιτέρω καθορίσει την πιθανή προγνωστική αξία του δικτύου πρωτεΐνης RAN, πολυπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης Cox πραγματοποιήθηκαν για RAN και κάθε συνεργάτη που επιτυγχάνεται σημασία στην μονοπαραγοντική ανάλυση.

οι αναλογίες κινδύνου του RAN, XPO7 και TPX2 για τη συνολική επιβίωση των ασθενών συγκρίθηκαν με το πρότυπο προγνωστικούς παράγοντες όπως στάδιο και υπολειμματικής νόσου (Πίνακας 2). Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι μόνο RAN (p = 0.015, HR = 1,84), TPX2 (p = 0,033, HR = 2,15) και υπολειπόμενη νόσο (p & lt? 0,05) ήταν σημαντικά ανεξάρτητοι προγνωστικοί δείκτες για τη συνολική επιβίωση σε όγκους HG. Είναι ενδιαφέρον, τόσο RAN και TPX2 είχαν υψηλότερα HRs από υπολειμματικής νόσου (Πίνακας 2).

Για την επανάληψη, το μοτίβο έκφρασης του RAN και TPX2 συγκρίθηκαν επίσης με το πρότυπο μεταβλητές πρόγνωση (στάδιο και υπολειμματικής νόσου). Σε όγκους HG, μόνο RAN (p = 0,013, HR = 1,69) και TPX2 (p = 0,024, HR = 2,53) ήταν ανεξάρτητες μεταβλητές πρόβλεψης υψηλό κίνδυνο υποτροπής (Πίνακας 2).

Μια ταυτόχρονη υπερπίεση Μοτίβο έκφραση TPX2 /RAN ή TPX2 /XPO7 σχετίζεται με χειρότερη έκβαση υδαρής ασθενείς ΕΓΚ

τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι τα πρότυπα έκφρασης των RAN και TPX2 μιτωτική συνεργάτη της στην ορώδες πράξη EOC ως ανεξάρτητοι προγνωστικοί βιοδείκτες για δύο τη συνολική επιβίωση και την επανεμφάνιση του ασθενούς. Αξιολογήσαμε την επόμενη τη συνδυασμένη επίδραση των δύο αυτών υποψηφίων βιοδεικτών για τη συνολική και τη νόσο επιβίωση χωρίς τη χρήση ανάλυσης καμπύλης Kaplan-Meier. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν μια σημαντική διαφορά μεταξύ της χρώσης του RAN και TPX2 στην ελεύθερη εξέλιξης επιβίωση (Σχήμα 4J) σε περιπτώσεις HG. Ειδικότερα, η ταυτόχρονη παρουσία του RAN και TPX2 σχετίστηκε με βραχύτερο ελεύθερο νόσου σε σύγκριση με την παρουσία μόνο του RAN (15 μήνες έναντι 30 μηνών, p = 0.001, Εικόνα 4J). Η ίδια τάση παρατηρήθηκε επίσης για τη συνολική επιβίωση των ασθενών με οριακή σημασία (ρ = 0,07, Σχήμα 3J). Χρησιμοποιώντας τις ίδιες αναλύσεις, αποδείξαμε επίσης ότι τα πρότυπα έκφρασης XPO7 και TPX2 συσχετίζονταν σημαντικά τόσο με φτωχότερη συνολική επιβίωση (ρ = 0.012) και μικρότερες επιβίωσης χωρίς νόσο (p = 0,012), σε σύγκριση με την παρουσία μόνο XPO7 (Σχήμα 3Κ, Εικόνα 4K). Είναι αξιοσημείωτο ότι η έκφραση TPX2, όταν αυτό συνέβη, ήταν πάντα που σχετίζονται είτε με RAN ή XPO7 συν-έκφραση.

Συζήτηση

Υψηλή RAN τα επίπεδα έκφρασης έχουν αναφερθεί σε διαφορετικούς όγκους, όπως του παγκρέατος , του παχέος εντέρου, του πνεύμονα, του ρινοφάρυγγα, του στομάχου και των νεφρών, σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς [17] – [19], [36]. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι μελέτες παρεμβολή RNA έχουν δείξει που έτρεξε κάτω ρύθμιση επηρεάζει δραστικά την επιβίωση των καρκινικών κυττάρων, αλλά όχι εκείνη των φυσιολογικών κυττάρων [14], [18]. Ωστόσο, παρά τη ζωτική σημασία του RAN σε καρκινικά κύτταρα ήταν δύσκολο να καθοριστεί ποια λειτουργία αυτής της πρωτεΐνης εμπλέκεται στην ογκογένεση. Για να ξεκινήσετε την αντιμετώπιση αυτού του ζητήματος μελετήσαμε την έκφραση πολλών εταίρων RAN, ειδικά για διαφορετικές λειτουργίες της, σε συνεργασία με EOC την επιβίωση και την επανάληψη των ασθενών.

Χρησιμοποιώντας μια μεγαλύτερη ομάδα, έχουμε επιβεβαιώνεται η αρχική μας ευρήματα ότι οι ασθενείς με υψηλή έκφραση RAN στο ορώδες ΕΓΚ σχετίζονται με την εξέλιξη της νόσου και την κακή έκβαση [12], [13]. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης.