Αφηρημένο

Ιστορικό

Οι δοσοεξαρτώμενη τοξικότητα του δοξορουβικίνη (ϋΟΧ) να περιορίσει τις κλινικές εφαρμογές της, ιδιαίτερα σε ανθεκτικά στα φάρμακα μορφές καρκίνου, όπως ο καρκίνος του ήπατος. Σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε το ρόλο της κερκετίνης για τις κατά του όγκου επιδράσεις της DOX σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος και την ικανότητά του να παρέχει προστασία έναντι DOX μεσολάβηση ηπατική βλάβη σε ποντικούς.

μεθοδολογία και τα αποτελέσματα

Η δοκιμασία χρώσης ΜΤΤ και αννεξίνης V /PI αποδειχθεί ότι η κερκετίνη επιλεκτικά ευαισθητοποιημένα DOX επαγόμενη κυτταροτοξικότητα έναντι του καρκίνου του ήπατος κυττάρων ενώ ταυτόχρονα προστατεύει κανονικά κύτταρα ήπατος. Η αύξηση του DOX μεσολάβηση απόπτωση σε κύτταρα ηπατώματος από quercetin ήταν ρ53-εξαρτώμενη και εμφανίστηκε με ρύθμιση προς τα κάτω Bcl-XL έκφρασης. Z-VAD-fmk (αναστολέας κασπάσης), pifithrin-α (αναστολέας ρ53), ή υπερεκφρασμένο Bcl-XL μείωσε τις επιδράσεις της quercetin επί DOX-απόπτωση. Η συνδυασμένη θεραπεία της κερκετίνης και DOX μείωσε σημαντικά την αύξηση ξενομοσχευμάτων καρκίνου του ήπατος σε ποντικούς. Επιπλέον, η κερκετίνη μείωση των επιπέδων της αμινοτρανσφεράσης της αλανίνης και ασπαρτική αμινοτρανσφεράση που αυξήθηκαν σε ποντίκια DOX επεξεργασμένο ορό. Κερσετίνη αντιστραφεί επίσης τα DOX που προκαλείται από παθολογικές αλλαγές σε ποντίκια τα συκώτια.

Συμπέρασμα και τη σημασία

Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η κουερσετίνη ενίσχυσε τα αποτελέσματα κατά των όγκων της DOX σε καρκίνο του ήπατος κύτταρα, προστατεύοντας παράλληλα φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα. Ως εκ τούτου, η ανάπτυξη της quercetin μπορεί να είναι ευεργετική σε μια συνδυασμένη θεραπεία με DOX για αυξημένη θεραπευτική αποτελεσματικότητα κατά του καρκίνου του ήπατος

Παράθεση:. Wang G, Zhang J, Liu L, Sharma S, Dong Q (2012) Κερσετίνη ενισχύει Η δοξορουβικίνη Προκαλούμενη Αντικαρκινική δράση κατά του καρκίνου του ήπατος μέσω του p53 /Bcl-XL. PLoS ONE 7 (12): e51764. doi: 10.1371 /journal.pone.0051764

Επιμέλεια: Ασράφ Β Abdel-Ναΐμ, Πανεπιστήμιο Ain Shams, την Αίγυπτο

Ελήφθη: 25 Ιουλ, 2012? Δεκτές: 7 Νοεμ 2012? Δημοσιεύθηκε: 11, Δεκεμβρίου του 2012

Copyright: © 2012 Wang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (Αρ .: 30400521), το Τμήμα Επιστήμης Τεχνολογίας της επαρχίας Zhejiang (αριθ .: 2012R10047 να QD και το αριθ .: 2012C33116 σε GW) και το Τμήμα Εκπαίδευσης της επαρχίας Zhejiang (αριθ .: Y201224108). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

το ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) είναι ένας από τους πιο κοινούς τύπους καρκίνου του ήπατος και η τέταρτη κύρια αιτία θανάτων από καρκίνο παγκοσμίως [1]. Η έλλειψη βιοδεικτών που ανιχνεύουν χειρουργικά χειρουργήσιμη πρώιμο στάδιο μιας νόσου έχει προκαλέσει την εκδήλωση της προχωρημένα στάδια στους περισσότερους ασθενείς όταν χειρουργική εκτομή δεν είναι πλέον εφικτή. [2] Ως εκ τούτου, η χημειοθεραπεία παραμένει η βιώσιμη επιλογή για τη θεραπεία των ασθενών με ανεγχείρητο ΗΚΚ.

Κατά τη διάρκεια των ετών, δοξορουβικίνη (ϋΟΧ) έχει γίνει ένα χρησιμοποιούνται συνήθως και ευρέως παράγοντα στη θεραπεία HCC. Ωστόσο, μελέτες έχουν δείξει ότι ορισμένα καρκινικά κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων ηπατώματος, είναι ανθεκτικά στα αποπτωτικά αποτελέσματα του DOX [3]. Επιπλέον, DOX χημειοθεραπεία με βάση συνδέεται με σοβαρές παρενέργειες σε μη ογκογόνους ιστούς, όπως η καρδιά, το ήπαρ, τα νεφρά και, περιορίζοντας σημαντικά τις κλινικές εφαρμογές του [4], [5]. Benjamin περιγράφεται οκτώ ασθενείς με διαταραχή της ηπατικής λειτουργίας που ανέπτυξε σοβαρή πανκυτταροπενία και βλεννογονίτιδα ενώ λαμβάνουν DOX, με αποτέλεσμα οι ειδικοί για τη μείωση της δοσολογίας λόγω μεταβολής της ηπατικής λειτουργίας [6]. Έτσι, οι βελτιωμένες θεραπευτικές αγωγές που ενισχύουν αποτελέσματα DOX, οι οποίες επιτρέπουν τη μείωση της δόσης και την προστασία των μη ογκογόνους ιστούς, για να βελτιωθεί η θεραπεία των ασθενών με καρκίνο του ήπατος.

Οι μηχανισμοί του ϋΟΧ-κυτταροτοξικότητα σε καρκινικά κύτταρα και φυσιολογικούς ιστούς είναι διαφορετικοί [7]. DOX τοξικότητα σε καρκινικά κύτταρα λαμβάνει χώρα κυρίως μέσω παρεμβολής DNA και βλάβη [8], ενώ DOX επαγόμενη καρδιοτοξικότητα ή ηπατοτοξικότητας συμβαίνει κυρίως μέσω της παραγωγής ελευθέρων ριζών οξυγόνου, η οποία αναστέλλεται από ελευθέρων ριζών [9]. Αυτή η διαφορά στην DOX μεσολάβηση τοξικότητα σε καρκινικά και φυσιολογικά κύτταρα μπορεί να διερευνηθεί για να βελτιώσει τα αποτελέσματα κατά του όγκου της ΔΟΞ με συνδυαστικές προσεγγίσεις που επιτρέπουν την μείωση της δόσης του DOX προστατεύοντας ταυτόχρονα τα φυσιολογικά κύτταρα.

Quercetin (3, 3 ‘, 4 ‘, 5, 7-pentahydroxyflavone), μια σημαντική διαιτητική φλαβονοειδές παρούσα σε διάφορα φρούτα και λαχανικά, εκθέματα αντιοξειδωτικό, αντιφλεγμονώδες, και αντικαρκινικές ιδιότητες [10]. Quercetin έχει λάβει αυξανόμενη προσοχή ως προ-αποπτωτικών φλαβονοειδών με ειδικές και σχεδόν αποκλειστική δραστηριότητα στα κύτταρα του όγκου και όχι κανονική, μη μετασχηματισμένα κύτταρα [11], [12]. Πάντως, οι μηχανισμοί με τους οποίους η κερκετίνη ασκεί αντι-πολλαπλασιαστική και αποπτωτικών δραστηριότητές του παραμένουν ασαφείς. Αρκετές

in vitro

και

in vivo

μελέτες έχουν αξιολογήσει quercetin συνδυαστεί με DOX για τον καρκίνο του μαστού και θεραπείες λευχαιμίας, αποκαλύπτοντας συνεργιστικά αποτελέσματα [13] – [15]. Σε μοντέλα ποντικών με καρκίνο του μαστού, ένας συνδυασμός των διαιτητικών quercetin και ενδοογκική ένεση DOX μειώνει τον όγκο του όγκου και τη μεταστατική εξάπλωση [13]. Παρά το γεγονός ότι η κερκετίνη αντιστρέφει DOX προκαλούμενη αντοχή πολυφαρμάκου σε ανθρώπινα μυελογενή λευχαιμικά κύτταρα [14], [16], υπάρχουν μελέτες σχετικά με την αποτελεσματικότητα του quercetin με DOX κατά του καρκίνου του ήπατος έχουν αναφερθεί ακόμα.

Αντιοξειδωτικά έχουν ευεργετικά αποτελέσματα κατά DOX επαγόμενη τοξικότητα σε ποντίκια και αρουραίους [17]. Quercetin έχει μια προστατευτική επίδραση έναντι DOX επαγόμενη καρδιοτοξικότητα σε ποντικούς, αλλά οι μηχανισμοί παραμένουν ασαφείς [18]. Quercetin παρουσιάζει επίσης μια προστατευτική επίδραση έναντι AFB1 μεσολάβηση ηπατική βλάβη

in vivo

προωθώντας αντιοξειδωτική αμυντικά συστήματα και την αναστολή της υπεροξείδωσης λιπιδίων [19]. Επιπλέον, quercetin μειώνει την ηπατική περιεκτικότητα κυτοχρώματος Ρ450 και αυξάνει την ηπατική γλουταθειόνη S-τρανσφεράση (GST) δραστηριότητα εμπλέκεται στην ενεργοποίηση /αποτοξίνωση χημικά μεταλλαξιγόνα /καρκινογόνα [20] – [22]. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η κερκετίνη μπορεί να παρέχει προστασία έναντι DOX μεσολάβηση ηπατική βλάβη.

Η παρούσα μελέτη στοχεύει να αξιολογηθούν τα αποτελέσματα του συνδυασμού της ΔΟΞ χημειοθεραπευτικό παράγοντα με τη φυσική ένωση quercetin στην ανθρώπινη καρκίνο του ήπατος και φυσιολογικά κύτταρα. Εξετάστηκε επίσης η δυνητική λειτουργία του quercetin ως συκώτι προστατευτικός παράγοντας κατά τη διάρκεια της θεραπείας DOX σε ποντικούς.

Τα αποτελέσματα μας αποδεικνύουν ότι η quercetin ενισχυμένη ϋΟΧ-απόπτωση σε κύτταρα ηπατώματος είναι ρ53-εξαρτώμενη και λαμβάνει χώρα με προς τα κάτω ρύθμιση Bcl- XL. Επιπλέον, η κερκετίνη επιδεικνύει ένα προστατευτικό αποτέλεσμα έναντι DOX επαγόμενη ηπατοτοξικότητα σε ποντικούς.

Αποτελέσματα

Quercetin ενισχύει επιλεκτικά DOX κυτταροτοξικότητα σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος, αλλά όχι σε φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα

Cultures εκτέθηκαν σε quercetin σε δόσεις των 0 μΜ έως 150 μΜ να προσδιοριστούν τα αποτελέσματα του quercetin στο ήπαρ καρκινικά κύτταρα και φυσιολογικά κύτταρα. Διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO? 0,1%) χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος. Μετά από 48 ώρες, μία εξαρτώμενη από τη δόση μείωση στην βιωσιμότητα των καρκινικών κυττάρων (IC

50 τιμή κύτταρα SMMC7721 = 133 μΜ και QGY7701 κύτταρα = 142 μΜ) παρατηρήθηκε (Εικ. 1Α). Quercetin δεν επηρέασε τη φυσιολογική ανάπτυξη των ηπατικών κυττάρων (L02), ακόμη και σε υψηλές συγκεντρώσεις (& gt? 100 μΜ). Λαμβάνοντας υπόψη ότι 12 μΜ συγκέντρωσης ορού quercetin δεν προκάλεσε κανένα σχετίζεται παρενέργειες στον άνθρωπο και κυτταροτοξικότητα της σε διάφορες καρκινικές κυτταρικές γραμμές [23], [24], επιλέξαμε 20 μΜ της κερκετίνης για μελέτες συνδυασμού φαρμάκων. Κερκετίνη (20 μΜ) αυξήθηκε DOX που προκαλείται από το ήπαρ θάνατο των καρκινικών κυττάρων και μείωσε το IC

50 αξία των ϋΟΧ έναντι ηπατώματος SMMC7721 κύτταρα (5,1 μΜ έως 2,2 μΜ? Εικ. 1Β) και QGY7701 κύτταρα (6,2 μΜ έως 2,7 μΜ? Εικ . 1C). Αντιθέτως, προ-επεξεργασία με 20 μΜ του quercetin μείωσε την DOX κυτταροτοξικότητα σε φυσιολογικό ήπαρ L02 κύτταρα (Σχ. 1D). Στο ανθρώπινο πλάσμα, η κορυφή και η σταθερή κατάσταση συγκέντρωσης DOX είναι 5 μΜ και 25 nM έως 500 nM, αντίστοιχα [25]? Έτσι, επιλέγεται 1 μΜ ϋΟΧ για τις μελέτες συνδυασμού φαρμάκων να αντιπροσωπεύει σχετικά επίπεδα στο πλάσμα σε ασθενείς DOX-θεραπεία. χρώση V /ΡΙ αννεξίνης διεξήχθη για να διερευνηθεί κατά πόσο ή όχι DOX κυτταρικό θάνατο που επάγεται σε κύτταρα ηπατώματος συμβαίνει μέσω απόπτωσης. DOX θεραπεία (1 μΜ) προκάλεσε απόπτωση σε 13% των κυττάρων SMMC7721? ο συν-θεραπεία με κερκετίνη αύξησε το ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων σε 42% (Σχ. 1Ε). Το ποσοστό της ΔΟΞ απόπτωση μόνο του ή ο συν-θεραπεία με κερκετίνη σε κύτταρα L02 ήταν περίπου 22% και 18%, αντίστοιχα, υποδεικνύοντας ότι η κερκετίνη δεν ευαισθητοποιεί τα φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα να DOX επαγόμενη απόπτωση. Παρόμοια αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν με χρώση Hoechst (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν μια προτιμησιακή ενίσχυση επίδραση του quercetin στην DOX κυτταροτοξικότητα σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος, αλλά όχι σε φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα.

(Α) Επίδραση της quercetin στον πολλαπλασιασμό των SMMC7721 και QGY7701 καρκίνο του ήπατος κύτταρα, και L02 φυσιολογικά κύτταρα του ήπατος. Τα κύτταρα επωάστηκαν με κερκετίνη (0 μΜ έως 150 μΜ) για 48 ώρες και υποβάλλεται σε μία δοκιμασία ΜΤΤ για να προσδιοριστεί ο ρυθμός πολλαπλασιασμού. (Β) Κερσετίνη ευαισθητοποιημένα SMMC7721 κύτταρα να DOX. (C) Κερσετίνη ευαισθητοποιημένα QGY7701 κύτταρα να DOX. (D) Quercetin μειώνεται μερικώς το DOX επαγόμενη αναστολή της ανάπτυξης σε L02 κύτταρα. Τα κύτταρα επωάστηκαν με DOX (1 μΜ) και /ή κερκετίνη (20 μΜ) (Β, C, και D) επί 24 ώρες, και στη συνέχεια υποβάλλεται σε μία δοκιμασία ΜΤΤ. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± S.D. τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. (Ε) SMMC7721 και L02 κύτταρα επωάστηκαν με DOX (1 μΜ) και /ή κερκετίνη (20 μΜ) για 24 ώρες, και στη συνέχεια αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας χρώση /ΡΙ αννεξίνης V σε διάκριση των ζωντανών κυττάρων (αννεξίνη V- /PI -), πρώιμων αποπτωτικών κυττάρων (αννεξίνη V + /ΡΙ-), νέκρωση ή αργά αποπτωτικών κυττάρων (αννεξίνη V + /ΡΙ +), και τα νεκρά κύτταρα (Αννεξίνη V- /ΡΙ +). *

P

& lt? 0,05 έναντι κύτταρα συν-επεξεργασία με κερκετίνη

Η

Κερσετίνη ενισχύει την ενεργοποίηση της κασπάσης DOX που προκαλείται στο ήπαρ καρκινικά κύτταρα

Η ενεργοποίηση της κασπάσης έχει ένα. σημαντική λειτουργία τόσο ενδογενών και εξωγενών αποπτωτικά μονοπάτια. Έτσι, εξετάσαμε επίσης την επίδραση της quercetin επί DOX μεταβολές που προκλήθηκαν από κασπάσες. Quercetin δεν ενεργοποιούν άμεσα κασπάσες, αλλά ενισχύεται έντονα το DOX επαγόμενη ενεργοποίηση της κασπάσης-9, δεν κασπάσης-8 ενεργοποίηση, σε SMMC7721 κύτταρα (Σχ. 2Α). Η ενεργοποιημένη κασπάση-3, η κύρια τελεστή των κασπασών, και PARP, το κύριο υπόστρωμα των κασπασών, αξιολογήθηκαν επίσης. Quercetin μόνη δεν προκάλεσε καμία διάσπαση της κασπάσης-3 σε SMMC7721 κύτταρα? DOX προκάλεσε σχηματισμό διάσπασης 20 kDa. Ωστόσο, η συν-θεραπεία του quercetin και DOX προκάλεσε την διάσπαση του procaspase-3 σε ένα ενδιάμεσο ρ20, το οποίο στη συνέχεια διασπάται στο ενεργό υπομονάδα ρ17. Περισσότερες πρωτεΐνες ΡΑΚΡ διασπάστηκαν σε 85 kDa μορφές αφού η θεραπεία συνδυασμού χορηγήθηκε σε σύγκριση με τη θεραπεία με DOX μόνη της. Παρόμοια μοτίβα ενεργοποίηση κασπασών και η αποκοπή του PARP παρατηρήθηκαν σε QGY7701 κύτταρα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η δοκιμασία δραστικότητας κασπάσης-3 επιβεβαίωσε ότι η κερκετίνη αύξησε σημαντικά την DOX επαγόμενη δραστικότητα κασπάσης-3 σε SMMC7721 κύτταρα (Εικ. 2Β). Τα αποτελέσματα του ευρέος φάσματος αναστολέα της κασπάσης Z-VAD-fmk επί της απόπτωσης των κυττάρων του καρκίνου του ήπατος προσδιορίστηκε με χρώση ΡΙ για να επιβεβαιώσει ότι η δράση της quercetin στη DOX ήταν κασπάσης εξαρτάται. Η συσσώρευση συν-θεραπεία που προκαλείται από υπο-G1 κυτταρικών πληθυσμών φάση σε QGY7701 κύτταρα ήταν σημαντικά μειωμένη (26% έως 7%) από την προεπεξεργασία με Z-VAD-fmk (Σχ. 2C). Ο πληθυσμός των κυττάρων φάση υπο-G1 σε SMMC7721 κυττάρων μειώθηκε επίσης από 39% σε 8% (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η κερκετίνη ενισχύεται DOX επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος με την ενεργοποίηση των κασπασών-9 και -3 της ενδογενούς οδού.

(Α) Διασπασμένη κασπασών-3, -8, -9 και και PARP έκφραση αξιολογήθηκαν με western αποτύπωση σε SMMC7721 κύτταρα κατεργασμένα με DOX (1 μΜ) και /ή κερκετίνη (20 μΜ) για 24 ώρες. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος. (Β) Κασπάση-3 δοκιμασία δραστικότητας του DOX- (1 μΜ) και /ή quercetin- (20 μΜ) κατεργάζεται SMMC7721 κυττάρων για 24 ώρες. Τα κυτταρολύματα επωάστηκαν με φθορογόνο κασπάσης-3 υπόστρωμα για 1 ώρα στους 37 ° C. δραστικότητα κασπάσης-3 ομαλοποιήθηκε με την πρωτεΐνη κυτταρολύματος και εκφράζονται ως φορές ενεργοποίησης σε σύγκριση με τον έλεγχο. *

P

& lt? 0,05 έναντι DOX-επεξεργασμένα κύτταρα. (Γ) αναστολέα κασπάσης Ζ-VAD-fmk μείωσε την επίδραση του quercetin στην DOX επαγόμενη απόπτωση σε QGY7701 κύτταρα εξετάζονται με χρώση ΡΙ. Έλεγχος: 0,5% διμεθυλοσουλφοξείδιο? quercetin: 20 μΜ? DOX: 1 μΜ? DOX + quercetin: DOX 1 μΜ συν quercetin 20 μΜ? Z-VAD-fmk + DOX + quercetin: κύτταρα προκατεργάστηκαν με 25 μΜ Ζ-VAD-fmk επί 1,5 ώρες και κατεργάζεται περαιτέρω με DOX συν κερκετίνη για 24 ώρες. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± S.D. τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. *

P

& lt? 0,05 έναντι DOX-επεξεργασμένα κύτταρα. **

P

& lt?. 0,01 vs. DOX + quercetin κατεργασμένα κύτταρα

Η

Quercetin ενισχύει DOX επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος μέσω Bcl-XL /Bax μεσολάβηση μιτοχονδριακής οδού

τα πειράματα διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας JC-1 για να διερευνηθεί η πιθανή εμπλοκή της διαταραχής της μιτοχονδριακής μεμβράνης. Ποσοτικές μετρήσεις έδειξαν ότι SMMC7721 κύτταρα κατεργασμένα με κερκετίνη μόνο του δεν παρουσιάζει καμία μεταβολή σε σχέση με τον έλεγχο. θεραπεία DOX προκάλεσε μια μέτρια μείωση του ερυθρού φθορισμού, υποδεικνύοντας μία μείωση στο δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης, ενώ η συν-θεραπεία του quercetin και DOX προκάλεσε μία απότομη, σημαντική μείωση (Σχ. 3Α και Β). Συνεπής με την απώλεια της μιτοχονδριακής μεμβράνης, η συν-επεξεργασία των κυττάρων με SMMC7721 quercetin και DOX κυκλοφορήσει περισσότερα κυτοχρώματος

γ

από τα μιτοχόνδρια στο κυτοσόλιο σε σύγκριση με εκείνη της θεραπείας DOX μόνη της (σχ. 3C).

(Α, Β) Επίδραση της ΔΟΞ και /ή quercetin στην μιτοχονδριακή μεμβράνη δυναμικό κατανομή στον SMMC7721 κύτταρα κατεργασμένα με DOX (1 μΜ) και /ή κερκετίνη (20 μΜ) για 24 ώρες. JC-1 παρατηρείται ως πράσινο φθορισμό μονομερή στο κυτταρόπλασμα ή το κόκκινο συσσωματώματα φθορίζοντα σε άθικτα μιτοχόνδρια. Η μείωση των ερυθρών έντασης φθορισμού δείχνει μιτοχονδριακό κατανομή με πιθανούς άθικτη μεμβράνη. *

P

& lt? 0,01 έναντι DOX-επεξεργασμένα κύτταρα. (Γ) ανάλυση κηλίδας Western της συνολικής έκφρασης του Bid, Bcl-2, και Bcl-XL, καθώς και η μιτοχονδριακή διανομή του Βαχ και το κυτοσόλιο διανομή του κυτοχρώματος

γ

σε SMMC7721 κύτταρα κατεργασμένα με DOX ( 1 μΜ) και /ή κερκετίνη (20 μΜ) για 24 ώρες. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος για την ολική πρωτεΐνη και κυτοσόλιο πρωτεΐνη. Hsp60 χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος για την μιτοχονδριακή πρωτεΐνη. (D) ανάλυση κηλίδας Western της μιτοχονδριακής διανομή του Βαχ και το συνολικό έκφραση του Bcl-XL στην SMMC7721 κύτταρα επιμολυσμένα με Bcl-XL φορέα έκφρασης και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με DOX (1 μΜ) και /ή κερκετίνη (20 μΜ) για 24 ώρες. (Ε) Επίδραση της ΔΟΞ ή /και quercetin στην απόπτωση των /Bcl-XL και SMMC7721 /neo κύτταρα SMMC7721 προσδιορίστηκε με χρώση ΡΙ μετά DOX (1 μΜ) και /ή κερκετίνη (20 μΜ) χορηγήθηκε για 24 ώρες. *

P

& lt? 0,01, SMMC7721 /neo εναντίον SMMC7721 /Bcl-xl κύτταρα. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± S.D. από τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Εξετάσαμε επίπεδο πρωτεϊνών έκφραση Bcl-2 οικογένειας για τη διερεύνηση των πιθανών μοριακών στόχων ανάντη της κασπάσης-9 μονοπάτια. Bcl-2 επίπεδο έκφρασης δεν αλλάζει μετά έγιναν διάφορες θεραπείες. Η συν-θεραπεία της ΔΟΞ και quercetin δεν επηρέασε την DOX προκαλούμενη μείωση στο επίπεδο έκφρασης Bid. Παραδόξως, ο συν-θεραπεία προκάλεσε μια απότομη μείωση στην έκφραση Bcl-XL, ενώ ΔΟΞ ή θεραπεία βαλανοκετόνη από μόνες τους δεν επηρέασε Bcl-XL έκφραση (Σχ. 3C). Κατά συνέπεια, η συν-επεξεργασία των κυττάρων με SMMC7721 quercetin και DOX αυξήθηκε σημαντικά Bax μετατόπιση από το κυτοσόλιο στα μιτοχόνδρια σε σχέση με τη θεραπεία με DOX μόνη της, η οποία προκάλεσε μόνο μία μέτρια αύξηση σε Βαχ μετατόπισης.

SMMC7721 κύτταρα ήταν σταθερά μεταχθέντα χρησιμοποιώντας τον φορέα έκφρασης Bcl-XL για να επιβεβαιωθεί η σημαντική λειτουργία των πρωτεϊνών Bcl-XL στο επιδράσεις του quercetin στην DOX επαγόμενη απόπτωση. Η υπερέκφραση του Bcl-XL στην SMMC7721 κύτταρα ανέστειλε σημαντικά Βαχ μετάθεση σε μιτοχόνδρια που επάγεται από την συν-θεραπεία της ΔΟΞ και quercetin (Σχ. 3D), και μείωσε την επίδραση δυναμικοποίηση quercetin επί DOX-επαγόμενη απόπτωση (Σχ. 3Ε ). Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι η κερκετίνη ενισχύει DOX επαγόμενη απόπτωση σε κύτταρα ηπατώματος μέσω της μιτοχονδριακής οδού με προς τα κάτω ρύθμιση πρωτεΐνης Bcl-XL και αυξάνοντας στη συνέχεια Bax μετατόπιση στα μιτοχόνδρια.

Quercetin ενίσχυση της DOX επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος είναι ρ53-εξαρτώμενη

η ενεργοποιημένη ρ53-διαμεσολαβούμενη προαγωγή απόπτωσης σε κύτταρα όγκου είναι ένας σημαντικός μηχανισμός των αντικαρκινικών φαρμάκων, όπως DOX [26]. Συνεπώς, διερευνήσαμε αν πρωτεΐνη p53 εμπλέκεται στην επίδρασης ενίσχυσης της quercetin επί DOX επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος. Καμία ανιχνεύσιμη έκφραση της πρωτεΐνης p53 παρατηρήθηκε στον έλεγχο ή κύτταρα βαλανοκετόνη-θεραπεία, ενώ ο συν-θεραπεία του quercetin και DOX αύξησε σημαντικά το επίπεδο έκφρασης της ρ53 πρωτεΐνης που προκαλείται από DOX σε SMMC7721 κύτταρα (Σχ. 4Α). ρ53 ρυθμίζεται προς τα πάνω ρυθμιστής της απόπτωσης (PUMA), ένα προ-αποπτωτικό ΒΗ3-μόνο πρωτεΐνη, είναι μια άμεση μεταγραφική στόχος της ρ53. Στη συνέχεια Κερσετίνη αύξησε τις DOX που προκαλείται από τα επίπεδα έκφρασης PUMA. κύτταρα SMMC7721 επιμολύνθηκαν παροδικά με το πλασμίδιο p53-λουσιφεράσης και εκτέθηκαν σε διαφορετικές θεραπείες για να αποσαφηνιστεί η λειτουργία του ρ53 στο επίδρασης ενίσχυσης της quercetin επί DOX επαγόμενη απόπτωση. Quercetin μόνο του δεν ενισχύουν την δραστηριότητα της ρ53. Αντιθέτως, η συνδυασμένη θεραπεία με DOX και θεραπεία DOX μόνη ενίσχυσε σημαντικά τη δραστικότητα ρ53 με 15- και 6-φορές, αντίστοιχα, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Επιπλέον, pifithrin-α, ένας ειδικός αναστολέας ρ53, δεν επηρέασε την επιβίωση των κυττάρων, αλλά ανέστειλε σημαντικά δραστικότητα ρ53 (2,4 φορές), το οποίο ενισχύεται από τη συνδυασμένη quercetin και θεραπεία DOX (Εικ. 4Β), και μείωσε την επίδραση ενίσχυση της quercetin επί DOX-επαγόμενη απόπτωση (Σχ. 4C). Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι η αυξημένη δραστικότητα της ρ53 είναι απαραίτητη για την τόνωση της επίδρασης ενίσχυσης της quercetin επί DOX επαγόμενη απόπτωση.

(Α) και p53 PUMA εκφράσεις αξιολογήθηκαν με στύπωμα Western σε SMMC7721 κύτταρα κατεργασμένα με DOX (1 μΜ ) και /ή κερκετίνη (20 μΜ) για 24 ώρες. β-ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως ένας εσωτερικός έλεγχος. (Β) Η λουσιφεράσης δοκιμασία της DOX- και ενεργοποίηση p53 quercetin που προκαλείται. SMMC7721 κύτταρα προκατεργάστηκαν για 1 ώρα με 2 μΜ pifithrin-α, και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με DOX (1 μΜ) ή κερκετίνη (20 μΜ) για 12 ώρες. δραστικότητα ρ53 προσδιορίστηκε με δοκιμασία λουσιφεράσης δραστηριότητα. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± S.D. τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. *

P

& lt? 0,01 έναντι DOX-επεξεργασμένα κύτταρα. **

P

& lt? 0.001 έναντι DOX + κύτταρα quercetin-θεραπεία. (Γ) SMMC7721 κύτταρα προκατεργάστηκαν με 2 μΜ pfithrin-α για 1 ώρα, και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με DOX (1 μΜ) και /ή κερκετίνη (20 μΜ) για 24 ώρες. τα ποσοστά απόπτωσης προσδιορίστηκαν με χρώση Αηηβχίη V /PI. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± S.D. τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. *

P

& lt? 0.001 έναντι DOX-επεξεργασμένα κύτταρα. **

P

& lt? 0,01 έναντι DOX-επεξεργασμένα κύτταρα. ***

P

& lt?. 0.001 έναντι DOX + quercetin επεξεργασμένα κύτταρα

Η

Κερσετίνη αυξάνει DOX που προκαλείται από την ανάπτυξη αναστολή της SMMC7721 ξενομοσχευμάτων σε ποντίκια

Η επιδράσεις του quercetin στην DOX σε μοντέλο κυτταροκαλλιέργειας μας

in vitro

επικυρώθηκαν στη μελέτη αυτή. Ως εκ τούτου, αξιολογήσαμε εάν quercetin μπορεί να ενισχύσει την αντικαρκινική δράση της DOX σε ξενομοσχεύματα όγκου SMMC7721 σε γυμνούς ποντικούς. SMMC7721 εναιωρήματα μονών κυττάρων ενέθηκαν s.c. στα πλευρά του έξι εβδομάδων ποντικοί ανοσο-ανεπαρκή, οι ποντικοί χωρίστηκαν στη συνέχεια σε τέσσερις ομάδες 10 ημέρες μετά τον εμβολιασμό του όγκου όταν οι όγκοι ήταν ψηλαφητοί: 1) Ομάδα ελέγχου φυσιολογικό αλατούχο διάλυμα (ε.π., 3 χ /εβδομάδα)? 2) quercetin (100 mg /kg, ε.π., 3 χ /εβδομάδα)? 3) DOX (4 mg /kg, ί.ρ., 1 χ /εβδομάδα)? και 4) DOX (4 mg /kg, ί.ρ., 1 χ /εβδομάδα) συν κερκετίνη (100 mg /kg, ί.ρ., 3 χ /εβδομάδα). Για την ομάδα ϋΟΧ, οι αγωγές χορηγήθηκαν μέχρι αθροιστική δόση 12 mg /kg επιτεύχθηκε. Quercetin μόνο του δεν ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου? Αντ ‘αυτού, η κερκετίνη προωθείται η ανάπτυξη του όγκου για τις πρώτες 14 ημέρες, και στη συνέχεια, επιβραδύνει την ανάπτυξη του όγκου για τις επόμενες 7 ημέρες σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Στο τέλος του πειράματος, ο μέσος όγκος του όγκου της θεραπείας quercetin ήταν 531,3 mm

3, παρόμοια με εκείνη της ομάδας ελέγχου. θεραπεία DOX μείωσε σημαντικά τους όγκους όγκου (334.7 mm

3) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Μια σημαντική μείωση του όγκου του όγκου των συν-αγωγή ξενομοσχευμάτων παρατηρήθηκε από τέταρτη ημέρα μετά την αγωγή μέχρι το τέλος του πειράματος (Σχ. 5Α). Μετά χορηγήθηκε συν-θεραπεία, οι όγκοι αυξήθηκαν με μειωμένο συντελεστή με την έναρξη και την τελική τους μέσους όγκους των όγκων των 76,5 και 118,1 χιλιοστά

3, αντίστοιχα.

SMMC7721 όγκους των κυττάρων που προέρχονται αναπτύχθηκαν σε άτριχα ποντίκια και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με αλατούχο διάλυμα, quercetin, DOX και DOX + quercetin. (Α) Η ανάπτυξη του όγκου παρακολουθήθηκε με μέτρηση του όγκου του όγκου για τρεις εβδομάδες. (

n

= 5 ποντίκια ανά ομάδα). *

P

& lt? 0,01 έναντι του ελέγχου και ομάδες quercetin-θεραπεία. **

P

& lt? Εναντίον ομάδας DOX έλαβαν 0,01. (Β) Στο τέλος των τριών εβδομάδων, οι όγκοι συλλέχθηκαν και ζυγίστηκαν. DOX μείωσε το μέγεθος του όγκου σε σύγκριση με τον έλεγχο και τις ομάδες που έλαβαν quercetin (*

P & lt?

0,05). Συν-θεραπεία μείωσε σημαντικά το μέγεθος του όγκου σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες θεραπείας (**

P & lt?

0.001). (C) δείγματα όγκου υποβλήθηκαν σε χρώση αιματοξυλίνης και ηωσίνης και ανοσοϊστοχημική ανάλυση χρησιμοποιώντας Ki67, Bcl-XL, και αντισώματα ρ53. όγκοι Co-αγωγή έδειξαν σημαντική μείωση στην Κί67 και Bcl-XL έκφρασης, καθώς και μια αύξηση στην έκφραση της ρ53 σε σύγκριση με άλλους όγκους αγωγή (

P

& lt? 0,05).

Η

το μέσο βάρος του όγκου στην ομάδα ελέγχου έφθασαν 163 mg, ενώ η ομάδα quercetin αγωγή προκάλεσε καμία επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου SMMC7721. θεραπεία DOX είχε ως αποτέλεσμα περίπου 50% αναστολή της ανάπτυξης του όγκου σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου? το μέσο βάρος του όγκου μειώθηκε σε 87 mg. Η συν-θεραπεία της ΔΟΞ και quercetin προκάλεσε την πιο αποτελεσματική αναστολή της ανάπτυξης του όγκου και οδήγησε σε μέσο βάρος του όγκου από 20 mg (Εικ. 5Β). Τα δεδομένα έδειξαν ότι η κερκετίνη αυξάνει την αντικαρκινική δράση της ΔΟΞ

in vivo

.

Ιστολογικά, οι όγκοι ήταν σημαντικά λιγότερο κυτταρική και αποτελείται κυρίως από ακυτταρικού υλικού στα συν-θεραπεία ξενομοσχεύματα. Αντιθέτως, τα καρκινικά κύτταρα από τα ποντίκια που έλαβαν τη θεραπεία ελέγχου του οχήματος και quercetin διευθετήθηκαν ως φωλιές διαχωρίζονται από δέσμες εξωκυτταρικής μήτρας (Σχ. 5C). Ένας μικρός αριθμός των όγκων βρέθηκαν σε ποντίκια DOX-θεραπεία. τομές όγκων από γυμνά ποντίκια αξιολογήθηκαν για έκφραση Κί67 να διερευνήσει την επίδραση της συνδυασμένης θεραπείας επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων του όγκου (Σχ. 5C). Μετά από τρεις εβδομάδες θεραπείας, 24%, 62%, 91% και 92% των κυττάρων του όγκου Κί67 + βρέθηκαν στο συν-, DOX-, και τον έλεγχο του οχήματος ή ποντίκια βαλανοκετόνη-θεραπεία, αντίστοιχα. Συμπληρωματικές ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν για να επιβεβαιωθεί η

in vitro

ευρήματα σχετικά με τους μηχανισμούς με τους οποίους η κερκετίνη παρουσιάζει επίδρασης ενίσχυσης με DOX

in vivo

. Κερσετίνη και DOX συν-θεραπεία όγκων exhibitd αυξημένα επίπεδα ρ53 και μειωμένη Bcl-XL επίπεδα σε σχέση με την ομάδα ελέγχου (Σχ. 5C), σε συνέπεια με

in vitro

ευρήματά μας.

Quercetin εξασθενίζει DOX επαγόμενη ηπατοτοξικότητα

in vivo

Η

Θεωρώντας

in vitro

παρατηρήσεις μας ότι η κερκετίνη μπορεί να μειώσει DOX κυτταροτοξικότητα σε φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα (Εικ. 1D), θα διερευνηθεί περαιτέρω επιπτώσεις της στην DOX-επαγόμενη ηπατοτοξικότητα

in vivo

. C57BL 6 ποντίκια /υποβλήθηκαν σε αγωγή με DOX στα 20 mg /kg (ε.π.), μια δόση που προκαλεί οξεία τοξικότητα [27]. Η οξεία ηπατοτοξικότητα της DOX ήταν σαφώς αποκάλυψε η αύξηση των βιοχημικών δεικτών στον ορό, ιδιαίτερα αμινοτρανσφεράσης της αλανίνης (ALT) και ασπαρτική αμινοτρανσφεράση (AST). θεραπεία DOX οδήγησε σε σημαντική αύξηση του 765% και 378% σε ALT και AST, αντίστοιχα, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Πίνακας 1). συμπλήρωση Quercetin μόνο του δεν παρουσιάζουν σημαντικές αλλαγές στις βιοχημικούς δείκτες. Αντίθετα, ο συν-θεραπεία DOX και quercetin οδήγησε σε μερική αναστροφή της DOX που προκαλείται από την αύξηση στον ορό των ALT και AST (

σ

& lt? 0,05).

Η

Η μικροσκοπική εξέταση αποκάλυψε ότι ο έλεγχος και η κερσετίνη επεξεργασμένο ηπατικούς ιστούς έχουν μεγάλα κανονική πολυγωνικά κύτταρα με εξέχοντα γύρο πυρήνες και ηωσινοφιλική κυτταρόπλασμα, όπως επίσης και μερικές απέχουσες ηπατική ημιτονοειδή διατεταγμένα στο ενδιάμεσο των ηπατικών κορδόνια (Σχ. 6Α). Αντίθετα, οι ποντικοί που έλαβαν 20 mg /kg του DOX έδειξε μαζική ηπατοτοξικότητα, με τη διάλυση των εμπλεκόμενων ηπατικής κορδόνια, το οποίο εμφανίστηκε ως κενά κενοτόπια ευθυγραμμισμένη κατά σκέλη του νεκρωτικά ηπατοκύτταρα και κύτταρα Kupffer πολλαπλασιάστηκαν με διάχυση μεταξύ το λιπαρό εκφυλίστηκε ηπατοκύτταρα. Ιστοπαθολογική στοιχεία αποκαλύπτουν ότι ηπατική βλάβη μετά από θεραπεία DOX ήταν σημαντικά μειωμένη κατά την συν-θεραπεία με κερκετίνη.

(Α) C57BL /6 ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με κερκετίνη (100 mg /kg /ημέρα, ρο) τέσσερις ημέρες πριν από την ip χορήγηση του DOX (20 mg /kg). Τα ήπατα αφαιρέθηκαν πέντε ημέρες μετά τη θεραπεία DOX, και οι τομές βάφτηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η &? Ε? Μεγέθυνση 200 Χ). όγκων (Β) SMMC7721 που προέρχεται από κύτταρα αναπτύχθηκαν σε γυμνούς ποντικούς και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με φυσιολογικό ορό, quercetin, DOX και DOX + quercetin. Στο τέλος των τριών εβδομάδων, συκώτια συλλέχθηκαν και χρωματίστηκαν με Η &? Ε. (Γ) Ένα μοντέλο της επίδρασης της quercetion για DOX στα ηπατικά κύτταρα. Σε αυτό το μοντέλο, η κερκετίνη αυξάνει DOX επαγόμενη έκφραση ρ53 σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος και μειώνει την έκφραση Bcl-XL, αυξάνοντας έτσι κασπάσης -3 /-9 δραστηριότητα και δυναμικοποίηση DOX κυτταρικό θάνατο που επάγεται σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος. Quercetin μειώνει DOX που προκαλείται από το οξειδωτικό στρες και αυξάνει την επιβίωση των κυττάρων σε φυσιολογικά ηπατικά κύτταρα.

Η

Ερευνήσαμε τις DOX που προκαλείται από υποχρόνια ηπατικές βλάβες σε ποντίκια χρησιμοποιώντας SMMC7721 ξενομοσχεύματα. Η ομάδα DOX επεξεργασμένο έλαβε DOX μία φορά την εβδομάδα (4 mg /kg, ε.π.), μέχρι μία αθροιστική δόση των 12 mg /kg επιτεύχθηκε. Το ηπατικό ιστό της ομάδας ϋΟΧ αγωγή παρουσίασαν παθολογικές αλλαγές παρόμοιες με αυτές της οξείας DOX επεξεργασμένου C57BL /6 ποντίκια (Σχ. 6Β). Quercetin ανέστρεψε την DOX επαγόμενη ηπατική βλάβη σε γυμνά ποντίκια με ξενομοσχεύματα όγκων SMMC7721.

Συζήτηση

Αν και DOX είναι ένας ισχυρός αντικαρκινικό φάρμακο, κλινική χρήση της περιορίζεται από την τοξικότητα του να φυσιολογικούς ιστούς, όπως ως η καρδιά και το συκώτι. Ένας άλλος περιορισμός της αποτελεσματικότητάς του είναι η ανάπτυξη αντοχής πολυφαρμάκου από καρκινικά κύτταρα. Μερικά φλαβονοειδή εμφανίζουν αυξημένη κατά του όγκου αποτελέσματα με χημειοθεραπευτικούς παράγοντες, όπως quercetin [28]. Στις

in vitro

και του καρκίνου του μαστού ζωικά μοντέλα, quercetin βελτιώνει τον θεραπευτικό δείκτη του DOX σε καρκινικά κύτταρα μαστού παρεμβαίνοντας με το μεταβολισμό των κυττάρων, τη δραστηριότητα της GST, και κυτταροσκελετού. Αντίθετα, quercetin μειώνει DOX κυτταροτοξικότητα σε κύτταρα μαστικού μη οιδηματώδης [13] – [15]. Αν και η συν-θεραπεία του quercetin και DOX μπορούν να αναπτυχθούν σε ένα νέο χημειοθεραπευτικό συνδυασμός για τη θεραπεία του καρκίνου του μαστού, έστω και quercetin προκαλεί την ίδια επίδραση στην DOX σε άλλους τύπους καρκίνου, στα οποία DOX χρησιμοποιείται ως θεραπεία πρώτης γραμμής, όπως ο καρκίνος του ήπατος, παραμένει άγνωστη. Η παρούσα μελέτη διερεύνησε την αποτελεσματικότητα του quercetin με DOX σε καρκίνο του ήπατος κύτταρα και προστατευτική δράση έναντι της DOX επαγόμενη ηπατοτοξικότητα σε ποντικούς.

Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι το IC

50 για κερκετίνη σε διάφορους όγκους κυμαίνεται από 7 nM έως & gt? 100 μΜ. Σε αντίθεση με άλλους τύπους ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων, η κερκετίνη εμφανίζει αντι-πολλαπλασιαστικές και προ-αποπτωτικά αποτελέσματα σε χαμηλές συγκεντρώσεις [23], όπως 21 μΜ για ΜϋΑ-ΜΒ-468 ανθρώπινα κύτταρα καρκίνου του μαστού [24]. Αρκετές εκθέσεις και τα αποτελέσματα μας έδειξαν ότι τα ανθρώπινα κύτταρα ηπατώματος που θεωρούνται ανθεκτικοί στη quercetin, γιατί το IC

50 τιμή είναι & gt? 100 μΜ. Ανθρώπινα κύτταρα ηπατώματος είναι επίσης ανθεκτικά σε DOX (IC

50 τιμή & gt? 5 μΜ) και η μέγιστη συγκέντρωση ϋΟΧ στο ανθρώπινο πλάσμα είναι 5 μΜ. Τα αποτελέσματα μας αποκάλυψαν επίσης ότι η συν-θεραπεία του quercetin (20 μΜ) και DOX (1 μΜ) ενισχύει σημαντικά τις επιδράσεις κατά του όγκου του DOX σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του ήπατος. Τα καρκινικά κύτταρα εμφανίζουν αντοχή τους σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες με εκδίωξη των ενδοκυτταρικών αντικαρκινικά φάρμακα εκτός των κυττάρων μέσω της P-gp και άλλες αντλίες φαρμάκου. Quercetin μπορεί να αναστέλλει την δραστικότητα της αντλίας Ρ-gp εκροής δοσο-εξαρτώμενο τρόπο και επάγουν απόπτωση σε ανθεκτικό ανθρώπινη μυελοειδή λευχαιμία και κύτταρα καρκίνου του μαστού [29] – [31]? Έτσι, στην διευκόλυνση της ϋΟΧ-επαγόμενη απόπτωση ίσως το αποτέλεσμα της quercetin επαγόμενη αναστολή P-gp, που ακολουθείται από μια αύξηση του ενδοκυτταρικού DOX, και κατά συνέπεια αυξημένη απόπτωση [32]. Ωστόσο, χαμηλές δόσεις DOX μπορεί να αυξήσει ελαφρώς mRNA MDR1, αλλά όχι την έκφραση της πρωτεΐνης [33]. Για MRP1, καμία ανιχνεύσιμη mRNA MRP1 σε ϋΟΧ-επεξεργασμένα κύτταρα SMMC7721 βρέθηκε [34]. Με συνεστιακή μικροσκοπική τεχνολογίες, παρατηρήσαμε ότι η ενδοκυτταρική διανομή των DOX σε αυτά τα κύτταρα ηπατώματος δεν επηρεάστηκε από κερκετίνη (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Έτσι, η κερκετίνη πιθανό ενισχύει DOX-επαγόμενη απόπτωση, αλλά όχι μέσω της δράσης της για τη διατήρηση του φαρμάκου και εκροής. Απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για να καθοριστεί εάν ή όχι η κερκετίνη ευαισθητοποιεί DOX ανθεκτικά καρκίνο του ήπατος κύτταρα επηρεάζοντας την έκφραση του γονιδίου MDR-σχετίζονται

DOX-επαγόμενη απόπτωση συνδέεται με δύο διαφορετικές οδούς απόπτωσης:. η οδός υποδοχέα θάνατο με την ενεργοποίηση της κασπάσης -8 και η μιτοχονδριακή μονοπάτι με την ενεργοποίηση της κασπάσης-9 [35]. Το μιτοχονδριακό μονοπάτι είναι ο κύριος μηχανισμός του DOX επαγόμενη απόπτωση [36], στην οποία η κεντρική διαδικασία περιλαμβάνει την διαπερατότητα της εξωτερικής μιτοχονδριακής μεμβράνης με την επακόλουθη απελευθέρωση αρκετών προ-αποπτωτικών παραγόντων στο κυτοσόλιο [37]. Κυτόχρωμα

γ

, ένα από τα προ-αποπτωτικών παραγόντων, πρωτεΐνη προσαρμογέα κάρτας αΡΑΡ-1, και προ-κασπάσης-9 συγκεντρωθούν στο κυτταρόπλασμα για να σχηματίσουν το αποπτωσώματος. Προ-κασπάση-9 στη συνέχεια autoproteolytically επεξεργασία και πυροδοτεί την ενεργοποίηση των κασπασών τελεστή, οδηγώντας έτσι στην διάσπαση διαφόρων υποστρωμάτων. Βρήκαμε ότι η κερκετίνη αυξήθηκε σημαντικά DOX προκαλούμενη απώλεια του δυναμικού μιτοχονδριακής μεμβράνης, υποδεικνύοντας την αύξηση της μιτοχονδριακής βλάβης. Ουσιαστικά ενισχυμένη απελευθέρωση του κυτοχρώματος

γ

και διάσπαση της προ-κασπάσης-9 σημειώθηκαν, που οδηγεί στην αύξηση της κασπάσης-3 δραστικότητα και την υποβάθμιση PARP. Z-VAD-fmk μπλόκαρε την κερσετίνη-ενισχυμένη, ϋΟΧ-επαγόμενη απόπτωση, υποδηλώνοντας ότι η κερκετίνη ευαισθητοποιεί DOX επαγόμενη απόπτωση σε καρκινικά κύτταρα του ήπατος, κυρίως μέσω της μιτοχονδριακής οδού.

Πολυάριθμες εκθέσεις έδειξαν ότι ρ53 καταστολέα όγκου πρωτεΐνη ρυθμίζει μιτοχόνδρια -κατευθυνόμενης απόπτωση [38]. p53, ως παράγοντα μεταγραφής, μπορούν να διεγείρουν την έκφραση των προ-αποπτωτικών γονιδίων στόχων, όπως Puma, Bax, και Bid [39].