Αφηρημένο

από του στόματος χορήγηση των καρκινικών κυττάρων προκαλεί μια ανοσολογική υπο-ανταπόκριση γνωστό ως στοματική ανοχή. Έχουμε δείξει προηγουμένως ότι από του στόματος ανοχή σε ένα καρκίνου είναι αντιγόνο όγκου ειδικό, μη-εγκάρσια-αντιδρώντα και προσδίδει ένα πλεονέκτημα ανάπτυξης του όγκου. Διερευνήθηκε η χρησιμοποίηση των ρυθμιστικών Τ κυττάρων (Treg) εξάντληση από του στόματος ανοχή σε ένα καρκίνο και την ικανότητά του να ελέγχει την ανάπτυξη του όγκου. Balb /C ποντικοί ήταν καθετηριασμό τροφοδοτείται ομογενοποιημένο ιστό όγκου – JBS ινοσαρκώματος (για να επάγει στόματος ανοχής σε καρκίνο), ή PBS ως μάρτυρα. μετρήθηκαν ανάπτυξη υποδόριων όγκων JBS? σπληνός ιστού αποκόπηκαν και κυτταρομετρία ροής που χρησιμοποιούνται για την ποσοτικοποίηση και σύγκριση συστημική Tregs και των πληθυσμών των Τ κυττάρων τελεστή (Teff). Πριν ή /και μετά από τη διατροφή του όγκου, οι ποντικοί ενδοπεριτοναϊκώς αντι-CD25, να αδρανοποιήσει συστημική Tregs, ή δεδομένο αντίσωμα ισότυπου ως έλεγχο. Οι ποντικοί που είχαν προφορικά ανέπτυξε ανοχή πριν την επαγωγή υποδόριου όγκου, εμφανίζεται σημαντικά υψηλότερα συστηματικά επίπεδα Treg (14% έναντι 6%) και ταχύτερους ρυθμούς ανάπτυξης των όγκων από τους ελέγχους (ρ & lt? 0,05). Πλήρης υποχώρηση των όγκων παρατηρήθηκαν μόνο μετά Treg αδρανοποίηση και εμφανίστηκαν σε όλες τις ομάδες – αυτό δεν ανεστάλη με σίτιση του όγκου. Τα ποσοστά ίασης για Treg αδρανοποίηση ήταν 60% κατά τη διάρκεια της ανεκτικότητας, το 75% κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του όγκου και 100% κατά τη διάρκεια της απενεργοποίησης τόσο για ανεκτικότητα και την ανάπτυξη του όγκου. Εξάντληση των Tregs οδήγησε σε αύξηση του αριθμού των κυττάρων Teff. εξάντληση Treg μετά την αποευαισθητοποίηση και μετά την πρόκληση με όγκο οδήγησε στην πλήρη υποχώρηση όλων των όγκων σε ποντίκια που φέρουν όγκο. Η στοματική χορήγηση του ιστού του όγκου, παρέχει πλεονέκτημα ανάπτυξης του όγκου και συνοδεύεται από αύξηση των συστηματικών επιπέδων Treg. Η χορήγηση των αντι-CD25 Ab μείωση του αριθμού Treg και προκάλεσε αύξηση των Teffs. Πιο συγκεκριμένα η αναστολή των κυττάρων Treg υπερνίκησε εγκατεστημένος στοματική ανοχή με επακόλουθη υποχώρηση του όγκου, ιδιαίτερα για την εμπρόσθιο έντερο καρκίνους όπου στοματική ανοχή είναι πιθανόν να προκαλείται από την αποβολή του καρκινικού ιστού μέσα στο έντερο

Παράθεση:. Whelan MC, Casey G , Larkin JO, Guinn Ba, O’Sullivan GC, Tangney Μ (2014) Προφορική Ανοχή σε καρκίνο μπορεί να καταργηθεί από την T Ρυθμιστική Αναστολή κυττάρων. PLoS ONE 9 (5): e97602. doi: 10.1371 /journal.pone.0097602

Επιμέλεια: Valli De Re, Centro di Riferimento Oncologico, IRCCS Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου, Ιταλία

Ελήφθη: 14 Νοεμ 2013? Αποδεκτές: 22 του Απρίλη 2014? Δημοσιεύθηκε: May 15, 2014

Copyright: © 2014 Whelan et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο χρηματοδοτήθηκε μέσω μια ερευνητική επιχορήγηση για GOS και ΜΤ από Cancer Research Ιρλανδία (CRI06OSUG). MW χρηματοδοτήθηκε από μια υποτροφία από το Royal College of Surgeons του Εδιμβούργου και το Βασιλικό Κολέγιο Χειρουργών της Ιρλανδίας. Οι συγγραφείς αναγνωρίζουν επίσης την υποστήριξη από το Κορκ Κέντρο Ερευνών Καρκίνου. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ακόμα και επιτρέποντας για συγκρίσιμες όγκου στάδια, το πρόγνωση για τους ασθενείς που πάσχουν από οισοφάγου και του γαστρικού καρκίνου παραμένει σταθερά και σημαντικά φτωχότεροι από ό, τι για τους ασθενείς με περιφερική καρκίνους του γαστρεντερικού σωλήνα, παρά τις προόδους στις διαγνωστικές, χειρουργικές και επικουρική θεραπεία [1], [ ,,,0],2]. Ανάμεσα στις πολλές μεταβλητές που καθορίζουν τους ρυθμούς ανάπτυξης του όγκου και οι προβλέψεις, οι διαφορές στον όγκο ανοσολογική απόκριση είναι πιθανόν να υπάρχουν μεταξύ εμπρόσθιου εντέρου και άλλων μορφών καρκίνου. Η επεξεργασία των διατροφικών αντιγόνων (ΕΕΑ) από το ανοσοποιητικό σύστημα του βλεννογόνου του γαστρεντερικού σωλήνα οδηγεί σε μια συστημική Ag ειδική ανοσολογική υπο-αποκρισιμότητα ονομάζονται στοματική ανοχή [3]. Είναι πιθανό ότι ο όγκος Ags προέρχονται από ιστό όγκου ρίξει μέσα στο έντερο με εμπρόσθιο έντερο των καρκίνων θα υποβληθούν σε επεξεργασία από τις συνδεδεμένες έντερο λεμφοειδείς ιστούς (GALT), βρέθηκε κυρίως στο εγγύς γαστρεντερική οδό, με έναν τρόπο που θυμίζει Ags προσλαμβάνεται από το ανοσοποιητικό σύστημα του βλεννογόνου , δημιουργώντας έτσι ένα όγκο Αγ ειδική ανοσολογική ανοχή. Αναφέραμε προηγουμένως ότι από του στόματος χορηγούμενη φρέσκο ​​ιστό του όγκου που προκαλείται από έναν όγκο Ag ειδικό μη-εγκάρσια-αντιδρώντα ανοσολογικής ανοχής με επακόλουθο πλεονέκτημα ανάπτυξης για τον καρκίνο [4].

Ο μηχανισμός της ανοχής σε βρώσιμες Ags μπορεί να αποδοθεί σε είτε δραστική καταστολή ή η επαγωγή της κλωνικής διαγραφής /ανέργεια [5]. Τ κύτταρα κλωνοποιούνται από ανεκτικά ποντίκια έχουν αποδοθεί σε ένα μοναδικό υποσύνολο του CD4

+ πληθυσμό, το κύτταρο Th3 [6]. Σε Τ κυτταρικό υποδοχέα (TCR) διαγονιδιακών ποντικών, υπήρξε μια αύξηση στον αριθμό των CD4

+ CD25

+ κύτταρα ως απάντηση στην από του στόματος χορήγηση Αγ. Αυτά τα Tregs βρέθηκαν να εκφράζουν CTLA-4 και foxp3 και να έχουν μια λειτουργία κατασταλτική

in vitro

. CD4

+ CD25

+ foxp3

+ Tregs παίζουν ρόλο στην πρόληψη της ανάπτυξης της αυτοάνοσης νόσου και έχουν διπλή ιδιότητα και ως ανενεργά και κατασταλτικά κύτταρα. Σημαντικά, έχει δειχθεί ότι η απομάκρυνση αυτού του πληθυσμού μπορεί να επάγουν αντι-καρκινική δραστηριότητα του ανοσοποιητικού [7] – [10]. Σε πειραματικά συστήματα, καθώς οι όγκοι αναπτύσσονται, υπάρχει μια αριθμητική αύξηση Tregs στο ανοσοποιητικό διηθήματος με επακόλουθη τοπική καταστολή των κατά του όγκου ανοσοαποκρίσεων. Αντίσωμα (Ab) που προκαλείται αφαίρεση αυτών των Tregs μπορεί αποκαλύπτει φυσικό ογκοάνοση αντιδραστικότητα και η στρατηγική αυτή έχει αποδειχθεί ότι ενισχύουν την ανοσοθεραπευτική καταστροφή των πειραματικών καρκίνων [10] – [12].

Ερευνήσαμε τα αποτελέσματα της από του στόματος ανοχή στον όγκο JBS στους ρυθμούς αύξησης του όγκου και το μέγεθος των υποπληθυσμών λεμφοκυττάρων σε ποντίκια Balb /C. Συγκεκριμένα εξετάσαμε αν η επαγωγή από του στόματος ανοχής σε όγκους ήταν Treg-εξαρτώμενη – και αν Treg αδρανοποίηση θα μπορούσε να καταργήσει στόματος ανοχής και αναστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου

Υλικά και Μέθοδοι

Cell Tissue Culture

.

Το ινοσάρκωμα ποντικού JBS [13] αναπτύχθηκε σε φιάλες καλλιέργειας ιστών στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2, σε ϋΜΕΜ (Dulbecco που Minimal Essential Medium -Sigma-Aldrich, Δουβλίνο, Ιρλανδία). Τα μέσα καλλιέργειας ιστού συμπληρωμένο με 10% ορό μόσχου δότη συμπληρωμένου με σίδηρο, 50 μg /ml γενταμυκίνη, 300 μg /ml ί-γλουταμίνη και 10 mM HEPES (1-πιπεραζινοαιθανο σουλφονικό οξύ, 4- (2-υδροξυαιθυλ) μονονάτριο άλας ), ρΗ 7.4. Τυποποιημένες διαδικασίες για την θρυψινοποίηση, φυγοκέντρηση και επαναιώρηση των κυττάρων χρησιμοποιήθηκαν [13]. Βιώσιμων κυττάρων διεξήχθησαν με τη χρήση Trypan μπλε χρωστικής αποκλεισμού (Sigma, Ιρλανδία).

Ηθική Δήλωση

Όλα τα πειράματα ποντικού εγκρίθηκαν από την επιτροπή δεοντολογίας των ζώων του Πανεπιστημίου Cork College (Aerr # 2010 /003). Η μελέτη διεξήχθη σε αυστηρά σύμφωνα με τις συστάσεις που προβλέπονται από το ιρλανδικό Υπουργείο Παιδιών και την υγεία.

όγκου επαγωγή

Ποντίκια αποκτήθηκαν από Harlan Laboratories (Oxfordshire, Αγγλία). Είχαν διατηρείται σε σταθερή θερμοκρασία δωματίου (22 ° C) με ένα κύκλο φωτός φυσικό ημέρας /νύχτας σε ένα συμβατικό αποικία των ζώων. Συνήθης εργαστηριακός τροφή και νερό δόθηκαν

κατά βούληση

. Πριν από τα πειράματα, οι ποντικοί απέδωσε περίοδο προσαρμογής 14 ημερών. Balb /C ποντικούς και των δύο φύλων και αθυμικούς αρσενικό Balb /C HsdOla: MF1-ηυ σε καλή κατάσταση, βάρους 16-22 g κατά ηλικίας 6-8 εβδομάδων, συμπεριλήφθηκαν στα πειράματα. Για την επαγωγή όγκου JBS, 2 × 10

6 καρκινικά κύτταρα, εναιωρήθηκαν σε 200 μΙ ϋΜΕΜ, εγχύθηκαν υποδορίως στο πλευρό των ποντικών. Με αυτόν τον όγκο εμβολίου και η τοποθεσία ήταν λίγο σημείο της παρακέντησης εξαγγείωση του κυτταρικού εναιωρήματος και η ανάπτυξη και το σχήμα του όγκου ήταν συνεπής.

Υπερσιτισιιού Διατροφή

Μετά την υποδόρια εμβολιασμό των 2 × 10

6 JBS καρκινικά κύτταρα σε ποντικούς Balb /C, οι όγκοι αναπτύσσονται και αφέθηκαν να επιτύχουν ένα μέγεθος 1-2 cm

3, στο οποίο στάδιο τα ζώα θυσιάστηκαν και οι όγκοι τους αφαιρέθηκαν. Οι όγκοι ομογενοποιήθηκαν σε ρυθμιστικό αλατούχο διάλυμα φωσφορικών (PBS) (Sigma, Ιρλανδία) χρησιμοποιώντας έναν ομογενοποιητή FastPrep FP120 (Thermo Electron Corp., Αγγλία). Το ομογενοποίημα εκπλύθηκε εκτεταμένα με φυγοκέντριση με PBS για την απομάκρυνση υπολειμμάτων. Όταν το υπερκείμενο ήταν μακροσκοπικά σαφές το ομογενοποίημα επαναιωρήθηκε σε PBS σε μια τελική συγκέντρωση 0,2 g (υγρό βάρος) ανά ml. Αυτό δειγματίστηκε και κατεψυγμένα μέχρι τη χρήση. Ο έλεγχος PBS ήταν επίσης σε κλάσματα και καταψύχθηκαν. Χρησιμοποιώντας ένα 18 Fr-χάλυβα-ball-άκρου βελόνας τροφοδοσίας συνδέεται με μία σύριγγα του 1 ml, un-αναισθητοποιημένα ζώα ήταν καθετηριασμό τρέφονται 200 ​​μΙ προσφάτως αποψυγμένα ομογενοποιήματος JBS όγκου (40 mg όγκου) ή PBS. Τα ζώα τρέφονταν καθημερινά για 14 ημέρες. Η ποσότητα της τροφής και η διάρκεια της σίτισης αντιστοιχούσαν σε αυτά που χρησιμοποιούνται σε προηγούμενα δημοσιευμένες μελέτες από την ομάδα μας και βασίστηκαν σε μια ανασκόπηση της βιβλιογραφίας, ιδίως όσον αφορά τις μελέτες που εξετάστηκαν ανοχή σε κυτταρικό Ags [4], [14] – [17] . Την ημέρα 15, τα ζώα έλαβαν μια υποδόρια εμβολιασμό κυττάρων όγκου (2 × 10

6 κύτταρα) και παρακολουθήθηκαν για ανάπτυξη όγκου καθημερινά.

όγκου

Παρακολούθηση

Οι όγκοι μετρήθηκαν κάθε 48 ώρες χρησιμοποιώντας ένα ψηφιακό παχύμετρο. Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε με τον κανονικό τύπο

ν

=

ab

2π /6 και την ανάπτυξη του όγκου καμπύλες κατασκευάστηκαν. Οι ποντικοί ανώδυνα ευθανασία σε περιπτώσεις όπου ο όγκος έφθασε 1,5 cm

3 σε διάμετρο. Στο πρώτο πείραμα, τα ποντίκια τρέφονταν όγκου Ag ή PBS, και οι καμπύλες ανάπτυξης και επιβίωσης παρασκευάστηκαν. Στο δεύτερο πείραμα, η συστηματική Tregs είτε μόνιμα αδρανοποιηθεί (αναφέρεται ως εξαντλημένο) με τη χρήση αντι-CD25 Ab (κλώνος PC61- Bio-Express, New Hampshire, USA), απεμπλουτισμένο προσωρινά κατά τη διάρκεια της σίτισης μόνο ή όχι εξαντληθεί. Στο τελικό πείραμα οι ποντικοί τράφηκαν για 14 ημέρες και στη συνέχεια τυχαιοποιήθηκαν για να λάβουν αντι-CD25 Ab ή ένα στοιχείο ελέγχου Ab συζευγμένο με αντι-υπεροξειδάση αγριοραπανίδος (HPRN), Bio-Express, USA να παρακολουθεί την επίδραση στην ανάπτυξη sc όγκου.

Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής

ACK ερυθροκυττάρων ρυθμιστικού λύσης (0.15 Μ ΝΗ

4Cl, 10 mM KHCO

3, 0,1 mM Na

2EDTA, ρΗ 7,4 με HCI) παρασκευάσθηκε χρησιμοποιώντας αντιδραστήρια αγοράστηκαν από την Sigma-Aldrich, Ιρλανδία. Το διάλυμα αποστειρώθηκε με διήθηση μέσω φίλτρου 0,2 μm και φυλάχθηκε στους 4 ° C. ρυθμιστικό χρώσης FACS παρασκευάστηκε από ρυθμισμένο με φωσφορικό αλατούχο Dulbecco (Dulbecco που PBS) αγοράστηκε από την Sigma, μαζί με αλβουμίνη βόειου ορού (BSA), αζίδιο του νατρίου και ορό εμβρύου μόσχου. Οι σπλήνες και ιστού του όγκου απομακρύνθηκαν και κιμά χωριστά επί 70 μm σουρωτήρι νάιλον κυττάρων (BD Biosciences, UK). Αυτά τα κυτταρικά εναιωρήματα συλλέχθηκαν, πλύθηκαν σε μέσο καλλιέργειας, ιζηματοποιήθηκαν σε 300 g για 10 λεπτά στους 4 ° C και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ACK ερυθροκυττάρων ρυθμιστικό λύσης για 3 λεπτά μετά το οποίο πλύθηκαν δύο φορές και επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα χρώσης FACS. Αριθμοί των βιώσιμων κυττάρων προσδιορίστηκαν με μια πρότυπη δοκιμή αποκλεισμό trypan blue. Τα κύτταρα στη συνέχεια αραιώθηκαν σε μια συγκέντρωση των περίπου 2-4 × 10

6 ανά ml και χρώση 100 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος προστέθηκαν ανά σωληνάριο Falcon (Becton Dickinson). κυτταρικά εναιωρήματα και τα αντιδραστήρια διατηρήθηκαν στους 4 ° C κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας.

Cell Surface Marker Ανάλυση

Φυκοερυθρίνη-Cy5 (PE-Cy5) συζευγμένα αντισώματα έναντι CD25 ποντικού και CD3, ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC) συζευγμένο αντισώματα έναντι ποντικού CD25, CD3, CD4 και CD8 και το κιτ χρώσης foxp3 αντι-ποντικού ΡΕ αγοράστηκαν από eBioscience, Insight Biotechnology, Αγγλία. ΡΕ αντι ποντικού CD4 και CD3 αγοράστηκαν από Serotec, Oxford, England. Συζευγμένο με ένα φθοριόχρωμα ελέγχους χρώση ισοτύπου (FITC-IgG, ΡΕ-IgG2a και ΡΕ-Cy5 IgG ισότυπου ελέγχου) αγοράστηκαν από eBioscience. Μη συζευγμένο CD16 αντι-ποντικού /CD32 (Fcy III /II) μονοκλωνικό Ab (Fc αποκλεισμού Ab υποδοχέα) αγοράστηκε από την Serotec.

Για να ελαχιστοποιηθεί η μη ειδική Ab πρόσδεσης, αντι-CD16 /CD32 Fc υποδοχέα μπλοκαρίσματος Ab αραιώθηκε σε 0.01 μα /μΙ σε ρυθμιστικό διάλυμα χρώσης, 20 μΙ ανά φρεάτιο και επωάστηκαν στους 4 ° C για 20 λεπτά. Συζευγμένο με ένα φθοριόχρωμα αντισώματα προς δείκτες επιφάνειας κυττάρου επίσης αραιωμένο σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή και προστέθηκαν σε κάθε δείγμα χωρίς την απομάκρυνση του Ρο-αποκλεισμού Ab. Τα κύτταρα επωάστηκαν στο σκοτάδι στους 4 ° C για 45 λεπτά, στη συνέχεια πλύθηκαν δύο φορές σε 250 μΐ ρυθμιστικού διαλύματος χρώσης πριν την επαναιώρηση σε 500 μΙ ρυθμιστικού διαλύματος χρώσης για άμεση ανάλυση ή ένα στερεωτικό διάλυμα 0.5% παραφορμαλδεϋδη σε PBS του Dulbecco. Η ανάλυση πραγματοποιείται εντός 48 ωρών χρησιμοποιώντας ένα FACScaliber κυτταρόμετρο ροής (Becton Dickinson, Οξφόρδη, Ηνωμένο Βασίλειο) και αναλύθηκαν από το συνοδευτικό CELLQuest (BD Biosciences) του προγράμματος λογισμικού του υπολογιστή.

In Vivo

Ab Διοίκησης

Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως, αντι-CD25 Ab (PC61) και ελέγχου (αρουραίος ελέγχου ισότυπου IgG-HRPN) Ab χορηγήθηκαν ενδο-peritonealy σε δόση 1 mg /kg σε έναν συνολικό όγκο 200 υΐ PBS . Ο χρονισμός των δόσεων εξαρτάται από την πειραματικό πρωτόκολλο αλλά όταν δύο δόσεις ήταν να χορηγηθούν είχαν τέσσερις δεδομένες ημέρες διαφορά (Εικ. 1). Αυτό είχε ως αποτέλεσμα πάνω από 95% απενεργοποίηση του Tregs όπως προσδιορίζεται με κυτταρομετρία ροής.

Αρχικά πειράματα που εμπλέκονται ποντικούς οι οποίοι είχαν εξαντληθεί από Tregs για τη διάρκεια του πειράματος και αναφέρονταν ως μονίμως εξαντληθεί. Για πειράματα που περιλαμβάνουν εξάντληση κατά τη διάρκεια της ανεκτικότητας, εξάντληση Treg συνέβη μόνο κατά τη διάρκεια της σίτισης του όγκου και όχι όταν προκλήθηκαν όγκοι. Το τελικό πρωτόκολλο (εξάντληση μετά ανεκτικότητας) απαιτήθηκε από του στόματος ανοχής που θα καθοριστούν πριν από την εξάντληση Treg.

Η

Στατιστική Ανάλυση

Οι διαφορές μεταξύ των επιμέρους ομάδων εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας τα δύο-ουρά του Student

t-test

για ζεύγη τιμών. Διαφορές με

σ

τιμή μικρότερη από 0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές.

Αποτελέσματα

Στοματική χορήγηση του όγκου ιστών παρέχει όγκου Ειδικές Ανάπτυξης Advantage

Έχουμε προηγουμένως δείξει ότι υποδόριων όγκων έχουν ένα ταχύτερο ρυθμό ανάπτυξης σε ποντίκια που ταΐστηκαν όγκου πριν από την επαγωγή του όγκου, σε σύγκριση με τα ποντίκια που τρέφονταν είτε PBS ή εναλλακτική όγκου (CarB ή CT26) [4], [13]. Έχουμε αποδείξει επίσης ότι η καμπύλη ανάπτυξης όγκου σε ποντικούς Balb /C προσεγγίζει την καμπύλη ανάπτυξης του υποδόριου όγκου σε αθυμικά γυμνά ποντίκια, τα οποία στερούνται λειτουργικής Τ κύτταρα και αυτά τα ποντίκια χρησιμοποιήθηκαν ως μία ανοσολογική αναρμόδιος ελέγχου [13]. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιώντας το ίδιο πρωτόκολλο σίτιση, μπορούμε επικυρωθεί ότι καρκινικά σίτιση καθεστώς μας οδήγησε σε μια συνεπή και σημαντικά αυξημένο ρυθμό ανάπτυξης υποδόριου όγκου σε ποντικούς Balb /C έναντι ομάδων ελέγχου. Υποδόρια όγκων στις ομάδες τρέφονται JBS όγκου εμφανίστηκε νωρίτερα (ημέρα 5 έναντι ημέρας 6/7) και μεγάλωσε σημαντικά ταχύτερη (ρ & lt? 0,05) (Εικ. 2) σε διάφορα χρονικά σημεία

καμπύλες ανάπτυξης για όγκους JBS. σε ποντικούς μετά σίτιση καθετήρα στομάχου επί 14 διαδοχικές ημέρες με ομογενοποίημα όγκου JBS ή με PBS. JBS όγκοι αυξήθηκαν σημαντικά ταχύτερα σε ποντίκια από το στόμα ανεκτικά με JBS. Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει το μέσο όγκο του όγκου μιας ομάδας έξι ποντίκια. Η διαφορά ήταν στατιστικά σημαντική (ρ & lt? 0,05) στις ημέρες 8, 9, 12 & amp? 14 όπως υποδεικνύεται από έναν αστερίσκο στο γράφημα.

Η

Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των λεμφοκυττάρων σε απόκριση προς κατάποση όγκου

Μετά από 14 ημέρες από του στόματος χορήγηση όγκου ή PBS, σπληνός πληθυσμούς λεμφοκυττάρων αναλύθηκαν . Υπήρξε μια σημαντική αύξηση σε CD4

+ CD25

+ κύτταρα (ρ & lt? 0.022) μετά τη χορήγηση του όγκου έναντι PBS. Επιπλέον, υπήρξε μια σημαντική αύξηση που παρατηρήθηκε το CD25

+ /

foxp3

+ έκφρασης μετά περίφραξη στον CD3

+ CD4

+ πληθυσμό λεμφοκυττάρων (ρ & lt? 0.019) (Εικ . 3). Δεν υπήρξε σημαντική αύξηση του συνολικού αριθμού των CD3

+ CD4

+ ή CD3

+ CD25

+ κύτταρα. Ούτε ήταν κάποια σημαντική αύξηση των CD8

+ CD25

+ Teff πληθυσμούς υπο-ομάδα μετά από το πρόγραμμα σίτισης του όγκου εκεί. Δεν υπήρχε παρατηρήσιμη διαφορά στον αριθμό ή αναλογία των πληθυσμών των λεμφοκυττάρων μεταξύ των ποντικών που ταΐστηκαν PBS και εκείνων που δεν καθετηριασμό τρέφονται κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

(α) Dot οικόπεδα δείχνουν τον αριθμό των Tregs του περιφερικού αίματος σε PBS (I-IV) ή JBS (V-, viii) τρέφονται ποντίκια. Tregs σημάνθηκαν σύμφωνα με CD3, CD4, CD25 και

foxp3

αντισώματα συζευγμένα με φθοροχρώματα και τους ελέγχους ισοτύπου και αναλύθηκαν σε κυτταρόμετρο ροής. Τα κύτταρα περίφραξη σε CD3

+ και CD4

+ (II και VI) και οι έλεγχοι ισοτόπου (i και v) και στη συνέχεια οικόπεδα dot αποκτήθηκαν μέσω αυτής της πύλης για CD25

+ και

foxp3

+ κύτταρα (iv και viii) και ισότυπου ελέγχου (iii και vii). Υπήρξε μια σημαντική αύξηση σε CD4

+ CD25

+ κύτταρα (ρ & lt? 0.022) μετά τη χορήγηση του όγκου έναντι PBS. Επιπλέον, υπήρξε μια σημαντική αύξηση που παρατηρήθηκε το CD25

+ /

foxp3

+ έκφρασης μετά περίφραξη στον CD3

+ CD4

+ πληθυσμό λεμφοκυττάρων (ρ & lt? 0.019). (Β) Διάγραμμα που αντιπροσωπεύουν τις μέσες ποσοστιαίες τιμές των αριθμών Treg μείον τους ελέγχους ισοτύπου εντός του συνολικού πληθυσμού περιφερικών λεμφοκυττάρων από JBS ή PBS τρέφονται ποντίκια. Υπήρξε σημαντικά πιο Tregs στις σπλήνες ποντικών που είχαν τραφεί ομογενοποιημένο όγκου για 14 ημέρες από εκείνες που τρέφονται μόνο PBS (ρ & lt? 0,002? η = 6)

Η

Αυξημένη όγκου Ρυθμός Ανάπτυξης σχετίζεται με το. δραστηριότητα των Tregs

Έχουμε δείξει στο παρελθόν ότι το πρωτόκολλο μας χορήγηση αντι-CD25 Ab διευκολύνει το 90% αδρανοποίηση του CD25

+ κυττάρων σε περίοδο 14 [8] ημέρες. Τα ποντίκια τυχαιοποιήθηκαν να λάβουν είτε αντι-CD25 Ab κατά την έναρξη του προγράμματος σίτισης 14-ημερών, και πάλι στο τέλος της σίτισης (που αναφέρεται ως μόνιμη εξάντληση) ή Ab κατά το χρόνο από την έναρξη σίτισης μόνο (που αναφέρεται ως εξάντληση κατά τη διάρκεια της ανεκτικότητος) ή ελέγχου Ab, ή χωρίς Ab (Εικ. 1).

Οι προκύπτουσες καμπύλες ανάπτυξης υποδόριου όγκου έδειξε ότι η προηγουμένως παρατηρηθείσα πλεονέκτημα ανάπτυξης όγκου μετά σίτιση απουσίαζε στα ποντίκια που υποβάλλονται σε την εξάντληση κατά το πρόγραμμα ανεκτικότητος, με χρόνος για την εμφάνιση του όγκου και του ρυθμού ανάπτυξης όγκου παρόμοια με PBS-τρέφονται τα ποντίκια, υποδεικνύοντας την απαίτηση για Tregs κατά τη στιγμή της τροφοδοσίας του όγκου για την επαγωγή εκ του στόματος ανοχής (Εικ. 4α). Όπως φαίνεται στο Σχ. 4β, οι όγκοι σε ποντικούς που λαμβάνουν αντι-CD25 Ab τελικά υποχώρησαν πλήρως, τόσο στην εξάντληση κατά τη διάρκεια της ανεκτικότητας και μόνιμες ομάδες εξάντληση. Εμείς, και άλλοι, έχουν αναφερθεί στο παρελθόν τη διαπίστωση ότι τα αντι-CD25 χορήγηση πριν την επαγωγή του όγκου επάγει πλήρη υποχώρηση του όγκου [8].

(α) Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των ρυθμών ανάπτυξης του όγκου μεταξύ ποντίκια που τρέφονταν όγκου ( προσωρινά ή μόνιμα) και τα ποντίκια ελέγχου. Οι ποντικοί που δεν έλαβαν εξάντληση αντι-CD25 Ab έδειξαν σημαντικά διαφορετικούς ρυθμούς ανάπτυξης του όγκου κατά τις ημέρες 14, 18 και 22, ανάλογα με το αν είχαν τραφεί όγκου και φυσιολογικό ορό (Ρ & lt? 0,05). Κάθε σημείο δεδομένων αντιπροσωπεύει μέσες τιμές του όγκου για 10 ποντικούς. (Β) καμπύλη επιβίωσης για ποντίκια που ήταν μόνιμα, προσωρινά ή όχι εξαντλούνται κατά τη διάρκεια της επαγωγής της από του στόματος ανοχής. Τα ποντίκια που είχαν μονίμως εξαντληθεί ήταν 100% θεραπευτεί από υποδόριο όγκο τους και παρέμειναν ελεύθερα στις 100 ημέρες της νόσου. 75% των ατόμων που είχαν προσωρινά εξαντληθεί, ενώ τρέφονται όγκου θεραπευτεί, ενώ το 66% εκείνων που είχαν προσωρινά εξαντληθεί και τροφοδοτείται PBS θεραπευτεί. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ αυτών των ομάδων. Όλα αυτά τα ποντίκια που έλαβαν τον έλεγχο ισοτόπου Ab υπέκυψε στο φορτίο του όγκου (n = 10).

Η

Αλλαγές στην λεμφοκυττάρων Υπο-πληθυσμοί Παρατηρήθηκε σε απάντηση στην εξάντληση των Tregs είτε μόνιμα είτε Κατά τη διάρκεια της ανεκτικότητας

Σε διάφορα χρονικά σημεία, τα ποντίκια από κάθε ομάδα θυσιάστηκαν και οι σπλήνες τους αναλύονται για συστηματική CD4

+ CD25

+ Treg και CD8

+ CD25

+ αριθμούς Teff. Όγκου σίτιση αυξήθηκαν σημαντικά συστημικά αριθμούς Treg έναντι PBS τρέφονται ομάδες, και αυτή η διαφορά παρατηρήθηκε επίσης σε αντι CD25-Ab ποντίκια στα οποία χορηγήθηκε (Σχήμα 5α). (Ρ & lt? 0,01). Αν και υπήρχαν σημαντικά χαμηλότερους αριθμούς των Tregs σε PBS που τρέφονται ομάδες που έλαβαν αντι-CD25 Ab από αυτούς που έλαβαν ελέγχου Ab (Σχήμα 5β.) (Ρ & lt? 0,05), αναπάντεχα, μια μείωση της συνολικής αριθμούς Treg δεν βρέθηκε σε αντι- CD25 Ab, οι ποντικοί με όγκους τρέφονται.

(α) τα κύτταρα χρωματίστηκαν για CD3, CD4 και CD25. Τα κύτταρα αρχικά με περίφραξη σε CD3 και εν συνεχεία στην CD4

+ CD25

+. Σπληνικά Tregs αναλύθηκαν από ποντικούς οι οποίοι είχαν υποβληθεί σε αγωγή με αντίσωμα (i) έλεγχος ισοτύπου ακολουθούμενο από σίτιση PBS? (Ii) προσωρινά εξαντληθεί με αντι-CD25 αντίσωμα, αλλά PBS Fed (iii) μονίμως εξαντληθεί με αντι-CD25 αντίσωμα και PBS τροφοδοτείται? (Iv) κατεργασία αντίσωμα ισοτυπικού ελέγχου και του όγκου τροφοδοτείται, (v) προσωρινά εξαντλημένο με αντι-CD25, αλλά όγκου τροφοδοτείται ή (vi) μονίμως εξαντληθεί και όγκου τρέφονται. Αντιπροσωπευτικά διαγράμματα σημείων από τις σχετικές ομάδες φαίνεται, τρία ποντίκια από κάθε ομάδα θεραπείας αναλύθηκαν? (Β) γραφική παράσταση που αντιπροσωπεύει τις μέσες δεδομένα από τα διαγράμματα στιγμών στο (α). Υπάρχει μια σημαντική διαφορά μεταξύ αυτών των ποντικών που είχαν τραφεί όγκου ή PBS τρέφονται και μονίμως εξαντληθεί με αντι-CD25 (ρ & lt? 0,01), εξάντληση κατά τη διάρκεια της ανεκτικότητας ενώ PBS ή JBS Fed (ρ & lt? 0.001), τον έλεγχο Ab, όγκου τροφοδοτείται έναντι του ελέγχου Ab , PBS τροφοδοτείται (p & lt? 0,01). Υπήρξε σημαντική διαφορά ανάμεσα σε αυτές τα ποντίκια που υποβλήθηκαν σε αγωγή με έλεγχο Ab ή PBS Fed και εκείνων που υποβλήθηκαν σε αγωγή με αντι-CD25 Ab ανά πάσα στιγμή και PBS Fed, (ρ & lt? 0,05). Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην Tregs μεταξύ οποιωνδήποτε από εκείνα τα ποντίκια που ταΐστηκαν όγκου μεταξύ των ομάδων θεραπείας.

Η

Επίσης εξετάσαμε την επίδραση της στοματικής ανοχής και αντι-CD25 Ab επί της συστημικής ενεργοποιημένος πληθυσμός λεμφοκυττάρων τελεστή , δηλαδή η CD8

+ CD25

+ κύτταρα. Υπήρξε μια αύξηση στον αριθμό των κυττάρων που είχαν Teff μονίμως εξαντληθεί και τρέφονται όγκου σε σύγκριση με όλες τις άλλες ομάδες (Σχ. 6) και αυτή η τιμή πλησίαζε σημασία.

(α) σπλήνες από ποντίκια σε κάθε ομάδα θεραπείας βάφτηκαν για τον προσδιορισμό CD3

+ /CD8

+ και CD3

+ /CD25

+ αριθμούς. Οι ομάδες ήταν ως εξής (i) του όγκου τροφοδοτείται αλλά καμία μείωση αντίσωμα? (Ii) PBS τροφοδοτείται και δεν εξάντληση αντισώματος? (Iii) PBS τρέφονται και αντι-CD25 αγωγή και (iv) του όγκου τροφοδοτείται, αντι-CD25 θεραπεία. CD8

+ και CD25

+ εξετάστηκαν μέσα από το CD3

+ πληθυσμού. Κάθε πείραμα διεξήχθη εις τριπλούν? (Β) Διάγραμμα που εκπροσωπούν τις αλλαγές στους αριθμούς Teff παρακάτω διατροφή όγκου και εξαντλήσεις Ab. Αθροιστικά δεδομένα από οικόπεδα dot εκπροσωπούνται στο (α) (n = 3).

Η

Διατροφή αντι-CD25 Ab θεραπεία μετά όγκου ξεπερνά τα Induced Στοματική Ανοχή

Για να προσδιορίσετε αν αντι- θεραπεία CD25 Ab μπορεί να ακυρώσει μια καθιερωμένη πλεονέκτημα ανάπτυξης όγκου, οι ποντικοί που είχαν ολοκληρώσει την προφορική πρόγραμμα σίτισης όγκου χωρίστηκαν τυχαία σε ομάδες για να λάβουν αντι-CD25 Ab έναντι του ελέγχου Ab ή καθόλου Ab (PBS μόνο). Η χορήγηση του αντι-CD25 Ab αμέσως μετά τη διατροφή του όγκου, απομακρύνθηκε το προηγουμένως παρατηρηθεί πλεονέκτημα ανάπτυξης όγκου (Σχ. 7α). Αυτό βρέθηκε να είναι σημαντική σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες (p & lt? 0,03). Τα δεδομένα επιβίωσης έδειξαν ότι το 100% των ποντικών που έλαβαν αντι-CD25 Ab θεραπεύτηκαν, ένας ρυθμός σκλήρυνσης ισοδύναμη με την ομάδα των ποντικών δεν τρέφονται όγκου και στη συνέχεια υποβλήθηκε σε επεξεργασία με αντι-CD25 Ab (Εικ. 7b).

( α) τα ποντίκια τράφηκαν όγκου ή PBS και τυχαία για να λάβουν αντι-CD25 Ab, ισότυπο αναφοράς Ab ή PBS. Εκείνοι που έλαβαν αντι-CD25 Ab είχαν πιο αργό ρυθμό ανάπτυξης του όγκου σε σύγκριση με τις άλλες ομάδες. Η σημαντική διαφορά στο ρυθμό ανάπτυξης μεταξύ εκείνων που ήταν όγκου ή Fed PBS διατηρήθηκε στον έλεγχο ισότυπο Ab και καμία ομάδα Ab σε ορισμένα χρονικά σημεία (ρ & lt? 0,05)? (Β) Τα ποντίκια που ανέπτυξε ανοχή στο αντιγόνο του όγκου μέσω του στόματος χορήγηση του όγκου στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε θεραπεία εξάντληση αντι-CD25 Treg και θεραπεύτηκαν του υποδόριου όγκου υπόλοιπο του όγκου τους δωρεάν για τουλάχιστον 100 ημέρες.

Η

Treg αριθμοί σε θεραπευμένα ποντίκια

Η θεραπεία αντι-CD25 Ab δεν είχε μακροπρόθεσμες επιπτώσεις για τους αριθμούς Treg. Τα ποντίκια θεραπεύτηκαν από όγκους τους μέσω χορήγησης αντι-CD25 μελετήθηκαν από 30 ημέρες και είχαν παρόμοιους αριθμούς Treg με αφελή ζώα, ανεξάρτητα από το αν ήταν από τα προφορικά ανέπτυξε ανοχή ή ομάδες ελέγχου (εικ. 8).

Εκατόν τριάντα ημέρες από ότι είναι η θεραπεία με αντι-CD25 αντίσωμα, τα ποντίκια θυσιάστηκαν και οι σπλήνες τους χρωματίστηκαν για CD4

+ CD25

+ Tregs. Δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές δει στο ποσοστό των CD4

+ CD25

+ κυττάρων μεταξύ των ποντικιών που είχαν θεραπευτεί από όγκου τους ή αφελείς ποντίκια (n = 3 ανά ομάδα).

Η

συζήτηση

Οι περισσότεροι ασθενείς που αναπτύσσουν καρκίνους του ανώτερου γαστρεντερικού σωλήνα πεθαίνουν ως άμεση συνέπεια της νόσου τους. Ακόμη και για εκείνους με κλινικά εντοπισμένο όγκους, οι οποίοι υποβάλλονται σε θεραπευτική χειρουργική επέμβαση, τα ποσοστά υποτροπής πέντε χρόνο είναι συνήθως πάνω από εξήντα τοις εκατό [18]. Κατά τη στιγμή της χειρουργικής επέμβασης, οι περισσότεροι από τους ασθενείς αυτούς έχουν μικρομεταστάσεων σε διάφορους ιστούς υποδεικνύει αιματογόνος εξάπλωση του καρκίνου σε πρώιμο στάδιο ανάπτυξης του όγκου. Αυτό αφήνει τους ασθενείς σε μια ελάχιστη κατάσταση ασθένειας μετά τη χειρουργική θεραπεία. Μια θεραπεία που θα μπορούσε να διευκολύνει το ανοσοποιητικό σύστημα για τον εντοπισμό όγκων Ags συστηματικά θα ήταν ιδανικό, αν όχι για να καταργήσετε την επιλογή όλων των επιβαρύνσεων από ασθένειες, τότε τουλάχιστον να δημιουργήσει μια κατάσταση λήθαργου όγκου [19], [20].

Έχουμε προηγουμένως δείξει ότι η ανάπτυξη του ασθενώς ανοσογονικών κυτταρική γραμμή JBS στο πλευρό του ανοσοποιητικού αρμόδια ποντικών οδήγησε σε αύξηση του αριθμού των κυττάρων Treg στο περιβάλλον του όγκου, αλλά όχι συστηματικά [8]. Σε αυτή τη μελέτη έχουμε ως πρότυπο την παρουσία των θραυσμάτων του όγκου στο έντερο με την κλινική κατάσταση με σίτιση καθετήρα στομάχου κυττάρων JBS σε ποντίκια. Θα περιμέναμε αυτά τα θραύσματα να υποβληθούν σε επεξεργασία από τον GALT και θα οδηγήσει σε μια συστηματική υπο-ανταπόκρισης σε όγκο Ags [13]. Έχουμε αποδείξει για πρώτη φορά ότι CD4

+ CD25

+ Tregs είναι συστηματικά αυξάνεται σε απάντηση του στόματος χορήγηση σύνολο (JBS) όγκου. Επιπλέον, έχουμε δείξει ότι η επαγωγή του στόματος ανοχής σε έναν όγκο παρέχει πλεονέκτημα ανάπτυξης στον καρκίνο.

ποντικούς των οποίων Tregs αφαιρέθηκαν με επεξεργασία αντι-CD25, ανεξάρτητα από όγκο ή σίτιση PBS, κατέδειξε υποχώρηση των όγκων και μακροπρόθεσμες θεραπείες. Δεν υπήρχαν διαφορές στα ποσοστά ανταπόκρισης μεταξύ των ομάδων των όγκων τροφοδοτείται και ελέγχου υποδεικνύοντας ότι η αναστολή Treg ξεπερνά αποτελεσματικά τα συνδυασμένα από του στόματος ανοχή και την ανάπτυξη του όγκου επιρροές. Είναι πιθανό ότι η πρόωρη επαγωγή των Tregs σε συστημικό επίπεδο, επιτεύχθηκε σε αυτή τη μελέτη με σίτιση του όγκου, είναι υπεύθυνη για την ανάπτυξη του όγκου πλεονέκτημα παρατηρήθηκε. Είναι ενδιαφέρον ότι δεν υπήρχαν διαφορές στους αριθμούς των CD8

+ Τ κύτταρα μεταξύ οποιασδήποτε από τις ομάδες που υποδηλώνει ότι η μείωση των Teffs δεν παρουσιάζεται με επαγωγή ανοχής από του στόματος. Είναι επίσης πιθανό ότι η στοματική ανοχή και πρώιμες αποκρίσεις Treg δεν αναστέλλει το ανοσοποιητικό ευαισθητοποίηση στον όγκο αλλά ανέστειλε λειτουργία τελεστή καθώς δεν υπήρχαν διαφορές στο χρονισμό ή την πληρότητα των υποχώρηση του όγκου μετά από αγωγή Ab μεταξύ του όγκου που διατρέφονται ανεκτικά ή η ομάδα ελέγχου PBS του ποντίκια. Υπήρχε μια σημαντική διαφορά στο συνολικό αριθμό των CD4

+ CD25

+ Tregs σε ποντικούς που έλαβαν αντι-CD25 Ab και ήταν όγκων τροφοδοτείται και ο έλεγχος αλατούχου διαλύματος που τροφοδοτείται ομάδες. Αυτό παρατηρήθηκε επίσης σε εκείνες τις ομάδες που είχαν προσωρινά εξαντληθεί. Απροσδόκητα ωστόσο, δεν υπήρξε σημαντική μείωση στην Tregs που παρατηρήθηκε μεταξύ των ομάδων που είχαν τραφεί όγκου και έλαβαν είτε ένα δοσολογικό σχήμα των αντι-CD25 Ab ή ισοτυπικού ελέγχου Ab. Μια πιθανή εξήγηση για αυτό μπορεί να οφείλεται στην ανάλυση των αριθμών Treg χρησιμοποιώντας CD4

+ CD25

+ μόνο σε αυτό το στάδιο της πειραματικής διαδικασίας, σε αντίθεση με την πιο συγκεκριμένες CD4

+ CD25

+

foxp3

+. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική μείωση των Tregs μπορεί στην πραγματικότητα να περιλαμβάνει το πειραματικό πρωτόκολλο και το χρονοδιάγραμμα για την εξέταση των Tregs και της δόσης του αντι-CD25Ab, η οποία επιλέχθηκε με βάση την προηγούμενη γνώση μας ότι η μέγιστη εξάντληση Treg ήταν μέσα σε 7 ημέρες από τη χορήγηση Αβ. Η δόση του Ab χρησιμοποιήθηκε στη μελέτη αυτή εξασφάλισε μια μείωση κατά 90% του αριθμού των Treg σε παρθένα ποντίκια. Η συνολική αύξηση του αριθμού των Treg σε απόκριση προς διατροφή δεν ελήφθη υπόψη με αυξημένη δόση Ab. Παρά το γεγονός αυτό, δεν παρατηρήθηκαν λειτουργικές διαφορές μεταξύ των διαφορετικών δόσεων του αντι-CD25 Ab στα προκύπτοντα καμπύλες ανάπτυξης, γεγονός που υποδηλώνει CD4

+ CD25 κύτταρα

+ Treg εμπλέκονται στην απόκριση Τ-λεμφοκυττάρων που παρέχει το πλεονέκτημα ανάπτυξης όγκου μετά σίτισης. Αυτό μπορεί να οφείλεται στο γεγονός ότι το αποτέλεσμα της αφαίρεσης ή λειτουργικά αδρανοποίηση Tregs με Ab depletions κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης των από του στόματος ανοχή είναι αρκετή για να επιτρέψει τη μερική εκπαίδευση του ανοσοποιητικού συστήματος και την ανάπτυξη των κυτταροτοξικών αποκρίσεων κατά του όγκου. Είναι ενδιαφέρον, υπήρχαν περισσότερες θεραπείες που παρατηρήθηκαν στις ομάδες που έλαβαν αντι-CD25 Ab κατά τη διάρκεια του ταΐσματος μόνο και τρέφονται όγκου (75%) από ό, τι σε εκείνους που έλαβαν Ab κατά τη στιγμή της τροφοδοσίας και τροφοδοτείται PBS (60%). Μπορεί να είναι ότι Αγ φόρτωσης με τη διατροφή και την επακόλουθη απενεργοποίηση των Tregs προκαλώντας αύξηση του αριθμού Teff μπορούσε να έχει συμβεί και έχουν παρόμοια ευρήματα έχουν αποδειχθεί αλλού [21].

Στην κλινική, οι ασθενείς με GALT παρόν με μια ήδη προφορικά ανέπτυξε ανοχή του ανοσοποιητικού συστήματος, και μένει να καθοριστεί αν στοματική ανοχή μπορεί να ξεπεραστεί μετά την αποκατάσταση της ανάπτυξης του όγκου. Σε μελέτες ανοχής, έχει αποδειχθεί ότι η υιοθετούμενη μεταφορά των Tregs σε μοντέλα ποντικών μπορούν να ξεπεράσουν το ανοσοποιητικό ασθένειας που προκαλείται από [5]. Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε κατά πόσο η απομάκρυνση των Tregs μπορεί να επιτρέψει την ανάπτυξη μιας κυτταροτοξική Τ κυτταρική απόκριση σε ένα υποδόριο όγκο. Μετά την τροφοδοσία του όγκου και την εγκατάσταση του στόματος ανοχής, ένα ενιαίο σχήμα δοσολόγησης του αντι-CD25 Ab αφαιρείται το πλεονέκτημα της ανάπτυξης του όγκου που θα έπρεπε κανονικά να φανεί με την απουσία της θεραπείας αντι-CD25 Ab. Επιπλέον, η χορήγηση αντι-CD25 Ab οδήγησε σε θεραπείες σε όλους τους ποντικούς που φέρουν υποδόριους όγκους. Έχουμε δείξει ότι ακόμη και μια καθιερωμένη στόματος ανοχής σε έναν όγκο Ag, και το προκύπτον ανάπτυξη επιθετικών όγκων και φτωχότερη επιβίωση, μπορούν να ξεπεραστούν με Treg εξασθένησης θεραπεία. Το αποτέλεσμα αυτό υποδεικνύει ότι οι καρκίνοι του ανώτερου γαστρεντερικού σωλήνα θα είναι επιδεκτικά σε θεραπείες που επιχειρούν να αδρανοποιούν αποδεδειγμένη δραστικότητα των κυττάρων Treg. Είναι επίσης σημαντικό να σημειωθεί ότι η θεραπεία αντι-CD25 Ab δεν επηρέασε τις συστημικές πληθυσμούς Treg σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή μετά από θεραπεία, σε σύγκριση με παρθένα ποντίκια. Αυτό είναι σημαντικό, δεδομένου ότι περιορίζει την πιθανότητα ότι αντι CD25-θεραπεία Ab των αυτοάνοσων νοσημάτων θα μπορούσε να αφαιρέσει Tregs εντελώς ή μόνιμα

Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης δείχνουν ένα μηχανισμό ανοχής -. Τ-κύτταρα καταστολής ενός αντικαρκινική ανοσολογική απόκριση. δεν έχει ακόμη καθοριστεί η ταυτότητα του όγκου Ag (s)? Ωστόσο, αυτή η μελέτη επιβεβαιώνει και επεκτείνει τις παρατηρήσεις των προηγούμενων εκθέσεων όπου σίτιση του όγκου Ags δείχθηκε να βλάψουν αντικαρκινική κυτταροτοξικότητα και έτσι υποστηρίζει την υπόθεση ότι ο όγκος Ags που αποβάλλονται μέσα στον ανώτερο γαστρεντερικό σωλήνα και υποβάλλονται σε επεξεργασία από το ανοσοποιητικό σύστημα του βλεννογόνου μπορεί να οδηγήσει σε κάτω