Αφηρημένο

Φλοιοεπινεφριδιακή καρκίνωμα (ACC) είναι μια σπάνια, αλλά εξαιρετικά κακοήθη όγκο άγνωστης προέλευσης. Ινχιμπίνης α-υπομονάδα (

Inha

) knockout ποντικών αναπτύξει ΚΕΠ παρακάτω γοναδεκτομή. Στον άνθρωπο,

Inha

έκφραση ποικίλλει σε μεγάλο βαθμό μέσα στους ιστούς ACC και του κυκλοφορούντος πεπτιδίου ινχιμπίνης pro-αΟ έχει περιγραφεί ως ένα νέο δείκτη όγκου για ACC. Ερευνήσαμε κατά πόσο γενετικές και επιγενετικές αλλαγές του

Inha

γονίδιο σε ανθρώπινα προκαλέσει απώλεια ACC ή παραλλαγή του

Inha

έκφρασης. Για το σκοπό αυτό, οι αναλύσεις του

Inha

αλληλουχία, μεθυλίωση προαγωγού και έκφραση mRNA διεξήχθησαν σε ανθρώπινους ιστούς του φλοιού των επινεφριδίων. Ορός ινχιμπίνης pro-αΟ επίπεδα μετρήθηκαν επίσης σε ACC ασθενείς.

Inha

γενετική ανάλυση σε 37 μοναδικά ΚΕΠ αποκάλυψε 10 μυθιστόρημα, ετερόζυγη σπάνιες παραλλαγές. Από τις 3 κωδικοποίησης βάσεις επηρεάζονται, μία παραλλαγή ήταν συνώνυμο και δύο παραλλαγές εσφαλμένου νοήματος: S72F και S184F. Το έλασσον αλληλόμορφο του rs11893842 σε -124 bp παρατηρήθηκε σε χαμηλή συχνότητα (24%) σε δείγματα ACC και συνδέθηκε με μειωμένη

Inha

επίπεδα mRNA: 4.7 ± 1.9 αυθαίρετες μονάδες για ΑΑ, σε σύγκριση με το 26 ± 11 για γονότυπους AG /GG (P = 0,034). Η μεθυλίωση των τεσσάρων εγγύς

Inha

CpGs προαγωγού έκτροπα αυξήθηκε σε πέντε ΚΕΠ (47,7 ± 3,9%), σε σύγκριση με την κανονική επινεφρίδια (18,4 ± 0,6%, p = 0,0052), ενώ οι υπόλοιπες 14 ΚΕΠ που μελετήθηκαν παρουσίασαν μειωμένη μεθυλίωση προαγωγού (9,8 ± 1,1%, Ρ = 0,020). CpG μεθυλίωση ήταν αντιστρόφως συσχετίζεται με

Inha

επίπεδα του mRNA σε ΚΕΠ (r = -0.701, p = 0,0036), αλλά δεν συνδέονται με ινχιμπίνη επίπεδα προ-αΟ ορό. Εν κατακλείδι, παρεκκλίνουσα μεθυλίωση και κοινή γενετική παραλλαγή στο

Inha

υποστηρικτής συμβαίνουν στην ανθρώπινη ΚΕΠ και σχετίζονται με μειωμένη

Inha

έκφραση

Παράθεση:. Hofland J, J Steenbergen , Voorsluijs JM, Verbiest MMPJ, de Krijger RR, Hofland LJ, et al. (2014) Inhibin άλφα-υπομονάδα (

Inha)

Έκφραση στον Καρκίνο του φλοιού Είναι Συνδέεται με Γενετικές και επιγενετικές

Inha

Ανάδοχος Παραλλαγή. PLoS ONE 9 (8): e104944. doi: 10.1371 /journal.pone.0104944

Επιμέλεια: Swati Palit Deb, Βιρτζίνια Πανεπιστήμιο της Κοινοπολιτείας, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 18 Μαρ 2014? Αποδεκτές: 17 Ιούλη του 2014? Δημοσιεύθηκε: 11 Αυγούστου 2014

Copyright: © 2014 Hofland et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα δεδομένα που υπάρχουν μέσα στο χειρόγραφο και το Συμπληρωματικό Πίνακα

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία χρηματοδότηση ή υποστήριξη στην έκθεση

Αντικρουόμενα συμφέροντα: Καθ. Wouter de Herder είναι μια Συντακτική επιτροπή PLoS ONE μέλος. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων να PLoS ONE Editorial πολιτικές και κριτήρια.

Εισαγωγή

Φλοιοεπινεφριδιακή καρκίνωμα (ACC) είναι μία σπάνια κακοήθεια με ένα φτωχό ποσοστό επιβίωσης [1], [2] . Η εμφάνιση του ACC έχει μια επικράτηση των γυναικών και μια δικόρυφη κατανομή με αυξημένη συχνότητα σε παιδιά και σε ενήλικες άνω των 60 ετών [3]. Οικογενής ACC συμβαίνει στο πλαίσιο γενετικών συνδρόμων, όπως το σύνδρομο Beckwith-Wiedemann [4] και το σύνδρομο Li-Fraumeni [5]. Μεταλλάξεις σε γονίδια που υπόκεινται σε αυτές διαταραχές έχουν επίσης συνδεθεί με σποραδικές σχηματισμός ACC, ειδικά στην περίπτωση του

ΤΡ53

[6]. Η πιο συχνή μεταβολή βρέθηκαν σε ACC είναι υπερέκφραση του μητρικά αποτυπώνεται τόπο IGF-II [7]. Πιο πρόσφατα, οι μεταλλάξεις στο μονοπάτι /β-κατενίνης Wnt έχουν δείξει να συμβούν κατά τη διάρκεια του φλοιού των επινεφριδίων την εξέλιξη του όγκου [8]. Γενετική αιτίες και ο ρόλος των χρωμοσωμικών ανωμαλιών σε αδρενοκορτικοειδές ογκογένεση παραμένουν σε μεγάλο βαθμό άγνωστες.

Η ινχιμπίνη α-υπομονάδος (που κωδικοποιείται από

Inha

) σχηματίζει αναστολίνης Α ή Β με σύζευξη με την αναστολίνη βA- ή βΒ-υπομονάδες, αντίστοιχα. Η έκφρασή του περιορίζεται στο γονάδες, πλακούντα και φλοιό των επινεφριδίων. Η κύρια επίδραση των κυκλοφορούντων ανασταλτινών Α και Β είναι η αναστολή της τοπικής έκκρισης ακτιβίνης επαγόμενη ωοθυλακιοτρόπου ορμόνης (FSH) από την υπόφυση [9]. Σε ένα μοντέλο ποντικού knockout, ο ινχιμπίνης α-υπομονάδος βρέθηκε να έχει ένα ρόλο κατασταλτική του όγκου για γονάδων ιστό [10] και, μετά από γοναδεκτομή, για τον φλοιό των επινεφριδίων [11]. Ενενήντα εννέα τοις εκατό του

Inha

– /- ποντίκια ανέπτυξαν καρκινώματα του φλοιού των επινεφριδίων που εκκρίνουν στεροειδή μετά γοναδεκτομή [11]. Οδών που εμπλέκονται σε αυτή τη δράση περιλαμβάνουν τη διαφοροποίηση σε κοκκιώδη κύτταρα των κυττάρων που μοιάζουν με την έκφραση του εμβρύου ή των γονάδων δείκτες όπως

Gata4

,

LHR, FSHR

και

Cyp17a1

[12 ].

Inha-

σχετικές καρκινογένεση σε ποντίκια έχει επίσης αποδοθεί στη μειωμένη ακτιβίνης σηματοδότησης δυνατότητες και ανώμαλη έκφραση και τα αποτελέσματα του TGF-β2 [13], [14].

Στον άνθρωπο, η λειτουργία της επινεφριδίων ανασταλτίνες είναι άγνωστη, αν ομόλογό ακτιβίνης του Α έχει περιγραφεί ότι εμπλέκεται στη ζώνη-ειδική ρύθμιση του φλοιού των επινεφριδίων στεροειδογένεση [15]. Τα αποδεικτικά στοιχεία για

Inha

ως καταστολέας των όγκων στο ανθρώπινο ACC είναι αντικρουόμενες. Αρκετές μελέτες mRNA και ανάλυση πρωτεϊνών έδειξαν έλλειψη

Inha

έκφραση σε ένα ποσοστό των ασθενών με ACC καθώς και

Inha

υπερέκφραση σε άλλη υποομάδα [16], [17], [18] [19], [20]. Πρόσφατα, αναφέρθηκε ότι τα επίπεδα της ελεύθερης μορφής πεπτίδιο της α-υπομονάδας στον ορό, ινχιμπίνης pro-αΟ, αυξήθηκαν σε ασθενείς με καρκινώματα του φλοιού των επινεφριδίων και ότι αυτά τα επίπεδα μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως δείκτης όγκου [21]? ινχιμπίνη pro-αΟ επίπεδα μπορεί να είναι χρήσιμη για την διαφοροποίηση μεταξύ κακοήθεις και καλοήθεις όγκοι του φλοιού των επινεφριδίων, καθώς και για την παρακολούθηση των μεμονωμένων ασθενών. Παρά το γεγονός ότι η πλειοψηφία των ACC ασθενείς έδειξαν αυξημένα επίπεδα ινχιμπίνης pro-αΟ ορού ένα υποσύνολο των ασθενών είχαν κανονικά επίπεδα, πιθανότατα αντιπροσωπεύουν τους όγκους που δεν εκφράζουν

Inha

[21].

Πολλά DNA μεταβολές είναι γνωστό ότι επηρεάζει την έκφραση του γονιδίου κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης. Εκτός από τις γενετικές αλλαγές που προκαλούν ανώμαλη ή απούσα έκφραση, επιγενετικές μεταβολές, όπως χρωματίνης αναδιαμόρφωση και CpG μεθυλίωση, μπορεί να επηρεάσει τη μεταγραφή γονιδίων και συμβαίνουν συχνά στον καρκίνο [22]. Η μεθυλίωση των CpG νησίδων σε γονιδιακές περιοχές υποκινητή μπορεί να οδηγήσει σε μεταγραφική σίγηση και η απώλεια της έκφρασης του γονιδίου λόγω παρεμβολών με την πρόσδεση των παραγόντων μεταγραφής [23].

Insights στο ρυθμιστικό έλεγχο του

Inha

έκφραση θα μπορούσε να ρίξει περισσότερο φως στο ρόλο του

Inha

στην ανθρώπινη ογκογένεση επινεφριδίων και σχετικά με την μεταβλητότητα του ελεύθερου κυκλοφορούντων επιπέδων ινχιμπίνης ορού η οποία θα μπορούσε να λειτουργήσει ως δείκτης όγκου ορού σε ACC ασθενείς. Για να διαλευκάνουν αυτό ερευνήσαμε τους ρυθμιστικούς μηχανισμούς του

Inha

έκφραση στην ανθρώπινη ACC. Προσδιορισμός της αλληλουχίας του

Inha

γονίδιο που αναλαμβάνονται για να ψάξετε γενετικές παραλλαγές που θα μπορούσαν να επηρεάσουν τα επίπεδα της λειτουργίας των γονιδίων ή έκφραση. Επιπλέον, η ποσοτική ανάλυση μεθυλίωσης του

Inha

υποστηρικτής έγινε με σκοπό να μελετήσουμε αν η μεθυλίωση του CpGs συμβάλλει με τις διαφορές στην έκφραση. Αυτές οι αναλύσεις συζεύχθηκαν με τα επίπεδα mRNA του όγκου των συγκεντρώσεων ινχιμπίνης α-υπομονάδα και ορό αναστολίνης pro-αΟ.

Υλικά και Μέθοδοι

Δείγμα συλλογή

εγκλεισμένα σε παραφίνη ιστός μπλοκ συλλέχθηκαν από τις παθολογικές αρχεία του Erasmus MC. δείγματα ιστών προέρχονταν από ασθενείς που λειτουργεί μεταξύ του 1991 και του 2010 σε αυτό το νοσοκομείο. Η διάγνωση του φλοιού των επινεφριδίων καρκίνωμα έγινε όταν ο δείκτης van Slooten υπέρβαση 8 [24]. Όγκου στάσης πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με το Ευρωπαϊκό Δίκτυο για τη Μελέτη των επινεφριδίων όγκοι συστήματος (ENSAT) στάσης [1]. Αιματοξυλίνη και ηωσίνη διαφάνειες χρώση αξιολογήθηκαν από έναν παθολόγο και τα τμήματα με ένα υψηλό ποσοστό των βιώσιμων κυττάρων όγκου μικροτομή για περαιτέρω ανάλυση. Οι ιστοί αποκοπεί πριν από το 2007 συλλέχθηκαν από τις παθολογικές αρχεία του Erasmus MC. Ενημερωμένη συγκατάθεση για τη δευτερεύουσα χρήση του πλεονάζοντος ιστού λήφθηκε από όλους τους ασθενείς προφορικά πριν από την επέμβαση. άρνηση του ασθενούς να διατίθενται για την έρευνα ιστού καταγράφονται και αυτά τα δείγματα δεν είχαν συμπεριληφθεί σε αυτή τη μελέτη αναλόγως. Από το 2007 και μετά, τα δείγματα συλλέχθηκαν σε μια προοπτική μελέτη όγκους των επινεφριδίων και ενημέρωσε γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους συμμετέχοντες. Αυτά τα δείγματα περιλαμβάνονται επίσης επινεφριδίων ιστούς από ασθενείς οι οποίοι υποβλήθηκαν σε εκτομή των επινεφριδίων λόγω καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων, υπερπλασία των επινεφριδίων και αδένωμα. Τομές όγκων συλλέχθηκαν από βιώσιμα τμήματα όγκου και καταψύχθηκαν ταχέως σε υγρό άζωτο ή ξηρό πάγο αμέσως μετά την εκτομή. Προ-εγχειρητική επίπεδα ινχιμπίνης προ-αΟ ορού μετρήθηκαν σε υποσύνολα ασθενή χρησιμοποιώντας ένα ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσομετρικό προσδιορισμό (Διαγνωστικό Εργαστήριο Συστημάτων, Webster, TX, USA). Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις ολλανδικές ρυθμίσεις σχετικά με τη χρήση των υπολειμματικών ιστών και εγκρίθηκε από την επιτροπή ιατρικής δεοντολογίας του Erasmus MC.

DNA αλληλουχίας

Το DNA απομονώθηκε με ένα κιτ DNA μίνι ( Qiagen, Venlo, Ολλανδία) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή και διαλύεται σε H

2O. Η συγκέντρωσή της μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα διανεμητή Nanodrop (Thermo Fisher Scientific, Waltham, ΜΑ, USA).

Το γονίδιο α-υπομονάδας αναστολίνης, που βρίσκεται στο 2q35, αποτελείται από δύο εξόνια (σχήμα 1). Για την ανάλυση του DNA του ιστούς παραφίνης επιλέχθηκαν ζεύγη εκκινητών για την ενίσχυση περιοχών του 200-250 bp. Για φρέσκο ​​κατεψυγμένο ιστών περιοχές έως και 500 bp μπορούσε να ενισχυθεί με επιτυχία. Οι Primer θέσεις συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Οι εκκινητές που καλύπτει την περιοχή κωδικοποίησης, μέχρι -331 bps από τη θέση έναρξης ATG (που περιέχει το cAMP πρόσδεσης, SF-1 απόκριση και GATA στοιχεία σε -151 έως -112 bps [25], [ ,,,0],26]) και τουλάχιστον 153 μ.β. του ιντρονίου πλησίον εξονίου-ιντρονίου όρια (Σχήμα 1).

βρίσκεται στο 2q35,

Inha

αποτελείται από δύο εξώνια που χωρίζονται από ένα ιντρόνιο 2 kb. Η κωδικοποιητική αλληλουχία αποτελείται από 1101 bps. Οι περιοχές αλληλουχία σε αυτή τη μελέτη που υποδεικνύεται από τις συνεχείς βέλη. Οι περιοχές που ερευνήθηκαν για μεθυλίωση απεικονίζεται με τα διακεκομμένα βέλη? Τα CpG δινουκλεοτίδια χαρακτηρίζονται με επιτυχία εμφανίζεται ως ανοιχτό κύκλους.

Η

PCR amplication πραγματοποιήθηκε σε ένα όγκο 30 μl 0,05 U /μl FastTaq πολυμεράσης (Roche Applied Science, Almere, Ολλανδία), 1 ng /μl DNA, 250 ηΜ προς τα εμπρός και αντίστροφοι εκκινητές, 200 μΜ dNTPs (Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden) και ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει MgCl

2 (Roche) σε ένα GeneAmp 9700 (Applied Biosystems, Nieuwerkerk aan den IJssel, The Netherlands) υπό τις ακόλουθες συνθήκες: 7 λεπτά στους 95 ° C, που ακολουθείται από 40 κύκλους των διαστημάτων 1 λεπτού στους 95 ° C, 56-63 ° C και 72 ° C, που τελειώνει με 10 λεπτά στους 72 ° C. Τα προϊόντα PCR καθαρίστηκαν με υψηλής καθαρότητας PCR καθαρισμός Προϊόν Kit (Roche).

Τόσο τα εμπρός και αντίστροφοι εκκινητές PCR χρησιμοποιήθηκαν σε ξεχωριστές αντιδράσεις αλληλουχίας με την BigDye Terminator Cycle Κιτ v1.1 Sequencing (Applied Biosystems). Τρία μΐ καθαρισμένο προϊόν PCR χρησιμοποιήθηκε με 500 ηΜ εκκινητή σε μια αντίδραση του 1 λεπτού στους 96 ° C και 25 κύκλους των 30 δευτερολέπτων στους 96 ° C, 15 δευτερόλεπτα στους 50 ° C, και 4 λεπτά στους 60 ° C. Τα προϊόντα της αντίδρασης αλληλουχία καθαρίστηκαν με τη χρήση της χρωστικής-Ex 96 Κιτ καθαρισμού (Qiagen) και στηλών καθαρισμού Micro-Bio-Spin (Bio-Rad, Veenendaal, Ολλανδία). ανίχνευσης αλληλουχίας πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το ΑΒΙ PRISM 3100 Genetic Analyzer (Applied Biosystems). λογισμικό Sequencher (Genes Codes Corporation, Αηη Arbor, ΜΙ, USA) χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση του DNA.

Η μεθυλίωση ανάλυση

Ένα μg DNA, που λαμβάνονται από τα κατεψυγμένα δείγματα, υποβλήθηκε σε επεξεργασία με όξινο θειώδες, χρησιμοποιώντας το EZ κιτ μεθυλίωση του DNA (έρευνα Zymo, Irvine, CA, USA), που εκλούεται σε 100 μΐ H

2O και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C. Κατεργασμένου με όξινο θειώδες DNA στην περιοχή του υποκινητή του

Inha

ενισχύθηκε με PCR ενώ ένα προαγωγό Τ7 εισήχθη στο αντίστροφο εκκινητή. Χρησιμοποιώντας το λογισμικό που παρέχεται από EpiDESIGNER Sequenom (San Diego, CA, USA) δύο σύνολα εκκινητών σχεδιάστηκαν που καλύπτονται πολλαπλές δινουκλεοτίδια CpG πριν από το

Inha

ξεκινήσει ιστοσελίδα (Σχήμα 1)? οι αλληλουχίες εκκινητών που περιγράφονται στον Πίνακα 1.

Η PCR πραγματοποιήθηκε σε έναν όγκο 5 μΐ που περιέχει 0.04 U /μl HotStar Taq πολυμεράση (Qiagen), 200 μΜ dNTPs, 200 ηΜ των δύο εκκινητών, 1 μλ όξινου θειώδους κατεργασμένα DNA, HotStar PCR ρυθμιστικό και H

2O. Μετά από 10 λεπτά στους 95 ° C, 35 κύκλοι πραγματοποιήθηκαν από 30 δευτερόλεπτα στους 95 ° C, 30 δευτερόλεπτα στους 53 ° C και 45 δευτερόλεπτα στους 72 ° C. Η αντίδραση τελείωσε με ένα βήμα 7 λεπτό ανοδιατάξεως στους 72 ° C. Μετά την επιβεβαίωση του προϊόντος PCR σε ένα πήκτωμα 2% αγαρόζης που περιέχει, το προϊόν υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 0,3 U αλκαλική φωσφατάση γαρίδας για 20 λεπτά στους 37 ° C και 5 λεπτά στους 85 ° C.

Στη συνέχεια,

in vitro

μεταγραφής και βάσης-ειδική διάσπαση διεξήχθη σε ένα μίγμα 7 μλ που περιέχει 20 U Τ7 Ε & amp? DNA πολυμεράση, Τ-συγκεκριμένο μίγμα διάσπασης, 3,14 mmol /l ϋΤΤ, RNase Α, το προϊόν της PCR και ρυθμιστικό διάλυμα πολυμεράσης Τ7 (Sequenom ). Τα προκύπτοντα θραύσματα αραιώθηκαν με Η

2O και 6 mg CLEAN ρητίνη προστέθηκε επί 10 λεπτά για να απομακρυνθούν τα ιόντα νατρίου και καλίου. Αυτό το μίγμα φυγοκεντρήθηκε στις 3000 rpm για 5 λεπτά και διανέμονται σε ένα SpectroCHIP με το RS-1000 μέσο MassARRAY Nanodispenser (Sequenom). Ποσοτική μεθυλίωση ανιχνεύθηκε με εκρόφηση υποβοηθούμενη από μήτρα λέιζερ /ιονισμού χρόνου-πτήσης (MALDI-TOF) φασματόμετρο μάζας (MassARRAY Analyzer Compact, Sequenom) και ανάλυση διεξήχθη χρησιμοποιώντας λογισμικό που συνοδεύει EpiTYPER.

Πρότυπες καμπύλες για αυτές δοκιμασίες κατασκευάστηκαν με προσδιορισμό μίγματα δείγματα ανάμικτης DNA που περιέχει 0% έως 100% μεθυλίωση με διαστήματα 10%. Ανάλυση μεθυλίωσης ήταν επιτυχής για 8 CpGs στο

Inha

υποστηρικτής:. Βρίσκεται 149, 203, 241, 285, 558, 599, 719 και 751 μονάδες βάσης πριν από το

Inha

ξεκινήσει ιστοσελίδα

mRNA ανάλυση

Ολικό RNA απομονώθηκε από κατεψυγμένα φλοιού των επινεφριδίων ιστούς με αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Ανάστροφης μεταγραφάσης και ποσοτικής αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης του

Inha

και καθαριότητας γονίδια

HPRT1

και

GAPDH

έγιναν εις διπλούν, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16]. Οι αλληλουχίες των εκκινητών και ανιχνευτών υποδεικνύονται στον Πίνακα 1. Τα επίπεδα έκφρασης του

Inha

υπολογίστηκαν σε σχέση με εκείνη του κύκλου όρια μέσης (Ct) του

GAPDH

και

HPRT1

με τη μέθοδο της δέλτα-Ct και πολλαπλασιάζεται με 1000.

Η στατιστική ανάλυση

το σύνολο δεδομένων για τη μελέτη αυτή περιλαμβάνεται στον πίνακα S1. Αναλύσεις των διαφορών μεταξύ των ομάδων πραγματοποιήθηκαν με δοκιμές Chi-Square, μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης ακολουθούμενη από πολλαπλές δοκιμές του Tukey σύγκριση ή t-tests χρησιμοποιώντας λογισμικό Graphpad Prism (Graphpad Inc, La Jolla, CA, USA). τα επίπεδα mRNA ήταν log-μετατράπηκαν πριν από την ανάλυση. Συσχετίσεις αναλύθηκαν με συντελεστή συσχέτισης του Spearman. Όλες οι δοκιμές που υπολογίζεται ως δύο-ουρά και ένα P-επίπεδο κάτω από 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

Αποτελέσματα

Ακολουθία ανάλυση

Το

Inha

ακολουθία αναλύθηκε σε 37 μοναδικά ACC ιστούς (12 κατεψυγμένα, 25 παραφίνη-ενσωματωμένες). Τα αποτελέσματα από την ακολουθία αναλύσεις έχουν συνοψίζονται στον Πίνακα 2.

Η

Συνολικά, προσδιορισμός της αλληλουχίας του Inha

γονιδίου σε 37 ΚΕΠ αποκάλυψε 10 νέα σπάνιες γενετικές παραλλαγές σε 8 ΚΕΠ. Ένα ACC έτρεφε τρεις ετερόζυγη παραλλαγές (-77G & gt? Α, -63A & gt? G και -56G & gt? T) στο 5’UTR, ενώ ένα ετερόζυγο παραλλαγή αμέσως μετά το κωδικόνιο λήξης (* 1G & gt? Α) ανιχνεύθηκε σε άλλο ACC. Εμείς εντοπισμένη τρεις εσονικές παραλλαγές, που βρίσκεται 179, 72 και 9 μονάδες βάσης ανάντη του ιντρονίου 1-εξόνιο 2 σύνορα. Στην περιοχή κωδικοποίησης του

Inha

ανιχνεύσαμε 1 συνώνυμος αλλαγή νουκλεοτιδίου (75C & gt? Τ, Ala25Ala) και 2 παραλλαγές εσφαλμένου νοήματος, σε 3 ξεχωριστές ΚΕΠ. Τα τελευταία δύο αποτελείτο κατά ετερόζυγο παραλλαγές Τ C →, σε bps 215 και 552, οδηγώντας σε σερίνη σε αλλαγές φαινυλαλανίνη σε αμινοξέα 72 και 184, αντίστοιχα

Σε πλήρη σειρά των δειγμάτων ACC, το -124A & gt?. G SNP, rs11893842, ήταν η πιο διαδεδομένη γενετική παραλλαγή με μια μικρή συχνότητα αλληλόμορφου (MAF) του 24%, σε σύγκριση με 44% σε έναν πληθυσμό αναφοράς (www.1000genomes.org [27]). Επιπλέον, το έλασσον αλληλόμορφο του εσωνίου SNP IVS1-87G & gt? Α (rs116399602) ήταν παρούσα στο 16% των δειγμάτων ACC, φαινομενικά υψηλότερες από ό, τι στα υγιή άτομα (2,8% MAF). Rs7588807 (IVS1-314G & gt? T) μετρήθηκε μόνο στο υποσύνολο των κατεψυγμένων δειγμάτων DNA. Το δευτερεύον Τ αλληλόμορφο προηγουμένως αναφερθεί σε 48% σε άτομα ελέγχου? το ΚΕΠ έδειξε ένα χαμηλότερο MAF 29%. Rs35118453 (-16C & gt? T) και rs12720063 (532C & gt? Τ) ήταν παρόντες σε χαμηλές συχνότητες, συγκρίσιμη με την αναφορά [27]: 9% και 12%, αντίστοιχα. Rs144941390, rs374972575 και rs148455844 εντός του Inha

γονίδιο εντοπίστηκε το καθένα σε ένα δείγμα ACC.

Η μεθυλίωση ανάλυση

Η πρώτη σειρά στην οποία

Inha

υποστηρικτής μεθυλίωση ερευνήθηκε, περιλάμβανε το DNA από τις 3 κανονικές επινεφρίδια και 12 ΚΕΠ. Για τους 4 CpG δινουκλεοτίδια 558, 599, 719 και 751 bps ανάντη του

Inha

θέσης έναρξης χαμηλές αναλογίες μεθυλίωσης ελήφθησαν σε όλα τα δείγματα που δοκιμάστηκαν: 4.4 ± 1.1%, 4.5 ± 0.8%, 1.7 ± 0.7% και 2.5 ± 0.6% (μέσος όρος ± SEM), αντίστοιχα. Επιπλέον, δεν υπήρχαν διαφορές μεταξύ των κανονικών ιστών και των επινεφριδίων ΚΕΠ (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Οι CpGs σε γειτνίαση με τη θέση έναρξης μεθυλιώθηκαν σε υψηλότερο βαθμό σε ένα υποσύνολο δειγμάτων? Ως εκ τούτου, αναλύσαμε ένα επιπλέον 7 ΚΕΠ με το κατάντη ζεύγος εκκινητών μόνο. ​​

Τα αποτελέσματα της ανάλυσης μεθυλίωσης των CpGs σε -285, -241, -203 και -149 που απεικονίζονται στην Εικόνα 2. Πέντε ΚΕΠ είχε έκτροπα υψηλής ποσοστά μεθυλίωσης των τεσσάρων εγγύς CpGs διερευνηθεί στο

Inha

υποκινητή. Μέσος δείκτης μεθυλίωση αυτών των ΚΕΠ ήταν 47,7 ± 3,9%, σε σύγκριση με 18,4 ± 0,6% για την κανονική επινεφρίδια (P = 0.0052) και 9,8 ± 1,1% για το άλλο ΚΕΠ (P & lt? 0,0001). Η διαφορά στην μεθυλίωση μεταξύ της κανονικής τα επινεφρίδια και το άλλο ΚΕΠ ήταν επίσης στατιστικά σημαντική (Ρ = 0,020). Το ποσοστό των

Inha

μεθυλίωση υποστηρικτής στα δείγματα ACC δεν συσχετίστηκε με τα χαρακτηριστικά του όγκου, όπως ορμονικές υπερπαραγωγή, van Slooten δείκτης ή το στάδιο ENSAT (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Η ποσοτική ανάλυση της μεθυλίωσης τέσσερα δινουκλεοτίδια CpG στο

Inha

υποστηρικτής πραγματοποιήθηκε σε 3 φυσιολογικό επινεφρίδια και 19 ΚΕΠ. Οι μεμονωμένες CpGs υποδεικνύονται στον χ-άξονα με τον αριθμό bp που βρίσκεται 5 ‘από την θέση έναρξης ATG. 0 δεικνύει ότι δεν υπάρχει μεθυλίωση του DNA, ενώ 1 αποδεικνύει ότι όλα DNA δοκιμαστεί στο δείγμα ιστού είναι μεθυλιωμένη. Τα μεμονωμένα σημεία δεδομένων που αποτελείται από μία μέση τιμή τριπλών μετρήσεων.

Η

Έκφραση ανάλυση

Inha

επίπεδα έκφρασης του mRNA μετρήθηκαν σε κανονικές επινεφριδίων (n = 10), αδρενοκορτικοειδή υπερπλασία (n = 20), αδένωμα (ADA, n = 11) και ACC (n = 25) ιστούς. Η ομάδα περιελάμβανε 10 κανονική επινεφριδίων, 4 υπερπλασία των επινεφριδίων και 14 δείγματα ACC στην οποία

επίπεδα Inha

αναφέρθηκαν πριν [16]. Η παρούσα ανάλυση έδειξε απουσία του

Inha

έκφραση σε 3 ACC ενώ το άλλο ΚΕΠ έδειξε ένα ευρύ φάσμα έκφρασης από 0,080 να 220 αυθαίρετες μονάδες (A.U.). Συνολικά, δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των επιπέδων

Inha

έκφρασης σε όλες τις ομάδες έρευνας (Σχήμα 3Α). Επίσης, τα επίπεδα του mRNA της

Inha

στο ΚΕΠ δεν σχετίζονται με τα χαρακτηριστικά του όγκου (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

(Α) Ποσοτική

Inha

ανάλυση mRNA ήταν συγκρίσιμη σε φυσιολογικά επινεφρίδια (NL, n = 10), του φλοιού των επινεφριδίων υπερπλασία (Ηγρ, n = 20), αδενώματα (ADA, n = 11) και τα καρκινώματα (ACC, n = 25). Το δείγμα ACC που στεγάζει το S184F variantis εμφανίζεται ως ένα ανοιχτό κύκλο. Μπάρα αντιπροσωπεύει τη μέση. (Β) Μεταβολή rs11893842 (-124A & gt? G) συσχετίστηκε με τις αλλαγές στο

έκφραση Inha

γονιδίου. Ράβδοι αντιπροσωπεύουν μέσο, ​​* P & lt? 0,05. (C) αρνητική συσχέτιση μεταξύ μεθυλίωσης υποστηρικτής του

Inha

γονιδίων και

Inha

έκφραση του mRNA (r = -0,701, P = 0.0036). (Δ) Η έλλειψη αντιστοιχίας μεταξύ των

Inha

έκφρασης του mRNA και ο ορός ινχιμπίνης pro-αΟ Z-score στο ACC ασθενείς (r = -0,473, p = 0.10).

Η

Από το 3 δείγματα ACC με σπάνιες γενετικές παραλλαγές στο Inha

εξώνια, μόνο μία ήταν διαθέσιμα για την ανάλυση της έκφρασης? αυτό το ACC υποθάλπουν την αλλαγή S184F έδειξε ένα φυσιολογικό επίπεδο

Inha

mRNA (15 Α.υ., Σχήμα 3Α, ανοιχτός κύκλος). Όταν στρωματοποιημένη για τις πέντε κοινές SNPs, μόνο η παραλλαγή του γονιδίου rs11893842 συνδέθηκε με τις αλλαγές στο

Inha

mRNA: σημαίνει έκφραση σε ιστούς με το γονότυπο ΑΑ ήταν 4,7 ± 1,9 Α.υ., σε σύγκριση με το 26 ± 11 Α.υ. για τους γονότυπους AG /GG (Ρ = 0.034, Εικόνα 3Β).

αναλύσεις συνδυασμένης mRNA και μεθυλίωσης ήταν διαθέσιμα για 15 ιστούς. Συνολικά, υπήρχε σημαντική αρνητική συσχέτιση μεταξύ της μέσης αναλογίας μεθυλίωση των εγγύς νησιά CpG και

Inha

έκφραση του mRNA (Σχήμα 3C, r

s = -0,701, p = 0,0036).

ορού ινχιμπίνης επίπεδα προ-αΟ ήταν διαθέσιμες σε ένα υποσύνολο των ασθενών. Δεν υπήρχαν σημαντικές σχέσεις μεταξύ αναστολίνης στον ορό προ-αΟ Ζ-βαθμολογίες σε μία αναλογία χέρι και μεθυλίωσης (n = 9, r

s = -0,10, Ρ = 0.81, τα δεδομένα δεν φαίνονται) ή έκφραση του mRNA (n = 13, r

s = -0,47, Ρ = 0,10, Σχήμα 3D) από την άλλη. επίπεδα Inhibin pro-αΟ ήταν διαθέσιμα μόνο για ένα ACC ασθενή με σπάνιες

Inha

παραλλαγές: αυτό προεμμηνοπαυσιακές γυναίκα ασθενής με τρεις σπάνιες παραλλαγές στο 5’UTR του

Inha

είχε ιδιαίτερα αυξημένη προ- ινχιμπίνης επίπεδα αΟ στα 3000 ng /l. (κανονικό & lt? 780 ng /l)

Συζήτηση

Η ινχιμπίνη α-υπομονάδος έχει ενοχοποιηθεί σε αδρενοκορτικοειδές ογκογένεση αφού παρατηρήθηκε ότι gonadectomized

Inha

– /- ποντίκια ανέπτυξαν καρκινώματα του φλοιού των επινεφριδίων με σχεδόν πλήρη διεισδυτικότητα [11]. Απώλεια

Inha

έκφραση έχει ανιχνευθεί σε μόνο μία μικρή υποομάδα των ανθρώπινων ΚΕΠ [16], [17], [18], [20], [28], [29], προβάλλοντας εναντίον ενός σημαντικού όγκου καταστολέα ρόλο του

Inha

στην ανθρώπινη φλοιού των επινεφριδίων καρκινογένεση. Αυτή είναι η πρώτη μελέτη που δείχνει ότι η μεγάλη διακύμανση στην

Inha

έκφραση στο ΚΕΠ προκαλείται εν μέρει από μεθυλίωση και κοινή γενετική παραλλαγή του

Inha

υποκινητή και δεν οφείλεται σε σπάνιες γενετικές παραλλαγές.

στο μοντέλο knockout ποντικών,

Inha

πιστεύεται ότι προδιαθέτουν subcapsular φλοιού των κυττάρων να υποβληθούν σε μια φαινοτυπική αλλαγή σε γονάδων-όπως κύτταρα [11], [12], [14]. Αυτό έχει υποτεθεί ότι προκαλείται από αυξημένη διαθεσιμότητα του τύπου III υποδοχέα ΤΟΡ-β βηταγλυκάνη που οδηγεί σε αυξημένο σηματοδότηση ΤΟΡ-β2 [13]. Η ταυτόχρονη αύξηση των κυκλοφορούντων επιπέδων γοναδοτροπίνης θα μπορούσε να εξασφαλίσει τον πολλαπλασιασμό του φλοιού των επινεφριδίων κυττάρων μέσω ενός κυκλίνη D2-εξαρτώμενο μονοπάτι [30]. Αν και ιστολογία αυτών των όγκων μοιάζει με αυτή του φλοιού των επινεφριδίων καρκίνωμα σε άνθρωπο [11] που είναι λειτουργικά πιο συγκρίσιμα με τα οιστρογόνα που εκκρίνουν γοναδικά κύτταρα που μοιάζουν [12]. Είτε τοπική νοκ ντάουν του

Inha

σε ανθρώπινα κύτταρα του φλοιού των επινεφριδίων συμβάλλει στην ογκογένεση του φλοιού των επινεφριδίων είναι άγνωστη. Δεδομένου ότι η εμφάνιση του ACC που δείχνει υπεροχή σε μετεμμηνοπαυσιακές γυναίκες που έχουν αυξημένα επίπεδα γοναδοτροπινών, ο μηχανισμός αυτός θα μπορούσε να συμβεί σε αυτή την υποομάδα των ασθενών.

Προηγούμενες μελέτες έκφρασης έχουν αποκαλύψει ότι το ινχιμπίνης α-υπομονάδος δεν εκφράζεται σε ένα μικρό υποσύνολο της ACC δειγμάτων [16], [17], [18], [20], [28], [29]. Σε αντίθεση,

in vivo

μελέτες έδειξαν αυξημένα επίπεδα της ινχιμπίνης α-υπομονάδος στον ορό των ασθενών με ACC [21], [31], [32]. Τα ευρήματα αυτά είναι πιθανό να είναι μια συνέπεια της μεγάλης ποικιλίας των όγκων

Inha

επίπεδα έκφρασης, στην παρούσα μελέτη σε μία 1000 φορές. Αιτίες της απώλειας ή μεταβολής

Inha

έκφρασης ήταν άγνωστη.

Μία προηγούμενη μελέτη έχει διερευνηθεί

Inha

γενετικές παραλλαγές σε ΚΕΠ. Longui

et al.

[19] μελέτησαν παιδιατρικούς ACC ασθενείς με βλαστική γραμμή

TP53

μεταλλάξεις και βρέθηκαν 3 σπάνια, ετερόζυγη

Inha

παραλλαγές σε 6 από 46 (13%) ασθενείς. Από τις τρεις αυτές νέες παραλλαγές, μία (G227A, rs12720061) στη συνέχεια αποδείχθηκε ότι είναι ένα κοινό SNP και δεν συμβαίνουν σε ACC ομάδα μας. Επιπτώσεις από τις άλλες δύο γενετικές παραλλαγές (P43A και A257T) είναι άγνωστη? δεν βρέθηκαν στην τρέχουσα έρευνα του σποραδικές ΚΕΠ. Είναι ενδιαφέρον ότι, η προαναφερθείσα μελέτη διαπίστωσε απώλεια της ετεροζυγωτίας (ΑΕ) στην περιοχή του

Inha

γονιδίου σε οκτώ από τις εννέα ΚΕΠ μελετηθεί [19], γεγονός που υποδηλώνει ότι ΑΕ θα μπορούσε να προκαλέσει μείωση των επιπέδων έκφρασης. Επιπλέον, συγκριτική γονιδιωματική υβριδοποίηση αναλύσεις της ανθρώπινης ΚΕΠ περιγράφεται σποραδικές χρωμοσωμική απώλεια του Inha

περιοχή στο 2q33-36, με υπεροχή σε όγκους της παιδικής ηλικίας [33], [34], [35]. Από την άλλη πλευρά, η ινχιμπίνη α-υπομονάδος είχε προηγουμένως δειχθεί ότι υπερεκφράζεται σε παιδιατρικούς ΚΕΠ [21].

Στην παρούσα μελέτη, δύο νέες γενετικές παραλλαγές ετερόζυγη παρερμηνεύσιμη ανιχνεύθηκαν. Η σερίνη σε υποκαταστάσεις φαινυλαλανίνη στα αμινοξέα 72 και 184 θα μπορούσαν να επηρεάσουν την δραστικότητα του προκύπτοντος ινχιμπίνης α-υπομονάδος, αλλά δεδομένου ότι η λειτουργία της ινχιμπίνης εις τα επινεφρίδια άνθρωπο είναι άγνωστος [36], είναι δύσκολο να διερευνήσει τις συνέπειες της δυνητικά μεταβληθεί δραστηριότητα. Ο όγκος που φέρουν την αλλαγή S184F εξέφρασε κανονικό επίπεδο

Inha

mRNA, αλλά η λειτουργία ή η υποβάθμιση της πρωτεΐνης θα μπορούσε να επηρεάζεται από την εισαγωγή της πλευράς βενζυλική δαχτυλίδι. Οι γενετικές παραλλαγές που βρίσκεται 179, 72 και 9 bps ανοδικά του ιντρονίου-εξονίου σύνορα μπορεί να οδηγήσει σε εναλλακτικό μάτισμα του

Inha

γονίδιο. Κυρίως, δεν ομόζυγη παραλλαγές εντοπίστηκαν, προβάλλοντας κατά συνολικής νοκ-άουτ του

Inha

οδηγώντας στο σχηματισμό ACC. Δυστυχώς, είχαμε μόνο έναν ασθενή με

παραλλαγές Inha

και ταυτόχρονα διαθέσιμες ανασταλτίνης στον ορό των επιπέδων προ-αΟ. Εδώ, τα υψηλά επίπεδα ορού βρέθηκαν παρά τρεις παραλλαγές στην περιοχή του υποκινητή αυξάνοντας την πιθανότητα της αυξημένης δραστηριότητας προαγωγού. Δεδομένης της χαμηλής συχνότητας των

Inha

γενετικές παραλλαγές σε σποραδική και οικογενή ΚΕΠ [19], αυτές οι αλλαγές του DNA μπορεί να συμμετέχει μόνο σε φλοιού των επινεφριδίων ογκογένεση σε ένα μικρό υποσύνολο των ACC ασθενών. Αρκετά κοινά

Inha

SNPs ανιχνεύθηκαν στους ασθενείς μας. Μικρά αλληλόμορφα του rs11893842 και rs758807 βρέθηκαν να συμβαίνουν σε ασθενείς ACC σε χαμηλότερες συχνότητες από προηγουμένως αναφερθεί σε υγιείς ομάδες, η οποία θα μπορούσε να υποδηλώνει ότι οι μεγάλες αλληλόμορφα αυτών των SNPs παίζουν ρόλο στην ογκογένεση επινεφριδίων. Περιέργως, ο ανήλικος αλληλόμορφο rs11893842, που βρίσκεται στην περιοχή του υποκινητή σε άμεση γειτνίαση με κρίσιμο ρυθμιστικές αλληλουχίες [25], [26], συνδέθηκε με χαμηλότερα επίπεδα

Inha

έκφραση mRNA. Η χαμηλότερη συχνότητα αυτού του SNP σε δείγματα ACC φαίνεται να αντικρούουν την υπόθεση ότι

Inha

είναι ένας καταστολέας όγκων σε ανθρώπινο ACC.

Η μεθυλίωση των περιοχών προαγωγού των ογκοκατασταλτικών γονιδίων είναι ένας κοινός μηχανισμός που εμπλέκονται στην καρκινογένεση [23]. Μειωμένη

Inha

έκφραση στο ΚΕΠ θα μπορούσε να προκληθεί από την αυξημένη μεθυλίωση του

Inha

υποκινητή. Η μεθυλίωση του φολλιστατίνης, που εμπλέκονται στην ακτιβίνη και ινχιβίνη μονοπάτι σηματοδότησης ως ανταγωνιστής ακτιβίνης, είχε προηγουμένως βρεθεί στο ACC ανθρώπινη κυτταρική σειρά H295R [37]. Δείχνουμε τώρα ότι ένα υποσύνολο των ανθρώπινων ΚΕΠ (21%) έχει μια αυξημένη αναλογία μεθυλίωση των πολλών CpGs στο

Inha

υποκινητή, σε αντίθεση με την πλειονότητα των ΚΕΠ που δείχνουν μειωμένη μεθυλίωση του

Inha

υποκινητή σύγκριση με το φυσιολογικό ιστό επινεφριδίων. Αυτό το ευρύ φάσμα της μεθυλίωσης αντιπροσωπεύει προφανώς για ένα μέρος της μεγάλης

Inha

εύρος έκφρασης, όπως φαίνεται από την αντίστροφη σχέση μεταξύ του

Inha

μεθυλίωση προαγωγού και

Inha

έκφραση του mRNA. Αυτή η επιγενετική τροποποίηση στο

Inha

υποκινητή και rs11893842 θα μπορούσε επίσης να συμμετέχουν σε ρυθμιστικό έλεγχο του

Inha

έκφραση στο άλλο

Inha

εκφράζοντα ιστούς, δηλαδή γονάδες και τον πλακούντα.

Τα επίπεδα μεθυλίωσης του

Inha

υποκινητή και

Inha

έκφραση του mRNA που δεν συνδέονται με ινχιμπίνη επίπεδα προ-αΟ ορό. Επιπλέον, βρήκαμε προηγουμένως καμία συσχέτιση μεταξύ της προ-αΟ επίπεδα και το στάδιο του όγκου ή του μεγέθους [21]. Ως εκ τούτου, τα επίπεδα αυτά θα μπορούσαν να είναι κατά κύριο λόγο εξαρτάται (μετα) μεταφραστικές τροποποιήσεις, τη δραστηριότητα των κυττάρων του όγκου, ή κάθαρση από την κυκλοφορία.

περιορισμούς Μελέτη περιλαμβάνουν το μικρό μέγεθος του δείγματος, η αβεβαιότητα σχετικά με την παρουσία της ΑΕ και κατά πόσον το μυθιστόρημα παραλλαγές είναι βλαστικής γραμμής ή σωματικά. Με δεδομένη την πολύ χαμηλή επίπτωση του

Inha

γενετικές παραλλαγές σε αυτό το σημαντικό σύνολο 37 ΚΕΠ, είναι πολύ απίθανο ότι

Inha

μεταλλάξεις παίζουν σημαντικό ρόλο στο σχηματισμό ACC στον άνθρωπο. Αν και ΑΕ δεν έχει μελετηθεί άμεσα σε αυτά τα δείγματα, η εμφάνιση των ετερόζυγη παραλλαγές στα ΚΕΠ ενάντιά πλήρη νοκ-άουτ του γονιδίου. Είναι σημαντικό, μόνο ομόζυγο

Inha

knock-out ποντίκια ανέπτυξαν όγκους του φλοιού των επινεφριδίων [11] ομολόγησε κατά ογκογόνο δυναμικό του αριθμού διαγραφή μόνο αντίγραφο. Τέλος, ζεύγη αλληλουχίας των φυσιολογικών και καρκινικών ιστών θα μπορούσε να αποκαλύψει αν οι μη-περιγραφείσα προηγουμένως παραλλαγές έχουν μια γραμμή φύτρου ή σωματικά προέλευση, αλλά αυτό δεν ήταν διαθέσιμη για την τρέχουσα μελέτη. Τα ευρήματα αποκαλύπτουν ένα νέο σύνδεσμο μεταξύ της μεθυλίωσης και έκφραση ινχιμπίνης. Knockdown της ινχιμπίνης α-υπομονάδος κατά τον σχηματισμό ACC μέσω μεθυλίωσης μπορεί να προδιαθέσει προς ομόφωνα παρακρινή ΤΟΡ-β ή ακτιβίνης δράση επί του φλοιού των επινεφριδίων πολλαπλασιασμό ή την στεροειδογένεση. Αποκατάσταση της ανασταλτίνης και φολιστατίνη [37] τα επίπεδα ACC δι’απομεθυλιώσεως πράκτορες θα μπορούσαν να συμβάλλουν στις αντι-πολλαπλασιαστική και στερεοειδογόνο επιδράσεις που παρατηρήθηκαν με αναστολέα της μεθυλίωσης του DNA 5-αζα-2′-δεοξυκυτιδίνης σε φλοιού των επινεφριδίων κύτταρα [38]. Αντιστρόφως, η μεθυλίωση του υποκινητή αναστολίνη θα μπορούσε επίσης να είναι μια κοινή ρυθμιστικό μηχανισμό της ινχιμπίνης έκφρασης σε γονάδων, των επινεφριδίων και ιστό πλακούντα και θεραπεία με παράγοντες απομεθυλίωσης θα μπορούσε να σκεφτεί να επηρεάσει αναστολίνη παραγωγή σε αυτά τα όργανα.

Εν κατακλείδι, παρεκκλίνουσα μεθυλίωση και κοινή γενετική παραλλαγή στην περιοχή προαγωγέα του

Inha

γονίδιο σχετίζονται με

Inha

έκφραση mRNA σε ανθρώπινο ACC. Αυτά γενετικών και επιγενετικών

Inha

αλλαγές θα μπορούσαν να συμβάλουν στην ανθρώπινη φλοιού των επινεφριδίων ογκογένεση, παρόμοια με την κατάσταση στη ποντικού

Inha

μοντέλο νοκ-άουτ. Σπάνιες

Inha

παραλλαγές δεν φαίνεται να εμπλέκονται στην παθοφυσιολογία της σποραδικής ACC.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

Μελέτη σύνολο δεδομένων

doi:. 10.1371 /journal.pone.0104944.s001

(XLSX)