Αφηρημένο

Ιστορικό

Η Alpha Β-κρυσταλλίνης (CRYAB) είναι μια πρωτεΐνη που λειτουργεί ως «μοριακός συνοδός» στη διατήρηση της ενδοκυτταρικής αρχιτεκτονικής και της κυτταρικής μεμβράνης. Επίσης, CRYAB είναι ιδιαίτερα αντιαποπτωτικού. Ανώμαλη έκφραση CRYAB είναι ένα προγνωστικό βιοδείκτη για τον καρκίνο του στόματος, ενώ η γονιδιωματική παραλλαγές της και η ένωση με την καρκινογένεση δεν έχουν μελετηθεί ποτέ.

Μεθοδολογία /εύρεση

Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι

CRYAB

πολυμορφισμών μονού νουκλεοτιδίου μπορεί να συνδέεται με τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου του στόματος. Σε αυτό το νοσοκομείο με βάση μελέτη, η ένωση του

CRYAB

Α-1215G (rs2228387), C-802G (rs14133) και intron2 (rs2070894) πολυμορφισμών με καρκίνο του στόματος σε έναν πληθυσμό Ταϊβάν ερευνήθηκε. Συνολικά, 496 ασθενείς με καρκίνο του στόματος και 992 την ηλικία και το φύλο υγιείς μάρτυρες ήταν ο γονότυπος και αναλύθηκαν. Μια πολύ διαφορετική κατανομή συχνοτήτων βρέθηκε στο

CRYAB

C-802G γονότυπους, αλλά όχι σε μια-1215G και intron2 γονότυπους, μεταξύ των καρκίνο του στόματος και του ελέγχου των ομάδων. Η

CRYAB

C-802G G αλληλόμορφο που ανατίθενται αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του στόματος (

P

= 1.49 × 10

-5). Οι ασθενείς που μεταφέρουν CG /GG στο

CRYAB

C-802G ήταν χαμηλότερης 5-ετή επιβίωση και υψηλότερο ποσοστό υποτροπής από εκείνες των CC (

P

& lt? 0,05).

συμπέρασμα /Σημασία

τα αποτελέσματά μας παρέχουν την πρώτη απόδειξη ότι το αλληλόμορφο G του

CRYAB

C-802G συσχετίζεται με το στόμα τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου και αυτός ο πολυμορφισμός μπορεί να είναι ένας χρήσιμος δείκτης για στοματική υποτροπής του καρκίνου και την επιβίωση πρόβλεψη για την κλινική αναφορά

Παράθεση:. Bau DT, Tsai CW, Lin CC, Tsai RY, Tsai ΜΗ (2011) Σύλλογος

Η Alpha Β-κρυστάλλινη

γενότυποι με τον καρκίνο του στόματος Ευαισθησία, επιβίωση, και την επανάληψη στην Ταϊβάν. PLoS ONE 6 (9): e16374. doi: 10.1371 /journal.pone.0016374

Επιμέλεια: Songtao Shi, University of Southern California, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 18 Σεπ 2010? Αποδεκτές: 18 του Δεκέμβρη 2010? Δημοσιεύθηκε: 7 Σεπτέμβρη του 2011

Copyright: © 2011 Bau et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από ερευνητικές επιχορηγήσεις από το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο (NSC 98-2320-Β-039-010-my3) (https://nscnt12.nsc.gov.tw/RS09/Modules/Personal/Personal_Researcher_index.aspx). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του στόματος, η οποία είναι η κύρια αιτία θανάτου και παραμόρφωση σε όλο τον κόσμο [1] – [4], έχει κατατάσσεται στην 4

ου καρκίνου στην Ταϊβάν ανδρικού πληθυσμού [5]. Υπάρχει επείγουσα ανάγκη για την ανάπτυξη ρουτίνας προεγχειρητική δείκτες για τα ανταλλακτικά ασθενείς με κακή πρόγνωση μετά από χειρουργική επέμβαση ή άλλη επεξεργασία και από την άλλη πλευρά, η αναγνώριση ασθενών που διατρέχουν κίνδυνο πρόωρης επανάληψης και να δικαιολογήσει την προφυλακτική εκτομή του λαιμού και του επικουρικού ταυτόχρονη χημειοραδιοθεραπεία καθώς και εκείνων που θα μπορούσαν να ωφεληθούν από διάφορες θεραπείες, ανεξάρτητα από το μέγεθος του όγκου τους ή στάσης. Εκείνοι που εντοπίζονται σε μεγαλύτερο κίνδυνο από του στόματος υποτροπής ή /και της μετάστασης του καρκίνου θα πρέπει να ανιχνεύονται νωρίτερα και παρακολουθούνται πιο συχνά για να απολαύσετε μεγαλύτερη διάρκεια ζωής με την ανάπτυξη χρήσιμων δεικτών για την πρόβλεψη της πρόγνωσης.

Η Alpha Β-κρυστάλλινη (CRYAB ) είναι ένα μέλος της οικογένειας των μικρών πρωτεϊνών θερμικού σοκ (sHSP) και ένα συνοδό μόριο που εκφράζεται σε διάφορους ιστούς [6], [7]. Πρόσφατη απόδειξη έχει αποδείξει ότι CRYAB παρουσιάζει όχι μόνο στο μάτι, αλλά και στην καρδιά, το δέρμα, τον εγκέφαλο, το νωτιαίο μυελό και τους ιστούς των πνευμόνων [6], [8]. Στα θηλαστικά, υπάρχουν τρεις κατηγορίες κρυστάλλινες: άλφα, βήτα και γάμμα, το καθένα συμβάλλοντας εξίσου με την ολική μάζα του φακού. Από τις πρωτεομική ή μελέτες επίπεδο πρωτεΐνης, έχει πρόσφατα αναγνωρισθεί ότι CRYAB μπορεί να έχει ένα ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου. Το 2005, αναφέρεται ότι

CRYAB

ήταν κάτω-ρυθμίζονται σε επίπεδο mRNA από ασθενείς με καρκίνο του στόματος σε σχέση με το φυσιολογικό βλεννογόνο του στόματος [9]. Ωστόσο, σε αντίθεση με την υψηλά έκφραση σε φυσιολογικό βλεννογόνο του στόματος, οι ασθενείς με αρνητικά ή χαμηλότερη CRYAB ανιχνεύθηκε σε καρκινικές θέσεις τους είχαν καλύτερα ποσοστά επιβίωσης ελεύθερη νόσου από εκείνους τους ασθενείς των οποίων οι όγκοι βάφονται έντονα. Αντιθέτως, έχει αναφερθεί ότι από την προβολή πρωτεομικής στην Ταϊβάν, CRYAB ήταν σημαντικά πάνω ρυθμισμένα στην πρωτογενή ιστό από ασθενείς με καρκίνο του στόματος [10]. Το 2010, παρόμοια αποτελέσματα αναφέρθηκαν σε ένα μοντέλο καρκίνου του στόματος ποντικούς μέσω επεξεργασίας ταυτόχρονα 8 εβδομάδων με 4-NQO (200 μg /mL) και η αρεκολίνη (500 μg /mL) [11]. Παρά τις διαφωνίες ανέκυψαν μεταξύ διαφορετικών ηθικής και των πληθυσμών που ερευνήθηκαν, η γονιδιωματική ιδιότητα του

CRYAB

και η σύνδεση μεταξύ του γονότυπου και του κλινικού αποτελέσματος είναι σε μεγάλο βαθμό άγνωστη.

Για να κατανοήσουμε τη γονιδιωματική ρόλο της

CRYAB

στον καρκίνο του στόματος, έχουμε επιλέξει τρεις πολυμορφισμούς μονών νουκλεοτιδίων (SNPs) του

CRYAB

, Α-1215G (rs2228387), C-802G (rs14133), ιντρόνιο 2 (rs2070894), και διερευνήθηκαν γονοτυπική κατανομή τους σε ένα μεγάλο Ταϊβάν πληθυσμό καρκίνο του στόματος. Επιπλέον, οι δύο κλινικές εκβάσεις συμβάλλουν στο υψηλότερο ποσοστό θανάτου από καρκίνο του στόματος, μετάσταση και την επανάληψη, αναλύθηκαν των ενώσεών τους με

CRYAB

γονότυπους.

Αποτελέσματα

Η τα κλινικά χαρακτηριστικά της στοματικής ασθενών με καρκίνο και των ελέγχων παρουσιάζονται στον πίνακα 1. δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των δύο ομάδων σε ηλικία και φύλο τους, ενώ οι ασθενείς είναι πολύ υψηλότερα εκτεθειμένα στους περιβαλλοντικούς παράγοντες επικίνδυνη για τον καρκίνο του στόματος στην Ταϊβάν, το κάπνισμα, το αλκοόλ συνήθειες κατανάλωσης οινοπνεύματος και betel λίρες μάσημα (Πίνακας 1). Οι συχνότητες των γονοτύπων και αλληλόμορφα για το

CRYAB

Α-1215G, C-802G, και ιντρόνιο 2 για τους συμμετέχοντες παρουσιάζονται στον Πίνακα 2. κατανομή γονότυπων των διαφόρων γενετικών πολυμορφισμών του

CRYAB

C-802G είναι σημαντικά διαφορετική μεταξύ καρκίνο του στόματος και του ελέγχου των ομάδων (

P

& lt? 0,05), ενώ εκείνες για το A-1215G ή ιντρόνιο 2 δεν ήταν σημαντική (

P

& gt? 0,05) ( Πίνακας 2). Επίσης, οι κατανομές αλληλόμορφο του

CRYAB

C-802G (

P

= 1,49 * 10

-5, OR = 1.51, 95% CI = 1,25 – 1,83), όχι εκείνες Α-1215G (

P

= 0,8593, OR = 0,91, 95% CI = 0,31 – 2,62) ή intron2 (

P

= 0,1366, OR = 1,16, 95% CI = 0.95- 1,41), έχει βρεθεί ότι σχετίζεται με την ευαισθησία για καρκίνο του στόματος (Πίνακας 2). Για να συνοψίσω, το αλληλόμορφο G και GG ή CG γονότυπο του

CRYAB

C-802G σχετίζονται με το στόμα τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου και μπορεί να είναι βιοδείκτες για στοματική ανίχνευση του καρκίνου. Ο εκπρόσωπος περιορισμός που βασίζεται στην PCR αναλύσεις για το

CRYAB

C-802G πολυμορφισμοί φαίνονται στο Σχήμα 1.

Μ: 100 bp DNA δείκτη μεγέθους, G /G: ένζυμο δύσπεπτο ομοζυγώτες, C /G: ετεροζυγώτες, και C /C:. ενζύμου εύπεπτο ομοζυγώτες

η

η

Για την αξιολόγηση της προγνωστικής αξίας των

CRYAB

γονότυπους, τις σχέσεις μεταξύ των ελεύθερη νόσου επιβίωση , υποτροπή, μετάσταση και

CRYAB

C-802G γονότυπους αναλύθηκαν. Πρώτον, οι ασθενείς με καρκίνο του στόματος που φέρει το

CRYAB

C-802G CG είχε μια σημαντική τάση προς μειωμένη επιβίωση ελεύθερη νόσου, και οι ασθενείς που φέρουν

CRYAB

C-802G GG είχε τη συντομότερη ασθένειες δωρεάν περίοδος επιβίωσης (Σχήμα 2). Η σύντομη ελεύθερη νόσου μπορεί να αντανακλά κατά κύριο λόγο την τοπική υποτροπή. Περισσότερο από το 80% (30 από 37) των ασθενών που φέρουν

CRYAB

C-802G GG είχε κομβικό υποτροπή χωρίς στάδιο προχωρημένο Ν (N0-1) κατά την πρώτη διάγνωση. Είναι ενδιαφέρον ότι, οι ασθενείς θα έχουν συχνή υποτροπή και υψηλής δεύτερο επιτόκια της πρωτογενούς όγκου μέσα στα επόμενα πέντε χρόνια. Δεύτερον, σε σύγκριση με εκείνους με CC γονότυπο, οι ασθενείς που φέρουν

CRYAB

C-802G CG ή GG γονότυπο είχαν υψηλότερο ποσοστό υποτροπής εντός των επόμενων πέντε ετών (

P

= 0,228, OR = 2,08 , 95% CI = 1,11 – 3,92), αλλά όχι ένα υψηλότερο ποσοστό μετάστασης (Πίνακας 3).

η στατιστική ανάλυση έγινε με τη δοκιμασία log-rank.

η

συζήτηση

η μελέτη είχε ως στόχο να διερευνήσει τη σύνδεση των

CRYAB

γονότυπους και clinicopathopogical διακυμάνσεις στην Ταϊβάν ασθενείς με καρκίνο του στόματος. Έχει πρόσφατα αναγνωριστεί ότι CRYAB πρωτεΐνη μπορεί να παίζει ρόλο στην ανάπτυξη καρκίνου του στόματος. Σε προηγούμενη βιβλιογραφία, αναφέρθηκε ότι CRYAB ήταν σημαντικά πάνω από εκφράζεται στον ιστό πρωτοπαθούς από ασθενείς με καρκίνο του στόματος στην Ταϊβάν [10]. Το 2010, σε μια γλώσσα ποντικούς καρκίνο μοντέλο πραγματοποιηθεί με επεξεργασία ταυτόχρονα 8 εβδομάδων με 4-NQO (200 μg /mL) και η αρεκολίνη (500 μg /mL) και να αποσύρουν στις ακόλουθες 20 εβδομάδες τα κύτταρα από τις περιοχές του όγκου είχαν υψηλότερα έκφραση των CRYAB από τα ομόλογό κύτταρα των ψευδο-αγωγή ποντικούς [11]. Ωστόσο, υπήρχαν και κάποιες διαπιστώσεις αμφισβήτηση αυτή τη ρύθμιση σύνδεσης [9], [12]. Αυτό μπορεί να οφείλεται στην εν λόγω διαφορετικών πληθυσμών διαφορετικών ηθικής, γενετικό υπόβαθρο, καλλιέργειες, και η έκθεση του περιβάλλοντος ερευνήθηκαν. Από την σκοπιά των μελετών που βασίζονται κυτταρική γραμμή, καταδείχθηκε ότι η υπερέκφραση του CRYAB σε μετασχηματισμένα ανθρώπινα αθανατοποιημένα επιθηλιακά κύτταρα μαστού αποδεικνύεται νεοπλασματική χαρακτηριστικά και ανάπτυξη του αυλού και οι αλλαγές αυτές ανεστάλησαν όταν η έκφραση CRYAB σίγησε χρησιμοποιώντας παρεμβολή RNA [13]. Η υπερέκφραση του CRYAB σε ανθρώπινα μαστικά επιθηλιακά κύτταρα σχηματίζονται επίσης επεμβατικές μαστικών καρκινωμάτων σε γυμνούς ποντικούς, παράγοντα που επάγεται επιδερμικού αυξητικού και αγκύρωση ανάπτυξη ανεξάρτητη, αυξημένη κυτταρική μετανάστευση και εισβολή, και ενεργοποίησε το /εξωκυτταρικό κινάση σήματος ρυθμιζόμενη κινάση πρωτεΐνης που ενεργοποιείται από μιτογόνο (MEK /ERK ) οδού υποδεικνύοντας ότι CRYAB θα μπορούσε να θεωρηθεί μια ογκοπρωτεΐνη [14]. Ωστόσο, δεν υπάρχει ακόμη καμία μελέτη που πραγματοποιήθηκε από το επίπεδο του DNA να διερευνήσει το σημαντικό ρόλο του

CRYAB

στην καρκινογένεση.

Με βάση τα προηγούμενα στοιχεία διαφορικής έκφρασης, ήμασταν έντονα ενδιαφέρονται και επέλεξε το τρία SNPs του

CRYAB

, δύο στην περιοχή υποκινητή (Α-1215G και C-802G) και μία στο ιντρόνιο 2 (intron2), για να διερευνήσει τις ενώσεις τους με από του στόματος κίνδυνο καρκίνου και την πρόγνωση. Βρήκαμε ότι

CRYAB

C-802G πολυμορφισμός, δεν Α-1215G ή intron2, συσχετίστηκε με αυξημένο κίνδυνο για καρκίνο του στόματος (Πίνακας 2), και το τοπικό ποσοστό υποτροπής (Πίνακας 3). Επίσης, οι ασθενείς με καρκίνο του στόματος που μεταφέρουν GG ή CG στην πολυμορφική θέση είχαν χαμηλότερο ποσοστό επιβίωσης 5-ετών από εκείνα που φέρουν ομόλογο CC (Εικόνα 2). Είναι ενδιαφέρον ότι, οι ασθενείς που φέρουν GG στο

CRYAB

C-802G καταγράφηκαν να έχουν πολύ πιο συχνή υποτροπή και το δεύτερο πρωτεύον τιμές. Αυτό μπορεί να σημαίνει ότι

CRYAB

C-802G θα μπορούσε να είναι μια predicator για στοματική κατεύθυνση εξέλιξης του καρκίνου. Ενδεχομένως ο γενετικός πολυμορφισμός επηρεάζει άμεσα τις διαφορικές μορφές της πρωτεΐνης CRYAB, στο έκφρασης ή /και λειτουργικό επίπεδο, όσο και έμμεσα ανισορροπίες τις συνήθεις λειτουργίες των άλλων γονιδίων και πρωτεϊνών CRYAB σχετίζονται, η οποία μπορεί να οδηγήσει στην στοματική καρκινογένεση. Ταυτόχρονα, η μεταβολή της έκφρασης πρωτεΐνης CRYAB στην εξωκυτταρική μήτρα μπορεί να προκαλέσει τις λεπτές αλλαγές του μικροπεριβάλλοντος κοντά στην πρωτογενή του στόματος όγκου, για την επανάληψη, αλλά όχι για την μετάσταση. Αυτό μπορεί να δικαιολογηθεί από το ρόλο του CRYAB στη σηματοδότηση κινάσης τυροσίνης, που θα μπορούσε να μεταβληθεί εύκολα σε καρκινικά κύτταρα. Η μειωμένη έκφραση του CRYAB έχει πρώτον αναφερθεί ότι συνδέεται με μια αρνητική πρόγνωση το 2003 [15].

Περίπου το 10% από το κεφάλι πρώιμου σταδίου και των ασθενών ακανθοκυτταρικό καρκίνωμα αυχένα αναπτύσσουν τοποπεριοχική επανάληψη και 15% έως 25 % αναπτύσσουν δεύτερο πρωτογενείς όγκους εντός 5 ετών από την αρχική διάγνωση [16], [17]. Όπως διαγνωστικές και θεραπευτικές προσεγγίσεις συνεχίσει να αναπτύσσει την ικανότητα να προβλέψει με ακρίβεια δεύτερου πρωτοπαθούς όγκου /υποτροπών σε ασθενείς καρκίνο του στόματος πρώιμου σταδίου θα διευκολύνει την εντατική παρακολούθηση ή στοχευμένες παρεμβάσεις για τους ασθενείς υψηλού κινδύνου και ως εκ τούτου μείωση της θνησιμότητας και νοσηρότητας. Σε αυτή τη μελέτη, οι ασθενείς που φέρουν

CRYAB

C-802G CG ή GG γονότυπο βρέθηκαν να έχουν υψηλότερο ποσοστό υποτροπής εντός των επόμενων πέντε ετών, αλλά όχι υψηλότερο ποσοστό μετάστασης (Πίνακας 3).

Η εμφάνιση δεύτερων πρωτογενών όγκων μπορεί να οφείλεται στις λεπτές μεταβολές του μικροπεριβάλλοντος που έχουν συσσωρευτεί για να φτάσει το όριο της ογκογένεσης στους ασθενείς υψηλού κινδύνου γονότυπους, όπως GG σε

CRYAB

C-802G. Η λειτουργική μελέτη αυτού του SNP και πως η πρωτεΐνη CRYAB αλληλεπιδρά με πρωτεΐνες στο εξωκυττάριο υπόστρωμα σε στοματική καρκινογένεση χρειάζονται επίσης περαιτέρω έρευνες. Στο μέλλον, οι συλλογικές στοιχεία από μεγαλύτερες και διαφορετικές ομάδες που χρησιμοποιούν αυτό το SNP μπορεί να βοηθήσει στην προφορική σταδιοποίηση του καρκίνου, πρόβλεψη κατεύθυνση έκβαση, και πιο αποτελεσματική και ολοκληρωμένη στρατηγική.

Είναι κατ ‘αρχάς διαπίστωσε ότι η SNP στην περιοχή υποκινητή των

CRYAB,

C-802G, συνδέεται με το στόμα ευαισθησία στον καρκίνο, την επανάληψη, και 5-ετή επιβίωση ελεύθερη νόσου, αλλά όχι μετάσταση. Από κακή τοπική-περιφερειακή έλεγχο και εύκολη επανάληψης είναι οι κύριες αιτίες των αποτυχιών της θεραπείας με από του στόματος θεραπεία του καρκίνου, τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης μπορεί να παρέχει περισσότερες πληροφορίες για την έξυπνη καθοδήγηση, όχι μόνο για την πρόληψη, αλλά και τη φροντίδα, τη θεραπεία και την παρακολούθηση των ασθενών διατρέχουν μεγαλύτερο κίνδυνο υποτροπής του καρκίνου και χαμηλότερο ποσοστό επιβίωσης 5 ετών.

Υλικά και Μέθοδοι

πληθυσμός μελέτης και δείγμα συλλογής

Τετρακόσια ενενήντα έξι ασθενείς με καρκίνο διαγνωστεί με από του στόματος καρκίνο είχαν προσληφθεί στα εξωτερικά ιατρεία γενικής χειρουργικής μεταξύ 2005-2008 στην Κίνα Ιατρικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο, Taichung, Ταϊβάν, Δημοκρατία της Κίνας. Τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών περιλαμβάνουν ιστολογικές λεπτομέρειες ήταν όλοι βαθμολογούνται και ορίζονται από τους χειρουργούς εμπειρογνώμονα. Όλοι οι ασθενείς συμμετείχαν εθελοντικά, ολοκλήρωσε ένα αυτοδιοικούμενο ερωτηματολόγιο και έδωσαν δείγματα περιφερικού αίματος. Διπλή αριθμός των μη καρκινικών υγιείς εθελοντές ως έλεγχοι επιλέχθηκαν με ταιριάζουν ως προς την ηλικία, το φύλο και ορισμένες ανοχές μετά την αρχική τυχαία δειγματοληψία από τον διαγνωστικό Εξέταση κοόρτης του νοσοκομείου. Τα κριτήρια αποκλεισμού της ομάδας ελέγχου που περιλαμβάνονται προηγούμενη κακοήθεια, μετάσταση καρκίνου από άλλα ή άγνωστης προέλευσης, καθώς και κάθε οικογενειακή ή γενετικές ασθένειες. Και οι δύο ομάδες τελειώσει ένα σύντομο ερωτηματολόγιο το οποίο περιελάμβανε κάποια συγχωροχάρτια και καταγράφηκαν. Η μελέτη μας εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review της Κίνας Ιατρικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο και γραπτές-ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους συμμετέχοντες.

δοκιμασίες Γονοτυπικές

Το γονιδιακό DNA από τον καρκίνο του στόματος και του ελέγχου της υγείας άτομα ήταν παρασκευάζονται από λευκοκύτταρα περιφερικού αίματος χρησιμοποιώντας ένα QIAamp Blood Mini Kit (Blossom, Ταϊπέι, Ταϊβάν) και περαιτέρω επεξεργασία σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες [18] – [24]. Εν συντομία, οι ακόλουθοι εκκινητές χρησιμοποιήθηκαν για

CRYAB

Α-1215G (rs2228387): 5′-ACCTGTTGGAGTCTGATCTT-3 ‘και 5′-ATGCACCTCAATCACATCTC-3’? για

CRYAB

C-802G (rs14133): 5′-TTGACCATCACTGCTCTCTT-3 ‘και 5′-TTGGCAATGTGACACATACC-3’? για

CRYAB

ιντρόνιο 2 (rs2070894): 5′-GTCTAGAAGACTAAGTTAGG-3 ‘και 5′-AGAGAAGTCACAACTCAAGT-3’? Διεξήχθησαν οι ακόλουθες συνθήκες ποδηλασίας: ένας κύκλος στους 94 ° C για 5 λεπτά? 35 κύκλοι των 94 ° C για 30 s, 55 ° C για 30 s, και 72 ° C για 30 s? και μία τελική επέκταση στους 72 ° C για 10 λεπτά. Τα προϊόντα της PCR μελετήθηκαν μετά από πέψη με

Fau εγώ

,

Fat Ι

, και

DPN εγώ

, ένζυμα περιορισμού για το A-1215G (cut από 212 bp Ένας τύπος σε 67 + 145 bp τύπου G), C-802G (cut από 363 bp τύπου G σε 85 + 278 bp τύπου C), και ιντρόνιο 2 (περικοπή από 363 bp τύπου Τ σε bp τύπου 74 + 339 C), αντίστοιχα.

Στατιστικές αναλύσεις

Στη μελέτη μας,

o

μόνον οι εν λόγω αγώνες με όλους τους SNPs δεδομένων (υπόθεση /έλεγχος = 496/992) επελέγησαν σε τελική ανάλυση. Για να εξασφαλιστεί ότι οι έλεγχοι που χρησιμοποιήθηκαν ήταν αντιπροσωπευτικό του γενικού πληθυσμού και να αποκλειστεί η πιθανότητα λάθους του γονότυπου, την απόκλιση των συχνοτήτων γονοτύπου του

CRYAB

SNPs στα θέματα ελέγχου από αυτές που αναμένονται υπό την ισορροπία Hardy-Weinberg ήταν αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας το τεστ καλοσύνη-of-fit. διπλής όψης Chi-square test Pearson ή ακριβές τεστ του Fisher (όταν ο αναμενόμενος αριθμός σε κάθε κελί ήταν λιγότερο από πέντε) χρησιμοποιήθηκε για τη σύγκριση της κατανομής των

CRYAB

γονότυπων μεταξύ ασθενών και μαρτύρων.

Το κύριο αποτέλεσμα ήταν ελεύθερη νόσου επιβίωση. Τα τελικά σημεία περιλάμβαναν τοπική υποτροπή του καρκίνου και μετάσταση. Συνέχεια πληροφορίες ήταν διαθέσιμες για όλους τους ασθενείς στο χρονικό σημείο των 5 ετών. Ελεύθερη νόσου χρόνο επιβίωσης υπολογίστηκε από την ημερομηνία της αγωγής μέχρι τη στιγμή της επανάληψης, που ορίζεται ως υποτροπή της νόσου στον ίδιο χώρο ή την ανίχνευση μεταστάσεων, συμπεριλαμβανομένων επανεμφάνιση των λεμφαδένων του τραχήλου. Οι γενότυποι κωδικοποιήθηκαν υποθέτοντας μια αλληλόμορφο δόσης-επίδρασης (CC άγριου τύπου = 0, CG ετερόζυγη φορέας του μεταλλαγμένου αλληλόμορφου = 1, GG ομόζυγο φορέας του μεταλλαγμένου αλληλόμορφου = 2). καμπύλες ελεύθερη νόσου επιβίωση παρήχθησαν με τη μέθοδο Kaplan-Meier και επιβλέπεται από την δοκιμασία log-rank. Το επίπεδο σημαντικότητας ορίστηκε στο

P

& lt?. 0.05