Αφηρημένο

Η πρωτεΐνη κινητήρα κινεσίνη υπεροικογένεια πρωτεϊνών (KIFS) εμπλέκονται στην εξέλιξη του καρκίνου. Η εξάντληση ενός από τα KIFS, KIF14, θα μπορούσε να καθυστερήσει τη μετάβαση μετάφασης-to-ανάφαση, με αποτέλεσμα ένα διπύρηνα κατάσταση, η οποία ενισχύει την εξέλιξη του όγκου? Ωστόσο, η ακριβής συσχέτιση μεταξύ KIF14 και εξέλιξη του καρκίνου παραμένει ασαφής. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιώντας την απώλεια της ετεροζυγωτίας και σειρά αναλύσεων συγκριτικής γονιδιωματικής υβριδοποίησης, παρατηρήσαμε μια απώλεια 30% στις περιοχές γύρω KIF14 στο χρωμόσωμα 1 q σε αδενοκαρκινώματα πνεύμονα. Επιπλέον, τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης του KIF14 σε 122 αδενοκαρκινώματα πνεύμονα έδειξε επίσης ότι περίπου το 30% των αδενοκαρκινωμάτων έδειξε KIF14 κάτω ρύθμιση σε σύγκριση με την έκφραση στα βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα των παρακείμενων φυσιολογικά αντίστοιχα. Επιπλέον, η μειωμένη έκφραση του mRNA KIF14 ή πρωτεΐνες συσχετίστηκε με κακή συνολική επιβίωση (Ρ = 0.0158 και & lt? 0,0001, αντίστοιχα), και τα επίπεδα της πρωτεΐνης ήταν επίσης αντιστρόφως ανάλογη με μετάσταση (Ρ & lt? 0,0001). Η υπερέκφραση του KIF14 στα κύτταρα αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα ανέστειλε αγκύρωση-ανεξάρτητη ανάπτυξη

in vitro

και ξενομοσχεύματος ανάπτυξη του όγκου

in vivo

. Η υπερέκφραση και σίγηση του KIF14 ανέστειλε επίσης ή ενισχυμένη μετανάστευση καρκινικών κυττάρων, εισβολή και την πρόσφυση στο πρωτεϊνών εξωκυτταρικής μήτρας λαμινίνη και το κολλαγόνο IV. Επιπλέον, εντοπίσαμε τα μόρια προσκόλλησης καντερίνη 11 (CDH11) και μόριο προσκόλλησης κυττάρων μελανώματος (MCAM) ως φορτίο σε KIF14. Η υπερέκφραση και σίγηση του KIF14 ενισχυμένη ή μείωσε την πρόσληψη του CDH11 στο κλάσμα μεμβράνης, γεγονός που υποδηλώνει ότι KIF14 μπορεί να δράσει μέσω μορίων προσκόλλησης πρόσληψη στην κυτταρική μεμβράνη και διαμόρφωση κυτταρικής προσκόλλησης, μεταναστευτικών και επεμβατική ιδιότητες. Έτσι, KIF14 ίσως αναστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση του καρκίνου σε αδενοκαρκινώματα πνεύμονα

Παράθεση:. Hung Ρ-F, το Χονγκ T-M, Hsu Y-C, Chen Η-Υ, Chang Υ-L, Wu C-Τ, et al. (2013) Η πρωτεΐνη KIF14 Motor αναστέλλει την ανάπτυξη των όγκων και του καρκίνου μετάσταση στον πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα. PLoS ONE 8 (4): e61664. doi: 10.1371 /journal.pone.0061664

Επιμέλεια: Wael El-Rifai, Vanderbilt University Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 18η Οκτωβρίου 2012? Αποδεκτές: 12 Μαρτίου 2013? Δημοσιεύθηκε: 23 Απρ 2013

Copyright: © 2013 Hung et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε μέσω επιχορηγήσεων από το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο της Δημοκρατίας της Κίνας (NSC98-2628-B-002-086-my3, NSC100-2321-B-002-071, και NSC100-3112-Β-006-005) και από Εθνικούς Πανεπιστήμιο της Ταϊβάν (NTU101R7601-2 και NTU102R7601-2). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο κινεσίνης (KIF) αποτελείται υπεροικογένειας πρωτεϊνών μοτέρ που οργανίδια μεταφοράς, πρωτεΐνες και mRNA σε αδενοσίνη-5′-τριφωσφορική (ΑΤΡ) – και μικροσωληνίσκων τρόπο που εξαρτάται από [1], [2]. Υπάρχουν περισσότερα από 45 μέλη της υπερ-οικογένειας KIF, τα οποία χωρίζονται σε 13 υποοικογένειες ανάλογα με τον προσανατολισμό, τον τομέα και η λειτουργία τους [3]. KIF14, ένα μέλος της οικογένειας κινεσίνης-3, περιέχουν έναν κινητήρα και έναν τομέα forkhead που σχετίζεται, και αυτή η πρωτεΐνη παίζει σημαντικό ρόλο στην κυτοκίνηση και στο διαχωρισμό, congression και την ευθυγράμμιση των χρωμοσωμάτων [4] – [6]. Η εξάντληση των KIF14 θα μπορούσε να προκαλέσει μια χρονική καθυστέρηση στη μετάβαση μετάφασης-to-ανάφαση, αναστέλλουν κυτταροκίνηση και να παράγει ένα διπύρηνα κατάσταση [7], [8]. Περαιτέρω μελέτες έχουν δείξει ότι KIF14 θα μπορούσε να προωθήσει την αποτελεσματική κυτταροκίνηση μέσω αλληλεπιδράσεων με κινάση κίτρου (CIK) και την πρωτεΐνη ρυθμιστή της κυτοκίνησης 1 (PRC1) [7].

κυτταροκίνηση είναι το τελικό στάδιο του κυτταρικού κύκλου στην οποία το δύο θυγατρικά κύτταρα εντελώς ξεχωριστά [9]. Αύξηση στοιχεία δείχνουν ότι παρεκκλίνουσα κυτοκίνηση μπορεί να δημιουργήσει αστάθεια τετραπλοειδής κύτταρα, οδηγώντας σε ανευπλοειδία, η οποία αναπτύσσει τελικά σε καρκινογένεση [9] – [11]. Πολλά συστατικά που ρυθμίζουν την κυτοκίνηση έχουν ταυτοποιηθεί, και μερικά μόρια, συμπεριλαμβανομένων KIFS, έχουν σαφώς συνδεθεί με τον καρκίνο. Για παράδειγμα, KIF2 και KIF15 έχουν ταυτοποιηθεί ως αντιγόνα όγκου στον καρκίνο του μαστού [12], [13]? KIF13A υπερεκφράζεται σε ορισμένους ρετινοβλαστώματα [14]? KIF20A είναι ρυθμισμένα προς τα πάνω σε καρκίνο του παγκρέατος [15]? KIF3 και KIF4 έχουν ταυτοποιηθεί ως γονίδια καταστολής όγκων σε γαστρικό καρκίνο [16], [17]? και η έκφραση του KIF10 μειώνεται σε ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [18]. Επιπλέον, έχει αναφερθεί ότι ορισμένα μέλη της οικογένειας KIF, συμπεριλαμβανομένων KIF3, KIF4 και KIF22, έχουν συγκρουόμενα ρόλους στην ογκογένεση [16], [17], [19] – [23].

καρκίνος του πνεύμονα είναι η πιο κοινή αιτία θανάτου από καρκίνο, ιδίως στην Ασία, και τους λογαριασμούς για το 17% του συνόλου των θανάτων από καρκίνο σε όλο τον κόσμο [24], [25]. Πρόσφατες μελέτες έχουν επικεντρωθεί στο ρόλο των πρωτεϊνών κινεσίνης, όπως KIF3, KIF5B και KIF14, σε εξέλιξης του καρκίνου του πνεύμονα? Ωστόσο, οι λεπτομερείς μηχανισμοί που διέπουν τις λειτουργίες αυτών των πρωτεϊνών παραμένουν ασαφείς [16], [26] – [28]. Ως εκ τούτου, ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί ο ρόλος των πρωτεϊνών κινεσίνη κινητήρα στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα.

Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε τον πιθανό ρόλο των KIF14 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα, χρησιμοποιώντας την απώλεια της ετεροζυγωτίας (ΑΕ) και σειρά συγκριτικών γονιδιωματικής υβριδοποίησης (CGH) αναλύσεις των 138 αδενοκαρκινώματα πνεύμονα σε χρωμόσωμα 1 Q, η οποία είναι όπου KIF14 βρίσκεται. Επιπλέον, εξετάσαμε επίσης την πρωτεΐνη έκφραση του KIF14 σε δείγματα ιστών από ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα 122 χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημική χρώση. Η έκφραση KIF14 mRNA και πρωτεΐνης συσχετίστηκαν με τα συνολικά ποσοστά επιβίωσης και τη μετάσταση σε αυτούς τους ασθενείς. Έχουμε αποσυντίθενται επίσης το μοριακό μηχανισμό του KIF14, που διαμεσολαβεί την καταστολή των καρκινικών κυττάρων εισβολής, τη μετανάστευση και προσκόλληση. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι KIF14 μπορεί να αναστείλει την ανάπτυξη του όγκου και τη μετάσταση του καρκίνου σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα.

Αποτελέσματα

KIF14 έκφραση σε πνεύμονα Καρκινοπαθών

Για την αξιολόγηση του δυνητικού ρόλου της κινεσίνης στον πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα, εξετάσαμε πρώτα τη συχνότητα της ΑΕ σε χρωμοσωμάτων χρησιμοποιώντας δείκτες μικροδορυφόρων, και παρατήρησε ότι ΑΕ συνέβη μεταξύ των δεικτών D1S1660 (40,0% ΑΕ και 86,7% μικροδορυφορικού αστάθεια (MI)) και D1S213 (31,6% ΑΕ και 60,5% ΜΙ), οι οποίες είναι που βρίσκεται κοντά KIF14 επί 1q χρωμόσωμα (Σχήμα 1Α). Για να επιβεβαιώσουν αυτά τα αποτελέσματα, πραγματοποιήσαμε υψηλής πυκνότητας array CGH σε μια ανεξάρτητη ομάδα των 138 αδενοκαρκινώματα πνεύμονα [29]. Τα δεδομένα έδειξαν ότι σχεδόν το 25% (22,5% και 26,8%) απώλεια από τους δύο ανιχνευτές μέσα KIF14 εντοπισμός και 5% (2,9% και 6,5%) κέρδος εκδηλωθεί σε ασθενείς (Σχήμα 1 Β και Πίνακας 1).

(α) απώλεια της ετεροζυγωτίας (ΑΕ) και αστάθεια μικροδορυφόρου (MI) αναλύει κοντά στην τοποθεσία της KIF14 στην πρωτοβάθμια αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα. Χρωμόσωμα 1 ιδεόγραμμα που δείχνει τις μικροδορυφορικών δεικτών χαρτογραφείται στο 1ο τρίμηνο, σύμφωνα με τη βάση δεδομένων τοποθεσία? ο αριθμός και το ποσοστό των ασθενών υποδεικνύονται. (Β) Τα προφίλ μεταβολή αριθμού αντιγράφων του χρωμοσώματος 1. Η θέση KIF14 υποδεικνύεται εντός χρωμόσωμα 1q32.1. (Γ) Το πρότυπο έκφρασης της πρωτεΐνης του KIF14 εξετάστηκε χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία με αντισώματα αντι-KIF14 σε φυσιολογικά βρογχικά βλεννογόνο (αριστερό πάνελ) και πρωτογενή δείγματα όγκου (μεσαία και δεξιά πάνελ). Αρχική μεγέθυνση 200 ×.

Η

Στη συνέχεια εξετάσαμε την έκφραση του KIF14 σε δείγματα ιστών και των παρακείμενων φυσιολογικών ιστών από 122 αδενοκαρκινώματα πνεύμονα χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία. Η ειδικότητα του αντισώματος KIF14 επιβεβαιώθηκε μέσω του ανταγωνισμού αντιγόνου KIF14 χρησιμοποιώντας ανοσοκηλιδώσεως και ανοσοϊστοχημεία (Εικόνα S1), και τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών αυτών συνοψίζονται στον Πίνακα 2. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι KIF14 έντονα εκφράζεται σε φυσιολογικά βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα (Σχήμα 1C ). Περαιτέρω ανάλυση έδειξε ότι 30,3% των αδενοκαρκινωμάτων έδειξε KIF14 ρύθμιση προς τα κάτω στους όγκους σε σύγκριση με τα βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα σε γειτονικό φυσιολογικό ομολόγους και ότι 18,0% των αδενοκαρκινωμάτων έδειξε υψηλότερη έκφραση KIF14 ό, τι στην κανονική βρογχικό βλεννογόνο (Πίνακας 1). Στο σύνολό τους, τα αποτελέσματα αυτά υποδηλώνουν ότι KIF14 θα μπορούσαν να έχουν μεγαλύτερη απώλεια (~ 30%) από ό, τι κέρδος (3-6%) σε αδενοκαρκινώματα πνεύμονα.

Η

χαμηλή έκφραση του KIF14 ήταν σχετίζονται με την κακή συνολική επιβίωση σε αδενοκαρκίνωμα πνεύμονα ασθενείς

Για να διερευνηθεί περαιτέρω αν η έκφραση της KIF14 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα συσχετίζεται με τις κλινικές εκβάσεις, τα επίπεδα του mRNA της KIF14 σε δείγματα όγκων από ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα 53 προσδιορίστηκαν με τη χρήση του πραγματικού χρόνου πολυμεράσης ποσοτική ανάστροφης μεταγραφάσης αλυσιδωτή αντίδραση. Τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών αυτών συνοψίζονται στον Πίνακα S1. Οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση KIF14 παρουσίασαν χειρότερη συνολική επιβίωση από ό, τι τα άτομα με υψηλή έκφραση KIF14 (Εικόνα 2Α, P = 0.0158). αναλύσεις πολυμεταβλητή Cox αναλογική παλινδρόμηση κινδύνου έδειξε ότι η έκφραση KIF14 (αναλογία κινδύνου [HR] = 0,341, 95% διάστημα εμπιστοσύνης [CI] = 0,179 – 0,652? P = 0,0011) και το στάδιο της νόσου (HR = 1,962, 95% CI = 1,311 – 2,936 ? Ρ = 0.0010) ήταν ανεξάρτητοι παράγοντες που σχετίζονται με τη συνολική επιβίωση των ασθενών αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα (Πίνακας S2)

(Α) έκφραση mRNA KIF14 χαμηλό συσχετίστηκε με κακή συνολική επιβίωση σε ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα.. Τα επίπεδα mRNA KIF14 μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας πραγματικού χρόνου ποσοτική RT-PCR δειγμάτων πρωτογενούς όγκου. Η μέση τιμή χρησιμοποιήθηκε για να διαιρέσει ασθενείς σε χαμηλή (κόκκινη γραμμή) και υψηλή (μπλε γραμμή) ομάδες έκφρασης KIF14 (log rank, P = 0.0158). έκφραση της πρωτεΐνης (Β) Χαμηλή KIF14 συσχετίστηκε με κακή συνολική επιβίωση σε μια ανεξάρτητη ομάδα ασθενών αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα. Οι ασθενείς χωρίστηκαν σε δύο ομάδες ανάλογα με την ανοσοαντιδραστικότητα των αντισωμάτων KIF14. Η τιμή αποκοπής ήταν 70% σε τομές όγκων που δείχνουν ανοσοαντιδραστικότητα με τα αντισώματα. Kaplan-Meier αναλύσεις χρησιμοποιήθηκαν για να εκτιμηθεί η συνολική επιβίωση των ασθενών αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα, σύμφωνα με την έκφραση KIF14 (log rank, P & lt? 0,0001). (Γ) Ποσοστό ανάλυση της μεταστατικής κατάστασης σε ομάδες υψηλής και χαμηλής έκφρασης KIF14. Οι ασθενείς σε υψηλές και χαμηλές ομάδες έκφραση KIF14 διαιρέθηκαν περαιτέρω με βάση την παρουσία της μετάστασης? και οι αριθμοί της κάθε υποομάδας εμφανίζεται ως ποσοστό χρησιμοποιώντας στατιστική ανάλυση (chi-square test, P & lt? 0,0001). (Δ) Η έκφραση KIF14 σε αδενοκαρκίνωμα ανθρώπινου πνεύμονα προβλέψει την εμφάνιση μεταστάσεων. καμπύλες μετάσταση επιβίωση χωρίς των 122 ασθενών αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα στρωματοποιημένη από χαμηλά (κόκκινη γραμμή) και υψηλή (μπλε γραμμή) έκφραση της πρωτεΐνης KIF14 (log rank, P & lt? 0.0001)

Η

Για να επεκτείνει την ανάλυσή μας σε πρωτεΐνη. επίπεδα έκφρασης, χρησιμοποιήσαμε ανοσοϊστοχημεία για να εξετάσει την έκφραση του KIF14 σε δείγματα όγκων από 122 ασθενείς αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα σε ένα ανεξάρτητο κοόρτη. Σε συμφωνία με προηγούμενα αποτελέσματα μας, οι ασθενείς με χαμηλά επίπεδα έκφρασης KIF14 είχε φτωχότερη συνολική επιβίωση συγκριτικά με τους ασθενείς με υψηλά επίπεδα έκφρασης KIF14 (Ρ & lt? 0,0001? Σχήμα 2Β). Η πολυπαραγοντική Cox αναλογική παλινδρόμηση κινδύνου αναλύσεις αποκάλυψαν ότι οι ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες ήταν KIF14 έκφρασης (HR = 0,37, 95% CI = 0,18 – 0,76? P = 0.0006) και το στάδιο της νόσου (HR = 5,38, 95% CI = 2,82 – 9,88? P & lt ?. 0,0001) (Πίνακας 3)

η

KIF14 σχετίστηκε αρνητικά με μετάσταση στον πνεύμονα αδενοκαρκίνωμα ασθενείς

Εμείς διερευνηθεί περαιτέρω κατά πόσον τα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης του KIF14 σε δείγματα όγκων συσχετίζεται αρνητικά με μετάσταση καρκίνου σε ασθενείς. Τα αποτελέσματα από 122 αδενοκαρκινώματα του πνεύμονα έδειξαν ότι 29 από τους 63 ασθενείς με χαμηλή έκφραση της πρωτεΐνης KIF14 είχε μετάσταση καρκίνου. Ωστόσο, μόνο 6 από τους 59 ασθενείς με υψηλή έκφραση KIF14 αναπτύξει μετάσταση του καρκίνου (Σχήμα 2C, η P & lt? 0,0001). Η εκτίμηση κατά Kaplan-Meier της μετάστασης-free-επιβίωσης έδειξε επίσης ότι οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση KIF14 είχαν σημαντικά φτωχότερη ποσοστό επιβίωσης μετάσταση ελεύθερο από εκείνους με υψηλή έκφραση KIF14 (Σχήμα 2D, η P & lt? 0,0001). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι KIF14 μπορεί να είναι ένα ογκογόνο και μεταστατικό καταστολέα σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα.

Η υπερέκφραση του KIF14 σε αδενοκαρκίνωμα πνεύμονα κύτταρα που αναστέλλονται Anchorage-ανεξάρτητη ανάπτυξη in vitro και ξενομοσχεύματος όγκου Σχηματισμός

in vivo

Οι παρατηρήσεις μας υποστήριξε την υπόθεση ότι KIF14 δρα ως καταστολέας όγκων σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα. Να εξετάσει περαιτέρω την υπόθεση αυτή, θα αξιολογηθεί για πρώτη φορά την έκφραση ενδογενούς πρωτεΐνης KIF14 σε χαμηλές επεμβατική CL1-0 και CL1-5 κύτταρα υψηλής διηθητικό αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα (Σχήμα S2A). Παρατηρήσαμε ότι KIF14 πρωτεΐνης σε κύτταρα CL1-0 ήταν υψηλότερη από ότι σε CL1-5 κύτταρα. Να εξετάσει τις αλλαγές στην εξέλιξη του καρκίνου

in vitro

και

in vivo

[30], έχουμε καθιερώσει σταθερές Flag-tagged KIF14 εκφράζουν κυτταρικές σειρές από κύτταρα CL1-5 και KIF14-φιμώνονται CL1- 0 κύτταρα, και το πρότυπο έκφρασης της πρωτεΐνης επιβεβαιώθηκε μέσω ανοσοστύπωσης (Σχήμα 3Α και 3Β). Στην ανίχνευση του ρυθμού πολλαπλασιασμού των κυττάρων, παρατηρήσαμε σημαντικές διαφορές μεταξύ των ελέγχων φορέα μόνο και τα KIF14 υπερεκφράζουν κυτταρικές γραμμές (Σχήμα 3C), αλλά μείωσε τον πολλαπλασιασμό παρατηρήθηκε στις KIF14-σιγήσει κυττάρων σε σύγκριση με τον έλεγχο shLacZ (Σχήμα 3D, P & lt? 0,0001). Με βάση τα στοιχεία που δείχνουν ότι η ανεξάρτητη από προσκόλληση κυτταρική ανάπτυξη μπορεί να σχετίζεται με ογκογόνο δυναμικό [31], [32], εξετάσαμε περαιτέρω την ανάπτυξη των σταθερών κυτταρικών σειρών σε μαλακό άγαρ. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο αριθμός των αποικιών που σχηματίστηκαν ήταν μειωμένη όταν KIF14 υπερεκφράστηκε σε κύτταρα CL1-5 (Σχήμα 3Ε) και αυξάνεται όταν KIF14 σίγησε σε CL1-0 κύτταρα (Σχήμα 3F). Στη συνέχεια, οι σταθερές κυτταρικές σειρές υποδορίως μεταμοσχεύθηκαν σε ποντίκια SCID να διερευνήσει την επίδραση της KIF14 στην ανάπτυξη όγκου

in vivo

. Η υπερέκφραση του KIF14 μείωσε σημαντικά την ανάπτυξη του όγκου σε σύγκριση με τους μάρτυρες (Εικόνα 3G, δεξιά? Ρ = 0.0021). Οι αντιπροσωπευτικές εικόνες του CL1-5 /οργανισμούς φορείς και KIF14 # 2-εμβολιασθέντες ποντικούς (σχήμα 3G, αριστερά).

(Α) Οι κυτταρικές σειρές που εκφράζουν ιδιοσυστατικά KIF14 καθορίστηκαν μέσω της επιμόλυνση των pCMV-7.1- 3-3 × Σημαία-KIF14 σε CL1-5 κύτταρα. Μεμονωμένες αποικίες επιλέχθηκαν χρησιμοποιώντας Geneticin, και η έκφραση της πρωτεΐνης KIF14 αξιολογήθηκε μέσω ανοσοστύπωσης με αντι-Flag αντισώματα? ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Ο αστερίσκος και βέλος υποδεικνύει τη μη συγκεκριμένη ζώνη και Flag-KIF14, αντίστοιχα. (Β) έκφραση KIF14 χτυπήθηκε κάτω σε κύτταρα CL1-0 χρήση shRNA λεντοϊού μόλυνση. Μετά την επιλογή με πουρομυκίνη για δύο εβδομάδες, τα πρότυπα έκφρασης πρωτεΐνης KIF14 αξιολογήθηκαν μέσω ανοσοστύπωσης με αντισώματα αντι-KIF14? ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. (Γ και Δ) Επιδράσεις των KIF14 υπερέκφραση και φίμωση στον πολλαπλασιασμό των καλλιεργημένων κυττάρων του όγκου. Ο αριθμός των κυττάρων υπολογίστηκε στους χρόνους που υποδεικνύονται μετά τη φύτευση. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν τυπικές αποκλίσεις από την μέση τιμή. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στα ποσοστά πολλαπλασιασμού μεταξύ διαφορετικών κυτταρικών γραμμών με μονόδρομη ανάλυση ANOVA (C). (Ε και F) Anchorage-ανεξάρτητη ανάπτυξη των KIF14 υπερεκφράζουν και -silencing κυτταρικές σειρές αξιολογήθηκαν με σχηματισμό αποικιών σε μαλακό άγαρ. Οι μπάρες σφάλματος αντιπροσωπεύουν τις τυπικές αποκλίσεις των τριών ανεξάρτητων πειραμάτων που έγιναν εις τριπλούν. υπερέκφραση μειωμένη ανάπτυξη του όγκου (G) KIF14. Οι ποντικοί έλαβαν υποδόρια ένεση στα πλευρά με CL1-5 /φορέα και # κύτταρα CL1-5 /KIF14 2. Αριστερό πλαίσιο: Τελική εικόνες του όγκου σε 35 ημέρες μετά την υποδόρια ένεση. Δεξιό πλαίσιο: Μέσος όγκος του όγκου σε 35 ημέρες μετά την υποδόρια ένεση υπολογίστηκε, και τα ζώα στη συνέχεια θυσιάστηκαν. Οι μπάρες αντιπροσωπεύουν το μέσο ± τυπικές αποκλίσεις των έξι ποντίκια ανά ομάδα (one-way ANOVA, P = 0.0021).

Η

Χειραγώγηση της KIF14 επίπεδα έκφρασης μετέβαλε την μετανάστευση, εισβολή και την προσκόλληση των αδενοκαρκίνωμα πνεύμονα κυτταρικών γραμμών

Επειδή η έκφραση της KIF14 σχετίστηκε αρνητικά με μετάσταση στους ασθενείς, έχουμε την επόμενη διερευνηθεί αν KIF14 επηρεάζονται μετάσταση των καρκινικών κυττάρων. Μία δοκιμασία για επούλωση της πληγής χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση των ικανοτήτων μετανάστευση κυττάρων KIF14 εκφράζουν. έκφραση KIF14 μείωσε την μετανάστευση κυττάρων CL1-5, ενώ η knockdown έκφρασης πρωτεΐνης σε κύτταρα KIF14 CL1-0 αυξημένη μετανάστευση κυττάρων (όλα τα P & lt? 0,05? Σχήμα 4Α και 4Β, αριστερά). Για την επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται από τα κύτταρα CL, εξετάσαμε τα επίπεδα έκφρασης KIF14 σε άλλες αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα κυτταρικές σειρές (Σχήμα S2B) και υπερεκφράζεται KIF14 σε Α549 κύτταρα με χαμηλή ενδογενή πρωτεΐνη KIF14 και σιγήσει KIF14 σε Η1299 κυττάρων με τα σχετικά επίπεδα πρωτεΐνης υψηλής KIF14. Τα έκφραση και τον πολλαπλασιασμό ποσοστά πρωτεΐνης KIF14 αυτών των κυττάρων φαίνεται στο Σχήμα S3. Παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν με τη χρήση επιπλέον κυτταρικές σειρές σε σύγκριση με κύτταρα CL (όλα τα Ρ & lt? 0,05? Σχήμα 4Α και 4Β, δεξιά).

(Α) CL1-5 κύτταρα με μόνιμα KIF14 υπερέκφραση και Α549 κύτταρα παροδικά μολυσμένα με φακοϊό που κωδικοποιεί μη-tagged πλήρους μήκους KIF14 αναλύθηκαν για την ικανότητα των μεταναστευτικών κυττάρων σε μια δοκιμασία επούλωση της πληγής. Τα στοιχεία δείχνουν ότι ο αριθμός των μεταναστευτικών κυττάρων, και οι τιμές Ρ υπολογίστηκαν σε σχέση με τους ελέγχους φορέα μόνο με τη χρήση του Student

t-test

. (Β) προσδιορισμός των κυττάρων CL1-0 και Η1299 επούλωση των πληγών με KIF14 αποσιώπηση. Ο αριθμός των μεταναστευτικών κυττάρων υπολογίστηκε επίσης. (Γ και Δ) KIF14 υπερέκφραση μειωμένη κυτταρική εισβολή. Η ικανότητα εισβολής των σταθερών ή παροδικά μολυσμένα KIF14-σιγήσει κυτταρικές γραμμές KIF14 και μετρήθηκε χρησιμοποιώντας μια τροποποιημένη δοκιμασία θαλάμους Boyden. Τα εισβάλλοντα κύτταρα υποδεικνύεται με χρώση με ιωδιούχο προπίδιο και προσδιορίζεται ποσοτικά (n = 3). (Ε) KIF14 υπερέκφραση αυξημένη κυτταρική προσκόλληση. Μία πλάκα 96 φρεατίων επικαλύφθηκε με λαμινίνη και το κολλαγόνο IV. Ένα σύνολο 3 × 10

4 κύτταρα απλώθηκαν πάνω σε ένα τρυβλίο 96 φρεατίων, επωάστηκαν στους 37 ° C για 1 ώρα και η κόλλα δραστηριότητα υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας κρύσταλλο παραβιάζουν χρώση. Υψηλή απορρόφηση στα 540 nm έδειξε αυξημένη κυτταρική προσκόλληση.

Η

επόμενο αξιολόγησε τις επεμβατικές ιδιότητες αυτών των κυτταρικών σειρών με τη χρήση τροποποιημένων δοκιμασιών θάλαμο Boyden. KIF14 υπερέκφραση σε CL1-5 και κύτταρα Α549 μειωμένη κυτταρική διεισδυτικότητα 11,6 να 64,9% σε σύγκριση με τον φορέα μόνο ελέγχους (Ρ & lt? 0,05? Σχήμα 4C). Αντιστρόφως, η knockdown έκφρασης ενδογενούς KIF14 σε CL1-0 και Η1299 κυττάρων αυξήθηκε κύτταρο διεισδυτικότητα 1,4 έως 2,3 φορές (Ρ & lt? 0,05? Εικόνα 4D).

Σε γενικές γραμμές, η προσκόλληση κυττάρου είναι ένα πολύπλοκο μηχανισμό που εμπλέκονται στην μια ποικιλία διεργασιών, συμπεριλαμβανομένης της μετανάστευσης των κυττάρων και εισβολή [33]. Επειδή αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι η έκφραση του KIF14 μπορούν να επηρεάσουν τα μεταναστευτικά και επεμβατική ικανότητες των κυτταρικών γραμμών αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα, ερευνήσαμε περαιτέρω εάν προσκόλληση κυττάρου επηρεάστηκε μετά τη διαμόρφωση KIF14. Σύμφωνα με την υπόθεσή μας, τα δεδομένα έδειξαν ότι η υπερέκφραση του KIF14 αυξημένη προσκόλληση στο εξωκυτταρικό πρωτεΐνες μήτρας, λαμινίνη και το κολλαγόνο IV, και στα δύο κύτταρα CL1-5 και Α549? Επιπλέον, φίμωση KIF14 μειωμένη πρόσφυση και στις δύο κύτταρα CL1-0 και Η1299 (Σχήμα 4Ε).

KIF14 Μήπως Ρυθμίζουν την πρόσληψη Κολλητική Μόριο CDH11 στην κυτταρική μεμβράνη σε αδενοκαρκίνωμα πνεύμονα Γραμμές κυττάρων

Επειδή KIF14 ανέστειλε την κυτταρική μετανάστευση, εισβολή και προσκόλληση

in vitro

και τον καρκίνο της μετάστασης

in vivo

, θέλαμε να προσδιορίσει αν οι αλλαγές στη λειτουργία του κινητήρα σε κύτταρα θα μπορούσαν να οδηγήσουν σε φυσιολογικές αλλαγές. Ως εκ τούτου, ερευνήσαμε δυνητικά συνεργαζόμενων εταίρων της KIF14 χρησιμοποιώντας το String βάση δεδομένων πρωτεϊνικών αλληλεπιδράσεων 9.0 (https://string.embl.de/) και προσδιορίζονται τα δύο γνωστά συνδεδεμένες πρωτεΐνες, PRC1 και CIK [7], καθώς και δύο επιπλέον πρωτεΐνες, cadherin 11 (CDH11) και μόριο προσκόλλησης κυττάρων μελανώματος (MCAM), οι οποίες ενδεχομένως συνδέονται με KIF14 (Σχήμα S4). Επειδή CDH11 και MCAM είναι σημαντικά μόρια προσκόλλησης που σχετίζονται με ογκογένεση και τη μετάσταση [34], [35], υποθέσαμε ότι KIF14 θα μπορούσαν να επηρεάσουν την κυτταρική προσκόλληση και μετανάστευση μέσα από αυτά τα μόρια του φορτίου. Για να επιβεβαιωθεί αυτή η υπόθεση, εξέτασε πρώτα κατά πόσον KIF14 θα μπορούσε να συνδέσει με CDH11 και MCAM χρησιμοποιώντας συνανοσοκαθίζησης. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το ΗΑ-tagged CDH11 και MCAM συνδέονται με Flag-tagged πρωτεΐνες KIF14 (Σχήμα 5Α). Η ενδογενής ανοσοκατακρήμνιση επιβεβαίωσε επίσης συσχετίσεις μεταξύ KIF14 και CDH11

in vivo

(Εικόνα 5Β). Οι κατανομές των KIF14 και πρωτεϊνών CDH11 ή MCAM εξετάστηκαν σε Η1299 κύτταρα χρησιμοποιώντας χρώση ανοσοφθορισμού. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι πρωτεΐνες CDH11 και MCAM μπορούσε συν-εντοπίζεται σε κοινά διαμερίσματα με KIF14 πρωτεΐνη, και η έκφραση του CDH11 και MCAM παρατηρήθηκε κυρίως στην περιφέρεια του κυττάρου όταν KIF14 υπερεκφράστηκε (Σχήμα 5C). Όπως KIF14 είναι μια πρωτεΐνη κινητήρα που συμμετέχει στη μεταφορά των μορίων, θα διερευνηθεί περαιτέρω κατά πόσον η έκφραση του KIF14 θα μπορούσε να ρυθμίσει τον εντοπισμό των CDH11. Απομονώσαμε πρωτεΐνες κλάσμα μεμβράνης και ανέλυσε την έκφραση της CDH11 από KIF14 υπερεκφράζουν και KIF14-σιγήσει κυτταρικές σειρές. Οι ποσότητες του ΗΑ-CDH11 στο κλάσμα μεμβράνης ποσοτικοποιείται μέσω ομαλοποίηση με την ποσότητα σε συνολικά κυτταρολύματα, και τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η υπερέκφραση του KIF14 αύξησε την έκφραση του CDH11 στο κλάσμα μεμβράνης σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (Σχήμα 5Β, αριστερά ). Σε αντίθεση, η εξάντληση των KIF14 μειωμένη έκφραση CDH11 στην κυτταρική επιφάνεια σε σύγκριση με τα μη-σιγήσει μάρτυρες (Σχήμα 5Β, δεξιά). Εξετάσαμε επίσης την κατανομή του ενδογενούς CDH11 σε CL1-5 /φορέα, CL1-5 /KIF14 # 2, CL1-0 /shLacZ και CL1-0 /shKIF14 κύτταρα, και τα αποτελέσματα ήταν παρόμοια με τα προηγούμενα δεδομένα (Εικόνα S5).

(Α) KIF14 συνδέονται με CDH11 και MCAM. Το προϊόν λύσης των κυττάρων ΗΕΚ293Τ που μορφομετατρέπονται με τα υποδεικνυόμενα πλασμίδια χρησιμοποιήθηκε σε εξωγενή προσδιορισμούς ανοσοκαθίζησης. Ανοσοκηλίδωση διεξήχθη με τα υποδεικνυόμενα αντισώματα. Η ακτίνη χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. (Β) Το προϊόν λύσεως των κυττάρων Η460 χρησιμοποιήθηκε σε ενδογενείς προσδιορισμούς ανοσοκαθίζησης. Ανοσοκηλίδωση διεξήχθη με τα υποδεικνυόμενα αντισώματα. (Γ) Η κατανομή των CDH11 και MCAM άλλαξε με την υπερέκφραση του KIF14. κύτταρα Η1299 συν-επιμολύνθηκαν με HA-CDH11 ή ΗΑ-MCAM και GFP-KIF14, σταθερό και υβριδοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας αντι-ΗΑ αντισώματα. Το σήμα συνελήφθη χρησιμοποιώντας ένα ομοεστιακό μικροσκόπιο (αρχική μεγέθυνση, 1.000 ×). (D) κύτταρα ΗΕΚ293Τ συν-επιμολύνθηκαν με HA-CDH11 και Flag-KIF14 ή siKIF14 και στη συνέχεια, το κλάσμα μεμβράνης απομονώθηκε. Η πρωτεΐνη στο κλάσμα μεμβράνης και του συνολικού κυτταρολύματος αναλύθηκε μέσω ανοσοστύπωσης. Οι ποσότητες του ΗΑ-CDH11 στο κλάσμα μεμβράνης ποσοτικοποιείται μέσω ομαλοποίηση με το ποσό των συνολικά κυτταρολύματα. Hsp90 χρησιμοποιήθηκε ως κυτοσόλιο δείκτη.

Η

Συζήτηση

Αυτά τα αποτελέσματα κατέδειξαν ότι η πρωτεΐνη μοτέρ KIF14 δρα ως και μετάσταση όγκου καταστολέα σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα. Παρατηρήσαμε περισσότερη απώλεια από κέρδος κοντά KIF14 στο χρωμόσωμα 1q32 (Σχήμα 1) και διαπίστωσαν ότι οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση KIF14 παρουσίασαν χειρότερη γενική και μετάσταση επιβίωση χωρίς σύγκριση με τους ασθενείς που εκφράζουν υψηλά επίπεδα KIF14 (Σχήμα 2). Η υπερέκφραση του KIF14 σε καρκινικά κύτταρα πνεύμονα ανέστειλε σημαντικά ανεξάρτητη από προσκόλληση ανάπτυξη

in vitro

και ξενομοσχεύματος σχηματισμό όγκου

in vivo

(Σχήμα 3). Επιπλέον, διαμορφώνοντας την έκφραση των KIF14 ανέστειλε κυτταρική μετανάστευση, εισβολή και προσκόλληση μέσω συνδυασμού με και αυξάνοντας την έκφραση μεμβράνης της πρωτεΐνης φορτίου, CDH11 (Σχήμα 4 και 5). Ως εκ τούτου, KIF14 θα μπορούσε να είναι ένας πιθανός στόχος για τη θεραπεία αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα.

χρωμόσωμα mis-διαχωρισμός οδηγεί σε παρεκκλίνουσα κυτταροκίνηση και ανευπλοειδία. Το φαινόμενο αυτό παρεμποδίζεται σε κανονικά κύτταρα μέσω διακοπή του κυτταρικού κύκλου και της απόπτωσης? Ωστόσο, τα καρκινικά κύτταρα δείχνουν αύξηση των ποσοστών της ανευπλοειδίας, η οποία μπορεί να σχετίζεται με κακή κλινική έκβαση [36] – [41]. λειτουργίες KIF14 στο χρωμόσωμα διαχωρισμού και κυτταροκίνηση, και η εξάντληση του θα μπορούσε να οδηγήσει σε ένα διπύρηνο ή πολυ-πυρηνικά κατάστασης [4], [5], [7], [8]. Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν την υπόθεση ότι η ανευπλοειδία εξελίσσεται σε καρκινογένεση [9] – [11], [42]. Σε αυτή τη μελέτη, η υπερέκφραση ή αποσιώπηση της KIF14 σε κύτταρα μειώνεται ή να αυξάνεται, αντίστοιχα, ανεξάρτητη από προσκόλληση ανάπτυξη

in vitro

, και KIF14 υπερέκφραση ανάπτυξη μειώνεται όγκου

in vivo

(Σχήμα 3). Αυτά τα αποτελέσματα συμφωνούν με εκείνα της προηγούμενης μελέτης στην οποία η έκφραση του σιγήσει KIF14 σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα οδήγησε σε αυξημένη αγκύρωση ανεξάρτητη επιβίωση [43]. Εκτός από KIF14, πολλές άλλες ρυθμιστικές κυτοκίνηση έχουν επίσης αναφερθεί ως ογκοκατασταλτικών γονιδίων, συμπεριλαμβανομένων KIF1A, KIF1B, KIF3, KIF4, KIF10, Von Hippel-Lindau σύνδρομο πρωτεΐνη (pVHL) και BRCA2 [16] – [18], [44] – [47]. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η ανεπάρκεια KIF14 μπορεί να προωθήσει ανευπλοειδία, με αποτέλεσμα το σχηματισμό του όγκου, και ότι θα μπορούσε να KIF14 δρα ως καταστολέας όγκων σε καρκίνο του πνεύμονα.

Εξέλιξη

Ο καρκίνος είναι μια σύνθετη διαδικασία που περιλαμβάνει την ανάπτυξη των κυττάρων, βασικής μεμβράνης υποβάθμιση, κυτταρική μετανάστευση, εισβολή, προσκόλληση, και μετάσταση [48], [49]. Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται στην παρούσα μελέτη έδειξε ότι KIF14 δεν συμμετείχε μόνο στην ογκογένεση αλλά επίσης συμμετείχε στην κυτταρική προσκόλληση, η μετανάστευση και εισβολή (Σχήμα 3 και 4). Immunochemistry έδειξαν ότι τα επίπεδα έκφρασης του KIF14 είχαν αρνητική συσχέτιση με τη μετάσταση καρκίνου σε ασθενείς (Σχήμα 2C και 2D). Σε κυτταρικές γραμμές CL, τα επίπεδα πρωτεΐνης KIF14 συσχετίζονταν αντίστροφα με επεμβατικές ικανότητες κυττάρων (Σχήμα S2A). Αυτές οι παρατηρήσεις ήταν παρόμοιες με εκείνες της προηγούμενης έκθεσης στα οποία η έκφραση KIF14 σχετίστηκε αρνητικά με Matrigel και νεύρο εισβολή σε παγκρεατικού καρκίνου [43]. Ως εκ τούτου, θα μπορούσε να KIF14 δρα ως καταστολέας μεταστατικό αδενοκαρκίνωμα σε πνεύμονα.

Αξίζει να σημειωθεί ότι τα αποτελέσματα του

in vitro δοκιμασίες

ήταν ελαφρώς ασύμφωνα. Τα δεδομένα που λαμβάνονται στην παρούσα μελέτη υποδεικνύουν ότι KIF14 σίγηση μειώνει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων (Σχήμα 3), ενδεχομένως αντανακλώντας καθυστερήσεις Μ φάση και τις αποτυχίες κυτοκίνηση. Παρ ‘όλα αυτά, KIF14 υπερέκφραση δεν επηρέασε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε σύγκριση με τον έλεγχο. Εξετάσαμε περαιτέρω την κατανομή των KIF14 και τα φαινόμενα των κυττάρων σε κάθε φάση, και τα δεδομένα έδειξαν ότι δεν υπάρχει ειδική ελάττωμα συνέβη με KIF14 υπερέκφραση (μη δημοσιευμένα δεδομένα). Έτσι, η αποσιώπηση ή υπερέκφραση KIF14 μειωθεί ή δεν επηρέασε τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, αλλά αυξάνεται ή μειώνεται το σχηματισμό αποικιών? τα αποτελέσματα αυτά θεωρούνται ικανότητες των κυττάρων μετασχηματισμού. Η υπερέκφραση του KIF14 (2 KIF14 #) σε κύτταρα CL1-5 μειωθεί σημαντικά το σχηματισμό αποικιών, τη μετανάστευση των κυττάρων και εισβολή, και την ελαφρά έκφραση του KIF14 (KIF14 1 #) ηπίως μειωμένη σχηματισμός αποικίας και έντονα μειωμένη κυτταρική μετανάστευση και εισβολή (Σχήμα 3 και 4). Αυτά τα αποτελέσματα πρότειναν ότι KIF14 πρωτεΐνη επηρεάζει μετασχηματισμό των κυττάρων και εισβολή σε διαφορετικούς βαθμούς. Προτείνουμε ότι η μικρή αύξηση της έκφρασης της πρωτεΐνης KIF14 στο CL1-5 /KIF14 # 1 σταθερή κύτταρα προωθεί επίσης δραματική μετανάστευση των κυττάρων αναστέλλοντας τη μεταφορά αρκετών σημαντικών πρωτεϊνών του φορτίου που αφορά στη μετανάστευση των κυττάρων και την εισβολή.

Αν και KIF14 είναι μια σημαντική πρωτεΐνη του κινητήρα που συμμετέχει στην κυτοκίνηση μέσω αλληλεπιδράσεων με PRC1 και κινάση κίτρου, ο ρόλος των KIF14 σε άλλες λειτουργίες παραμένει ασαφής [7]. Τα αποτελέσματα που προέκυψαν στην παρούσα μελέτη έδειξε ότι KIF14 μπορεί να ρυθμίζει την κυτταρική μετανάστευση και προσκόλληση μέσω ενώσεων με CDH11 και MCAM? Αυτή η αύξηση στον εντοπισμό μεμβράνης της CDH11 σε κυτταρικές γραμμές αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα είναι μία νέα βρίσκοντας σε σχέση με την λειτουργία του KIF14 (Σχήμα 5). Αυτά τα αποτελέσματα είναι παρόμοια με εκείνα μιας έκθεσης στην οποία KIF13 συμμετείχε στην μεταφορά του υποδοχέα μαννόζης-6-φωσφορικής από το κυτοσόλιο μεμβράνη του πλάσματος [50]. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι KIFS μπορούσε ρυθμίζουν διαφορετικές κυτταρικές λειτουργίες, αλλάζοντας τον εντοπισμό των διαφορετικών πρωτεϊνών φορτίων.

Αυτά τα αποτελέσματα υποστηρίζουν την υπόθεση ότι KIF14 δρα ως καταστολέας όγκων και αναστολέα μετάστασης σε αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα. Ο ρόλος των KIF14 σε εξέλιξης του καρκίνου έχει συζητηθεί τα τελευταία χρόνια. Corson et al., Kim et al. και Wang et al. έδειξαν ότι KIF14 εκφράζεται έντονα σε αμφιβληστροειδοβλάστωμα, καρκίνο του μαστού, τον καρκίνο των ωοθηκών, ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, γλοίωμα και ορισμένους όγκους του πνεύμονα [28], [51] – [55]. Χρησιμοποιώντας array CGH ανάλυση, Corson et al. παρατηρήθηκε αύξηση κατά 20% του πνεύμονα και των βρόγχων όγκων σε μια μεγάλη περιοχή του χρωμοσώματος 1q31-1q32 [51]? Ωστόσο, στην παρούσα μελέτη, πραγματοποιήσαμε αναλύσεις array CGH και παρατηρείται μια απώλεια 25% (22,5% και 26,8%) από τους δύο ανιχνευτές μέσα KIF14 εντοπισμός και ένα κέρδος 5% (2,9% και 6,5%) σε αδενοκαρκινώματα πνεύμονα. Για να διερευνήσουν αυτή την ασυμφωνία, εξετάσαμε επίσης την έκφραση του mRNA της KIF14 στην ομάδα μελέτης μας με τη χρήση των εκκινητών και του ανιχνευτή από Corson et al μελέτες. Του. Παρόμοια με τα αποτελέσματα που φαίνονται στο Σχήμα 1 Β, οι ασθενείς με χαμηλή έκφραση KIF14 παρουσίασαν χειρότερα συνολική επιβίωση συγκριτικά με τους ασθενείς με υψηλή έκφραση KIF14. Corson et al. επίσης σιγήσει KIF14 χρησιμοποιώντας siRNA σε κυτταρικές γραμμές όγκου πνεύμονα και υπέδειξε ότι KIF14 φίμωση μειωμένη κυτταρικό πολλαπλασιασμό και το σχηματισμό αποικιών [28]. Στην παρούσα μελέτη, σιγήσει την έκφραση του KIF14 μέσω του βραδέος παράδοση shKIF14 και ελήφθησαν παρόμοια αποτελέσματα για τον πολλαπλασιασμό αλλά αντίθετα αποτελέσματα σε σχέση με το σχηματισμό αποικιών. Είναι ενδιαφέρον, παραμένει ασαφές γιατί διαφορετικά αποτελέσματα ελήφθησαν για το ίδιο γονίδιο? Ωστόσο, υπάρχουν αρκετές πιθανές εξηγήσεις για αυτά τα φαινόμενα. 1. Διαφορά KIF14 ετικέτες πρωτεΐνης: Theriault et al. Χρησιμοποιούμενη C-τερματικό EGFP- και Myc-tagged KIF14 σε δοκιμασίες πολλαπλασιασμού και σχηματισμό αποικιών, και EGFP-tagged KIF14 παρουσίασαν ηπιότερες επιπτώσεις από Μγο-tagged KIF14 [54]. Ως εκ τούτου, δημιουργείται μη-tagged κατασκευάσματα KIF14 άγριου τύπου και εξέτασαν τις επιδράσεις στην κυτταρική διεισδυτικότητα? τα αποτελέσματα ήταν παρόμοια με εκείνα του Flag-tagged KIF14 (Σχήμα 4C). Δημιουργήσαμε επίσης Ο-τερματικό Flag-tagged KIF14 να εξετάσει κυτταρική μετανάστευση, και τα δεδομένα ήταν παρόμοια με εκείνα που λαμβάνονται με Ν-τερματική Flag-tagged και μη-tagged KIF14 (τα δεδομένα δεν εμφανίζονται). 2. Εθνικές διαφορές: μια πρόσφατη μελέτη έδειξε σαφώς ότι η εμφάνιση, αιτία, η κατάσταση μετάλλαξης του γονιδίου, την επιβίωση, την πρόγνωση και τη θεραπεία του καρκίνου του πνεύμονα ήταν διαφορετικά στην Ασία και τις ΗΠΑ [56]. 3. Ένα γονίδιο ή μία πρωτεΐνη θα μπορούσε να διαδραματίσει διπλή ή πολλαπλούς ρόλους στη φυσιολογική λειτουργία. Για παράδειγμα, αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού βήτα (ΤΟΡ-β) δρα είτε σαν ογκο-κατασταλτικά ή ενός όγκου-υποκινητή υπό διαφορετικές συνθήκες κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκίνου [57], [58], και μετατροπέα σήματος και ενεργοποιητής της μεταγραφής 3 (STAT3) έχει ένα ογκογόνο ή ένα ογκοκατασταλτικό ρόλο ανάλογα με την μεταλλακτική φόντο του όγκου [59].