Αφηρημένο

Μια λειτουργική σύνδεση των δομικά άσχετα υποδοχείς HER2 και CXCR4 έχει προταθεί για τον καρκίνο του μαστού, αλλά δεν έχει αξιολογηθεί για καρκίνωμα του οισοφάγου . Η αναστολή της HER2 οδηγεί σε μείωση του πρωτογενούς ανάπτυξης όγκου και των μεταστάσεων σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο του οισοφαγικού καρκινώματος. Το CXCR4 υποδοχέα χημειοκίνης έχει εμπλακεί στην μεταστατική διάδοση των διαφόρων όγκων και συσχετίζεται με κακή επιβίωση σε οισοφαγικό καρκίνωμα. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνήσει μια συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων έκφρασης του HER2 και CXCR4 και για την αξιολόγηση της involvemnent του CXCR4-έκφραση σε HER2-θετικό καρκίνο του οισοφάγου. αξιολογήθηκαν οι επιπτώσεις του HER2-αναστολής με τραστουζουμάμπη και CXCR4-αναστολής με AMD3100 στην πρωτογενή ανάπτυξη του όγκου, το μεταστατικό παλιννόστησης, και η έκφραση του υποδοχέα

in vitro

και σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο μεταστατικό καρκίνωμα του οισοφάγου με τη χρήση μαγνητικής τομογραφίας για την απεικόνιση. Η κλινική σημασία των HER2- και CXCR4-έκφραση εξετάστηκε σε ασθενείς με καρκίνωμα του οισοφάγου. Μια σημαντική συσχέτιση του HER2- και CXCR4-έκφραση σε πρωτοπαθή όγκο και μεταστάσεις υπάρχει στο ορθοτοπικό μοντέλο. Trastuzumab και θεραπεία AMD3100 οδήγησε σε σημαντική μείωση του πρωτογενούς όγκου ανάπτυξης, μεταστάσεων και μικρομεταστάσεων. HER2-έκφραση ήταν σημαντικά αυξημένα σε θεραπεία AMD3100 στον πρωτογενή όγκο και ιδιαίτερα στις μεταστάσεις. Η θετική συσχέτιση μεταξύ HER2- και CXCR4-έκφραση ελέγχθηκε σε ασθενείς με καρκίνο του οισοφάγου. Η συσχέτιση των CXCR4- και HER2-έκφρασης και η ανύψωση του HER2-έκφραση και τη μείωση των μεταστάσεων μέσω CXCR4-αναστολής υποδεικνύουν μια πιθανή λειτουργική διασύνδεση και ένα ρόλο στη διάδοση του όγκου σε HER2-θετικό καρκίνο του οισοφάγου

Αιτιολογική αναφορά.: SJ Gros, Kurschat Ν, Drenckhan Α, Dohrmann Τ, Forberich Ε, Effenberger K, et al. (2012) Συμμετοχή του CXCR4 χημειοκινών υποδοχέα μεταστατικού HER2-θετικό καρκίνο του οισοφάγου. PLoS ONE 7 (10): e47287. doi: 10.1371 /journal.pone.0047287

Συντάκτης: Μινγκ Tan, Πανεπιστήμιο της Νότιας Αλαμπάμα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 10, Αύγ 2012? Αποδεκτές: 14 Σεπτέμβρη, 2012? Δημοσιεύθηκε: 17 Οκτώβρη 2012

Copyright: © Gros et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο έχει υποστηριχθεί από GR επιχορήγηση 3484 /1-1 της Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν την εξής ενδιαφέρον: Robert M. Hoffman σχετίζεται με αντικαρκινικά, Inc Δρ. Pantel είναι μια Αμοιβές με τη Roche και έναν εμπειρογνώμονα Μαρτύρων με Genentech. Δεν υπάρχουν διπλώματα ευρεσιτεχνίας, τα προϊόντα για την ανάπτυξη ή την εμπορία προϊόντων που να δηλώνουν. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών, όπως περιγράφεται λεπτομερώς σε απευθείας σύνδεση στον οδηγό για τους συγγραφείς.

Εισαγωγή

Η ανθρώπινη οικογένεια υποδοχέα επιθηλιακού αυξητικού παράγοντα ( HER, ErbB) κινασών υποδοχέα παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη και την εξέλιξη του όγκου [1]. Μεταξύ αυτών των υποδοχέων, HER2 είναι η ισχυρότερη ογκογονίδιο και βρέθηκε να ενισχύεται και υπερεκφράζεται σε περίπου 20% των καρκίνων του μαστού [2] Στην περίπτωση του καρκίνου του μαστού HER2 είναι γνωστό ότι σχετίζεται με κακή πρόγνωση και μετάσταση [3], [4]. HER2-υπερέκφραση και ενίσχυση αναφέρεται σε καρκίνο του οισοφάγου με τάση προς υψηλότερα ποσοστά θετικότητας σε αδενοκαρκίνωμα [5] – [10] σε σύγκριση με καρκινώματα πλακωδών κυττάρων [6], [7], [11] – [13]

Μια ισχυρή συμφωνία για την κατάσταση HER2 στην πρωτοβάθμια και μεταστατικό αδενοκαρκίνωμα οισοφάγου με ενίσχυση γονιδίου HER2 υψηλού επιπέδου, όπως έχει παρατηρηθεί, γεγονός που υποδηλώνει ασθενείς καρκίνο του οισοφάγου με πρωτοπαθείς όγκους HER2-θετικό ως υποψήφιοι για θεραπεία με trastuzumab [14]. HER2 είναι γνωστό ότι αυξάνει την μεταστατικού δυναμικού σε ποντικού και καρκινικές κυτταρικές γραμμές του ανθρώπου [15] – [18]

με trastuzumab (Herceptin®) υφίσταται θεραπεία που βασίζεται σε αντίσωμα το οποίο χρησιμοποιείται επιτυχώς κλινικά για τη στόχευση HER2 σε. μεταστατικό HER2-θετικό καρκίνο του μαστού [3], [19] – [21]. εφαρμογή τραστουζουμάμπη έχει επίσης μια δραματική επίδραση σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού HER2-θετικό ως επικουρική θεραπεία [22]. Υπάρχει ακόμη ενδείξεις για μια πιθανή αντίδραση των καρκίνων μη-μαστού HER2-θετικό (π.χ. γαστρικό καρκίνο) στην τραστουζουμάμπη [23], [24].

Μια σημαντική μείωση του πρωτογενούς ανάπτυξης του όγκου και της μεταστατικής εξάπλωσης έχει προηγουμένως έχουν αναφερθεί σε ένα ορθοτοπικό μοντέλο του αδενοκαρκινώματος του οισοφάγου HER2-θετικό υπό θεραπεία με τραστουζουμάμπη [25]. Έχει δειχθεί ότι HER2- σηματοδότησης στον καρκίνο του μαστού ενισχύει την έκφραση του CXCR4, η οποία απαιτείται για HER2 με τη μεσολάβηση εισβολή [26]. Η χημειοκίνη CXCR4 έχει προταθεί ότι παίζουν ένα ουσιαστικό ρόλο στην κύτταρο όγκου παλιννόστησης στους λεμφαδένες και μυελό των οστών σε οισοφαγικό καρκίνωμα [27]. Η έκφραση του CXCR4 συσχετίζεται σημαντικά με τη συνολική και όγκου-ειδικά επιβίωση σε καρκίνωμα του οισοφάγου και σχετίζεται με κακή πρόγνωση [27]. Μια συσχέτιση του CXCR4 και HER2 και πιθανή λειτουργικό ρόλο στην αλληλεπίδραση των οδών τους, ωστόσο, δεν έχει διερευνηθεί για αδενοκαρκίνωμα του οισοφάγου.

Οι χημειοκίνες είναι μια υπεροικογένεια των μικρών κυτοκίνη όπως πεπτίδια [28], [ ,,,0],29]. Μέσω της αλληλεπίδρασης με τους υποδοχείς χημειοκίνης, χημειοκίνες επάγουν κυτταροσκελετική αναδιάταξη των αιμοποιητικών κυττάρων, την αύξηση της πρόσφυσης τους, και την άμεση μετάβαση σε σπίτι-ειδικά όργανα. υποδοχείς χημειοκινών είναι G-πρωτεΐνη υποδοχέων συζευγμένων και CXCR4 είναι ένα από τα καλύτερα χαρακτηρισμένη υποδοχείς. CXCR4 και συνδέτη SDF-1α του παίζουν σημαντικό ρόλο στη στόχευση του καρκίνου του μαστού μεταστάσεις [30], [31]. Η χημειοκίνη SDF-1α απελευθερώνεται σε υψηλές ποσότητες από όργανα όπως πνεύμονα, των οστών, και το ήπαρ. Η έλξη του SDF-1α και CXCR4 προκαλεί τον καρκίνο του μαστού τα κύτταρα για να μεταναστεύσουν σε αυτά τα όργανα, όπου πολλαπλασιάζονται και metastastes μορφή [30], [31].

Όπως μετάσταση εξακολουθεί να είναι η κύρια αιτία θανάτου των όγκων που σχετίζονται με και η νοσηρότητα είναι απαραίτητη για την περαιτέρω κατανόηση των πολύπλοκων παθοφυσιολογικές οδούς και τις διαδικασίες που οδηγούν σε μεταστατική εξάπλωση. Μεταστατικό μονοπάτια της κακοήθους νόσου του όγκου είναι πολύπλοκες και εξακολουθεί να είναι ελάχιστα κατανοητή [32] – [36]

Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνήσει τις επιπτώσεις της ενιαίας και σε συνδυασμό αναστολή των οδών υποδοχέα HER2 και CXCR4, και να. να εξετάσει τα επίπεδα HER2- και CXCR4-έκφραση υπό αναστολή, προκειμένου να καθοριστεί μια πιθανή εμπλοκή του CXCR4-έκφραση σε HER2-θετικό καρκίνο του οισοφάγου. Επιπλέον, ο στόχος ήταν να διερευνηθεί περαιτέρω ο ρόλος των CXCR4 και HER2 στην πρωτοβάθμια ανάπτυξη του όγκου και της παλιννόστησης των μεταστάσεων. Εκτός από τον καθορισμό της σημασία της παρουσίας του HER2 και CXCR4 σε ένα αντιπροσωπευτικό συλλογική ασθενούς, ένα εξαιρετικά μεταστατικό μοντέλο των οισοφαγικό καρκίνωμα χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση.

Υλικά και Μέθοδοι

κυτταρικής γραμμής, τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, και τη μετανάστευση των κυττάρων

in vitro

Η

Η ανθρώπινη κυτταρική σειρά OE19 (Ευρωπαϊκή Συλλογή Καλλιεργειών κυττάρων (ECACC), Υπηρεσία Προστασίας της Υγείας, Wiltshire, Ηνωμένο Βασίλειο) καλλιεργήθηκε σε μέσο RPMI1560 (Biochrome KG, Βερολίνο , Γερμανία) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25].

ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τον LDH κυτταροτοξικότητα Kit (PromoKine, Heidelberg, Germany). 50.000 κύτταρα OE19 σπάρθηκαν σε πλάκα 24 φρεατίων και αναπτύχθηκαν όλη τη νύκτα. AMD3100 (Sigma-Aldrich, Μόναχο, Γερμανία) συμπληρώθηκε με το μέσο καλλιέργειας και η κυτταρική ζωτικότητα αναλύθηκε μετά από 48 ώρες.

μετανάστευση των κυττάρων του όγκου μέσω μικροπορώδη μεμβράνη εκτιμήθηκε με βάση την αρχή του θαλάμου Boyden. Τα κύτταρα επωάστηκαν με μέσο καλλιέργειας για 90 λεπτά, και στη συνέχεια απλώνονται πάνω στην κορυφή του θαλάμου. Το μέσο καλλιέργειας που περιέχει 500 ng /ml ανασυνδυασμένης ανθρώπινης SDF-1α (R &? D Systems, Mineapolis, USA) προστέθηκε στο κατώτερο θάλαμο. Η πλάκα επωάστηκε στους 37 ° C, 5% CO

2 για 18 ώρες. Τα μεταναστεύσει κύτταρα χρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας ϋΑΡΙ (Sigma-Aldrich, Μόναχο, Γερμανία) και μετρήθηκαν υπό μικροσκόπιο φθορισμού (Carl Zeiss, Jena, Germany).

μοντέλο όγκου και θεραπευτική αγωγή

NMRI /nu (US Naval Medical Research Institute) ποντικοί ελήφθησαν από την Charles River Deutschland (Sulzfeld, Γερμανία) σε ηλικία 10 εβδομάδων. Όλες οι διαδικασίες ζώων πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με ένα πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από την Behörde für Wissenschaft und Gesundheit (Freie und Χανσεατική πόλη του Αμβούργου, Γερμανία). Το οισοφαγικό μοντέλο εμφύτευση καρκινώματος αποκτήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25], [37], [38]. Οι ποντικοί ζυγίστηκαν και εξετάστηκαν για ανάπτυξη του όγκου κάθε δεύτερη ημέρα.

Μετά την πρωτογενή ανάπτυξη του όγκου ιδρύθηκε από μαγνητικού συντονισμού απεικόνισης (MRI) την ημέρα 14, οι ποντικοί τυχαιοποιήθηκαν σε τέσσερις ομάδες των εννέα ποντικών εκάστη (δέκα ποντίκια στην ομάδα ελέγχου). Ομάδα ένας υποβλήθηκε σε επεξεργασία δύο φορές την εβδομάδα με ενδοπεριτοναϊκή ένεση 20 mg /kg σωματικού βάρους trastuzumab (Roche, Penzberg, Γερμανία) σε έναν όγκο 100 μΙ. Ομάδα δύο έλαβαν 5 mg /kg σωματικού βάρους AMD3100 (Sigma-Aldrich, Μόναχο, Γερμανία) σε 100 μl με ενδοπεριτοναϊκή ένεση. Ομάδα τριών έλαβαν δύο ενέσεις ημερησίως AMD3100 καθώς και δύο φορές την εβδομάδα trastuzumab. Ομάδα ήταν για χορηγείται καθημερινά ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις εικονική με 100 μΙ PBS και χρησιμοποιήθηκε ως ομάδα ελέγχου.

Ανοσοϊστοχημεία

Ο HercepTest (ϋΑΚΟ, Glostrup, Denmark) χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή , χρησιμοποιώντας μια αραίωση 1:300 του πρωτογενούς αντισώματος. CXCR4-χρώση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το πρωτογενές πολυκλωνικό κουνελιού CXCR4 αντίσωμα (Abcam, κλώνος 2074, Cambridge, UK) σε αραίωση 1:250 όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Η αντίδραση αντίσωμα αναπτύχθηκε με τη κυττάρων και ιστών Χρώση Kit, με τη χρήση του HRP-AEC-System, από R &? D-Systems (Minneapolis, ΜΝ, USA). Οι τομές επιχρωματίστηκαν με διάλυμα αιματοξυλίνης του Mayer (Merck). Όγκου ιστού που προσδιορίζονται από αιματοξυλίνη ηωσίνη (ΗΕ). Ανοσοχρώση σκόραρε από έναν παθολόγο (UR) και ένα δεύτερο ανεξάρτητο εξεταστή (AD) .following μια κλίμακα τεσσάρων βημάτων (0,1þ, 2Þ, 3ος) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή

φθορισμού in situ υβριδισμού (FISH )

HER2

ανάλυση FISH έγινε χρησιμοποιώντας το

HER2

Kit FISH pharmDx ™ (DAKO, Glostrup, Δανία) σύμφωνα με το πρωτόκολλο των κατασκευαστών.

Ανίχνευση μικρομεταστάσεων

Ολικό RNA απομονώθηκε από δείγματα ήπατος και των πνευμόνων, με κιτ απομόνωσης RNA (Qiagen, Hilden, Germany) και μεταγράφηκε αντίστροφα με ένα κιτ cDNA υψηλής χωρητικότητας ανάστροφης μεταγραφής (Applied Biosystems). Μικρομεταστάσεων ανιχνεύθηκαν με έκφραση του mRNA του ανθρώπινου

GAPDH

γονιδίου με ανάλυση σε πραγματικό χρόνο PCR. Τα αποτελέσματα ομαλοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας

18S RNA

έκφραση των δειγμάτων ιστού. εκκινητές PCR (TaqMan Gene Expression Assay GAPDH ανθρώπινη Hs99999905_m1, Αριθμός Μοντέλου 4.351.370, TaqMan Gene Expression Assay 18S Hs99999901_s1) και TaqMan PCR καθολική βασικού μείγματος ελήφθησαν (Applied Biosystems). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μικρομεταστάσεων δέλτα-CT-τιμές.

Ανίχνευση διαδίδονται κυττάρων όγκου στον μυελό των οστών

Ο μυελός των οστών ελήφθη δείγμα από το μηριαίο οστούν των ποντικών κατά τον χρόνο της sarifice και απομονώθηκαν με βαθμίδωση πυκνότητας όπως περιγράφηκε προηγουμένως [39]. Τα πλακίδια με κύτταρα μυελού των οστών ανοσοκυτταροχημικώς αξιολογήθηκαν για διαδίδονται καρκινικά κύτταρα με τη χρήση του μονοκλωνικού αντιανθρώπινο anticytokeratin αντίσωμα ΑΕ1 /ΑΕ3 (Dako, Glostrup, Denmark) σημασμένο με φθοριόχρωμα μονοκλωνικό αντίσωμα FITC και αντι-HER2 NCL-CB11 (Novocastra Αντιδραστήρια και αντισώματα, Leica Microsystems, Wetzlar, Γερμανία) σύμφωνα με τα πρωτόκολλα των κατασκευαστών. Μετά τη χρώση, τα πλακίδια καλύπτονται με Vectashield Τοποθέτηση Μέσο που περιέχει DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA).

Μαγνητική τομογραφία

Όλες οι μετρήσεις MRI εκτελέστηκαν σε μια κλινική ολόκληρο το σώμα 3T MRI σαρωτή (Intera®, Philips, Κάτω Χώρες), χρησιμοποιώντας ένα ειδικό μικρό σωληνοειδές πηνίο ζώων (PFL-HH, Αμβούργο, Γερμανία). Οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25], [37]. Η MRI ήταν εξοπλισμένο με ένα πρότυπο σύστημα κλίσης με ένα μέγιστο. πλάτος 40 MTM

-1 και μια απόκλιση ποσοστού 150 Tm

-1 s

-1. Μετά από μια σύντομη έρευνα, στεφανιαία Τ1 και Τ2, καθώς και οβελιαία ακολουθίες Τ2 χρησιμοποιήθηκαν για την απεικόνιση του όγκου. Κατ ‘αρχάς, διεξήχθησαν echo αλληλουχίες στεφανιαία Τ1 και Τ2 Turbo σπιν (ΜΣΕ). παραμέτρων απεικόνισης για στεφανιαία ακολουθίες: T1 σταθμισμένη TSE: επανάληψη του χρόνου (TR) = 1275 msec, χρόνος ηχούς (ΤΕ) = 33 msec, άλλη γωνία = 90 °, αριθμός φέτες = 14, πάχος τομής = 1 χιλιοστό, μήτρα = 464 × 480 px, FOV = 100 mm, ο αριθμός των διεγέρσεων (NEX) = 3, ανακατασκευάστηκε ογκοστοιχείων = 0,21 /0,21 /1 χιλιοστό

3, μήκους echo τρένο (ETL) = 4? στεφανιαία Τ2 ΜΣΕ με τον κορεσμό του λίπους: TR = συντομότερη? ΤΕ = 90 msec, άλλη γωνία = 90 °, αριθμός φέτες = 20, πάχος τομής = 1 χιλιοστό, μήτρα = 448 × 448 px, FOV = 100 mm, ο αριθμός των διεγέρσεων = 3 και ανακατασκευάστηκε voxel = 0,22 /0,22 /1 χιλιοστό

3. Στη συνέχεια, μία οβελιαία ακολουθία Τ2 TSE χρησιμοποιώντας κορεσμού του λίπους αποκτήθηκε σύμφωνα με τις ακόλουθες παραμέτρους: TR = συντομότερη? ΤΕ = 90 msec, άλλη γωνία = 90, αριθμός φέτες = 22, πάχος τομής = 1 χιλιοστό, μήτρα = 448 × 448 px, FOV = 100 mm, NEX = 3 και ανακατασκευάστηκε voxel = 0,22 /0,22 /1 χιλιοστό

3. χρόνος εξέτασης ήταν ~ 17 λεπτά.

Η ανάλυση εικόνας και ογκομετρική

μέτρησης

εικόνες DICOM υποβλήθηκαν σε επεξεργασία χρησιμοποιώντας το δωρεάν διαθέσιμο λογισμικό Osirix®. Η μεγαλύτερη διάμετρος του όγκου μετρήθηκε στις αλληλουχίες που οπτικοποιούνται καλύτερα τον όγκο. Οι μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν ξεχωριστά με δύο ερευνητές για κάθε ποντικό πριν και μετά τη θεραπεία. Επιπλέον, ο όγκος του όγκου ελήφθη με χειροκίνητη κυκλικής προσέγγισης της ζάντας του όγκου σε κάθε φέτα, ακολουθούμενη από την αυτόματη κατασκευή ενός χάρτη 3D όγκου.

συλλογική ασθενούς, ανοσοχρώση ανάλυσης ανθρώπινου ιστού και τα δεδομένα

Μια συλλογική ασθενή από 202 ασθενείς, που υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση στην θεραπευτική πρόθεση στο Τμήμα Χειρουργικής στο Ιατρικό Κέντρο του Πανεπιστημίου του Αμβούργου-Eppendorf, εξετάστηκε τόσο για HER2- και CXCR4-έκφρασης με ανοσοχρώση. Η μελέτη αυτή εγκρίθηκε από την επιτροπή δεοντολογίας του θαλάμου των γιατρών στο Αμβούργο, τη Γερμανία και την γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς να χρησιμοποιήσουν τα εκτομή δείγματα. Κατά την ιστοπαθολογική εξέταση των περιθωρίων εκτομής ήταν ελεύθερα όγκου. το στάδιο του όγκου και της ποιότητας ταξινομήθηκαν ανάλογα με τον όγκο-κόμβο μετάσταση κατάταξη της Διεθνούς Ένωσης κατά του Καρκίνου [40]. δείγματα όγκου ιστού που είχαν καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο εγκλείστηκαν σε Βέλτιστη Ενωση θερμοκρασία κοπής (Tissue-Tek) και χωρισμένο σε 5 mm. Για HER2 χρώση της HercepTest (ϋΑΚΟ, Glostrup, Denmark) χρησιμοποιήθηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή, χρησιμοποιώντας μια αραίωση 1:300 του πρωτογενούς αντισώματος. Ανοσοχρώση σκόραρε από τον παθολογοανατόμο (U.R.), μετά από τέσσερις-βήμα κλίμακας (0,1þ, 2Þ, 3ος) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι τομές χρωματίστηκαν με αντι-ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα CXCR4 (IgG2a, clone12G5? R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ) σε αραίωση 1:100 όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Ένα άσχετο IgG1 μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού (MOPC21? Sigma, Deisenhofen, Germany) χρησιμοποιήθηκε ως αρνητικός έλεγχος. Η αντίδραση αντίσωμα αναπτύχθηκε με την τεχνική αλκαλικής φωσφατάσης αντι-αλκαλικής φωσφατάσης (ΑΡΑΑΡ) συμπεριλαμβανομένων πολύκλωνο αντίσωμα αντι-ποντικού δευτερογενούς κουνελιού (κλώνος Z0259? Dako, Αμβούργο, Γερμανία) και ΑΡΑΑΡ χρώση συγκρότημα (Dako) σε συνδυασμό με ένα νέο φουξίνη κηλίδα (Sena , Χαϊδελβέργη, Γερμανία). Για την απεικόνιση, τομές βάφτηκαν αντίθετα με διάλυμα αιματοξυλίνης του Mayer (Merck). Τα δείγματα θεωρήθηκαν ανοσοθετικών για CXCR4 όταν περισσότερο από το 20% όλων των κυττάρων του όγκου μέσα σε ένα τμήμα ήταν σαφώς ανοσοχρώθηκαν. Τα αποτελέσματα δεν διαφέρουν όταν ένα άλλο σημείο αποκοπής (e.g.5% θετικά καρκινικά κύτταρα ως σημείο αποκοπής) ελέγχθηκε. Τα δείγματα όγκων έπειτα ταξινομήθηκαν ως έχοντες είτε απών σε χαμηλή χρώση (CXCR4-αρνητικό), εάν το 20% ή λιγότερα κύτταρα όγκου εξέφρασαν CXCR4, ή μέτρια έως ισχυρή χρώση (CXCR4-θετικό) εάν περισσότερο από το 20% των καρκινικών κυττάρων εκφράζεται CXCR4. Ανοσοϊστοχημική ανάλυση και βαθμολόγηση διεξήχθησαν από δύο ανεξάρτητους ερευνητές (U.R., Δ.Α.)

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε σε ένα πρότυπο προσωπικό υπολογιστή χρησιμοποιώντας SPSS for Windows (έκδοση 11.5.1? SPSS Inc., Chicago, IL).. Οι συσχετισμοί υπολογίστηκαν με σταυρό-πίνακες και η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε με δοκιμή του Fisher με p-value από δύο όψεων δοκιμές των & lt?. .05

Η στατιστική ανάλυση των δεδομένων

στατιστική ανάλυση των δεδομένων της

in vivo

δεδομένων έγινε με τη χρήση PASW Στατιστικής 18 (SPSS Inc., Chicago, ΗΠΑ) σε ένα τυπικό προσωπικό υπολογιστή με επεξεργαστή QuadCore. Για τον προσδιορισμό της σημαντικότητας σχετικά με διαφορές στην ανάπτυξη νεοπλασίας και την έκφραση του υποδοχέα, το μη-παραμετρικό Mann-Whitney-Wilcoxon-Test χρησιμοποιήθηκε. Του Fisher-ακριβής δοκιμή για Count-Data χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της σημασίας των μεταστάσεων. Για τη συσχέτιση του μεγέθους του όγκου MRI και το βάρος του όγκου του Pearson-συντελεστή και για τη συσχέτιση των HER2- και CXCR4-έκφραση η Spearman’s-rank-συσχέτισης-συντελεστής χρησιμοποιήθηκε.

Αποτελέσματα

Ο στόχος της Αυτή η μελέτη ήταν να διερευνήσει την πιθανή αλληλεπίδραση του HER2- και CXCR4-υποδοχείς και τα επίπεδα έκφρασής τους υπό θεραπεία με τους αντίστοιχους αναστολείς τους, προκειμένου να καθορίσει αντίκτυπο της CXCR4-έκφραση σε HER2-θετικό καρκίνο του οισοφάγου.

In vitro

πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση των κυττάρων του οισοφάγου OE19

για να διερευνήσει τις επιπτώσεις της CXCR4- και HER2-υποδοχείς στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων

in vitro

κύτταρα OE19 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με τραστουζουμάμπη και AMD3100 , αντίστοιχα. Ενώ ήταν αναμενόμενο ότι η θεραπεία τραστουζουμάμπη οδηγεί σε μείωση της κυτταρικής ανάπτυξης, η επίδραση της θεραπείας με AMD3100 δεν είχαν καθοριστεί. Κυττάρων μετανάστευση των CXCR4-θετικών κυττάρων, ωστόσο θα πρέπει να επηρεάζεται από το χημειοελκυστικό SDF-1α.

Ο

in vitro δοκιμασίες

πολλαπλασιασμού κυττάρου αναπαραγώγιμα έδειξε μία σημαντική μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων υπό HER2- και CXCR4 υποδοχέα αναστολή μετά από θεραπεία με trastuzumab (p = 0,005), καθώς και με AMD3100 (ρ = 0,02) (Σχήμα 1Α). Όπως ήταν αναμενόμενο, η θεραπεία με trastuzumab οδήγησαν σε μεγαλύτερη μείωση του πολλαπλασιασμού από τη θεραπεία με AMD3100. Στη δοκιμασία μετανάστευσης θα μπορούσε να παρατηρηθεί μια δοσοεξαρτώμενη επίδραση στη μετανάστευση των κυττάρων μετά την αγωγή με SDF-1α (Εικόνα 1Β). Χημειοταξία των CXCR4-θετικών κυττάρων OE19 θα μπορούσε έτσι να προκληθεί με SDF-1α (Εικόνα 1 C). Τα αποτελέσματα αναπαράγονται με διάφορες συγκεντρώσεις (δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Α Επίδραση του trastuzumab και ADM3100 θεραπεία επί του πολλαπλασιασμού (%) των κυττάρων OE19 σε σύγκριση με δείγμα αναφοράς στη δοκιμασία γαλακτικού-αφυδρογονάσης. η αναστολή του υποδοχέα οδηγεί σε μειωμένη πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Δείχνει μια σημαντική μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων υπό HER2- και αναστολή CXCR4 υποδοχέα μετά από θεραπεία με trastuzumab (p = 0,005), καθώς και με AMD3100 (p = 0.02) σε σύγκριση με το μη επεξεργασμένο μάρτυρα. Β Μικροσκοπική αξιολόγηση δείχνει δοσο-εξαρτώμενη επίδραση του SDF-1α-διεγερμένα κυτταρική μετανάστευση σε κύτταρα OE19. CA σχετική επίδραση της SDF-1α στην κυτταρική μετανάστευση παρατηρείται στα 250 ng /ml σε σύγκριση με μη διεγερμένα κύτταρα (έλεγχος).

Η

In vivo

πολλαπλασιασμό των πρωτογενών όγκων στην ορθοτοπικό μοντέλο

Για την περαιτέρω διερεύνηση της συμπεριφοράς των τοπικών και μεταστατικής αύξησης του οισοφάγου όγκου σε

vivo

κύτταρα OE19 εμφυτεύθηκαν ορθοτοπικά σε NMRI /ηυ. Όλοι οι ποντικοί ανέπτυξαν πρωτοπαθείς όγκους στο σημείο της εμφύτευσης, όπως φαίνεται από MRI δύο εβδομάδες μετά την εμφύτευση. Το σωματικό βάρος των ποντικών κυμαινόταν από 18.5-26.3 g κατά την έναρξη και 22,5 έως 32,7 g κατά τον τερματισμό του πειράματος. Τα μέσα σωματικά βάρη της κάθε θεραπευτική ομάδα κατά την έναρξη και τον τερματισμό του πειράματος συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Δεν παρατηρήθηκε καμία σημαντική μεταβολή. Τα ποντίκια τυχαιοποιήθηκαν δύο εβδομάδες μετά την εμφύτευση σε θεραπευτικές ομάδες. Έχουμε δείξει προηγουμένως ότι καρκινικά μεγέθη δύο εβδομάδες μετά την εμφύτευση ήταν συγκρίσιμες μεταξύ των ομάδων [37]. Κατά τη στιγμή του τερματισμού του πειράματος, μια μαγνητική τομογραφία έγινε αμέσως πριν από την ανατομία των ζώων. Όλα τα ζώα φτάσει στο τελικό σημείο της μελέτης χωρίς σοβαρή απώλεια βάρους ή άλλα σημεία της ασθένειας όγκου. Τα βάρη των όγκων καταγράφηκαν και έδωσαν τιμές μεταξύ 0,01 έως 3,9 g. Tumor ογκομετρία διεξήχθη και επιβεβαίωσε τα αποτελέσματα του βάρους του όγκου (Πίνακας 1). Ενώ οι τιμές του βάρους εντός του ελέγχου, ομάδα ομάδα trastuzumab αγωγή, και τραστουζουμάμπη /AMD3100 αγωγή ήταν πιο ομοιογενής, οι τιμές ποικίλουν πιο έντονα μέσα στην ομάδα AMD3100 αγωγή. Τα βάρη των όγκων στην ομάδα ελέγχου ήταν σημαντικά υψηλότερα από ό, τι στην τραστουζουμάμπη αγωγή (ρ & lt? 0,0001) και τραστουζουμάμπη /AMD3100 αγωγή (ρ & lt? 0,0001) ομάδες. Τα βάρη των όγκων στην ομάδα AMD3100 αγωγή ήταν σημαντικά υψηλότερα από ό, τι στις ομάδες trastuzumab-αγωγή (p = 0.04) και τραστουζουμάμπη /AMD3100-αγωγή (p = 0.02) (Εικόνα 2Α). Αν και η επίδραση του AMD3100 στην πρωτογενή βάρος όγκου δεν ήταν τόσο σημαντική όσο το αποτέλεσμα της trastuzumab, ένα ισχυρό αποτέλεσμα επιτεύχθηκε με κατεργασία AMD3100 μόνος σε σύγκριση με την ομάδα άνευ αγωγής. Τα βάρη των όγκων κατά τη στιγμή της αυτοψίας συσχετίστηκε σημαντικά με τον όγκο μετρήθηκε με MRI (συντελεστής συσχέτισης: 0.837, p & lt? 0,01). Τα αντιπροσωπευτικά παραδείγματα των εικόνων μαγνητικού συντονισμού για την αξιολόγηση των όγκων με και χωρίς θεραπεία φαίνεται στο Σχήμα 2Β

Μια σημαντική διαφορά στο βάρος του όγκου μεταξύ του ελέγχου και των ομάδων trastuzumab φάρμακο (p & lt? 0.00)., ο έλεγχος και ο συνδυασμός trastuzumab /AMD3100 κατεργασμένα ομάδες (p & lt? 0.00), η τραστουζουμάμπη και ομάδες AMD3100 φάρμακο (p = 0,04), και η AMD και ο συνδυασμός trastuzumab /ομάδες AMD3100 φάρμακο (p = 0.02). Αν και η επίδραση του AMD3100 στην πρωτογενή βάρους του όγκου δεν ήταν τόσο καλή όσο η επίδραση της trastuzumab, ένα ισχυρό αποτέλεσμα επιτεύχθηκε με κατεργασία AMD3100 μόνο, σε σύγκριση με την ομάδα άνευ αγωγής. Β MRI που βασίζονται ογκομετρία όγκων επιβεβαίωσαν τα αποτελέσματα του βάρους του όγκου. Τα βάρη των όγκων κατά τη στιγμή της αυτοψίας συσχετίζεται σημαντικά με την ογκομετρική μέτρο με μαγνητική τομογραφία (συντελεστής συσχέτισης: 0.837, p & lt? 0,01). Γ μικρομεταστάσεων στο ήπαρ και στους πνεύμονες μετά τη θεραπεία με AMD3100 και trastuzumab, αναλύθηκαν με πραγματικού χρόνου PCR σύμφωνα με το επίπεδο της ανθρώπινης

GAPDH

. AMD3100 και ποντίκια trastuzumab αγωγή έδειξε με μια μέση δέλτα-CT-τιμή -2 και -3 ισχυρή μειώσεις μετάσταση στους πνεύμονες 75 έως σχεδόν 100%. Επιπλέον, η τραστουζουμάμπη-ποντίκια με αγωγή είχε μια ισχυρή μείωση των ηπατικών μεταστάσεων που αντιπροσωπεύεται από μία μέση δέλτα-CT-τιμή -3. Η ομάδα συνδυασμός AMD3100 /trastuzumab είχε μειωμένο συντελεστή του πνεύμονα (δέλτα-ct -2), και το ήπαρ (δέλτα-ct -3) μετάσταση. καρκινικά κύτταρα D Διάχυτη ανιχνεύθηκαν με κυτοκερατίνη και immunhistochemical χρώση HER2. Το Σχήμα 3Β δείχνει ένα δείγμα μυελού των οστών. Ανθρώπινο κύτταρο με μια ισχυρή θετικότητα για HER2 είναι ανιχνεύσιμη (κόκκινο).

* Λόγω περιορισμένου χώρου, AMD3100 ήταν τα αρχικά της AMD στην

σχήματα 2α και γ

.

Η

Η

μεταστατικού δυναμικού των οισοφάγου καρκινικά κύτταρα

in vivo

η

κατά τον τερματισμό του

in vivo

πείραμα, ενδεχομένως μεταστατικό ιστούς (πνεύμονες, το ήπαρ και τους λεμφαδένες), ελήφθησαν δείγματα και ιστολογικά εξετάζονται για να αξιολογήσει η μεταστατική εξάπλωση του οισοφαγικού όγκου για κάθε ομάδα αγωγής. Επιπλέον, μικρομεταστάσεων σε ήπαρ και πνεύμονα ανιχνεύθηκαν με έκφραση του mRNA του ανθρώπινου

GAPDH

γονιδίου με PCR πραγματικού χρόνου ανάλυση από ολικό RNA.

Στην ομάδα ελέγχου εκτεταμένες μεταστατικού εξάπλωσης παρατηρήθηκε να πνεύμονα , το ήπαρ και τους λεμφαδένες. 20% των ζώων που είχαν επιθετική μεταστατική εξάπλωση σε όλα τα διαμερίσματα, συμπεριλαμβανομένων των πνευμόνων, του ήπατος και πολλαπλούς λεμφαδένες. Σε αντίθεση, η ομάδα AMD3100 αγωγή έδειξε λιγότερες μεταστάσεις και μόνο ένα ζώο που εκφράζεται εξαιρετικά επιθετική μεταστατική εξάπλωση σε τρία διαμερίσματα (πνεύμονα, ήπαρ, και λεμφαδένες). Ενώ μεταστατική εξάπλωση στην ομάδα συνδυασμού θεραπεία δεν ήταν σημαντικά χαμηλότερο από ό, τι στην ομάδα τραστουζουμάμπη-θεραπεία, η μετάσταση παρουσιάζονται μοναχικά.

Κατά την εξέταση συνολικά μεταστατική εξάπλωση σε Η.Ε. και ανοσοϊστολογική χρώση υπήρχε σημαντικά λιγότερη μεταστατική εξάπλωση βρέθηκαν στην ομάδα trastuzumab αγωγή σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (ρ = 0,002). Ειδικότερα, μια σημαντική μείωση των πνευμονικών μεταστάσεων θα μπορούσε να παρατηρηθεί σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου μετά AMD3100, trastuzumab και συνδυασμένη θεραπεία, καθώς και για το ήπαρ μετά trastuzumab και συνδυασμένη αγωγή (Σχήμα 2C). Οι μικρομεταστατικών τιμές παρουσιάζονται ως ct-τιμές δέλτα του ελέγχου και αγωγή ομάδες.

Διάχυτη καρκινικά κύτταρα στο μυελό των οστών

Για να προσδιοριστεί η παρουσία διαδίδονται καρκινικών κυττάρων στο μυελό των οστών, διάχυτη κύτταρα όγκου (DTC) απομονώθηκαν από μυελό των οστών των ποντικών με κλίση πυκνότητας και οπτικοποιήθηκαν με χρωμογόνο ανοσοχρώση. Το εύρημα της κυτοκερατίνης-θετικών DTC στο μυελό των οστών έδειξε την έκταση της νόσου του όγκου (Σχήμα 2D).

CXCR4 και HER2 προφίλ έκφρασης των κυττάρων OE19

in vivo

Η

Πρώτον, τα κύτταρα OE19 εξετάστηκαν για έκφραση των CXCR4 και HER2. Δεν είναι μόνο το HER2-υπερέκφραση, αλλά και η ενίσχυση του γονιδίου της είναι κλινικής σημασίας, έτσι

Her2

κατάσταση -amplification επαληθεύτηκε. κύτταρα OE19 έδειξε μια ισχυρή έκφραση της CXCR4- και HER2-υποδοχέων σε ανοσοχρώση (Σχήμα 3Α), καθώς και μια ενίσχυση του

Her2

-γονίδιο στα ψάρια (Σχήμα 3Β). ανάλυση Semiquantitive mRNA έδειξε έκφραση του

CXCR4

και

Her2

σύγκριση με SKBR-3 κυτταρικές σειρές (Σχήμα 3C).

MDA-MB-231 και Α-CXCR4 έκφραση κύτταρα OE19 καθορίζεται από ανοσοχρώση φθορισμού (IgG 1 ελέγχου) Β Επιβεβαίωση

Her2

-amplification καθορίζεται από φθορισμού in situ υβριδισμού (κόκκινο:

Her2

-γονίδιο τόπους, πράσινο αναφορά

CENT- 17

-loci) C

CXCR4

και

HER-2

ανάλυση mRNA έκφραση του οισοφάγου κυτταρική σειρά καρκίνου OE19 σύγκριση με SKBR-3 κυτταρικές γραμμές MDA-MB-231 και και null ελέγχου (NC). D CXCR4 και ανάλυση επίπεδο έκφρασης HER2 καθορίστηκε με ανοσοχρώση σε πρωτογενή όγκο, ήπατος, πνεύμονα και των λεμφαδένων. Αντιπροσωπευτικά εικόνες παρουσιάζονται από τους ιστούς ενός ζώου μη επεξεργασμένων (μεγέθυνση χ 100). E Ένταση HER2- και CXCR4-έκφραση σημειωθούν στο πρωτοπαθούς όγκου και των μεταστάσεων. Θετικότητα-βαθμολογίες του πρωτογενούς όγκου και των αντίστοιχων μεταστάσεις αντιστοιχήθηκαν για να αξιολογηθεί η εμφάνιση και η συσχέτιση των πρωτογενών έκφρασης όγκου και εκείνη των αντίστοιχων μεταστάσεων του μεταξύ των θεραπευτικών ομάδων. θεραπεία trastuzumab οδήγησαν στην απουσία των μεταστάσεων και επομένως δεν μπορούσαν να συμπεριληφθούν.

* Λόγω περιορισμένου χώρου, AMD3100 ήταν τα αρχικά της AMD στην

Εικόνα 3e

.

Η

Συσχέτιση CXCR4- και HER2-έκφραση στην ορθοτοπική

in vivo

μοντέλο

Δεύτερον, πρωτογενή όγκο και μεταστατικούς ιστούς από το ορθοτοπικό μοντέλο εξετάστηκαν για CXCR4- και HER2-έκφραση. CXCR4- και HER2-έκφραση παρατηρήθηκε σε όλες τις φέρουν όγκο-ιστούς, συμπεριλαμβανομένου πρωτογενούς όγκου, του ήπατος, του πνεύμονα και μεταστάσεις λεμφαδένα (Εικόνα 3D). HER2-έκφραση συσχετίζεται σημαντικά με CXCR4-έκφραση (συσχέτιση αποτελεσματική 0,490, p & lt? 0,01).

Ανώτατη ένταση της HER2-έκφρασης σε μεταστάσεις σε σύγκριση με πρωτοπαθή όγκο

Για να αξιολογήσει περαιτέρω την καταλληλότητα του HER2 – και CXCR4-συσχετισμού, ένα διάγραμμα σημείο προς σημείο σχεδιάστηκε (Σχήμα 3Ε), στην οποία χαρακτηρίστηκε κάθε μεταστατικό περίπτωση, αναφέροντας τόσο την ένταση της έκφρασης του μετάστασης (γ-άξονας) και την ένταση της έκφρασης των αντίστοιχων του πρωτογενούς όγκου (χ-άξονας). Σύμφωνα με την ομάδα θεραπείας, χρησιμοποιήθηκαν διαφορετικά σύμβολα. Το πρώτο διάγραμμα εμφανίζει το HER2-ένταση, το δεύτερο το CXCR4 έντασης.

Είναι ενδιαφέρον, μια υψηλότερη έκφραση του HER2 και CXCR4 θα μπορούσε να δει σε μεταστάσεις όλων των θεραπευτικών ομάδων σε σχέση με τις αντίστοιχες πρωτογενείς όγκους τους. Η ένταση του HER2- έκφρασης (στείλει 1-3) των πρωτογενών όγκων και των αντίστοιχων μεταστάσεις τους εφαρμόστηκαν στο πρώτο διάγραμμα στο σχήμα 3Ε. Το γράφημα έδειξε ότι η ένταση του HER2-θετικότητα με ανοσοχρώση κυμαίνεται μεταξύ ιστών των ομάδων θεραπείας. Ενώ το HER2-θετικότητα του πρωτογενούς όγκου στην ομάδα ελέγχου περιορίστηκε σε ελαφρύτερα ένταση (βαθμολογία 1), μεταστάσεις εκφράζεται HER2 σε όλα εντάσεις. Υπό θεραπεία AMD3100, ωστόσο, HER2 εκφραζόταν μόνο σε ισχυρότερη εντάσεις (βαθμολογίες 2 + 3) στον πρωτογενή όγκο. Μεταστάσεις στην ομάδα AMD3100 επεξεργασμένο εκφράζουν HER2 σχεδόν αποκλειστικά στην υψηλότερη ένταση (βαθμός 3).

Κατά την εφαρμογή των βαθμολογίες έντασης του CXCR4-θετικότητα (σκορ 1-3) των πρωτογενών όγκων και των αντίστοιχων μεταστάσεις τους να το δεύτερο διάγραμμα στο Σχήμα 3Ε, οι βαθμολογίες στην ομάδα ελέγχου κυμάνθηκε μεταξύ ελαφρύτερο και μεσαίου εντάσεις (βαθμολογίες 1 + 2). Παρά το γεγονός ότι η ένταση των επιπέδων CXCR4-έκφραση των πρωτογενών όγκων στην ομάδα αγωγής AMD3100 έφθασε υψηλότερα επίπεδα έκφρασης (βαθμολογία 3), η ένταση της μεταστατικής CXCR4-έκφραση έκανε μόνο βαθμό μέτρια επίπεδα (βαθμολογία 2).

και στις δύο διαγράμματα, η ομάδα trastuzumab αγωγή δεν μπορεί να αξιολογηθεί με τον τρόπο αυτό, όπως δεν υπήρχαν μεταστάσεις. Για την ομάδα συνδυασμένης θεραπείας, υπήρχαν μόνο δύο μεταστατικό περιπτώσεις καθιστώντας την αξιολόγηση στατιστικά δεν είναι αξιόπιστες.

Η αναβάθμιση του HER2-έκφρασης υπό θεραπεία AMD3100

Hypothesising ότι η έκφραση του CXCR4 ή /και HER2, τους οι αντίστοιχες πορείες και την αλληλεπίδρασή τους εμπλέκονται στην μεσολάβηση της προόδου των όγκων και των μεταστατικών παλιννόστησης, κάθε θεραπευτική ομάδα αξιολογήθηκε ξεχωριστά ως προς την ένταση του HER2- και τα επίπεδα CXCR4-έκφρασης. Χρησιμοποιώντας το ίδιο διάγραμμα (Σχήμα 3Ε) την ένταση του HER2- και CXCR4-έκφραση συγκρίθηκε μεταξύ των ομάδων θεραπείας. Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, οι HER2-εντάσεις των μεταστάσεων και πρωτογενών όγκων της ομάδας AMD3100 αγωγή αντιπροσωπεύεται από υψηλότερες βαθμολογίες σε όλη.

Όταν στατιστικώς σύγκριση της έκφρασης HER2 του πρωτογενούς όγκου και των μεταστάσεων μεταξύ θεραπευτικών ομάδων, ένα σημαντικά υψηλότερο HER2-έκφραση παρατηρήθηκε στην ομάδα που trastuzumab-αγωγή (p = 0,003) και την ομάδα που AMD3100-αγωγή (p = 0,003) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Κατά την εξέταση του CXCR4-έκφρασης, ένας σημαντικά υψηλότερη έκφραση παρατηρήθηκε στην ομάδα που trastuzumab-αγωγή (p = 0,003) και υψηλότερη έκφραση στην ομάδα AMD3100-αγωγή (p = 0,065) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Η συνδυασμένη ομάδα θεραπείας (τραστουζουμάμπη /AMD3100) δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές HER2-έκφραση ή CXCR4-έκφραση σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου.

Επικύρωση CXCR4- και HER2-συν-έκφραση σε ανθρώπινο καρκίνωμα του οισοφάγου

για να επικυρώσετε περαιτέρω τη συσχέτιση των HER2 και CXCR4 που βρέθηκε στο

in vivo

μελέτες, εξετάστηκαν ιστούς πρωτογενούς όγκου των 202 ασθενών τόσο για HER2- και CXCR4-έκφρασης με ανοσοχρώση.