Αφηρημένο

Ιστορικό

3′-δεσοξυ-3 ‘- [

18F] φθοροθυμιδίνη (

18F-FLT) είναι ένας ιχνηθέτης που χρησιμοποιείται για την εκτίμηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων em

in vivo

. Ο σκοπός της μελέτης ήταν να χρησιμοποιήσει

18F-FLT τομογραφία εκπομπής ποζιτρονίων (ΡΕΤ) για τη μελέτη αποκρίσεις θεραπεία σε μια νέα αντικαρκινική ένωση. Για να γίνει αυτό, μελετήσαμε νωρίς αντι-πολλαπλασιαστικές επιδράσεις της πειραματικής χημειοθεραπείας Top216 μη επεμβατικά από PET.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

In vivo

πρόσληψη

18F-FLT σε ανθρώπινα ξενομοσχεύματα καρκίνου των ωοθηκών σε ποντίκια (Α2780) μελετήθηκε σε διάφορα χρονικά σημεία μετά τη θεραπεία Top216 (50 mg /kg iv στις 0 και 48 ώρες) ξεκίνησε. Baseline

18F-FLT σαρώσεις έγιναν πριν είτε Top216 (n = 7-10) ή όχημα (n = 5-7) εγχύθηκε και επαναλήφθηκε μετά από 2 και 6 ώρες και 1 και 5 ημέρες θεραπείας. Μια παράλληλη μελέτη έγινε με 2′-δεοξυ-2 ‘- [

18F] φθορο-D-γλυκόζης (

18F-FDG) (n = 8). πρόσληψη ιχνηλάτη μετρήθηκε ποσοτικά με τη χρήση μικρών ζώων PET /CT. αποτελέσματα απεικόνισης επικυρώθηκαν από τις μεταβολές του όγκου του όγκου και της έκφρασης των γονιδίων των Ki67 και ΤΚ1. Top216 (50 mg /kg 0 και 48 ώρες) ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου Α2780 σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Ρ & lt? 0.001).

πρόσληψη 18F-FLT μειώθηκε σημαντικά στις 2 ώρες (-52%? P & lt? 0.001), 6 ώρες (-49%? P = 0,002) και την Ημέρα 1 (-47%? P & lt? 0.001) μετά τη θεραπεία Top216. Την Ημέρα 5 πρόσληψη

18F-FLT ήταν συγκρίσιμη με πρόσληψη στην ομάδα ελέγχου. Πρόσληψη

18F-FLT ήταν αμετάβλητη στην ομάδα ελέγχου κατά τη διάρκεια του πειράματος. Στην ομάδα θεραπείας, η πρόσληψη των

18F-FDG μειώθηκε σημαντικά στις 6 ώρες (-21%? P = 0,003), Ημέρα 1 (-29%? P & lt? 0.001) και την Ημέρα 5 (-19%? P = 0.05) σε σύγκριση με την αρχική τιμή.

Συμπεράσματα /Σημασία

μία ένεση με Top216 ξεκίνησε μια γρήγορη και σημαντική μείωση στην πολλαπλασιασμού των κυττάρων εκτιμητέα από

18F-FLT μετά από 2 ώρες. Τα πρώτα μειώσεις πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων προηγείται αλλαγές στο μέγεθος του όγκου. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι

18F-FLT PET είναι πολλά υποσχόμενη για την πρώιμη μη επεμβατική εκτίμηση των επιπτώσεων της χημειοθεραπείας τόσο την ανάπτυξη φαρμάκων και για την προσαρμογή της θεραπείας σε ασθενείς

Παράθεση:. Munk Jensen Μ, Erichsen KD, Björkling F, Madsen J, Jensen ΡΒ, Højgaard L, et al. (2010) Πρώιμη Ανίχνευση Απάντηση στην Πειραματική χημειοθεραπευτικά Top216 με [

18F] FLT και [

18F] FDG PET Ανθρώπων ωοθηκών ξενομοσχευμάτων καρκίνου σε ποντίκια. PLoS ONE 5 (9): e12965. doi: 10.1371 /journal.pone.0012965

Συντάκτης: Andrew Boswell, Genentech, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 8 Ιούλη του 2010? Αποδεκτές: 28 του Αυγούστου 2010? Δημοσιεύθηκε: 24 Σεπτεμβρίου 2010

Copyright: © 2010 Munk Jensen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. AP Moller Ίδρυμα, Εθνικό Ίδρυμα Τεχνολογίας προχωρημένους της Δανίας, Svend Ίδρυμα Andersens, Novo Nordisk Foundation, Lundbeck Ιδρύματος, Birthe και John Meyer Ιδρύματος, της Δανίας Cancer Society, Rigshospitalets Ίδρυμα Ερευνών, Περιφέρεια της Δανίας και TopoTarget A /S. Οι συν-συγγραφείς που απασχολούνται από TopoTarget είχε έναν ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης και η συλλογή και ανάλυση δεδομένων. Οι άλλοι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι ακόλουθες συν-συγγραφείς έχουν σύγκρουση συμφερόντων: Peter Jensen Μπουλ: Ιδιοκτησία Ενδιαφέροντα και Απασχόληση στην TopoTarget A /S. Maxwell Sehested: Ιδιοκτησίας και Απασχόληση στην TopoTarget A /S. Fredrik Björkling: Απασχόληση σε TopoTarget A /S. Kamille Dumong Erichsen: Απασχόληση σε TopoTarget A /S. Όλοι οι άλλοι συγγραφείς δεν έχουν καμία σύγκρουση συμφερόντων. Ότι ορισμένοι από τους συν-συγγραφείς απασχολούνται από TopoTarget A /S δεν μεταβάλλει την τήρηση των συγγραφέων στα PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Για την αξιολόγηση της επίδρασης σε μελέτες σε ζώα κατά τη διάρκεια της προκλινική ανάπτυξη νέων αντικαρκινικών παραγόντων, μείωση του όγκου του όγκου είναι η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη κριτήριο για την αποτελεσματικότητα. Ωστόσο, ο χρόνος μέχρι συρρίκνωση του όγκου μπορεί να είναι μακρά και απαιτεί μετρήσεις επαναλαμβάνονται όγκου του όγκου αρκετές φορές την εβδομάδα για να δείξει αποτέλεσμα. Μη επεμβατική μοριακή απεικόνιση όπως η τομογραφία εκπομπής ποζιτρονίων (ΡΕΤ) επιτρέπει βιολογικές διαδικασίες για να απεικονιστεί και ποσοτικοποιηθεί μη επεμβατικά πάροδο του χρόνου. Μια μη επεμβατική μέθοδο για την ανίχνευση πρώιμων βιολογική απόκριση μετά αντικαρκινικής θεραπείας θα ήταν πολύτιμη στην ανάπτυξη αντικαρκινικών φαρμάκων για τη διάκριση αποτελεσματική από μη αποτελεσματικά φάρμακα πριν γίνει εμφανής αλλαγές στον όγκο του όγκου.

αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων είναι ένα από τα κύρια χαρακτηριστικά του καρκίνου [1]. Μεγάλο μέρος της έρευνας εστιάζεται στη μη επεμβατική απεικόνιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, η οποία θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για να καθορίσει μια βιολογική απόκριση στη θεραπεία νωρίς κατά τη διάρκεια της θεραπείας. 3′-δεσοξυ-3 ‘- [

18F] φθοροθυμιδίνη (

18F-FLT) χρησιμοποιείται ως ιχνηλάτη ΡΕΤ για την απεικόνιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού [2].

18F-FLT είναι ένα ανάλογο της θυμιδίνης και συνεπώς ένα υπόστρωμα της συνθετικής οδού DNA [3]. Όταν παραλαμβάνεται σε κύτταρα

18F-FLT φωσφορυλιώνεται από κινάση θυμιδίνης-1 (ΤΚ1), η οποία οδηγεί σε ενδοκυτταρική παγίδευσης. δραστηριότητα ΤΚ1 είναι στενά κυτταρικό κύκλο ρυθμίζεται και εκφράζεται κυρίως κατά τη διάρκεια της φάσης S του κυτταρικού κύκλου? Κατά συνέπεια, θεωρείται ότι αντανακλά το ποσό των πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων [4], [5]. πρόσληψη

18F-FLT συσχετίζεται θετικά με την ανάπτυξη των κυττάρων και τη δραστηριότητα ΤΚ1 [5] – [7]. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει μία συσχέτιση μεταξύ

πολλαπλασιασμός 18F-FLT πρόσληψη και καρκινικών κυττάρων, τόσο σε ξενομοσχεύματα καρκίνου σε ποντίκια [8] – [11] και τα δείγματα ανθρώπινου όγκου [12] – [14].

Αρκετές προ-κλινικές μελέτες έχουν αξιολογήσει πολλαπλασιασμός μετρήθηκε με

18F-FLT ΡΕΤ σε απόκριση προς διαφορετικές χημείο- και ακτινοβολίας θεραπείες σε διαφορετικά ζωικά μοντέλα καρκίνου [8] – [11], [15] – [19]. Τα αποτελέσματα από αυτές τις μελέτες διαφέρει? η πρώτη αλλαγή σε

πρόσληψη 18F-FLT βρίσκεται στην κλίμακα από 24 ώρες έως μία εβδομάδα μετά την έναρξη της θεραπείας. Ωστόσο, δεν είναι όλες οι μελέτες έχουν βρει ένα συσχετισμό μεταξύ της απόκρισης του όγκου και μια αλλαγή στην

πρόσληψη 18F-FLT μετά την έναρξη της θεραπείας [20], [21]. Φαινομενικά, το χρονικό πλαίσιο για την αξιολόγηση των αλλαγών στον πολλαπλασιασμό είναι πολύ μεταβλητό ανάλογα με τις διαφορετικές θεραπευτικές αγωγές.

Early μη επεμβατική ανίχνευση των αντι-πολλαπλασιαστική δραστηριότητα με

18F-FLT PET θα μπορούσε επίσης να είναι χρήσιμη σε μια κλινική ρύθμιση για να καθοριστεί εάν οι ασθενείς αποκρίνονται στη συμβατική θεραπεία και κατά τη διάρκεια της φάσης Ι, II και III μελέτες κατά την αξιολόγηση αποκρίσεων σε νέα αντικαρκινικά φάρμακα. Σήμερα, οι πλέον ευρέως χρησιμοποιούμενες μέθοδοι για την εκτίμηση του όγκου αποκρίσεις κλινικώς είναι με ανατομικές τεχνικές απεικόνισης όπως η αξονική τομογραφία (CT) και η μαγνητική τομογραφία (MRI) χρησιμοποιώντας τα κριτήρια ανταπόκρισης αξιολόγησης σε συμπαγείς όγκους (RECIST). Ωστόσο, αυτό απαιτεί συχνά αρκετές εβδομάδες ή μήνες πριν γίνει εμφανής μια πιθανή απάντηση [22], [23]. Πρόσφατα, οι κατευθυντήριες γραμμές για την ανάλυση αποκρίσεις όγκου με χρήση ΡΕΤ και 2′-δεοξυ-2 ‘- [

18F] φθορο-D-γλυκόζης (

18F-FDG) έχουν προταθεί εκφράζοντας την ανάγκη για πρόσθετες μεθόδους για τη μέτρηση του όγκου αποκρίσεις [24]. Νέα αντικαρκινικών παραγόντων είναι συχνά tumorstatic παρά ογκοκτόνο και οι αλλαγές στο μέγεθος του όγκου μπορεί να είναι ελάχιστη παρά αποτελεσματική θεραπεία δημιουργώντας έτσι την ανάγκη για νέες μεθόδους για την αξιολόγηση της κλινικής ανταπόκρισης εκτός συρρίκνωση του όγκου του όγκου.

18F-FDG είναι σήμερα η πιο ευρέως χρησιμοποιούμενη ραδιοιχνηθέτης για απεικόνιση στην ογκολογία και είναι πολύ χρήσιμο για την ανίχνευση και τον χαρακτηρισμό των καρκίνων. Αρκετές μελέτες έχουν αναλύσει τις αλλαγές σε

πρόσληψη 18F-FDG μετά την αγωγή κατά του καρκίνου, αλλά με μεταβλητά αποτελέσματα [25].

18F-FDG πάσχει από τον περιορισμό ότι δεν μπορεί να ανιχνεύσει επιδράσεις σε πολύ πρώιμο στάδιο και μια φλεγμονώδη απόκριση μετά τη θεραπεία του καρκίνου μπορεί σε κάποιο βαθμό ασαφή η ανίχνευση αντικαρκινικό αποτέλεσμα [26], [27].

Top216 είναι ένας πιο ισχυρός και μεταβολικά σταθερό παράγωγο του Top001, η οποία ανακαλύφθηκε από bioimage να έχουν ισχυρή και εκλεκτική δράση θανάτωσης σε κυτταρικές σειρές καρκίνου του μαστού [28]. Top001 αναστέλλει την οδό mTOR σε ένα κύτταρο-επιλεκτικό τρόπο και μετά από παρατεταμένη επώαση (~ 24 ώρες). Η συσχέτιση μεταξύ της αναστολής του mTOR και κυτταρική γραμμή η ευαισθησία είναι καλή, αλλά δεν είναι τέλεια.

Top216 αναστέλλει πρωτεΐνη, RNA, και τη σύνθεση του DNA σε ευαίσθητες κυτταρικές σειρές μετά από 1-2 ώρες επώασης και επάγει την απόπτωση. Διέγερση απόπτωσης όπως μετράται με δραστικότητα κασπάσης 3/7 είναι ανιχνεύσιμη μετά από 6 ώρες σε πιο ευαίσθητες κυτταρικές σειρές. Top001 και Top216 δεν αναστέλλει σημαντικά κινάσες (Upstate πίνακα κινάσης) ή υποδοχείς (πίνακας Cerep) σε σχετικές συγκεντρώσεις και προς το παρόν ο ακριβής στόχος ή ο τρόπος δράσης μένει να προσδιοριστεί. Top216 δείχνει ισχυρός

in vivo

αποτελεσματικότητα σε μοντέλα ξενομοσχεύματος ποντικού του ανθρώπινου μαστού, του προστάτη, των ωοθηκών και του καρκίνου του παγκρέατος, τόσο όταν χορηγείται ενδοφλεβίως και po. Top216 βρίσκεται σήμερα στο στάδιο της ασφάλειας και της εξέτασης της τοξικολογίας, με σκοπό να κινηθεί η ένωση στην κλινική.

Ο σκοπός της μελέτης ήταν να χρησιμοποιήσει

18F-FLT PET για να μελετήσει τις απαντήσεις θεραπεία για ένα νέα ένωση αντικαρκινική μη επεμβατικά. Για να γίνει αυτό θα απεικονιστεί τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων

in vivo

με

18F-FLT ΡΕΤ σε ένα ανθρώπινο μοντέλο όγκου ποντικού καρκίνου μετά την έναρξη της θεραπείας με Top216. Πρόσληψη

18F-FLT ήταν σε σύγκριση με την πρόσληψη του

18F-FDG και Ki67 και την έκφραση του γονιδίου ΤΚ1.

Υλικά και Μέθοδοι

μοντέλο όγκου

Ζώων φροντίδα και όλες οι πειραματικές διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν υπό την έγκριση του Συμβουλίου Ευημερίας των ζώων της Δανίας (2006 /561-1124). Θήλυ NMRI (Naval Medical Research Institute) γυμνά ποντίκια (ηλικίας 8-11 εβδομάδων) αποκτήθηκαν από την Taconic Ευρώπη (Lille Skensved, Denmark) και αφέθηκαν να εγκλιματιστούν για μία εβδομάδα στην εγκατάσταση ζώων πριν από την έναρξη κάθε παρέμβαση. Η ανθρώπινη κυτταρική γραμμή καρκινώματος ωοθηκών Α2780 (ένα δώρο από τον R. Ozols, Fox Chase Cancer Center της Φιλαδέλφειας, PA, Ιανουάριος 2004) χρησιμοποιήθηκε. 10

7 κύτταρα σε 100 μΙ μέσου αναμιγνύεται με 100 μL Matrixgel ™ Υπόγειο Membrane Matrix (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) ενέθηκαν υποδορίως σε αριστερό και το δεξί πλευρό αντίστοιχα κατά τη διάρκεια αναισθησίας με 1:01 ν /ν μίγμα της Hypnorm® (Janssen Pharmaceutica, Beerse, Βέλγιο) και Dormicum® (Roche, Βασιλεία, Ελβετία). Η κυτταρική σειρά έχει δοκιμαστεί χωρίς μυκόπλασμα? Ωστόσο, δεν έχει πιστοποιηθεί. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε RPMI (Roswell Park Memorial Institute) μέσο 1640+ GlutaMAX (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου μόσχου (Biological Industries, Israel) και 1% πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη (Invitrogen) σε 5% CO

2 στους 37 ° C.

Πειραματικός σχεδιασμός

Έξι ομάδες ποντικών ακολουθούνται (n = 5-10 όγκων ανά ομάδα). Η αγωγή ξεκίνησε την ημέρα 12-24 μετά την εμφύτευση των κυττάρων του όγκου, όταν οι όγκοι του όγκου ήταν κατά μέσο όρο 225 mm

3. Τα ποντίκια έλαβαν αγωγή Top216 50 mg /kg ί.ν. ή όχημα (2% DMSO, 20% ΗΡ-β-CD σε φυσιολογικό ορό) στους 0 και 48 ώρες (εικόνα 1). Αυτή η δόση ήταν Top216 σε προηγούμενες αναλύσεις αποδειχθεί ότι αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου Α2780 ξενομόσχευμα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Πριν από την έναρξη της θεραπείας, τα ποντίκια σαρώθηκαν με

18F-FLT ή

18F-FDG, προκειμένου να προσδιοριστεί το επίπεδο αναφοράς της πρόσληψης του ιχνηθέτη.

18F-FLT ή

18F-FDG σαρώσεις επαναλήφθηκαν στις 6, 30 (Ημέρα 1) και 126 (Ημέρα 5) ώρες μετά την ένεση Top216 ή του οχήματος (σχήμα 2) Επιπλέον, μια ομάδα ποντικών σαρώθηκε με

18F-FLT κατά την έναρξη και 2 ώρες μετά την έναρξη της θεραπείας (Top216 ή όχημα). Ο όγκος του όγκου παρακολουθήθηκε με CT κατά τη διάρκεια των πειραμάτων [29]. Οι όγκοι των όγκων υπολογίστηκαν σε σχέση με τον όγκο κατά την έναρξη.

Η

Η έκφραση του Κί67 και ΤΚ1 αναλύθηκε

in vitro

σε μια παράλληλη ομάδα ποντικών, που υποβλήθηκαν σε αγωγή με είτε Top216 ή του οχήματος και βιοψία πριν και στις 6, 30 (Ημέρα 1) και 126 (Ημέρα 5) ώρες μετά την έναρξη της θεραπείας. Οι βιοψίες απομακρύνθηκαν με μία βελόνα 18G και τοποθετήθηκε αμέσως σε RNA later® (Ambion (Europe) Limited, Cambridgeshire, UK). Όλα τα δείγματα φυλάχθηκαν στους 4 ° C και την επόμενη μέρα RNAlater® αφαιρέθηκε και τα δείγματα μεταφέρθηκαν σε -80 ° C μέχρι την περαιτέρω επεξεργασία qPCR.

Η

Σύνθεση

18F-FLT και

18F-FDG

[18F] FLT συντέθηκε χρησιμοποιώντας 3-Ν-Βοο-1- [5-Ο- (4,4′-διμεθοξυτριτυλ) -3-O-νοσύλιο-2-δεοξυ-BD- lyxofuranosyl] θυμίνη ως πρόδρομος και συντίθεται σε ένα GE TracerLab MX Synthesizer. Όλα τα αντιδραστήρια και κασέτες FLT αγοράστηκαν από ABX (Radeberg, Γερμανία). Η ραδιοχημική καθαρότητα προσδιορίζεται μετά μέτρηση του περιεχομένου του φθορίου-18 και άλλων ραδιενεργών ακαθαρσιών στο διάλυμα FLT μετράται με TLC και HPLC αντίστοιχα. Το περιεχόμενο αιθανόλης και ακετονιτριλίου προσδιορίστηκε με ανάλυση GC. Το ρΗ μετρήθηκε με ένα πεχάμετρο. Σε ξεχωριστές παρασκευές, η σταθερότητα των παρασκευασμάτων εξετάστηκε μετά από 8 ώρες. HPLC διεξήχθη σε σύστημα Gilson HPLC (Biolab A /S, Δανία) εξοπλισμένο με ένα Dionex υν-ανιχνευτή (Dionex Denmark A /S, Δανία) και έναν ανιχνευτή ραδιενέργειας σε σειρά. Η στήλη HPLC ήταν μια Luna 5 μ C18 (2) 100Α, 150 χ 4,6 mm (Phenomenex, Δανία). Το έκλουσμα ήταν νερό /ακετονιτρίλιο 90/10 και ένα ρυθμό ροής 1 ml /min. υν ανίχνευση στα 267 nm. πλάκες TLC ελήφθησαν από την Merck και νερό /ακετονιτρίλιο 5/95 χρησιμοποιήθηκε ως μέσο έκλουσης. Υπολειμματικοί διαλύτες προσδιορίσθηκαν σε Shimatzu GC 2014 (Holm & amp? Halby, A /S, Δανία) εφοδιασμένο με Chromosorb 101, 100-120 Mesh, στήλη 1/8 «× 10», FID ανιχνευτή και φέρον αέριο ήλιο. Η θερμοκρασία της στήλης ήταν 210 ° C. Η ραδιοχημική καθαρότητα του

18F-FLT ήταν & gt? 98% με μία ειδική ραδιενέργεια που κυμαίνεται από 150-270 GBq /μmol στο EOS. Η περιεκτικότητα σε αιθανόλη ήταν στο εύρος 7-8% και η ποσότητα του ακετονιτριλίου ήταν κάτω από το όριο ανίχνευσης. Το ρΗ ήταν 7.5 – 7.8. Η ραδιοχημική καθαρότητα, περιεκτικότητα σε αιθανόλη και το pH δεν άλλαξε μετά από 8 ώρες φύλαξη σε θερμοκρασία δωματίου.

18F-FDG αποκτήθηκε από την καθημερινή παραγωγές για κλινική χρήση (Rigshospitalet, Κοπεγχάγη, Δανία).

microPET και microCT απεικόνισης

Ποντίκια ενέθηκαν IV με 10,0 ± 1,5 (μέση τιμή ± SD) MBq

18F-FDG ή 6,9 ± 2,4 (μέση τιμή ± SD) MBq

18F-FLT. Τα ποντίκια νηστικοί όλη την νύχτα πριν από κάθε

18F-FDG σάρωση [30]. Μία ώρα μετά τα ποντίκια ένεση ιχνηθέτη αναισθητοποιήθηκαν με 3% sevofluran (Abbott Scandinavia AB, Solna, Σουηδία) αναμειγνύεται με 35% O

2 N

2 και σταθερά σε ένα κρεβάτι με παρουσία τριών βασικών δεικτών που επιτρέπουν τη σύντηξη των PET και CT εικόνες. Μια ΡΕΤ scan 20 λεπτά αποκτήθηκε χρησιμοποιώντας ένα MicroPET Focus 120 (Siemens Medical Solutions, Malvern, ΡΑ, USA). Μετά την απόκτηση δεδομένων, τα δεδομένα PET ήταν τοποθετημένα σε sinograms και στη συνέχεια ανακατασκευάστηκε με τη μέγιστη αλγόριθμο ανακατασκευής των υστέρων (MAP). Το μέγεθος pixel ήταν 0.866 × 0.866 × 0,796 χιλιοστά και στο κέντρο οπτικό πεδίο το ψήφισμα ήταν 1,4 χιλιοστά πλήρες πλάτος στο μισό της μέγιστης.

Μετά τη σάρωση microPET, μια σάρωση microCT αποκτήθηκε με σύστημα MicroCAT® II (Siemens Medical Solutions). Ένα 7 λεπτά και 10 δευτερόλεπτα αξονική τομογραφία έγινε με τις ρυθμίσεις παραμέτρων: βήματα 360 περιστροφή, τάση σωλήνα 60 kV, ρεύμα σωλήνα 500 μΑ, binning 4 και το χρόνο έκθεσης 310 ms. Το μέγεθος pixel ήταν 0.091 × 0.091 × 0.091 mm.

PET και microCT εικόνες συγχωνεύθηκαν στο λογισμικό Inveon (Siemens Medical Solutions). Πριν περιοχή συγχώνευση των συμφερόντων (ROIs) καταρτίστηκαν στις εικόνες CT με το χέρι από την ποιοτική αξιολόγηση που καλύπτει το σύνολο των όγκων και εν συνεχεία ο όγκος του όγκου και του ιχνηθέτη πρόσληψη, η οποία αξιολογείται από αποκοπή τιμών πρόσληψης (SUV) μέση και μέγιστη, παρήχθησαν από την άθροιση των voxels εντός της τομογραφικές αεροπλάνα.

ποσοτική πραγματικού χρόνου αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (qPCR)

Ολικό RNA απομονώθηκε από τις βιοψίες με TRI reagent® ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή (Molecular Research Center Inc., ΟΗ, USA ) και στη συνέχεια το RNA ακεραιότητα μετρήθηκε σε 2.100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). της ποιότητας του RNA αναφέρεται ως αριθμός ακεραιότητα του RNA (RIN) [31]. Η συγκέντρωση του RNA προσδιορίστηκε με NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific, Wilmington, DE, USA). Ολικό RNA (0.3 μα) αντιστράφηκε μεταγραφή χρησιμοποιώντας το κιτ Affinityscript ™ QPCR cDNA Synthesis (Stratagene, La Jolla, CA, USA) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα δείγματα ψύχθηκαν και αποθηκεύτηκαν στους -20 ° C μέχρι την περαιτέρω χρήση.

Η γονιδιακή έκφραση προσδιορίστηκε ποσοτικά στο σύστημα πραγματικού χρόνου PCR Mx3000P® από την Stratagene. Κί67 και ΤΚ1 καθένα ποσοτικά σε ένα διπλής όψης με συρραφή ΤΑΤΑ πρωτεΐνης (TBP). Χρησιμοποιήθηκε το σετ αντιδραστηρίων Πυρήνας Brilliant® QPCR (Stratagene). Βελτιστοποίηση δοκιμασίες οδήγησαν σε αύξηση κατά 50% σε dNTP και Taq πολυμεράση. Μια συγκέντρωση MgCl του 5,5 mm χρησιμοποιήθηκε για όλα τα πειράματα. Το ακόλουθο θερμικό προφίλ χρησιμοποιήθηκε σε όλα τα πειράματα:. 10 λεπτά μετουσίωση στους 95 ° C που ακολουθείται από 45 κύκλους με μετουσίωση επί 30 δευτερόλεπτα στους 95 ° C και ανόπτηση /επιμήκυνση στους 60 ° C για 1 λεπτά με τα

Σχετική χρησιμοποιήθηκε ποσοτικοποίηση με τη συγκριτική μέθοδο (2

-ΔΔCt) [32]. Οι μετρήσεις διορθώθηκαν για την αποτελεσματικότητα της αντίδρασης PCR υπολογίζονται από τις καμπύλες αραίωσης 5 φορές αντικαθιστώντας έτσι 2 στον τύπο με (Ε + 1) [33]. διορθώσεις απόδοσης έγιναν για κάθε γονίδιο σε κάθε δοκιμασία. Ιστού από την αρχική τιμή δείγματα υπηρέτησε ως βαθμονομητή. ΤΒΡ χρησιμοποιήθηκε ως γονίδιο αναφοράς. Αυτό το γονίδιο προηγουμένως δοκιμαστεί για να είναι σταθερή σε όγκο έναντι φυσιολογικό ιστό και στη συνέχεια βρέθηκε να είναι σταθερό σε αυτή την πειραματική διάταξη.

Εκκινητές και TaqMan διπλής-σήμανσης ανιχνευτές σχεδιάστηκαν χρησιμοποιώντας Beacon Designer (PREMIER Biosoft, Palo Alto, CA ΗΠΑ). Οι εκκινητές και ανιχνευτές που φαίνεται στο (πίνακας 1). Για κάθε γονίδιο βρέθηκε η βέλτιστη συγκέντρωση εκκινητή και ανιχνευτή. Όλα τα δείγματα αναλύθηκαν εις τριπλούν χρησιμοποιώντας μία μΙ cDNA. Σε κάθε δείγμα περιελάμβανε μια μη-αντίστροφη ελέγχου μεταγραφής (NORT), και σε κάθε πλάκα συμπεριλήφθηκε ένας έλεγχος χωρίς πρότυπο (NTC).

Η

Η στατιστική ανάλυση

Η σύγκριση των όγκων όγκου μεταξύ Top216 αγωγή και των ομάδων ελέγχου υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας t-test ενός μη ζευγαρωμένα σπουδαστή. Paired t-test χρησιμοποιήθηκε για συγκρίσεις εντός του ομίλου. Bonferroni διόρθωση του p-τιμές για πολλαπλές συγκρίσεις εφαρμόστηκε. Όλα τα δεδομένα ελέγχθηκαν για να είναι φυσιολογική διανέμεται με τη βοήθεια τεστ Kolmogorov-Smirnov. Οι υπολογισμοί έγιναν με SPSS 16.0. Τα δεδομένα αναφέρονται ως μέση τιμή ± SEM και P & lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Επίδραση των Top216 με το μέγεθος του όγκου

Top216 (50 mg /kg σε 0 και 48 ώρες) ανέστειλε την ανάπτυξη του Α2780 ανθρώπινης ωοθήκης ξενομοσχεύματα καρκίνου σε ποντίκια

in vivo

σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Ρ & lt? 0.001) (σχήμα 3). Τα μεγέθη των μη επεξεργασμένων όγκων αυξήθηκε κατά περίπου ένα συντελεστή 3 κατά τη διάρκεια της μελέτης και οι όγκοι των όγκων αγωγή παρέμειναν αμετάβλητες.

Α) Τα αποτελέσματα της Top216 επί της ανάπτυξης ξενομοσχευμάτων όγκου Α2780. Ο όγκος του όγκου προσδιορίστηκε με microCT. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με Top216 (50 mg /kg) ή φορέα στους 0 και 48 ώρες. *) Η P & lt? 0,05, **) P & lt? 0,01 έναντι βασικής γραμμής και

# # #) P & lt? 0,001 έναντι του ελέγχου. n = 15 όγκων ανά ομάδα. Β) Μεταβολές στον όγκο του όγκου αξιολογήθηκε από την Ημέρα αναλογία 5 /βασική γραμμή στην ομάδα ελέγχου ως συνάρτηση της πρόσληψης FLT βασικής γραμμής. n = 7 όγκων. R

2 = 0,61, P = 0,04.

Η

18F-FLT και

18F-FDG πρόσληψη

πρόσληψη Baseline όγκου των

18F- FLT στο μοντέλο όγκου Α2780 ήταν σχετικά υψηλό (SUVmean 1,05 ± 0,03), γεγονός που καθιστά εύκολο να διαφοροποιήσει όγκου από μη καρκινικούς ιστούς ενώ για

18F-FDG μόνο παρατηρήθηκε μια μέτρια πρόσληψη όγκου (SUVmean 0,48 ± 0,02). Στην ομάδα ελέγχου, αρχική τιμή απορρόφησης

18F-FLT προβλεπόμενη αύξηση όγκου του όγκου πάνω από 5 ημέρες (γραμμική παλινδρόμηση του SUVmean γραμμής βάσης έναντι του όγκου του όγκου την Ημέρα αναλογία 5 /αρχική τιμή: r

2 = 0,61, Ρ = 0,04) (Σχήμα 3). Καμία συσχέτιση μεταξύ της βασικής γραμμής παρατηρήθηκε

18F-FDG πρόσληψη και τον όγκο του όγκου αύξηση.

Πρόσληψη

18F-FLT αξιολογούνται από SUVmean μειώθηκε σημαντικά από 1.09 ± 0.03 κατά την έναρξη σε 0,53 ± 0,02 (-52 %? Ρ & lt? 0.001) στις 2 ώρες, σε 0,56 ± 0,06 (-49%? Ρ & lt? 0.001) στις 6 ώρες και σε 0,58 ± 0,03 (-47%? Ρ & lt? 0.001) κατά την ημέρα 1 μετά από την έναρξη της θεραπείας Top216 (σχήμα 4 5).

Α) Οι οκτώ εικόνες στα αριστερά είναι αντιπροσωπευτικά στεφανιαία λιωμένο PET /CT εικόνες των δύο ποντίκια σαρωθεί με

18F-FLT κατά την έναρξη και σε 6 ώρες και 1 και 5 ημέρες μετά την έναρξη της θεραπείας . Οι εικόνες στην κορυφή δείχνουν ένα ποντικό που νοσηλεύθηκε με Top216 και οι εικόνες στο κάτω μέρος δείχνουν ένα ποντίκι ελέγχου που έλαβε όχημα. Οι τέσσερις εικόνες στη δεξιά δείχνουν συντήκονται PET /CT εικόνες των δύο αντιπροσωπευτικών ποντικούς που έλαβαν είτε Top216 ή όχημα και σαρώνεται στη βασική γραμμή και 2 ώρες μετά την έναρξη της θεραπείας. Τα βέλη δείχνουν προς την κατεύθυνση των όγκων. Β) Εκπρόσωπος στεφανιαία λιωμένο PET /CT εικόνες των δύο ποντίκια σαρωθεί με

18F-FDG κατά την έναρξη και 6 ώρες και 1 και 5 ημέρες μετά την έναρξη της θεραπείας. Οι εικόνες στην κορυφή δείχνουν ένα ποντικό που νοσηλεύθηκε με Top216 και οι εικόνες στο κάτω μέρος δείχνουν ένα ποντίκι ελέγχου που έλαβε όχημα. Τα βέλη δείχνουν προς την κατεύθυνση των όγκων.

Η

επεξεργασία /όχημα Top216 ξεκίνησε σε 0 ώρες και επαναλαμβάνεται στις 48 ώρες μετά την πρώτη ένεση. N = 5-10 όγκων ανά ομάδα. *) Η P & lt? 0,05, **) P & lt? 0,01, ***) Η P & lt? 0.001 σε σύγκριση με την αρχική τιμή. Οι δύο γραφικές παραστάσεις στα αριστερά δεδομένα δείχνουν από τα πειράματα

18F-FLT και οι δύο γραφικές παραστάσεις στα δεξιά δεδομένα δείχνουν από τα πειράματα

18F-FDG.

Η

Μετά από 5 ημέρες

18F -FLT πρόσληψη (1.33 ± 0.08) ήταν συγκρίσιμη με την αρχική τιμή πρόσληψη. SUVmean ήταν αμετάβλητη στην ομάδα ελέγχου κατά τη διάρκεια του πειράματος. τιμές SUVmax μειώθηκε σημαντικά από 2.01 ± 0.09 κατά την έναρξη σε 0,89 ± 0,05 σε 2 ώρες (-55%? P & lt? 0.001), σε 0,94 ± 0,08 στις 6 ώρες (-53%? P = 0,002) και 0.84 ± 0.03 στην Ημέρα 1 (-58%? P & lt? 0.001). τιμές SUVmax αυξήθηκε σε 2,26 ± 0,12 σε 5η ημέρα μετά την έναρξη της θεραπείας (13%? P = 0.04). SUVmax ήταν αμετάβλητη στην ομάδα ελέγχου, ωστόσο, αυξήθηκε ελαφρώς κατά την 5η ημέρα μετά την έναρξη της θεραπείας σε σύγκριση με την αρχική τιμή (13%? P = 0.03).

Πρόσληψη

18F-FDG αξιολογούνται από SUVmean μειώθηκε σημαντικά από 0.49 ± 0,03 κατά την έναρξη σε 0,39 ± 0,02 (-21%? Ρ = 0,003) στις 6 ώρες, έως 0,35 ± 0,01 (-29%? Ρ & lt? 0.001) από την Ημέρα 1 και σε 0,40 ± 0,02 (-19%? Ρ = 0,05 ) την ημέρα 5 (σχήμα 4 + 5). Πρόσληψη

18F-FDG στην ομάδα ελέγχου ήταν σημαντικά αυξημένη σε Ημέρα 5 σε σύγκριση με την αρχική τιμή πρόσληψης (27%? Ρ = 0,05). τιμές SUVmax μειώθηκε σημαντικά από 0,92 ± 0,06 κατά την έναρξη σε 0,64 ± 0,04 σε 6 ώρες μετά την ένεση (-31%? Ρ & lt? 0.001), σε 0,53 ± 0,02 την Ημέρα 1 (-42%? Ρ & lt? 0.001) και προς 0,66 ± 0,03 την Ημέρα 5 (-29%? P = 0,01). SUVmax ήταν αμετάβλητη στην ομάδα ελέγχου κατά τη διάρκεια του πειράματος.

Η έκφραση της Κί67 και ΤΚ1

Η έκφραση του γονιδίου αναφοράς TBP ήταν σταθερή κατά τη διάρκεια του πειράματος. Οι διαφορές στη Ct τιμές μεταξύ κανονικών δειγμάτων και των δειγμάτων NORT ήταν 13 (διάμεσος). αριθμοί ακεραιότητα RNA (RIN-τιμές) ήταν 9,1 ± 0,1 (μέση τιμή ± SD) για όλα τα δείγματα.

Gene τα επίπεδα έκφρασης του Κί67 και ΤΚ1 φαίνεται στο σχήμα 6. Στο έκφραση ομάδα θεραπείας του Κί67 ήταν σημαντικά χαμηλότερη 6 ώρες μετά την ένεση (-31%, P = 0,01) και την Ημέρα 1 (-71%? P & lt? 0.001) μετά τη θεραπεία αρχίζουν σε σύγκριση με την αρχική τιμή. Έκφραση του Κί67 ήταν 21% αύξηση την Ημέρα 5 (P = 0,04) σε σύγκριση με την αρχική τιμή. Η έκφραση του Κί67 στην ομάδα ελέγχου ήταν σημαντικά χαμηλότερη στις 6 ώρες (-17%? Ρ = 0,01). Σε σύγκριση με την αρχική τιμή

Δεδομένα παρουσιάζονται ως φορές αλλαγές μετά από θεραπεία με Top216 /οχήματος σε σχέση με τα αρχικά επίπεδα (n = 7 όγκοι ανά ομάδα). Top216 θεραπεία ξεκίνησε στο χρονικό σημείο 0 και επαναλαμβάνεται στις 48 ώρες μετά την πρώτη ένεση. *) Η P & lt? 0,05, **) P & lt? 0,01, ***) Η P & lt? 0.001 σε σύγκριση με την αρχική τιμή

Η

Στην έκφραση ομάδα θεραπεία της ΤΚ1 μειώθηκε σημαντικά κατά την Ημέρα 1 (-56%. , P & lt? 0.001) σε σύγκριση με την αρχική τιμή. Κατά την Ημέρα 5 έκφραση του ΤΚ1 αυξήθηκε (30%, Ρ = 0,013) σε σύγκριση με την αρχική τιμή. Στην ομάδα ελέγχου της έκφρασης της ΤΚ1 ήταν αμετάβλητη κατά τη διάρκεια του πειράματος.

Συζήτηση

Μία ένεση με Top216 ξεκίνησε μια γρήγορη και σημαντική μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων του 52% εκτιμητέο από

18F-FLT ΡΕΤ ήδη 2 ώρες μετά την ένεση. Η μείωση αυτή διήρκησε για τουλάχιστον 1 ημέρα, αλλά την Ημέρα 5 (3 ημέρες μετά την

ου θεραπεία 2) πρόσληψη

18F-FLT ήταν συγκρίσιμη με την πρόσληψη στην ομάδα ελέγχου που υποδηλώνει ότι τα καρκινικά κύτταρα είχαν ανακτήσει τον πολλαπλασιασμό τους χωρητικότητα. Πρόσληψη

18F-FLT στην ομάδα ελέγχου δεν άλλαξε κατά τη διάρκεια του πειράματος επικύρωση έτσι την αντι-πολλαπλασιαστική επίδραση των Top216. Σε αντίθεση με την απότομη μείωση στην

πρόσληψη 18F-FLT από την έναρξη της θεραπείας, μια μικρή, αλλά σημαντική, μείωση σε ποσοστό

πρόσληψη 18F-FDG παρατηρήθηκε στις 6 ώρες και την ημέρα 1 μετά την έναρξη της θεραπείας Top216, και αυτό μείωση διήρκεσε μέχρι την ημέρα 5. αλλαγές στην

πρόσληψη 18F-FLT (μείωση max: 52%? 2 ώρες) ήταν πιο έντονη από αλλαγές στο

πρόσληψη 18F-FDG (μείωση max: 29%? Ημέρα 1). Ωστόσο, στο τέλος του πειράματος,

πρόσληψη 18F-FDG παρέμεινε χαμηλότερα από ό, τι κατά την έναρξη της ομάδας Top216, ενώ αυξήθηκε στην ομάδα ελέγχου.

Η μείωση σε ποσοστό

18F-FLT πρώιμη πρόσληψη μετά την ένεση δεν συνοδεύτηκε από μία μείωση στον όγκο του όγκου ως όγκος των όγκων δεν άλλαξε κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Αυτό δείχνει ότι η χρήση μη-επεμβατική απεικόνιση για την απόκριση του όγκου είναι σημαντικό αφού αξιολογηθεί μείωση στον όγκο του όγκου ως ένα τελικό σημείο θα έχουν δημιουργήσει ένα ψευδώς αρνητικό συμπέρασμα. αντι-όγκου Top216 ήταν, ωστόσο, εξακολουθεί να θεωρείται σε σχέση με την ομάδα ελέγχου. Αλλαγές στη διαθεσιμότητα ιχνηθέτη π.χ. ως συνέπεια της αιμάτωσης όγκου μεταβολές μετά τη θεραπεία, θα μπορούσε να εξηγήσει μερικές από την επίδραση στην μειωμένη πρόσληψη

18F-FLT. Ωστόσο, το γεγονός ότι

πρόσληψη 18F-FDG δεν μειώθηκε με τον ίδιο τρόπο όπως

18F-FLT οδηγεί στην υπόθεση ότι μειώνονται σε

πρόσληψη 18F-FLT δεν είναι μόνο λόγω της αλλαγής στην αιμάτωση του όγκου, αλλά επίσης σε μία φυσιολογική αλλαγή στον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων. Αυτό περαιτέρω επικυρωθεί με μια παρόμοια μείωση στην έκφραση του γονιδίου Κί67.

Οι μετρήσεις της προσλήψεως ιχνηλάτη για την Ημέρα 5 μπορεί να ερμηνευθεί τόσο ως μέτρο του πολλαπλασιασμού των κυττάρων 5 ημέρες μετά την έναρξη της θεραπείας και η κατάσταση πολλαπλασιασμός 3 ημέρες μετά την δεύτερη ένεση Top216. Κατά συνέπεια, μια ένεση Top216 ανέστειλε τον πολλαπλασιασμό κάπου μεταξύ 1 και 3 ημέρες, στη συνέχεια τα κύτταρα του όγκου ανακτήθηκαν ικανότητα πολλαπλασιασμού τους. Αυτή η πληροφορία θα μπορούσε να είναι χρήσιμη κατά το σχεδιασμό προγραμμάτων θεραπείας κατά τη διάρκεια της προ-κλινικές έρευνες και στο μέλλον κλινικά πρωτόκολλα προκειμένου να βρεθεί η βέλτιστη πρόγραμμα θεραπείας.

Την 5η ημέρα μετά την έναρξη της θεραπείας

18F-FDG πρόσληψη ήταν 19% χαμηλότερα σε σύγκριση με την αρχική τιμή, ενώ η πρόσληψη των

18F-FLT ήταν συγκρίσιμη με την αρχική τιμή. Πρόσληψη

18F-FDG ήταν, κατά συνέπεια, επηρεάζεται για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα από ό, τι

πρόσληψη 18F-FLT. Αυτό δείχνει ότι, ακόμη και αν ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων μετά από 5 ημέρες (3 ημέρες μετά την 2

nd θεραπεία) ήταν συγκρίσιμη με την αρχική τιμή, βιολογικές επιδράσεις της θεραπείας εξακολουθεί να υφίσταται και έγιναν ορατές με

18F-FDG. Πρόσληψη

18F-FDG ήταν σημαντικά χαμηλότερη στις 6 ώρες μετά την έναρξη της θεραπείας σε σύγκριση με την αρχική τιμή πρόσληψη. Ωστόσο, η μείωση κατά 21% από το ήδη χαμηλό πρόσληψη δεν είναι εύκολα ορατό στις εικόνες PET /CT (εικόνα 4).

Τα ευρήματά μας ότι το

18F-FLT ήταν ανώτερη

18F-FDG για την αξιολόγηση των πρώιμες αποκρίσεις μετά από θεραπευτική αγωγή κατά του καρκίνου είναι σε συμφωνία με άλλες μελέτες [8], [11], [21]. Αρχικά επίπεδα του

πρόσληψη 18F-FDG στο μοντέλο όγκου ήταν χαμηλό και μόνο τα μισά περίπου από τα επίπεδα αναφοράς της

πρόσληψη 18F-FLT η οποία είναι σε συμφωνία με τα ευρήματα άλλων [11], [17]. Ωστόσο, άλλες μελέτες έχουν βρει μια υψηλότερη πρόσληψη

18F-FDG σε διάφορα μοντέλα ξενομοσχεύματος σε σύγκριση με την πρόσληψη

18F-FLT [16], [19], [21]. Έχει ήδη αποδειχθεί ότι είναι πιο δύσκολο να μετρηθεί ανταπόκριση στη θεραπεία σε όγκους με πρόσληψη ιχνηλάτη χαμηλή αρχική τιμή, η οποία είναι σε συμφωνία με τα αποτελέσματα που βρέθηκαν σε αυτή τη μελέτη [11] αποτελέσματα, [21], [34].

Τα ευρήματα από άλλες μελέτες χρησιμοποιώντας

18F-FLT ΡΕΤ για την αξιολόγηση νωρίς αποκρίσεων σε θεραπεία κατά του καρκίνου ήταν πολύ μεταβλητή, όπου παρατηρήθηκε απόκριση σε έναν αναστολέα αποακετυλάσης ιστόνης μετά από 4 ημέρες [10], η ανταπόκριση στη σισπλατίνη παρατηρείται μετά 1 ημέρα [9], απόκριση σε κυκλοφωσφαμίδη και η αναστολή mTOR είναι εμφανής μετά από 2 ημέρες [16] και ο αναστολέας κινάσης ErbB ξεκίνησε μια μείωση στην

πρόσληψη 18F-FLT 2 ημέρες μετά την έναρξη της θεραπείας ενώ καμία απόκριση παρατηρήθηκε στις 6 και 24 ώρες [11]. Ωστόσο σύγκριση των μελετών είναι δύσκολη λόγω διαφορετικά σχήματα αγωγής και τη σάρωση και μοντέλα μεταβλητή όγκου. Σε σύγκριση με άλλες μελέτες βρήκαμε μια απότομη μείωση στην

πρόσληψη 18F-FLT αξιολογούνται από PET και η μείωση αυτή παρατηρήθηκε πολύ νωρίτερα (2 και 6 ώρες). Μένει να διαπιστωθεί αν αυτή η πρώιμη απόκριση είναι ένωση συγκεκριμένο ή απλά λόγω πρωτόκολλο μας είναι ο πρώτος που θα αξιολογηθεί η ανταπόκριση τόσο νωρίς μετά τη θεραπεία.

Το αν ή όχι η πρόωρη αλλαγή στην

18F-FLT και

18F-FDG μπορεί να είναι ένας προγνωστικός δείκτης της κλινικής έκβασης είναι ακόμα άγνωστο και περαιτέρω μελέτες για τη διερεύνηση νωρίς τις αλλαγές και τη συνολική επιβίωση προκειμένου να δοθεί απάντηση στο ερώτημα.

Σύγκριση

πρόσληψη 18F-FLT και Ki67 γονιδιακής έκφρασης έδειξε μια παρόμοια αλλαγή μετά από θεραπεία με Top216. Ωστόσο, τα επίπεδα Ki67 mRNA δεν μειώνονται όσο η πρόσληψη έναρξη της θεραπείας

18F-FLT 6 ώρες μετά. Μια πιθανή εξήγηση θα μπορούσε να είναι ότι οι αλλαγές στην ενζυματική δραστηριότητα συμβεί πριν τις αλλαγές στα επίπεδα mRNA. Η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του γονιδίου Ki67 και η πρόσληψη

18F-FLT στη μελέτη μας είναι σύμφωνα με άλλες μελέτες έδειξαν ισχυρή συσχέτιση μεταξύ Ki67 σε επίπεδο πρωτεΐνης και την πρόσληψη

18F-FLT [8] – [11]. Βρήκαμε μια σημαντική μείωση στην

πρόσληψη 18F-FLT το συντομότερο 2 και 6 ώρες μετά την έναρξη της θεραπείας? Ωστόσο, παρά τη σημαντικά χαμηλότερη

πρόσληψη 18F-FLT στις 6 ώρες, μια μείωση στην έκφραση του γονιδίου ΤΚ1 ήταν η πρώτη εμφανής κατά την Ημέρα 1 μετά την έναρξη της θεραπείας. ενζυμική δραστηριότητα ΤΚ1 συσχετίζεται θετικά με

πρόσληψη 18F-FLT [6], [7] και έχει δειχθεί ότι μεταγραφικούς μηχανισμούς μπορούν να λάβουν μέρος στη ρύθμιση της δραστηριότητας ΤΚ1 όπου τόσο πρωτεΐνη ΤΚ1 και τα επίπεδα mRNA σχετίζονταν με μια μείωση στην

πρόσληψη 18F-FLT μετά από θεραπεία με έναν αναστολέα αποακετυλάσης ιστόνης [10]. Νωρίς αλλαγές στο

πρόσληψη 18F-FLT χωρίς αλλαγές στα επίπεδα mRNA ΤΚ1 είναι πιθανόν να οφείλεται σε αλλαγές στα επίπεδα πρωτεΐνης, μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις της πρωτεΐνης ή αλλαγές στα επίπεδα ΑΤΡ [7], [10], [35].