Αφηρημένο

Ιστορικό

όγκων που σχετίζονται με τα μακροφάγα (ΤΑΜ) αναδιαμορφώνει ο καρκίνος του παχέος (CRC) μικροπεριβάλλον. Ωστόσο, τα ευρήματα σχετικά με το ρόλο του ΤΑΜ στο CRC φαίνεται να είναι αντιφατική σε σχέση με άλλες μορφές καρκίνου. FoxP3

+ ρυθμιστικά Τ (Treg) β-κύτταρα δεσπόζει διεισδύσει CRC. Ωστόσο, ο υποκείμενος μοριακός μηχανισμός με τον οποίο ΤΑΜ μπορεί να συμβάλει στη διακίνηση των Treg κυττάρων στη μάζα του όγκου παραμένει άγνωστη.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

CRC ήταν είτε προκαλείται από Ν-μεθυλο Ν-νιτροζουρία (MNU) και H.

πυλωρού

ή έχει καθιερωθεί από υποδόρια ένεση του παχέος εντέρου κυτταρική γραμμή όγκου ποντικού (CMT93) σε ποντίκια. κύτταρα CMT93 συν-καλλιεργήθηκαν με πρωτογενή μακροφάγα σε μία συσκευή Transwell. Πρόσληψη FoxP3 πρωτεΐνη πράσινου φθορισμού θετικό (FoxP3

GFP +) Treg κυττάρων εκτιμήθηκε με τη χρήση του συστήματος απεικόνισης IVIS ή χρώση ανοσοφθορισμού. Ένας ρόλος για μακροφάγα σε διακίνηση Treg κυττάρων και στην ανάπτυξη του CRC διερευνήθηκε σε CD11b υποδοχέα της τοξίνης της διφθερίτιδας (CD11b-DTR) διαγονιδιακών C57BL /6J ποντίκια στα οποία τα μακροφάγα μπορούν να εξαντληθούν επιλεκτικά. Treg κύτταρα διείσδυσαν αξιοσημείωτα συμπαγή όγκο, και εκφράζεται κυρίως τον υποδοχέα παλιννόστησης χημειοκίνης (CCR) 6 στο μοντέλο επαγόμενης CRC. Και τα δύο καρκινικά κύτταρα CMT93 και μακροφάγα που παράγεται μια μεγάλη ποσότητα CCL20, το μοναδικό συνδέτη του CCR6

in vitro

και

in vivo

. Ένεση του ανασυνδυασμένου CCL20 ποντικού σε θέσεις όγκου προώθησε την ανάπτυξή της με μια σημαντική στρατολόγηση Treg κυττάρων στο μοντέλο μοσχεύματος CRC. Υπό όρους μακροφάγων κατάλυση μειωμένα επίπεδα CCL20, μπλοκάρει τις προσλήψεις Treg κυττάρων και αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου σε CD11b-DTR ποντίκια μπολιασμένα με CMT93.

Συμπεράσματα /Σημασία

ΤΑΜ προσλάβει CCR6

+ Treg κύτταρα με τη μάζα του όγκου και την προώθηση της ανάπτυξης της μέσω της ενίσχυσης της παραγωγής CCL20 σε ένα μοντέλο ποντικού CRC

Παράθεση:. Liu J, Ζανγκ Ν, Li Q, W Ζανγκ, Ke F, Leng Q, et al. (2011) σχετίζονται με τον όγκο μακροφάγα Recruit CCR6

+ ρυθμιστικά Τ κύτταρα και προωθούν την ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου μέσω Ενίσχυση CCL20 Παραγωγή σε ποντίκια. PLoS ONE 6 (4): e19495. doi: 10.1371 /journal.pone.0019495

Επιμέλεια: Sven Γ Meuth, Πανεπιστήμιο του Muenster, Γερμανία

Ελήφθη: 27 Οκτωβρίου 2010? Δεκτές: 7, Απρίλη του 2011? Δημοσιεύθηκε: 29 Απριλίου 2011

Copyright: © 2011 Liu et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η έρευνα υποστηρίζεται από μια επιχορήγηση από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (No: 30972787), από το Πρόγραμμα για τον καθηγητή Ειδικής Διορισμός (Ανατολική Μελετητής) στη Σαγκάη ιδρύματα της τριτοβάθμιας εκπαίδευσης, με την Επιστήμη και την Τεχνολογία Επιτροπή του Δήμου Σαγκάης (Νο : 09140902600), και από την κορυφαία ακαδημαϊκά Πειθαρχία Έργο της Επιτροπής Παιδείας της Σαγκάης Δημοτική (αριθ: J50208 και αριθ: J50207). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο ορθοκολικός καρκίνος (CRC) είναι μία από τις πιο κοινές καρκίνους παγκοσμίως, και η τέταρτη πιο κοινή αιτία του καρκίνου που σχετίζεται με το θάνατο [1]. Παρόμοια με άλλους τύπους καρκίνου, CRC τίθεται σε χρόνια φλεγμονή των ιστών, και η ανάπτυξή του είναι υπό επιτήρηση του ανοσοποιητικού και εξαρτάται από κυτταροκινών και χημειοκινών που εκκρίνονται από τα κύτταρα του ανοσοποιητικού διηθημένων από όγκο [2]

Ρυθμιστικές Τ (Treg). – κύτταρα αρχικά χαρακτηρίζεται από CD4 τους

+ CD25

+ FoxP3

+ φαινότυπο και σκέφτηκα να ισορροπήσει απαραίτητη επιθετικότητα ενάντια στους εχθρούς με την ανοχή για την αυτο-συστατικά [3]. Οι αυξημένοι αριθμοί των Treg-κύτταρα έχουν αναφερθεί στο αίμα και οι όγκοι των ασθενών με διάφορους καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του μαστού, ορθοκολικό καρκίνο, καρκίνο του οισοφάγου, γαστρικό καρκίνο, ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα, λευχαιμία, καρκίνος πνεύμονα, λέμφωμα, μελάνωμα, καρκίνο των ωοθηκών, και του παγκρέατος καρκίνος [4]. Επιπλέον, μελέτες που απεμπλουτισμένο Treg κύτταρα οδήγησε σε βελτιωμένη αντικαρκινική ανοσία και σημαντικά μειωμένη ανάπτυξη όγκου σε διάφορα μοντέλα όγκου ποντικού [4]. Σε ασθενείς με CRC, ένα αυξημένο αριθμό Treg κυττάρων στο περιφερικό αίμα, μεσεντερικοί λεμφαδένες και απευθείας εντός του όγκου παρατηρήθηκαν [5], [6]. Επιπλέον, η θεραπεία με πρωτεΐνη FoxP3 προκαλούμενης από αντίσωμα οδήγησε σε κλινικά σημαντική μείωση της επιβάρυνσης του όγκου σε ένα συνγονιδιακό μοντέλο μετάστασης του καρκίνου του παχέος εντέρου να ήπατος σε ποντικούς Balb /c. [7]

γνώση σχετικά με την προέλευση των Treg κυττάρων συσσωρεύεται στο εσωτερικό καρκινικών βλαβών προέρχεται από τις μελέτες μοντέλο όγκου σε ζώα. Έχει προταθεί ότι και οι δύο προϋπάρχουσες φυσικά απαντώμενα Treg-κύτταρα (nTreg-κύτταρα) και προσαρμοστική Treg-κύτταρα (aTreg-κύτταρα) που επάγεται από μη-Treg πρόδρομα κύτταρα συμβάλλουν στην συνολική ομάδα των ογκο-διηθητικά FoxP3

+ Treg κύτταρα [8], [9]. Οι ενδονεοπλασματική Treg-αντιγόνο κύτταρα έμπειρους, άκρως ενεργοποιούνται και φαίνεται να υφίστανται εκτεταμένη κυτταρικού πολλαπλασιασμού όπως η πλειοψηφία ενδονεοπλασιακής Treg κύτταρα έχουν χάσει την έκφραση CD62L και CD45RB, αλλά η έκφραση τους CD25, CTLA-4 και GITR είναι έντονα αυξημένη [8], [10]. Η εξάντληση των προϋπαρχόντων nTreg-κυττάρων χρησιμοποιώντας αντι-CD25 mAb οδήγησε σε περισσότερες ταχεία και εκτεταμένη μετατροπή προδρόμων κυττάρων προς aTreg-κύτταρα, τα οποία σε μεγάλο βαθμό μπορεί να αντισταθμίσει την απώλεια του nTreg-κυττάρων [8]. Η ενεργοποίηση και επέκταση του είτε nTreg-κύτταρα ή aTreg-κύτταρα σε θέσεις όγκου εξαρτάται αντιγόνο, και συμβάλλει στην ειδική όγκου ανοχή [4]. Συγκεκριμένα, κύτταρα που εμφανίζουν αντιγόνο όπως δενδριτικά κύτταρα και τα μακροφάγα που διηθούν όγκο πιθανόν εμπλέκονται στην τοπική ενεργοποίηση και επέκταση των nTreg-κυττάρων στο εσωτερικό καρκινικών βλαβών [11]. Επιπλέον, στους ανθρώπους, αντιγόνο όγκου ειδικό FoxP3

+ Treg κύτταρα έχουν επιτυχώς απομονωθεί από ιστούς όγκων, καθώς και περιφερικό αίμα ασθενών με μελάνωμα και τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας [12], [13].

FoxP3

+ Treg-κύτταρα αρχίζουν να διεισδύσουν στο αρχόμενη αλλοίωση του όγκου σε πολύ πρώιμο στάδιο της ανάπτυξης του όγκου [14]. Μελέτες με ανθρώπινους καρκίνους των ωοθηκών έχουν δείξει ότι η Treg κύτταρα επισκεψιμότητας στο στη μάζα του όγκου και ο ασκίτης μέσω υποδοχέα χημειοκίνης CCR4 ανταποκρίνεται σε CCL22 που απελευθερώνεται από τα καρκινικά κύτταρα και τα μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους (ΤΑΜ). Αυτό υποδηλώνει ότι χημειοκίνης και υποδοχείς χημειοκινών είναι σημαντικές για Treg κυττάρων παλιννόστησης σε όγκους [15]. Ωστόσο, άλλοι υποδοχείς χημειοκινών, για παράδειγμα, CXCR3, και CCR6, οι οποίες είναι κοινές με μνήμη Th1, Th2 και Th17 κύτταρα, έχουν επίσης δειχθεί ότι εκφράζεται με ογκο-διηθητικά κύτταρα Treg-[16], [17]. CCR6 είναι ένας υποδοχέας χημειοκίνης με μόνο ένα ενιαίο γνωστό συνδετήρα ειδικό χημειοκινικό, η φλεγμονώδης και ομοιοστατική CCL20 χημειοκίνη η οποία είναι επίσης γνωστή ως το συκώτι και χημειοκίνη ενεργοποίηση-ρυθμιζόμενη (LARC) [18] ή Εξόδου [19]. Σε αντίθεση με πολλές άλλες χημειοκίνες, CCL20 έχει σχετικά ειδικό υποδοχέα και συνδέεται σχεδόν αποκλειστικά με την CCR6 χημειοκινικού υποδοχέα, ο οποίος εκφράζεται επίσης από CD45RO

+ Τ κυττάρων μνήμης και άλλοι [20].

Παρά το γεγονός ότι η ανάπτυξη του όγκου θα μπορούσε να προωθηθεί εν μέρει από το ίδιο το ανοσοποιητικό σύστημα, ο κατασταλτικός λειτουργία του Treg κυττάρων, όπως επίσης και ο μοριακός μηχανισμός που βρίσκεται κάτω διακίνησης τους σε θέσεις όγκου παραμένει αόριστη. Σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε τα χαρακτηριστικά homing των Treg κυττάρων, και το δυναμικό λειτουργία προαγωγής του καρκίνου της ΤΑΜ σε ένα μοντέλο CRC. Αναφέρουμε ότι, σε συμπαγείς όγκους ποντικών με CRC, Treg κύτταρα ήταν σημαντικά αυξημένη σε σύγκριση με τις ομάδες ελέγχου. ΤΑΜ συνέβαλαν στην αύξηση της παραγωγής CCL20 στο περιβάλλον του όγκου και προσλαμβάνονται Treg κύτταρα που εξέφραζαν υψηλά επίπεδα CCR6. Ένεση του ανασυνδυασμένου CCL20 ποντικού σε CRC προωθείται ανάπτυξη όγκου με έντονη πρόσληψη Treg κυττάρων σε ποντίκια άγριου τύπου, και διεγείρονται ανάπτυξη του όγκου κατά την απευθείας ενεργοποίηση CMT93 κύτταρα σε CCR6 – /- ποντίκια. Το πιο σημαντικό, χρησιμοποιώντας CD11b-DTR διαγονιδιακό μοντέλο ποντικού αποδεικνύουμε για πρώτη φορά ότι η υπό όρους εκτομή μακροφάγων δεν μειώθηκε μόνο έκφραση του CCL20 και FoxP3 αλλά οδήγησε σε σημαντική αναστολή του CRC. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η επιλεκτική στόχευση CCL20 από τα κάτω ρύθμιση της δραστηριότητας των ΤΑΜ ή CCR6 αντίθετο υποδοχέα της για να εμποδίσει τη μνήμη πρόσληψη Treg κυττάρων μπορεί να αντιπροσωπεύει μια νέα θεραπευτική στρατηγική για την καταπολέμηση CRC στον άνθρωπο.

Αποτελέσματα

οι αριθμοί των FoxP3

+ Treg-κύτταρα αυξήθηκαν σε ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα του CRC σε ποντίκια

Ένας σημαντικός στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να προσφέρει μια οριστική απόδειξη του μηχανισμού εμπορίας για FoxP3

+ Treg κυττάρων σε CRC

in vivo

. Για το σκοπό αυτό, θα επάγεται CRC σε ποντίκια με MNU και H.

pylori

. MNU είναι ένας άμεσος παράγοντας αλκυλίωσης που δεν απαιτεί μεταβολική ενεργοποίηση και έτσι είναι ένας ισχυρός τοπική καρκινογόνο [21]. Προηγουμένως, ενδοπρωκτική ενστάλαξη MNU έχει αναφερθεί ότι επάγουν CRC σε αρουραίους [21]. Όπως αναμενόταν, μετά από 80 εβδομάδες το 85% ποντίκια που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη αναπτύχθηκαν ορατοί CRC που επάγεται από MNU και H.

pylori

(Σχήμα 1Α-C). Η &? Ε χρώση περαιτέρω έδειξαν διάσπαρτα καρκινικά κύτταρα σε τομές που προέρχονται από CRC σε ποντικούς (Σχήμα 1 D, Ε). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν σαφώς ότι η μέθοδος που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη αντιπροσωπεύει μια αποτελεσματική στρατηγική για την επαγωγή CRC σε ποντικούς.

(Α) Ογδόντα εβδομάδων C57BL /6J ποντικού με μεγάλα CRC που προκαλείται από MNU και H.

πυλωρού

. (Β) Μεγαλύτερη μεγέθυνση της περιοχής που υποδεικνύεται από το τρίγωνο (Δ) (Α). (C) Σταδιακά της περιοχής που σημειώνεται με αστερίσκο (*) του (Β). (Δ) Η &? Ε χρώση του ορθοκολικού ιστού καρκινώματος που προέρχονται από CRC που επάγεται από MNU και H.

pylori

(αρχική μεγέθυνση, χ 20). (Ε) Μεγαλύτερη μεγέθυνση του (D) όπως υποδεικνύεται από το ορθογώνιο. Να εξετάσει FoxP3

+ Treg κυττάρων σε ποντίκια με CRC που προκαλείται από MNU και H.

πυλωρού

, χρώση ανοσοφθορισμού των FoxP3 διεξήχθη σε κρυοτομές από CRC ποντίκι ή φυσιολογικό ιστό του παχέος εντέρου. (F) Έκφραση του FoxP3 (Red χρώση) στο CRC ποντίκι (αρχική μεγέθυνση, × 20, × 40 και × 100). (G) Αρνητικός έκφραση του FoxP3 σε ιστό κόλον ποντικού (αρχική μεγέθυνση, χ 20). χρώση ελέγχου (H) Rat IgG (αρχική μεγέθυνση, × 20). Τα λεμφοκύτταρα που διηθούν CRC (n = 10) και φυσιολογικού βλεννογόνου (n = 6) απομονώθηκαν για Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής της έκφρασης FoxP3. (I, j) Η συχνότητα των Treg κυττάρων σε CRC που προέρχονται από ογδόντα εβδομάδων C57BL /6J ποντίκι και φυσιολογικό βλεννογόνο σε ποντικούς. (Κ) Μια σημαντική αύξηση στη συχνότητα των Treg κυττάρων βρέθηκε σε TIL του CRC σε σύγκριση με φυσιολογικό βλεννογόνο (

ρ

& lt? 0,0001 με δοκιμή t Student). Τα αντιπροσωπευτικά δεδομένα εμφανίζονται η οποία είχε αναπαραχθεί σε 3 ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Για να διερευνηθεί αν FoxP3

+ Treg-κύτταρα που διηθούν όγκους που προκαλείται από MNU και H.

πυλωρού

στην ποντίκια, χρώση ανοσοφθορισμού του όγκου και φυσιολογικό κόλον για FoxP3 διεξήχθη. Όπως παρατηρήθηκε σε PBMC από ασθενείς ανθρώπους (Σχήμα S1), FoxP3 (Red χρώσης) ήταν εκφράζεται σε αφθονία στον ιστό του όγκου που προέρχονται από ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με MNU και H.

pylori

σύγκριση με το κανονικό κόλον ποντικών χωρίς θεραπεία ή χρώση ελέγχου IgG (Σχήμα 1F-Η). Για να δούμε με μεγαλύτερη ακρίβεια στη συχνότητα των Treg κυττάρων που διηθούν το CRC, αιώρημα μονών κυττάρων από CRC και φυσιολογικό βλεννογόνο παρασκευάσθηκε και η συχνότητα των Treg κυττάρων προσδιορίστηκε με cytomery Flow. Επιβεβαιώσαμε ότι ένα σημαντικά υψηλότερη συχνότητα των CD4

+ FoxP3

+ Treg κύτταρα ήταν παρόντα στον όγκο, σε σύγκριση με την κανονική του παχέος εντέρου (μέση τιμή 9,095% ± 1.038% έναντι σημαίνει 0,478% ± 0,095%,

σ

& lt? 0.0001) (Σχήμα 1Θ-K). Η αυξημένη πυκνότητα των Treg κυττάρων σε λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο (ΤΙΤ) υποδηλώνει σαφώς ότι Treg κύτταρα μπορεί να παίζει ουσιαστικό ρόλο στη ρύθμιση αντικαρκινικές ανοσοαποκρίσεις στο μοντέλο ποντικού του CRC που προκαλείται από MNU και H.

pylori

.

CCR6 απαιτούνταν για την πρόσληψη των Treg κυττάρων να CRC σε ποντίκια

για να αντιμετωπιστεί το ζήτημα του κατά πόσον φυσικά FoxP3

+ Treg-κύτταρα είναι σε θέση να μεταναστεύσουν σε όγκο ιστούς μετά την θετή μεταφορά, εμείς ένεση 0,5-1 × 10

6 Treg-κύτταρα που απομονώθηκαν από FoxP3

GFP διαγονιδιακό ποντίκι σε ποντίκια που φέρουν CRC που προκαλείται από MNU και H.

πυλωρού

ή υγιής ελέγχους. Δύο εβδομάδες μετά την θετή μεταφορά, κρυοτομές που προέρχονται από ιστό όγκου των ποντικών που ενέθηκαν με FoxP3

GFP + κύτταρα εξετάστηκαν για GFP

+ Treg-κύτταρα. Παρατηρήσαμε ότι GFP

+ Treg κύτταρα μαζικά συσσωρευτεί εντός του όγκου (Σχήμα 2Α). Συγκεκριμένα, εντοπίσαμε ότι αυτές συσσωρεύονται GFP

+ Treg κυττάρων εντός του παχέος όγκου εκφράζεται CCR6, ο υποδοχέας Treg κυττάρων παλιννόστησης (Σχήμα 2Β). Ωστόσο, αφελής Treg-κύτταρα που προέρχονται από FoxP3

GFP διαγονιδιακά ποντίκια δεν εκφράζουν CCR6 (Σχήμα 2C-D). Επιπλέον, έχουμε πέψη ορθοκολικού όγκου από ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με MNU και H.

pylori

, και προσδιορίζεται η έκφραση του CCR6 διηθούν όγκο Treg-κυττάρων από cytomery Flow. Σταθερά, βρήκαμε ογκο-διηθητικά Treg-κύτταρα εξέφρασαν σχεδόν αποκλειστικά CCR6 (Σχήμα 2Ε, F). Για να επιβεβαιώσετε εάν CCR6 ήταν απαραίτητη για τη μετανάστευση των Treg κυττάρων στις περιοχές του όγκου, θα εμβολιάζονται ποντίκι του παχέος καρκινικών κυττάρων γραμμή CMT93 σε CCR6 – /- ποντίκια. Δύο εβδομάδες μετά τη μεταμόσχευση CMT93, ογκο-διηθητικά Treg κυττάρων σε CCR6 – /- ποντίκια εξετάστηκαν από cytomery Flow. Παρατηρήσαμε ότι η διείσδυση των Treg κυττάρων παρεμποδίστηκε πλήρως με την απουσία του CCR6 σε CCR6 – /- ποντίκια σε σύγκριση με CCR6 + /+ ποντικό (Εικόνα 2G, Η). Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι η παλιννόστησης και της εμπορίας που διηθούν όγκο Treg κυττάρων στη μάζα του όγκου εξαρτάται από τον υποδοχέα χημειοκινών CCR6

in vivo

στο μοντέλο ποντικού CRC μπολιασμένα με CMT93.

Treg β-κύτταρα (0,5-1 × 10

6) καθαρίστηκαν από σπλήνες FoxP3

ποντίκια GFP είχαν υιοθεσίας μεταφέρθηκαν σε ποντίκια που φέρουν CRC που προκαλείται από MNU και H.

πυλωρού

. (Α) Κρυοτομές από όγκου χρωματίστηκαν για πυρήνες κυττάρων με DAPI για να διερευνήσει διείσδυση του FoxP3

GFP + Treg κυττάρων στη μάζα του όγκου (αρχική μεγέθυνση, χ 20). (Β) Συν-εντοπισμός της GFP με χρώση CCR6. (C, D) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής για CCR6 της FoxP

GFP + Treg-κύτταρα που προέρχονται από το περιφερικό αίμα αφελείς FoxP3

ποντίκια GFP. (Ε, F) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής για CCR6 των διηθητικών Treg-κύτταρα που προέρχονται από CRC που επάγεται από MNU και H.

pylori

σε ποντικούς. Για να επιβεβαιώσει εάν CCR6 απαιτείται για FoxP3 διακίνηση

Treg κυττάρων +, κυτταρική σειρά CMT93 μεταμοσχεύθηκε σε CCR6 – /- και CCR6 + /+ ποντίκια. (G, H) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής που διηθούν όγκο CD4

+ FoxP3

+ Treg κύτταρα δύο εβδομάδες μετά την κυτταρική γραμμή CMT93 εμβολιασμό CCR6 – /- (G) και + /+ (H) ποντικούς CCR6. Τα αντιπροσωπευτικά δεδομένα εμφανίζονται η οποία είχε αναπαραχθεί σε 4 ανεξάρτητα πειράματα.

Η

ΤΑΜ συνέβαλε στην παραγωγή CCL20, ο συνδετήρας της CCR6

CCL20 είναι μέχρι στιγμής γνωστό ότι είναι ο μόνος συνδέτης για CCR6 και ικανοί να κατευθύνουν την μετανάστευση του CCR6

+ κύτταρα [20]. Για να εξετασθεί η πιθανή παραγωγή CCL20 στον ιστό του όγκου, κατεψυγμένες τομές όγκων που λαμβάνονται από C57BL /6J ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με MNU και H.

pylori

ανοσοχρωματίστηκαν με αντι-ποντικού CCL20 mAb. Παρατηρήσαμε ότι η έκφραση της χημειοκίνης CCL20 (ερυθρά χρώση) ήταν σημαντικά αυξημένη σε ιστούς CRC σε σύγκριση με το φυσιολογικό βλεννογόνο (Σχήμα 3Α, Β). Συντονισμένη σηματοδότηση μεταξύ κυττάρων όγκου και μη κακοήθη φλεγμονώδη κύτταρα στο μικροπεριβάλλον του όγκου που απαιτείται για την ανάπτυξη των όγκων. Μεταξύ αυτών, τα μακροφάγα είναι σημαντικοί παραγωγοί προφλεγμονωδών κυτοκινών όπως παράγοντας νέκρωσης όγκων-α (TNF-α), IL-1β και IL-6, και παίζουν κρίσιμο ρόλο στη ρύθμιση ανοσοαποκρίσεων [22]. Για να διερευνηθεί κατά πόσο τα μακροφάγα αποτελούν σημαντική πηγή CCL20 στις καρκινικές περιοχές, χρώση ανοσοφθορισμού διπλό διεξήχθη επί κρυο-τομές που προέρχονται από βιοψίες όγκων των ποντικών που έλαβαν θεραπεία με MNU και H.

pylori

. Παρατηρήσαμε ότι εκτός από την /80

+ μακροφάγων F4, άλλα κύτταρα που παράγονται επίσης CCL20 στις καρκινικές περιοχές των ποντικών (Σχήμα 3C), υποδεικνύοντας ότι CCL20 απελευθερώνονται από ΤΑΜ ή άλλοι μπορεί να επάγει μετανάστευση Treg κυττάρων σε όγκους. Να διευκρινίσει τι άλλα κύτταρα παράγουν CCL20, εμείς transducted CMT93 με GFP, και μπολιασμένα υποδόρια σε C57BL /6J ποντίκια (Σχήμα 3D). Τρεις εβδομάδες αργότερα, ανιχνεύσαμε την πλειοψηφία των CCL20

+ κύτταρα (78,98%) ήταν GFP

+ CMT93 καρκινικά κύτταρα, υποδηλώνοντας τα περισσότερα από τα άλλα κύτταρα που παράγουν CCL20 είναι καρκινικά κύτταρα (Σχήμα 3Ε). Για να καθοριστεί εάν τα μακροφάγα είναι υπεύθυνα για την υπερπαραγωγή του CCL20 στη μάζα του όγκου, έχουμε συν-καλλιεργημένα καρκινικά κύτταρα CMT93 με περιτοναϊκά μακροφάγα ποντικού φρέσκο ​​για 48 ώρες σε μία συσκευή Transwell. Δείξαμε ότι στην συν-καλλιέργεια δύο μακροφάγα και καρκινικά κύτταρα CMT93 παράγονται αυξημένα επίπεδα CCL20 σύγκριση είτε με μακροφάγα ή καλλιέργεια CMT93 μόνο του (Σχήμα 3F, G). Εντυπωσιακά, στην συν-καλλιέργεια CMT93 και περιτοναϊκών μακροφάγων ποντικού, CMT93 καρκινικά κύτταρα που παράγονται 26,4 φορές περισσότερο CCL20 από μακροφάγα σε επίπεδα mRNA, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα μακροφάγα μπορεί να αλληλεπιδράσουν με τα καρκινικά κύτταρα για την παραγωγή CCL20 στο μικροπεριβάλλον του όγκου (Σχήμα 3F). Επιπλέον, τα αυξημένα επίπεδα της πρωτεΐνης του CCL20 επιβεβαιώθηκαν με ELISA σε συν-καλλιέργεια (Σχήμα 3Η).

(Α, Β) Κρυοτομές από CRC ποντίκι που προκαλείται από MNU και H.

πυλωρού

ή το ποντίκι φυσιολογικό κόλον χρωματίστηκαν για CCL20 (κόκκινο, αρχική Magni-ποίηση, × 20). Διπλό ανοσοχρώση με CCL20 αντι-ποντικού και F4 /80 mAb διεξήχθη επί κατεψυγμένων τομών που προέρχονται από CRC ποντικού. (C) Συν-εντοπισμός του CCL20 με F4 80 χρώση /(αρχική μεγέθυνση, × 20). (Δ) CMT93 ήταν transducted με GFP, και επιβεβαιώθηκε με κυτταρομετρία ροής. (Ε) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των CCL20

+ κύτταρα τρεις εβδομάδες μετά GFP

+ CMT93 κύτταρα εμβολιασμό C57BL /6J ποντίκια. επίπεδα (F) mRNA του CCL20 για συν-καλλιέργεια του ποντικού περιτοναϊκών μακροφάγων με καρκινικά κύτταρα CMT93. AU, αυθαίρετες μονάδες. επίπεδα (ζ) πρωτεΐνες του CCL20 για συν-καλλιέργεια του ποντικιού περιτοναϊκή μακροφάγα με καρκινικά κύτταρα CMT93. Τα αντιπροσωπευτικά δεδομένα εμφανίζονται η οποία είχε αναπαραχθεί σε τουλάχιστον 2 ανεξάρτητα πειράματα. *

σ

& lt? 0,05, **

σ

& lt? 0,01, ***

σ

& lt?. 0.001,

t

δοκιμή Student

η ταυτόχρονη έγχυση του ανασυνδυασμένου CCL20 ποντίκι αποτελέσματα στη διακίνηση CCR6

+ Treg κυττάρων σε όγκους, και την προώθηση της ανάπτυξης CRC σε ποντίκια

διηθούν όγκο Treg κύτταρα καταστέλλουν η λειτουργία πλήρωσης και τελεστή του όγκου θανάτωση δραστικά Τ κύτταρα, συμβάλλοντας στην αύξηση και ανάπτυξη [11] του όγκου. Για τον προσδιορισμό του ρόλου του CCL20 στη μετανάστευση των Treg κυττάρων

in vivo

, είμαστε υποδορίως ένεση CMT93 κύτταρα ποντικού CRC μαζί με ανασυνδυασμένη CCL20 ποντίκι σε FoxP3

GFP διαγονιδιακά ποντίκια. Χρησιμοποιώντας το σύστημα απεικόνισης φθορισμού μικρό ζώο σε ολόκληρο το σώμα για την παρακολούθηση της μετανάστευσης των Treg κυττάρων [23], αποδείξαμε ότι η ανασυνδυασμένη CCL20 ποντίκι προσληφθεί ένας μεγάλος αριθμός GFP

+ Treg-κυττάρων σε όγκους (λευκό βέλος) σε σύγκριση με PBS αγωγή ομάδες (Σχήμα 4Α-C). Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω σημασμένο GFP Treg κύτταρα μετανάστευσαν στην μάζα του όγκου σε απόκριση προς ανασυνδυασμένη CCL20 ποντικού, αιωρήματα απλών κυττάρων του ιστού του όγκου προετοιμάστηκαν και FoxP3

GFP + Treg κύτταρα ανιχνεύθηκαν με cytomery Flow στο τέλος του πειράματος . Σε αντίθεση με τη θεραπεία PBS, παρατηρήσαμε ότι GFP

+ Treg κυττάρων ήταν σημαντικά αυξημένα εντός του όγκου που υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ανασυνδυασμένη CCL20 ποντικού (Εικόνα 4D). Να μελετήσει περαιτέρω την παθολογική σημασία της CCL20, που χορηγείται ανασυνδυασμένη CCL20 ποντίκι γύρω περιοχές όγκου εβδομαδιαίως για 4 εβδομάδες. Δείξαμε ότι το μέγεθος του όγκου ήταν σημαντικά αυξημένη σε ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ανασυνδυασμένη CCL20 ποντίκι σύγκριση με τους ελέγχους PBS (Σχήμα 4Ε), προτείνοντας ένα κρίσιμο ρόλο του CCL20 σε αύξηση και ανάπτυξη CRC. Σε ασθενείς ανθρώπινη CRC, CCR6 επίσης βρέθηκε να εκφράζεται από πρωτογενή κύτταρα CRC [24]. Ως εκ τούτου, για την οριστική επιβεβαιωτική μελέτη, μπολιασμένα καρκίνο CMT93 CRC κυττάρων σε CCR6 – /- ποντίκια. Σε αυτό το μοντέλο, λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο (ΤΙΤ) δεν θα εκφράσει CCR6. Δύο εβδομάδες αργότερα, αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής για έκφραση CCR6 εναιώρημα μεμονωμένων κυττάρων που παρασκευάζονται από μόσχευμα CRC. Σύμφωνα με μελέτη σε ανθρώπους ασθενείς με CRC [24], παρατηρήσαμε ότι σε CCR6 – /- ποντίκια, όσο 73,71% του μοσχεύματος κυττάρων CRC εκφράζεται CCR6 (Σχήμα 4F). Πιο ενδιαφέρον είναι, παρατηρήσαμε ότι η ανασυνδυασμένη CCL20 ποντικού διεγερμένα κυτταρική ανάπτυξη CMT93 CRC με απευθείας ενεργοποίηση CCR6 επί κυττάρων όγκου απουσία CCR6

+ TIL σε CCR6 – /- ποντίκια (Εικόνα 4G). Αυτή τη μεσολάβηση CCL20 επίδραση είναι πιθανό να συμβεί μέσω της προσέλκυσης Treg κυττάρων στη μάζα του όγκου ή την άμεση τόνωση των καρκινικών κυττάρων CRC ή και τα δύο.

Παχέος κυτταρική σειρά

Ποντίκι, CMT 93 (1 × 10

6) με ή χωρίς 0,5 μg ποντίκι ανασυνδυασμένη CCL20 ποντικού σε 100 μΐ PBS εγχύθηκαν υποδορίως σε FoxP3

ποντίκια GFP, και 0.5 μg ανασυνδυασμένης CCL20 ποντικού σε 100 μΙ PBS εγχύθηκε s.c. εβδομαδιαίως επί 28 ημέρες. Ελέγχου FoxP3

ποντίκια GFP δόθηκαν μόνο 100 μl ένεση PBS. (Α) Η κανονική FoxP3

GFP ποντικού χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος τεχνική. (B, C) πράσινος φθορισμός του FoxP3

GFP + κύτταρα σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή PBS ή ανασυνδυασμένη CCL20 ποντικού (λευκό βέλος) παρακολουθήθηκαν χρησιμοποιώντας το σύστημα απεικόνισης IVIS την ημέρα 28. (D) Αριθμοί των ογκο-διηθητικά FoxP3

GFP + Treg-κύτταρα που προέρχονται από εμβολιασμένο CRC σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με PBS ή ανασυνδυασμένη CCL20 ποντικού αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής. (Ε) Τα μεγέθη των όγκων μετρήθηκαν με παχύμετρο στα δεικνυόμενα χρονικά σημεία για 28 ημέρες. Ένεση του ανασυνδυασμένου CCL20 ποντικού οδήγησε σε σημαντική αύξηση των μεγεθών των όγκων (n = 5). (F) Τα επίπεδα έκφρασης των CCR6 με εμβολιασμένου CRC σε CCR6 – /- ποντίκια. (G) CMT 93 (1 χ 10

6) με ή χωρίς 0,5 μg ποντίκι ανασυνδυασμένη CCL20 ποντικού σε 100 μΐ PBS εγχύθηκαν υποδορίως σε CCR6 – /- ποντίκια, και 0.5 μg ανασυνδυασμένης CCL20 ποντικού σε 100 μΐ PBS ή 100 μΙ PBS εγχύθηκε s.c. σε κάθε δεύτερη ημέρα για 21 ημέρες. βάρος όγκου CRC μετρήθηκε στο τέλος του πειράματος. Τα αντιπροσωπευτικά δεδομένα εμφανίζονται η οποία είχε αναπαραχθεί σε 3 ανεξάρτητα πειράματα. *

σ

& lt? 0,05, **

σ

& lt? 0,01,

t

test του Student

Η

Η επιλεκτική εξάντληση των μακροφάγων σε CD11b. -DTR ποντίκια μειωμένα επίπεδα CCL20 όγκου, μπλοκάρει CCR6

+ στρατολόγηση Treg κυττάρων εντός της μάζας του όγκου και ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου

CD11b-DTR διαγονιδιακά ποντίκια έχουν υποκινητή μεσολάβηση έκφραση CD11b της τοξίνης ανθρώπινης διφθερίτιδας (DT ) υποδοχέα, και αυτό το επαγόμενο σύστημα καταστρέφει επιλεκτικά τα μακροφάγα

in vivo

όταν DT εγχέεται [25]. Να εξετάσει κατά πόσον

in vivo

DT θεραπεία θα μπορούσε να εξαλείψει ΤΑΜ στο μοντέλο CMT93 μόσχευμα CRC, έχουμε την πρώτη ένεση DT ή DT

mu σε συγκέντρωση 25 ng βάρους /g ποντίκι μία ημέρα πριν από τη μεταμόσχευση CMT93 σε CD11b -DTR διαγονιδιακών ποντικών. Στη συνέχεια, υποβάλλαμε σε αγωγή ποντικούς με DT ή DT

mu σε συγκέντρωση 5 ng /g κάθε τρεις ημέρες για 14 ημέρες. Σε συμφωνία με τους άλλους, αποδείξαμε ότι η DT επιλεκτικά απεμπλουτισμένο F4 /80

+ μακροφάγα 24 ώρες μετά την ένεση, αλλά δεν είχε καμία σημαντική επίδραση στα κύτταρα Τ, ουδετερόφιλα, μαστοκύτταρα ή ώριμα κύτταρα Langerhans /δενδριτικά κύτταρα (τα δεδομένα δεν φαίνονται) [ ,,,0],26]. Στο τέλος του πειράματος, τα δεδομένα μας αποκάλυψαν ότι η θεραπεία DT εξαλειφθεί εντελώς F4 /80

+ ΤΑΜ σε σύγκριση με CRC DT

ένεση mu (Εικόνα 5Α, Β). Εξετάσαμε περαιτέρω έκφραση CCL20 σε ιστό όγκου που προέρχονται από ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με DT, βρήκαμε ότι η επιλεκτική εξάντληση των μακροφάγων κατέληξαν σε μια αξιοσημείωτη μείωση τόσο επίπεδο mRNA CCL20 (Σχήμα 5C) και στο επίπεδο της πρωτεΐνης CCL20 (Σχήμα 5D) σε όγκο μάζα σε σύγκριση με την DT

θεραπεία mu. Για να διερευνηθεί αν ΤΑΜ προάγουν την απελευθέρωση CCL20 από κύτταρα όγκου CMT93

in vivo

, εμείς μπολιασμένα GFP

+ CMT93 καρκινικά κύτταρα σε CD11b-DTR διαγονιδιακά ποντίκια. Μετά τη θεραπεία της DT ή DT

mu για 14 ημέρες, παρατηρήσαμε ότι η επιλεκτική εξάντληση των ΤΑΜ ανέστειλε προφανώς την παραγωγή CCL20 από CMT93

καρκινικά κύτταρα GFP ποντικού, γεγονός που υποδηλώνει ότι ΤΑΜ δεν είναι μόνο η κύρια πηγή της CCL20 αλλά επίσης σαφώς να συμβάλλει στην απελευθέρωση των CCL20 από κύτταρα CRC σε ποντικούς (Σχήμα 5Ε). Επιπλέον, αποδείξαμε ότι η θεραπεία η DT δεν μειώνουν την έκφραση CCR6 από CMT93

καρκινικά κύτταρα GFP ποντίκι σε σύγκριση με DT

mu (Σχήμα 5F). Ωστόσο, τα κύτταρα ποντικού CRC έχουν χαμηλή έκφραση CCR6 πριν τη μεταμόσχευση για να φιλοξενεί (Σχήμα 5F). Το πιο σημαντικό, μακροφάγων εξάντληση με χορήγηση DT οδήγησε σε σημαντική μείωση του αριθμού των ογκο-διηθητικά FoxP3

+ Treg-κύτταρα (Σχήμα 5G, Η). Μαζί, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι ΤΑΜ υποστηρίζουν την συσσώρευση του CCR6

+ διηθούν όγκο Treg κύτταρα, και, τουλάχιστον εν μέρει, μέσω αυτού του μηχανισμού, προάγουν την απελευθέρωση CCL20 σε CRC σε ποντικούς. Τέλος, βρήκαμε ότι η επιλεκτική εξάλειψη των ΤΑΜ ανέστειλε δραματικά την ανάπτυξη του CRC σε ποντικούς (Σχήμα 5Θ, J), καταδεικνύοντας ένα κρίσιμο όγκο προώθηση του ρόλου του ΤΑΜ στο μοντέλο ποντικού CRC.

(Α, Β) Ροή κυτταρομετρίας ανάλυση ΤΑΜ που προέρχονται από εμβολιασμένα CRC σε CD11b-DTR ποντίκια με ένεση DT

mu ή DT. (Γ) τα επίπεδα mRNA σε CCL20 μπολιασμένα CRC σε ποντίκια CD11b-DTR ένεση με DT

mu ή DT (δεδομένα από 5 ποντίκια από κάθε ομάδα ομαδοποιήθηκαν μαζί). (Δ) Προϊόντα λύσεως των εμβολιασμένων CRC από CD11b-DTR ποντίκια με ένεση DT

mu ή DT υποβλήθηκαν σε κηλίδωση Western για έκφραση CCL20. Ακτίνης – φόρτωση ελέγχου. (Ε) χρώση ανοσοφθορισμού με CCL20 αντι-ποντικού πραγματοποιήθηκε σε κατεψυγμένες τομές του GFP

+ CMT93 εμβολιασμένη μάζα του όγκου που προέρχεται από CD11b-DTR ποντίκια που ενέθηκαν με DT

MU ή DT για 14 ημέρες. (F) Ανάλυση κυτταρομετρίας ροής της έκφρασης CCR6 για GFP

+ CMT93 κυττάρων πριν τη μεταμόσχευση (αριστερό πάνελ), και χρώση CCR6 για κρυοτομές της GFP

+ CMT93 μπολιασμένα μάζας του όγκου που προέρχεται από CD11b-DTR ποντίκια με ένεση DT

mu ή DT για 14 ημέρες (μεσαία και δεξιά πλευρά). (G, H) Αριθμός διηθούν όγκο FoxP3

+ Treg κυττάρων σε εμβολιασμένο CRC σε CD11b-DTR ποντίκια με ένεση DT

mu ή DT. (Ι) CRC εμβολιασμένο σε CD11b-DTR ποντίκια που ενέθηκαν με DT

MU ή DT για 14 ημέρες. (J) Το βάρος του όγκου των CRC μπόλιασμα στην CD11b-DTR ποντίκια με ένεση DT

mu ή DT για 14 ημέρες. Τα αντιπροσωπευτικά δεδομένα εμφανίζονται η οποία είχε αναπαραχθεί σε 2 ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Συζήτηση

Οι έμφυτη και προσαρμοστικά συστήματα του ανοσοποιητικού μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη του όγκου μέσω μηχανισμών φλεγμονής που εξαρτάται [2], [27 ]. Η εκδήλωση συντονίζεται από πολλά φλεγμονώδη κύτταρα, μεταξύ των οποίων FoxP3

+ Τα Treg κύτταρα πιστεύεται ότι καταστέλλει την ανοσία των Τ κυττάρων σε αντιγόνα που σχετίζονται με όγκους και να διευκολύνει την εξέλιξη του όγκου [4]. FoxP3 είναι η πιο οριστική κατασκευάστρια των Treg κυττάρων, και ανίχνευση της θα μπορούσε να επιτρέψει μια καλύτερη κατανόηση των μηχανισμών μέσω των οποίων Treg κύτταρα που εμπλέκονται σε αυτοάνοσες και μολυσματικές ασθένειες, όπως επίσης και την μεταμόσχευση και του όγκου ανοσία [28]. Αν και πολλές μελέτες έχουν επικεντρωθεί στο ρόλο των Treg κυττάρων στον έλεγχο αυτο-αντιδραστικότητα, υπάρχει ένα αυξανόμενο σώμα της στοιχεία που δείχνουν ότι Treg κύτταρα έχουν σημαντικό αντίκτυπο στην απόκριση του ξενιστή σε καρκίνο [29], [30], συμπεριλαμβανομένων CRC [31], [32]. Έχει αναφερθεί στο παρελθόν ότι οι ασθενείς με υψηλές συχνότητες διεισδύουν CD3

+ Τ κυττάρων μέσα έχουν όγκους παχέος εντέρου τους έχουν σκεφτεί να έχουν καλύτερο ποσοστό επιβίωσης 5 ετών (73%) από ό, τι τα άτομα με χαμηλά επίπεδα CD3

+ T κύτταρα (30%) [33]. Ωστόσο, σε αυτό το CD3 πληθυσμό

+ Τ κυττάρων, εκτός από δραστικά Τ κύτταρα, Treg κύτταρα θεωρούνται καταστείλει αντικαρκινικές ανοσολογικές αποκρίσεις σε ασθενείς με CRC [34]. Σε αυτή τη μελέτη έχουμε επίσης επιβεβαίωσαν ότι FoxP3

+ Treg κυττάρων είναι ιδιαίτερα συσσωρευτεί στο μικροπεριβάλλον στο μοντέλο ποντικού CRC, υποστηρίζοντας την ιδέα ότι η παρουσία των Treg κυττάρων μπορεί να επιτρέπει τη διαφυγή των καρκινικών κυττάρων από το ανοσοποιητικό επιτήρηση από κυτταροτοξικά Τ λεμφοκυττάρων σε ασθενείς CRC.

όπως και άλλες ασθένειες του ανθρώπου, τα μοντέλα ποντικιών χρησιμοποιούνται ευρέως για τη διαλεύκανση των μηχανισμών που εμπλέκονται στην καρκινογένεση του παχέος εντέρου (έναρξη, προώθηση και εξέλιξη), καθώς και μελέτες για χημειοπροφύλαξη και παρέμβασης [35]. Εδώ, θα επάγεται CRC σε C57BL /6J ποντικούς με MNU και H.

pylori

να ερευνήσει διακίνησης Treg κυττάρων, τη διαφοροποίηση και τη λειτουργία. MNU είναι ένας άμεσος παράγοντας αλκυλίωσης που δεν απαιτεί μεταβολική ενεργοποίηση και έτσι είναι ένας ισχυρός τοπικός καρκινογόνα [21]. Έχουμε βρει τη στρατηγική που χρησιμοποιείται για την επαγωγή σε ποντικούς CRC είναι αρκετά αποτελεσματική, όπως το 85% ποντικοί που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη αναπτύχθηκαν ορατό CRC κάτω από την πρόκληση της MNU και H.

pylori

(αδημοσίευτες παρατηρήσεις).

Τα στοιχεία που υποστηρίζουν έναν σημαντικό ρόλο για FoxP3

+ Treg κυττάρων σε καρκινικά ανοσοποιητικό φοροδιαφυγή προέρχεται από μελέτες που αποβάλλεται Treg κύτταρα πριν την πρόκληση του όγκου. Αυτή η κατεργασία είχε σαν αποτέλεσμα την απόρριψη του όγκου σε διάφορα μοντέλα όγκου ποντικού [10], [36], [37], [38]. Όπως και στην ανθρώπινη ρυθμίσεις [34], ένα αυξημένο αριθμό Treg κυττάρων παρατηρήθηκαν τόσο στο περιφερικό αίμα (σχήμα S2) και στερεών όγκων σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με MNU και H.

pylori

σύγκριση με το κανονικό κόλον ποντικών χωρίς θεραπεία . Τα περισσότερα ενδιαφέροντα, σε συμπαγείς όγκους που προέρχονται από ποντικούς που υπέστησαν αγωγή MNU και H.

pylori

, η συχνότητα των CD4

+ FoxP3

+ Treg κυττάρων ήταν κατά μέσο όρο 9.095% του συνολικού TIL, υποδηλώνοντας ότι οι εν λόγω συσσωρευμένες Treg κύτταρα μπορούν να χρησιμεύσουν ως ένα κοινό ανοσοποιητικό μηχανισμό φοροδιαφυγής να εμποδίσουν ανοσοεπιτήρηση έναντι αυτόλογων κυττάρων όγκου. Treg κύτταρα επιτελούν μια σημαντική λειτουργία για τον περιορισμό της αυτοανοσίας και έτσι στόχευση μετανάστευση Treg κυττάρων μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα νέο και προτιμώμενη προσέγγιση στην ανοσοθεραπεία της συνολικής προόδου των όγκων. Επιπλέον, έχουμε εντοπιστεί κάποια CD4

– κύτταρα που εκφράζουν FoxP3 στη μάζα του όγκου. Η προέλευση των CD4

-FoxP3

+ κύτταρα θα υποβληθεί στο μέλλον έρευνα.

Για να λειτουργήσει αποτελεσματικά στο μικροπεριβάλλον του όγκου, Treg κύτταρα πρέπει να μεταναστεύσουν και να λειτουργούν σε διάφορες λεμφικών και μη λεμφοειδή όργανα. Παρόμοια με τελεστές πληθυσμούς κυττάρων Τ, τα Treg-κυτταρικοί πληθυσμοί υποδιαιρούνται με βάση την έκφραση τους υποδοχείς παλιννόστησης σε υποσύνολα που προβλέπεται να μεταναστεύσουν κατά προτίμηση προς ορισμένους ιστούς [39]. Μελέτες με ανθρώπινους καρκίνους των ωοθηκών έχουν αποκαλύψει ότι Treg κύτταρα σπίτι στη μάζα του όγκου και ο ασκίτης

μέσω

CCR4 σε απόκριση σε κύτταρα όγκου και ΤΑΜ προερχόμενο CCL22 [15]. Ωστόσο, οι αναδυόμενες απόδειξη έχει προτείνει ότι εκτός από CCR4 κάποιες άλλους υποδοχείς χημειοκίνης που εμπλέκονται στην καθοδήγηση της διακίνησης Treg κυττάρων σε διαφορετικούς τύπους όγκων σε τόσο των ανθρώπων όσο και ποντικούς [17], [40]. Ως εκ τούτου, τα πρότυπα έκφρασης του υποδοχέα χημειοκίνης φαίνεται να είναι εξαιρετικά ετερογενής εντός του περιφερειακού FoxP3

+ πληθυσμό Treg κυττάρων [11]. Μέχρι σήμερα, κανένα μεμονωμένο υποδοχέα παλιννόστησης έχει ταυτοποιηθεί ότι εκφράζεται ειδικά από Treg κύτταρα. Ωστόσο, μεταξύ CD4

+ Τ κύτταρα, ο υποδοχέας χημειοκίνης CCR6 εκφράζεται κυρίως από Treg κυττάρων σε διάφορες φλεγμονώδεις ρυθμίσεις [41]. Ομοίως, η CCL20 συνδέτης CCR6 εκφράζεται ιδιοσυστατικώς από εντερικά επιθηλιακά κύτταρα, και ρυθμίζεται προς τα πάνω σε επιθηλιακά κύτταρα κατά τη διάρκεια της φλεγμονής [42].