Αφηρημένο

Ιστορικό

Αρκετές μελέτες έχουν δείξει την προγνωστική και προβλεπτική δυνατότητες των μοριακών δεικτών σε συνδυασμένη θεραπεία για τον καρκίνο του πνεύμονα. Οι περισσότεροι από αυτούς που αναφέρονται, ωστόσο, να μπορεί να λειτουργεί NSCLC πρώιμο στάδιο. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης είναι η συσχέτιση της έκφρασης των πολλαπλών δεικτών mRNA σε βρογχοσκόπηση λαμβάνονται δείγματα του καρκίνου με την κλινική έκβαση του προχωρημένου καρκίνου του πνεύμονα.

Μέθοδοι

δείγματα καρκίνου Βρογχοσκόπηση ελήφθησαν από 123 ασθενείς με ακτινολογική διάγνωση των προηγμένων όγκων του πνεύμονα. Από 123 ασθενείς 50 είχαν διαγνωστεί με καρκίνο εκ πλακωδών κυττάρων, 17 με αδενοκαρκίνωμα, 12 με NOS, 32 με SCLC και ένα με νευροενδοκρινική καρκίνο μεγάλου κυττάρου. Σε 11 ασθενείς διαγνώστηκαν άλλους όγκους. Η ομάδα ήταν ετερογενής όσον αφορά τις κλινικές στάδιο, την απόδοση των ασθενών και τη θεραπεία. Ποσοτική PCR σε πραγματικό χρόνο πραγματοποιήθηκε με ΑΒΙ 7900 μηχανή HT, με καθολική Probe Library (Roche) φθορίζοντες ανιχνευτές. Τα γονίδια που έχουν επιλεγεί για την ανάλυση ήταν ERCC1, EGFR, BRCA1, ΚΠΣ 1, CA9, DUSP6, STAT1, ErbB3, MMD, FN1 και CDKN1B.

Αποτελέσματα

Περισσότερα από 50 ng RNA ( το ποσό που θεωρείται επαρκής για την ανάλυση) απομονώθηκε σε 82 από 112 δείγματα καρκίνου του πνεύμονα (73%), συμπεριλαμβανομένων των 60/80 (75.0%) των δειγμάτων NSCLC και 22/32 (68,7%) των δειγμάτων SCLC. Το υψηλότερο συντελεστή κ Cohen για τις διακρίσεις μεταξύ μικρών κυττάρων, πλακωδών κυττάρων και του αδενοκαρκινώματος βρέθηκε για CDKN1B, ΚΠΣ και EGFR1 (κ = 0,177, p = 0,0041). Ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο παλινδρόμησης Cox έδειξε σημαντική επίδραση του κλινικό στάδιο (p & lt? 0.001, RR = 4,19), ERCC1 (p = 0,01, RR = 0,43) και CA9 (p = 0,03, RR = 2,11) έκφραση στη συνολική επιβίωση σε ένα ομάδα 60 ασθενών με NSCLC.

Συμπέρασμα

Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν την εφικτότητα της ανάλυσης πολλαπλών γονιδιακής έκφρασης σε βρογχοσκόπηση λαμβάνονται δείγματα του καρκίνου ως προγνωστικοί δείκτες σε ακτινοθεραπεία και χημειοθεραπεία για τον προχωρημένο καρκίνο του πνεύμονα. Ένας περιοριστικός παράγοντας ήταν σχετικά υψηλό ποσοστό των δειγμάτων από τις οποίες δεν θα μπορούσε να απομονωθεί επαρκής ποσότητα του RNA

Παράθεση:. Suwinski R, Klusek Α, Tyszkiewicz Τ, Kowalska Μ, Szczesniak-Klusek Β, Gawkowska-Suwinska Μ, et al. (2012) Gene Expression από Βρογχοσκόπηση Λαμβάνεται όγκου δείγματα ως παράγοντας πρόβλεψης του αποτελέσματος στον τομέα των προηγμένων μη εγχειρήσιμο καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 7 (7): e41379. doi: 10.1371 /journal.pone.0041379

Επιμέλεια: Alfons Navarro, Πανεπιστήμιο της Βαρκελώνης, Ισπανία

Ελήφθη: 23 Απριλίου του 2012? Αποδεκτές: 20 Ιουν 2012? Δημοσιεύθηκε: 27, Ιουλίου 2012

Copyright: © Suwinski et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη χρηματοδοτήθηκε από μια ερευνητική επιχορήγηση NN 403 290636 που παρέχονται από το Υπουργείο Επιστημών και Τριτοβάθμιας Εκπαίδευσης της Δημοκρατίας της Πολωνίας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Αρκετές μελέτες έδειξαν το δυναμικό της προφίλ γονιδιακής έκφρασης για την πρόβλεψη του αποτελέσματος σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) [1] – [8]. Οι περισσότερες από αυτές τις μελέτες που αναφέρονται, ωστόσο, σε χειρουργικά αντιμετωπιστεί έγκαιρα στάδιο της νόσου. Η προσβασιμότητα και η ποιότητα των δειγμάτων όγκου που λαμβάνονται σε χειρουργική επέμβαση καθιστά την προσέγγιση αυτή προτάθηκαν είναι εφικτό, έτσι διαφόρων προγνωστικών υπογραφές για τη νόσο πρώιμο στάδιο.

Δυστυχώς, οι όγκοι του πνεύμονα συχνά διαγιγνώσκεται σε προχωρημένο κλινικό στάδιο, στο οποίο ακτινοθεραπεία ή /και χημειοθεραπεία είναι επικεφαλής επιλογές θεραπείας. Επίσης, η παθολογική διάγνωση του μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα (SCLC) αποκλείει χρήση της χειρουργικής επέμβασης στις περισσότερες των περιπτώσεων. Κατά συνέπεια, οι προγνωστικοί υπογραφές που αφορούν τους ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με χειρουργική επέμβαση μπορεί να έχουν περιορισμένη, αν υπάρχει, δυνατότητα εφαρμογής σε άτομα και σύνολα δεδομένων στα οποία χημειοθεραπεία ή /και τη χημειοθεραπεία είναι η κύρια θεραπευτική επιλογή. Μπορεί κανείς να αναμένει ότι τα ίδια γονίδια που προδιαθέτουν τα καρκινικά κύτταρα σε κακή διαφοροποίηση, έτσι στην τάση για διάχυση μετά την επέμβαση, μπορεί να συνεπάγεται μεγαλύτερη ραδιοευαισθησία ή /και χημειοευαισθησία οφείλεται σε σύντομο κύκλο εργασιών των κυττάρων. Τέτοιες διακρίσεις υπογραμμίζουν τη ζήτηση για τις δοκιμασίες που αξιολογούν την έκφραση γονιδίων από δείγματα όγκου βρογχοσκόπηση που λαμβάνονται, και αφορούν την έκφραση με την κλινική έκβαση. Η ανάπτυξη των προγνωστικών υπογραφών για την προηγμένη ακατάλληλο όγκους έχει μείνει, ωστόσο, πίσω από παρόμοιες προσπάθειες με χειρουργικά λαμβάνονται δείγματα [9]. Αυτό δημιούργησε τη βάση για την παρούσα μελέτη.

Μέθοδοι

Ασθενείς

Τα κριτήρια επιλογής περιλαμβάνονται ασθενείς με ακτινολογικά διαγνώστηκε όγκος των πνευμόνων που ήταν ύποπτα για κακοήθεια. Μόνο οι ασθενείς με βρογχοσκόπηση προσβάσιμα προχωρημένους όγκους, θεωρείται ακατάλληλο για χρήση κατά την αρχική διάγνωση, θεωρήθηκαν. Μια ενημερωμένη συγκατάθεση που απαιτείται για την ένταξη στη μελέτη. Ένα πρωτόκολλο της έρευνας εγκρίθηκε από την τοπική επιτροπή βιοηθικής σύμφωνα με τους εθνικούς κανονισμούς.

Μεταξύ Νοέμβριο του 2006 και τον Απρίλιο του 2009, ελήφθησαν δείγματα όγκων κατά τη διάρκεια της ρουτίνας βρογχοσκόπηση σε 123 ασθενείς. Δείγματα αποτιμήθηκαν αμέσως μετά τη βιοψία και μέρος του δείγματος χρησιμοποιήθηκε για την παθολογική εξέταση, ενώ το υπόλοιπο τμήμα φυλάχθηκε για ανάλυση γονιδιακής έκφρασης.

Από 123 ασθενείς 50 (40,6%) είχαν διαγνωστεί με καρκίνο εκ πλακωδών κυττάρων , 17 (13,8%) με αδενοκαρκίνωμα, 12 (9,7%) με NOS (δεν ορίζεται διαφορετικά) NSCLC, 32 (26,0%) με καρκίνο του πνεύμονα μικρών κυττάρων και ένα με νευροενδοκρινική καρκίνο μεγάλου κυττάρου. Σε 7 ασθενείς άλλους τύπους όγκου διαγνώστηκαν, συμπεριλαμβανομένου του 2 περιπτώσεις λεμφώματος και 5 μεταστατικούς όγκους. Σε 2 ασθενείς όγκου δεν φάνηκε να είναι κακοήθεις, και σε 3 περιπτώσεις δεν μπορούσε να καθοριστεί η οριστική παθολογική διάγνωση.

Συνοπτικά 112 από 123 δείγματα (91,1%) χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη. Αυτό περιλαμβάνεται 80 δείγματα του μη μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα, και 32 του μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα.

Γονιδιακής Έκφρασης Ανάλυση

δείγματα όγκων τοποθετήθηκαν σε 5 ml RNA αργότερα και αποθηκεύονται σε -20 ° C πριν την ανάλυση. Απομόνωση RNA πραγματοποιήθηκε με RNeasy Midi Kit (Qiagen) ακολουθώντας πρότυπες διαδικασίες. Το καθαρισμένο RNA αποθηκεύτηκε σε -70 ° C. Η συγκέντρωση του RNA εκτιμήθηκε με φασματοφωτομετρία (260 nm απορρόφηση) χρησιμοποιώντας NanoDrop ND-1000. Ποιότητα του RNA εκτιμήθηκε με τριχοειδή ηλεκτροφόρηση σε Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies) χρησιμοποιώντας RNA 6000 Νανο Δοκιμασία. Ένας βαθμός αποικοδόμησης RNA αξιολογήθηκε με εκτίμηση του RNA Ακεραιότητα Αριθμός (RIN). cDNA συντέθηκε από την μήτρα RNA μέσω αντίστροφης μεταγραφής χρησιμοποιώντας Omniscript Kit (Qiagen).

ποσοτική πραγματικού χρόνου PCR διεξήχθη με ΑΒΙ 7900 μηχανή HT, με καθολική Probe Library (Roche). Η έκφραση των γονιδίων στόχων κανονικοποιήθηκε σε σχέση με έξι γονίδια αναφοράς (UBE2D2, PGK1, Hadha, EIF3S10, CCT7 και Β2Μ)

επιλέχθηκαν Έντεκα γονίδια για την ανάλυση:. ERCC1, EGFR, BRCA1, ΚΠΣ 1, CA9, DUSP6, STAT1, ErbB3, MMD, FN1 και CDKN1B. Η επιλογή αυτή βασίστηκε σε δημοσιευμένες προγνωστικούς υπογραφές, οι περισσότεροι εκ των οποίων αναφέρεται σε χειρουργικές σειρές ασθενών με NSCLC. Ο Πίνακας 1 συνοψίζει την πιθανή μηχανισμός δράσης αυτών των γονιδίων, καθώς και το αναμενόμενο αποτέλεσμα που σχετίζονται με την υπερ-έκφραση του γονιδίου. Σημειώνουμε ότι η αναμενόμενη έκβαση αναφέρεται, κατά κύριο λόγο, σε όγκους πρώιμο στάδιο, και όχι στους ασθενείς με προχωρημένο ανεγχείρητο νόσο.

Η

Στατιστική Ανάλυση

Ο κύριος στόχος της ανάλυσης ήταν να κατηγοριοποιήσει τις όγκους σύμφωνα με την κλινική πρόγνωση, χρησιμοποιώντας τα δεδομένα επί της έκφρασης γονιδίου. Η ομάδα, όμως, ήταν ετερογενής σε σχέση με την παθολογία του όγκου, κλινικά χαρακτηριστικά και την θεραπεία που θα μπορούσε να επηρεάσει σημαντικά την κλινική έκβαση, ανεξαρτήτως της γονιδιακής έκφρασης. Ως εκ τούτου, οι στατιστικές μέθοδοι επιτρέπεται προσαρμογή για τους συγχυτικούς κλινικούς παράγοντες.

Η επίδραση της γονιδιακής έκφρασης για την επιβίωση αναλύθηκε χρησιμοποιώντας μονοπαραγοντική και πολυπαραγοντική μοντέλο παλινδρόμησης Cox. έκφρασης κανονικοποιούνται γονίδιο διαχωρίστηκαν μεταξύ τους, όπως ότι είχε κωδικοποιηθεί ως 0 (χαμηλή) ή 1 (υψηλή) χρησιμοποιώντας μέση τιμή έκφρασης ως ένα cut-off [2] .Overall επιβίωση υπολογίστηκε ως ο χρόνος από τη διάγνωση μέχρι θανάτου (χωρίς λογοκρισία) ή ως ο χρόνος από τη διάγνωση μέχρι την τελευταία παρακολούθηση (λογοκριμένη). Θεωρώντας διερευνητική Σκοπός της παρούσας έρευνας και σχετικά μικρό μέγεθος του δείγματος, δοκιμή στ Cox χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της σημασίας διαφορές στην επιβίωση μεταξύ των δύο ομάδων. Αυτό το τεστ είναι σχεδιασμένο για την ανάλυση των μικρών ομάδων, σε αντίθεση με δοκιμασία log-rank που χρησιμοποιείται για την ανάλυση της μεγάλης κλινικής σύνολα δεδομένων.

Ένα μονομεταβλητό μοντέλο Cox επιβίωσης χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό του σχετικού κινδύνου (RR) για το θάνατο σε διαχωρίστηκαν μεταξύ τους ομάδες. Μόνο οι μεταβλητές που εμφανίστηκε σημαντική, ή ότι έδειξε μια τάση για σημαντικότητα (RR & lt? 0.7 ή RR & gt? 1.3 και p & lt? 0,15) θεωρήθηκαν σε ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο. Επιλογή με βάση τις στατιστικές τάσεις δικαιολογείται από την κλινική ετερογένεια της ομάδας που, κάθε φορά που αγνοούνται, θα μπορούσε να συγχύσει την πιθανή προγνωστική επίδραση της γονιδιακής έκφρασης. Ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου Cox προσδιόρισε τις μεταβλητές που σημαντικά και ανεξάρτητα επηρέασε την επιβίωση. Το μοντέλο έχει βελτιστοποιηθεί χρησιμοποιώντας τα πίσω σταδιακή υποχώρηση. Οι μεταβλητές που σημαντικά και ανεξάρτητα επηρεάζεται η συνολική επιβίωση χρησιμοποιήθηκαν για να κατασκευαστεί ένα προγνωστικό υπογραφής με βάση τα αποτελέσματα της πολυμεταβλητής μελέτης.

Από την κλινική πρόγνωση και η διαχείριση των SCLC διαφέρουν εξ ολοκλήρου από NSCLC επιβίωση σε αυτές τις δύο ομάδες αναλύθηκε χωριστά.

Για τον εντοπισμό γονιδίων τα οποία μπορούν να διακρίνουν μεταξύ 3 κύριες παθολογικές υπο-ομάδες (καρκίνος πλακωδών κυττάρων, αδενοκαρκίνωμα και μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα) t-test Student χρησιμοποιήθηκε κατά την έναρξη. Για να διερευνήσουν περαιτέρω πιθανή σχέση μεταξύ της έκφρασης των γονιδίων και παθολογικών τύπο της μεθόδου όγκου k-means χρησιμοποιήθηκε. Αυτή η μέθοδος αποτελεί την ανάλυση διασποράς η οποία αποσκοπεί στη διχοτόμηση του ν παρατηρήσεων σε k συστάδες όπου κάθε παρατήρηση ανήκει στο σύμπλεγμα με το πλησιέστερο μέση [10]. Η καλύτερη συσχέτιση μεταξύ εκφράσεις των γονιδίων και των παθολογικών τύπο του όγκου ιδρύθηκε με τη χρήση του συντελεστή κ Cohen, η οποία είναι ένα στατιστικό μέτρο της συμφωνίας μεταξύ των αξιολογητών για την κατηγορηματική στοιχεία [11]. Σημειώνουμε ότι τα γονίδια που αναλύθηκαν σε αυτή τη μελέτη επιλέχθηκαν ως πιθανοί προγνωστικοί παράγοντες σε κυτταροτοξική θεραπεία και όχι ως τις πιθανές discriminators μεταξύ των τύπων όγκων.

Αποτελέσματα

Ποιότητα RNA

Περισσότερα από 50 ng RNA (το ποσό που θεωρείται επαρκής για την ανάλυση) απομονώθηκε σε 82 από 112 δείγματα καρκίνου του πνεύμονα (73%), συμπεριλαμβανομένων των 60/80 (75.0%) των δειγμάτων NSCLC και 22/32 (68,7%) του SCLC δείγματα. Μεταξύ των ασθενών με καρκίνο εκ πλακωδών κυττάρων μία επαρκής ποσότητα του RNA ελήφθη σε 38/50 (76,0%) σε σύγκριση με 12/17 (70,6%) με αδενοκαρκίνωμα και να 10/12 (83,3%) με NOS NSCLC. Πολύ καλή RNA ακεραιότητα (RIN 8-10) ελήφθη σε μόλις 12,3% των δειγμάτων. Αυτά δείχνει ότι η ανάλυση των δειγμάτων όγκου βρογχοσκόπησης λαμβάνεται απαιτεί περαιτέρω βελτιστοποίηση πριν από την κλινική εφαρμογή. Η ανάλυση, όπως φαίνεται, ήταν με βάση την κατάσταση της γονιδιακής έκφρασης αξιολογήθηκαν σε 82 δείγματα από τους οποίους επαρκή ποσότητα RNA απομονώθηκε (60 NSCLC και 22 SCLC).

Γονιδιακής Έκφρασης Σύμφωνα με Παθολογίας του όγκου

έλεγχος τ αποκάλυψε ότι BRCA1, CDKN1B και έκφραση CSF διέφεραν σημαντικά μεταξύ των μικρών-κυττάρων και μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του (ρ-τιμές 0,01, 0,02 και 0,02 αντίστοιχα). Δύο άλλα γονίδια (EGFR1, STAT1) έδειξαν μια τάση. (Τιμές ρ 0,07 και 0,09 αντίστοιχα). Αντίθετα, δεν υπάρχουν σημαντικές διαφορές στην έκφραση των γονιδίων βρέθηκαν μεταξύ καρκίνο πλακωδών κυττάρων και του αδενοκαρκινώματος, αν και υπήρχε μια τάση για BRCA1, CDKN1B και ERCC1. Το υψηλότερο συντελεστή κ Cohen για τις διακρίσεις μεταξύ μικρών κυττάρων, πλακωδών κυττάρων και του αδενοκαρκινώματος βρέθηκε για CDKN1B, ΚΠΣ και EGFR1 (κ = 0,177, p = 0,0041). Μια τέτοια εκτίμηση δείχνει μια σχετικά μικρή αλλά στατιστικά σημαντική συσχέτιση μεταξύ των εκφράσεων αυτών των γονιδίων και παθολογικών τύπο του όγκου.

κλινικούς παράγοντες εναντίον επιβίωσης στην ομάδα στόχου

Ο Πίνακας 2 παρουσιάζει τα κλινικά χαρακτηριστικά των ασθενών 60 με ΜΜΚΠ που είχαν γνωστή κατάσταση έκφρασης του γονιδίου. Η ομάδα ήταν ετερογενής όσον αφορά τις κλινικές στάδιο, την απόδοση των ασθενών και τη θεραπεία. Όπως ήταν αναμενόμενο, η πλειοψηφία των ασθενών ήταν σε προχωρημένο κλινικά στάδια, συμπεριλαμβανομένου 48% με νόσο σταδίου IV. Μόνο 2 άτομα (3%) ήταν στο στάδιο της νόσου Ι-ΙΙ (και οι δύο θεωρήθηκαν εκτός λειτουργίας λόγω συνοδά νοσήματα). Εξήντα τοις εκατό των ασθενών είχαν χημειοθεραπεία (σισπλατίνη βάση ζεύγη), το 57% είχε ακτινοθεραπεία με συνολικές δόσεις που κυμαίνονται 20-70 Gy (διάμεση τιμή των 30 Gy). Διάμεση παρακολούθηση είναι 3,6 χρόνια).

Η

Σκηνή, το καθεστώς των επιδόσεων και των δύο φύλων επηρέασε σημαντικά την επιβίωση σε μια μονοπαραγοντική μοντέλο, αλλά σε μια πολυπαραγοντική ανάλυση μόνο κλινικό στάδιο φάνηκε να έχει και ανεξάρτητη προγνωστική σημασία (RR = 3.56, 95% CI = 1,95 – 6,45, p = 0,00003). Ως εκ τούτου, κλινικό στάδιο περαιτέρω θεωρείται ως ο κύριος παράγοντας που μπορεί να συγχύσει την πιθανή προγνωστική σημασία της γονιδιακής έκφρασης.

μονοπαραγοντική Επίδραση της γονιδιακής έκφρασης στην επιβίωση

Ο Πίνακας 3 δείχνει την επιρροή των 11 επιλεγμένων γονιδίων σε συνολική επιβίωση σε μια ομάδα 60 ασθενών με NSCLC. Από 11 γονιδίων μόνο η έκφραση των ERCC1 είχαν σημαντική επίδραση στην επιβίωση, ενώ οι εκφράσεις των τεσσάρων άλλων γονιδίων (CA9, ErbB3, FN1 και STAT1) έδειξε μια τάση (RR & lt? 0.7 ή RR & gt? 1.3 και p & lt? 0.015). Υψηλή έκφραση του 3 από αυτά τα γονίδια (CA9, FN1 και STAT1) σχετιζόταν με αυξημένο κίνδυνο θανάτου, ενώ η υπερ-έκφραση του ERCC1 και ErbB3 είχε μια προστατευτική επίδραση. Το πιο σημαντικό (όπως θα συζητηθεί περαιτέρω) τέτοιο αποτέλεσμα έχει λογική εξήγηση σε βιολογική λειτουργία αυτών των γονιδίων, και στο αποτέλεσμα των δημοσιευμένων μελετών. Αδυναμία της σημασίας της ατομικής έκφρασης του γονιδίου για την επιβίωση δεν είναι έκπληξη, λαμβάνοντας υπόψη την κλινική ετερογένεια και μικρό δείγμα της ομάδας.

Η

Για τις διερευνητικές σκοπούς κατασκευάσαμε ένα προγνωστικό σκορ στο οποίο υπερέκφραση του κάθε γονιδίων κινδύνου (CA9 , FN1 ή STAT1) κωδικοποιήθηκε ως +1, ενώ η υπερέκφραση του κάθε προστατευτικού γονιδίου (ERCC1 ή ErbB3) κωδικοποιήθηκε ως -1. Προστέθηκαν οι βαθμολογίες. Το ποσό κάτω από το μηδέν συμβολίζεται χαμηλού κινδύνου, ενώ το ποσό των μηδέν ή περισσότερα συμβολίζεται υψηλού κινδύνου. Σχήμα 1α απεικονίζει τη συνολική επιβίωση, σύμφωνα με τέτοιες πέντε-γονίδιο υπογραφή. Η διαφορά στην επιβίωση μεταξύ των ομάδων υψηλού και χαμηλού ρίσκου ήταν σημαντική (RR = 1,89, ρ = 0,02). Όταν η ανάλυση περιορίστηκε σε 31 ασθενείς με εντοπισμένη νόσο η διαφορά μεταξύ των ομάδων υψηλού και χαμηλού ρίσκου παρέμειναν σημαντικές (RR = 2,3, ρ = 0,03, Σχήμα 1β). Επίσης, παρέμειναν σημαντικές σε 29 ασθενείς με μεταστατική νόσο (RR = 2.3, p = 0.03, Σχήμα 1γ).

Α) 60 ασθενείς με NSCLC. Β) 31 ασθενείς με εντοπισμένη νόσο (στάδιο Ι-ΙΙΙ). Γ) 29 ασθενείς με μεταστατικό ασθένειες (στάδιο IV).

Η

Η πολυπαραγοντική ανάλυση

Πέντε γονίδια που εμφανίστηκε σημαντική ή αποδεικνύεται η τάση σε μια μονοπαραγοντική μοντέλο συμπεριλήφθηκαν σε μια πολυπαραγοντική ανάλυση (ERCC1, ErbB3, CA9, FN1 και STAT1). Αυτή η ανάλυση αποκάλυψε ότι 3 από τα 5 γονίδια (ErbB3, FN1 και STAT1) δεν μπορούν να θεωρηθούν ως ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες. Η υπερέκφραση του ErbB3 ήταν πιο συχνές σε γυναίκες, και ως εκ τούτου σχετίζονται με το στάδιο της νόσου (προχωρημένο στάδιο ήταν πιο συχνή στους άνδρες). Ομοίως, η υπερέκφραση της FN1 ήταν πιο συχνή στις πιο προηγμένες κλινικά στάδια. Η υπερέκφραση του STAT1 συσχετίστηκε με υπερέκφραση του CA9. Δύο γονίδια παρέμειναν σημαντικές σε παραλλαγή ενός πολυπαραγοντικό μοντέλο που δεν ευθύνονται για το στάδιο του όγκου: ERCC1 (RR = 0,53, 95% CI 0,30 – 0,96, p = 0,03) και CA9 (RR = 1,79, 95% CI 1,00 – 3,21, p = 0,05).

η πολυπαραγοντική μοντέλο που αντιπροσώπευαν επίσης για το στάδιο της νόσου επιβεβαίωσε μια σημαντική και ανεξάρτητη προγνωστική αξία των ERCC1 και της έκφρασης CA9 (Πίνακας 4). Η προγνωστική βαθμολογία κατασκευαστεί με βάση τα αποτελέσματα της πολυπαραγοντικής ανάλυσης ήταν ως εξής:

όπου κλινικό στάδιο, καθώς και CA9 και ECCC1 εκφράσεις διαχωρίστηκαν μεταξύ τους και κωδικοποιούνται ως 0 ή 1. Οι τιμές πάνω από τη μέση του 2,5 συμβολίζεται υψηλού κινδύνου . Το Σχήμα 2 απεικονίζει τις καμπύλες επιβίωσης ανάλογα με τις ομάδες κινδύνου. Η διαφορά στην επιβίωση μεταξύ των ομάδων ήταν πολύ σημαντική (RR = 4,40, 95% CI 2,35 – 8,17, p = 0,00003), και η διαφορά ξεπέρασε την μονοπαραγοντική επίδραση του σταδίου (RR = 3,56).

Η

μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα

από 22 ασθενείς με SCLC 7 είχαν περιορισμένες και 15 εκτεταμένη νόσο. Η έκταση της νόσου δεν φάνηκε να επηρεάζει σημαντικά την επιβίωση (RR-0.95, p = 0.93). Αντιθέτως, η υπερέκφραση του 2 γονιδίων φαίνεται να μειώνουν σημαντικά την επιβίωση (CA9: RR = 1,6, ρ = 0,04 και MMD, RR = 1,8, ρ = 0,03). Η κλινική σημασία αυτής της διαπίστωσης είναι, παρ ‘όλα αυτά, αμφισβητήσιμη λόγω του πολύ μικρού μεγέθους και της κλινικής ετερογένειας της ομάδας.

Συζήτηση

Η γονιδιακή έκφραση έχει χρησιμοποιηθεί με επιτυχία για την ταξινόμηση και την πρόγνωση των μη-μικροκυτταρικού καρκίνο του πνεύμονα, αν και πρόσφατη αναθεώρηση των δημοσιευμένων στοιχείων δείχνουν ότι η προσέγγιση αυτή δεν είναι ακόμη έτοιμη για κλινική εφαρμογή [6]. Οι περισσότερες από τις σχετικές μελέτες που αναφέρονται στο χειρουργικό σειρά [1] – [8], [12] – [17], με λίγες μόνο που επιχείρησε να αναλύσει τα προφίλ γονιδιακής έκφρασης βασίζεται σε βρογχοσκόπηση λαμβάνονται δείγματα [9]. Αντίθετα, η αξιολόγηση των μεταλλάξεων του EGFR ως προγνωστική δοκιμασία για τους αναστολείς της τυροσινικής κινάσης σε προχωρημένο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα θεωρήθηκε μια σημαντική ανακάλυψη, και αναδείχθηκε ως ένα νέο διαγνωστικό εργαλείο [18]. Αυτό αποδεικνύει ότι, παρά τις δυσκολίες και τους περιορισμούς, μοριακών δεικτών πιθανότατα θα διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στη διάγνωση, πρόγνωση και πρόβλεψη για προχωρημένο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα.

Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης δείχνουν ότι η ανάλυση του προφίλ γονιδιακής έκφρασης βασίζονται σε βρογχοσκόπηση λαμβάνεται δείγματα είναι εφικτή, αλλά οι μέθοδοι που χρησιμοποιήθηκαν βελτιστοποίηση της ζήτησης. Η μείζων περιοριστικός παράγοντας ήταν σχετικά υψηλό ποσοστό των δειγμάτων από τα οποία δεν θα μπορούσαν να απομονωθούν επαρκή ποσότητα RNA. Ένας άλλος παράγοντας που συνέβαλε για τις ανεπιθύμητες ποσοστό εγκατάλειψης των περιπτώσεων ήταν η παθολογική διάγνωση που δεν ήταν διαθέσιμες πριν από τη βρογχοσκόπηση. Ένα ποσοστό των ασθενών που είχαν, έτσι, διαφορετική διάγνωση από ότι οι αναμενόμενες με βάση τα συμπτώματα, η κλινική εξέταση και απεικόνισης.

Εκτός από τα έντεκα γονίδια που μελετήθηκαν υψηλή έκφραση των γονιδίων 3 (CA9, FN1 και STAT1) σχετιζόταν με αυξημένο κίνδυνος θανάτου, ενώ η υπερ-έκφραση του ERCC1 και ErbB3 είχε μια προστατευτική επίδραση. Τέτοια αποτέλεσμα έχει μια ορθολογική υποστήριξη σε βιολογική λειτουργία αυτών των γονιδίων, και από το αποτέλεσμα των επιλεγμένων δημοσιευμένες μελέτες.

ERCC1 φάνηκε να σχετίζεται πιο έντονα με την πρόγνωση στην παρούσα μελέτη. Είναι υπεύθυνη για νουκλεοτίδιο επιδιόρθωση εκτομής του κατεστραμμένου DNA. Υπερ-έκφραση αυτού του γονιδίου μπορεί να ενισχύσει την βλάβη των κυττάρων όγκου από την ακτινοβολία ή φάρμακα και θα συμβάλει στην καλύτερη πρόγνωση [16]. Τέτοια συμπέρασμα υποστηρίζεται από τα παρόντα δεδομένα.

CA9 θεωρείται ότι είναι ένας υποκατάστατος δείκτης της υποξίας όγκου. Ραδιοθεραπεία ή κυτταροτοξικά φάρμακα είναι λιγότερο αποτελεσματικά σε υποξικό περιβάλλον, έτσι μια αυξημένη έκφραση του CA9 μπορεί να συμβάλει για χειρότερη πρόγνωση. Τέτοια συμπέρασμα υποστηρίζεται από την παρούσα μελέτη. Αντιθέτως, μια αυξημένη έκφραση του CA9 είχε προστατευτική επίδραση για λειτουργική πλακωδών καρκίνο του πνεύμονα [2] που μπορεί να απεικονίζουν πιθανές διαφορές στην προγνωστική σημασία ενός δεδομένου γονιδίου σε χειρουργικές και μη χειρουργικές σειρές.

ErbB3 κωδικοποιεί μέλος της οικογένειας του υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) των κινασών τυροσίνης υποδοχέα. Υψηλή έκφραση του γονιδίου αυτού εμφανίστηκε συσχετισθεί με συγκεκριμένες κλινική-παθολογικά χαρακτηριστικά της ιαπωνικής καρκίνου του πνεύμονα [15]. Το πιο σημαντικό ErbB3 ήταν υπερ-εκφράζεται σε μη καπνιστές γυναίκες με μεταλλαγμένη EGFR, δηλαδή σε μια ομάδα με ευνοϊκές προγνωστικά χαρακτηριστικά. Ενώ δεν υπάρχουν στοιχεία σχετικά με μεταλλάξεις του EGFR ήταν διαθέσιμα στην παρούσα σειρά, υπερ-έκφραση ErbB3 ήταν πιο συχνή στις γυναίκες με αδενοκαρκίνωμα, υποστηρίζοντας, έτσι, τα αποτελέσματα της ιαπωνικής μελέτης. Επειδή η πρόγνωση στις γυναίκες ήταν καλύτερη, υπερ-έκφραση του ErbB3 είχε προστατευτική (αλλά όχι ανεξάρτητες) επίδραση στην επιβίωση στην παρούσα σειρά. Είναι ενδιαφέρον, ένα αντίθετο αποτέλεσμα από erbB3 υπερέκφραση (αυξημένο κίνδυνο θανάτου) αποκαλύφθηκε στη χειρουργική μελέτη [1]. Αυτό μπορεί, και πάλι, απεικονίζουν πιθανές διαφορές στην προγνωστική σημασία ενός δεδομένου γονιδίου σε χειρουργικές και μη χειρουργικές σειρές.

STAT1 εμπλέκεται στη up-ρύθμιση γονιδίων, οδηγώντας σε αυξημένη έκφραση ιντερφερόνης Διεγειρόμενης γονιδίων. Υπερ-έκφραση του STAT1 σχετιζόταν με καλύτερη πρόγνωση σε χειρουργική σειρά [1], αλλά όχι στην παρούσα μελέτη. Η παρούσα ανάλυση επιβεβαίωσε, πράγματι, ότι STAT1 υπερ-έκφραση σχετιζόταν με υπερ-έκφραση των άλλων γονιδίων (συμπεριλαμβανομένων όλων των γονιδίων αναφοράς 6), αλλά το καθαρό αποτέλεσμα μιας τέτοιας σχέσης ήταν μια τάση για μια προστατευτική επίδραση της STAT1. Αυτό το αποτέλεσμα μπορεί να εξηγηθεί από την ισχυρή συσχέτιση των STAT1 και CA9 εμφανές στις παρούσες δεδομένων.

Τέλος, FN1 είναι γνωστή για το ρόλο της στην κυτταρική προσκόλληση, την ανάπτυξη, τη μετανάστευση και τη διαφοροποίηση. υπερ-έκφραση της αφορούσε την διέγερση του μη μικροκυτταρικού ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων του πνεύμονα μέσω ενεργοποίησης της Akt /mTOR /S6 κινάση και αδρανοποίηση των LKB1 /AMP-ενεργοποιημένη σηματοδοτικό μονοπάτι πρωτεϊνικής κινάσης [17]. Υπερέκφραση του FN1 σχετιζόταν με χειρότερη πρόγνωση στην παρούσα σειρά, αλλά αυτό δεν φαίνεται σαν ένα χρήσιμο δείκτη στην παρούσα ανάλυση λόγω της συσχέτισης με το κλινικό στάδιο.

Η προγνωστική βαθμολογία προτεινόμενη απαιτεί επικύρωση χρησιμοποιώντας ένα ανεξάρτητο σύνολο δεδομένων. Σημειώνουμε, ωστόσο, ότι σε αντίθεση με τις μελέτες που επιδιώκουν για τις νέες δείκτες, διερευνήσαμε μόνο τους δείκτες που είναι γνωστό ότι έχουν μια πιθανή προγνωστική αξία σε μετεγχειρητική ρύθμιση. Κάποιος μπορεί να εξετάσει, ως εκ τούτου, ότι ήταν η παρούσα μελέτη που επικυρώνονται τους δείκτες που παρέχονται από τους άλλους συγγραφείς σε ένα σύνολο δεδομένων που περιλάμβανε τους ασθενείς σε προχωρημένο στάδιο της νόσου. Δοκιμάζοντας την προγνωστική βαθμολογία μελλοντικά σε πιο ομοιογενείς ομάδες ασθενών είναι το μέλλον μας στόχος. Επίσης, δοκιμάζοντας τα άλλα γονίδια θα, πιθανόν, να συμβάλουν για τη βελτίωση της προτεινόμενης απλοϊκή βαθμολογίας.

Εν ολίγοις, καταλήγουμε στο συμπέρασμα ότι η ανάλυση του προφίλ γονιδιακής έκφρασης με βάση λαμβάνονται δείγματα βρογχοσκόπηση φαίνεται εφικτή, αλλά η μεθοδολογία που ήταν μεταχειρισμένα αιτήματα περαιτέρω βελτιστοποίηση. Δύο γονίδιο υπογραφή προτείνεται για προχωρημένους ανεγχείρητο ΜΜΚΠ μπορεί να φαίνεται χρήσιμη, ιδιαίτερα σε κλινικά ομοιογενείς ομάδες.