Αφηρημένο

Η σημασία της νεοαγγείωσης για την πρωτοβάθμια και την ανάπτυξη μεταστατικών όγκων προώθησε πολυάριθμες κλινικές δοκιμές των αναστολέων αγγειογένεσης είτε μόνη της είτε σε συνδυασμό με συμβατικές αντινεοπλασματικές θεραπείες. Μία πρόκληση με τη χρήση μοριακώς στοχευμένων παραγόντων ήταν η αποσύνδεση μεταξύ της μείωσης του μεγέθους του όγκου και βιολογική συμπεριφορά, είτε όταν το φάρμακο είναι αποτελεσματικό ή όταν η αντίσταση όγκου αναδύεται. Εδώ, αναφέρουμε την σύνθεση και τον χαρακτηρισμό των

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab ως μέσο απεικόνισης για την απεικόνιση ΡΕΤ ενδοογκική περιεχόμενο VEGF in vivo.

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab αχόρταγα συσσωρευτεί σε ξενομοσχεύματα νεφροκυτταρικό 786-O με χαμηλότερα επίπεδα σε όργανα υποδοχής. RAD001 (everolimus) σημαντικά εξασθενημένο

συσσώρευση 64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab εντός ξενομοσχευμάτων 786-O νεφρικό καρκίνωμα. Του όγκου των ιστών και των κυτταρικών μοριακή ανάλυση επικυρωθεί απεικόνιση PET, αποδεικνύοντας μειώσεις στο σύνολο και εκκρίνεται περιεχόμενο VEGF και ενεργοποίηση VEGFR2. Αξίζει να σημειωθεί ότι,

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab απεικόνισης PET ήταν σύμφωνη με τη διακοπή της ανάπτυξης των όγκων RAD001. Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι immunoPET στόχευση των αγγειογενετικών παραγόντων, όπως ο VEGF θα μπορούσε να είναι μια νέα κατηγορία των υποκατάστατων δεικτών που συμπληρώνουν τα κριτήρια RECIST σε ασθενείς που λαμβάνουν μοριακά στοχευμένες θεραπείες

Παράθεση:. Chang AJ, Sohn R, Lu ZH, Arbeit JM , Lapi SE (2013) Ανίχνευση Rapalog διαμεσολαβείται από τη θεραπευτική απάντηση σε καρκίνο του νεφρού Ξενομοσχεύματα Χρησιμοποιώντας

64Cu-bevacizumab ImmunoPET. PLoS ONE 8 (3): e58949. doi: 10.1371 /journal.pone.0058949

Επιμέλεια: Αλέξανδρος J. Annala, City of Hope, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 11 Ιουλίου, 2012? Αποδεκτές: 11 Φεβρουαρίου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 14 Μαρτίου 2013

Copyright: © 2013 Chang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από NCI R01CA159959, την Beatrice Roe Ουρολογία Ταμείου Έρευνας, και Mallinckrodt Τμήμα Ακτινολογίας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

η αγγειογένεση, η ανάπτυξη νέων αιμοφόρων αγγείων, είναι ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα του καρκίνου προώθηση της ανάπτυξης του όγκου, εισβολή, και μετάσταση [1]. Τα εν τω γεννάσθαι όγκοι υποστηρίζονται από το οξυγόνο και τα θρεπτικά συστατικά από το κοντινό αιμοφόρα αγγεία, ωστόσο, όπως ο όγκος μεγαλώνει, η παροχή αίματος καθίσταται ανεπαρκής και αρκετά μονοπάτια σηματοδότησης διεγείρουν επέκταση νεοαγγείωση [2]. Neovessels μπορούν επίσης να δράσουν ως αγωγοί μεταστατικό όγκο [2]. Η φαινομενική σημασία της νεοαγγείωσης για πρωτογενή και την ανάπτυξη μεταστατικών όγκων προωθείται πολυάριθμες αναστολέα αγγειογένεσης κλινικές δοκιμές είτε μόνα τους είτε σε συνδυασμό με συμβατικές θεραπείες αντινεοπλασματικούς [3], [4]. Αυτοί οι παράγοντες καθυστέρησης της ανάπτυξης του όγκου με την αρχική βελτιώσεις στην θεραπευτική αποτελεσματικότητα που σχετίζεται με αγγειακές κανονικοποίηση δίκτυο [4]. Ωστόσο, δεν είναι όλοι οι ασθενείς ανταποκρίνονται σε αντι-αγγειογενετική θεραπεία, και την αντίσταση αναπτύσσει σχεδόν αμετάβλητα παρά την αρχική βελτίωση. Προκλινικές μελέτες έχουν δείξει ότι οι αναστολείς της αγγειογένεσης αυξάνουν εισβολή όγκου και η μετάσταση [5], αν και αυτή η κλινική βελτίωση επιθετικότητα έχει ακόμη να φανεί σαφώς στην ασθενείς. Ως εκ τούτου, μια καλύτερη κατανόηση των περιορισμών και επίκτητη αντίσταση σε αναστολείς της αγγειογένεσης είναι απαραίτητη. Δοκιμές θεραπεία επαγόμενης αγγειογόνου μείωση έκκριση παράγοντα προσφέρει την υπόσχεση της έγκαιρο εντοπισμό των ασθενών που εμφανίζουν απόκριση, και περισσότερο ταχεία ανίχνευση της ανθεκτικότητας εμφάνιση παράγοντα-ειδική.

αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) παίζει κεντρικό ρόλο στην αγγειογένεση και έχει αναδείχθηκε ως εξέχων θεραπευτικό στόχο. έκφραση VEGF διεγείρεται σε κακοήθειες με διάφορους μηχανισμούς. Στο επίπεδο μεταγραφής, VEGF είναι ένας σημαντικός στόχος των ετεροδιμερών υποξία παραγόντων (HIFs) [6]. HIFs αποτελούνται από, ασταθής άλφα (HIF-1α, 2α-HIF, HIF-3α) και εκφράζεται ιδιοσυστατικά βήτα (HIF-1β) υπομονάδες [6]. Σε νορμοξία, προλυλ και ασπαραγινυλίου υδροξυλάσες δημιουργούν θέσεις δέσμευσης για την Ε3 ουμπικουιτίνης λιγάση νοη Hippel Lindau (VHL) πρωτεΐνη και αναστέλλουν την HIF μεταγραφική δραστικότητα, αντίστοιχα. Κατά τη διάρκεια της υποξίας, τα οξυγόνο που εξαρτώνται υδροξυλασών αναστέλλεται, οι παράγοντες HIF1 /2 μεταγραφή σταθεροποιηθεί, και αγγειογόνων, μεταβολικές και τα βλαστικά γονίδια στόχους κυττάρων που προκαλείται. Εκτός από VEGF, παράγοντες μεταγραφής HIF upregulate πολλαπλούς αγγειογενετικών παραγόντων [7]. Ωστόσο, πρόσφατα δεδομένα σε ένα nondisease μοντέλο του HIF-1 κέρδος της λειτουργίας καταδεικνύει ότι ο VEGF είναι το πιο σημαντικό για νεοαγγειακές επαγωγή [8]. Ως απώλεια της λειτουργίας VHL κρύβεται ανάπτυξη νεφρικού καρκινώματος σαφής κυττάρου [9], οι όγκοι αυτοί είναι ιδιαίτερα υπεραγγειακών λόγω HIFα μεσολάβηση επαγωγή πολλαπλών αγγειογόνων παραγόντων, συμπεριλαμβανομένων του VEGF [6].

Εκτός από παράγοντα μεταγραφής υπερέκφραση, η φωσφοϊνοσιτιδίου 3-κινάσης (ΡΙ3Κ) οδός είναι μια παράλληλη μονάδα ρύθμισης HIF- και παραγωγή VEGF-εξαρτώμενη των κυττάρων του όγκου αγγειογόνο παράγοντα [10]. Η οδός ΡΙ3Κ υπερδραστηριοποιημένο στην πλειονότητα των ανθρώπινων καρκίνων λόγω πολλαπλών μηχανισμών [11]. Θηλαστικών στόχος της ραπαμυκίνης (mTOR) είναι μία κινάση σερίνης-θρεονίνης κατάντη του ΡΙ3Κ. mTOR κατοικεί μέσα σε δύο συγκροτήματα εντοπισμένο σε διακριτές ενδοκυττάρια διαμερίσματα και το καθένα διαθέτει ειδικές λειτουργίες [12], [13]. mTORC1 ρυθμίζει την πρωτεϊνοσύνθεση σε πολλαπλά επίπεδα, συμπεριλαμβανομένων έναρξη της μετάφρασης και των ριβοσωμάτων βιογένεση [14]. Οι υπομονάδες HIFα και VEGF είναι mTORC1 μεταφραστική στόχους, και είναι λειτουργικά σε νορμοξικά κακοήθη κύτταρα με την ενεργοποίηση της ΡΙ3Κ [15]. mTORC2 ρυθμίζει πολλαπλές λειτουργίες κυτταρικής και δευτερογενούς μικροπεριβάλλον συμπεριλαμβανομένων κυτταρική επιβίωση, κινητικότητα, τον πολλαπλασιασμό και την αγγειογένεση μέσω στόχους ΑΚΤ της, SGK, και PKC, και HIF-2α. Όπως PI3K και mTOR είναι επίσης κατάντη του VEGFR2, το κύριο σηματοδότησης των υποδοχέων του VEGF στα ενδοθηλιακά κύτταρα [16], mTOR έχει μια πιθανή διπλή λειτουργία νεοαγγείωση τόσο του όγκου και τα ενδοθηλιακά κύτταρα.

Λόγω κοντά πανταχού παρούσα ρύθμιση προς τα πάνω του, εκεί έχει υπάρξει έντονο κλινικό ενδιαφέρον στο μονοπάτι του mTOR που στοχεύουν σε στερεά κακοήθειες. Η ραπαμυκίνη και του ανάλογα, everolimus, temserolimus, και deforlimus, (rapalogs), συνδέονται προς την κυκλοφιλίνη, FKBP-12, σχηματίζοντας ένα σύμπλοκο αναστολή mTORC1 [17]. δραστηριότητα mTORC2 αναστέλλεται με την παρατεταμένη έκθεση rapalog σε ορισμένες κυτταρικές σειρές [18], πιθανόν να οφείλεται σε νεοσυντιθέμενες δέσμευση του mTOR σε ανενεργά σύμπλοκα rapalog. Στις αρχές προκλινικές μελέτες, η ραπαμυκίνη έδειξε ότι μειώνει τόσο την ανάπτυξη του όγκου και νεοαγγείωση [19]. Σε άλλες προκλινικές μελέτες, το everolimus ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου και η έκφραση του VEGF [17]. Λόγω ελπιδοφόρα δεδομένα αποτελεσματικότητας Φάσης III, έχουν rapalogs εγκριθεί για τη θεραπεία ασθενών με μεταστατικό καρκίνο νεφρικών κυττάρων (RCC) [20]. Ωστόσο, η θεραπευτική αντίσταση είτε είναι παρών κατά την έναρξη ή και αναπτύσσεται κατά τη διάρκεια rapalog θεραπείας [21]. Αρκετές πρόσφατες και παλαιότερες εκδόσεις έχουν επισημανθεί είτε σηματοδότησης bypass, ή γενετικό κέρδος της λειτουργίας του mTOR κατάντη στόχους [22] – [24]

Όπως VEGF είναι μεταγενέστερος δείκτης ενεργοποίησης του mTOR και μια σημαντική κινητήρια δύναμη της αγγειογένεσης, της. επίπεδο έκφρασης μπορεί να χαρακτηριστεί ως rapalog δείκτη ευαισθησίας. Bevacizumab είναι ένα ανθρωποποιημένο μονοκλωνικό αντίσωμα που δεσμεύεται με όλες τις ισομορφές του VEGF [25]. Προηγούμενες μελέτες έχουν υποδείξει ότι ραδιοεπισημασμένο bevacizumab μπορεί μη επεμβατικά εικόνας και να ποσοτικοποιήσει έκφραση VEGF [26] – [28]. Αν και

64Cu-DOTA (1,4,7,10 τετρααζακυκλοδωδεκανο-1,4,7,10-τετραοξικό οξύ) -bevacizumab έδειξε ενθαρρυντικά αποτελέσματα για προκλινικές VEGF ξενομοσχεύματος απεικόνισης [28], η ενισχυμένη συσσώρευση του ήπατος που σχετίζεται με το γνωστό σε vivo αστάθεια του χαλκού-DOTA, μας κίνητρο για να διερευνήσει ένα πιο σταθερό χηλικό χαλκό. Πρόσφατες εργασίες από τον Zhang

et al

χρησιμοποιώντας ΝΟΤΑ (1,4,7,10 tetraazacyclonoane-Ν, Ν ‘, Ν «, – τριοξικό οξύ). Ως χηλικό για

64Cu-bevacizumab κατέδειξε την ανωτερότητα αυτού του συγκροτήματος για την απεικόνιση ΡΕΤ [29]. Εδώ χρησιμοποιήσαμε και αξιολόγησε το VEGF συγκεκριμένο ιχνηλάτη ΡΕΤ

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab για την παρακολούθηση των αλλαγών στην rapalog διοίκηση. Δοκιμάσαμε για πρώτη φορά την αποτελεσματικότητα της απεικόνισης του

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab σε ξενομοσχεύματα νεφρικό καρκίνωμα, έναν όγκο με έντονη υπερέκφραση του VEGF. Στη συνέχεια, θα δοκιμαστεί

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab ως δείκτης ανταπόκρισης του όγκου αναστολή mTOR. Η μελέτη μας δείχνει ότι αυτό το αντίσωμα συζευγμένο με ιχνηλάτη ΡΕΤ μπορεί τελικά να είναι χρήσιμη τόσο για να επιλέξετε και να συνεχίσουν οι ασθενείς σε μοριακές θεραπείες που στοχεύουν εκκρίνεται αγγειογενετικών αυξητικών παραγόντων.

Υλικά και Μέθοδοι

Σύνθεση

64Cu -NOTA-bevacizumab

64Cu παρήχθη μέσω του

64Ni (p, n)

64Cu πυρηνική αντίδραση χρησιμοποιώντας το CS-15 κυκλοτρονίου (Κυκλοτρονικού Corporation, Berkeley, CA) και διαχωρίζονται μέσω ανταλλαγή ιόντων, όπως περιγράφεται προηγουμένως [30]. Bevacizumab (Avastin ™, Genentech /Roche, South San Francisco, CA) επωάστηκε σε μοριακή αναλογία 1:05 με 2- (pisothiocyanatobenzyl) -1,4,7-τριαζακυκλοεννεάνιο-1,4,7-τριοξικό οξύ (SCN- Bz-ΝΟΤΑ) (Macrocyclics, Dallas, ΤΧ) σε 0.1 Μ NaHCO

3 ρυθμιστικό ρΗ 9,0 για 30 λεπτά. Το προκύπτον προϊόν, ΝΟΤΑ-bevacizumab, καθαρίστηκε μέσω Zeba Στήλες Spin Αφαλάτωση (Pierce Biotechnology, Rockford, IL).

64Cu συμπλέχθηκε με ΝΟΤΑ-bevacizumab σε αναλογία 666 MBq /mg (18 mCi /mg) του αντισώματος σε 0.1 Μ NH

4OAc ρυθμιστικό ρΗ 5.5 στους 37 ° C για 1 ώρα με συνεχή ανάδευση.

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab καθαρίστηκε χρησιμοποιώντας στήλες Zeba Spin Αφαλάτωση (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) και ραδιοχημική καθαρότητα προσδιορίστηκε με αναλυτική χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους (Superose 12 10/300 GL, GE Healthcare, Piscataway, NJ) με 20 mM HEPES και 150 mM NaCl (ρΗ 7,3) εκλούστηκε σε ένα ρυθμό ροής 0.75 mL /min. Millenium 32 λογισμικό (Waters, Milford, ΜΑ) χρησιμοποιήθηκε για την ποσοτικοποίηση χρωματογραφήματα με ολοκλήρωση.

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab επωάστηκε στους 37 ° C με ανθρώπινο ορό για 48 ώρες και αξιολογήθηκε για σταθερότητα με χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους.

ραδιοϊχνηθετών Δεσμευτική Κινητική

VEGF

165 (R &? D Systems, Minneapolis, ΜΝ) αραιώθηκε σειριακά σε 0,5 φορές συγκεντρώσεις που κυμαίνονται από 10 μg /ml έως 0,4 μg /mL σε διττανθρακικό ρυθμιστικό επικάλυψης (5 mM Na

2CO

3, 35 mM NaHCO

3, ρΗ 9.6). 50 μΙ διαλύματος VEGF σε κάθε συγκέντρωση μεταφέρθηκε με πιπέττα εις τριπλούν στα φρεάτια μιας πλάκας 96 φρεατίων και επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Η πλάκα πλύθηκε 3 φορές με 200 μΙ PBS που ακολουθείται από την προσθήκη 100 μΐ 1% BSA (Sigma, St. Louis, ΜΟ) σε PBS για να εμποδίσει τις υπόλοιπες θέσεις δέσμευσης πρωτεϊνών σε κάθε φρεάτιο. Μετά από ολονύκτια επώαση στους 4 ° C, κάθε φρεάτιο πλύθηκε 4 φορές με 200 μΙ PBS. 74 kBq /0.1 μg (2 μΟί) του

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab σε 100 μΙ PBS προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο και επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 2 ώρες. Χωρίς περιορισμούς

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab απομακρύνθηκε προσεκτικά, κάθε φρεάτιο πλύθηκε 3 φορές με 200 μΙ PBS + 0.1% Tween 80 (Sigma, St. Louis, ΜΟ), έπειτα 200 μΙ διαλύματος 0.2 Ν ΝαΟΗ προστέθηκαν σε κάθε καλά και επωάστηκαν για 15 λεπτά. Η ραδιενέργεια που συλλέγονται για κάθε φρεάτιο και μετρήθηκαν σε μετρητή γάμμα.

μοντέλο ξενομοσχεύματος όγκου

786-O (CRL-1932, ATCC, Manassas, VA) κύτταρα καρκινώματος νεφρικών κυττάρων αναπτύχθηκαν σε RPMI μέσα συμπληρωμένα με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό και 1% πενικιλλίνη /στρεπτομυκίνη. Κύτταρα λογαριθμικής φάσης συλλέχθηκαν, επαναιωρήθηκαν σε μέσο σε 1 × 10

5 /μl, και 1 × 10

6 κύτταρα ενέθηκαν υποδορίως στα αυτιά του ηλικίας 6-8 εβδομάδων αθυμικά NCr-ηυ /ηυ ποντίκια (NCI , Frederick, MD). Οι όγκοι απεικονίστηκαν 3 εβδομάδες μετά την ένεση σε ένα μέγεθος όγκου των 94,9 mm

3 (η = 4 ποντικοί ανά ομάδα). Όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές ΝΙΗ για τη Φροντίδα και Χρήση Έρευνας Ζώα και με την έγκριση της Επιτροπής των ζώων Σπουδών του Πανεπιστημίου της Ουάσιγκτον.

ραδιοϊχνηθετών βιοκατανομής Σπουδών

In vivo

μελέτες βιοκατανομής πραγματοποιήθηκαν με αθυμικά γυμνά ποντίκια (η = 4 ποντίκια) για να προσδιοριστεί η πρόσληψη

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab σε ξενομοσχεύματα καρκίνου 786-O νεφρικών κυττάρων σε σχέση με φυσιολογικά όργανα.

64Cu-bevacizumab, 0,555 MBq /0,83 μg, 15 μCi, εγχύθηκε ενδοφλεβίως, οι ποντικοί θυσιάστηκαν 24 ώρες αργότερα, και ειδική πρόσληψη των όγκων και επιλέξτε οργάνων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα μετρητή γάμμα με φόντο και τη διόρθωση αποσύνθεσης. Η ειδική πρόσληψη εκφράστηκε ως% εγχυθείσας δόσης ανά γραμμάριο ιστού (% ID /g) όπως υπολογίζεται με κανονικοποίηση με τη συνολική δραστηριότητα με ένεση, χρησιμοποιώντας μια γνωστή ποσότητα εγχύθηκε δραστηριότητα ως πρότυπο.

Μικρών Ζώων PET Μελέτες

Μικρές ζώων PET /CT πειράματα έγιναν με τη Inveon MicroPET /CT (Siemens, Knoxville, TN).

64Cu-bevacizumab (2,96 έως 3,7 MBq /4.4 – 5.5 μg (80-100 μΟϊ) σε 100 μL 0,9% αποστειρωμένο αλατούχο) εγχύθηκε ενδοφλεβίως Εικοσιτέσσερις ώρες αργότερα, οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με 2% ισοφλουράνιο και απεικονίζεται. Είκοσι λεπτά στατικές εικόνες (n = 4 ποντίκια για κάθε ομάδα θεραπείας) συλλέχθηκαν και συν-καταχωρηθεί με το λογισμικό προβολής εικόνων (Inveon έρευνα στο χώρο εργασίας, η Siemens, Knoxville, TN). Περιοχές ενδιαφέροντος, συμπεριλαμβανομένου του όγκου και των μυών ήταν ανατομικό, και οι κατ ‘αποκοπή τιμών πρόσληψης (SUV) για όγκους προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τον τύπο: SUV = [(MBq /ml) × (. Ζωικό βάρος (g)) /ενέσιμης δόσης (MBq) ].

RAD001 Θεραπεία

RAD001 (Everolimus) γαλάκτωμα (Novartis, San Diego, CA) χορηγήθηκε από την καθημερινή καθετηριασμό σε 10 mg /kg σωματικού βάρους. Τα ζώα ελέγχου έλαβαν γαλάκτωμα placebo (Novartis ιδιόκτητο διατύπωση). Αφού τα αρχικά πειράματα απεικόνισης που περιγράφεται ανωτέρω, στους ποντικούς χορηγήθηκε RAD001 ή όχημα για 7 συνεχόμενες ημέρες και ακολούθως εκ νέου απεικονίστηκαν με

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab (2,96 έως 3,7 MBq /4.4 έως 5.5 μg) όπως περιγράφεται παραπάνω (RAD001, n = 4, όχημα, η = 4 ποντίκια). Μελέτες βιοκατανομής (όπως περιγράφηκε παραπάνω) διεξήχθησαν μετά την ολοκλήρωση της μικρής ΡΕΤ απεικόνιση των ζώων την ημέρα 7. Για πειράματα ανάπτυξης όγκου, ένα ξεχωριστό κοόρτη 8-12 εβδομάδων ποντικούς που φέρουν όγκους οι διμερείς αυτί υποβλήθηκαν σε αγωγή με όχημα (n = 7 ποντικούς, 14 όγκοι αναλύθηκαν) ή RAD001 (n = 9 ποντίκια, 18 όγκοι). ανάπτυξη του ωτός του όγκου προσδιορίστηκε με μέτρηση των τριών μεγαλύτερων κάθετων διαστάσεις και τον όγκο του όγκου σε mm

3 αναλύθηκε για κάθε όγκο κατά τις ημέρες 7 και 14 της θεραπείας.

ανοσοαποτύπωσης

RAD001 (n = 3 ποντίκια) και ελέγχου του οχήματος (n = 3 ποντίκια) όγκους αυτί 786-O συλλέχθηκαν, ομογενοποιήθηκαν σε ρυθμιστικό RIPA (50 mM Tris σε ρΗ 7,4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% νονυλφαινυλ-πολυαιθυλενογλυκόλη ( Nonidet Ρ-40 υποκατάστατο), 0,1% SDS, 1% δεοξυχολικό νάτριο, 1% Triton Χ-100) συμπληρωμένο με κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης και Φωσφατάση αναστολέα κοκτέιλ 1 και 2 (όλοι δύο παρα δέκα? Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ ). Διαυγασμένα λύματα όγκων μετρήθηκαν ποσοτικά για συγκέντρωση πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας το κιτ δοκιμασίας BCA (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) και αποθηκεύτηκε στους -80 ° C. Η συνολική πρωτεΐνη (120 μ§) διαχωρίστηκαν σε πηκτώματα πολυακρυλαμιδίου SDS, μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF (Invitrogen, Carlsbad, CA), αποκλείστηκαν με 10% μη λιπαρό ξηρό γάλα σε ρυθμισμένο με Tris αλατούχο διάλυμα (ρΗ 7.6) που περιέχει 0.5% Tween 20 (TBST ), και ανιχνεύθηκαν με αντισώματα κουνελιού για S6K

T389, S6K, ΑΚΤ

S473, ΑΚΤ, pVEGFR2

Y1175, VEGFR2 (όλα 1:1,000, Cell Signaling Technology), το κοτόπουλο πολύκλωνο αντίσωμα VEGF (1:2,500 Ab14078, Abcam) και πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού για β-τουμπουλίνης (1:35,000, Abcam). Μετά από ολονύκτια επώαση στους 4 ° C, οι μεμβράνες πλύθηκαν τρεις φορές σε TBST, επωάστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου σε δευτερεύοντα αντισώματα υπεροξειδάσης-συνδεδεμένη αρμορακίας (1:5,000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), και ζώνες πρωτεΐνης έγιναν ορατές με ECL συν το αντιδραστήριο (GE Healthcare, Piscataway, NJ). Πρωτεΐνη φόρτωση ομαλοποιήθηκε σε β-τουμπουλίνης.

VEGF ELISA

786-Ο κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων σε μια κυτταρική πυκνότητα 3 × 10

5 κύτταρα ανά φρεάτιο και καλλιεργούνται σε πλήρες μέσο επί μία νύκτα. Λογαριθμικής φάσης κύτταρα στη συνέχεια καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI 1640 χωρίς ορό συμπληρωμένο με όχημα (DMSO) ή 100 ηΜ ή 1000 ραπαμυκίνης ηΜ για 6 ώρες, το μέσο αντικαταστάθηκε με 2 ml φρέσκου μέσου φορέα που περιέχει ελεύθερο ορού ή το ίδιο διαφορετικές ραπαμυκίνης συγκεντρώσεις, και το υπερκείμενο κυτταρικής καλλιέργειας συλλέχθηκε 18 ώρες αργότερα. Η εκκρινόμενη πρωτεΐνη VEGF σε ρυθμισμένο μέσο ποσοστώθηκαν με ELISA σε τέσσερις ανεξάρτητες καλλιέργειες ανά ομάδα με τη χρήση του ανθρώπινου VEGF Quantikine ELISA Kit (R &? D, Minneapolis, ΜΝ). Και ομαλοποιήθηκε ως προς συνολικό περιεχόμενο κυτταρικό DNA

Στατιστική Ανάλυση

τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. Η δίπλευρη του Student

t-test

, το Mann-Whitney U, ενός και δύο τρόπο ANOVA και η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης (GraphPad Prism 6.0b, La Jolla, CA) χρησιμοποιήθηκαν για τη δοκιμή σημαντικότητα . Μία τιμή ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Σύνθεση και in vitro Προσδιορισμός

64Cu-ΝΟΤΑ-Bevacizumab VEGF συγγένεια

Όπως και τα προηγούμενα. μελέτες που χρησιμοποιούν

64Cu-DOTA συζυγών έδειξε υψηλή συσσώρευση ήπατος ραδιενέργειας υποδηλώνοντας δυνητικό διαμετάλλωσης σε άλλες πρωτεΐνες in vivo [28], [31], που επέλεξε να χρησιμοποιήσει ΝΟΤΑ το οποίο σχηματίζει ένα πιο σταθερό σύμπλοκο χαλκού [32]. Bevacizumab ήταν συζευγμένο με ΝΟΤΑ-ΒΖ-NCS και ραδιοσημάνθηκαν με

64Cu. αποδοτικότητα ραδιοεπισήμανση ήταν 92.1% ± 4.7%, η ραδιοχημική καθαρότητα ήταν 98,1 ± 1,7%, και η ειδική δραστικότητα ήταν περίπου 644 MBq /mg (17.4 mCi /mg) (n = 5 ανεξάρτητα πειράματα).

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab ήταν σταθερή έως και 48 ώρες σε ορό στους 37 ° C χωρίς ορατές προϊόντων αποδόμησης στην ανάλυση HPLC αποκλεισμού μεγέθους.

Για να ελέγξετε

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab ειδικότητα VEGF δοκιμασίες ανοσοαντιδραστικότητας διεξήχθησαν. VEGF

165 απλώθηκε εις τριπλούν σε στοιχειωδών συγκεντρώσεις που κυμαίνονται από 0,4 έως 10 μg /mL. Η ποσότητα του δεσμευμένου

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab ως ποσοστό της συνολικής δραστηριότητας προστιθέμενης ανυψώθηκε με αυξανόμενη συγκέντρωση από 13,3 ± 0,72% στα 0,4 μg /mL VEGF

165 να 34,4 ± 3,89% με 10 μg /mL VEGF (Φιγούρα 1). Συν-επώαση με 20 μg περίσσεια μη επισημασμένου bevacizumab μειώθηκε αισθητά

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab VEGF

165 πρόσδεση σε 2,04 ± 0,35% που δεικνύει εξειδίκευση του ραδιοεπισημασμένου ανοσοαντιδραστικότητας αντισώματος (Σχήμα 1).

αυξημένη δέσμευση του

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab παρατηρήθηκε με αυξανόμενη συγκέντρωση του VEGF. Η ανασταλεί αποκλεισμός σύνδεσης χρησιμοποιώντας 20 μg μη επισημασμένη bevacizumab αναδεικνύει την ιδιαιτερότητα ιχνηθέτη. Όλες οι δοκιμασίες διεξήχθησαν εις τριπλούν. Μπαρ που εμφανίζονται είναι +/- τυπική απόκλιση.

Η

64Cu-ΝΟΤΑ-Bevacizumab βιοκατανομής και απεικόνισης Δείχνει Ενισχυμένη νεφρικού όγκου Localization

Για να ελέγξετε

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab απληστία σε έναν όγκο με σημαντική έκφραση VEGF, μελέτες βιοκατανομής πραγματοποιήθηκαν σε αθυμικούς γυμνούς ποντικούς που φέρουν 786-O ετεροτοπική όγκων αυτί Σχήμα 2Α και Β). Το επίπεδο κυκλοφορίας του

64Cu-bevacizumab στο αίμα ήταν 9,3 ± 3,8% ένεση δόσης ανά γραμμάριο (ID /g). πρόσληψη όγκου ήταν 22,0 ± 5,3% ID /g, ενώ η πρόσληψη των μυών ήταν μόνο 1,1 ± 0,4% ID /g. Σπλήνα, πνεύμονες, ήπαρ, και η πρόσληψη των νεφρών ήταν επίσης χαμηλή σε 5.8 ± 2.5%, 4.8 ± 1.7%, 5.6 ± 1.4% και 2.6 ± 0.6%, αντίστοιχα. Έτσι, ακόμη και αν οι ποντικοί έφεραν δύο όγκους, ένα σε κάθε αυτί, η πρόσληψη στην ενιαία όγκου αυτί του δείγματος ήταν σημαντικά ισχυρή σε σύγκριση με φιλοξενήσει όργανα. Η προσθήκη μιας δόσης αποκλεισμού 100 μα μη σημασμένου bevacizumab αναστέλλει σημαντικά όγκου

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab πρόσληψης ραδιο-ιχνηθέτη αποδεικνύει την ειδικότητα in vivo (Σχήμα 2Α). Μικρές απεικόνιση ΡΕΤ σε πειραματόζωα έδειξαν υψηλά επίπεδα πρόσληψης όγκου του

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab (SUV 10,6) (Εικόνα 2Β). Ως περαιτέρω δοκιμασία της ειδικότητας, θα χορηγείται μια 10-πλάσια περίσσεια δόση μπλοκάρισμα iv της bevacizumab σε συνδυασμό με το

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab ιχνηλάτη ΡΕΤ. Η μη επισημασμένη δόση αποκλεισμού μειωμένη πρόσληψη όγκου ιστού τρεις φορές (Σχήμα 2Β). Είναι αξιοσημείωτο ότι η δόση αποκλεισμού καταργείται ανίχνευση εικόνας όγκου (6,3 ± 2,1%), με εναπομένουσα σήμα που εκπέμπεται από την πισίνα ιχνηθέτη στο αίμα (Σχήμα 2Β).

(Α) Ποντίκια με 786-O νεφρικών κυττάρων όγκων αυτί καρκίνωμα ήταν iv ένεση με 100 μθί

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab (η = 4 ποντίκια). 24 ώρες μετά την ένεση επιλέξτε όργανα και οι όγκοι συλλέχθηκαν, ζυγίστηκαν, και η ποσότητα της δραστηριότητας σε κάθε ιστό αξιολογήθηκε σε μία γάμμα-μετρητή. Η εγχυθείσα δόση αποσύνθεση διορθωμένη% (ID) /g ιστού υπολογίστηκε για κάθε όργανο. Μια δόση μπλοκάρισμα των 100 μg μη σημασμένου bevacizumab αισθητά και συγκεκριμένα μειωμένη πρόσληψη ιχνηλάτη όγκου χωρίς ανιχνεύσιμη επίδραση στην συσσώρευση ιχνηθέτη όργανο υποδοχής. (Β) Τα ποντίκια με 786-O νεφροκυτταρικό καρκίνωμα όγκοι αυτιών χορηγήθηκαν 100 μθί

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab ε.φ. εν απουσία (αριστερά πάνελ) ή παρουσία (δεξιά πάνελ), 100 μα μη σημασμένου αντισώματος. Είκοσι λεπτά στατική σαρώσεις αποκτήθηκαν 24 ώρες μετά την ένεση.

Η

RAD001 Μειώνει Νεφρική όγκων Target φωσφορυλίωση και VEGF Περιεχόμενο

Πριν από τη δοκιμή

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab PET θεραπευτική ανταπόκριση απεικόνισης, μια ομάδα ποντικών υποβλήθηκε σε επεξεργασία καθημερινά με RAD001, 10 mg /kg, ή όχημα, για να προσδιοριστεί η επίδραση του rapalog επί mTOR όγκου σηματοδότηση και το περιεχόμενο του VEGF. Δεκατέσσερις ημέρες από RAD001 παράγονται μη ανιχνεύσιμη φωσφορυλίωση του ειδικού θρεονίνης 389 θέση της κινάσης ριβοσωμικής πρωτεΐνης S6 mTOR (Σχήμα 3). Σε αντίθεση με τις προηγούμενες εργασίες με ανθρώπινες κυτταρικές σειρές που αποδεικνύουν rapalog αρνητική ανάδραση PI3K-mTORC2 επαγωγής [33], υπήρχε ένα 15% ΑΚΤ μείωση της φωσφορυλίωσης στη σερίνη 473 (ρΑΚΤ

S473), ένας στόχος mTORC2, σύμφωνα με rapalog-mTOR παγίδευση [34]. θεραπεία RAD001 μειωμένη έκφραση των όγκων VEGF πρωτεΐνης κατά 60% με ταυτόχρονη μείωση κατά 60% στη φωσφορυλίωση VEGFR2, η αρχή του VEGF ενδοθηλιακών κυττάρων υποδοχέα σηματοδότησης όπως προσδιορίζεται με κανονικοποίηση των αντίστοιχων ελέγχων τουμπουλίνης φόρτωση (Σχήμα 3Α). Για να δοκιμαστούν τα κύτταρο αυτόνομες επιδράσεις της rapalogs επί 786-O έκκριση VEGF, ρυθμισμένα μέσα από καλλιέργειες ραπαμυκίνης και υπό αγωγή με όχημα αναλύθηκαν για περιεκτικότητα VEGF. Η ραπαμυκίνη προκάλεσε πτώση 20% σε εκκρίνεται VEGF σε σύγκριση με μάρτυρες (Σχήμα 3Β). Αυτή η μερική απόκριση του 786-O κύτταρα θα μπορούσαν να οφείλονται σε αδυναμία της ραπαμυκίνης να αναστέλλει βασικούς στόχους mTORC1 ρυθμίζει μετάφραση του «αδύναμος mRNAs», όπως 4Ε-ΒΡ1 [13] (Εικόνα 3). Υπάρχουν διάφορες εξηγήσεις για την πιο έντονη μείωση των επιπέδων του VEGF στα ανοσοστυπώματα έναντι ανάλυση ELISA. Όπως ELISA μετρήθηκε εκκρίνεται VEGF είναι πιθανό ότι ο VEGF εκκρίθηκε και πριν την έναρξη της θεραπείας ραπαμυκίνη, ως εκ τούτου, το φάρμακο ανέστειλε μόνο τη μετάφραση και έκκριση της νεοσυντιθέμενη αυξητικού παράγοντα σε καλλιεργημένα κύτταρα. Επιπλέον, η ραπαμυκίνη μπορεί να επηρεάζουν την κυτταρική μονοπάτι έκκρισης VEGF σε μια ξεχωριστή μηχανισμό σε σύγκριση με το VEGF mRNA μεταφραστική ρύθμιση. Πιο πιθανό, ήταν η έντονη διαφορά μεταξύ κυτταρικής καλλιέργειας όπου παροχή θρεπτικών συστατικών είναι ομοιόμορφη, παρά την πείνα στον ορό, σε σχέση με το μικροπεριβάλλον του όγκου σε άθικτα ποντίκια ενδεχομένως να κατέχουν οι αναντιστοιχίες αιμάτωσης ή αρτηριοφλεβώδεις ελιγμών.

(Α) RAD001 καταργηθεί mTORC1 μεσολάβηση ριβοσωμικού πρωτεΐνης S6 φωσφορυλίωση της κινάσης σε προϊόντα λύσης του όγκου χωρίς να επηρεάζει mTORC1 μεσολάβηση 4E-BP1 φωσφορυλίωση. Όγκων του περιεχομένου VEGF μειώθηκε κατά 60% και να συνοδεύονται από ανάλογη παρόμοια μείωση στην φωσφορυλίωση VEGFR2. Τα δεδομένα ανοσοκηλίδος κανονικοποιήθηκαν προς το μη φωσφορυλιωμένη ολική πρωτεΐνη για κάθε στόχο και σε β-τουμπουλίνης. Κάθε λωρίδα είναι κυτταρολύματος από έναν όγκο σε ένα ποντίκι. (Β) ανάλυση ELISA των ρυθμισμένων μέσων από RAD001 αγωγή 786-O καλλιεργημένα κύτταρα, η = τέσσερις ανεξάρτητες καλλιέργειες ανά ομάδα θεραπείας, έδειξε μια πτώση 20% στο επίπεδο εκκρινόμενης πρωτεΐνης VEGF. Τα δεδομένα ELISA κανονικοποιήθηκαν σε Πλήρες κυτταρικό DNA για τη διόρθωση RAD001 μεσολάβηση μειώσεις στην ολική πρωτεΐνη κυττάρου. * P & lt?. 0.0001

Η

64Cu-ΝΟΤΑ-Bevacizumab Biodistibution Μεταβολές σε απάντηση RAD001

Στη συνέχεια, ερευνήσαμε αν

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab απεικόνισης PET θα μπορούσε ανιχνεύουν RAD001 μεσολάβηση μειώσεις όγκων περιεχόμενο VEGF σε ένα μοντέλο ποντικού της RCC. Μελέτες βιοκατανομής πραγματοποιήθηκαν στους 7 παρά 14 ημέρες χορήγησης RAD001 να δοκιμαστεί εάν η πρόσληψη του VEGF είχε διαχωριστεί από σημαντικές μεταβολές της ανάπτυξης του όγκου (Σχήμα 4Α). RAD001 μειώθηκε σημαντικά όγκου

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab πρόσληψη δύο φορές, όγκοι αντιμετωπίζονται όχημα, 30,3 ± 8,3%, RAD001 13.8 ± 2.6% ID /g αντίστοιχα,

σ

& lt? 0.001. μελέτες απεικόνισης MicroPET /CT που εκτελούνται σε μια παράλληλη ομάδα του όγκου ποντικών που φέρουν (Σχήμα 4Β και C) αποκάλυψε τριπλάσια μείωση των καρκινικών

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab ένταση σήματος, SUV 4,0, σε σύγκριση ποντικοί υπό αγωγή με όχημα, όχημα 12.2 . ανάλυση απόκριση ανάπτυξη του όγκου σε ένα άλλο παράλληλο κοόρτη RAD001 και ποντίκια που έλαβαν φορέα (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι) αποκάλυψε ότι RAD001 εμπόδισε επέκταση του μεγέθους του όγκου κατά τη διάρκεια των 14 ημερών της θεραπείας, όπως προσδιορίζεται με ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης, όπου η κλίση της αύξησης της ανάπτυξης ομάδα οχήματος ήταν 14,98 (p = 0,0001), ενώ η κλίση της ομάδας RAD001 αγωγή ήταν 0,20 (p = 0,92). Αμφίδρομη ανάλυση ANOVA αποκάλυψε επίσης μια σημαντική διαφορά στα μεγέθη των όγκων, σύμφωνα με μέτρηση ημερών και του οχήματος με φαρμακευτική αγωγή. Δυστυχώς, διαφορικό, RAD001 μείωση του όγκου του όγκου είχε ήδη φθάσει στατιστική σημασία από την ημέρα 7, όπως προσδιορίζεται με μονόδρομη ANOVA, ρ = 0,003 για την ημέρα 0-ημέρα 7 διάστημα ή μόνο χρόνο ανάλυση σημείο της ημέρας 7 το μέγεθος του όγκου μεταξύ του οχήματος και ομάδες RAD001, Mann-Whitney U-test, ρ = 0.013, εμποδίζοντας τον προσδιορισμό της τιμής πρόβλεψης της απεικόνισης VEGF-PET σε αυτό το χρονικό σημείο (Σχήμα 5).

(Α) Βιοκατανομή

64Cu- ΝΟΤΑ-bevacizumab σε ποντίκια (η = 4 ποντικοί ανά ομάδα) που φέρουν όγκους 786-O νεφροκυτταρικό καρκίνωμα μετά από θεραπεία με RAD001 ή όχημα. (Β) Ποντικοί που φέρουν 786-O νεφροκυτταρικό καρκίνωμα όγκοι αυτί σαρώθηκαν στη βασική γραμμή μετά από ί.ν. ένεση 100 μCi

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab (n = 4). RAD001 κατόπιν χορηγήθηκε για 7 ημέρες και οι σαρώσεις επαναλαμβάνεται. Εκεί ήταν μια αξιοσημείωτη μείωση στην

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab σήματος στο RAD001 σε σύγκριση με το ποντίκι αντιμετωπίζονται ελέγχου του οχήματος. (Γ) Μείωση του κατ ‘αποκοπή τιμή πρόσληψης (SUV) στην RAD001 σύγκριση με τα ποντίκια που έλαβαν φορέα.

Η

τρισδιάστατο αυτί προσδιορισμός ανάπτυξης όγκου αποκαλύπτει ότι RAD001 (▪) εμποδίζει ουσιαστικά την ανάπτυξη των όγκων του αυτιού (n = 9 ποντίκια που έφεραν 18 διμερείς όγκους) σε σύγκριση με γραμμική αύξηση των ελέγχων των οχημάτων (•) (n = 7 ποντίκια που έφεραν 14 διμερείς όγκοι).

Η

Συζήτηση

στην παρούσα μελέτη, εμείς με επιτυχία συντέθηκαν και αξιολογήθηκαν

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab για την απεικόνιση των επιπέδων του VEGF σε ξενομοσχεύματα όγκων RCC. Αυτή η ένωση ήταν σταθερή, ειδικά συσσωρευτεί σε όγκους, και θα μπορούσε να μπλοκαριστεί από την προσθήκη μη επισημασμένου bevacizumab. Επιπλέον, ένα RAD001 μεσολάβηση μείωση της έκφρασης του VEGF ήταν σαφώς ορατή με την απεικόνιση ΡΕΤ χρησιμοποιώντας

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab. μείωση της πρόσληψης του ιχνηθέτη ήταν ταυτόχρονη με στατική επίδραση της RAD001 στην ανάπτυξη του όγκου. Έτσι,

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab μπορεί να είναι ένα μυθιστόρημα υποκατάστατο βιοδείκτη για τη σταθεροποίηση της νόσου που προκαλείται από rapalog ή κινάσης mTOR θεραπείες αναστολέα.

Παραδοσιακά στερεών όγκων θεραπευτική ανταπόκριση βαθμολογείται με βάση διαστάσεων μείωση του όγκου, είτε να μετρηθεί σωματικά , ακτινολογικά, ή με αξονική και μαγνητική τομογραφία. Τα Κριτήρια Αξιολόγησης απόκρισης σε συμπαγείς όγκους (RECIST) και πιο πρόσφατη έκδοση RECIST1.1 του παρέχει μια τυποποιημένη μεθοδολογία για τις συγκρίσεις αποτελεσματικότητα σε όλη φάρμακα και μελέτες. Ωστόσο, η εμφάνιση των μοριακά στοχευμένες θεραπείες προκλήσεις RECIST ως σημείο αναφοράς την αποτελεσματικότητα [35]. Όταν μοριακά στοχευμένες θεραπείες είναι αποτελεσματικές, παράγουν κυρίως σταθερή νόσος (SD) ή μερική ανταπόκριση (PR) με ελάχιστες αλλαγές στο μέγεθος του όγκου. Περιορισμοί της RECIST για τον προσδιορισμό του μοριακού αποτελεσματικότητα της θεραπείας παρακινεί την ανάπτυξη των CT, MRI, και οι αλγόριθμοι και οι τεχνικές απεικόνισης υπερήχων προσαρμοσμένα ιδίως για αγγειακή στόχευση του όγκου των ναρκωτικών. Αυτοί οι αλγόριθμοι έχουν σχεδιαστεί για την ανίχνευση μεταβολών στη συνολική πυκνότητα του αγγειακού όγκου, παράγοντας τη μεσολάβηση της αγγειακής διαρροής αγγειογενετική, και του όγκου αγγειακή ροή [36].

Μια άλλη προσέγγιση για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας είναι ΡΕΤ. Οι όγκοι χαρακτηρίζονται από ενισχυμένη πρόσληψη γλυκόζης και θυμιδίνης σε απόκριση σε γενετική απορύθμιση του μεταβολισμού και του πολλαπλασιασμού [37]. Οι ραδιοϊχνηθετών

18F-φθοροδεοξυγλυκόζης (FDG) και

18F-φθοροθυμιδίνη (FLT) [38] – [40], η εικόνα του όγκου πρόσληψη γλυκόζης και σύνθεση του DNA ανίχνευση του πρωτογενούς όγκου και μετάσταση και την παρακολούθηση της θεραπευτικής ανταπόκρισης. Τόσο FDG και FLT PET μπορεί να αποκαλύψει θεραπευτική αποτελεσματικότητα πριν από την αλλαγή του όγκου του όγκου. Αυτές οι δύο ιχνηλάτες ΡΕΤ προκλήθηκαν από το γεγονός ότι ορισμένοι καρκίνοι όπως RCC (και του προστάτη) είναι κατά κύριο λόγο FDG αναίσθητος [41], και FLT υποεκτιμά τον πολλαπλασιασμό σε όγκους με ενεργοποιημένη πυριμιδινο de-ηονο σύνθεση ή διάσωσης οδός προς τα πάνω ρύθμιση [42]. Εντούτοις, η μειοψηφία της FDG θετική Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης, PET ανιχνεύει ανταπόκρισης του όγκου νωρίτερα από τη μείωση του μεγέθους και προβλέπει καλύτερη επιβίωση χωρίς εξέλιξη (PFS) [14].

Παρά τους περιορισμούς σε καρκίνους όπως του RCC, μια νέα διάσταση στην PET έχει γίνει φανερό τα τελευταία χρόνια. «ImmunoPET» ιχνηθετών σύζευξης αντισώματος-ραδιονουκλιδίου δέσμευσης με τις πρωτεΐνες είτε προσκολλημένα στην επιφάνεια κυττάρου ή εκκρίνεται εντός του μικροπεριβάλλον του όγκου [43]. Χρησιμοποιώντας διλειτουργικά χηλικά μέσα όπως το μορφές 1,4,7,10-τετρααζακυκλοδωδεκανίου-1,4,7,10-τετραοξικό οξύ (DOTA) NCS (ισοθειοκυανικό) ή NHS (Ν-υδροξυηλεκτριμίδιο) ή 1,4,7-τριαζακυκλοεννεάνιο -Ν, Ν’Ν «-τριοξικό οξύ (ΝΟΤΑ), ιόντα ραδιονουκλίδιο μετάλλου μπορεί να συμπλοκοποιείται στους πυρήνες χηλικοποιητή ενώ οι ομοιοπολικούς δεσμούς που σχηματίζονται με ελεύθερες ομάδες λυσίνης σε αντισώματα ή πεπτίδια [44]. Η δύναμη αυτής της προσέγγισης είναι ότι DOTA /ΝΟΤΑ συμπλοκοποιείται ιχνηλατών ΡΕΤ μπορεί να συζευχθεί με αντισώματα ειδικά για ένα ρεπερτόριο αγγειογόνων παραγόντων. Καθώς ο VEGF είναι ο κύριος αγγειογόνος παράγοντας που παράγεται από RCC (και οι περισσότερες άλλες μορφές καρκίνου, καθώς), αυτή η αγγειογόνος παράγοντας έχει διερευνηθεί ως στόχο απεικόνισης. Προηγούμενες μελέτες έχουν αξιολογήσει τη χρήση ραδιοσημασμένων bevacizumab για την απεικόνιση ΡΕΤ της έκφρασης του VEGF. Για παράδειγμα, bevacizumab έχει ραδιοσημασμένου με

89Zr [26] και

86Y [27] για την προκλινική απεικόνιση των μοντέλων ξενομοσχεύματος των ωοθηκών. Παρά την ικανότητα αυτών των παραγόντων για την εικόνα του VEGF, την υψηλή ενέργεια και την αφθονία της φθοράς γάμμα από αυτά τα ραδιονουκλίδια είναι μια ανησυχία την έκθεση σε σύγκριση με

64Cu η οποία έχει ένα πολύ χαμηλότερο υψηλή ενεργειακή αφθονία φθορά γάμμα. Paudyal

et al.

Αξιολογούνται

64Cu-DOTA- bevacizumab για την προκλινική απεικόνιση της έκφρασης του VEGF στον ορθοκολικό ξενομοσχεύματα [28]. πρόσληψη από το ήπαρ ήταν σχετικά υψηλή, 17.2% ID /g, σε αντίθεση με μας

64Cu-ΝΟΤΑ-bevacizumab ιχνηθέτη όπου ήταν 4,8% ID /g. Μια εξήγηση για την πρόσληψη διαφορική ήπαρ θα μπορούσε να είναι το υψηλότερο

64Cu συγγένεια δέσμευσης του ΝΟΤΑ σε σχέση με DOTA. Nagengast

et al

.