Αφηρημένο

Ιστορικό

Μετάσταση στο κόκκαλο είναι ένας κλινικά σημαντικά χαρακτηριστικά του καρκίνου του προστάτη (PCA). Οι τρέχουσες διαγνωστικές μέθοδοι δεν μπορούν να προβλέψουν μεταστατική προστάτη σε ένα σκληρυνόμενο στάδιο της νόσου. Ως εκ τούτου, προσδιορισμός των μεταβολικών οδών που εμπλέκονται στην ανάπτυξη των οστικών μεταστάσεων έχει τη δυνατότητα να βελτιώσει προστάτη πρόγνωση, καθώς και θεραπεία.

Μεθοδολογία /Κύρια Ευρήματα

Μεταβολομική εφαρμόστηκε για τη μελέτη του προστάτη και οστικές μεταστάσεις (n = 20) σε σύγκριση με αντίστοιχο φυσιολογικό οστό (n = 14), και επιπλέον των κακοήθων (n = 13) και καλοήθη (n = 17) δείγματα ιστού του προστάτη και της αντίστοιχης του πλάσματος που λαμβάνονται από ασθενείς με (n = 15) και χωρίς (n = 13) διαγνωστεί μεταστάσεις και από άνδρες με καλοήθη ασθένεια προστάτη (n = 30). Αυτό έγινε χρησιμοποιώντας χρωματογραφία-φασματομετρία μάζας αερίου για το χαρακτηρισμό του δείγματος, και χημειομετρικών βιοπληροφορικής για την ανάλυση δεδομένων. Τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν σε ένα ξεχωριστό σετ δοκιμής περιλαμβανομένων των μεταστατικών και φυσιολογικό ιστό του οστού από ασθενείς με άλλους καρκίνους (n = 7). Σημαντικές διαφορές βρέθηκαν μεταξύ PCa οστικές μεταστάσεις, μεταστάσεις στα οστά άλλων καρκίνων, και το κανονικό οστό. Επιπλέον, γνωστούς μεταβολίτες σε πρωτογενή καρκινικό ιστό και στο πλάσμα που συσχετίστηκαν σε σημαντικό βαθμό με μεταστατική νόσο. Μεταξύ των μεταβολιτών σε προστάτη οστικές μεταστάσεις σημειώθηκε ιδιαίτερα χοληστερόλη. Σε μια δοκιμή που η μέση στάθμη χοληστερόλης στο PCa οστικές μεταστάσεις ήταν 127,30 mg /g, σε σύγκριση με 81,06 και 35,85 mg /g σε οστικές μεταστάσεις διαφορετικής προέλευσης και φυσιολογικό οστό, αντίστοιχα (Ρ = 0.0002 και 0.001). Ανοσοϊστοχημική χρώση του προστάτη οστικών μεταστάσεων έδειξε έντονη χρώση του υποδοχέα χαμηλής πυκνότητας λιποπρωτεϊνης και μεταβλητά επίπεδα του υποδοχέα καθαριστή κατηγορίας Β τύπου 1 και 3-υδροξυ-3-μεθυλγλουταρυλ-συνένζυμο αναγωγάσης σε επιθηλιακά κύτταρα του όγκου, υποδεικνύοντας δυνατότητες για εισροή και

de novo

σύνθεση της χοληστερόλης.

Συμπεράσματα /Σημασία

Έχουμε εντοπίσει τους μεταβολίτες που σχετίζονται με προστάτη μετάσταση και συγκεκριμένα εντοπίστηκαν υψηλά επίπεδα χοληστερόλης στο προστάτη οστικές μεταστάσεις. Με βάση τα ευρήματά μας και την προηγούμενη βιβλιογραφία, αυτό κάνει τη χοληστερόλη ένα δυνατό θεραπευτικό στόχο για προηγμένη προστάτη

Παράθεση:. Thysell Ε, Surowiec Ι, Hornberg Ε, Crnalic S, Widmark Α, Johansson AI, et al. (2010) μεταβολομική Χαρακτηρισμός των Ανθρωπίνων Καρκίνος του προστάτη οστικές μεταστάσεις αποκαλύπτει αυξημένα επίπεδα χοληστερόλης. PLoS ONE 5 (12): e14175. doi: 10.1371 /journal.pone.0014175

Συντάκτης: Τσαντ Creighton, Baylor College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 14, Ιουνίου 2010? Αποδεκτές: 4 Νοεμβρίου, 2010? Δημοσιεύθηκε: 3 Δεκ, 2010

Copyright: © 2010 Thysell et al. . Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση: Επιχορήγηση υποστήριξης : η σουηδική Εταιρεία Καρκίνου, το Συμβούλιο Έρευνας της Σουηδίας, το θεμέλιο Λιοντάρια Cancer Research, KEMPE ίδρυμα, Knut και Alice Wallenberg θεμέλια, και το Ίδρυμα Βόρειας Σουηδίας Καρκίνου. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

επιθετικό καρκίνο του προστάτη (PCA), τελικά εξαπλώνεται μέχρι το κόκαλο, είναι μια κοινή και θανατηφόρα ασθένεια που απαιτεί έγκαιρη διάγνωση και αποτελεσματική θεραπεία. Τρέχουσες διαγνωστικές μέθοδοι? μέτρηση των επιπέδων του ειδικού προστατικού αντιγόνου (PSA) σε δείγματα αίματος και εξέταση βιοψίες βελόνα από τον προστάτη υπό μικροσκόπιο φωτός, ωστόσο, δεν είναι ιδιαίτερα αποτελεσματικά στο διαχωρισμό περιπτώσεις επιθετικών προστάτη από τις πιο διαδεδομένες και βραδείας μορφών προστάτη, που συχνά μπορεί να μείνει χωρίς θεραπεία, ή στο διαχωρισμό του καρκίνου από άλλες μη κακοήθεις παθήσεις του προστάτη [1], [2]. Χρησιμοποιώντας μια ποικιλία τεχνικών πολλαπλών ερευνητές έχουν, συνεπώς, προσπάθησε να βρει νέες διαγνωστικές μεθόδους και προγνωστικοί δείκτες που μπορούν να διαχωριστούν επιθετική από πιο νωχελικός μορφές του προστάτη (αναθεωρηθούν [3]).

Μεγάλη προσπάθεια έχει τεθεί σε αναγνώριση γενετικών και πρωτεομικής προφίλ για την PCA (που επισκοπείται στο [4]), και φασματοσκοπία μαγνητικού συντονισμού έχουν χρησιμοποιηθεί για την εκμετάλλευση αλλαγές του μεταβολισμού που σχετίζονται με προστάτη [5], [6], [7]. Zakian και colleauges παρέχουν μια καλή κριτική για το θέμα αυτό [8]. Σε μια πρόσφατη δημοσίευση, ωστόσο, Sreekumar και οι συνεργάτες του χρησιμοποίησαν υγρή και αέρια χρωματογραφία – ώρα φασματομετρία μάζας πτήσης (GC /TOFMS) στο προφίλ του μεταβολιτών στους ιστούς, ούρα, και το πλάσμα από ασθενείς του προστάτη και προσδιορίζονται οι μεταβολές που συνδέονται με την εξέλιξη της νόσου [9] . Συγκεκριμένα, εντόπισαν σαρκοσίνη, το

Ν

μεθυλο παράγωγο της γλυκίνης, ως ένα εν δυνάμει σημαντικό δείκτη για την εισβολή προστάτη των κυττάρων, τη μετανάστευση, και την επιθετικότητα. Η μελέτη Sreekumar μαζί με άλλες πρόσφατες μελέτες [10], [11], [12], [13] πραγματικά δείχνουν ότι οι μέθοδοι που βασίζονται φασματομετρία μάζας θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για να χαρακτηρίσει μεταβολομική αλλαγές κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του καρκίνου και να προσδιορίσουν περαιτέρω πιθανές διαγνωστικές και προγνωστικές βιοδεικτών ή πρότυπα των βιοδεικτών, καθώς και να αυξήσει τις γνώσεις μας σχετικά με την εξέλιξη της νόσου.

Αυτή η μελέτη έγινε με την υπόθεση ότι το δυναμικό νέων δεικτών για την επιθετική του προστάτη θα μπορούσε να ανακαλυφθεί από την εύρεση παραγόντων σημαντικά πάνω ρυθμισμένα σε οστικές μεταστάσεις και στη συνέχεια να εξετάσει αν η ίδιοι παράγοντες είναι επίσης αυξημένη σε δείγματα αίματος και σε πρωτογενείς όγκους από ασθενείς με μεταστατική νόσο. Ως εκ τούτου, εκτελείται μία μεταβολομική μελέτη του προστάτη οστικών μεταστάσεων σε σύγκριση με αντίστοιχο φυσιολογικό οστό, πρωτογενούς όγκου προστάτη και φυσιολογικό προστατικό ιστό, με τη χρήση μεταστατικού ιστού που συλλέγονται σε χειρουργική επέμβαση για επιπλοκές των μεταστάσεων στα οστά [14]. Επιπλέον, αναλύσαμε δείγματα αίματος από ασθενείς με και χωρίς διάγνωση οστικές μεταστάσεις, με σκοπό να προσδιορίσει μεταβολίτες που θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για τη βελτίωση πρόγνωση και θεραπεία του προχωρημένου προστάτη. Τα αποτελέσματα επιβεβαιώθηκαν σε μια ξεχωριστή δοκιμή που περιλαμβάνει επίσης μεταστατικού ιστού των οστών από άλλους καρκίνους. Αυτό έγινε με τη χρήση χρωματογραφίας-φασματομετρίας μάζας αερίου για το χαρακτηρισμό του δείγματος και χημειομετρικών βιοπληροφορικής για την ανάλυση και την αξιολόγηση [15] των δεδομένων.

Αποτελέσματα

οστικές μεταστάσεις του καρκίνου του προστάτη δείχνουν σαφή μεταβολικές διαφορές στο φυσιολογικό οστό και να οστικές μεταστάσεις από άλλες μορφές καρκίνου, συμπεριλαμβανομένων των αυξημένων επιπέδων της χοληστερόλης

Αέρια χρωματογραφία-χρόνου πτήσεως σπεκτρομετρίας μάζης (GC /TOFMS) χρησιμοποιήθηκε για να χαρακτηρίσει προστάτη οστικές μεταστάσεις από 14 ασθενείς (7 ορμόνη ασθενείς χωρίς προηγούμενη θεραπεία του προστάτη και 7 ασθενείς με CRPC) και γειτονικά κανονικά εμφανίζονται κομμάτια οστών που ήταν διαθέσιμα από 10 από τους ασθενείς (Πίνακας 1). Συνολικά, 123 χρωματογραφικές κορυφές που αντιστοιχούν σε υποθετική μεταβολίτες βρέθηκαν από αποσυνέλιξη [16] μετά τον αποκλεισμό των κορυφών που προέρχονται από εσωτερικά πρότυπα, η μόλυνση και καλλιτεχνημάτων. Από τους 123 υποθετικό μεταβολίτες, 49 θα μπορούσε να ανατεθεί μια ταυτότητα από τα φάσματα τους μάζα και αντίστοιχο δείκτη κατακράτησης (Σχήμα 1). Ορθογώνια μερική ελαχίστων τετραγώνων διακρίσεις ανάλυση (OPLS-DA) αποκάλυψε μια προφανής και στατιστικώς σημαντική διαχωρισμού (

P

& lt? 0.001) μεταξύ των κανονικών δειγμάτων οστών και οστικές μεταστάσεις, ανεξάρτητα από τη θεραπεία, που καθορίζεται από ANOVA της πολλαπλής επικυρωμένο μοντέλο (Σχήμα 2β). Σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων του δείγματος (VIP & gt? 0.9, Μεταβλητό σημασία στο μοντέλο OPLS-DA ή

P

& lt? 0,05, Mann Whitney U-test) αποτελέσματα για το 58,5% (71 από 123) των υποτιθέμενων μεταβολιτών (Σχήμα 2α, Πίνακας S1). Από τα 71 σημαντικά διακρίσεις μεταβολίτες, 34 θα μπορούσε να ανατεθεί μια ταυτότητα από τα φάσματα τους μάζα και αντίστοιχο δείκτη κατακράτησης, ενώ 37 είχαν ανατεθεί μόνο σε μια πιθανή ένωση κατηγορία ή παρέμειναν άγνωστοι. Για να επικυρώσετε την ανιχνευθεί μεταβολομική υπογραφή στο μεταστατικό ιστό των οστών και να διερευνήσει αν υπάρχει ένα μοναδικό πρότυπο μεταβολίτη για την PCA, μια σειρά από επιπλέον δείγματα προφίλ σε μια ξεχωριστή πορεία. Αυτή η «σετ δοκιμής» περιλαμβάνονται δείγματα μετάσταση στα οστά από προστάτη (6), του μαστού (3), νεφρό (2) και πλακωδών κυττάρων (2) τα αδενοκαρκινώματα, καθώς και φυσιολογικά δείγματα οστών από αντίστοιχους ασθενείς παρασκευάζονται, προφίλ και προέβλεψε ως ξεχωριστή ομάδα επικύρωσης (Τραπέζι 1). Πρόβλεψη των οστικών μεταστάσεων του προστάτη και τα αντίστοιχα φυσιολογικά δείγματα οστών (τυφλός με το μοντέλο) στο μοντέλο OPLS-DA αποκάλυψε μια σαφή διάκριση μεταξύ των κατηγοριών του δείγματος στο σύνολο δοκιμής (Σχήμα 2γ). Επιπλέον, ένα ξεχωριστό μοντέλο OPLS-DA έδωσε μια σημαντική διαφορά (

P

& lt? 0.001) μεταξύ των μεταστάσεων στα οστά προστάτη και τα αντίστοιχα φυσιολογικά δείγματα οστών στο σετ δοκιμής και των μεταβολιτών διαχωρισμού σημαντικά εκείνες τις ομάδες δειγμάτων (Πίνακας S2 ) επικαλύπτονται σε μεγάλο βαθμό με τις σημαντικές μεταβολίτες ανιχνεύθηκαν στο μοντέλο σετ (Πίνακας S1). Επιπλέον, OPLS-DA εκτίθεται μια προφανής και σημαντική (P & lt? 0.005) διαχωρισμός μεταξύ των οστικών μεταστάσεων του προστάτη και των μεταστάσεων από τους άλλους καρκίνους (Σχήμα S1)

Οι προσδιορισμένοι μεταβολίτες κατηγοριοποιούνται ανάλογα με τη χημική τάξη και τον αριθμό. των μεταβολιτών ανά τάξη σημαντική συσχέτιση με μετάσταση υποδεικνύεται (

P

& lt? 0,05, Mann Whitney U-test, ή VIP & gt? 0,9). Ταξινόμηση των μεταβολιτών ανάλογα με τη χημική τάξη (ανθρώπινη μεταβολιτών DB? Www.hmdb.ca). n = ο αριθμός των ταυτοποιημένων μεταβολιτών μέσα σε κάθε κατηγορία μεταβολίτη

Η

Α) φορτώσεις συσχέτιση (p [1]) από OPLS-DA ανάλυση των σημαντικά διαφοροποίησης των μεταβολιτών (

P

& lt.? 0.05, Mann Whitney U-test, ή VIP & gt? 0,9) μεταξύ καρκίνου του προστάτη και οστικές μεταστάσεις και φυσιολογικό οστό παρουσιάζει θετικές τιμές για τους μεταβολίτες με αυξημένα επίπεδα σε οστικές μεταστάσεις και αρνητικές τιμές για τους μεταβολίτες με μειωμένα επίπεδα σε οστικές μεταστάσεις. Ταξινόμηση των μη αναγνωρισμένων ενώσεων σύμφωνα με χημική κατηγορία (ανθρώπινη μεταβολιτών DB? Www.hmdb.ca) Β) OPLS-DA οικόπεδο βαθμολογία δείχνει στατιστικά σημαντική διαχωρισμού (

P

& lt? 0.001) μεταξύ της κανονικής οστών και του καρκίνου του προστάτη οστικές μεταστάσεις. Γ) σετ δοκιμής προβλέψεις των οστικών μεταστάσεων του καρκίνου του προστάτη και τα αντίστοιχα φυσιολογικά δείγματα οστών (τυφλός με το μοντέλο) στο μοντέλο OPLS-DA δείχνει μια σαφή διάκριση ανάμεσα στις τάξεις δείγμα με βάση το ανιχνεύεται μεταβολομική υπογραφή.

Η

Μεταξύ των ανιχνεύονται μεταβολίτες στο προστάτη οστικές μεταστάσεις (Εικόνα 2α και Πίνακας S1) βρήκαμε αυξημένα επίπεδα διαφόρων αμινοξέων σε σύγκριση με το φυσιολογικό οστό, υποδεικνύοντας μεταβολισμό υψηλό αμινοξύ. Κατά συνέπεια, οι κορυφαίες 12 κανονικών περιόδων του προστάτη οστικές μεταστάσεις που προτείνεται από την ανάλυση της οδού συστήματα (Ingenuity Systems, Inc.) ήταν όλα τα σχετικά με τα αμινοξέα σύνθεση οξύ και το μεταβολισμό (Πίνακας S3). μεταβολισμό των αμινοξέων ήταν επίσης η κορυφαία λειτουργία αναφέρονται από την ανάλυση της οδού Ingenuity για μεταστάσεις προστάτη των οστών (Πίνακας S4). Επιπλέον, ανιχνεύσαμε υψηλά επίπεδα χοληστερόλης, μυο-ινοσιτόλη-1-φωσφορικό άλας, κιτρικό οξύ, φουμαρικό, γλυκερόλη-3-φωσφορική, και λιπαρά οξέα (Πίνακας S1), οι οποίες σχετίζονται με το μοριακό και κυτταρικές λειτουργίες εντός του προστάτη οστικές μεταστάσεις, όπως αναφέρεται στον πίνακα S4.

Σημειώσαμε ειδικά τα υψηλά επίπεδα της χοληστερόλης στο προστάτη οστικές μεταστάσεις η χοληστερόλη παρουσίασαν την υψηλότερη τιμή VIP κατά τη διαφοροποίηση του προστάτη οστικές μεταστάσεις από φυσιολογικό ιστό του οστού (Πίνακας S1, Σχήμα 2α), καθώς και από άλλες οστικές μεταστάσεις (Πίνακας S5). Επιπλέον, η χοληστερόλη έχει προταθεί για την προώθηση της ανάπτυξης και της εξέλιξης του καρκίνου (που επισκοπείται στο [17]), και ως εκ τούτου επελέγη για περαιτέρω ανάλυση. Το υψηλό επίπεδο χοληστερόλης στο PCa οστικές μεταστάσεις, σε σύγκριση με φυσιολογικό οστό (

P

= 3.12E-5, Εικόνα 3α) ήταν σαφώς επαληθεύονται τα σετ δοκιμής δεδομένων (

P

= 0.001, Εικόνα 3β). Είναι ενδιαφέρον ότι, τα επίπεδα χοληστερόλης στο PCa οστικές μεταστάσεις ήταν υψηλές και σε σύγκριση με τα επίπεδα σε οστικές μεταστάσεις από άλλους καρκίνους (Ρ = 0,0002, Σχήμα 3Β).

A. Θηκόγραμμα για τη συγκέντρωση της χοληστερόλης (mg χοληστερόλης /g ιστού) που δείχνει σημαντικά υψηλότερα επίπεδα σε καρκίνο του προστάτη μεταστάσεις (PCA) των οστών σε σύγκριση με το φυσιολογικό οστό. οικόπεδο Β Κουτί για συγκέντρωση χοληστερόλης (mg χοληστερόλης /g ιστού) σε σειρά δοκιμών που αποδεικνύουν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα σε προστάτη μεταστάσεις οστού σε σύγκριση με φυσιολογικό οστό, καθώς και σε σύγκριση με οστικές μεταστάσεις από άλλους καρκίνους? του μαστού, των νεφρών, και του καρκίνου πλακωδών (BCA, KCa και SCA). Ο-Ε. Η ανοσοϊστοχημική χρώση του υποδοχέα χαμηλής πυκνότητας λιποπρωτεϊνης (LDL-R), ο υποδοχέας καθαριστή τύπου κλάσης Β 1 (SR-Β1), και 3-υδροξυ-3-μεθυλγλουταρυλ-συνένζυμο Α αναγωγάση (HMG-CoA κόκκινο.) Σε PCa οστών μεταστάσεις που δείχνουν έντονη χρώση και υποδεικνύοντας δυνατότητες εισροή καθώς και

de novo

σύνθεση της χοληστερόλης σε επιθηλιακά κύτταρα του όγκου, όπως προτείνεται στην FF χοληστερόλη εισροή και η σύνθεση διεγείρεται από υποδοχέα ανδρογόνου (AR) δράση εν μέρει μέσω ενεργοποίησης του στερόλη ρυθμιστικό στοιχείο δέσμευσης πρωτεΐνης (SREBP) και μετέπειτα μεταγραφή του LDL-R και HMG-CoA κόκκινο [24], [25] και τα ανδρογόνα θα μπορούσε να παρέχεται από χοληστερόλη με μετατροπή της σε διάφορα βήματα [27], [28].

οστικές μεταστάσεις του καρκίνου του προστάτη έχουν τα μηχανήματα για την πρόσληψη και

de novo

σύνθεση της χοληστερόλης

η χοληστερόλη αποτελεί έναν πιθανό θεραπευτικό στόχο και γι ‘αυτό ήθελε να εξετάσει πιθανούς λόγους για την τα υψηλά επίπεδα χοληστερόλης στο PCa οστικές μεταστάσεις. Τα κύτταρα μπορούν να αποκτήσουν τη χοληστερόλη από εξωγενείς εισροή μέσω του υποδοχέα λιποπρωτεΐνης χαμηλής πυκνότητας (LDL-R), ο υποδοχέας καθαριστή κατηγορίας Β τύπου 1 (SR-Β1) ή με

de novo

σύνθεση από ακετυλο-CoA, όταν η μείωση του 3-υδροξυ-3-μεθυλγλουταρυλ-συνενζύμου Α (HMG-CoA) σε μεβαλονικό θεωρείται ότι είναι το περιοριστικό του ρυθμού στάδιο [18], [19]. Ως εκ τούτου, εγκλεισμένα σε παραφίνη κομμάτια από τις μεταστάσεις προστάτη που περιλαμβάνονται στην ανάλυση GC /TOFMS ανοσοχρωματίστηκαν για LDL-R, SR-B1 και HMG-CoA. Όλες οι περιπτώσεις προστάτη έδειξαν ισχυρή ομοιογενή χρώση LDL-R των μεταστατικών επιθηλιακών κυττάρων και περιστασιακά λιγότερο έντονη χρώση των παρακείμενων κυττάρων στρώματος, ενδοθηλιακά κύτταρα, λιποκύτταρα, και των οστών κύτταρα (Σχήμα 3γ, Πίνακας 2). Η επιθηλιακή χρώση του SR-B1 και HMG-CoA αναγωγάσης ήταν πιο ετερογενής, που κυμαίνονται από ασθενές σε έντονη (Πίνακας 2). Είναι ενδιαφέρον ότι, η HMG-CoA αναγωγάσης έδειξε ιδιαίτερα έντονη χρώση στα ενδοθηλιακά κύτταρα, αγγειακά τοιχώματα, κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος, και τα κύτταρα των οστών (Εικόνα 3e), ενώ SR-B1 έδειξε αρνητική χρώση στρώμα (Εικόνα 3d). Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι ο όγκος των επιθηλιακών κυττάρων στον προστάτη και οστικές μεταστάσεις, ενδεχομένως, να συνθέσει τη χοληστερόλη

de novo

μέσω της HMG-CoA αναγωγάσης, αλλά και ότι άλλους τύπους κυττάρων στο μυελό των οστών μεταστάσεις μικρο-περιβάλλον εκφράζουν το ένζυμο αυτό, ενδεχομένως, τους επιτρέπουν να παρέχουν τη χοληστερόλη ότι θα μπορούσε να ληφθεί από τα επιθηλιακά κύτταρα του όγκου μέσω της LDL και SRB-1 υποδοχείς (Σχήμα 3F). Δεν υπήρχε προφανής σχέση μεταξύ της ετερογένειας σε SR-B1 και HMG-CoA ανοσοχρώση και τα αντίστοιχα επίπεδα χοληστερόλης στα μεταστάσεις προστάτη των οστών (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Είναι ενδιαφέρον, ωστόσο, οι οστικές μεταστάσεις προστάτη έδειξε γενικά ισχυρότερη ανοσοχρώση της LDL-R και SR-B1 από τις μεταστάσεις στα οστά διαφορετικής προέλευσης (Πίνακας 2), ενδεχομένως συμβάλλουν στις σχετικώς υψηλότερα επίπεδα χοληστερόλης παρατηρήθηκε στις μεταστάσεις PCa (Εικ. 3) .

η

μεταβολικές διαφορές μεταξύ των ιστών πρωτογενούς όγκου του προστάτη από ασθενείς υψηλού κινδύνου με και χωρίς ιδρύθηκε οστικές μεταστάσεις

πρωτοβάθμια προστάτη ιστό που λαμβάνεται από ασθενείς με όγκους υψηλού κινδύνου (που ορίζεται ως τοπικά προχωρημένο ή κακώς διαφοροποιημένο καρκίνο? στάδιο T3-4 ή /και GS 8-10) με (Μ1, n = 7) ή χωρίς (Μ0, n = 6) διαγνωστεί οστικές μεταστάσεις προφίλ σε σύγκριση με καλοήθη δείγματα προστάτη (n = 17, Πίνακας 3). Αυτό είχε ως αποτέλεσμα 157 πιθανός μεταβολίτης κορυφές των οποίων 59 θα μπορούσε να εκχωρηθεί μια ταυτότητα (Σχήμα 1). Σαφείς και στατιστικά σημαντικές διακρίσεις (P & lt? 0.001), καθορίζεται από ANOVA του μοντέλου πολλαπλής επικυρωθεί, μεταξύ όλων των τάξεων ιστού τρεις προστάτη (καλοήθης, M0, και Μ1) αποκαλύφθηκε από OPLS-DA μοντελοποίηση (Σχήμα S2). Σημαντικές αλλαγές που σχετίζονται με μεταστατική νόσο, ορίζεται ως αλλαγές μεταβολίτης Μ1 εναντίον καλοήθεις και Μ1 εναντίον M0 (P & lt? 0,05 ή VIP & gt? 0,9) ανιχνεύθηκαν για 13 μεταβολίτες του οποίου εντοπίστηκαν οκτώ (Πίνακες S6 και S7). Είναι ενδιαφέρον, τέσσερις από αυτούς ήταν επίσης σημαντικά αυξημένα σε δείγματα οστικές μεταστάσεις, σε σύγκριση με φυσιολογικό οστό? ασπαραγίνη, θρεονίνη, φουμαρικό οξύ, και το λινελαϊκό οξύ (Πίνακας S1).

Η

Διάκριση μεταβολίτη προφίλ στο πλάσμα του αίματος από ασθενείς με υψηλό κίνδυνο όγκους με και χωρίς εγκατεστημένος οστικές μεταστάσεις

Διερεύνηση μεταβολιτών στο πλάσμα από ασθενείς PCa με (Μ1, n = 15) και χωρίς (Μ0, n = 13), η διάγνωση των μεταστάσεων στα οστά και τους άνδρες με καλοήθη ασθένεια βασίστηκε σε 179 επιλυθεί υποθετικό μεταβολίτες, και από αυτά τα 50 θα μπορούσε να εκχωρηθεί μια ταυτότητα (Σχήμα 1). Παρά τη σαφή επικάλυψη στα επίπεδα PSA ορού (Πίνακας 3), μία σημαντική διαχωρισμού (Ρ & lt? 0.003) χρησιμοποιώντας OPLS-DA μοντελοποίηση λήφθηκε για τη διαφορά μεταξύ Μ1 και καλοήθεις πλάσματος καθώς και μεταξύ Μ1 και Μ0 πλάσμα, προσδιορίζεται με ANOVA του διασχίζουν επικυρωμένα μοντέλα. Είκοσι επτά μεταβολίτες, επτά εντοπίστηκαν, βρέθηκαν ως σημαντικές μετατροπές (Ρ & lt? 0,05 ή VIP & gt? 0,9) στο πλάσμα του αίματος από ασθενείς Μ1 σε σύγκριση με τους ασθενείς με καλοήθη (Πίνακας S8) και ασθένεια M0 (Πίνακας S9). Είναι ενδιαφέρον ότι, από αυτές τις 27, τέσσερις μεταβολίτες? γλουταμινικό οξύ, ταυρίνη, και φαινυλαλανίνη (αυξημένα στο αίμα) και στεατικό οξύ (μειωμένη στο αίμα) βρέθηκαν επίσης ως σημειωτές μετάσταση στα οστά (Πίνακας S1). Μια περίληψη όλων των ταυτοποιημένων μεταβολιτών στα διάφορα είδη δειγμάτων δίδονται στον Πίνακα S10 και τα δεδομένα μπορούν να βρεθούν σε μια στήριξη αρχείο δεδομένων (Data S1).

επίπεδα της σαρκοσίνης σε δείγματα ιστού και πλάσματος

επίπεδα σαρκοσίνη μετρήθηκαν χωριστά στα δείγματα χρησιμοποιώντας AccQ • παραγώγων Tag ακολουθείται από LC /MS ανάλυση. Η ανάλυση έδειξε μια αύξηση της σαρκοσίνης σε οστικές μεταστάσεις προστάτη σε σύγκριση με φυσιολογικό οστό, ενώ θα μπορούσε να παρατηρηθεί καμία διαφορά σε σύγκριση με οστικές μεταστάσεις από άλλους καρκίνους (Σχήμα S3). Επιπλέον, δεν υπάρχει σαφής εξέλιξης της νόσου παρατηρήθηκε κατά τη σύγκριση των επιπέδων σαρκοσίνη μεταξύ καλοήθους προστάτη και πρωτογενή ιστό όγκου του προστάτη, αν και ο χαμηλός αριθμός (n = 5) του πρωτογενούς εκχυλίσματα όγκων διαθέσιμες για την ανάλυση αυτή επηρέασε την αξιοπιστία των αποτελεσμάτων, και επίσης έκανε μια σύγκριση μεταξύ πρωτογενών όγκων και ιστούς μετάσταση στα οστά αναξιόπιστη. Συγκρίσεις των επιπέδων σαρκοσίνης στο πλάσμα του αίματος δεν αποκάλυψε σημαντικές διαφορές που σχετίζονται προς PCA ή την παρουσία μεταστάσεων στα οστά (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

Συζήτηση

Εμείς εδώ, για πρώτη φορά, μια έκθεση ολοκληρωμένη ανάλυση των μοντέλων μεταβολισμού σε προστάτη οστικών μεταστάσεων σε σύγκριση με πρωτογενή προστάτη, καλοήθη ιστό του προστάτη, και φυσιολογικό ιστό των οστών. Έχουμε βρει μεταβολίτες που διαφοροποιούν του προστάτη οστικές μεταστάσεις από φυσιολογικά δείγματα των οστών και, επιπλέον, από μεταστάσεις στα οστά διαφορετικής προέλευσης. Βρήκαμε επίσης μεταβολίτες που, σε αντίθεση με PSA, παρουσίασαν μεταβολή των επιπέδων στο πλάσμα και πρωτογενούς όγκου σε άτομα με μεταστατικό PCA σε σύγκριση με τους ασθενείς με όγκους υψηλού κινδύνου, αλλά χωρίς ανιχνεύσιμες μεταστάσεις. Ένα από τα πιο αξιοσημείωτα ευρήματα μας είναι τα υψηλά επίπεδα της χοληστερίνης στις οστικές μεταστάσεις PCa, η οποία πιθανώς επιτευχθεί με

de novo

σύνθεση της χοληστερόλης σε επιθηλιακά κύτταρα του όγκου, καθώς και εισροή αυτού του μεταβολίτη από το περιβάλλον μέσω της LDL R και SR-Β1.

αυξημένη βιοδιαθεσιμότητα της χοληστερόλης στα κύτταρα του όγκου μπορεί να έχει μεγάλη βιολογική σημασία για οστικές μεταστάσεις ανάπτυξη, όπως τα συμπληρώματα χοληστερόλης έχει αποδειχθεί ότι αυξάνει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του όγκου του προστάτη, τη μετανάστευση, και εισβολή

σε vitro

[20], ενώ η στόχευση της χοληστερόλης επάγει την απόπτωση [21], κατά πάσα πιθανότητα από τη μείωση της περιεκτικότητας της χοληστερόλης λιπιδίων σχεδία και έτσι να παρεμβαίνει με αυξητικό παράγοντα σηματοδότηση [21], [22]. Ο αδένας του προστάτη συνήθως περιέχει υψηλά επίπεδα χοληστερόλης σε σύγκριση με άλλα όργανα και αυξημένα επίπεδα χοληστερόλης έχουν προηγουμένως συσχετιστεί με προστάτη [23]. Περαιτέρω αύξηση των επιπέδων χοληστερόλης στο οστικές μεταστάσεις θα μπορούσε προφανώς να αντικατοπτρίζει υψηλή ζήτηση για τη βιοσύνθεση μεμβρανών σε πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα, αλλά και το γεγονός ότι ο μεταβολισμός της χοληστερόλης είναι άμεσα ρυθμίζεται από ανδρογόνα (που επισκοπείται στο [24]). Τα ανδρογόνα ρυθμίζουν θετικά την μεταγραφή του γονιδίου της LDL-R και επίσης να προάγει την σύνθεση χοληστερόλης μέσω της αύξησης της μεταγραφής της HMG-CoA αναγωγάσης [25] και έτσι το περιοριστικό του ρυθμού μετατροπής του HMG-CoA σε μεβαλονικό [26]. Δεδομένου ότι οι υποδοχείς ανδρογόνων εκφράζονται και presumingly ενεργός στην πλειονότητα των μεταστάσεων στα οστά σ CRPC [14], ανδρογόνων δράσεις πιθανώς συμβάλλουν στα υψηλότερα επίπεδα χοληστερόλης στο PCa μεταστάσεις σε σύγκριση με οστικές μεταστάσεις διαφορετικής προέλευσης. Η χοληστερόλη με τη σειρά του πιθανόν συμβάλλει στην ανδρογόνου σηματοδότηση υποδοχέα και έτσι ο ευνουχισμός ανάπτυξη ανθεκτικών όγκων σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με θεραπεία στέρησης ανδρογόνου, με τη μετατροπή του σε ανδρογόνα από μεταβολικά ένζυμα [27], [28]. Κατά συνέπεια, έχουν μια δυτική επίπεδα διατροφής και υψηλής ορό της χοληστερόλης έχουν συσχετιστεί με αυξημένο κίνδυνο προστάτη σε μια σειρά από μελέτες [29], [30], [31], αν και τα αποτελέσματα δεν ήταν απολύτως πειστικές (αναθεωρούνται στο [17]) . Είναι ενδιαφέρον, μια πρόσφατη μελέτη δείχνει χαμηλότερο κίνδυνο ανάπτυξης υψηλής ποιότητας προστάτη για τους άνδρες με χαμηλά επίπεδα χοληστερόλης στον ορό [32] και, σύμφωνα με αυτό, η μακροχρόνια χρήση των αναστολέων της HMG-CoA αναγωγάσης ( «στατίνες») για την πρόληψη της καρδιαγγειακής νόσου έχει αποδειχθεί ότι μειώνουν τον κίνδυνο εξέλιξης προστάτη σε επιθετικό, θανατηφόρο ασθένεια [33], [34], [35], [36]. παράγοντες μείωσης της χοληστερόλης έχουν επίσης δειχθεί ότι αναστέλλουν την ανάπτυξη των κυττάρων προστάτη

in vitro

και στο μοντέλο πειραματικά συστήματα

in vivo

[37], [38]. Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν τη δυνατότητα χρησιμοποιήσεως αναστολέων χοληστερόλη ως θεραπεία ή χημειοπροληπτική παράγοντες για την PCA μετάσταση, αλλά οι νέες ουσίες, τότε απαιτούνται οι στατίνες χρησιμοποιούνται σήμερα επικεντρωθεί κυρίως στο συκώτι και ελάχιστα φτάσει περιφερικά όργανα [17].

Βρήκαμε υψηλά επίπεδα πολλά αμινοξέα εντός των οστικών μεταστάσεων PCa, και ο μεταβολισμός αμινοξέων ήταν η πιο μεταβληθεί λειτουργική μονοπάτι που σχετίζεται με μεταστάσεις στα οστά προστάτη σύμφωνα με την ανάλυση μονοπατιού εφευρετικότητα. Τα αποτελέσματά μας υποστηρίζουν έτσι τη μεταβολομική με βάση μελέτη από Sreekumar και τους συναδέλφους [9], αλλά και νωρίτερα έκφρασης των γονιδίων που βασίζεται σε μελέτες που δείχνουν αυξημένη σύνθεση πρωτεϊνών κατά τη διάρκεια του προστάτη εξέλιξη [39]. Είναι ενδιαφέρον, είναι μια πρόσφατη χαρτί υψηλής υπογράμμισαν ότι επίσης τα επίπεδα των συνθετασών αμινοακυλο tRNA (aaRSs) αυξήθηκε κατά τη διάρκεια της εξέλιξης της ΣΕΣΣ και, επιπλέον, ότι η μεταγραφή κάποιου aaRSs υποκινείται από ανδρογόνα [40]. Αυτό αξιοσημείωτο εύρημα θα μπορούσε ενδεχομένως να συνδέεται με το γεγονός ότι βρήκαμε αυξημένα επίπεδα ορισμένων αμινοξέων όπως θρεονίνη, γλουταμικό, φαινυλαλανίνη εντός του προστάτη οστικών μεταστάσεων σε σύγκριση με οστικές μεταστάσεις διαφορετικής προέλευσης. Εκτός από τα αμινοξέα, άλλα αξιοσημείωτα μεταβολιτών στα δεδομένα μας (κιτρικό οξύ, φουμαρικό, γλυκερόλη-3-φωσφορική, και λιπαρά οξέα) δείχνουν μια υψηλή ενέργεια του μεταβολισμού που θα μπορούσαν να αντανακλούν τον υψηλό κλάσμα των πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων μέσα οστικές μεταστάσεις [14]. Επιπλέον, τα υψηλά επίπεδα μυο-ινοσιτόλης-1-φωσφορικής μπορεί να είναι ένα σημάδι της δραστικής κυτταρική σηματοδότηση με μόρια ινοσιτόλη-based ως δεύτεροι αγγελιοφόροι, όπως φωσφορικά ινοσιτόλης και φωσφορικά άλατα φωσφατιδυλινοσιτόλης. είναι εκείνα τα μόρια που εμπλέκονται στην ενεργοποίηση της πρωτεϊνικής κινάσης C και Akt και συνεπώς, στη ρύθμιση διεργασιών θεωρούνται ως χαρακτηριστικά του καρκίνου, δηλ πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την απόπτωση, τη διαφοροποίηση, την εισβολή και την αγγειογένεση [41]. Συνολικά οι αλλαγές στην μεταβολιτών ανιχνευθεί σε αυτή τη μελέτη ως σχετίζονται με προστάτη και οστικές μεταστάσεις έδειξε διαταραγμένη μοριακών και κυτταρικών λειτουργιών των σαφές ενδιαφέρον για την εξέλιξη του καρκίνου. Η σχετική σημασία αυτών των λειτουργιών είναι ωστόσο δύσκολο να εκχωρήσετε, καθώς εξαρτώνται εν μέρει από τις τάξεις μεταβολίτη ανιχνεύσιμη εντός του GC /ανάλυση TOFMS και τις ταυτότητες που λαμβάνονται στο πλαίσιο του παρόντος διαθέσιμες βιβλιοθήκες. Με τον /TOFMS μέθοδο μεταβολίτη προφίλ GC δεν ήμασταν σε θέση να ανιχνεύσει σαρκοσίνη στα δείγματα. Ωστόσο, χρησιμοποιώντας μια στοχευμένη προσέγγιση ανάλυσης, βρήκαμε υψηλά επίπεδα σαρκοσίνης σε οστικές μεταστάσεις, σύμφωνα με τα προηγούμενα ευρήματα των αυξημένων επιπέδων της σαρκοσίνης με την εξέλιξη προστάτη [9]. Είναι σημαντικό όμως, δεν είδαμε καμία διαφορά στα επίπεδα σαρκοσίνη μεταξύ οστικές μεταστάσεις του προστάτη και οστικές μεταστάσεις, διαφορετικής προέλευσης, υποδεικνύοντας ότι σαρκοσίνη δεν είναι προστάτη ειδικό, αλλά αντ ‘αυτού συνδέονται με προχωρημένο καρκίνο και μετάσταση. Μια πιο ολοκληρωμένη εικόνα των συγκεκριμένων βιολογικών δικτύων που έχουν σημασία για την PCA μεταστάσεις ανάπτυξη θα πρέπει να λαμβάνεται ως μέθοδοι ανάλυσης αναπτύξουν και βιβλιοθηκών για την ταυτοποίηση πάρει πιο ολοκληρωμένη, αλλά θα μπορούσε επίσης να επιτευχθεί με συνδυασμό μεταβολομική δεδομένων με γονιδιωματική ή πρωτεομική δεδομένων. Μέχρι στιγμής, σημειώνουμε ότι ειδικά θρεονίνη, ασπαραγίνη, φουμαρικό οξύ, και το λινελαϊκό οξύ είναι αυξημένη όχι μόνο σε οστικές μεταστάσεις, αλλά και σε πρωτογενείς προστατικό ιστό από ασθενείς με επιβεβαιωμένες οστικές μεταστάσεις, σε σύγκριση με τους ασθενείς M0. Essential λιπαρό οξύ όπως λινολεϊκό οξύ έχει αποδειχθεί ότι διεγείρουν την ανάπτυξη του προστάτη όγκου σε συστήματα μοντέλων [42], [43], και η μετατροπή του λινελαϊκού οξέος προς αραχιδονικό οξύ και περαιτέρω σε προσταγλανδίνες θα μπορούσε ενδεχομένως να διεγείρει μια φλεγμονώδη απόκριση η οποία συνδέεται με την παθογένεση του προστάτη [44].

ούτε η χοληστερόλη ούτε σαρκοσίνη ήταν, ωστόσο, προγνωστικά για οστικές μεταστάσεις στο πλάσμα. Αντί υψηλά επίπεδα γλουταμινικό οξύ, φαινυλαλανίνη, και ταυρίνη βρέθηκαν σε PCa μετάσταση στα οστά ιστό και στο πλάσμα από άνδρες με διαγνωσμένο οστικές μεταστάσεις PCa. Γλουταμινικό οξύ δείχθηκε πρόσφατα στη μελέτη με Sreekumar και συναδέλφους να αυξηθεί PCa ιστό [9] και, κατά τρόπο ενδιαφέροντα, τα καρκινικά κύτταρα που προκαλούν αναστάτωση οστού σε μοντέλα ζώων εκκρίνουν γλουταμικού στο περιβάλλον τους [45]. Όπως γλουταμινεργικής ενδοκυτταρική επικοινωνία είναι σημαντική για την κανονική ομοιόσταση των οστών μέσω των υποδοχέων γλουταμικού σε ειδικά κύτταρα του οστού (που επισκοπείται στο [46]), είναι πιθανό ότι οι διαταραχές μέσα σε αυτό το σύστημα θα μπορούσε να ανιχνευθεί κατά τη διαδικασία της μετάστασης οστών. Τα αποτελέσματά μας είναι, επίσης, σύμφωνα με μια πρόσφατη μελέτη που βρέθηκαν υψηλότερα επίπεδα ταυρίνης σε προστάτη σε σχέση με καλοήθη ιστό όταν αξιολογήθηκε με τη χρήση περιστροφής μαγικής γωνίας ((1) H HR-MAS) NMR φασματοσκοπία [47]. Η αξία αυτών των μεταβολιτών ως δείκτες πλάσματος για την επιθετική του προστάτη πρέπει όμως να επιβεβαιωθεί με περαιτέρω μελέτες.

Εν κατακλείδι, έχουμε εντοπίσει τους μεταβολίτες που σχετίζονται με τη μετάσταση καρκίνου του προστάτη και συγκεκριμένα σημείωσε υψηλά επίπεδα χοληστερόλης στο προστάτη οστικές μεταστάσεις. Με βάση τα ευρήματά μας και την προηγούμενη βιβλιογραφία, αυτό κάνει τη χοληστερόλη μια πιθανή θεραπευτικό στόχο για προχωρημένους ΣΕΣΣ. Αν και αυτό είναι το μεγαλύτερο μεταβολομική μελέτη του προστάτη οστικές μεταστάσεις που εκτελούνται έχει σίγουρα τα όριά της. Προηγούμενες μελέτες

1 NMR αποκάλυψαν εμφανής αλλαγές στα επίπεδα του κιτρικού και χολίνη μεταξύ καλοήθους προστάτη και καρκινικού ιστού [5], [6], [7], αλλά κάπως ανησυχητικό, δεν ήμασταν σε θέση να βρείτε αυτές τις διαφορές σε κιτρικό επίπεδα. Ούτε θα μπορούσαμε με τη μέθοδο μας εντοπίσουν χολίνης. Τα αποτελέσματα αυτά δεν αναδεικνύουν τους περιορισμούς της μεθόδου μας και να επισημάνω την ανάγκη για συμπληρωματικές προσεγγίσεις στην αναζήτηση για χρήσιμες μεταβολομική βιοδείκτες. Επιπλέον, το σχετικά χαμηλό αριθμό των ασθενών που συμπεριλήφθηκαν και η ετερογένεια της μεταστατικής νόσου κάνουν αξιολόγηση σε περαιτέρω μελέτες που είναι απαραίτητες πριν θα μπορούσε να εξασφαλιστεί η σημασία των αποτελεσμάτων μας.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

οι μελέτες εγκρίθηκαν από την τοπική ηθική επιτροπή δεοντολογίας του Πανεπιστημίου της Umea και οι συμμετέχοντες έδωσαν γραπτή ή προφορική συγκατάθεση.

δείγματα

οι οστικές μεταστάσεις και δίπλα συνήθως εμφανίζονται κομμάτια ιστού των οστών ελήφθησαν από ένα σειρά από φρέσκο-κατεψυγμένα βιοψίες που συλλέγονται από ασθενείς με διάγνωση του καρκίνου ή υποψία καρκίνου, που λειτουργεί για μεταστατική συμπίεση του νωτιαίου μυελού ή παθολογικών καταγμάτων (Πίνακας 1). Οι ασθενείς έχουν περιγραφεί λεπτομερώς στο [14].

Το πλάσμα του αίματος ήταν διαθέσιμες από μια σειρά από άνδρες που υποβλήθηκαν σε διορθικό υπέρηχο-καθοδηγούμενη βιοψία βελόνα του προστάτη, λόγω των αυξημένων επιπέδων του PSA στον ορό, και πρωτοβάθμια προστάτη και καλοήθη προστάτη βιοψίες ήταν αξιολογήσιμα σε ορισμένες περιπτώσεις (Πίνακας 3). Οι ασθενείς που περιλαμβάνονται σε αυτή τη μελέτη ήταν όλα τα επιλεγμένα για να έχουν όγκους υψηλού κινδύνου ορίζεται ως? παρουσία των μεταστάσεων στα οστά ή τοπικά προχωρημένο όγκο ή ένα ελάχιστα διαφοροποιημένο καρκίνο (Μ1 και /ή T3-4 και /ή GS 8-10), ενώ οι άνδρες με καλοήθη νόσο είχαν τουλάχιστον δύο γύρους αρνητικών βιοψιών. Οι περιπτώσεις του προστάτη και οι καλοήθεις περιπτώσεις αντιστοιχήθηκαν σύμφωνα με φορά από τη δειγματοληψία. Πρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τους ασθενείς και την προετοιμασία του δείγματος δίνεται στην υποστήριξη κειμένου (Κείμενο S1).

μεταβολομική προφίλ χρησιμοποιώντας GC /TOFMS

Πριν από την ανάλυση GC /TOFMS οι χαμηλού μοριακού βάρους μεταβολίτες σε δείγματα πλάσματος ήταν εκχυλίζεται και παραγοντοποιείται όπως περιγράφηκε προηγουμένως [48]. Δείγματα ιστών εκχυλίζονται με Η

2O /μεθανόλη /χλωροφόρμιο (1:03:01) μείγματος που περιέχει 11 εσωτερικά πρότυπα A [48] (1 mL ανά 15 mg ιστού) ομοιόμορφα κατανεμημένη σε όλη την χρωματογραφική διάρκεια διατήρησης. Η εκχύλιση διεξάγεται σε μύλο σφαιριδίων με δύο βολφράμιο χάντρες και το υπόλοιπο της διαδικασίας ήταν η ίδια όπως για τα δείγματα πλάσματος. Παραγωγοποιημένα εκχυλίσματα του δείγματος στη συνέχεια με ένεση σε λειτουργία splitless από CTC Combi Pal αυτόματο δειγματολήπτη (CTC Analytics AG, Zwingen, Ελβετία) σε αέριο χρωματογράφο Agilent 6890 εξοπλισμένη με ένα εσ 10 m × 0,18 χιλιοστά τριχοειδή στήλη με ένα χημικό συνδετικό 0,18 μm DB 5-MS στατική φάση (J & amp? W Scientific, Folsom, CA, USA). Η εκροή της στήλης εισήχθη στην πηγή ιόντων ενός φασματογράφου μάζης Pegasus III χρόνο-πτήσης, GC /TOFMS (Leco Corp., St Joseph, ΜΙ, USA). Μια αλκάνιο serie (C10-C40) είχε τρέξει για κάθε ξεχωριστό κύκλο GC /TOFMS. Περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με την προετοιμασία του δείγματος, παραγώγων και GC /TOFMS αναλύσεις μπορούν να βρεθούν στο συμπληρωματικές πληροφορίες. Η επαναληψιμότητα της μεθόδου έχει αναφερθεί στο παρελθόν [16], [48].

Η επεξεργασία δεδομένων

Δεδομένα προ-θεραπείας, συμπεριλαμβανομένης της διόρθωσης βασικής γραμμής, ευθυγράμμισης χρωματογράφημα, ρύθμιση του χρόνου-παράθυρο, ιεραρχική καμπύλη πολυπαραγοντική ψήφισμα (H-MCR) [11] και την ομαλοποίηση πραγματοποιήθηκαν σε MATLAB [έκδοση 7.3] χρησιμοποιώντας προσαρμοσμένες δέσμες ενεργειών. Περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με την επεξεργασία των δεδομένων μπορεί να βρεθεί στις πληροφορίες υποστήριξης (Κείμενο S1)

Δεδομένα ανάλυσης και Στατιστικής

Ορθογώνια μερική ελαχίστων τετραγώνων -. Διακριτική ανάλυση (OPLS-DA) [49] ήταν εφαρμόζονται για να εξαγάγετε και να ερμηνεύσει τη συστηματική διακύμανση των επιλυθεί προφίλ των ιστών και το πλάσμα /TOFMS GC που σχετίζονται με συγκεκριμένες απαντήσεις. Ο στόχος ήταν να εξαγάγει μεταβολικές μοτίβα που σχετίζονται προς PCA και πιο συγκεκριμένα σε μεταστατική νόσο.