Αφηρημένο

Ιστορικό

Xenotropic λευχαιμίας των ποντικών που σχετίζονται με ρετροϊό (XMRV) είναι ένα πρόσφατα ανακαλύφθηκε ρετροϊό που έχει συνδεθεί με τον καρκίνο του προστάτη του ανθρώπου και το σύνδρομο χρόνιας κόπωσης (CFS). Και οι δύο ασθένειες επηρεάζουν ένα μεγάλο μέρος του παγκόσμιου πληθυσμού, με καρκίνο του προστάτη που επηρεάζει έναν στους έξι άνδρες, και CFS επηρεάζει κατ ‘εκτίμηση 0,4 έως 1% του πληθυσμού.

Κύρια Ευρήματα

Σαράντα πέντε ενώσεις, συμπεριλαμβανομένων είκοσι οκτώ φάρμακα που έχουν εγκριθεί για χρήση σε ανθρώπους, αξιολογήθηκαν έναντι αντιγραφής XMRV

in vitro

. Βρήκαμε ότι ο ρετροϊικός αναστολέας ενσωματάσης, raltegravir, ήταν ισχυρός και εκλεκτικός έναντι XMRV σε υπομικρογραμμομοριακές συγκεντρώσεις, σε MCF-7 και κύτταρα LNCaP, καρκίνο μαστού και του προστάτη καρκινική κυτταρική γραμμή, αντίστοιχα. Ένας άλλος αναστολέας της ιντεγκράσης, L-000870812, και δύο νουκλεοσιδικούς αναστολείς της ανάστροφης μεταγραφάσης, ζιδοβουδίνη (ZDV), και το tenofovir disoproxil fumarate (TDF) ανέστειλαν επίσης την αντιγραφή XMRV. Όταν συνδυάζονται, αυτά τα φάρμακα που εμφανίζεται κυρίως συνεργική δράση κατά του ιού, γεγονός που υποδηλώνει ότι η συνδυαστική θεραπεία μπορεί να καθυστερήσει ή να εμποδίσει την επιλογή των ανθεκτικών ιών.

Συμπεράσματα

Αν XMRV αποδεικνύεται ότι είναι ένας αιτιώδης παράγοντας σε προστάτη καρκίνο ή CFS, αυτές οι ανακαλύψεις μπορεί να επιτρέψει για ορθολογικό σχεδιασμό των κλινικών δοκιμών

Παράθεση:. Singh IR, Gorzynski JE, Drobysheva D, Bassit L, Schinazi RF (2010) ραλτεγκραβίρη είναι ένας ισχυρός αναστολέας της XMRV, ένας ιός Εμπλεκόμενος στην Καρκίνος του προστάτη και το σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. PLoS ONE 5 (4): e9948. doi: 10.1371 /journal.pone.0009948

Επιμέλεια: Peter Sommer, Institut Pasteur Κορέα, Δημοκρατία της Κορέας

Ελήφθη: 18 Φεβ 2010? Αποδεκτές: 11 Μάρ 2010? Δημοσιεύθηκε: 1, Απριλίου του 2010

Copyright: © 2010 Singh et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίζεται εν μέρει από NIH επιχορήγησης 2P30-AI-50409 (CFAR να RFS), και από το τμήμα Υποθέσεων Βετεράνων (RFS). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. RFS είναι ιδρυτής και μεγαλομέτοχος της RFS Pharma, LLC που αναπτύσσεται Amdoxovir κλινικά και αυτός εισπράττει δικαιώματα από τις πωλήσεις του 3TC. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών.

Εισαγωγή

Xenotropic λευχαιμία που σχετίζονται με ρετροϊό ποντικού (XMRV) είναι ένα πρόσφατα ανακαλύφθηκε μολυσματικό παράγοντα [1 ] που έχει συνδεθεί με τον καρκίνο του προστάτη του ανθρώπου [2] και το σύνδρομο χρόνιας κόπωσης (CFS) [3]. Και οι δύο ασθένειες επηρεάζουν ένα μεγάλο μέρος του παγκόσμιου πληθυσμού, με καρκίνο του προστάτη που επηρεάζει έναν στους έξι άνδρες, και CFS επηρεάζει κατ ‘εκτίμηση 0,4 έως 1% του πληθυσμού [4], [5]. XMRV νουκλεϊκό οξύ ή πρωτεΐνες βρίσκονται σε 27% των καρκίνων του προστάτη και σε 68% των ασθενών σύνδρομο χρόνιας κόπωσης, και σε λιγότερο από 4-6% των φυσιολογικών μαρτύρων, υποδεικνύοντας τη σύνδεση μεταξύ του ιού και της ανθρώπινης νόσου [2], [3 ].

CFS, μια ασθένεια που χαρακτηρίζεται από σοβαρή εξουθενωτική κόπωση, είχε ένα αβέβαιο αιτιολογία δεδομένου ότι η αναγνώριση της. Ενώ έχουν προταθεί μία σειρά ιικών παραγόντων και περιβαλλοντικές τοξίνες να συνδέεται με CFS, καμία σαφής ένδειξη για αυτές έχει ποτέ παρουσιαστεί (που επισκοπείται στο [6]). Η πρόσφατη σύνδεση των XMRV με CFS από το Ινστιτούτο Peterson Whittemore στο Ρίνο, Νεβάδα, ενώ μακριά από το να αποδειχθεί αιτιώδης, είναι το ισχυρότερο ιογενή ένωση που πρέπει να γίνουν ακόμα. Τρεις πρόσφατες εκθέσεις, χρησιμοποιώντας το πλασμίδιο DNA ως θετικοί έλεγχοι, δεν βρήκε XMRV σε ασθενείς CFS στην Ευρώπη [7] [8] [9]. Ο επιπολασμός της XMRV στον καρκίνο του προστάτη στην Ευρώπη είναι αβέβαιο, με μία γερμανική ομάδα ανέφερε την παρουσία XMRV σε ανθρώπινο προστάτη [10], και το άλλο δεν ανιχνεύει κανένα [11]. Ωστόσο, η ιδέα ότι ένας ρετροϊός μπορεί να εμπλέκεται τόσο τον καρκίνο και neuroimmune ασθένεια στον άνθρωπο δεν είναι χωρίς προηγούμενο. Ανθρώπινα Τ-κυττάρων λεμφοτροφικός ιός, τύπου 1 (HTLV-1), ένα άλλο ρετροϊό, προκαλεί και λέμφωμα Τ-κυττάρων /λευχαιμίας, καθώς και τροπική σπαστική παραπάρεση, μια μυελοπάθεια λόγω ανοσολογική ελαττώματα που προκύπτουν από την ιογενή λοίμωξη.

Infectious XMRV έχει απομονωθεί από ορούς ασθενών CFS [3]. Η παρουσία των κυκλοφορούντων μολυσματικών σωματιδίων ρετροϊού στο αίμα επικαλείται ένα σενάριο δεν είναι σε αντίθεση με μια άλλη λοίμωξη ρετροϊό, τον ιό της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας τύπου 1 (HIV-1). Δεδομένου ότι δεν υπάρχει αποτελεσματική θεραπεία για αυτό το βαθύτατα εξουθενωτική ασθένεια, η χρήση των αντιρετροϊκών παραγόντων που έχουν αποδειχθεί ότι είναι αρκετά ασφαλές για ανθρώπινη χρήση, μπορεί να είναι επωφελής. Η ανακάλυψη αποτελεσματικών αντιρετροϊκών παραγόντων κατά XMRV θα επιτρέψει την ορθολογικό σχεδιασμό των κλινικών δοκιμών για την πρόληψη της εξέλιξης του καρκίνου του προστάτη ή για τη θεραπεία της CFS.

Στην παρούσα μελέτη, αναφέρουμε την επίδραση των 45 ενώσεων επί της αντιγραφής XMRV σε MCF- 7 και LNCaP κύτταρα, κυτταρικές γραμμές που δημιουργούνται από ανθρώπινους καρκίνους του μαστού και του προστάτη, αντίστοιχα. Μελετήσαμε τα φάρμακα που χρησιμοποιούνται στη θεραπεία των μολύνσεων HIV-1, καθώς επίσης και ενώσεις που χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία άλλων ιογενών λοιμώξεων σε ανθρώπους. XMRV είναι ένα gammaretrovirus, συνδέονται στενά με τους ιούς της λευχαιμίας των ποντικών (MLV) [1]. Στο επίπεδο των αμινοξέων, που μοιράζεται σημαντική ταυτότητα με αλληλουχίες του ιού Moloney λευχαιμίας ποντικού (MoMLV), ένα πρωτότυπο MLV. Η μέγιστη ομοιότητα μεταξύ XMRV και πρωτεϊνών MoMLV βρίσκεται στις αλληλουχίες για ιικής πρωτεάσης (96% ταυτότητα), και το λιγότερο ομοιότητα μεταξύ των δύο πρωτεϊνών περιβλήματος (66% ταυτότητα) [1]. Δυστυχώς, δεν είναι πολλοί ενεργά χρησιμοποιούνται αντιρετροϊικούς παράγοντες έχουν δοκιμαστεί για δραστικότητα έναντι MLV, με την εξαίρεση του ZDV, η οποία καταστέλλει αποτελεσματικά MLV [12], και αποδείχθηκε πρόσφατα ότι είναι αποτελεσματικό ενάντια XMRV καθώς [13]. Σε αντίθεση, ενώ υπάρχει πολλές πληροφορίες σχετικά με αντι-ιική δράση έναντι απαραίτητες πρωτεΐνες HIV-1, υπάρχει πολύ μικρή ομοιότητα μεταξύ των πρωτεϊνών του HIV-1 και XMRV, με τις πρωτεάσες (PR) των δύο ιών που μοιράζονται 28% ταυτότητα στο αμινο επίπεδο οξύ, οι αντίστροφης μεταγραφάσης πρωτεΐνες (RT) που μοιράζονται το 17% και οι πρωτεΐνες ιντεγκράσης (IN) μοιράζονται μόνο 14% ταυτότητα. Αυτή η χαμηλή ομοιότητα αλληλουχίας καθιστά δύσκολο να προβλεφθεί ποια, εάν υπάρχει, από τις αντιρετροϊικούς παράγοντες που είναι αποτελεσματικοί έναντι του HIV-1 θα είναι αποτελεσματικό ενάντια XMRV. Εμείς επιλέξαμε αρκετά φάρμακα από κάθε κύρια κατηγορία αντιρετροϊκών παραγόντων: νουκλεοσιδικούς και μη νουκλεοσιδικούς αναστολείς RT (NRTIs και NNRTIs), στους αναστολείς, και αναστολείς PR (PI). Οι πρωτεΐνες φακέλου του XMRV και HIV-1 είναι πολύ διαφορετικές σε μέγεθος (70 kD και 160 kD αντιστοίχως), χρησιμοποιούν διαφορετικούς υποδοχείς για την είσοδο του ιού και δεν μοιράζονται καμία σημαντική ομοιότητα. Ως εκ τούτου, πεπτιδομιμητικά που δρουν επί της πρωτεΐνης περιβλήματος του HIV-1 για την πρόληψη της ιικής εισόδου δεν συμπεριελήφθησαν στη μελέτη μας. Λίγα αναστολείς που είναι γνωστό ότι αναστέλλουν την αντιγραφή των ιών άλλων από τους ρετροϊούς αξιολογήθηκαν επίσης. Ένας σημαντικός αριθμός ενώσεων εξετάστηκαν στη μελέτη μας, δηλαδή. 28 από 45 συνολικά, είναι ήδη εγκεκριμένη από την FDA για τη θεραπεία της λοίμωξης με HIV-1 ή άλλους ιούς. Αναφέρουμε εδώ για πρώτη φορά ότι ο αναστολέας ενσωματάσης, ραλτεγκραβίρη (RAL), είναι εξαιρετικά ισχυροί και εκλεκτικοί έναντι XMRV, όταν χρησιμοποιούνται σε χαμηλές συγκεντρώσεις υπομικρογραμμομοριακές στα δύο συστήματα καλλιέργειας κυττάρων. Άλλο σε αναστολέα, L-000870812, και δύο NRTIs, ZDV και tenofovir disoproxil fumarate (TDF), αναστέλλουν επίσης την αντιγραφή XMRV, αλλά σε υψηλότερες συγκεντρώσεις. Όταν συνδυάζονται, οι ενώσεις αυτές εμφανίζουν συνεργιστική δράση, προτείνοντας συνδυασμένη τρόπους για τη θεραπεία της λοίμωξης XMRV, έτσι καθυστερώντας ή εμποδίζοντας την επιλογή των ανθεκτικών ιών.

Αποτελέσματα

Δοκιμάσαμε ένα σύνολο 45 ενώσεων που ανήκουν σε διαφορετικές κατηγορίες αναστολέων HIV-1, και μερικές αναστολείς ιών άλλων από τους ρετροϊούς, για την ικανότητά τους να αναστέλλουν την αντιγραφή XMRV σε καλλιεργημένα κύτταρα. LNCaP και MCF-7 κύτταρα επιλέχθηκαν για την ικανότητά τους να υποστηρίζουν ισχυρά

in vitro

αντιγραφή του XMRV. Τα κύτταρα MCF-7, λόγω των καλύτερων ιδιοτήτων τους ανάπτυξη σε καλλιέργεια αρχικά χρησιμοποιηθεί για τη δοκιμή όλων των 45 ενώσεις (Σχήμα 1). Ενώσεις με δραστικότητα αντι-XMRV ακολούθως δοκιμάστηκαν σε αμφότερα LNCaP και MCF-7 κύτταρα (Πίνακας S1). Για να προσδιοριστεί εάν η μείωση του ιικού απελευθέρωσης μπορεί να οφείλεται στην τοξικότητα της ένωσης και δεν οφείλεται σε ειδική αντιρετροϊκή δραστικότητα, κυτταρική μορφολογία παρακολουθήθηκε κάθε 24 ώρες με μικροσκοπική εξέταση, και ένας ΜΤΤ [3- (4,5-διμεθυλθειαζολ-2- υλ) -2,5-διφαινυλοτετραζόλιο] χρωματομετρική δοκιμασία χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί το δυναμικό κυτταροτοξικότητας που παράγονται από τις ενώσεις. Τα υπερκείμενα συλλέχθηκαν κάθε 24 ώρες και αναλύθηκαν για ιική απελευθέρωση με μέτρηση της δραστικότητας RT. Η αναστολή της δραστικότητας RT (βλέπε Σχήμα 2) κατά μέσο όρο σε 3-6 πειράματα, κάθε πραγματοποιήθηκαν εις διπλούν, και χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό της διάμεσης (ΕΚ

50) και 90% αποτελεσματικές συγκεντρώσεις (ΕΚ

90) για κάθε ένωση (Φιγούρα 1). Για σκοπούς σύγκρισης, όλες οι ενώσεις αξιολογήθηκαν στις μελέτες αυτές εξετάστηκαν επίσης έναντι του HIV-1

LAI σε πρωτογενή ανθρώπινα λεμφοκύτταρα.

Όλες οι ενώσεις αξιολογήθηκαν εις διπλούν τουλάχιστον τρεις φορές. Οι τιμές που παρουσιάζονται είναι μέσος όρος των επαναληπτικών δοκιμασιών. * (4

S

) -8-χλωρο-4-μεθυλ-5- (3-μεθυλβουτ-2-ενυλ) -3,4,5,6-τετραϋδρο-1 Η- [1], [3 ] διαζεπινο [4,5,6-cd] ινδολο-2 (2Ah) -θειόνη.

Η

Οι αναστολείς της HIV-1 αντίστροφης μεταγραφάσης

Οι ακόλουθοι αναστολείς NRTI του HIV-1 RT δοκιμάστηκαν σε προσδιορισμούς αντιγραφής XMRV μας: ZDV, 3′-αζιδο-3′-δεοξυαδενοσίνη (ΑΖΑ), 3′-αζιδο-3′-δεοξυγουανοσίνης (AZG), 3′-αζιδο-3′-δεοξυ-5-μεθυλο -κυτιδίνη (CS-92), λαμιβουδίνη (3TC), εμτρισιταβίνη [(-) – FTC], τενοφοβίρη (TNV) και μορφή προφαρμάκου του TDF, 9- (β-D-1,3-διοξολαν-4-υλ) γουανίνη (DXG) και η μορφή προφαρμάκου της, amdoxovir (DAPD, AMDX), (-) – carbovir (CBV), σταβουδίνη (d4T) και το αντίστοιχο της ανάλογο κυτοσίνης του (D4C), Videx (ddI), ζαλσιταβίνη (ddC), και 3 ‘ -φθορο-3’-δεοξυθυμιδίνη (FLT). Δοκιμάσαμε επίσης το efavirenz NNRTIs, και ένα παράγωγο ΤΙΒΟ που φάνηκε να είναι αποτελεσματική σε ένα σύστημα ποντικού [14]. Μεταξύ αυτών, οι πλέον ισχυροί αναστολείς XMRV ήταν ZDV και TDF (Σχήμα 2, Α, Β). Το ΕΚ

50 και ΕΚ

90 στα κύτταρα MCF-7 ήταν 0,11 μΜ και 7.3 μΜ για ZDV, και 0,24 μΜ και 15.3 μΜ για TDF αντίστοιχα (βλέπε Εικόνα 1). Η ΕΚ

50 και ΕΚ

90 τιμές προσδιορίστηκαν επίσης σε κύτταρα LNCaP, μία κυτταρική σειρά καρκίνου του προστάτη, και υπήρχε μια συνεπής διαφορά μέχρι 5 φορές μεταξύ των δύο κυτταρικές σειρές, η οποία μπορεί να σχετίζεται με διαφορετικές τους ποσοστά πρόσληψης νουκλεοσιδίου και βιομετατροπή στο δραστικό ανάλογο νουκλεοζίτη τριφωσφορική. Το ΕΚ

50 και ΕΚ

90 στα κύτταρα LNCaP ήταν 0,14 μΜ και 1,1 μΜ για ZDV, και 0,9 μΜ και 4,2 μΜ για TDF, αντίστοιχα. CBV, ΑΖΑ, FLT και D4T όλα έδειξαν μεγαλύτερη από 70% αναστολή της αντιγραφής του XMRV (βλέπε πίνακα S1), αλλά στο πολύ υψηλότερη συγκέντρωση των 100 μΜ. AZG, CS-92, (-) – FTC, 3TC, ddI, DAPD και DXG ήταν ουσιαστικά ανενεργός στα 100 μΜ (Εικόνα 1). TFV ήταν επίσης αναποτελεσματικά κατά XMRV, πιθανώς λόγω της πολικής φύσης του, η οποία δεν μπορεί να επιτρέψει αρκετό φάρμακο να διεισδύσει στα κύτταρα. Η εφαβιρένζη NNRTIs (EFV) και το παράγωγο ΤΙΒΟ, δεν έδειξε καμία σημαντική δραστηριότητα ενάντια XMRV.

Viral απελευθέρωση από τα κύτταρα LNCaP XMRV μολυσμένα με την παρουσία αυξημένων συγκεντρώσεων (Α) ZDV (Β) TDF ( C) RAL και (D) L-000870812, προσδιορίστηκε με μέτρηση της δραστικότητας ΚΤ στα υπερκείμενα. Η εκατοστιαία αναστολή υπολογίστηκε με βάση τα μολυσμένα κύτταρα που εκτίθενται σε DMSO μόνο ρυθμίστηκε σε 0% αναστολή, και αφελείς κυττάρων απουσία οποιωνδήποτε ενώσεων ορίζεται σε 100% αναστολή. Η βιωσιμότητα των κυττάρων ελέγχθηκε με μικροσκόπιο, ποσοτικά με τη δοκιμασία ΜΤΤ, και εκπροσωπείται από σκιασμένες στήλες. Τα δεδομένα για κάθε ένωση που προέρχεται από ένα μέσο όρο τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα, κάθε εκτελέστηκαν εις διπλούν.

Η

αναστολείς του HIV-1 ενσωματάση

αναστολείς ραλτεγκραβίρη (RAL ή MK- 0518) και L-000870812 [15] επίσης αξιολογήθηκαν για την ικανότητά τους να αναστέλλουν XMRV στα δύο κυτταρικά συστήματα (Σχήμα 1, Σχήμα 2 Γ και Δ). Από όλες τις ενώσεις που εξετάστηκαν, RAL ήταν η πιο ισχυρή, με μια ΕΚ

50 από 0.005 μΜ και μία ΕΚ

90 από 3,5 μΜ σε κύτταρα MCF-7, και ενός ΕΚ

50 0,03 μΜ και μια ΕΚ

90 0,46 μΜ σε κύτταρα LNCaP (Πίνακας S1). L-000870812, έδειξε δραστικότητα έναντι αντιγραφής XMRV σε σημαντικά υψηλότερες συγκεντρώσεις, με μια ΕΚ

50 και ΕΚ

90 0,16 μΜ και 26,9 μΜ σε κύτταρα MCF-7, και 0,7 μΜ και 4,5 μΜ σε κύτταρα LNCaP, αντίστοιχα .

οι αναστολείς της HIV-1 πρωτεάσης

Εννέα γνωστό PIs HIV-1 αξιολογήθηκαν για δραστικότητα έναντι XMRV (Σχήμα 1). Η πιο αποτελεσματική ήταν η νελφιναβίρη, παρότι με ΕΚ

50 34,3 μΜ. Η ακόλουθη PIs είχε πολύ μέτρια δραστηριότητες αντι-XMRV: αταζαναβίρη (ΕΚ

50 64,8 μΜ), amprenavir (ΕΚ

50 68.0 μΜ), το lopinavir (ΕΚ

50 72,2 μΜ), και ritonavir ( ΕΚ

50 76,4 μΜ). Δαρουναβίρη, ινδιναβίρη, σακουιναβίρη και το tipranavir ήταν ουσιαστικά αναποτελεσματική ενάντια XMRV

in vitro

, όταν δοκιμάζεται μέχρι 100 μΜ.

Αναστολείς των ιών εκτός του HIV-1

Μια επιλογή αριθμός των αντιιικών παραγόντων είναι γνωστό ότι αναστέλλουν ιούς, εκτός από τους ρετροϊούς αξιολογήθηκαν επίσης. Αυτά περιελάμβαναν την αντιερπικά ακυκλοβίρη φάρμακα (ACV), ganciclovir (GCV), βιδαραβίνη (ara-A), 5-ιωδο-2′-δεοξυουριδίνη (IdUrd), πενσικλοβίρη (PCV), foscarnet (PFA), Vistide (HPMPC) ? τα φάρμακα κατά της ηπατίτιδας entecavir (ETV), το telbivudine (LDT), και ριμπαβιρίνη (RBV). ETV επιλέχτηκε επίσης επειδή ήταν πρόσφατα αναφερθεί ότι αναστέλλουν την αντιγραφή του HIV-1, τόσο

in vitro

και σε ανθρώπους [16]. Άλλες ενώσεις αξιώνονται ότι είναι αποτελεσματικές ενάντια XMRV, MLV, HIV-1 και άλλων ιών, όπως η χλωροκίνη [17], δεϋδροεπιανδροστερόνη (DHEA) [18], το κυανούν του μεθυλενίου και ασπιρίνη επίσης αξιολογήθηκαν για αντι-XMRV

in vitro

. Μεθυλενίου μπλε είναι γνωστό ότι έχει αντί-ερπητική δραστηριότητα και επίσης μπορούν να αδρανοποιήσουν HIV-1 [19]. Δυστυχώς, οι περισσότερες από τις ενώσεις που αναφέρονται ανωτέρω, εκτός του IdUrd ήταν αναποτελεσματικά κατά XMRV, ή ήταν αποτελεσματικές σε τοξικά συγκεντρώσεις (Σχήμα 1). IdUrd επέδειξε χαμηλό θεραπευτικό δείκτη (ΤΙ, η αναλογία του CC

50 /ΕΚ

50) και δεν μπορεί να θεωρηθεί ως μια ειδική αντιϊικό παράγοντα έναντι XMRV.

συνδυασμένες επιδράσεις των δραστικών ενώσεων επί της αντιγραφής XMRV

Binary συνδυασμούς των πιο ισχυρών ενώσεων, δηλ. RAL, L-000870812, TDF και ZDV ελέγχθηκαν για δραστικότητα έναντι XMRV σε κύτταρα LNCaP. Οι ενώσεις δοκιμάστηκαν σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις, σε τρία διαφορετικά σύνολα, με την αναλογία των δύο ενώσεων διατηρείται σταθερή. Τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση της μεθόδου CalcuSyn που αρχικά περιγράφηκε από τους Chou και Talalay [20]. Μια σύνοψη των αποτελεσμάτων για όλους τους συνδυασμούς αξιολογήθηκε σε κύτταρα LNCaP παρουσιάζεται στο Σχήμα 3.

Συνδυασμός Δείκτης (CI) τιμές προσδιορίστηκαν για μια αμοιβαία αποκλειστική αλληλεπίδραση με τη χρήση του προγράμματος CalcuSyn, όπου CI & lt? Υποδεικνύει 1 συνέργεια, CI = 1 δείχνει προσθετική δράση, και CI & gt? 1 δείχνει ανταγωνισμό. Σταθμισμένη μέση τιμή CI (CI

κβ) ορίστηκε ως [CI

50 + 2CI

75 + 3CI

90 + 4CI

95] /10. RAL, ραλτεγκραβίρη? TDF, το tenofovir disoproxil fumarate? . ZDV, ζιδοβουδίνη

Η

Για τους συνδυασμούς που δοκιμάστηκαν (RAL με TDF ή ZDV ή L-000870812? ΦΝΘ με ZDV ή L-000870812? L-000870812 με ZDV), ένα πρόσθετο ή ως επί το πλείστον συνεργιστική αλληλεπίδραση ήταν Σημειώνεται σε όλα τα επίπεδα αποτέλεσμα χωρίς εμφανή κυτταροτοξικότητα στις υψηλότερες συγκεντρώσεις που χρησιμοποιούνται. Στην υπολογιστική ανάλυση είτε για ένα από τα τέσσερα φάρμακα (RAL, TDF, L-000870812, ή ZDV), ο γραμμικός συντελεστής συσχέτισης (

τιμές r

) του οικοπέδου μέσου-αποτελέσματος ή για συνδυασμούς σταθερή αναλογία τους κυμαίνονταν από 0,92 να 0,99 (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται), που ταιριάζουν το νόμο της μάζας-δράσης. Η

in vitro

αποτέλεσμα του συνδυασμού του RAL είτε με TDF ή ZDV, έδειξε μία επιθυμητή μείωση της δόσης σε όλες τις αναλογίες. Επιπλέον, όλοι οι Δείκτης (CI) τιμές συνδυασμών (βλέπε Υλικά και Μέθοδοι) ήταν λιγότερο από 1, γεγονός που υποδηλώνει συνέργεια όταν οι αναλογίες συνδυασμός είτε TDF ή ZDV και RAL αναλύθηκαν (Σχήμα 3). Επιπλέον, η διπλή συνδυασμοί είτε ZDV και L-000870812 ή TDF δοκιμάστηκαν επίσης. Οι σταθμισμένες CI (CI

κβ) τιμές από 0,1 έως 0,5 για TDF + ZDV, που υποδεικνύεται συνεργιστικά αποτελέσματα σε όλες τις αναλογίες που δοκιμάστηκαν (Σχήμα 3). Επιπλέον, η διπλή συνδυασμός L-000870812 και ZDV σε αναλογία 1:02 έδειξε μία σχεδόν αθροιστική δράση (CI

κβ 1,0)? ωστόσο σε αναλογία 1:0.4, η τιμή CI ήταν 0,3, υποδεικνύοντας συνεργισμό (Σχήμα 3). Σημασία ήταν ότι όλοι τους διπλούς συνδυασμούς που περιέχουν RAL, το πιο ισχυρό αντι-ιικό παράγοντα ενάντια XMRV, έδειξε αξιοσημείωτη συνέργεια σε όλα τα επίπεδα αποτέλεσμα χωρίς εμφανή κυτταροτοξικότητα. Είναι ενδιαφέρον ότι, ο συνδυασμός των δύο σε αναστολείς δεν ήταν ανταγωνιστικός ή πρόσθετο, αλλά βρέθηκε να είναι συνεργιστική, προτείνοντας ότι αυτές οι δύο ενώσεις μπορεί να έχουν διαφορετικές αντι-ιική μηχανισμούς (βλέπε συζήτηση).

Συζήτηση

σε περίπτωση απουσίας ενός σαφούς αιτιολογίας, η θεραπεία της CFS ήταν τόσο εμπειρική και αντισυμβατικό. Θεραπείες έχουν συμπεριλάβει ανοσοδιεγερτικό θεραπεία μέσω ενέσεων τοξοειδούς σταφυλόκοκκου [21], η ενδοφλέβια θεραπεία ανοσοσφαιρίνη [22] [23], [24], και υδροκορτιζόνη [25] το καθένα με άνισα αποτελέσματα. Η ιντερφερόνη-β και οι αναστολείς ΤΝΡ-α έχουν δοκιμαστεί σε πολύ μικρό αριθμό ασθενών. Αντικαταθλιπτικά, μη στεροειδή αντιφλεγμονώδη φάρμακα, αγχολυτικά φάρμακα, διεγερτικά, αντιαλλεργικό φάρμακα και αντι-υποτασικά φάρμακα έχουν χρησιμοποιηθεί, αλλά δεν είναι καθολικά ευεργετική [26]. Η έλλειψη αποτελεσματικής θεραπείας έχει οδηγήσει στη χρήση των φυτικών εκχυλισμάτων [27], η ομοιοπαθητική [28], [29], η ύπνωση [30], ο βελονισμός [31], και ολόκληρο το σώμα του στρες περιοδική επιτάχυνσης [32], κανένας με διαρκή οφέλη. Οι μόνοι τρόποι θεραπείας που έχετε οποιαδήποτε αποδεδειγμένα οφέλη είναι γνωστική συμπεριφορική θεραπεία προγράμματα και βαθμολογούνται άσκηση, δύο εκ των οποίων φαίνεται να βοηθήσουν με τη βελτίωση της αντιμετώπισης των δεξιοτήτων και όχι στη μείωση των συμπτωμάτων [33]. Εάν, XMRV αποδεικνύεται ότι έχουν αιτιολογική συσχέτιση με την ανθρώπινη νόσο, τότε η γνώση ότι ορισμένα αντιρετροϊκών παραγόντων αναστέλλουν XMRV σε υπομικρομοριακή συγκεντρώσεις

in vitro

, και να έχουν συνεργικά αποτελέσματα όταν συνδυάζεται, όπως φαίνεται σε αυτή τη μελέτη, θα μπορούσε να οδηγήσει σε κλινικές δοκιμές. Βρήκαμε ότι RAL, L-000870812, ZDV, και TDF αναστέλλουν ισχυρά XMRV σε κυτταρική καλλιέργεια, με RAL είναι η πιο ισχυρή, σε ΕΚ

50 0,005 μΜ, και άλλοι όπως η L-000870812 (ΕΚ

50 = 0,16 μΜ), ZDV (ΕΚ

50 = 0.11 μΜ) και TDF (ΕΚ

50 = 0.24 μΜ) είναι αρκετά αποτελεσματική, καθώς και. Επιπλέον, αυτές οι ενώσεις είχαν υψηλούς θεραπευτικούς δείκτες, με τιμές για ZDV = 591? ΦΝΘ = 218? RAL = 18.460 και L-000870812 = 378, υποδεικνύοντας ότι πρέπει να είναι δυνατό να επιτευχθεί θεραπευτικό επίπεδο αντι-ιικής με ελάχιστη τοξικότητα.

Πολλές ενώσεις που αξιολογήθηκαν είχαν περιορισμένη επίδραση στην αναπαραγωγή XMRV

in vitro

. Ορισμένες από αυτές τις επιδράσεις μπορεί να εξηγηθεί από τη στιγμή κατανοητό μηχανισμούς. Για παράδειγμα, τόσο 3TC και (-) – FTC χρειάζονται ένα λειτουργικό μοτίβο YMDD σε RT για να είναι ενεργό. Η μετάλλαξη M184V του HIV-1 RT κάνει το ανθεκτικό σε 3TC και τον ιό (-) – FTC [34]. Αυτά τα φάρμακα είναι αναποτελεσματικά κατά MoMLV, διότι σε MoMLV RT, V είναι το φυσικό κατάλοιπο σε αυτήν μοτίβο στη θέση του Μ Ομοίως, V είναι επίσης ο φυσικός κατάλοιπο σε αυτή τη θέση σε XMRV RT, καθιστώντας 3TC και (-) – FTC αναποτελεσματική. Γιατί κανένας από τους PIs HIV-1 ήταν αποτελεσματική ενάντια XMRV (ένα εύρημα που έχει αναφερθεί για την επιλεγμένη PIs πριν από [13]) παραμένει ασαφές αυτή τη στιγμή, αλλά θα μπορούσε να σχετίζεται με το μέγεθος της τσέπης ΡΙ καθώς και άλλες βιοχημικές και διαρθρωτικών παραγόντων.

υπήρχε μια διαφορά στις δραστηριότητες των ενώσεων όταν δοκιμάζονται σε διαφορετικούς τύπους κυττάρων, η οποία μπορεί να σχετίζεται με την πρόσληψη του φαρμάκου από τα κύτταρα, τα διαφορετικά επίπεδα των φυσικών dNTP στα κύτταρα, καθώς και διαφορετικές ενδοκυτταρική φωσφορυλίωση ικανότητας [35]. Σε γενικές γραμμές, η ΕΚ

50 για τις δραστικές ενώσεις που παρατίθενται παραπάνω ήταν χαμηλότερες σε MCF-7 από κύτταρα LNCaP υποδηλώνοντας μεγαλύτερη ισχύ. Σε σχέση με τον HIV-1, οι ενώσεις ήταν γενικά λιγότερο ισχυρές έναντι XMRV από HIV-1, ειδικά στο ΕΚ

90 επίπεδο.

Η χρήση του μονοθεραπεία για τη θεραπεία μολύνσεων με HIV έχει οδηγήσει στην εμφάνιση του φαρμάκου ανθεκτικών στελεχών του ιού [36], [37]. Η διαπίστωση ότι RAL, L-000870812, TDF και ZDV έχουν ισχυρά συνεργικά αποτελέσματα όταν συνδυάζεται σε σχήμα διπλού συνδυασμού αποτελεί καλό οιωνό για τη θεραπεία συνδυασμού σε περίπτωση μόλυνσης XMRV. Αν παραλληλισμούς λοίμωξη XMRV άλλες μολύνσεις ρετροϊών, τότε η χρήση της συνδυασμένης αντιρετροϊκής θεραπείας μπορεί να διατηρήσει την καταστολή XMRV, να αποτρέψει την εμφάνιση της αντοχής σε αντιρετροϊκών παραγόντων και ενδεχομένως επίσης να προκαλέσει βελτίωση της νόσου. Για τον HIV-1, η συνδυασμένη θεραπεία λειτουργεί ιδιαίτερα καλά όταν τα συνδυασμένα φάρμακα έχουν διαφορετικούς στόχους ιική πρωτεΐνη, ή στην περίπτωση των νουκλεοσιδίων, χρησιμοποιούν διαφορετικές κινάσες για την ενεργοποίηση τους σε ανάλογα ΝΤΡ [31]. Εμείς, ως εκ τούτου, με σύνεση επιλεγμένες συνδυασμοί φαρμάκων που αναστέλλουν XMRV, όπως RAL με ZDV ή TDF ή L-000870812. Όταν τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας την ισχυρή μέθοδο των Chou και Talalay, προσθετική ή συνεργιστική αλληλεπιδράσεις βρέθηκαν σε όλα τα επίπεδα αποτέλεσμα όταν αυτοί οι παράγοντες δοκιμάστηκαν σε κύτταρα LNCaP. Σημαντικότητας ότι κανένας ανταγωνισμός σημειώθηκε για οποιονδήποτε από τους συνδυασμούς αξιολογήθηκαν σε αυτά τα κύτταρα. Προς έκπληξή μας, ακόμη και οι δύο στην αναστολείς εμφανίζεται μια συνεργική δράση. Τόσο στην αναστολείς δρουν μέσω της αναστολής της αντίδρασης μεταφοράς κλώνου, αλλά εάν ο μηχανισμός δράσης τους ήταν να είναι πανομοιότυπα, θα εμφανίζουν ένα προσθετικό αποτέλεσμα σε συνδυασμό. Μια συνεργική επίδραση δείχνει ότι μπορεί να υπάρχουν λεπτές μηχανιστική διαφορές στις δράσεις των δύο αυτών ΣΤΟΝ αναστολείς, ένα εύρημα που επιβεβαιώνεται από ανέκδοτες βιοχημικά πειράματα (προσωπική επικοινωνία, Δρ Ντάρια Hazuda, Merck Research Laboratories, West Point, ΡΑ). Είναι σημαντικό να σημειωθεί εδώ, ότι XMRV διαφέρει από HIV-1 σε μία άποψη η οποία είναι σημαντική για τις μελέτες αυτές: XMRV απομονώσεις εμφανίζουν πολύ περιορισμένη ποικιλομορφία αλληλουχίας σε σύγκριση με HIV-1 ή MLV. Από όλα τα αλληλουχία XMRV στελέχη που υπάρχουν σήμερα, τόσο από περιπτώσεις με καρκίνο του προστάτη, καθώς και CFS, που προέρχονται από γεωγραφικά απομακρυσμένες περιοχές των Ηνωμένων Πολιτειών, οι δύο τουλάχιστον σχετίζονται γονιδιώματα διαφέρουν μεταξύ τους σε μόνο 27 από τις συνολικά πάνω από 8.100 νουκλεοτίδια. Ένα παρόμοιο βαθμό περιορίζονται γενετικής ποικιλομορφίας έχει βρεθεί για HTLV-1 [38], ένα άλλο ρετροϊό ενοχοποιηθεί τόσο καρκίνου και neuroimmune ασθένεια. Έχει προταθεί ότι αυτή η έλλειψη ποικιλομορφίας σε ακολουθίες XMRV συνεπάγεται ότι ο αριθμός των κύκλων αναδιπλασιασμού μέσα σε ένα μολυσμένο άτομο είναι περιορισμένη [39]. Αυτό θα σήμαινε ότι XMRV έχει ένα σημαντικά χαμηλότερο δυναμικό για την ανάπτυξη ανθεκτικών στα φάρμακα μεταλλάξεις, σε σύγκριση με HIV-1. Επιπλέον, είναι πιθανό ότι ένας συνδυασμός δύο φαρμάκων μόλις μπορεί να είναι επαρκής για την πρόληψη της εμφάνισης μεταλλαγμένου ιού ανθεκτικών στα φάρμακα, αν και αυτό θα πρέπει να δοκιμάζονται πριν να γίνουν οποιεσδήποτε θεραπευτικές συστάσεις. Έχουμε προσπαθήσει να επιλέξει για ανθεκτικές RAL ιούς στον πολιτισμό για αρκετούς μήνες τώρα, και δεν έχουν ακόμη επιτυχία στην απομόνωση ανθεκτικών στα φάρμακα ιών.

Όταν μια δοκιμασία για τη μέτρηση του ιικού φορτίου XMRV γίνεται διαθέσιμη, τα επίπεδα του ιού στο αίμα θα μπορούσε να γίνει μια αντικειμενική υποκατάστατος δείκτης για την αποτελεσματική απόκριση σε αντι-ιικά φάρμακα, εκτός από κλινικά αποτελέσματα. Αν και δεν είναι ακόμη σαφές εάν τυχόν ασθένειες που προκαλούνται άμεσα από XMRV, τα δεδομένα μας δείχνουν ότι οι λοιμώξεις XMRV θα μπορούσε να προληφθεί ή να θεραπευτεί με ειδικό αντι-ιικών παραγόντων. Με την παρουσία οποιουδήποτε αποδεικτικού στοιχείου της αιτιότητας των ανθρώπινων ασθενειών, τα ευρήματά μας θα πρέπει να παρέχει τη βάση για το σχεδιασμό κλινικών δοκιμών για τη θεραπεία τους.

Υλικά και Μέθοδοι

XMRV, Κύτταρα και μόλυνση με XMRV

293Τ κύτταρα (ATCC, CRL-11268) διαμολύνθηκαν με pXMRV1, ένα μολυσματικό κλώνο του XMRV [2]. Ιός που απελευθερώνεται στο υπερκείμενο συλλέχθηκε και τιτλοδοτήθηκε με εμβολιασμό κυττάρων MCF-7, καρκίνος μαστού κυτταρική γραμμή (ATCC, ΗΤΒ-22) σε 70% συρροή, με μια σειρά από δέκα φορές αραιώσεις XMRV σε μέσο χωρίς ορό, ακολουθούμενο 36-48 ώρες αργότερα με στερέωση των κυττάρων σε παραφορμαλδεΰδη και επεξεργασία για ανοσοφθορισμό χρησιμοποιώντας ένα αντιορό κουνελιού που αναπτύχθηκε έναντι απενεργοποιημένου XMRV [2]. Τυπικά παρασκευάσματα ιού έδωσε τίτλους περίπου 2-5 × 10

6 μολυσματικές μονάδες /ml. Ο ιός αραιώνεται σε μέσο ελεύθερο ορού και χρησιμοποιήθηκαν για τον εμβολιασμό των κυττάρων σε μια πολλαπλότητα μόλυνσης (ΜΟΙ) περίπου 3, με την παρουσία διαφόρων αντι-ιικών ενώσεων, όπως περιγράφεται παρακάτω. LNCaP, μία καρκίνου του προστάτη κυτταρική γραμμή (ATCC, CRL-1740) και κύτταρα MCF-7 αναπτύχθηκαν σε περίπου 50% συρροή σε ϋΜΕΜ που περιέχει 10% θερμοαπενεργοποιημένο βόειο εμβρυϊκό ορό, 100 μg /ml πενικιλλίνη, και 100 IU /ml στρεπτομυκίνη. Τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό Dulbecco (DPBS, Gibco) και επωάζονται με το ιικό εμβόλιο για 90 λεπτά στους 37 ° C υπό την παρουσία 95% αέρα και 5% CO

2, τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με DPBS , ανεξάρτητο με θρυψίνη-ΕϋΤΑ (0,25% θρυψίνη? Cellgro), και μετρήθηκαν. Χίλια κύτταρα προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο μιας πλάκας 96-φρεατίων, μαζί με ένα ίσο όγκο μέσου που περιέχει τον αναστολέα ρετροϊικής κατά 2-φορές την επιθυμητή συγκέντρωση. Οι αναστολείς διαλύθηκαν σε DMSO ή νερό, ανάλογα με τη διαλυτότητά τους, και εξετάστηκαν όλα σε 0,01 έως 100 μΜ σε βήματα 10 φορές. Όπου το φάρμακο βρέθηκε να είναι δραστική κατά 0,01 μΜ, περαιτέρω αραιώσεις από 1 ηΜ έως 0,01 ηΜ ελέγχθηκαν. Κάθε αναστολέας δοκιμάζεται εις διπλούν τουλάχιστον τρεις ξεχωριστές φορές σε κύτταρα MCF-7 σε ένα εντελώς τυφλό τρόπο χρησιμοποιώντας κωδικοποιημένες ενώσεις, και τα αποτελέσματα κατά μέσο όρο. Δραστικές ενώσεις αξιολογήθηκαν επίσης για αντι-ιική δράση σε κύτταρα LNCaP να επιβεβαιώσουν δραστηριότητα σε μία δευτερεύουσα γραμμή κυττάρων είναι γνωστό ότι υποστηρίζουν τον αναδιπλασιασμό XMRV. Για τους ελέγχους, χρησιμοποιήθηκαν φρεάτια που περιέχουν νερό ή DMSO σε κατάλληλες συγκεντρώσεις.

Αναλύσεις για την αντιγραφή κυτταροτοξικότητα και XMRV

Κάθε φρεάτιο παρακολουθούνται προσεκτικά για σημεία της κυτταρικής τοξικότητας που οφείλεται στους αναστολείς με μικροσκοπική παρατήρηση κάθε 24 h. Επιπλέον, η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τον προσδιορισμό πολλαπλασιασμού One Solution κύτταρο CellTiter 96 Υδατικά σύμφωνα με τον κατασκευαστή (Promega, Madison, Wis). Viral απελευθέρωση από τα κύτταρα προσδιορίστηκε με μέτρηση της δραστικότητας RT στο υπερκείμενο. Για το σκοπό αυτό, το υπερκείμενο από κάθε φρεάτιο συλλέχθηκε κάθε 24 ώρες και καταψύχθηκαν στους -20 ° C έως ότου αναλύθηκε με προσδιορισμό RT για ιική απελευθέρωση όπως περιγράφηκε προηγουμένως [40]. Εν συντομία, ολιγο (dT) · πολυ (ΓΑ) δοκιμασίες εκκινητή-προτύπου πραγματοποιήθηκαν με την παρουσία ραδιοεπισημασμένου [α-

32Ρ] dTTP και Mn

2+. Μετά από επώαση των ιικών υπερκειμένων με το μείγμα αντίδρασης RT για 1 ώρα στους 37 ° C, τα δείγματα κηλιδώθηκαν πάνω σε χαρτί κυτταρίνης DE81 DEAE (Whatman) και μη ενσωματωμένη επισήμανση έπλυνε με 2 χ SSC (1 χ SSC = 0.15 Μ NaCl και 0.015 Μ νάτριο κιτρικό άλας). Λοιμογόνου παράγοντα που σχετίζεται με RT αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ένα Typhoon 9410 PhosphorImager (GE Healthcare) και ποσοτικά με το λογισμικό J εικόνας (https://rsbweb.nih.gov/ij/). Η αναστολή της ιικής απελευθέρωσης όπως μετράται την ημέρα 6 μετά τον εμβολιασμό ήταν κατά μέσο όρο σε 3-5 πειράματα και απεικονίζονται. Η αντι-ιική ΕΚ

50 και κυτταροτοξικές συγκεντρώσεις (CC

50,) προσδιορίστηκε από την καμπύλη συγκέντρωσης-απόκρισης χρησιμοποιώντας τη μέθοδο μέσου αποτελέσματος [20]. HIV-1 προσδιορισμούς αντιγραφής εκτελέστηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως χρησιμοποιώντας μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMC) ελήφθησαν από την Αμερικανικού Ερυθρού Σταυρού, Atlanta, GA, που διεγέρθηκαν με φυτοαιμοσυγκολλητίνη (ΡΗΑ) επί 72 ώρες [41].

μελέτες συνδυασμού

Για να αξιολογηθεί κατά πόσον τα αντι-ιικά αποτελέσματα της διπλής συνδυασμούς φαρμάκων της: RAL με ΦΝΘ ή ZDV ή L-000870812? ΦΝΘ με ZDV ή L-000870812? L-000870812 με ZDV ήταν συνεργιστική, πρόσθετο ή ανταγωνιστική, συνδυασμοί φαρμάκων σε διάφορες σταθερές αναλογίες αξιολογήθηκαν. RAL, L-000870812, ZDV και TDF για πρώτη φορά δοκιμάστηκε μόνη της να καθορίσει το ΕΚ

50 και ΕΚ

90 τιμές, τουλάχιστον τρεις φορές, κάθε εις διπλούν. Για την ανάλυση μέσου-αποτελέσματος, οι ενώσεις συνδυάστηκαν σε διάφορες αναλογίες βασίζεται σε πολλαπλάσια των ΕΚ

τους 50 ή EC

90 τιμές. Για κάθε φάρμακο (μόνο του ή σε συνδυασμό), τρεις έως τέσσερα ανεξάρτητα πειράματα διεξήχθησαν και όλα τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία εις διπλούν. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό CalcuSyn (Biosoft, Ferguson, ΜΟ, USA) (βλέπε Σχήμα 3 για τις τιμές CI), το οποίο επιτρέπει αυτόματο προσομοίωση του συνεργισμού και ανταγωνισμού σε όλα τα επίπεδα δόσης και επίδρασης και εμφανίζει τις μεθόδους των Chou και Talalay [20] , συμπεριλαμβανομένων μεσαίο οικόπεδο αποτέλεσμα και τιμές CI. Επειδή οι υψηλές επιπτώσεις βαθμό είναι πιο θεραπευτικά συναφή από τον χαμηλό βαθμό των επιπτώσεων, η πρόσθετη σταθμισμένος μέσος όρος CI (CI

κβ) υπολογίστηκε, η οποία χρησιμοποιεί τον τύπο: CI

κβ = [CI

50 + 2CI

75 + 3CI

90 + 4CI

95] /10, όπου CI

50, CI

75, CI

90, CI

95 είναι οι τιμές CI σε 50 %, 75%, 90% και 95% αναστολή, αντίστοιχα. [20], [42].

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

EC50, EC90 και CC50 αξίες των ενώσεων δραστικές έναντι XMRV σε κύτταρα MCF-7, όπως δοκιμάστηκε στα κύτταρα LNCaP XMRV μολυσμένα. Ενώσεις που βρέθηκαν να έχουν σημαντική δράση στα κύτταρα MCF-7 ελέγχθηκαν σε κύτταρα LNCaP για δραστηριότητα. Όλες οι ενώσεις εκτιμήθηκαν εις διπλούν τουλάχιστον τρεις φορές. Οι τιμές που παρουσιάζονται είναι μέσος όρος των επαναληπτικών δοκιμασιών. Αντίστοιχες τιμές σε MCF-7 κύτταρα εμφανίζονται για σύγκριση

doi:. 10.1371 /journal.pone.0009948.s001

(0,11 MB ΔΕΘ)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Mervi Detorio και Melissa Johns για την εξαιρετική τεχνική βοήθεια τους, και ο Daniel Κόε και Robert Schlaberg για τη βοήθειά τους με προκαταρκτικά πειράματα.