Αφηρημένο

Έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν ότι η έκφραση MUC4 είναι κακό προγνωστικό παράγοντα σε διάφορα καρκινώματα. προηγούμενη μελέτη μας έδειξε επίσης ότι η έκφραση MUC 1 σε γαστρικών καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων των νωρίς και προχωρημένα στάδια είναι μια φτωχή προγνωστικός παράγοντας. Στην παρούσα μελέτη, τα προφίλ έκφρασης του MUC4 και MUC1 εξετάστηκαν με ανοσοϊστοχημεία (IHC) χρησιμοποιώντας δύο αντι-MUC4 μονοκλωνικά αντισώματα (MAbs), 8G7 και 1G8, και αντι-MUC 1 MAb DF3 σε 104 γαστρεκτομή δείγματα πρώιμης αδενοκαρκίνωμα στομάχου με υποβλεννογόνια εισβολή (pT1b2), συμπεριλαμβανομένων των 197 ιστολογικές υποτύπου αλλοιώσεις. Πριν από την μελέτη των IHC ανθρώπινα δείγματα, αξιολογήσαμε την εξειδίκευση των δύο MAbs με κηλίδωση Western και IHC δύο MUC4 mRNA που εκφράζει κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου. MAb 8G7 αντέδρασαν σαφώς, ενώ MAb 1G8 δεν παρουσίασαν καμία αντιδραστικότητα, σε οποιαδήποτε κηλίδωση Western ή IHC. Στην IHC των γαστρικών καρκίνων, τα ποσοστά έκφρασης MUC4 /8G7 ανιχνεύονται από MAb 8G7, MUC4 /1G8 ανιχνεύονται από MAb 1G8 και MUC1 /DF3 ανιχνεύεται με το MAb DF3 σε καλά διαφοροποιημένα είδη (70%, 38/54? 67%, 36/54? 52%, 28/54) ήταν σημαντικά υψηλότερες από αυτές σε φτωχά διαφοροποιημένα είδη (18%, 10/55? 36%, 20/55? 13%, 7/55) (

P

MAb MUC4 /1G8 αραιωμένο 1:500, 37 ° C, 24 min .; MAb MUC1 /DF3 αραιωμένο 1:50, 37 ° C, 32 min.) σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό ρΗ 7.4 (PBS) με 1% λευκωματίνη βόειου ορού, οι τομές βάφτηκαν με Benchmark XT αυτοματοποιημένη συσκευή κηλιδώσεως slide χρησιμοποιώντας ένα κιτ ανίχνευσης διαμινοβενζιδίνη (DAB ultraView, Ventana Medical Systems). Για λόγους απλότητας, MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 και MUC1 /DF3 χρησιμοποιούνται για να δηλώσουν τα βλεννίνη αντιγόνα ανιχνεύονται από κάθε αντίσωμα.

βαθμολόγηση των αποτελεσμάτων και τη στατιστική ανάλυση.

Τέσσερις τύφλωσε ερευνητές ( YT, MH, MG και SY) αξιολόγησε τα δεδομένα κηλίδωσης ανεξάρτητα. Όταν η αξιολόγηση διέφερε μεταξύ των τεσσάρων, η τελική απόφαση ελήφθη με συναίνεση. Τα αποτελέσματα αξιολογήθηκαν με βάση το ποσοστό των θετικώς χρωματισμένων κυττάρων καρκινώματος, και οι ποσοστιαίες δεδομένα ταξινομήθηκαν σε έξι βαθμούς χρησιμοποιώντας το ακόλουθο σύστημα βαθμολόγησης: αρνητική, κανένα από τα κύτταρα καρκινώματος βάφονται? λιποθυμίας, & lt? 5% των κυττάρων καρκινώματος βάφονται? 1+, ≥5% σε & lt? 25%? 2+, ≥25% στο & lt? 50%? 3+, ≥50% στο & lt? 75%? και 4+: ≥75% χρωματισμένο. Θήκες με ≥5% των καρκινικών κυττάρων βάφονται θεωρήθηκαν θετικά. Η στατιστική ανάλυση έγινε με μη παραμετρικές μεθόδους χρησιμοποιώντας EXCEL Στατιστικά λογισμικό Ver.3 παράγεται από Hisae Yanai, Σχολή Θετικών Επιστημών, Πανεπιστήμιο Saitama (OMS Publishing, Ιαπωνία).

Η επιβίωση των ασθενών συγκρίθηκε μεταξύ της ομάδας με θετικό MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ή MUC1 /DF3 έκφρασης και η ομάδα με αρνητική έκφραση σύμφωνα με τη μέθοδο Kaplan-Meier, και οι διαφορές μεταξύ των καμπυλών επιβίωσης εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Μια πιθανότητα P & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Αξιολόγηση των δύο μονοκλωνικά αντισώματα για MUC4

Για να διερευνηθεί η διαφορά στην εξειδίκευση αντισώματος μεταξύ 8G7 και 1G8, εμείς. διεξάγεται RT-PCR, κηλίδωση Western και ανάλυση IHC χρησιμοποιώντας δύο κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου, SNU-16 και ΝΟΙ-Ν87 κύτταρα. Το mRNA MUC4 ανιχνεύθηκε στα δύο κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου (Εικ. 1Α). Συνεπής με την προηγούμενη έκθεση [14], τα δεδομένα μας έδειξαν ότι 8G7 αναγνωρίζονται μοριακό πρωτεΐνη πολύ υψηλό βάρος (πάνω από 500 kD, το οποίο ήταν το αναμενόμενο μέγεθος της αυτοφυούς MUC4). Αντιθέτως, 1G8 δεν εμφανίζει καμία ανοσοαντιδραστικές ζώνες (Εικ. 1Β). Το ίδιο αποτέλεσμα παρατηρήθηκε στην ανάλυση IHC (Εικ. 1 C).

ανοσοϊστοχημική χρώση γαστρεκτομή Δείγματα

Ανοσοϊστοχημική χρώση των μη νεοπλασματικών γαστρικού βλεννογόνου.

Στο μη -neoplastic βλεννογόνο των περιπτώσεων με καρκίνο του στομάχου, MUC4 /8G7 εκφράστηκε μερικές φορές στο κυτταρόπλασμα των επιφανειακών βλεννωδών επιθηλίου, και συχνά αλλά ασθενώς στο κυτταρόπλασμα του θόλου και πυλωρική αδένες (Σχήμα S1 Α και D). MUC4 /1G8 ήταν συχνά εκφράζεται στο κύτταρο κορυφή και στο κυτταρόπλασμα του βλεννογόνου επιθηλίου επιφάνεια, και συχνά αλλά ασθενώς στο κυτταρόπλασμα του θόλου και πυλωρική αδένες (Σχήμα S1 Β και Ε), και παρατηρήθηκε σταθερά στο αγγειακό ενδοθήλιο. MUC1 /DF3 ήταν μερικές φορές εκφράζεται στο επιθήλιο βλεννογόνους επιφάνεια, και πάντα στα θόλου αδένων (ιδιαίτερα έντονα στην κυτταρική κορυφές), αλλά όχι στα πυλωρικό αδένες (Σχήμα S1 C και F).

Ανοσοϊστοχημική χρώση γαστρικό αδενοκαρκίνωμα.

Εξετάσαμε δείγματα γαστρεκτομή από 104 στις αρχές γαστρικών καρκίνων (pT1b2), δεδομένου ότι θέλησε να αποφύγει τις μεγάλες εκφυλιστικές αλλαγές που παρατηρούνται συχνά σε προχωρημένο καρκινικούς ιστούς, και να ρυθμίσετε το στάδιο για την ακριβή σύγκριση μεταξύ ευρήματα IHC και οι κλινικοπαθολογική παράγοντες.

Όταν περισσότεροι από δύο ιστολογικών τύπων αναμίχθηκαν σε μία βλάβη στα δείγματα γαστρεκτομή 104 νωρίς γαστρικών καρκίνων, κάθε ιστολογική πρότυπο αξιολογήθηκε ανεξάρτητα, σύμφωνα με την JCGC [16]. Ως εκ τούτου, στα δείγματα 104 γαστρεκτομή, θα μπορούσαμε να αξιολογήσουν 197 εστίες καρκίνωμα των διαφόρων ιστολογικών τύπων συνολικά.

Μεταξύ των 197 βλάβες, υπήρχαν 15 βλάβες του θηλώδους αδενοκαρκίνωμα (PAP) (Σχ. 2Α-Δ), 39 από καλά διαφοροποιημένο σωληνοειδούς αδενοκαρκίνωμα (tub1) (Σχ. 2Ε-H), 52 μέτρια διαφοροποιημένο σωληνοειδούς αδενοκαρκίνωμα (tub2) (Σχ. 2I-L), 6 από βλεννώδες καρκίνωμα (MUC) (Σχ. 2Μ-P), 8 του στερεού τύπου φτωχά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα (por1) (Εικ. 2Q-T), 47 μη-στερεού τύπου φτωχά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα (por2) (Σχ. 2U-X) και 30 της καρκίνωμα σφραγίδα δακτύλιο (sig) (Εικ. 2Y-β), με βάση την πλαίσια των κοινών ιστολογική ταξινόμηση του καρκίνου του στομάχου σε JCGC [16]. Σύμφωνα με το πλαίσιο της ταξινόμησης του ΠΟΥ των όγκων του στομάχου [17], καθώς και ότι σε JCGC [16], Παπανικολάου και tub1 ταξινομήθηκαν σε «καλά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα», και por1 και por2 ταξινομήθηκαν σε «ελάχιστα διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα «. Τα δεδομένα του ρυθμού έκφρασης του MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 και MUC1 /DF3 συνοψίζονται στο Σχήμα 3. Η λεπτομερής αριθμός και το ποσοστό των θετικά χρωματισμένο νεοπλασματικών κυττάρων χρησιμοποιώντας το σύστημα βαθμολόγησης συνοψίζονται στον Πίνακα S1.

προφίλ έκφρασης του MUC4 /8G7.

Μεταξύ των 197 αδενοκαρκινώματος βλάβες, MUC4 /8G7 εκφράστηκε σε 83 βλάβες (42%). MUC4 /8G7 παρουσίασαν σημαντικά υψηλότερο ποσοστό της θετικής έκφρασης (≥5% των καρκινικών κυττάρων βάφονται) σε καλά διαφοροποιημένα είδη (pap + tub1: 70%, 38/54) από εκείνο στο ελάχιστα διαφοροποιημένες μορφές (por1 + por2: 18% , 10/55) (

P

& lt? 0.0001) (Σχήμα 3Α, βέλη).. MUC4 /8G7 εκφράστηκε κυρίως στο κυτταρόπλασμα των νεοπλασματικών κυττάρων του ΡΑΡ (Εικ. 2Β), tub1 (Σχ. 2F) και tub2 (Σχ. 2J), στις περιπτώσεις με θετική έκφραση.

προφίλ έκφρασης της MUC4 /1G8.

Μεταξύ των 197 αδενοκαρκίνωμα βλάβες, MUC4 /1G8 εκφράστηκε σε 95 βλάβες (48%). MUC4 /1G8 έδειξε σημαντικά υψηλότερα ποσοστά της θετικής έκφρασης σε καλά διαφοροποιημένα είδη (pap + tub1: 67%, 36/54) από ότι σε ελάχιστα διαφοροποιημένες μορφές (por1 + por2: 36%, 20/55) (

P

= 0.0021) (Σχ. 3Β, βέλη). MUC4 /1G8 εκφράστηκε κυρίως στην κυτταρική κορυφές του ΡΑΡ (Σχ. 2C), tub1 (Σχ. 2G) και tub2 (Εικ. 2K), ή σε ενδοκυτταροπλασματική βλεννίνης ουσία του sig (Σχ. 2α), στις περιπτώσεις με θετική έκφραση.

προφίλ έκφρασης του MUC1 /DF3.

Μεταξύ των 197 αδενοκαρκινώματος βλάβες, MUC1 /DF3 εκφράστηκε σε 62 βλάβες (31%). MUC1 /DF3 έδειξε σημαντικά υψηλότερα ποσοστά της θετικής έκφρασης σε καλά διαφοροποιημένα είδη (pap + tub1: 52%, 28/54) από ότι σε ελάχιστα διαφοροποιημένες μορφές (por1 + por2: 13%, 7/55) (

P

& lt? 0.0001) (Σχήμα 3C, βέλη).. MUC1 /DF3 εκφράστηκε κυρίως στις κυτταρικές κορυφές των Παπανικολάου, tub1 και tub2 (Εικ. 2 λίτρα), στις περιπτώσεις με θετική έκφραση.

Σύγκριση της έκφρασης βλεννίνης σε κάθε ιστολογικό τύπο.

Σε tub1, τα ποσοστά έκφρασης MUC4 /8G7 και MUC4 /1G8 ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη του MUC 1 /DF3 (

P

= 0,0106 και

P

= 0.039, αντίστοιχα) (Σχ. 3, * 1). Σε por2, ο ρυθμός έκφραση του MUC4 /1G8 ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη των MUC4 /8G7 (

P

= 0,0286), ή εκείνη της MUC1 /DF3 (

P

= 0.0005) (Σχ. 3, * 2). Σε sig, ποσοστό έκφραση MUC4 /1G8 ήταν σημαντικά υψηλότερο από εκείνο των MUC4 /8G7 (

P

= 0,0158) ή του MUC 1 /DF3 (SIG,

P

= 0,0019) (Εικ . 3, * 3). Στις άλλες histolgical τύπους (Παπανικολάου, tub2, MUC και por1), δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στα ποσοστά έκφρασης μεταξύ MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 και MUC1 /DF3 (Εικ. 3).

Σχέση μεταξύ MUC4 ή MUC1 έκφρασης και της λέμφου εισβολή σκάφος, εισβολή αιμοφόρων αγγείων και μετάστασης λεμφαδένα.

ποσοτικαί αξιολόγηση του λεμφικού εισβολής (ly), φλεβική εισβολή (v) και το καθεστώς λεμφαδένα μετάσταση (Ν) ορίζεται στην JCGC [16]. Λεμφική εισβολή (ly) αξιολογήθηκε ως εξής? ly0, δεν λεμφική εισβολή? Ι_γ1, ελάχιστη λεμφική εισβολή? Ly2, μέτρια λεμφική εισβολή? και Ly3, σημειώνονται λεμφική εισβολή. Για την φλεβική εισβολή (ν), παρόμοια αξιολόγηση (v0 να V3) έγινε χρησιμοποιώντας ελαστικό χρώσης (Βικτώρια-Μπλε), το οποίο προστέθηκε σε χρώση αιματοξυλίνης-ηωσίνης. Ο συνολικός αριθμός των λεμφαδένων και ο αριθμός των εμπλεκόμενων λεμφαδένων σε κάθε κομβικό σταθμό (Ν) καταγράφηκαν ως εξής? N0, καμία περιφερειακή μετάσταση στους λεμφαδένες? Ν1, μετάσταση σε 1-2 τοπικούς λεμφαδένες? και Ν2, μετάσταση σε 3-6 τοπικούς λεμφαδένες. Περιφερειακή μετάσταση λεμφαδένα παρατηρήθηκε σε 55 ασθενείς (Ν1, 41 περιπτώσεις? Ν2, 14 περιπτώσεις). Δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ των ιστολογικών τύπων και λεμφική εισβολή, φλεβική εισβολή ή την κατάσταση των λεμφαδένων μεταστάσεων.

Σε κάθε περίπτωση, η υψηλότερη βαθμολογία από τους έξι βαθμούς IHC (αρνητικό, εξασθενημένο, 1+, 2+, 3+ ή 4+) στα διάφορα ιστολογικών τύπων μετρήθηκε ως το σκορ IHC σε κάθε άτομο, π.χ. «Βαθμολογία IHC 4+» για μια υπόθεση με την [tub1 βαθμολογία, 3+? tub2 σκορ, 4+]. Αξιολογήσαμε τη συσχέτιση μεταξύ της βαθμολογίας IHC και το ly, v και Ν παράγοντες σε κάθε ασθενή. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, η έκφραση MUC4 /8G7 σχετιζόταν με λεμφική εισβολή (r = 0.304,

P

= 0,033). Η έκφραση MUC4 /1G8 σχετιζόταν με λεμφική εισβολή (r = 0,395,

P

= 0.001) και λεμφαδένα μετάσταση (r = 0.296,

P

= 0,045). Η έκφραση MUC1 /DF3 σχετιζόταν με λεμφική εισβολή (r = 0,357,

P

= 0,032) και φλεβική εισβολή (r = 0,377,

P

= 0.024).

Επιπλέον, εξετάσαμε τη συσχέτιση μεταξύ των IHC βαθμολογίες των MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 και MUC1 /DF3. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, υπήρχε μια συσχέτιση μεταξύ βαθμολογίας MUC4 /8G7 και το σκορ MUC4 /1G8 (r = 0,486,

P

& lt? 0,0001). Αντίθετα, δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ βαθμολογίας MUC4 /8G7 και το σκορ MUC1 /DF3 (r = 0,267,

P

= 0,202), και δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ βαθμολογίας MUC4 /1G8 και το σκορ MUC1 /DF3 (r = 0,245,

P

= 0,269).

Σχέση μεταξύ MUC4 ή MUC1 έκφρασης και επιβίωσης.

μεταξύ των 104 ασθενών, παρακολούθηση δεδομένα λήφθηκαν για 87 ασθενείς. Διάμεση περίοδο παρακολούθησης ήταν 47,5 μήνες (εύρος, 0-193 μήνες). Στους 87 ασθενείς, ένας ασθενής πέθανε από γαστρικού καρκινώματος 39 μήνες μετά την επέμβαση, ένας ασθενής έδειξε μετάσταση στο ήπαρ αλλά επιβίωσαν για 78 μήνες και δύο ασθενείς πέθαναν από άλλες ασθένειες. Σε 85 ασθενείς εκτός από δύο ασθενείς πέθαναν από άλλες ασθένειες, εκτίμηση κατά Kaplan-Meier ελέγχθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία log-rank. Μεταξύ του θετικού ομάδα και αρνητική ομάδα (MUC4 /8G7 + vs -, MUC4 /1G8 + vs – ή MUC1 /DF3 + vs -), δοκιμασία log-rank της συνολικής επιβίωσης (MUC4 /8G7, P = 0,27? MUC4 /1G8, P = 0,37 ? MUC1 /DF3, P = 0,22) και η επιβίωση χωρίς εξέλιξη (MUC4 /8G7, P = 0,85? MUC4 /1G8, P = 0,23? MUC1 /DF3, P = 0.83) δεν έδειξαν σημαντικές διαφορές. Περαιτέρω ανάλυση των 42 ασθενών που επέζησαν για περισσότερα από 5 χρόνια έδειξε επίσης σημαντικές διαφορές.

Συζήτηση

Πρόσφατα, έχουμε αναφερθεί ότι η έκφραση του MUC4 είναι ένας ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας κακής του pancreatobiliary αδενοκαρκινώματα [ ,,,0],10], [11], [12], καθώς και αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα [13] και στοματικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων [9]. MUC1 έχει επίσης αναφερθεί να είναι ένα φτωχό προγνωστικός παράγοντας σε διάφορους ανθρώπινους νεοπλάσματα [4], [5]. προηγούμενη μελέτη μας σε γαστρικών καρκίνων, συμπεριλαμβανομένων τόσο νωρίς καρκίνων και προχωρημένους καρκίνους έδειξαν ότι MUC 1 είναι ένα χρήσιμο προγνωστικό παράγοντα για την κακή έκβαση σε ασθενείς [6]. Στην παρούσα μελέτη, η σχέση μεταξύ της έκφρασης βλεννίνης και την έκβαση του ασθενούς δεν μπορεί να αξιολογηθεί, επειδή οι γαστρικών καρκίνων βρίσκονται στο πρώιμο στάδιο στο pT1b2 και οι περισσότεροι από τους ασθενείς είχαν ένα ευνοϊκό αποτέλεσμα. Παρ ‘όλα αυτά, ελήφθησαν τα ακόλουθα αποτελέσματα: (1) Η MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 και εκφράσεις MUC1 /DF3 σχετίζονταν με λεμφική εισβολή. (2) Η έκφραση MUC4 /1G8 σχετιζόταν με μετάσταση στους λεμφαδένες. (3) Η έκφραση /DF3 MU1 σχετιζόταν με φλεβική εισβολή. Στην Ιαπωνία, ESD είναι η πρώτη θεραπεία επιλογής για την έγκαιρη γαστρικών καρκίνων [3]. Εξέταση των MUC4 καθώς και MUC1 στα δείγματα ESD μπορεί να διευκρινίσει αν η πρόσθετη χειρουργική επέμβαση, συμπεριλαμβανομένων των λεμφαδένων ή συχνή παρακολούθηση για μετάσταση είναι απαραίτητη.

προηγούμενες μελέτες μας έδειξαν ότι δεν υπήρχε συσχετισμός μεταξύ siginificant MUC4 έκφρασης και έκφραση MUC1 [10], [11], [12], [13]. Επίσης, στην παρούσα μελέτη των γαστρικών καρκίνων σε πρώιμο στάδιο, δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ siginificant έκφραση MUC4 και MUC1. Τόσο έκφραση MUC4 και MUC 1 στα γαστρικά καρκίνους μπορεί να σχετίζεται με τις φτωχές προγνωστικούς παράγοντες, όπως λεμφικό εισβολή, φλεβική εισβολή και μετάσταση λεμφαδένα, μέσω διαφορετικού μηχανισμού.

Στην προηγούμενη μελέτη των γαστρικών καρκίνων χρησιμοποιώντας MAb 8G7, Senapati et al. έδειξαν ότι η έκφραση MUC4 /8G7 δεν συνδέθηκε με τον τύπο του όγκου, το στάδιο ή με το βαθμό διαφοροποίησης [18]. Είναι ενδιαφέρον ότι, τα αποτελέσματά τους έδειξαν ποσοστό έκφρασης 42% στο στάδιο καρκίνους Ι (n = 19), η οποία είναι σύμφωνη με τα δεδομένα μας (MUC4 /8G7: 42% και MUC4 /1G8: 48%) στην παρούσα μελέτη εξετάζει σταδίου Ι καρκίνους (n = 104). Ωστόσο, η μελέτη μας έδειξε ότι τόσο MUC4 /8G7 και MUC4 /1G8 εκφράσεις ήταν διαφορετική μεταξύ των ιστολογικών τύπων, και ήταν σημαντικά υψηλότερα στα καλά διαφοροποιημένα είδη σε σχέση με το κακώς διαφοροποιημένο τύπο. έκφραση MUC1 /DF3 ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερη στα καλά διαφοροποιημένο τύπους σε σχέση με το πτωχά διαφοροποιημένο τύπο. Έχουμε αναφερθεί ότι η έκφραση MUC 1 ήταν υψηλή σε καλά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα σε γαστρικών καρκίνων συμπεριλαμβανομένων προηγμένων καρκίνων, και η υψηλή MUC1 έκφραση μπορεί να επηρεάσει την επιβίωση των ασθενών με καλά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα του στομάχου [6]. Η υψηλή έκφραση του MUC4 στο καλά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα επίσης μπορεί να επηρεάσει την επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του στομάχου. Σε προηγούμενη μελέτη μας [6], το ποσοστό της υψηλής έκφρασης του MUC 1 /DF3 ήταν σημαντικά υψηλότερη στα προχωρημένα γαστρικών καρκίνων από ότι στις αρχές της δεκαετίας του γαστρικού καρκίνου. Η σχέση της έκφρασης MUC4 με την εισβολή των γαστρικών καρκίνων θα ήταν μια ενδιαφέρουσα περιοχή της μελέτης.

Υπάρχει διαμάχη σχετικά με την προγνωστική σημασία της MUC4 /8G7 και έκφραση MUC4 /1G8. Έτσι, έχουμε αξιολόγηση 19 άρθρα της μελέτης MUC4 IHC εφαρμοστεί για διάφορους ανθρώπινους ιστούς καρκίνου (Πίνακας 3). Η σημασία της MUC4 /8G7 και MUC4 /1G8 δεν θα μπορούσε να αξιολογηθεί σε 8 από τις 19 μελέτες. Μία μελέτη χρησιμοποιώντας πολυκλωνικό αντίσωμα αντι-MIUC4 ανέφεραν ότι η έκφραση MUC4 σχετίζεται με αποτέλεσμα fovorabel [19], τρεις μελέτες δεν δείχνουν καμία συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης MUC4 και πρόγνωση [20], [21], [22], τα άλλα τρία μελέτες δεν κάποιες παρατηρήσεις σχετικά με την συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης MUC4 και την πρόγνωση [18], [23], [24], και το υπόλοιπο μια μελέτη του καρκίνου του θυρεοειδούς αναφερθεί καμία έκφραση MUC4 στον καρκίνο [25]. Από την άλλη πλευρά, στα άλλα 11 είδη, υπήρχε εμφανής διαφορά της προγνωστικής σημασίας μεταξύ έκφραση MUC4 /8G7 και έκφραση MUC4 /1G8. Οι περισσότερες μελέτες που χρησιμοποιούν 8G7, η οποία παρήχθη κατά της ανθρώπινης MUC4, έκφραση MUC4 /8G7 σχετίζεται με επιθετική συμπεριφορά όγκου ή κακή έκβαση σε ανθρώπινα καρκινώματα [9], [10], [11], [12], [13], [ ,,,0],26]. Αντίθετα, οι περισσότερες μελέτες που χρησιμοποιούν 1G8, το οποίο τέθηκε κατά ASGP-2 αρουραίου, που περιγράφεται ότι η έκφραση MUC4 /1G8 σχετίζεται με ένα ευνοϊκό αποτέλεσμα [27], [28], [29], [30], αν και μία μελέτη της παγκρεατικής αδενοκαρκίνωμα περιγράφεται ότι η έκφραση MUC4 /1G8 σχετίζεται με κακή επιβίωση [31]. Αυτή η σαφής διαφορά θέτει το ερώτημα του κατά πόσον 8G7 και 1G8 έχουν ουσιαστικά διαφορετικούς χαρακτήρες. Το MAb 1G8 ανατράφηκε με τη χρήση αρουραίων MUC4 επιτόπου [15]. Ανθρώπινα MUC4 και MUC4 αρουραίου δείχνει περισσότερο από 60% ομοιότητα αλληλουχίας πεπτιδίου [32], αλλά δεν είναι ταυτόσημες. Είναι αξιοσημείωτο ότι IHC χρησιμοποιώντας MAb 1G8 εμφανίζει πάντα θετική χρώση στο αγγειακό ενδοθήλιο, η οποία είναι κάπως ασυνήθιστη ως έκφραση MUC4 το οποίο είναι ένα από τα μέλη του βλεννίνες.

Έτσι, αξιολογήσαμε την ειδικότητα του MAb 8G7 και 1G8 MAb με κηλίδωση Western και IHC δύο κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου. Western blotting ανάλυσή μας έδειξε ότι το MAb 8G7 που αναγνωρίζονται μοριακό πρωτεΐνη πολύ υψηλό βάρος (πάνω από 500 kD, το οποίο ήταν το αναμενόμενο μέγεθος της αυτοφυούς MUC4), ενώ το MAb 1G8 δεν παρουσιάζει ανοσοαντιδραστικές ζώνες. Η ανάλυση έδειξε επίσης IHC MAb 8G7 θετική χρώση αλλά αρνητική χρώση MAb 1G8 στις δύο κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου. MUC4 mRNA εκφράστηκε επίσης στις δύο κυτταρικές γραμμές γαστρικού καρκίνου στην παρούσα μελέτη, όπως φαίνεται στην προηγούμενη μελέτη αναλύει τις παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές με RT-PCR και αναλύσεις κηλίδος northen [33], [34]. Τόσο MAb 8G7 και 1G8 MAb αντιδρούν με ανθρώπινο γαστρικό καρκινικούς ιστούς, αν και οι θέσεις των MUC4 /8G7 και έκφραση MUC4 /1G8 έδειξε αξιοσημείωτη διαφορά. Σε γαστρικό καρκινικούς ιστούς, MUC4 /8G7 εκφράστηκε κυρίως στο κυτταρόπλασμα των νεοπλασματικών κυττάρων του Παπανικολάου και μπανιέρα, ενώ MUC4 /1G8 εκφράστηκε κυρίως στις κυτταρικές κορυφές των pap και μπανιέρα ή ενδοκυτταροπλασματική βλεννίνη ουσία sig. Δεδομένου ότι η κυτταροπλασματική πρότυπο έκφρασης του MUC4 /8G7 παρατηρείται επίσης σε παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα, ενδοηπατικής χολαγγειοκαρκίνωμα, επιπλέον ηπατικό καρκίνωμα του χοληφόρου πόρου, αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα και στοματικό καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων [9], [10], [11], [12], [13