Αφηρημένο

Ιστορικό

παχέος εντέρου (CRCs) με μικροδορυφόρων αστάθεια (MSI) συνδέονται με μια καλή πρόγνωση και μια υψηλή πυκνότητα του ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα (TILs). Έχουμε αναλάβει να καθορίσει τη σχέση μεταξύ πυκνοτήτων ΤΙΤ και MSI CRC χαρακτηριστικά ιστολογικά.

Ασθενείς και Μέθοδοι

Χρησιμοποιώντας μικροσυστοιχίες ιστού, Τ-κυττάρων διείσδυση υπο-πληθυσμού, συμπεριλαμβανομένων των Τ κυττάρων (CD3), κυτταροτοξικά Τ κύτταρα (CD8) και ρυθμιστικά Τ κύτταρα (FoxP3) μελετήθηκαν σε 86 MSI CRCs. Εμείς αναλύονται χωριστά TILs των στρωματικών και επιθηλιακών διαμερίσματα στο κέντρο του όγκου, το καρκινικό περιθώριο εισβολή και συναφείς φυσιολογικό ιστό.

Αποτελέσματα

Για την πυκνότητα FoxP3 + TIL στο χώρο του κέντρου στρωματικών όγκων, βρήκαμε μια ισχυρή αρνητική συσχέτιση με το στάδιο Τ4 (p = 0.01), ο κόμβος εισβολή (p & lt? 0.001). και VELIPI (αγγειακή εμβολή, λεμφική εισβολή και perinervous εισβολής) κριτήρια (p = 0,002)

Συμπέρασμα

Η ισχυρή συσχέτιση μεταξύ των ρυθμιστικών Τ κυττάρων πυκνότητα και την απουσία κριτηρίων VELIPI προτείνει ότι αυτή η υπο-ομάδα των Τ κυττάρων κατά προτίμηση συνδέεται με λιγότερο επεμβατικές όγκους

Παράθεση:. Tougeron D, Maby P, Elie Ν, Fauquembergue Ε, Le Pessot F, Cornic M, et al. (2013) Ρυθμιστική Τ λεμφοκύτταρα είναι συνδεδεμένες με λιγότερο επιθετικές ιστολογικές χαρακτηριστικά γνωρίσματα σε Μικροδορυφορικοί-Ασταθή παχέος εντέρου. PLoS ONE 8 (4): e61001. doi: 10.1371 /journal.pone.0061001

Επιμέλεια: Hoguen Kim, Yonsei University College of Medicine, Δημοκρατίας της Κορέας

Ελήφθη: 19 του Δεκέμβρη του 2012? Αποδεκτές: 5 Μαρ 2013? Δημοσιεύθηκε: 15η Απριλίου 2013

Copyright: © 2013 Tougeron et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οικονομική ενίσχυση ελήφθη από Inserm – Haute-Normandie Περιφέρεια (μισθός Π Maby του), και η Ligue Contre le Cancer de Seine-Maritime (αντιδραστήρια). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Πρόσφατα, ανοσοαπόκριση ξενιστή έχει δειχθεί ότι παίζει σημαντικό ρόλο στον καθορισμό της έκβασης ασθενών με ορθοκολικό καρκίνο (CRC). Σελίδες

κ.ά.

έχουν καταδείξει ότι μια υψηλή πυκνότητα διηθητικά Τ κυττάρων μνήμης εντός του όγκου συσχετίζεται με την απουσία ιστολογικών δεικτών της συνεχιζόμενης εισβολής, που ονομάζεται επίσης VELIPI (αγγειακή εμβολή, λεμφικό εισβολή και perinervous εισβολή) τα κριτήρια και με την καλύτερη συνολική επιβίωση [1], [2]. Επιπλέον, λεμφοκυττάρων που διηθούν όγκο (ΤΙΤ) πυκνότητα φαίνεται να έχει μια καλύτερη τιμή πρόγνωση από το στάδιο TNM [3], και ορισμένοι υποπληθυσμοί κυττάρων Τ έχουν δειχθεί να σχετίζεται με καλύτερη CRC κλινική έκβαση, όπως κυτταροτοξικά Τ κύτταρα (CD8 +) , Th17 βοηθητικά Τ κύτταρα και, πιο αμφιλεγόμενα, ρυθμιστικά Τ κύτταρα (FoxP3 +) [3] – [5].

είναι ενδιαφέρον ότι, οι όγκοι που παρουσιάζουν αστάθεια μικροδορυφόρου (MSI) ή φαινότυπο σφάλμα αντιγραφής είναι ιστοπαθολογικά χαρακτηρίζονται από υψηλή TIL πυκνότητα [6] – [8]. Οι όγκοι αυτοί έχουν μια συνολική βελτίωση της πρόγνωσης με λιγότερη υποτροπή της νόσου και καλύτερο ποσοστό επιβίωσης από την άλλη ομόλογό CRC, με μικροδορυφόρων σταθερό φαινότυπο [9], [10]. MSI φαινότυπο, που παρατηρείται σε περίπου 12% των καρκίνων του παχέος εντέρου, οφείλεται στην αδρανοποίηση του συστήματος επιδιόρθωσης αταίριαστων βάσεων του DNA (MMR)

11 που προκύπτει είτε από σωματικά επιγενετικές μεταβολές, ή από ένα βλαστικής γραμμής αλλοίωση (σύνδρομο Lynch) [11 ]. MMR αδρανοποίηση επηρεάζει νουκλεοτιδίων αντιγραφή επανάληψης και μπορεί να οδηγήσει στη δημιουργία νεο-πρωτεΐνες αποικοδομούνται σε νεο-πεπτίδια που παρουσιάζονται στα μόρια HLA. Συνεπώς, η καλύτερη πρόγνωση για μικροδορυφορικών ασταθή του παχέος εντέρου μπορεί να εξηγηθεί τουλάχιστον εν μέρει από την παρουσία TILs η οποία θα μπορούσε να είναι ειδικά για ορισμένα πεπτίδια του όγκου που προκύπτουν από αστάθεια μικροδορυφόρου [12], [13]. MSI όγκοι έχουν υψηλότερα ποσοστά των CD8 + και FoxP3 + TILs από τους όγκους MSS, αλλά οι λίγες δημοσιευμένες μελέτες σχετικά με MSI CRCs αναφέρει αντιφατικά αποτελέσματα σχετικά με αυτές τις τιμές πρόγνωση ΤΙΤ [4], [8], [14] – [18]. Επιπλέον, σε MSI ΚΕΣ μόνο CD8 + ενδοεπιθηλιακή πυκνότητα των λεμφοκυττάρων έχει πλήρως μελετηθεί, με εξαίρεση τα στρωματικά λεμφοκυττάρων και άλλων κυττάρων Τ υποπληθυσμών [14], [19].

Ανοσοποιητικό κυτταρική πυκνότητα μπορεί να έχει μια προγνωστική αξία, και Ως εκ τούτου, είναι κλινικά σημαντική, ειδικά για συνταγογράφηση επικουρική χημειοθεραπεία σε MSI CRCs. Αλλά για να τις γνώσεις μας, μέχρι τώρα καμία μελέτη δεν έχει διερευνηθεί, σε μια μεγάλη σειρά ασθενών, η σύνδεση μεταξύ των διαφόρων ΤΙΤ υπο-πληθυσμούς στην στρωματικών και επιθηλιακών διαμερίσματα, και την πρόγνωση ή ιστολογική όγκου χαρακτηριστικά, το MSI CRCs. Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε αναλύσει συνολικών κυττάρων Τ, των κυτταροτοξικών Τ κυττάρων και των ρυθμιστικών διείσδυση των καρκινικών κυττάρων Τ στο MSI CRCs και προσπάθησε να δημιουργήσει αυτό το σύνδεσμο για αυτές τις ανοσοποιητικού κυτταρικούς πληθυσμούς.

Υλικά και Μέθοδοι

η επιλογή των ασθενών και των μικροδορυφόρων

Αξιολόγηση αστάθεια

στο ίδρυμα μας, μικροδορυφόρων αστάθεια έχει αναλυθεί σε όλες τις CRCs από το 2003. Για κάθε ασθενή, γονιδιακό DNA εξήχθη από ζεύγη όγκου και φυσιολογικό παχέος ιστούς. αξιολόγηση μικροδορυφορικού αστάθεια πραγματοποιήθηκε από μια συγκριτική ανάλυση αυτών των δειγμάτων DNA, χρησιμοποιώντας τις πέντε επαναλήψεις συναίνεση μονονουκλεοτίδιο (

BAT25

,

BAT26

,

NR21

,

NR22

και

NR24

) [20]. Αστάθεια μικροδορυφόρου (MSI) ορίστηκε από την παρουσία της αστάθειας που επηρεάζουν τουλάχιστον δύο δείκτες (που αντιστοιχεί στην πραγματικότητα στο MSI υψηλή όγκους μόνο). Επιτροπή Δεοντολογίας του οργάνου μας (Comité de προστασία des personnes Nord-Ouest Ι) ενέκρινε τη μελέτη και παραιτήθηκε από την ανάγκη για πληροφορημένη συναίνεση, λόγω της αναδρομικής φύσης της μελέτης. Σύμφωνα με τη γαλλική νομοθεσία, έγγραφη συγκατάθεση είχε συστηματικά έχουν ληφθεί για τη μετάλλαξη βλαστικής σειράς σύστημα επιδιόρθωσης αναντιστοιχία DNA αναλύσεις που έγιναν για ιατρικούς σκοπούς.

ασθενών και του όγκου Χαρακτηριστικά, και της κλινικής έκβασης

ασθενών και όγκου χαρακτηριστικά κατά την έναρξη συλλέχθηκαν. Επιπλέον, για κάθε όγκου, η ιστολογική δείκτες της συνεχιζόμενης εισβολής που αντιστοιχούν στα κριτήρια VELIPI προσδιορίστηκαν με την εξέταση έναν παθολόγο [1].

Όλοι οι ασθενείς ηλικίας κάτω των εξήντα ετών και /ή με οικογενειακό ιστορικό φάσμα σύνδρομο Lynch όγκου απευθύνονταν σε ογκογένεση διαβούλευση. Σε αυτούς τους ασθενείς, η παρουσία ενός επιβλαβή βλαστική γονιδιακή μετάλλαξη του συστήματος επιδιόρθωσης του DNA ζητήθηκε έξω.

Ασθένεια επανάληψης αξιολογήθηκε κάθε 3 μήνες τα δύο πρώτα χρόνια και κάθε έξι μήνες τα επόμενα τρία χρόνια. Παρακολούθηση δεδομένων επικαιροποιήθηκαν τον Δεκέμβριο του 2011.

ιστικές μικροσυστοιχίες και ανοσοϊστοχημεία

μικροσυστοιχίες ιστών (ΤΜΑ) αποτελούνται από παραφίνη μπλοκ στο οποίο οι έως 1000 ξεχωριστές πυρήνες ιστού συναρμολογούνται σε μια μόδα σειρά για να επιτρέπουν πολλαπλές ιστολογικές αναλύσεις μετά ανοσοχρώση. Για κάθε όγκου, τέσσερις πυρήνες διαμέτρου 0,6 πιπί ελήφθησαν στο κέντρο του όγκου, στο περιθώριο εισβολή, και τέσσερις επιπλέον δοκιμίων από μακρινές ιστολογικά φυσιολογικό βλεννογόνο του κόλου (Tissue arrayer, Alphelys, France). Όλες οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν σε surgicaly εκτομή πρωτοβάθμια CRC πριν από τη θεραπεία χημειοθεραπεία. Περιοχή με όπως λεμφικών απάντηση του Crohn αποκλείστηκαν από την κατασκευή TMA και αναλύσεις. Οι οκτώ TMAs χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη περιείχε περισσότερο από 1000 πυρήνες μικροδορυφορικών ασταθής CRCs. Τέσσερις μm πάχους τομές κόπηκαν από τα τεμάχια ΤΜΑ και χρησιμοποιήθηκαν για ανοσοϊστοχημεία με βάση CD3 (Τ κυττάρου), CD8 (κυτοτοξικό Τ κύτταρο) και FoxP3 (ρυθμιστικών Τ κυττάρων) χρώση. Σταθεροποιημένα με φορμαλίνη ιστούς αποπαραφινοποιήθηκαν και θερμότητα προκαλούμενη ανάκτηση επίτοπο διεξήχθη χρησιμοποιώντας ένα ατμόπλοιο. Τα πλακίδια επωάστηκαν με μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού, αντι-CD3 (ϋΑΚΟ, Carpentria, CA) αραιωμένο 1/50 για 32 λεπτά, αντι-CD8 (ϋΑΚΟ, Carpentria, CA) αραιωμένο 1/50 για 32 λεπτά, και αντι-FoxP3 (Abcam , Cambridge, ΜΑ) αραιωμένο 1/50 για 32 λεπτά, σύμφωνα με τις οδηγίες των κατασκευαστών. Για κάθε τμήμα, ένα πρωτεύον αντίσωμα ποντικού και ένα δευτερεύον αντίσωμα αντι-ποντίκι για την αποκάλυψη χρησιμοποιήθηκαν. Το δευτερεύον αντίσωμα ήταν άμεσα συνδεδεμένο με ένζυμο HRPO (Horse-ραπανάκι-υπεροξειδάσης, ϋΑΚΟ) και εφαρμόστηκε για 15 λεπτά. Χρώμα αποκαλύφθηκε χρησιμοποιώντας DAB χρωμογόνου (Diaminobenzine) και την εφαρμογή Η2Ο2 (υπεροξείδιο του υδρογόνου).

Η ποσοτικοποίηση της λεμφοκύτταρα που διηθούν

Κάθε slide σαρώθηκε με Mirax Scan®. Το πρόγραμμα Chips’N Φτηνές Ανάλυση TMA, χρησιμοποιώντας Αφήλιο 3.2 (ADCIS, Hérouville St Clair, Γαλλία), είχε βελτιστοποιηθεί για την αναγνώριση κάθε τσιπ για την εικονική διαφάνεια TMA και να μας επιτρέψει να οριοθετηθούν τα ακυτταρικό περιοχές, το στρωματικά και τα επιθηλιακά διαμερίσματα για κάθε πυρήνα. Οι περιοχές ενδιαφέροντος, δηλαδή στρώμα και επιθήλιο, ήταν το χέρι οριοθετείται εντός των μη-κακοήθεις (4 πυρήνες), στο κέντρο του όγκου (4 πυρήνες), και το περιθώριο εισβολή (4 πυρήνες) θέσεις για κάθε ασθενή. Μετά την αφαίρεση των ακυτταρικού περιοχές, οι αναλογίες μεταξύ ανοσοχρωματίστηκε περιοχών και συνολικές εκτάσεις περιοχή ιστού υπολογίστηκαν αυτόματα (Εικόνα 1).

Παραδείγματα κέντρου όγκου μάρκες με CD3 (Α), CD8 (Β) και FoxP3 (C ) χρώση. Αριστερό πάνελ αποτελούν παραδείγματα των υψηλών πυκνοτήτων ΤΙΤ και δεξιά πάνελ είναι παραδείγματα χαμηλές πυκνότητες TIL. Το στρώμα είναι σε κόκκινο κύκλο, το επιθήλιο σε μπλε, και οι μαύρες περιοχές εξαιρούνται. Οι σημειώνονται περιοχές που λαμβάνονται υπόψη για τον υπολογισμό της πυκνότητας των λεμφοκυττάρων διήθηση κύκλο με κίτρινο χρώμα. Όλα τα δεδομένα αποκτήθηκαν με πρόγραμμα ανάλυσης Ν Φτηνές TMA του Chip.

Η

ΤΙΤ ποσοτικοποίησης δόθηκαν από τα ποσοστά του συνόλου των επιφανειών επισημανθεί από τα αντισώματα. Οπτική ανάλυση των δειγμάτων από 10 ασθενείς μας οδήγησε να εκτιμούν ότι το ένα τοις εκατό από όγκο διείσδυση χρώσης λεμφοκυττάρων αντιστοιχούσε σε περίπου 350 TILs /mm

2. Σε όγκους με βλεννώδες διαφοροποίησης, πυκνότητες TIL υπολογίστηκαν εκτός των βλεννωδών περιοχών.

Στατιστική Ανάλυση

T-test χρησιμοποιήθηκε για να συσχέτιση μεταξύ των χαρακτηριστικών δοκιμή όγκου και πυκνότητας TIL. Ελεύθερη νόσου επιβίωση (DFS) εκτιμήθηκε από την ημερομηνία χειρουργική επέμβαση μέχρι την τεκμηριωμένη υποτροπή ή τελευταία παρακολούθηση ημερομηνία. καμπύλη επιβίωσης ιδρύθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Kaplan-Meier. Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τιμή σημαντικότητας δύο πλευρά του 0,05, με τη χρήση του λογισμικού Statview (Statview για Windows, SAS Ινστιτούτο Inc., έκδοση 5.0).

Αποτελέσματα

ασθενών και των όγκων Χαρακτηριστικά

Ένα σύνολο 106 CRCs με μικροδορυφόρων αστάθειας (δύο ασθενείς ανέπτυξαν 2 σύγχρονης όγκους), ο οποίος είχε υποβληθεί σε χειρουργική επέμβαση από τον Ιανουάριο του 2003 και του Δεκεμβρίου του 2009, είχαν περιληφθεί αρχικά. Μερικοί ασθενείς αποκλείστηκαν στη συνέχεια από την ανάλυση λόγω της απουσίας του δείγματος όγκου ή κλινικά δεδομένα. Ογδόντα έξι ασθενείς εξακολουθούν να περιλαμβάνονται στην τελική μελέτη (Πίνακας 1). Η μέση ηλικία των ασθενών ήταν 68,6 ± 17,5 χρόνια. Τριάντα ένας ασθενείς ελέγχθηκαν για MMR γονιδιακές μεταλλάξεις βλαστικής σειράς. Δεκαοκτώ από τους ασθενείς (24,4%) παρουσίασε ένα σύνδρομο Lynch, όπως ορίζεται από την παρουσία ενός επιβλαβούς βλαστικής γραμμής MMR μετάλλαξη (16 ασθενείς) ή μια παρουσίαση που πληροί τα κριτήρια του Άμστερνταμ σε ασθενείς χωρίς βλαστικής σειράς MMR μετάλλαξη (2 ασθενείς).

η πλειοψηφία των όγκων ήταν ΤΝΜ σταδίου ΙΙ ή ΙΙΙ (74,4%) και στο δεξιό κόλον (63,9%) (Πίνακας 1). Περίπου το ήμισυ των όγκων είχαν κριτήρια VELIPI (45,3%) και 12,7% ήταν βλεννώδες όγκων, που ορίζεται ως όγκοι με βλεννώδες διαφοροποίηση που αντιπροσωπεύουν τουλάχιστον το 50% του συνολικού όγκου του όγκου? 25,3% του συνόλου των όγκων είχε κάποια βλεννώδες διαφοροποίηση που αντιπροσωπεύει λιγότερο από το 50% του συνολικού όγκου του όγκου (λιγότερο από 20% περίπου το ήμισυ των όγκων αυτών, και μεταξύ 20 και 40% για τα υπόλοιπα). Μόνο 16 (18,6%) ασθενείς υποτροπίασαν μετά από διάμεση παρακολούθηση 25,0 ± 5,7 μήνες. Στη συνέχεια, η διάμεση DFS δεν επιτεύχθηκε. Τριετές DFS ήταν 78,7%. Η διάμεση συνολική επιβίωση (OS) ήταν 72,1 ± 11,3 μηνών και τριών ετών OS ήταν 60,2%.

λεμφοκύτταρα

CD3 +, CD8 +, και FoxP3 + Τ κύτταρα που διηθούν όγκο ήταν κυρίως εντοπισμένη στην στρωματική διαμέρισμα (Σχήμα 2). Μία σημαντικά υψηλότερη συνολική πυκνότητα των κυττάρων Τ παρατηρήθηκε στον όγκο, σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς κόλου (ρ & lt? 0,05, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται)., Όπως έχει ήδη αναφερθεί

13 εντός του όγκου και φυσιολογικούς ιστούς, CD3 +, CD8 + και FoxP3 + TIL πυκνότητες ήσαν υψηλότερη στο στρώμα σε σχέση με το επιθήλιο (ρ & lt? 0,01 για όλους τους δείκτες) (Σχήμα 2). Επιπλέον, υπήρχε μια ισχυρή θετική συσχέτιση μεταξύ CD3 +, CD8 + και FoxP3 + TIL πυκνότητες που παρατηρήθηκαν τόσο στο κέντρο του όγκου και το μέτωπο εισβολή, ανεξάρτητα από το διαμέρισμα (ρ & lt? 0,01, τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Moroever, υπήρχαν υψηλότερα densitites CD8 + TIL στην επεμβατική εμπρός σε σχέση με το κέντρο του όγκου (ρ & lt? 0,05), που δεν ήταν η περίπτωση για πυκνότητες CD3 + και FoxP3 + TIL. Δεν υπήρχε διαφορά μεταξύ των TIL densitites σε ασθενείς με ή χωρίς το σύνδρομο Lynch.

Το μπαρ διαγράμματα αντιπροσωπεύουν τα ποσοστά των επιφανειών χαρακτηρίζεται από CD3, CD8 και FoxP3 ανοσοχρώση στην στρωματική (χτύπημα) και επιθηλιακά (ep) διαμερίσματα, στο κέντρο του όγκου (TC) και το μπροστινό εισβολή (IF) ιστούς. Τα τυπικά σφάλματα δίνεται από τις μπάρες. πυκνότητες CD3 + ΤΙΤ ήταν αντίστοιχα, 2.2 ± 2.5% στο διαμέρισμα επιθήλιο κέντρο του όγκου, 6,4 ± 5,1% στο διαμέρισμα στρωματικά κέντρο του όγκου, 2.3 ± 2.5% στο διαμέρισμα επιθήλιο μπροστά εισβολή, 7,2 ± 6,1% στο διαμέρισμα στρωματικά μπροστά εισβολή. πυκνότητες CD8 + ΤΙΤ ήταν αντίστοιχα, 1,52 ± 2,0% στο διαμέρισμα επιθήλιο κέντρο του όγκου, 2.9 ± 2.7% στο διαμέρισμα στρωματικά κέντρο του όγκου, 1.8 ± 2.4% στο διαμέρισμα επιθήλιο μπροστά εισβολή, 3.3 ± 3.0% στο διαμέρισμα στρωματικά μπροστά εισβολή. πυκνότητες FoxP3 + ΤΙΤ ήταν αντίστοιχα, 0,13 ± 0,12% στον όγκο διαμέρισμα κέντρο επιθηλίου, 0,59 ± 0,53% στον όγκο διαμέρισμα κέντρο στρωματικά, 0,14 ± 0,14% στην εισβολή διαμέρισμα μπροστά επιθηλίου, 0,63 ± 0,58% στο διαμέρισμα εισβολή μπροστά στρωματικών.

σύνδεσης μεταξύ ΤΙΤ πυκνοτήτων και κλινικοπαθολογοανατομικές μεταβλητές

Εμείς κοίταξε για μια συσχέτιση μεταξύ των πυκνοτήτων ΤΙΤ στα διάφορα διαμερίσματα και έναν αριθμό διαφορετικών κλινικοπαθολογοανατομικών μεταβλητών (& gt? 60 χρόνια έναντι ≤ 60 χρόνια, φτωχά σε σχέση με καλά /μετρίως διαφοροποιημένων όγκων, του ορθού /παχέος εντέρου αριστερά έναντι εντοπισμό δεξιό κόλον όγκου, εισβολή τοίχο (Τ4 έναντι T1-3), ο κόμβος εισβολή (Ν + έναντι N0), ιστολογικές δείκτες της συνεχιζόμενης εισβολής (κριτήρια VELIPI), τα στάδια Ι-ΙΙ έναντι ΙΙΙ IV). πυκνότητα CD3 + TIL στο διαμέρισμα επιθήλιο κέντρο του όγκου που σχετίζεται με κακή διαφοροποίηση (p = 0.01, δεδομένα που δεν φαίνονται). Για πυκνότητα CD3 + TIL στα άλλα διαμερίσματα και πυκνότητα CD8 + ΤΙΕ σε όλα τα διαμερίσματα, δεν υπήρχε συσχέτιση με κλινικά δεδομένα. Αντιθέτως, η πυκνότητα FoxP3 + TIL στο στρωματικό διαμέρισμα κέντρο του όγκου ήταν έντονα αρνητικά που συνδέονται με το στάδιο Τ4 (p = 0.01), ο κόμβος εισβολή (ρ & lt? 0.001), τα κριτήρια VELIPI (p = 0,002) και τα στάδια III-IV (ρ & lt? 0.001 ) (Πίνακας 2). Δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ της πυκνότητας FoxP3 + ΤΙΤ σε άλλο διαμέρισμα και κλινικά δεδομένα.

Η

Συζήτηση

Στη μελέτη αυτή αρχικά ανέλαβε να αξιολογήσει τις προγνωστικές αξίες των διαφόρων TIL (CD3 +, CD8 + , FoxP3 +) πυκνότητες του παχέος εντέρου με μικροδορυφόρων αστάθεια. Στην μονοπαραγοντική ανάλυση, ο κόμβος εισβολή (p = 0,002) και τα κριτήρια VELIPI (p = 0.004) ήταν προγνωστική της DFS, αλλά όχι CD3 +, CD8 + και FoxP3 + TIL πυκνότητες (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Παρά το γεγονός ότι μεγάλη σειρά μας των ασθενών (n = 106) ήταν αξιόπιστο για να μελετήσει διαφορετικά χαρακτηριστικά ιστολογική του ΚΕΣ με μικροδορυφόρων αστάθεια, δεν ήταν αρκετή για να πραγματοποιήσει μια ισχυρή στατιστική ανάλυση σχετικά με την επιβίωση. Πράγματι, επειδή αυτός ο τύπος του καρκίνου έχει καλή πρόγνωση, μόνο λίγοι ασθενείς (n = 16) είχαν υποτροπή και καμία συσχέτιση μεταξύ κάθε πληθυσμιακή πυκνότητα ΤΙΤ και DFS μπορούσε να παρατηρηθεί. Παρ ‘όλα αυτά, βρήκαμε μια ισχυρή αρνητική συσχέτιση μεταξύ της πυκνότητας FoxP3 + TIL στο διαμέρισμα στρωματικά κέντρο του όγκου και πιο επιθετική χαρακτηριστικά όγκου: εισβολή τοίχο, τα κριτήρια κόμβο εισβολή και VELIPI, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα ρυθμιστικά Τ κύτταρα εντός του όγκου θα μπορούσε να σχετίζεται με πολλαπλασιασμό των κυττάρων περιορισμένη καρκίνο δυναμικό

Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι τα CD8 + Τ κύτταρα, που φαίνεται να συνιστούν το μεγαλύτερο μέρος του ενδο-επιθηλιακά διήθηση, συνδέονται με καλύτερη επιβίωση σε CRCs [21] – [24].. Επιπλέον, η συνολική διήθηση CD8 + ΤΙΕ αποδείχθηκε ότι είναι πιο πυκνή σε MSI CRCs ό, τι στην MSS ΚΕΣ πιθανώς λόγω της έκφρασης με κύτταρα όγκου MSI από μετάλλαξη μετατόπισης πλαισίου που προέρχεται ανοσογόνος νεοαντιγόνων [13] – [17]. Αυτές οι μελέτες υποδεικνύουν ότι το πλεονέκτημα επιβίωσης σε MSI CRCs μπορεί να είναι, τουλάχιστον εν μέρει, οφείλεται στην αύξηση των CD8 + από ενδο-ογκικές Τ κυττάρου απόκριση, στοχευμένη έναντι αυτών των νεοαντιγόνων. Ωστόσο, η μελέτη μας δεν απέδειξε σύνδεση μεταξύ CD8 + διεισδύσει πυκνότητα και την καλύτερη πρόγνωση σε MSI CRCs. Θα ήταν ενδιαφέρον να αξιολογηθεί η λειτουργικότητα του CD8 + TILs, δεδομένου ότι ορισμένες κλινικές παρατηρήσεις υποδηλώνουν διαταραχή της λειτουργίας του CD8 + TILs σε MSI CRCs [25], [26].

Ένα άλλο σημαντικό υποπληθυσμό ΤΙΤ αποτελείται από CD4 + Τ κύτταρα. Δυστυχώς, μέχρι σήμερα, δεν έχουμε τη δυνατότητα να αναλύσει τον πληθυσμό CD4 + Τ κυττάρων, ακόμη και αν αποτελεσματική CD8 + κυτταροτοξικών αποκρίσεων απαιτούν τη βοήθεια των CD4 + Τ κυττάρων. Πράγματι, μεταξύ των διαφόρων αντισωμάτων αντι-CD4 προσπαθήσαμε έξω, ούτε ένας που επιτρέπεται για τη χρώση των καλής ποιότητας που θα μπορούν να χρησιμοποιηθούν σε σχέση με TMA και συμβατό με το λογισμικό ανάλυσης εικόνας μας. CD4 + Τ κύτταρα εμφανίζονται αυξημένες σε όγκους σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς ιστούς [27] και σε ένα χαμηλό CD4 + διήθηση μπορεί να σχετίζεται με καλύτερη επιβίωση [28], [29], το οποίο παραμένει αμφιλεγόμενη [5]. Αυτή η παρατήρηση θα μπορούσε να εξηγηθεί από το γεγονός ότι τα CD4 + Τ κύτταρα αντιπροσωπεύουν έναν ετερογενή πληθυσμό που περιέχει τόσο ενεργοποιημένα βοηθητικά Τ-λεμφοκύτταρα των διαφόρων δραστηριοτήτων, και ρυθμιστικά Τ κύτταρα.

Μεγάλο ενδιαφέρον έχει πρόσφατα δειχθεί σε FoxP3 + Τ κύτταρα που έχουν ρυθμιστικές λειτουργίες στην ανοσολογική απόκριση. Αυτός ο πληθυσμός λεμφοκυττάρων χαρακτηρίζεται από έκκριση των ανοσοκατασταλτικών κυτοκινών (ΤΟΡ-β και IL-10) και την έκφραση των μορίων όπως CTLA-4 (κυτταροτοξικά Τ-λεμφοκυττάρων αντιγόνο 4) που αναστέλλουν την ενεργοποίηση και τον πολλαπλασιασμό των CD4 + και CD8 + Τ κύτταρα τελεστές [30 ]. Μία υψηλή πυκνότητα των ρυθμιστικών Τ κυττάρων έχει βρεθεί συχνά στους λεμφαδένες και οι όγκοι των ασθενών CRC, και επίσης στο αίμα τους, σε σύγκριση με υγιή άτομα [31] – [33]. Αρχικά, μερικές μελέτες βρήκαν συσχέτιση μεταξύ υψηλής FoxP3 + πυκνότητας ΤΙΤ και κακή πρόγνωση σε CRC [4], [34]. Πρόσφατες μελέτες, ωστόσο, έχουν απροσδόκητα βρει ότι αυτή η διήθηση μπορεί να σχετίζεται με καλή πρόγνωση [33], [35] – [37]. Μέχρι σήμερα, μόνο Michel

et al

έχουν αξιολογηθεί ενδελεχώς την παρουσία αυτών των κυττάρων σε MSI CRCs [38]. Παρατήρησαν μια υψηλότερη FoxP3 + διεισδύσει στην MSI CRCs από ό, τι στο MSS CRCs. Ωστόσο, η σύνδεση με την πρόγνωση δεν μελετήθηκε. Στη μελέτη μας, το MSI ΚΕΣ πυκνότητα FoxP3 + ΤΙΤ ήταν σαφώς σχετίζεται με λιγότερο επεμβατικές χαρακτηριστικά όγκου, ιδίως με την απουσία κριτηρίων VELIPI, και ως εκ τούτου θα μπορούσε να συνδέεται έμμεσα με καλύτερη πρόγνωση. Αυτό το αποτέλεσμα ήταν μη αναμενόμενο και μπορεί ακόμη και να φαίνεται παράδοξο αφού ρυθμιστικά Τ κύτταρα αναστέλλουν ανοσοαπόκριση. Στην πραγματικότητα, αυτά τα ρυθμιστικά κύτταρα Τ θα μπορούσε να αντανακλά ένα μηχανισμό που αναπτύχθηκε από τον ίδιο τον όγκο να περιορίσει απόκριση κατά του όγκου, και, ίσως, ο πιο αποτελεσματική απόκριση αυτή η αντι-όγκου είναι οι περισσότερο πολυάριθμες αυτές ρυθμιστικά Τ κύτταρα είναι. Η υπόθεση αυτή υποστηρίζεται σθεναρά από τη συσχέτιση που βρήκαμε μεταξύ CD3, CD8 και πυκνότητες FoxP3 + ΤΙΤ. Μια άλλη εξήγηση coul είναι ότι ρυθμιστικά Τ κύτταρα μειώνουν τη φλεγμονή η οποία μπορεί να συμβάλει στην ανάπτυξη του όγκου και το μεταστατικό δυναμικό του, όπως αναφέρθηκε από Mantovani

et al

[39]. Ετερογένεια σε καρκίνο του παχέος εντέρου διηθητικά ρυθμιστικών Τ κυττάρων, όπως περιγράφεται πρόσφατα από Blatner

κ.ά.

[40], θα μπορούσε επίσης να εξηγήσει μερικά απροσδόκητα κλινικά αποτελέσματα σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος. Ωστόσο, θα μπορούσε να δημιουργηθεί καμία στατιστικά σημαντική συσχέτιση μεταξύ της πυκνότητας FoxP3 + ΤΙΤ και DFS, ίσως πάλι λόγω της έλλειψης στατιστικής ισχύος, λόγω του μικρού αριθμού των υποτροπών του όγκου.

Μια δύναμη της μελέτης μας σε σχέση με άλλες μελέτες ήταν ότι λάβαμε υπόψη η ακριβής ΤΙΤ εντοπίσεις. Οι διαφορετικές υποπληθυσμών TIL φάνηκε να είναι κυρίως συν-εντοπισμένη στο στρώμα του όγκου. Όπως και στο MSS CRCs, CD8 + Τ κύτταρα φαίνεται να αποτελούν την πλειονότητα των ενδο-επιθηλιακών λεμφοκυττάρων Τ διεισδύσουν σε MSI CRCs. FoxP3 + Τ κυτταρική πυκνότητα φαίνεται να είναι χαμηλή σε σύγκριση με κύτταρα CD3 + και CD8 + Τ, τονίζοντας το γεγονός ότι άλλα CD4 + Τ κύτταρα είναι παρόντα, η οποία θα μπορούσε να διαδραματίσει ένα σημαντικό ρόλο στην MSI CRCs.

Στη μελέτη μας, προγνωστικοί παράγοντες υποτροπής ήταν κόμβου κριτήρια εισβολή και VELIPI, όπως έχει ήδη αναφερθεί στο MSS CRCs [41]. Σύνδεσης μεταξύ διηθούν όγκο ρυθμιστικά Τ κυτταρική πυκνότητα και την απουσία κριτηρίων VELIPI είναι σίγουρα το πιο σημαντικό εύρημα στην παρούσα μελέτη. Όλα αυτά τα αποτελέσματα πρέπει να επιβεβαιωθούν και να καθορίζεται ακριβέστερα, ελπίζουμε σε μια μεγαλύτερη πολυκεντρική σειρά ασθενών MSI CRC, συμπεριλαμβανομένων περισσότερων ασθενών με υποτροπή της νόσου.

Ευχαριστίες

Οι συγγραφείς επιθυμούν να ευχαριστήσω Jeffrey Arsham , ένας Αμερικανός μεταφραστής, για το γεγονός ότι επανεξέτασε και αναθεώρησε το αρχικό κείμενο στην αγγλική γλώσσα. Οι συγγραφείς επιθυμούν να ευχαριστήσω Julie Tinat για τα δεδομένα σχετικά με τις δοκιμές MMR βλαστικής σειράς.