Αφηρημένο

Ο καρκίνος των ωοθηκών παραμένει δύσκολο να αντιμετωπιστεί κυρίως λόγω της παρουσίασης της νόσου σε προχωρημένο στάδιο. Οι υπό όρους-αντιγραφόμενοι αδενοϊοί (Crads) υπόσχεται αντικαρκινικών παραγόντων που σκοτώνουν επιλεκτικά τα καρκινικά κύτταρα. Η παρούσα μελέτη αξιολόγησε την αποτελεσματικότητα ενός νέου CRAd (Ad5 /3-CXCR4-Timp2) που περιέχει τον προαγωγό CXCR4 για επιλεκτική αντιγραφή του ιού στα καρκινικά κύτταρα μαζί με Timp2 ως θεραπευτικό διαγονίδιο, με στόχο τις μεταλλοπρωτεάσες μήτρας (MMPs) σε μυϊκό πρότυπο ορθοτοπικής του διαδίδονται καρκίνου των ωοθηκών. Ένα πρότυπο ορθοτοπικής του καρκίνου των ωοθηκών ιδρύθηκε σε αθυμικούς γυμνούς ποντικούς με έγχυση intraperitonal του καρκίνου ανθρώπινη κυτταρική σειρά ωοθήκης, SKOV3-Luc, που εκφράζουν λουσιφεράση. Μετά την επιβεβαίωση της περιτοναϊκή διάχυση των κυττάρων με μη επεμβατική απεικόνιση, τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες θεραπείας: PBS, Ad-ΔΕ1-Timp2, Ad5 /3-CXCR4, και Ad5 /3-CXCR4-Timp2. Όλα τα ποντίκια απεικονίστηκαν εβδομάδα για να παρακολουθεί την ανάπτυξη του όγκου και θυσιάστηκαν φτάνοντας κάποια από τις προκαθορισμένες παραμέτρους, συμπεριλαμβανομένης της υψηλής επιβάρυνσης του όγκου και σημαντική απώλεια βάρους σε συνδυασμό με τις κλινικές ενδείξεις του πόνου και αγωνίας. ανάλυση επιβίωσης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία log-rank. Η διάμεση επιβίωση για την ομάδα PBS ήταν 33 ημέρες? για Ad-ΔΕ1-Timp2, 39 ημέρες? για Ad5 /3-CXCR4, 52,5 ημέρες? και για Ad5 /3-CXCR4-Timp2, 63 ημέρες. Η Timp2-οπλισμένοι CRAd καθυστερήσει την ανάπτυξη του όγκου και αύξησε σημαντικά την επιβίωση σε σύγκριση με το άοπλο CRAd. Αυτή η θεραπευτική δράση επιβεβαιώθηκε ότι προκαλείται μέσω αναστολής της ΜΜΡ9. Τα αποτελέσματα του

in vivo

μελέτη υποστηρίζουν τη μεταφραστική δυναμικό του Ad5 /3-CXCR4-Timp2 για τη θεραπεία ανθρώπινων ασθενών με προχωρημένο καρκίνο των ωοθηκών

Παράθεση:. Yang ΝΔ, Chanda D, Cody JJ , Rivera AA, Wæhler R, Siegal GP, et al. (2011) αναδιπλασιάζεται υπό κατάλληλες συνθήκες αδενοϊό που εκφράζει Timp2 αυξάνει την επιβίωση σε ένα μοντέλο ποντικού της Διάχυτη καρκίνου των ωοθηκών. PLoS ONE 6 (10): e25131. doi: 10.1371 /journal.pone.0025131

Συντάκτης: Τσαντ Creighton, Baylor College of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: May 27, 2011? Αποδεκτές: 25 Αυγ 2011? Δημοσιεύθηκε: 12 Οκτωβρίου 2011

Copyright: © 2011 Yang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Υγείας χορηγεί R01CA108585, Τ32 CA075930, και το Πανεπιστήμιο της Αλαμπάμα στο Μπέρμιγχαμ, Τμήμα Παθολογίας Ταμείου Έρευνας είναι ευπρόσδεκτη. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν ανταγωνιστικά συμφέροντα υπάρχουν

Εισαγωγή

ο καρκίνος των ωοθηκών είναι η κύρια αιτία των γυναικολογικών θανάτου από καρκίνο στις ΗΠΑ [1]. Η σημαντική νοσηρότητα και θνησιμότητα σε ασθενείς με αυτή την ομάδα των όγκων αποδίδεται στο γεγονός ότι οι ασθενείς παρουσιάζουν μόνο με μη ειδικά συμπτώματα στα αρχικά στάδια, η οποία αποκλείει τη διάγνωση του [2]. Η πλειονότητα των ασθενών που διαγιγνώσκονται σε στάδιο ΙΙΙ ή μετά, εφόσον ο καρκίνος έχει διαδοθεί σε ολόκληρο τον περιτοναϊκή κοιλότητα, η οποία οδηγεί σε κακή πρόγνωση. Οι τρέχουσες θεραπείες έχουν περιορισμούς, όπως το ποσοστό πενταετούς επιβίωσης έχει παραμείνει αμετάβλητο στο 50% κατά τη διάρκεια των τελευταίων τεσσάρων [3] δεκαετίες. Έτσι, τα νέα και αποτελεσματικά στοχευμένες θεραπείες για την ασθένεια απαιτούνται επειγόντως.

αναδιπλασιαζόμενος υπό κατάλληλες συνθήκες αδενοϊούς (Crads) είναι μία πολλά υποσχόμενη νέα κατηγορία θεραπευτικών, καθώς αυτοί οι ιοί έχουν τη δυνατότητα να επιλεκτικά και αυτο-διαρκώς αναπαράγουν και καρκίνος λύουν κύτταρα για να εξαλείψουν το σύνολο του όγκου [4]. Κλινικές δοκιμές με Crads έχουν αποδείξει μέχρι στιγμής την ασφάλεια των ογκολυτικού αδενοϊούς. Ωστόσο, μέτρια θεραπευτική αποτελεσματικότητα με Crads προτείνει περαιτέρω βελτιστοποίησης για την αποτελεσματική κλινική μετάφραση [5] που απαιτούνται. Μία στρατηγική αυξάνοντας την αποτελεσματικότητα κατά του όγκου χρησιμοποιεί το CRAd ως πλατφόρμα για την παροχή ενός θεραπευτικού διαγονιδίου, εκτός από την ογκολυτική δυναμικό τους [6]. Για το σκοπό αυτό, υποθέσαμε ότι η αποτελεσματικότητα ενός αντιγραφόμενο αδενοϊό θα μπορούσε να βελτιωθεί για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών εξοπλίζοντας με ένα γονίδιο το οποίο δρα στο μικροπεριβάλλον του ξενιστή, καθώς η αλληλεπίδραση μεταξύ των καρκινικών κυττάρων και μικροπεριβάλλοντος του έχει γίνει γνωστό να διαμορφώνουν την εξέλιξη του όγκου [7], [8], [9].

μεταλλοπρωτεϊνάσες μήτρας (MMPs) είναι μια διαφορετική οικογένεια πρωτεασών ικανά αποικοδόμησης πολλαπλά συστατικά της εξωκυττάριας ουσίας (ECM) [10]. Αποτελούν μία από τις ιδανικοί στόχοι για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών, καθώς απορρύθμισης τους έχει αποδειχθεί ότι συμβάλλει στην προώθηση της ανάπτυξης του όγκου, της αγγειογένεσης, εισβολής και μετάστασης [11]. Ειδικότερα, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 ρυθμίζονται προς τα άνω με συνέπεια στον καρκίνο των ωοθηκών και σχετίζονται με πτωχή πρόγνωση [12], [13]. Σημαντικός ρυθμιστής των MMPs είναι ενδογενείς αναστολείς τους, ο αναστολέας μεταλλοπρωτεϊνασών ιστού (ΤΙΜΡ), μια οικογένεια μικρών εκκρινόμενων πρωτεϊνών που δρουν με δέσμευση απευθείας σε ενεργές MMPs αναστέλλοντας έτσι τη δράση τους. Μέχρι σήμερα, έχουν τέσσερις TIMPs θηλαστικών έχουν εντοπιστεί [14]. Μεταξύ των μελών της οικογένειας ΤΙΜΡ, ΤΙΜΡ-2 είναι μοναδική στην ικανότητά της να αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου και την αγγειογένεση μέσω οδών επίσης ανεξάρτητη από ΜΜΡ αναστολή [15], [16], [17]. Υποθέσαμε ότι η παραγωγή Timp2 από κύτταρα μολυσμένα με τον ιό πρέπει να δεσμεύει και να αναστέλλει περίσσεια εξωκυττάριας MMPs και έτσι αναστέλλουν την εξέλιξη του όγκου μέσω τόσο ΜΜΡ-εξαρτώμενη και ΜΜΡ-ανεξάρτητες οδούς.

Προηγουμένως, έχουμε αναπτύξει και προσδιορίζεται το θεραπευτικό δυναμικό ένα Timp2 ενόπλων CRAd, Ad5 /3-CXCR4-Timp2, για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών [18]. Μεταγωγιμότητα επιλεκτικότητα του CRAd επιτεύχθηκε με γενετικά αντικαθιστώντας το κομβίο Ad5 με το κομβίο Ad3, η οποία παρακάμπτει την coxsackie και αδενοϊού υποδοχέα (CAR) και ανακατευθύνει σύνδεση με τον υποδοχέα Ad3, η οποία εκφράζεται με μεγαλύτερη αφθονία σε καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών [19], [ ,,,0],20]. Ο προαγωγός CXCR4 χρησιμοποιήθηκε για να μεσολαβήσει όγκου επιλεκτική αντιγραφή του φορέα, δεδομένου ότι εμφανίζει ανώτερη δραστικότητα σε αμφότερες τις εγκατεστημένος ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών και πρωτογενείς ιστούς που λαμβάνονται από ασθενή όγκου [18]. Περαιτέρω, η δραστικότητα του CXCR4 υποκινητής είναι ελάχιστες στο ήπαρ, το κύριο όργανο που είναι γνωστό ότι ρυθμίζουν συστημικώς απελευθερούμενου αδενοϊικοί φορείς [21]. Το γονίδιο Timp2 ενσωματώθηκε να αναστέλλει την εξέλιξη του όγκου. Πρόσφατα επικυρωμένη

in vitro

που Ad5 /3-CXCR4-Timp2 παράγεται λειτουργική Timp2, όπως υποδεικνύεται από την αναστολή της ενζυματικής αποικοδόμησης ζελατίνης με ενεργητική MMPs [18]. Για το Timp2 ενόπλων CRAd να είναι αποτελεσματική, ήταν σημαντικό το γεγονός ότι η έκφραση της Timp2 δεν βλάπτουν την αντιγραφή του ιού ή ογκολυτική δραστικότητα της. Έχουμε αποδείξει πρόσφατα ότι τόσο ιική αντιγραφή και ογκολυτική δραστικότητα δεν διακυβεύεται τόσο SKOV3.ip1 και OV-4 ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών εξοπλίζοντας με Timp2 [18]. Περαιτέρω, δείξαμε ότι υπήρχε εκλεκτικότητα στην αντιγραφή με τον υποκινητή CXCR4, όπως υποδεικνύεται από ένα υψηλότερο επίπεδο αντιγραφής στα καρκινικά κύτταρα των ωοθηκών, σε σύγκριση με τον έλεγχο ινοβλάστες. Προς μετάφραση αυτού του ιού σε κλινικό επίπεδο, χρησιμοποιήσαμε περαιτέρω τη χρήση ενός

ex vivo

μοντέλο συστήματος για να εξετάσει περαιτέρω αντιγραφή του ιού σε όγκους ιστούς που λαμβάνονται από ασθενείς με επιβεβαιωμένη σταδίου III και IV του καρκίνου των ωοθηκών. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης έδειξαν μια αντιγραφή σταθερά υψηλού επιπέδου με Ad5 /3-CXCR4-Timp2 [18]. Συλλογικά, αυτά τα δεδομένα ήταν πολύ ενθαρρυντικά, γεγονός που υποδηλώνει ότι Ad5 /3-CXCR4-Timp2 μπορεί να είναι αποτελεσματική για τη θεραπεία του προχωρημένου καρκίνου των ωοθηκών. Στην παρούσα μελέτη, επιδιώξαμε να προσδιοριστεί η θεραπευτική αποτελεσματικότητα του Ad5 /3-CXCR4-Timp2 σε μυϊκό ορθοτοπικό μοντέλο διαδίδονται καρκίνο των ωοθηκών. την εξέλιξη του όγκου παρακολουθήθηκε μέσω μη επεμβατική

in vivo

απεικόνισης. Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης έδειξαν σημαντική αύξηση στην επιβίωση μετά από αγωγή με Ad5 /3-CXCR4-Timp2, γεγονός που υποδηλώνει το δυναμικό της για την κλινική μετάφραση.

Υλικά και Μέθοδοι

Cells

Η λουσιφεράση πυγολαμπίδας που εκφράζουν ωοθηκών κυτταρική γραμμή αδενοκαρκινώματος SKOV3-Luc παρασχέθηκε ευγενώς από τον Dr. R. Negrin (Stanford Ιατρική Σχολή, Stanford, CA). Η ανθρώπινη πνεύμονα κυτταρική γραμμή καρκινώματος Α549 αγοράστηκε από την American Type Culture Collection (ATCC? Manassas, VA). Αμφότερες οι κυτταρικές σειρές καλλιεργήθηκαν σε ένα μίγμα 1:01 του Dulbecco τροποποιημένο μέσο Eagle (DMEM) και F-12 του Ham, συμπληρωμένο με 10% (ν /ν) θερμο-απενεργοποιημένο βόειο εμβρυϊκό ορό (FBS? Invitrogen, Carlsbad, CA) , L-γλουταμίνη (2 mM), πενικιλλίνη (100 U /ml) και στρεπτομυκίνη (100 μg /ml), στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα και σε 5% CO

2. Μέσα μαζικής ενημέρωσης και τα συμπληρώματα αγοράστηκαν από την Mediatech (Herndon, VA).

Κατασκευή και παραγωγή των ιών

Ad-ΔΕ1-Timp2 είναι ένα Ε1, Ε3-διαγράφονται ελλειμματικού αναπαραγωγής φορέα Ad5 που εκφράζει Timp2 υπό τον έλεγχο του υποκινητή CMV [22]. Ad5 /3-CXCR4, είναι μια CRAd με τον υποκινητή CXCR4 εισάγεται στην θέση Ε1Α μαζί με ένα τροπισμό-τροποποιημένη ίνα, που περιέχει τον άξονα ίνας Ad5 και ουρά που είχε τον τομέα κουμπί αντικατασταθεί με εκείνη του ιού Ad3 [23]. Το Ad5 /3-CXCR4-Timp2 κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας ένα πλήρους μήκους cDNA ανθρώπινης Timp2 όπως περιγράφηκε προηγουμένως [18]. Το ελλειμματικό αναπαραγωγής αδενοϊό, Ad-ΔΕ1-Timp2 πολλαπλασιάστηκε σε κύτταρα 293. Οι Crads, Ad5 /3-CXCR4 και Ad5 /3-CXCR4-Timp2 ενισχύθηκαν στο Α549 κυτταρική γραμμή. Όλοι οι ιοί καθαρίστηκαν με δύο γύρους φυγοκέντρησης πυκνότητας χλωριούχου καισίου. Οι τίτλοι των ιικών σωματιδίων και μολυσματικών μονάδων προσδιορίστηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24].

πρότυπο ορθοτοπικής ωοθηκών και διάνυσμα θεραπεία

Θηλυκά BALB /c ηυ /ηυ ποντικοί 6 έως 8 εβδομάδων ηλικίας ελήφθησαν από το National Cancer Institute-Frederick Περιοχή Ζωικής παραγωγής (Frederick, MD) και σε καραντίνα για 2 εβδομάδες. Τα ποντίκια διατηρούνται υπό συνθήκες άνευ παθογόνων σύμφωνα με την Αμερικανική Ένωση για τη Διαπίστευση των κατευθυντήριων γραμμών Εργαστήριο φροντίδα των ζώων. πρωτόκολλα των ζώων εξετάστηκαν και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Θεσμικών ζώων Φροντίδα και Χρήση του Πανεπιστημίου της Αλαμπάμα στο Μπέρμιγχαμ.

In vivo

οπτική απεικόνιση διεξήχθη στο μικρό πυρήνα εγκατάσταση απεικόνιση των ζώων στην Περιεκτική Κέντρο Καρκίνου του Πανεπιστημίου της Αλαμπάμα στο Μπέρμιγχαμ. Την ημέρα 0, τα ποντίκια ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκά (ί.ρ.) με 5 × 10

6 SKOV3-Luc κύτταρα σε 250 μΙ PBS και απεικονίζεται για βιοφωταύγεια για να ληφθεί γραμμή βάσης αναγνώσεις. Οκτώ ημέρες αργότερα, τα ποντίκια reimaged να εξασφαλίσει την εμφύτευση των όγκων και στη συνέχεια χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες: PBS, Ad-ΔΕ1-Timp2, Ad5 /3-CXCR4, και Ad5 /3-CXCR4-Timp2, με n = 10 ανά ομάδα. Κάθε ποντικός εγχύθηκε ί.ρ. με 2 × 10

8 IU της δεδομένης ιού σε 200 μΙ PBS, ή PBS μόνο. Όλοι οι ποντικοί απεικονίστηκαν για βιοφωταύγεια εβδομαδιαία μετά την ένεση των κυττάρων του όγκου για την παρακολούθηση της ανάπτυξης του όγκου. Όλοι οι ποντικοί παρακολουθήθηκαν ημερησίως για την καταγραφή επιβίωση. χρόνος επιβίωσης αντανακλά το χρόνο που απαιτείται για τα ζώα να φθάσουν και τα δύο από τις ακόλουθες παραμέτρους. Πρώτον, η κλινικές ενδείξεις πόνου ή δυσφορίας. Δεύτερον, κάποια από τα προκαθορισμένα μετρήσιμα τελικά σημεία όπως: απώλεια βάρους που υπερβαίνει το 15%, ή αύξηση του σωματικού βάρους που υπερβαίνει το 20% του σωματικού βάρους. Το βάρος των ζώων μετρήθηκε την ημέρα 0 και αποτιμώνται κάθε 3 ημέρες μέχρι το τέλος του πειράματος. δεδομένα επιβίωσης απεικονίζονται σε μια καμπύλη Kaplan-Meier, και διαφορετικές ομάδες συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το Log-rank (Mantel-Cox) δοκιμή (GraphPad Prism Λογισμικό V.5).

απεικόνισης βιοφωταύγεια για την ανίχνευση

στο vivo

λουσιφεράσης έκφραση

Ποντίκια απεικονίστηκαν την ημέρα 0 για βιοφωταυγείς σήμα μετά την ένεση του SKOV3-Luc κύτταρα για να ληφθεί μια βασική γραμμή ανάγνωσης του φορτίου του όγκου. Απεικόνιση έγινε και πάλι πριν από την πρώτη θεραπεία κατά την ημέρα 8 και στη συνέχεια εβδομαδιαία μέχρι θυσιάστηκαν ποντίκια. Εν συντομία, 150 mg /kg D-λουσιφερίνης εγχύθηκε ενδοπεριτοναϊκά, και τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν με ισοφλουράνη αναισθησία αερίου και τοποθετούνται σε ένα ελαφρύ-σφιχτό θαλάμου. Το φωτογραφικό (γκρι κλίμακας) εικόνα αναφοράς ελήφθη στα 10 λεπτά μετά D-λουσιφερίνης ένεση, και το βιοφωταύγειας εικόνα συνελέγη αμέσως μετά. Εικόνες ελήφθησαν με μια CCD ψύχεται στους -120 ° C, με τη χρήση της IVIS -100 Σύστημα Απεικόνισης (Xenogen Corp., Alameda, CA), με το οπτικό πεδίο σε ύψος 25 εκατοστά. Οι bioluminescent εικόνες που χρησιμοποιούνται ανοίγματα που κυμαίνονται από 1 έως 10 s, 1 f /stop, 4 binning, και ανοιχτό φίλτρο. λογισμικό απόκτησης δεδομένων κλιμακώνεται έτσι ώστε δεν υπάρχουν pixels ήταν κορεσμένα κατά τη συλλογή εικόνων. Οι εικόνες bioluminescent και γκρι-κλίμακας επικαλύπτονται χρησιμοποιώντας LivingImage λογισμικού. Ζώντας Λογισμικό εικόνας (Xenogen, Alameda, CA) χρησιμοποιήθηκε επίσης για να αποκτήσει μια εικόνα ψευδοχρωμάτων που αντιπροσωπεύει ένταση βιοφωταύγεια (μπλε, τουλάχιστον έντονο, και κόκκινο, πιο έντονη). Περιοχές ενδιαφέροντος συντάχθηκαν γύρω από την ε.π. όγκων, και οι συνολικές μετρήσεις (φωτόνια) έχουν αθροίζονται για ολόκληρη την περιοχή του όγκου. Οι συνολικές μετρήσεις κανονικοποιήθηκαν προς χρόνος λήψης εικόνας (φωτόνια /sec). Οι στατιστικές διαφορές του μεγέθους του όγκου μεταξύ των ομάδων εκτιμήθηκαν με το t τεστ Student. Ένα

σ

αξία των & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέσες τιμές ± SD.

Ανοσοϊστοχημεία

Οι ποντικοί θυσιάστηκαν σε υψηλό φορτίο του όγκου με προκαθορισμένες παραμέτρους ορίζονται ως ανωτέρω. Κατά τη στιγμή της θυσίας, νεκροψίες πραγματοποιήθηκαν σε 3 ποντίκια από κάθε ομάδα θεραπείας, από τα οποία συλλέχθηκαν οι όγκοι και μείζονα όργανα και στερεώνονται σε μπλοκ παραφίνης. Εν συντομία, τομές παραφίνης ξενομοσχευμένου όγκων ανθρωπίνων ωοθηκών αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και ενυδατώθηκαν μέσω διαβαθμισμένης αλκοόλης. Το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη σε κιτρικό ρυθμιστικό (ρΗ 6,0), κάτω από ατμό για 20 λεπτά. Οι τομές ψύχεται σε θερμοκρασία δωματίου, και ενδογενούς υπεροξειδάσης απομακρύνθηκε χρησιμοποιώντας 0,3% Η

2O

2 σε μεθανόλη για 30 λεπτά και αποκλείστηκαν με 5% BSA για 30 λεπτά. Τομές ιστού στη συνέχεια επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C. Οι τομές πλύθηκαν σε ισοτονικό ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού που περιείχε 0.05% Tween-20 (PBST) και πάλι επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου με δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο με βιοτίνη κατσίκας αντι-κατσίκα /αντι-ποντικού για 2 ώρες. Μετά την πλύση, οι τομές επωάστηκαν με στρεπταβιδίνη συζευγμένη με υπεροξειδάση αρμορακίας για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από μια άλλη πλύση με PBST, ανοσοανίχνευση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας 3,3′-διαμινοβενζιδίνη-H

2O

2 (Vector Labs) και με αιματοξυλίνη.

Αποτελέσματα

Ενεργοποίηση με Timp2 καθυστερήσει την ανάπτυξη του όγκου

in vivo

η

Για να αξιολογηθεί η θεραπευτική αποτελεσματικότητα του Ad5 /3-CXCR4-Timp2 σε μια κλινικά σχετική

in vivo

μοντέλο, δημιουργήσαμε ορθοτοπικώς διάδοση των ωοθηκών καρκίνο με έγχυση θηλυκών γυμνών ποντικών με ανθρώπινη SKOV3-Luc κύτταρα ενδοπεριτοναϊκώς (ip). Μια λουσιφεράσης που εκφράζουν σταθερή κυτταρική γραμμή χρησιμοποιήθηκε για την παρακολούθηση της θεραπευτικής αποτελεσματικότητας των θεραπειών με μη επεμβατική απεικόνιση

in vivo

. Οκτώ ημέρες μετά τη χορήγηση των καρκινικών κυττάρων, τα ποντίκια επανα-απεικονίστηκαν να εξασφαλίσει την εμφύτευση των όγκων και χωρίζονται σε τέσσερις ομάδες θεραπείας, με 10 ποντικούς ανά ομάδα. Οι ομάδες ελέγχου έλαβαν PBS, ένα ελλιπές φορέα αντιγραφής που εκφράζουν Timp2 (Ad-ΔΕ1-Timp2), ή ένα CXCR4 προαγωγό ρυθμίζεται CRAd με μια χιμαιρική ίνα Ad5 /3 (Ad5 /3-CXCR4). Η θεραπευτική ομάδα έλαβε μία Timp2 ένοπλες CXCR4 υποκινητή βασίζεται CRAd με μια χιμαιρική ίνα Ad5 /3 (Ad5 /3-CXCR4-Timp2) (Σχ. 1). Όλοι οι ποντικοί απεικονίστηκαν μετά ε.π. ενέσεις D-λουσιφερίνης σε εβδομαδιαία βάση. Μια ομάδα αντιπροσωπευτικών εικόνων φαίνεται στο Σχ. 2Α, ενώ ποσοτικό προσδιορισμό της βιοφωταυγούς σημάτων παρουσιάζεται στο Σχ. 2Β. Χαμηλή bioluminescent σήματα SKOV3-Luc κύτταρα ανιχνεύθηκαν ήδη 8 ημέρες μετά την ένεση των κυττάρων του όγκου, και ήταν σχετικά σταθερή μεταξύ των τεσσάρων ομάδων. Μέχρι την ημέρα 22, υπήρχε σημαντική αύξηση όγκου στην ομάδα PBS και Ad-ΔΕ1-Timp2 ομάδα που υπέστη αγωγή. Σε αντίθεση, οι ομάδες που έλαβαν θεραπεία με τις Crads είχαν σημαντική αναστολή στην ανάπτυξη του όγκου. Η ομάδα που υπέστη αγωγή με τον ιό στόχο, Ad5 /3-CXCR4-Timp2, εμφάνισαν υποχώρηση του όγκου την ημέρα 22. Κατά την ημέρα 30, υπήρχε σημαντική επιβάρυνση του όγκου στην ομάδα PBS, οι ποντικοί εμφάνισαν μια σημαντική αύξηση στην κοιλιακή περίμετρο και είχαν αρχίσει να παρουσιάζουν σημάδια της επιβάρυνσης λόγω ασθενειών. Σε αντίθεση, η ανάπτυξη του όγκου ανεστάλη σημαντικά σε όλες τις ομάδες που έλαβαν θεραπεία με ιούς (ρ & lt? 0.001). Μέχρι την ημέρα 36, η πλειονότητα των ποντικών στην ομάδα PBS είχαν πεθάνει από ένα βαρύ φορτίο όγκου. Σε αυτό το χρονικό σημείο, τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με Ad-ΔΕ1-Timp2, άρχισαν να εμφανίζουν σημαντική επιβάρυνση του όγκου. Ωστόσο, και οι δύο ομάδες που υπέστησαν αγωγή με Crads είχαν σημαντικά μικρότερη bioluminescent σήματος (ρ & lt? 0,001), υποδεικνύοντας βραδύτερο ρυθμό ανάπτυξης του όγκου. Επιπλέον, φορτίο όγκου στην κοόρτη των ποντικών που έλαβαν θεραπεία με Ad5 /3-CXCR4-Timp2, η ένοπλη CRAd, ήταν σημαντικά μικρότερη σε σύγκριση με το βάρος του όγκου σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με αμφότερα Ad5 /3-CXCR4 και άοπλου CRAd (ρ & lt? 0,01 ? Εικ. 2Β). Μια παρόμοια τάση στην επιβίωση μετά από αγωγή με διαφορετικούς φορείς παρατηρήθηκε σε δύο πιλοτικές μελέτες με λιγότερο αριθμό των ζώων ανά ομάδα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Συλλογικά, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι και οι δύο ιική αντιγραφή και οπλισμού με Timp2 συνέβαλε στην επιβράδυνση της εμφάνισης ανάπτυξης όγκου.

Adwt300, είναι η άγριου τύπου Ad5 ιό. Ad-ΔΕ1-Timp2 είναι μια Ε1-, Ε3-διαγράφεται ελλειμματικού αναπαραγωγής φορέα Ad5 η οποία εκφράζει Timp2 υπό τον έλεγχο του υποκινητή CMV σε Ε1. Ad5 /3-CXCR4 είναι άοπλη CRAd με έναν υποκινητή CXCR4 σε Ε1 να περιορίσει την αντιγραφή του ιού στα καρκινικά κύτταρα σε συνδυασμό με ένα τροποποιημένο ίνα Ad5 /3 που περιέχει τον άξονα και την ουρά του Ad5 ίνα και το κομβίο ίνα Ad3. Ad5 /3-CXCR4-Timp2 είναι ένα CRAd με τον ανάδοχο του CXCR4 στο Ε1, οπλισμένοι με Timp2 στην περιοχή E3b και της προαναφερθείσας F5 /3 τροποποιημένων ινών.

Η

Διάχυτη όγκοι συστάθηκε με την έγχυση 5 × 10

6 SKOV3-Luc κύτταρα ip σε θηλυκούς αθυμικούς γυμνούς ποντικούς την ημέρα 0. Την ημέρα 8, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή είτε με μία ί.ρ. ένεση του PBS, ή 2 × 10

8 IU του Ad-ΔΕ1-Timp2, Ad5 /3-CXCR4, και Ad5 /3-CXCR4-Timp2, αντίστοιχα. επίπεδα βιοφωταύγεια μετρήθηκαν σε εβδομαδιαία βάση. (Α), ψευδοχρωμάτων εικόνα που αντιπροσωπεύει ένταση βιοφωταύγεια τις ημέρες 8, 22, 30 και 36. (Β), η ένταση βιοφωτισμός από την κοιλιακή περιοχή ποσοτικοποιήθηκε και κανονικοποιημένη, και οι μετρήσεις μέσης φωτονίων ανά δευτερόλεπτο για κάθε ομάδα παρουσιάζεται για τις δεδομένες ημέρες . Τα δεδομένα αναφέρονται ως μέσος όρος ± SD για κάθε ομάδα θεραπείας. * Ρ & lt?. 0.05

Η

Οπλισμός με Timp2 αυξημένη επιβίωση

Όλα τα ποντίκια στη συνέχεια παρακολουθήθηκαν για επιβίωση όπως φαίνεται στο Σχ. 3Α. Ο διάμεσος χρόνος επιβίωσης αυξήθηκε από 33 ημέρες, για την ομάδα PBS, σε 39 ημέρες στο κοόρτη ένεση με το μη αναδιπλασιαζόμενο φορέα που εκφράζει Timp2 (Ad-ΔΕ1-Timp2), αυτή η διαφορά ήταν στατιστικά σημαντική (ρ & lt? 0,03). Η ομάδα που έλαβαν θεραπεία με το άοπλο CRAd (Ad5 /3-CXCR4) είχαν διάμεσο χρόνο επιβίωσης των 52,5 ημερών, ενώ η ομάδα που έλαβαν θεραπεία με το Timp2 ένοπλες CRAd (Ad5 /3-CXCR4-Timp2) είχαν διάμεσο χρόνο επιβίωσης 63 ημερών ( Σχήμα 3Β), αυτή η διαφορά με επίσης στατιστικά σημαντική (ρ & lt?. 0.002). Συνοπτικά, όπλιση με Timp2 φαίνεται να είναι χρήσιμες για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών διαδίδονται, όπως αυξημένη επιβίωση

in vivo

.

Τα ποντίκια παρακολουθήθηκαν για επιβίωση. Τα δεδομένα επιβίωσης απεικονίζονται σε μια καμπύλη Kaplan-Meier (Α). Η θεραπεία με Ad5 /3-CXCR4-Timp2 ενισχύεται σημαντικά την επιβίωση σε σύγκριση με τη θεραπεία με Ad-ΔΕ1-Timp2, Ad5 /3-CXCR4, ή PBS (ρ & lt? 0,05). (Β), διάμεση επιβίωση σε ημέρες για κάθε ομάδα θεραπείας.

Η

Timp2 εκφράζεται στους όγκους των ενόπλων ιών

Για να προσδιοριστεί εάν η αυξημένη επιβίωση δει στο Timp2 ενόπλων CRAd σε σύγκριση με το άοπλος CRAd οφειλόταν στην διαμόρφωση του μικροπεριβάλλοντος με Timp2, η έκφραση της Timp2 εξετάστηκε πρώτα σε όγκους αποκόπηκε από κάθε ομάδα θεραπείας κατά την αυτοψία. Όπως φαίνεται στο Σχ. 4, οι όγκοι αποκόπηκαν από τις ομάδες που έλαβαν θεραπεία με PBS και Ad5 /3-CXCR4 ήταν αρνητικά για έκφραση Timp2. Αποτέλεσμα της ανοσοϊστοχημείας έδειξαν ότι σε όγκους αποκόπηκε από κοόρτη χορηγήθηκε με την Ad-ΔΕ1-Timp2, η έκφραση Timp2 ήταν ελάχιστη και εμφανίστηκε περιορίζεται στην περιφέρεια του όγκου. Αυτό δεν ήταν απροσδόκητο, καθώς Ad-ΔΕ1-Timp2 είναι ένας μη-αναδιπλασιαζόμενος φορέας και δεν αναμενόταν να διαδώσει εντός του όγκου αποτελεσματικά. Σε αντίθεση, οι όγκοι από ποντικούς που έλαβαν θεραπεία με Ad5 /3-CXCR4-Timp2 παρουσίασαν ενισχυμένη χρώση Timp2 σε όλο τον όγκο, υποδεικνύοντας ότι αυτή η ογκολυτική ιός ήταν αποτελεσματική στη μολύνουν και αναπαράγει όλη τη όγκου.

Κατά τον χρόνο της θυσίας των ποντικών λόγω του φορτίου του όγκου, οι όγκοι συλλέχθηκαν από έδειξε ομάδες θεραπείας και εξετάστηκαν για έκφραση του Timp2 με ανοσοϊστοχημεία.

η

Timp2 ενόπλων CRAd μείωσε το επίπεδο ενεργού ΜΜΡ

Timp2 είναι ένας γνωστός αναστολέας της ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9. Ως εκ τούτου, η χρώση για την ενεργό ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 διεξήχθη για να προσδιοριστεί εάν επηρεάστηκαν τα επίπεδα. Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης έδειξαν ότι οι όγκοι από τις ομάδες που έλαβαν θεραπεία με PBS, Ad5 /3-CXCR4, και Ad-ΔΕ1-Timp2, όλες εμφάνισαν υψηλά επίπεδα ενεργού ΜΜΡ2. Σε αντίθεση, οι όγκοι από την ομάδα που υποβλήθηκε σε επεξεργασία με Ad5 /3-CXCR4-Timp2 είχαν πολύ χαμηλά επίπεδα ΜΜΡ2. Ένα πανομοιότυπο μοτίβο ανιχνεύθηκε επίσης σε έκφραση ΜΜΡ9 με ανοσοϊστοχημεία. Ομάδες που έλαβαν θεραπεία με PBS, Ad5 /3-CXCR4, και Ad-ΔΕ1-Timp2, όλα παρουσίασαν ανοσολογική αντίδραση για την ενεργή ΜΜΡ9. Σε αντίθεση, οι όγκοι από την ομάδα που υποβλήθηκε σε επεξεργασία με Ad5 /3-CXCR4-Timp2 είχαν πολύ χαμηλά επίπεδα ενεργού έκφρασης ΜΜΡ9 (Εικ. 5). Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι Timp2 που εκκρίνεται από την ένοπλη CRAd ήταν επίσης αποτελεσματική στην αναστολή ΜΜΡ2 και ΜΜΡ9 δραστηριότητες.

Κατά τον χρόνο της θυσίας των ποντικών λόγω του φορτίου του όγκου, οι όγκοι συλλέχθηκαν από ενδεικνυόμενη ομάδες θεραπείας και εξετάστηκαν για έκφραση του MMP-9 με ανοσοϊστοχημεία.

η

Timp2-ένοπλες CRAd ανέστειλε την αγγειογένεση

Τέλος, οι όγκοι εξετάστηκαν για την έκφραση του CD31, ένα δείκτη για την αγγειογένεση. Κοόρτεις αγωγή με PBS, Ad-ΔΕ1-Timp2, και Ad5 /3-CXCR4, είχε μεγάλα σκάφη διαμέτρου με ελάχιστη ανοσοαντιδραστικότητα επένδυση τα ενδοθηλιακά τοιχώματα σε σύγκριση με κλάσεων που έλαβαν θεραπεία με Ad5 /3-CXCR4-Timp2 (Εικ. 6).

όγκου ομίλους στην περιοχή της κοιλιάς συλλέχθηκαν κατά τη διάρκεια της θυσίας των ζώων από τα υποδεικνυόμενα ομάδες θεραπείας και σταθερό. Πέντε μΜ τμήματα του μπλοκ παραφίνης από ιστούς όγκων βάφτηκαν με ανθρώπινο αντίσωμα CD31 για την ανίχνευση αγγείων του αίματος.

Η

Συζήτηση

Η σημασία της αλληλεπίδρασης μεταξύ καρκινικών κυττάρων και μικροπεριβάλλοντος στη διαμόρφωση του όγκου εξέλιξη έχει αναγνωριστεί προ πολλού [25]. Στην παθογένεση του καρκίνου των ωοθηκών, ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 ρυθμίζονται προς τα άνω με συνέπεια [12]. Επιπλέον, τα αυξημένα επίπεδα αυτών των MMPs συσχετίζεται αρνητικά με την επιβίωση, όπως αυτές που σχετίζονται με προχωρημένο στάδιο, υψηλής ποιότητας ασκίτη και θετική (μεταστατικό) λεμφαδένας [13]. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι οι ΜΜΡ είναι έγκυρα θεραπευτικοί στόχοι για την αγωγή του καρκίνου των ωοθηκών. Ένα βασικό ρυθμιστή των MMPs είναι ενδογενείς αναστολείς τους, TIMPs. Τέσσερις TIMPs θηλαστικών έχουν εντοπιστεί μέχρι σήμερα, μεταξύ των οποίων Timp2 έχει μελετηθεί πολύ εκτεταμένα λόγω της ικανότητάς της να αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου και την αγγειογένεση με μια ποικιλία μηχανισμών ανεξάρτητων άμεσης ΜΜΡ-αναστολής [15], [16], [17]. Timp2 μπορούν να αναστείλουν τον πολλαπλασιασμό των ενδοθηλιακών κυττάρων μέσω της επαγωγής της δραστηριότητας φωσφατάσης τυροσίνης πρωτείνης [17]. Timp2 αναστέλλει επίσης την ανάπτυξη του όγκου και την αγγειογένεση μέσω της αύξησης δραστικότητα του ενεργοποιείται από μιτογόνο πρωτεϊνική φωσφατάση κινάση 1 [15]. Σε μια προσπάθεια να αναπτυχθεί μια επιτυχημένη CRAd προσανατολισμένη προς τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών διαδίδονται, προτείναμε ότι εξοπλίζει με Timp2 θα αυξάνουν την θεραπευτική αποτελεσματικότητα του CRAd με αναστολή της προόδου των όγκων και από τις δύο ΜΜΡ-εξαρτώμενη και ΜΜΡ-ανεξάρτητες οδούς.

στην πρόσφατη μελέτη μας, η οποία χαρακτηρίζεται και αξιολόγησε την αποτελεσματικότητα του Ad5 /3-CXCR4-Timp2

in vitro

. Επιβεβαιώσαμε ότι η έκφραση Timp2 δεν επηρέασε δυσμενώς την ιική αντιγραφή ή ογκολυτική δραστικότητα του ιού. Επιπλέον, η επιλεκτική αντιγραφή επιτεύχθηκε με τον προαγωγό CXCR4. Επικύρωση του Ad5 /3-CXCR4-Timp2 σε δείγματα πρωτογενούς όγκου από πέντε ασθενείς με επιβεβαιωμένη σταδίου III ή των ωοθηκών IV, αποκάλυψε ένα σταθερό υψηλό επίπεδο αντιγραφής σε σύγκριση με τις άλλες ιούς ελέγχου. Συλλογικά, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν το δυναμικό της Ad5 /3-CXCR4-Timp2 για τη θεραπεία του προχωρημένου καρκίνου των ωοθηκών [18].

Στην παρούσα μελέτη, επιδιώξαμε να προσδιοριστεί η αποτελεσματικότητα του Ad5 /3-CXCR4- Timp2

in vivo

. Η μη επεμβατική απεικόνιση βιοφωταύγειας παρέχει ένα ισχυρό εργαλείο που επιτρέπει την διαμήκη παρακολούθηση της ανάπτυξης του όγκου σε ποντικούς. Επιπλέον, μας επέτρεψε να χρησιμοποιήσει ένα σύστημα μοντέλο που είναι κλινικά σημαντική. Στην πλειονότητα των περιπτώσεων, ο καρκίνος των ωοθηκών διαγιγνώσκεται σε προχωρημένο στάδιο, όπου ο καρκίνος έχει διαδοθεί σε ολόκληρο τον περιτοναϊκή κοιλότητα, έτσι, χρησιμοποιώντας μια υποδόρια ζωικό μοντέλο για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας, ενώ βολική, δεν αντικατοπτρίζει τη φυσική κλινική πρόοδο του ασθένεια. Ως εκ τούτου, για την ίδρυση διαδίδονται όγκους με ε.π. ένεση SKOV3-Luc κύτταρα μαζί με την απεικόνιση μας έδωσε τη δυνατότητα να χρησιμοποιούν ένα κλινικά έγκυρο σύστημα μοντέλο που μπορεί με μεγαλύτερη ακρίβεια και αποτελεσματικά προβλέψει την μεταγραφική αξία του Ad5 /3-CXCR4-Timp2. Επιπλέον, αρκετές μελέτες έχουν δείξει την ευαισθησία και την εγκυρότητα της bioluminescent απεικόνισης στο ε.π. μοντέλα όγκων [26], [27], [28].

Η θεραπεία με Timp2 ένοπλες CRAd σημαντικά αυξημένη επιβίωση σε σύγκριση με το άοπλο CRAd, ωστόσο η αύξηση δεν ήταν ισχυρή. Στην παρούσα μελέτη, ιοθεραπείας δόθηκε με μία μόνο ένεση του ιού χαμηλή δόση την ημέρα 8 μετά την εμφύτευση του όγκου. Αντίθετα, πολλές

in vivo

πειράματα που εξετάζουν την αποτελεσματικότητα έναρξη της θεραπείας είτε πριν ή κατά την ίδια ημέρα της ένεσης του όγκου. Επιπλέον, τα ιικά δόσεις που χρησιμοποιήθηκαν ήταν κατά τουλάχιστον μίας έως δύο κούτσουρα υψηλότερη και παραδόθηκαν μέσω πολλαπλές χορηγήσεις του ιού [29], [30], [31], [32]. Ο κύριος σκοπός του περιορισμού της δόσης φορέας στην παρούσα μελέτη ήταν να δημιουργήσει ένα ασφαλές θεραπευτικό δείκτη. Δεδομένου ότι τα γυμνά μοντέλα ποντικού που χρησιμοποιείται στην προκλινική αξιολόγηση των πειραματικών θεραπειών του καρκίνου των ωοθηκών δεν έχουν ένα λειτουργικό ανοσοποιητικό σύστημα, η αύξηση της δόσης φορέα στο υψηλότερο δυνατό επίπεδο για την επίτευξη ενός θεραπευτικού αποτελέσματος μπορεί να μην είναι κατάλληλη για παρέκταση στον άνθρωπο ως το υψηλότερο διάνυσμα δόση αποτελέσματα στην ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος που προκαλεί σοβαρές παρενέργειες. Ωστόσο, από τα δεδομένα σε αυτήν την μελέτη, είναι κατανοητό ότι με μια υψηλότερη δόση ή ένα σχήμα από πολλαπλές δόσεις, η θεραπευτική αποτελεσματικότητα θα μπορούσε να ενισχυθεί περαιτέρω. Μια πιθανή μειονέκτημα με επαναλαμβανόμενη χορήγηση του ιού είναι ότι η ασυλία θα μπορούσε να γίνει ένα σημαντικό πρόβλημα και να παρεμποδίσει θεραπευτική αποτελεσματικότητα. Πρόσφατη δημοσίευση από

Hemminki et al

δείχνουν ότι ακόμα και με την παρουσία σημαντικών ανοσία κατά Ad5, θα μπορούσε κανείς να παρακάμψει την ασυλία αυτή την απλή χρήση ενός ορότυπου που είναι λιγότερο διαδεδομένες στον πληθυσμό, όπως Ad3 και ως εκ τούτου την επίτευξη θεραπευτικής αποτελεσματικότητας χωρίς να χρειάζεται να αυξηθεί το ιικό δόση. Η αρχή αυτή θα μπορούσε να εφαρμοστεί εύκολα να επαναλάβει τις διοικήσεις του ιού, όπου και αν ανοσία αναπτύσσεται στον ορότυπο που χρησιμοποιείται, τότε μπορεί κανείς να αλλάξει απλά τη ραχοκοκαλιά του ιού σε μια λιγότερο διαδεδομένη ορότυπο [33]. Επιπλέον, αύξηση του ιικού αποτελεσματικότητα θα μπορούσε επίσης να επιτευχθεί με μια προσέγγιση πολλαπλών τροπικότητα χρησιμοποιώντας ακτινοβολία ή χημειοθεραπεία ως ανοσοενισχυτικό θεραπείες [34], [35], [36]. Με την τρέχουσα πλατφόρμα μας της στόχευσης μέσω Ad5 /3 είναι κατανοητό ότι θα μπορούσε ενδεχομένως να μολύνει και να αντιγράφονται σε ανθρώπινα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος του ιού, η έκταση της οποίας δεν μπορεί να καθοριστεί σε αυτό το μοντέλο, όπως ανθρώπινο αδενοϊό δεν αντιγράφονται σε ιστό ποντικού και αθυμικών γυμνών ποντίκια στερούνται Τ κυττάρων. Ωστόσο, αυτή η δυνητική παρενέργεια θα μπορούσε να μετριαστεί με την αλλαγή του τροπισμού του ιικού πλατφόρμας. Perreau

κ.ά.

έδειξαν μειωμένη μόλυνση των δενδριτικών κυττάρων με κυνικός αδενοϊός ορότυπος 2 (ΟΑν-2) ρυθμιστή ινών [37]. Έτσι, αλλάζοντας το κουμπί ινών από Ad5 /3 για να Ad-ΟΑν2, μπορούμε να αποτρέψουμε την μεταγωγή των δενδριτικών κυττάρων. Επιπλέον, αυτό επιτρέπει να διατηρήσει τους υποκινητές CXCR4 καθώς παρουσιάζει υψηλή δραστηριότητα σε κύτταρα όγκου.

Η βιολογία του όγκου, η φύση της περιτοναϊκή διάχυση του καρκίνου των ωοθηκών, καθώς και οι ρόλοι παράδοξο των MMPs και ΤΙΜΡ σε πρόοδο του καρκίνου προσθέτει περαιτέρω πολυπλοκότητα στην αποτελεσματική θεραπεία της νόσου. Είναι καλά τεκμηριωμένο ότι η αυξημένη ΜΜΡ-2 και ΜΜΡ-9 έκφραση στον καρκίνο των ωοθηκών συσχετίζεται αρνητικά με πρόγνωση και την επιβίωση [12], [13], [38], [39], [40], [41]. Ωστόσο, οι συγκεκριμένοι ρόλοι των MMPs στην πρόοδο του καρκίνου των ωοθηκών δεν είναι σαφώς καθορισμένες. Οι μελέτες δείχνουν ότι η ΜΜΡ-2 είναι κυρίως σημαντική σε πρώιμο ογκογένεση κινώντας μετάσταση μέσω της ενίσχυσης της προσκόλλησης των καρκινικών κυττάρων των ωοθηκών στο περιτόναιο [42]. Έτσι, θεραπείες για να εμποδίσει μια φορά αποδεικνύεται μετάσταση είναι αναποτελεσματικά. Ωστόσο, άλλες αναφορές υποστηρίζουν τον ρόλο της ΜΜΡ-9 στην αύξηση του όγκου και την αγγειογένεση [43]. Οι ρόλοι των MMPs και TIMPs στον καρκίνο των ωοθηκών συγχέονται περαιτέρω με ανοσοϊστοχημικές μελέτες που εξέτασαν την έκφραση της Timp2 σε ιστούς του καρκίνου των ωοθηκών. Ενώ ορισμένες ομάδες έχουν αναφέρει χαμηλή έκφραση του Timp2 σε πρωτογενείς όγκους των ωοθηκών [38], άλλοι έχουν δει αυξημένη έκφραση Timp2 σε ιστούς του καρκίνου των ωοθηκών, προτείνοντας ότι Timp2 συμβάλλει στην εξέλιξη του όγκου, εν μέρει μέσω της ενεργοποίησης του προ-ΜΜΡ2 και η αναστολή της αντι- δραστηριότητες του όγκου των ΜΜΡ [39], [41]. Σε αντίθεση, αρκετές μελέτες σε ζώα χρησιμοποιώντας ιική παράδοση Timp2 έχουν δείξει τη χρησιμότητά του για την καταστολή της ανάπτυξης του όγκου, τη μετανάστευση και τη μετάσταση σε διάφορα μοντέλα καρκίνου του [44], [45], [46], [47], [48]. Συλλογικά οι μελέτες αυτές δείχνουν ότι ίσως επιδράσεις της Timp2 για την προαγωγή του όγκου ή καταστολή εξαρτώνται από το χρονοδιάγραμμα και τον συγκεκριμένο τύπο όγκου. Αντί να μη ειδική αναστολή των MMPs, είναι ίσως πιο χρήσιμο να αναστέλλουν ειδικά διαφορετικά MMPs κατά τη διάρκεια των σταδίων της εξέλιξης του όγκου.

Οι αναδυόμενες δεδομένα από κλινικές, παθολογικές, και μοριακές γενετικές μελέτες προτείνουν ένα νέο μοντέλο για την ωοθηκική καρκινογένεση, όπου ωοθηκών καρκίνος ταξινομείται σε δύο διακριτές ομάδες, τύπου Ι και II [49]. όγκοι τύπου Ι είναι κλινικά νωχελικός, όπως είναι βραδεία και γενικά περιορίζεται στην ωοθήκη κατά τη διάγνωση. Αντίθετα, οι όγκοι τύπου II είναι κλινικά επιθετική, παρούσα σε προχωρημένο στάδιο και πιστεύεται ότι προέρχονται

de novo

, ως πρόδρομος βλάβες δεν έχουν προσδιοριστεί. Οι όγκοι τύπου II, αντιπροσωπεύοντας το 70% του καρκίνου των ωοθηκών, χαρακτηρίζονται από μεταλλάξεις του ΤΡ53 σε 80% των περιπτώσεων. Αυτή η νέα δεδομένα δείχνουν ότι η p53 θα μπορούσε δυνητικά να είναι ένα θεραπευτικό στόχο να εξοπλίσει τον ιό για τη θεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών. έχουν Crads οπλισμένοι με ρ53 έχουν δειχθεί

in vitro

να ενισχυθεί ογκόλυσης στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας [50] και μια ποικιλία άλλων κυτταρικών γραμμών καρκίνου [51]. Ένα άλλο πιθανό θεραπευτικό στόχο είναι CXCR4, ο μόνος υποδοχέας χημειοκίνης βρέθηκε να εκφράζεται σε καρκίνο των ωοθηκών [52].