Αφηρημένο

Σας παρουσιάζουμε ένα

σε-πυριτιο-to-in-vitro

προσέγγιση για την ανάπτυξη σαφώς καθορισμένες, αυτο-συναρμολογούνται, άκαμπτο-πυρήνα πολυμερές (Polybee) νανο-αρχιτεκτονική ελεγχόμενη παράδοση βασική συνιστώσα της δηλητήριο της μέλισσας, μελιττίνη. Μια ανταγωνιστική σύνθεση με λιπίδια έγκλειστα (Lipobee) άκαμπτα πυρήνα μικυλλίου επίσης συντίθεται. Σε μια σειρά διαδοχικών πειραμάτων, δείχνουμε πώς νανοκλίμακας χημεία επηρεάζει την παράδοση των τοξινών δηλητήριο για υποχώρηση του καρκίνου και να βοηθήσει να αποφύγει συστημική disintegrity και κυτταρική βλαβερότητας. Μια σχετικά ασθενέστερη σύνδεση της μελιττίνης στην περίπτωση των νανοσωματιδίων με βάση λιπίδιο συγκρίνεται με τα πολυμερικά σωματίδια αποκαλύπτεται από ελαχιστοποίηση ενέργειας και σύνδεσης μελέτες, οι οποίες υποστηρίζονται από βιοφυσικές μελέτες. Για πρώτη φορά, τα αποτελέσματα του πειράματος των συγγραφέων δείχνουν ότι η μελιττίνη μπορεί να διαδραματίσει σημαντικό ρόλο στις διαδικασίες σύνδεσης-αποσύνδεσης του DNA, το οποίο μπορεί να είναι μια εύλογη οδό για την αντικαρκινική τους δράση

Παράθεση:. Misra SK, Ye Μ, Kim S, Παν D (2015) Ορίζεται νανοκλίμακας Χημεία Επιρροές Παράδοση πεπτιδο-Τοξίνες για τον καρκίνο θεραπεία. PLoS ONE 10 (6): e0125908. doi: 10.1371 /journal.pone.0125908

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Mandé Holford, City University της Νέας Υόρκης-Graduate Center, Ηνωμένες Πολιτείες

Ελήφθη: 22, Οκτ 2014? Αποδεκτές: 23 Μαρτίου του 2015? Δημοσιεύθηκε: 1 Ιούν 2015

Copyright: © 2015 Misra et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από το Πανεπιστήμιο του Ιλλινόις. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

πεπτίδια άμυνα του ξενιστή (τονωθεί) είναι μια κατηγορία εξελικτικά συντηρημένη ουσιών του έμφυτη ανοσολογική απόκριση που αναγνωρίζονται ως επικεφαλής παίκτες στο αμυντικό σύστημα που βρέθηκαν μεταξύ όλων των κατηγοριών της ζωής. Συνήθως είναι αμφιπαθείς, έχουν ένα καθαρό θετικό φορτίο (γενικά +2 να +9) και είναι σύντομες σε αλληλουχία (10-100 αα)? Επιπλέον, να τονωθεί έχουν πρόσφατα διερευνηθεί για την αντικαρκινική ιδιότητα τους [1-4]. Αυτή η κατηγορία πεπτιδίων διαθέτει πολλά χαρακτηριστικά ιδανική για εφαρμογές αντικαρκινική θεραπεία, όπως i) υψηλή διαλυτότητα στο νερό, ii) ένα ευρύ φάσμα της κυτταροτοξικότητας, και iii) την ικανότητα να ξεπεράσει την αντίσταση σε πολλά φάρμακα, η οποία έχει αναπτυχθεί σε καρκινικά κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με τα συμβατικά φάρμακα χημειοθεραπείας [5]. Αρκετές βιοφυσικές μελέτες έχουν δείξει ότι τα μικρά πρωτεΐνες ή πεπτίδια (20-40 υπολείμματα αμινοξέων) μπορούν να διαπεράσουν τις κυτταρικές μεμβράνες των μικροοργανισμών. Melittin, ένα κατιονικό αμφιπαθικό πεπτίδιο που αποτελείται από 26 αμινοξέα (αα) τα κατάλοιπα, έχει βρεθεί ότι είναι ένας ισχυρός συστατικό του δηλητηρίου της μέλισσας

Apis mellifera

[6]. Έχει αποδειχθεί να έχει άμεση κυτταροτοξική δράση σε ένα ευρύ φάσμα καρκινικών κυτταρικών γραμμών

in vitro

. Έχει αναφερθεί ότι η μελιττίνη ανέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων σε δύο ωοθηκών καρκινικά κύτταρα μέσω επαγωγής των υποδοχέων θανάτου και κάτω ρύθμιση του JAK2 /STAT3 [7, 8]. Ασκεί τοξική δράση του διακόπτοντας μεμβράνες του πλάσματος μετά το σχηματισμό των πόρων. Κατιονικά αα υπολείμματα μελιττίνης αλληλεπιδρούν άμεσα με ανιονικά κυτταρικές μεμβράνες μέσω ηλεκτροστατικών αλληλεπιδράσεων και υδρόφοβες περιοχές? Αυτή η αλληλεπίδραση είναι υπεύθυνη για την διαπέραση μεμβράνης και διάσπαση [6]. Μία συγκριτικά μικρή πρωτεΐνη, με μια απόσταση από άκρο σε άκρο του ~ 3.5 nm, η διάσταση εξυπηρετεί τέλεια ως ενιαία διαμεμβρανική α-έλικα. Πολυάριθμες υπολογιστικές μελέτες έχουν δείξει ότι μορφές μελιττίνης διαμεμβρανική πόρους από την αλληλεπίδρασή του με μεμβράνες λεκιθίνης PC (2 ~ 3 nm σε διάμετρο). ισχυρή δράση της έχει προσελκύσει ερευνητές να χρησιμοποιήσουν μελιττίνη για την επόμενη γενιά αντικαρκινικό θεραπευτικό παράγοντα. Ωστόσο, το θεραπευτικό δυναμικό δεν έχει επιτευχθεί πλήρως στην κλινική λόγω της τοξικότητάς τους εκτός στόχου, ταχεία αποικοδόμηση και κάθαρση

in vivo

. Melittin έχει ενσωματωθεί σε επικαλυμμένα με λιπίδια σωματίδια υπερφθοράνθρακα να συσσωρεύεται σε πολλαπλούς στόχους όγκου, μειώνοντας δραματικά την ανάπτυξη του όγκου [7].

Αν και μερικές από αυτές τις προσεγγίσεις υπόσχονται σαφώς επικείμενη επιτυχία σε προκλινικές μελέτες, μεταφραστικό δυναμικό τους δεν ήταν υλοποιηθεί πλήρως. Καμία ή πολύ λίγες πληροφορίες μπορούν να βρεθούν στη βιβλιογραφία σχετικά με τη χρήση τους μεταφραστική ανθρώπινες μελέτες. Για τη βελτίωση της επιλεκτικότητας και να μειώσει την τοξικότητα, την εφαρμογή των οχημάτων παράδοσης στον άνθρωπο θα απαιτήσει μεγάλη προσοχή. Είναι, ως εκ τούτου, επιτακτική ανάγκη να δοθεί έμφαση στην βασική χημική στρατηγική και προσέγγιση ορθολογικά το σχεδιασμό του αυτοκινήτου κατάλληλα για μεταγραφική χρήση. Μια καλύτερη κατανόηση της αλληλεπίδρασης των τοξινών δηλητήριο σε νανοκλίμακα είναι κρίσιμη, η οποία μπορεί να υπαγορεύει τη συνολική σταθερότητα του, συστημική ακεραιότητα και κυτταρική βλαβερότητας. Μια προσεκτικά δομημένη μελέτη να κατανοήσουν τις αλληλεπιδράσεις της μελιττίνης με τα λειτουργικά συστατικά στο κέλυφος και το κέλυφος επιφάνεια θα οδηγήσει το σχεδιασμό των οχημάτων μεταφοράς επόμενης γενιάς. Προς το σκοπό αυτό, έχουμε υιοθετήσει μια προσέγγιση-πυριτιο-to-in-vitro και ανέπτυξε ένα καλά καθορισμένο σύστημα νανοσωματιδίων για ελεγχόμενη παράδοση της μελιττίνης. Ο στόχος αυτής της εργασίας ήταν να παρέχει ένα ορθολογικό σχεδιασμό των νανοσωματιδίων με βάση για παράδοση το δηλητήριο μέσω υπολογιστικών μελετών και να στηρίξει θεωρητικά τα ευρήματά μας με φυσικοχημικές και βιολογικές μελέτες. Έτσι, μετά την συνθέσεις και φυσικο-χημικός χαρακτηρισμός, μια σειρά διαδοχικών πειράματα διεξήχθησαν για να μελετήσουν πώς νανοκλίμακας χημεία επηρεάζει την παράδοση των τοξινών δηλητήριο για υποχώρηση του καρκίνου και να βοηθήσει να αποφύγει συστημική disintegrity και κυτταρική βλαβερότητας (Σχήμα 1).

(α) Σχηματική των διοικητικών πρωτοκόλλου για Lipobee και Polybee? (Β) Οι αρχικές εικόνες σύνδεσης του PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 και συστήματα μελιττίνης που δείχνει πώς οι δομές της μελιττίνης συνδέεται με ενιαίο αμφίφιλα πολυμερή και (γ) δείχνει τη δομή σύνδεσης των μελιττίνης και λεκιθίνη PC. PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 και λεκιθίνη απεικονίζονται με λευκές γραμμές με ρητή άτομα οξυγόνου που απεικονίζονται με κόκκινο χρώμα. Το πεπτίδιο μελιττίνης εμφανίζεται σε μια πράσινη αλυσίδα στυλ σύνδεσης με άτομα οξυγόνου απεικονίζεται ως κόκκινο και το άζωτο που απεικονίζονται σαν μπλε.

Η

Σε silico

μελέτες αποκάλυψαν την υψηλότερη απόκριση σταθερότητα της μελιττίνης προς αμφίφιλων πολυμερή μπλοκ σε σχέση με τα μόρια των λιπιδίων. Πειραματική μελέτη επιβεβαίωσε την καλύτερη σταθερότητα των πολυμερικών συστήματος πάνω λιπιδική συναρμολόγησης. Να εισαγάγει micellar σταθερότητα, εισήχθη η έννοια του άκαμπτου πυρήνα [9]. Μελέτες εξερεύνηση αλλαγή στο ενυδατωμένο μέγεθος και αδράνεια κατά των πρωτεϊνών του ορού αποκάλυψε την υψηλότερη σταθερότητα των άκαμπτων σωματιδίων πυρήνα. Πειράματα σε μελιττίνη έκπλυσης με την παρουσία συγκέντρωσης ορού αποκάλυψε την υψηλότερη σταθερότητα του συστήματος μελιττίνης-πολυμερές (Polybee) σε σύγκριση με ένα σύστημα μελιττίνη-λιπιδίου (Lipobee). Μια μελέτη σε silico για την αλληλεπίδραση μελιττίνη-DNA πραγματοποιήθηκε και επαληθεύεται με πειραματικά δεδομένα. Διαπιστώθηκε ότι οι ελεύθερες μελιττίνη μπορεί να επιφέρει σημαντική μεταβολή των δεσμών υδρογόνου μεταξύ έλικας σε δυνητικά επηρεάζουν τους μηχανισμούς κυτταρικής ανάπτυξης. Μελιτίνη σε προστατευμένη μορφή της ως Polybee και Lipobee ήταν ανενεργά. Σημαντικές αλλαγές στην ενυδατωμένη μέγεθος του Polybee και Lipobee κατά την επώαση με δωδεκυλοθειικό νάτριο παρατηρήθηκε αλλά όχι χαμηλότερο ρΗ. Αυτό τόνισε την αλληλεπίδραση ανιονικά μεμβράνη ως υπεύθυνο παράγοντα μέσα στο κυτταρόπλασμα ως εύλογο μηχανισμό απελευθέρωσης μελιττίνη. Ο καρκίνος του μαστού τα κύτταρα με διαφορετικό καθεστώς υποδοχέα οιστρογόνου χρησιμοποιήθηκαν ως μοντέλο

in vitro

καρκίνους για τις αναστολές ανάπτυξης μελέτες. Ανεξάρτητα από την κυτταρική γραμμή, Polybees βρέθηκαν να είναι καλύτερα σκευάσματα κατά του καρκίνου σε σύγκριση με Lipobee και δωρεάν έλεγχο μελιττίνη.

Αποτελέσματα και Συζήτηση

Για να σχεδιάσουμε ένα ασφαλέστερο, καθώς και αποτελεσματικό σύστημα παράδοσης, θα επιδιωχθεί ένα άκαμπτο πυρήνα nanosystem που μπορεί δυνητικά να διατηρούν την ακεραιότητά τους στην κυκλοφορία του αίματος μετά από συστηματική χορήγηση [10a-c]. Σε επίπεδο νανοκλίμακας, άκαμπτο πυρήνα micellar (RCM) συστήματα μπορούν είτε να σταθεροποιηθούν με αμφίφιλα PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 (πολυστυρένιο-b-πολυακρυλικό οξύ) (PRCM) ή με φωσφολιπίδια (λεκιθίνη PC) (LRCM) ενθυλάκωσης (Σχήμα 1Α). Αναμένουμε ότι αυτό το σύστημα θα παρέχει το μοντέλο αρχιτεκτονικές, δεδομένου ότι η πλειοψηφία των πλατφορμών νανοϊατρικής κυριαρχούνται από λιπιδίων και πολυμερικά συστήματα. Επιπλέον, η στρατηγική αυτή μπορεί να επεκταθεί και σε μια σειρά από πεπτίδιο-τοξίνες των διαφόρων φυσικών πηγών, χημείες και μεγέθη.

Για να διερευνήσουν τις βασικές αλληλεπιδράσεις στο melittin- PS

67-

b

-ΡΑΑ

27 πολυμερούς και μελιττίνη-λεκιθίνη συστήματα PC λιπιδίων, προσομοιώσεις μοριακής σύνδεσης πραγματοποιήθηκαν και αναλύθηκαν (Σχήμα 1Β και 1C). Όλα τα μόρια ελαχιστοποιήθηκαν (Sybyl-X 2.0) [11] πριν από docking με MOE 2.013,08. Να διερευνήσει τις βασικές αλληλεπιδράσεις στο melittin- PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερούς και μελιττίνη-λεκιθίνη σύστημα λιπιδίων PC, MOE-Dock [12] χρησιμοποιήθηκε για να δέσει το ελαχιστοποιημένο μελιττίνη τόσο για PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 συστήματα PC λιπιδίων πολυμερούς και λεκιθίνη. Οι πέντε καλύτερες σύνδεσης ποζάρει με υψηλότερες βαθμολογίες S (χαμηλότερη ενέργεια σύνδεσης) διατηρήθηκαν και παρατίθενται σε μορφή πίνακα. Υπερθέσεις των πέντε καλύτερα σύνδεσης θέτει στα δύο συστήματα έδειξε στο σχήμα 2. Από το Σχ 2, μπορεί να διαπιστωθεί ότι σε melittin- PS

67-

β

-ΡΑΑ δομή σύνδεσης

27 πολυμερούς , οι πέντε πόζες σύνδεσης είναι σε μεγάλη ποικιλομορφία, η οποία έχει ως αποτέλεσμα την μεγάλη διαφορά στο σκορ σύνδεσης μεταξύ πόζα 1 και ενέχουν 5 (14.5 kcal /mol). Ωστόσο, ως προς τη δομή σύνδεσης PC λιπιδίων μελιττίνη-λεκιθίνη, πέντε στάσεις σύνδεσης μπορεί να υπερέχουν πολύ καλύτερα, πράγμα που οδήγησε σε μια μικρή διαφορά βαθμολογίας σύνδεσης μεταξύ pose1 και θέτουν 5 (1 kcal /mol). Οι διαφορές διαμόρφωση πόζες σύνδεσης της μελιττίνης στο PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερούς και λεκιθίνη PC λιπιδίων που προκαλείται από τα διαφορετικά ηλεκτρικά πεδία και η στερεοχημική πεδία για τα δύο αυτά συστήματα.

Σούπερ-επιβολή των πέντε καλύτερες πόζες σύνδεσης της μελιττίνης με λεκιθίνη PC και PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερούς: (α) σύνδεσης πόζες της μελιττίνης στο PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερούς? (Β) docking θέτει μελιττίνης να λεκιθίνης PC. Το καλύτερο σκόραρε στάση είναι στο πράσινο συνδέονται αλυσίδες με τις παρακάτω μικρότερες συνημμένα αναφέρονται κατά σειρά ανάλογα με τη βαθμολογία τους όπως υποδεικνύεται από το χρώμα τους: Magenta, 2ο? κίτρινο, 3η? λευκό, 4η, και κυανό, 5ο.

Η

Σχήμα 1Α δείχνει τις δομές υποδοχής των καλύτερων πόζες της μελιττίνης στο PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερούς (Σχήμα 1 Β) και το σύστημα λιπιδίου λεκιθίνης PC (Σχήμα 1 C). Στο Σχήμα 1Β, μπορεί να φανεί ότι η μελιττίνη πεπτίδιο παραμένει κοντά και παραλληλισμοί καλά με το υδρόφιλο άκρο και ένα τμήμα του υδρόφοβου τμήματος του πολυμερούς. Τα υδρόφιλα υπολείμματα ακρυλικού οξέος του πολυμερούς που σχηματίζεται κρίσιμες αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου με αμινο και ομάδες υδροξυλίου των καταλοίπων αα. Υδρόφοβο ήμισυ φαινυλίου κοντά στο υδρόφιλο άκρο του πολυμερούς που σχηματίζεται υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις με πλευρικές αλυσίδες ΑΑ καταλοίπων μελιττίνης. Gly1 να Ile17 βρίσκονται στο υδρόφιλο άκρο ενώ Ser18 να Gln26 βρίσκονται στο υδρόφοβο άκρο του πολυμερούς. Αναλυτικότερα, οι αμινομάδες της ραχοκοκαλιάς του Gly1, Gly3, Ala4, Val5, Leu6, Gly12, Ala15 και Ile17, το οξυγόνο τόσο στην πλευρική αλυσίδα και ραχοκοκαλιά της Thr11 σχηματίζεται αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου με το οξυγόνο του καρβοξυλικού οξέος του πολυμερούς. Οι πλευρικές αλυσίδες του Leu17, Trp19, Lys21, Arg24 και Gln26 σχηματίζουν υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις με φαινύλιο και άτομα άνθρακα της ραχοκοκαλιάς του πολυμερούς. Για να συγκρίνετε τις βασικές αλληλεπιδράσεις της σύνδεσης ποζάρει με λεκιθίνη μοντέλο PC-πεπτίδιο, που ελλιμενίζεται το πεπτίδιο μελιττίνης με το λιπίδιο λεκιθίνη PC (Σχήμα 1C). Αν και μελιττίνης βρέθηκε να είναι καλά συνυφασμένη με το λιπίδιο, αυτό το πεπτίδιο-λιπιδίου δομή σύνδεσης ήταν πολύ αποκολληθούν. Η απόσταση μεταξύ των δύο μορίων δεν ήταν αρκετά κοντά? Ως εκ τούτου, δεν υπάρχουν ως παρατηρείται για σύμπλοκο πεπτιδίου-πολυμερούς πολλές αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου και υδρόφοβων αλληλεπιδράσεων. Οι μόνες αλληλεπιδράσεις εντοπίστηκαν ήταν οι αμινομάδες στην Arg22 και Arg24 σχηματίζουν αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου με το οξυγόνο κετο και φωσφόνο ομάδες σε λεκιθίνη PC λιπιδίων. Οι πλευρικές αλυσίδες των Ala4, Leu13 και Ile17 σχηματίζονται υδρόφοβων αλληλεπιδράσεων με το αλκυλ ομάδα στο λιπίδιο.

Για να διερευνηθεί περαιτέρω η αλληλουχία και το μέγεθος της εξάρτησης των πεπτιδίων για Polybee και Lipobee φορείς, επιλέξαμε διάφορες μελιττίνης πεπτιδική θραύσματα για υπολογιστική μελέτες μοντελοποίησης (S1 Σχήμα). Έχουμε επιλέξει (1) δεξιά 17-υπολειμμάτων πεπτίδιο, (2) αριστερά 9-υπολειμμάτων πεπτιδίου, και (3) μέση 16-υπολειμμάτων πεπτίδιο να δέσει στο PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερούς και του συστήματος λεκιθίνη PC λιπιδίων, αντίστοιχα. Στη δομή σύνδεσης του δικαιώματος 17-υπολειμμάτων πεπτίδιο με PS

67-

b

-ΡΑΑ

27 πολυμερές, τις αμινομάδες της ραχοκοκαλιάς του Thr1, την πλευρική αλυσίδα του Lys12, Arg13 και Arg15 , το οξυγόνο του καρβονυλίου ομάδα Lys12, Gln17 και πλευρική αλυσίδα της ομάδας υδροξυλίου από Thr1, Thr2 και Ser10 σχηματίζεται αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου με το οξυγόνο του καρβοξυλικού οξέος του πολυμερούς. Στη δομή λιπιδίων σύνδεσης λεκιθίνη PC, οι αμινομάδες της ραχοκοκαλιάς της Lys14 και πλευρικής αλυσίδας της Arg13, και πλευρική αλυσίδα της ομάδας υδροξυλίου από Thr1 σχηματίζεται αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου με το οξυγόνο σε ομάδες φωσφόνο σε λεκιθίνη PC λιπιδίων. Στη δομή σύνδεσης του αριστερού 9-υπολειμμάτων πεπτίδιο με PS

67-

b

-ΡΑΑ

27 πολυμερές, οι αμινομάδες της ραχοκοκαλιάς του Gly1, Ile2, Ala4 και Leu9, το οξυγόνο του καρβονυλική ομάδα του Val8 σχηματίζεται αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου με το οξυγόνο του καρβοξυλικού οξέος του πολυμερούς. Στη δομή λιπιδίων σύνδεσης λεκιθίνη PC, οι αμινομάδες της ραχοκοκαλιάς του Gly1, Ile2 και το οξυγόνο του καρβονυλίου της ομάδας του Ile2 σχηματίζεται αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου με το οξυγόνο σε ομάδες φωσφόνο σε λεκιθίνη PC λιπιδίων. Στη δομή σύνδεσης του μεσαίου 16-υπολειμμάτων πεπτίδιο με PS

67-

b

-ΡΑΑ

27 πολυμερές, οι αμινομάδες της ραχοκοκαλιάς του Thr5, Gly7, Lys16, την πλευρική αλυσίδα του Trp14, το οξυγόνο του καρβονυλίου της ομάδας του Gly7 και πλευρικής αλυσίδας της ομάδας υδροξυλίου της Ser13 σχηματίζεται αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου με το οξυγόνο του καρβοξυλικού οξέος του πολυμερούς. Στη δομή λιπιδίων σύνδεσης λεκιθίνη PC, οι αμινομάδες της ραχοκοκαλιάς του Leu1, Lys2, Val3, Thr5 και την πλευρική αλυσίδα της ομάδας υδροξυλίου του Thr5 σχηματίζεται αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου με το οξυγόνο σε ομάδες φωσφόνο σε λεκιθίνη PC λιπιδίων.

η ανάλυση των πόζες σύνδεσης μπορεί να εξηγήσει με σαφήνεια γιατί η δομή του πεπτιδίου-πολυμερούς είναι πιο σταθερό από ό, τι το πεπτίδιο-λιπιδίου δομή (Πίνακας 1). Έχουμε παρατηρήσει ότι αντίθετα με την ανάλυση πόζες σύνδεσης και αλληλεπιδράσεις, η ενέργεια σύνδεσης σε λεκιθίνη σύστημα PC λιπιδίων είναι χαμηλότερο από ό, τι PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερές σύστημα. Αυτό μπορεί να οφείλεται σε διαφορές στις μέσες εντροπία ζημία /κέρδος που οφείλεται στην διαμορφωτική ευελιξία και αποδιαλύτωση ενέργεια του κάθε ατόμου και όχι εκείνη της μέγιστης ενέργειας των Η-δεσμού μεταξύ PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερούς και λεκιθίνη λιπιδίων υπολογιστή των οποίων τα μεγέθη είναι πολύ διαφορετικά. Στο PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερές σύστημα, το υδρόφιλο ακρυλικό οξύ και αναλογία υδρόφοβων μονάδα στυρολίου θα επηρεάσει την δεσμού υδρογόνου και υδρόφοβων αλληλεπιδράσεων μεταξύ των συστημάτων μελιττίνης και πολυμερές, ενώ η μονάδα μήκος δεν αλλάζει αυτές τις αλληλεπιδράσεις σε μεγάλο βαθμό. S2 Ο πίνακας δείχνει τα αποτελέσματα των αποτελεσμάτων σύνδεσης των τριών τεμαχίων μελιττίνης να polybee και lipobee. Όπως είναι εμφανές, όσο μεγαλύτερη είναι οι αλληλουχίες πεπτιδίων, τόσο καλύτερη ελήφθησαν οι βαθμολογίες σύνδεσης. βαθμολογίες docking ήταν καλύτερα για πεπτίδιο με PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερούς από ό, τι με lethicin PC λιπιδίων, επειδή οι αλληλεπιδράσεις δεσμού υδρογόνου πιο εμπλέκονται σε μια PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 πολυμερές σύστημα.

Η

μια μετα-παρασκευαστική μέθοδο εισαγωγής ενός δοχείου χρησιμοποιήθηκε για σταθερή παγίδευση της μελιττίνης και μια γενιά λιπιδιωμένης άκαμπτο πυρήνα μικκυλιακής μελιττίνη (Lipobees) από λιπιδιωμένη άκαμπτο πυρήνα μικκύλια (LRCMs). Ομοίως, πολυμερισμένα άκαμπτο μελιττίνη πυρήνας μικκυλιακής (Polybees) παρασκευάστηκαν από πολυμερισμένο άκαμπτο πυρήνα μικκύλια (PRCMs). Ένα τυπικό προετοιμασία της LRCMs και PRCMs αφορούσε την προετοιμασία των «άκαμπτο πυρήνα» της polyoxyethylene20 κετυλαιθέρα (pece) που ακολουθείται από σταθερή επίστρωση με λεκιθίνη PC ή PS

67-

β

-ΡΑΑ

27 [ ,,,0],13]. Η σταθερότητα των μικκυλίων επιτεύχθηκε με σκλήρυνση του πυρήνα στους 4 ° C (pece mp: 32 ° C). RCMs στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε μετα-παρασκευαστική επώαση του μελιττίνης σε υδατικό εναιώρημα για 30 λεπτά σε θερμοκρασία περιβάλλοντος με ήπια περιδίνηση. Η υδροδυναμική διάμετρος, μορφολογία, πολυεπίπεδη ρυθμίσεις? τοπογραφία, ηλεκτροφορητική δυναμικό, και η σταθερότητα των σωματιδίων καθορίστηκαν με βάση τα διάφορα φυσικο-χημικά πειράματα. Για να μάθετε τη φόρτωση των μελιττίνης στην LRCM και PRCM, φασματοσκοπία UV-απορρόφηση εκτελέστηκε. Θεωρήθηκε ότι η απορρόφηση υπογραφή για μελιττίνη σε 290 nm πέσει στην περίπτωση του Lipobee και Polybee, πιθανότατα οφείλεται στην επιφάνεια εσωτερίκευση της μελιττίνης στην LRCM και PRCM με τη μεθοδολογία μετά την αλληλεπίδραση.

Η LRCM είχε μια μέσο υδροδυναμικό μέγεθος σωματιδίου 23 ± 2 nm, η οποία αυξήθηκε σε 83 ± 3 nm σε Lipobee κυρίως λόγω της επιφάνειας αλληλεπίδρασης του μελιττίνης με RCM (Σχήμα 3). Ομοίως, PRCM έδειξε μια μέση υδροδυναμική διάμετρο 25 ± 5 η οποία αυξήθηκε σε 40 ± 8 nm σε Polybee (Σχήμα 3). Σταθερότητα των σωματιδίων αυτών PRCM σε διάφορα χρονικά σημεία σε RT και το ρΗ 7.4 μετρήθηκε χρησιμοποιώντας μετρήσεις DLS, η οποία έδειξε μια ονομαστική αλλαγή στο μέγεθος του PRCM και Polybee μικρότερη από 10%. Ομοίως, το μέγεθος LRCM δεν άλλαξε σε σημαντικό επίπεδο, ενώ Lipobee έδειξε αλλαγές μέγεθος του ~ 40%, υπογραμμίζοντας τη σημαντική αστάθεια των Lipobees σε σύγκριση με την υψηλή σταθερότητα της Polybee. Σταθερότητα των οχημάτων μεταφοράς ήταν ανέκαθεν σημαντική ανησυχία για την επιτυχία των πρωτοκόλλων νανο-παράδοσης. Ως εκ τούτου, Polybee υπόσχεται η πιθανή καλύτερη απόκριση παράδοση μελιττίνης σε σύγκριση με σωματίδια Lipobee κατά τη διάρκεια

in vitro

και

in vivo

χρησιμοποιεί. Η πυκνότητα του φορτίου επιφάνεια για PRCMs ήταν -12 ± 1 mV, η οποία μειώθηκε σε -6 ± 1 mV σε Polybee μετά από επώαση με τις τοξίνες μέλισσα

Σύνθεση και χαρακτηρισμός των άκαμπτων πυρήνα μικυλλίων και μελιττίνης φορτωμένα σωματίδια:. ( α) Σύνθεση του PRCM και νανοσωματιδίων Polybee? (Β) εκπρόσωπο TEM εικόνες της Polybee? (Γ) εκπρόσωπο AFM εικόνες της Polybee? (Δ) Σύνθεση LRCM και Lipobee νανοσωματίδια? (Ε) εκπρόσωπο TEM εικόνες της Lipobee? (Γ) εκπρόσωπο AFM εικόνες της Lipobee? (Στ) UV-VIS φασματοσκοπία μελιττίνης, LRCM, PRCM, Lipobee και Polybee? (Ζ) διανομή υδροδυναμική διάμετρο (αριθμός κατά μέσο όρο, nm). δείγματα ΤΕΜ (20 μί) παρασκευάσθηκαν επί Formvar επικαλυμμένα με άνθρακα πλέγματα και αρνητικώς χρωματίστηκαν με οξικό ουρανύλιο και ξηραίνεται υπό κενό πριν την εκτέλεση της μικροσκοπίας. Δείγματα (20 μΙ) σταγόνα χυτεύτηκε σε προσφάτως διασπάται φύλλα μαρμαρυγία και ξηραίνεται στον αέρα για & gt? 24h πριν την εκτέλεση της υποκλοπή AFM λειτουργία

Η

Από την άλλη πλευρά, το δυναμικό ζήτα του LRCMs έδειξε μια ονομαστική αλλαγή σε. ζήτα δυναμικό, όταν μετατρέπεται σε Lipobee. Αυτό σημαίνει την αποτελεσματικότητα της λήψης Κουλόμπ αλληλεπιδράσεις του πεπτιδίου με την εξωτερική κορώνα του μπλοκ πολυμερή που αποτελούνται από πολυ (ακρυλικό οξύ) υπολείμματα. Άνυδρη κατάσταση μορφολογία των σωματιδίων Lipobee και Polybee ελήφθη στο μέγεθος 25 ± 5 nm έναντι 22 ± 6 nm για LRCM και PRCM ως μελετηθεί από μετάδοσης ηλεκτρονίου μικροσκοπία (ΤΕΜ, Σχήμα 3F). Οι αντιπροσωπευτικές μικροσκοπία ατομικής δύναμης (AFM) εικόνες αποκτήθηκαν από την πτώση χυτό δείγματα σε φύλλα μίκα να μελετήσει το πρότυπο μορφολογία αυτών των σωματιδίων RCM. Μέσες τιμές του ύψους (H

av) ενός αντιπροσωπευτικού δείγματος ήταν 25 ± 5 nm (Σχήμα 3G). Φυσικο-χημικές χαρακτηρισμούς των Polybees και Lipobees υποδηλώνουν μια πιθανή υπερ-άκρη για Polybees πάνω Lipobees στην σταθερότητα σκευάσματος και άλλες προϋποθέσεις για να γίνουν καλύτερα μέσα για συστηματική εφαρμογή (Πίνακας 2).

Η

Για να επαληθεύσετε τον καρκίνο συγγένεια κύτταρο παλινδρόμησης αυτών των σκευασμάτων, διεξήχθησαν δοκιμασίες κυτοτοξικότητας. Ως σύστημα μοντέλο για

in vitro καλλιέργεια

καρκίνος, επιλέξαμε θετικούς οιστρογονικούς (MCF-7) και τα οιστρογόνα αρνητικά κύτταρα καρκίνου του μαστού (MD-ΜΒ231) για την αξιολόγηση της λειτουργικής θεραπευτικό δυναμικό του Polybees και Lipobees. κυτταρικές σειρές MCF-7 και MD-ΜΒ231 αντιπροσωπεύουν διηθητικό καρκίνο του μαστού ανθρώπινες κυτταρικές σειρές πρώιμα στάδια και, αντίστοιχα. Ανεξάρτητα από την κυτταρική γραμμή, Polybee έδειξε σημαντικά υψηλότερη αποτελεσματικότητα σε σύγκριση με Lipobee και μελιττίνη όπως είναι προφανές από προσδιορισμούς ΜΤΤ (Σχήμα 4). Στο σημείο επώαση 48h, σε κύτταρα MD-ΜΒ231, η τιμή IC50 για Polybee έχει βρεθεί σε ca. 40 ± 4 nM έναντι περίπου 70 ± 7 ηΜ στην περίπτωση των Lipobee και ca. 110 ± 10 Μ δωρεάν μελιττίνη? Επιπλέον, σε MCF-7, τιμή IC50 για Polybee βρέθηκε να είναι ca. 80 ± 8 ηΜ σε σύγκριση με ca. 100 ± 10 ηΜ στην περίπτωση των Lipobee και 105 ± 10 ηΜ για δωρεάν μελιττίνη. Εν τω μεταξύ, LRCM και PRCM έδειξε IC50 & gt? & Gt? 1000 ηΜ ανεξάρτητα από την κυτταρική γραμμή, (Σχήμα 4G). Για τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με ελεύθερη μελιττίνη (100 ηΜ), την πυκνότητα κυτταρική ανάπτυξη και μορφολογικές αλλαγές ήταν ενδεικτικές του κυτταρικού θανάτου, ενώ LRCM και PRCM δεν μεταβάλλουν σε σημαντικό επίπεδο (Σχήμα 4).

Αντιπροσωπευτικές εικόνες φωτεινού πεδίου της πυκνότητας κυτταρικής ανάπτυξης και παραλλαγή μορφολογία καρκινικών κυττάρων για MCF-7 (AC) και MD-ΜΒ231 (DF) μετά από 48 ώρες επώασης σε επεξεργασία με μελιττίνη, LRCM και Lipobee, (ζ) Οι τιμές IC50 για διάφορες συνθέσεις σε μορφή πίνακα? βιοστατιστική ανάλυση σχετικά με τις τιμές IC50 για Polybee σχέση με μελιττίνη εκπροσωπούν *** για τιμή p & lt? 0.001 και ** για την τιμή p & lt? 0.005 μετά ένας τρόπος ANOVA με Bonferroni μετά τη δοκιμή και (hi) παραλλαγές% βιωσιμότητα των κυττάρων με διαφορετική διατύπωση στο MD-ΜΒ231 και (JK) MCF-7 κύτταρα για (HJ) πολυμερές και (ik) λιπιδική σκευάσματα.

Η

Οι τιμές CH50 για όλα τα σκευάσματα που χρησιμοποιούνται βρέθηκαν να είναι 6 ± 1 για PRCM, LRCM, Polybee, Lipobee και μελιττίνης και 8 ± 1 και 3 ± 1 για αναφοράς 1 και αναφοράς 2, αντίστοιχα (Σχήμα 5Α). Παρά το γεγονός ότι,

in vitro

πειράματα ιδρύθηκε Polybee και Lipobee ως ισχυρά σκευάσματα κατά του καρκίνου, θεωρείται ότι η συμπεριφορά τους για

in vivo

εφαρμογές εξακολουθούν να παραμένουν ασαφείς.

In vivo

επιτυχία τέτοιων σκευασμάτων πολύ εξαρτώνται από δύο κύριους παράγοντες i) η ουδετερότητα απέναντι συμπλήρωμα αίματος και ii) τη βιώσιμη πέρασμα του ωφέλιμου φορτίου μέσα από συστηματική κυκλοφορία. υπολογιστικές μελέτες μας είναι ενδεικτικά των ισχυρότερων, αυστηρότερων αλληλεπίδραση μελιττίνης με τα αμφίφιλο πολυμερές αλυσίδες σε άμεση σύγκριση με το λιπίδιο, καθιστώντας Polybees? ως εκ τούτου, η μελιττίνη με άκαμπτο πυρήνα του και πολυμερές κέλυφος είναι ένας καλύτερος υποψήφιος για

in vivo

εφαρμογή. Για να επιβεβαιωθεί αυτή η παρατήρηση πειραματικά, διερευνήσαμε την ενεργοποίηση του συμπληρώματος και μελιττίνη ικανότητα κατακράτησης αυτών των σκευασμάτων στον ορό του αίματος. Συμπληρώνοντας αυτό το σύστημα, μια ομάδα πρωτεϊνών που θα ενεργοποιήσει για να οδηγήσει τη λύση του κυττάρου-στόχου και θα διευκολύνει τη φαγοκυττάρωση μέσω οψωνινοποίηση την έκθεση σε στερεά ξένα υλικά στο κυκλοφορικό συστηματική ρευστό. Η δοκιμασία CH50, η οποία οθόνες την ενεργοποίηση της κλασικής συμπληρωματικών μονοπατιών βρεθεί να είναι ευαίσθητο στην αναγωγή, απουσία και /ή αδράνειας οποιοδήποτε συστατικό του μονοπατιού. Η συμπληρωματική δοκιμασία CH50 βασίζεται στη λύση των ευαισθητοποιημένα ερυθροκύτταρα προβάτου με την παρουσία Ca

+ και Mg2

2+. Όταν τα ευαισθητοποιημένα ερυθροκύτταρα προβάτου επωάζονται με ορό δοκιμής διαφορετικών θεραπειών, τα διάφορα επίπεδα αιμόλυσης επιτευχθεί. CH50 συμπληρώνουν δοκιμασία ενεργοποίησης πραγματοποιήθηκε για όλα τα σκευάσματα που χρησιμοποιούνται εδώ και βρέθηκαν να είναι πολύ αδρανείς στην ενεργοποίηση των συμπληρωματικών πρωτεϊνών, που δεν δείχνει σημαντική μεταβολή στις τιμές CH50 σε σύγκριση με φυσιολογικό πλάσμα συμπληρωματικό επίπεδο (αναφοράς 1, δηλαδή, 8 ± 1).

(α) Συμπληρώνοντας την ενεργοποίηση και (β) η συμπεριφορά μελιττίνη έκπλυση των Lipobee και Polybees. Ελεύθερη μελιττίνη, LRCM και PRCM χρησιμοποιήθηκαν ως έλεγχοι? (Γ) οπτικές εικόνες μικροσκοπίας επίχρισμα αίματος χωρίς θεραπεία (i) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με μελιττίνη (1:10) (ii), LRCM (1:10) (iii), Lipobee (1:10) (iv), PRCM (1: 10) (v) και polybee (1:10) (vi), αντίστοιχα, (με μεγέθυνση 20χ). Melittin- και Lipobee επεξεργασμένο αίμα χοίρων στην σοβαρά συσσωρευμένου, μορφολογικά στρεβλή κατάσταση που φαίνεται στο (ii) και (iv). Ένθετα σε (ii) και (iv) δείχνουν ερυθρών αιμοσφαιρίων μορφολογία να τονίσει άλλα παρόμοια μορφολογικά μοτίβα σε όλο το δείγμα.

Η

Οι τιμές CH50 για όλα τα σκευάσματα που χρησιμοποιούνται βρέθηκαν να είναι 6 ± 1 για PRCM , LRCM, Polybee, Lipobee και μελιττίνης και 8 ± 1 και 3 ± 1 για αναφοράς 1 και αναφοράς 2, αντίστοιχα. Αυτό δείχνει ότι διατύπωση PRCM, LRCM, Polybee, Lipobee και μελιττίνη δεν προκάλεσε κανένα συμπλήρωμα σε κάθε σημαντικό επίπεδο. Υποστηρίζει τη σκοπιμότητα της χρήσης αυτών των σκευασμάτων

in vivo

χωρίς κίνδυνο πρόκλησης ανοσολογικής απόκρισης.

Για να εκτιμηθεί περαιτέρω τα οφέλη από τη χρήση Polybee πάνω Lipobee για συστηματική χορήγηση, μελιττίνη απόπλυση χαρακτηριστικό αυτών των σκευασμάτων ήταν αξιολογούνται και εκτιμάται από την εκτέλεση μιας δοκιμασίας ΜΤΤ σε κύτταρα MD-ΜΒ231. Αποπλυμένα μελιττίνης που λαμβάνεται μετά την επώαση Polybee και Lipobee με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) στο ρυθμιστικό DMEM χρησιμοποιήθηκε σε αραιώσεις 1, 2, 4, 8 και 16 για προσδιορισμούς ΜΤΤ. Μία γνωστή συγκέντρωση μελιττίνης χρησιμοποιήθηκε ως ένας θετικός έλεγχος που κυμαίνεται από 20-1.25 μΜ. προσδιορισμοί ΜΤΤ επέδειξε μία υψηλή ποσότητα μελιττίνης έκπλυσης από Lipobee προκαλώντας ένα υψηλό ποσοστό των θανάτων των κυττάρων σε κάθε αραίωση σύγκριση με τα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία με μελιττίνη απόπλυση από Polybee η οποία δίνει μια πολύ σημαντική βιο-στατιστική σημασία (ρ & lt? 0.001) σε παράγοντα αραίωσης 1. από την άλλη πλευρά, την ίδια αραίωση, μελιττίνη διυλιστεί έξω από Polybee, με αποτέλεσμα τη σημαντική μείωση του θανάτου πληθυσμό κυττάρων χωρίς σημαντική αλλαγή στην κυτταρική βιωσιμότητα (Σχήμα 5Β). Αυτά τα ευρήματα έδειξαν ότι κατά τη διάρκεια συστηματική χορήγηση Lipobee, ένα υψηλό ποσό της μελιττίνης μπορούσε διαφεύγουν στο κυκλοφορικό ρευστό πριν φτάσει τα καρκινικά κύτταρα προκαλώντας έτσι μια σημαντική απώλεια στην απόδοση αντι-καρκίνου.

Polybee νανοσωματίδια έχουν επίσης εκτεθεί αξιοσημείωτο σθένος, όταν αναμειγνύεται με το αίμα των χοίρων. Ένα παρασκεύασμα «κηλίδα αίματος» έγινε για τον εντοπισμό τυχόν μορφολογικές μεταβολές στα λεμφοκύτταρα και τη συσσώρευση του αίματος παρακολουθείται από μια κλινική τεχνική οπτική μικροσκοπία (συμβατικό οπτικό μικροσκόπιο) με ένα πεδίο υψηλής ισχύος (σχήμα 5C). Δεν επιφανειακή βραδύ βάδισμα ή μορφολογικές εναλλαγές στα κύτταρα του αίματος παρατηρήθηκαν σε φρέσκο ​​αίμα χοίρου αντιμετωπίζονται με PRCM, LRCM και Polybee (αίμα: NP = 10: 1). Ωστόσο, το αίμα χοίρου κατεργάζεται με δωρεάν μελιττίνης και Lipobee εμφάνισαν σημαντική συσσωμάτωση και μορφολογικές αλλοιώσεις (Σχήμα 5C, II και IV). Για να κατανοήσουμε την εύλογη μηχανισμό απελευθέρωσης μελιττίνης από Lipobee και Polybee

in vitro

, περαιτέρω μελέτες διεξήχθησαν. Απελευθέρωση θεραπευτικών παραγόντων από τα νανοσωματίδια έχει αναφερθεί ως ρΗ απόκριση και /ή διαδραστική με το ανιονικό στρώμα του ενδοσωμιακό σε κυτταρικά συστήματα. Αυτοί οι παράγοντες μπορεί να διερευνηθεί η ανταπόκριση του χρησιμοποιούνται νανοσωματίδια για την επίτευξη ενός μηχανισμού πιθανή απελευθέρωση. Χρησιμοποιήσαμε αυτή τη στρατηγική για να περιορίσετε την επιλογή μας των προτιμησιακών οδών για την απελευθέρωση μελιττίνης από Lipobee και Polybee nanoformulations. Lipobee και Polybee παρασκευάστηκαν όπως συζητήθηκε νωρίτερα και ακολούθησε επώαση σε ρΗ 4,6 και με την παρουσία του δωδεκυλοθειικό νάτριο (SDS, 1 mM) για 2 ώρες. Στο τέλος της περιόδου επώασης, μια υδροδυναμική διάμετρος αποκτήθηκε για διαφορετικές συνθέσεις μέσω της χρήσης της δυναμικής σκέδασης φωτός. Μεγέθη σε 0 h θεωρήθηκαν ως έλεγχος για τα πειράματα (S2 Εικ).

DLS αποτελέσματα δείχνουν σαφώς την μεταβολή στο μέγεθος του Lipobee και Polybee μόνο σε παρουσία SDS (5 mM) χωρίς σημαντική επίδραση σε χαμηλότερη pH (S2 σχήμα). Υποστηρίζει την εύλογη εμφάνιση ανιονικά αλληλεπίδρασης σε ένα ενδοσωμιακό υπεύθυνος για μελιττίνη απελευθέρωση από Polybee και Lipobee. Επιπλέον, ένα υψηλότερο αλλαγή στο μέγεθος των Lipobee συνέβη κατά την επώαση με SDS σηματοδοτεί μια υψηλότερη αλληλεπίδραση λιπίδια επιφανειοδραστικού.

Το πεπτίδιο-πολυνουκλεοτιδικής αλληλεπιδράσεις έχουν προσελκύσει πάντα το ενδιαφέρον των φαρμακευτικών χημικών. Θα έχει ιδιαίτερο ενδιαφέρον να αποκρυπτογραφήσει τις αλληλεπιδράσεις DNA μελιττίνης και να κατανοήσουν το ρόλο τους στην αποσύνδεση από την δευτερογενή δομή του DNA. Ηλεκτροφόρηση πηκτής διεξήχθη για να καταστεί δυνατή η παρατήρηση των αλλαγών στην ηλεκτροφορητική προτύπων κινητικότητας του pBR322 επωάζονται με διάφορα σκευάσματα υπό την παρουσία (μελιττίνης, Polybee και Lipobee) και με την απουσία της μελιττίνης (LRCM και PRCM), καθώς και διάφορες συγκεντρώσεις των ελεύθερων μελιττίνης ( 50 έως 0,0005 μΜ).

διαπιστώθηκε ότι μόνο το ελεύθερο μελιττίνη ήταν σε θέση να διαχωρίσει το πλασμίδιο DNA. Με τη σειρά του, η απώλεια της μπάντας ηλεκτροφόρηση πραγματοποιήθηκε είτε με την καθυστέρηση της μετανάστευσης του DNA ή με την απομάκρυνση παρένθετα EtBr (βρωμιούχο αιθίδιο) οφείλεται σε μείζονα αύλακα δέσμευσης της μελιττίνης στο δίκλωνο DNA. Σκευάσματα με προστατευόμενη μελιττίνη σε καμία από τις περιπτώσεις, Lipobee και Polybee, δεν επηρέασε τις ζώνες του DNA σε σημαντικό βαθμό (Σχήμα S3A).

Ένα περαιτέρω έρευνα ηλεκτροφόρηση γέλης έδειξε ότι ~ 0,05 μΜ δωρεάν μελιττίνης ήταν επαρκής για να να ξεκινήσει η διάσταση ενός δευτερογενούς δομής DNA (S3b Εικ). Οι αλληλεπιδράσεις της μελιττίνης με DNA σε ελεύθερη μορφή σημαίνει ότι μια απελευθέρωση από Lipobee και Polybee μπορούν να στοχεύσουν γονιδιακό DNA, το οποίο μπορεί να επεκταθεί στο επίπεδο που εμποδίζουν την διαδικασία μεταγραφής. Ωστόσο, καμία αλληλεπίδραση μπορεί να λάβει χώρα εάν η μελιττίνη είναι σταθερά ενσωματωμένο. Εδώ δεν υπάρχει σημαντική επίδραση από LRCM και PRCM σχετικά με την κινητικότητα του DNA έδειξε ότι τα σωματίδια αυτά δεν έχουν να παίξουν στην αλληλεπίδραση του DNA ενεργό ρόλο και μελιττίνη είναι το μόνο συστατικό Polybee και Lipobee να συμμετάσχουν σε αλληλεπίδραση με το DNA διπλής όψης.

οι πρωτεΐνες είναι κύρια συστατικά του ορού του αίματος και την αντιμετώπιση του οχήματος φορτίου και pharmacoactive πράκτορες, παρέχοντας παράλληλα μέσα από συστηματική κυκλοφορίες. Κάθε απόφραξη σε κανονική συμπεριφορά αυτών των πρωτεϊνών του ορού του αίματος θα μπορούσε να οδηγήσει σε βλαβερές συνέπειες στο υποκείμενο. Ως πρότυπο σύστημα μελέτης, επιλέξαμε εμβρυϊκό βόειο ορό για τη δημιουργία συνέπειες των ελεύθερων μελιττίνης και nanoformulations της, Lipobee και Polybees στην κανονική φασματοσκοπικές ιδιότητες. μελέτη UV απορρόφηση πραγματοποιήθηκε σε 50 μΜ μελιττίνη επωάζονται (δωρεάν ή nanoformulation μορφή) διάλυμα 10% FBS. Δεν hypso- ή βαθοχρωμική μετατόπιση στο μοτίβο απορρόφησης UV παρατηρήθηκε από το διάλυμα FBS, αλλά η απορρόφηση αυξήθηκε μετά από επώαση με δωρεάν μελιττίνη. Μια μείωση στην απορρόφηση παρατηρήθηκε στην περίπτωση της Lipobee, η οποία έφθασε σε επίπεδο παρόμοιο με μη επεξεργασμένο FBS σε σύγκριση με Polybee (S3C σχήμα). Αυτή η παρατήρηση μπορεί να εξηγηθεί λόγω της επιπλέον απορρόφηση από την προστιθέμενη σκευάσματα, που σηματοδοτεί καμία ειδική αλληλεπίδραση της μελιττίνης σε ελεύθερη μορφή ή μορφή nanoformulation με τις πρωτεΐνες του ορού.

Η τύχη του απελευθερωμένου μελιττίνης μπορούν να οργανωθούν ορθολογικά σε σχέση με την αλληλεπίδραση του με γονιδιωματικό