Αφηρημένο

παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα (PDA) είναι μια ιδιαίτερα θανατηφόρα ασθένεια, η οποία συνήθως διαγιγνώσκεται σε προχωρημένο στάδιο. Έχουμε καθιερώσει διαγονιδιακά ποντίκια που φέρουν ένα μεταλλαγμένο

ras

γονίδιο K- ελέγχεται από την ενεργοποίηση /ΙοχΡ. Τα ζώα αναπτύσσουν PDA το οποίο είναι ιστοπαθολογικά παρόμοια με εκείνη σε ανθρώπους. Προηγουμένως, αναφέραμε ότι τα επίπεδα του Ν-ERC /mesothelin στον ορό ήταν σημαντικά υψηλότερη σε αρουραίους που φέρουν το PDA από ότι στους ελέγχους. Στην παρούσα μελέτη, για να διαπιστωθεί αν τα επίπεδα της N-ERC /mesothelin συσχετίζεται με το μέγεθος του όγκου του ορού, μετρήσαμε τα επίπεδα Ν-ERC /mesothelin σε αρουραίους που φέρουν PDA. Αυξημένα επίπεδα Ν-ERC /mesothelin ορού συσχετίστηκε με αυξημένο μέγεθος του όγκου. Αυτό το αποτέλεσμα δείχνει μια συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου της Ν-ERC /mesothelin και το μέγεθος του όγκου του ορού. Είμαστε δίπλα διερευνήθηκε η επίδραση της χημειοθεραπείας στα επίπεδα /mesothelin ορού Ν-ΕΣΕ. Rat παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα εμφυτεύθηκαν υποδορίως στο πλευρό του NOD-SCID ποντικούς. Στους ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με 200 mg /kg γεμκιταβίνη, το βάρος του όγκου και του επιπέδου της Ν-ERC /mesothelin ορού ήταν σημαντικά μειωμένη σε σύγκριση με τους μάρτυρες. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι οι μετρήσεις /mesothelin ορού Ν-ΕΣΕ θα μπορούσε να είναι χρήσιμη για την παρακολούθηση της απόκρισης σε θεραπεία

Παράθεση:. Fukamachi K, Iigo Μ, Hagiwara Υ, Shibata Κ, Futakuchi Μ, Αλέξανδρος DB, et al. (2014) Rat Ν-ERC /Mesothelin ως δείκτης για

In Vivo

διαλογή φαρμάκων κατά του καρκίνου του παγκρέατος. PLoS ONE 9 (10): e111481. doi: 10.1371 /journal.pone.0111481

Επιμέλεια: Mohammad Saleem, Hormel Ινστιτούτο, το Πανεπιστήμιο της Μινεσότα, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 2 Ιούνη του 2014? Αποδεκτές: 25 Σεπτέμβρη, 2014? Δημοσιεύθηκε: 27 Οκτώβρη 2014

Copyright: © 2014 Fukamachi et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι όλα τα δεδομένα που διέπουν τα ευρήματα είναι πλήρως διαθέσιμα χωρίς περιορισμούς. Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε εν μέρει από ευπροσάρμοστοι και Seamless Τεχνολογίας πρόγραμμα μεταφοράς μέσω της Ε & amp στόχου με γνώμονα? D (Α-STEP) από την Ιαπωνία Επιστήμης και τεχνολογία Οργανισμού? μια Grant-in-Ενισχύσεις για την Επιστημονική Έρευνα (C) από την Ιαπωνία Εταιρείας για την Προώθηση της Επιστήμης? μια Grant-in-Ενισχύσεις για την έρευνα στην Nagoya City University? το Ίδρυμα Καρκίνου Aichi Έρευνας? Το πρόγραμμα για την ανάπτυξη του συστήματος υποστήριξης για την αναβάθμιση της εκπαίδευσης και της έρευνας από το Υπουργείο Παιδείας, Πολιτισμού, Αθλητισμού, Επιστημών και Τεχνολογίας? και ένα Grant-in-Ενισχύσεις για την Έρευνα του Καρκίνου (17S-6, 20S-8) από το Υπουργείο Υγείας, Εργασίας και Πρόνοιας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Yoshiaki Hagiwara είναι υπάλληλος της Immuno-Biological Laboratories. Αυτό δεν αλλάζει την τήρηση των συγγραφέων σε όλες τις PLoS ONE πολιτικές για την ανταλλαγή δεδομένων και υλικών. Οι υπόλοιποι συγγραφείς δηλώνουν δεν ανταγωνιστικά οικονομικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

N-ERC /mesothelin είναι μια πρωτεΐνη 31-kDa που σχηματίζει την Ν-τερματικό θραύσμα της πλήρους μήκους 71-kDa ERC /πρωτεΐνη mesothelin και εκκρίνεται στο αίμα των ασθενών μεσοθηλιώματος [1] – [3]. Ο αρουραίος

Erc

(που εκφράζεται σε καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων) γονίδιο ταυτοποιήθηκε ως ένα εντόνως εκφρασμένο γονίδιο στο νεφροκυτταρικό καρκίνωμα του αρουραίου Eker [4], [5]. Το ανθρώπινο ομόλογο του αρουραίου

ΕΣΕ

είναι η

Mesothelin

/

μεγακαρυοκυττάρων ενισχυτικά παράγοντας

(

MPF

) γονίδιο [6] – [8]. ERC /mesothelin εκφράζεται επίσης σε ωοθήκη και καρκίνωμα του παγκρέατος ιστού σε ανθρώπους [9] – [12]. Ν-ERC /mesothelin θεωρείται ότι είναι σχετικές με την παρακολούθηση των χημειοθεραπευτικών ανταπόκριση σε ασθενείς με μεσοθηλίωμα [13], [14].

παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα (PDA) μεταφέρει την πιο ζοφερή πρόγνωση όλων των συμπαγών όγκων [15] . Έχουμε καθιερώσει διαγονιδιακές σειρές αρουραίων που μεταφέρουν ένα ανθρώπινο Η

ras

G12V (Hras250) [16], ή ένα ανθρώπινο Κ

ras

G12V (Kras301, Kras327) [17] ογκογονίδιο στην οποία η έκφραση του διαγονιδίου ρυθμίζεται από το σύστημα Cre /ΙοχΡ. Στοχευμένη ενεργοποίηση του διαγονιδίου επιτυγχάνεται με έγχυση ενός Cre recombinase που φέρει αδενοϊό (AxCANCre) εντός των παγκρεατικών αγωγών μέσω του κοινού χοληδόχου πόρου. Νεοπλασματικές αλλοιώσεις στα διαγονιδιακά ποντίκια παρουσιάζουν μορφολογικές [16], [18] και η βιολογική [17], [19] – [21] ομοιότητες με εκείνες που παρατηρούνται σε ανθρώπινα αλλοιώσεις πάγκρεας. Αναφέραμε προηγουμένως ότι η Ν-ERC /mesothelin ανιχνεύεται εύκολα στον ορό των αρουραίων που φέρουν παγκρέατος πορογενές αδενοκαρκινώματα [17]. Στην παρούσα μελέτη αναφέρουμε τη χρήση Ν-ERC /mesothelin ως δείκτης ορού για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της χημειοθεραπείας.

Υλικά και Μέθοδοι

Ζώα

Άντρας K

ras

G12V διαγονιδιακά (Kras301) αρουραίοι (Jcl: SD φόντο αρουραίος) ιδρύθηκαν ως έχουν αναφερθεί στο παρελθόν [17], [18]. Τα ομόζυγα ποντίκια δημιουργήθηκαν με την εκτροφή ετερόζυγο αρσενικοί αρουραίοι με ετερόζυγη θηλυκούς αρουραίους. Τα ομόζυγα διαγονιδιακά ποντίκια πιστοποιήθηκαν με ημι-ποσοτική PCR και στη συνέχεια επιβεβαιώνεται με γενετικό έλεγχο. Kras301 αρουραίοι εκτρέφονται για την απόκτηση βιώσιμη και γόνιμη ομόζυγη διαγονιδιακών απογόνων. Fisher344 (/DuCrlCrlj F344) αρουραίοι αγοράστηκαν από Charles River Japan, Inc. (Yokohama, Ιαπωνία). Sprague-Dawley (SD) αρουραίοι (Jcl: SD) ελήφθησαν από CLEA Japan (Tokyo, Japan). SD (SLC: SD) και Wistar (SLC: Wistar /ST) αρουραίοι αποκτήθηκαν από την Japan SLC, Inc. (Hamamatsu, Japan). Οι αρουραίοι διατηρήθηκαν σε πλαστικά κλουβιά σε ένα κλιματιζόμενο δωμάτιο με /σκότους 12-h φως 12 ωρών. Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές για τα πειράματα σε ζώα της Nagoya City University Graduate School of Medical Sciences, και εγκρίθηκε από την επιτροπή των ζώων Φροντίδα και Χρήση της Nagoya City University Graduate School of Medical Sciences (H21-02, H22M-24) .

επαγωγή όγκου και παθολογική εξέταση

Cre-εκφράζοντα φορείς αδενοϊού ενισχύθηκαν σε κύτταρα ΗΕΚ293 και στη συνέχεια καθαρίζεται χρησιμοποιώντας Vivapure Adenopack (Vivascience, Hannover, Germany) όπως έχει ήδη αναφερθεί [17]. όγκοι Πάγκρεας επάχθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [16] – [22]. Το πάγκρεας σταθεροποιήθηκε σε 4% παραφορμαλδεΰδη και υπέστησαν επεξεργασία για ιστολογική παρατήρηση. Αντι-αρουραίου C-ERC /mesothelin (306) αγοράστηκε από την Immuno-Biological Laboratories (Γκούνμα, Japan), και χρώση πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [17].

Μεταμόσχευση ενός παγκρέατος αρουραίου κυτταρική γραμμή και θεραπεία με γεμσιταβίνη

μια κυτταρική γραμμή καρκινώματος του παγκρέατος (634NOD) ιδρύθηκε από έναν όγκο στο πάγκρεας από αρουραίο Hras250 [17], [23]. κύτταρα 634NOD όγκου (2 × 10

6) μεταμοσχεύθηκαν υποδορίως σε ηλικίας 6 εβδομάδων αρσενικούς NOD-SCID ποντίκια (CLEA Japan, Tokyo, Japan). Μία εβδομάδα αργότερα, NOD-SCID ποντικοί έλαβαν γεμσιταβίνη (2 ‘, 2’-διφθορο δεοξυκυτιδίνη? DFdC) hydrochroride (Eli Lilly Ιαπωνία Κ.Κ., Kobe, Japan) σε φυσιολογικό ορό τέσσερεις φορές μέσα σε εννέα ημέρες με ενδοπεριτοναϊκή ένεση. Οι όγκοι μετρήθηκαν με μήκος (α) και το πλάτος (b), σε χιλιοστά χρησιμοποιώντας παχύμετρο και υπολογίστηκαν τα φορτία όγκου (V) σύμφωνα με τη σχέση V = ab

2/2, όπου «α» είναι η μεγαλύτερη από τις δύο μετρήσεις [24]. Επτά εβδομάδες μετά τη μεταμόσχευση, τα ποντίκια θανατώθηκαν υπό βαθιά αναισθησία με ισοφλουράνιο και οι όγκοι αφαιρέθηκαν και ζυγίστηκαν και συλλέχθηκε ορός για ανάλυση του Ν-ERC /mesothelin.

ορό δοκιμής

Το επίπεδο ορού των αρουραίων Ν-ERC /mesothelin προσδιορίστηκε ποσοτικά με ELISA (Κωδικός No.27765, Kit Rat Ν-ERC /mesothelin Δοκιμασία, IBL, Γκούνμα, Ιαπωνία) όπως περιγράφηκε προηγουμένως [25].

Αποτελέσματα

επίπεδο ορού της Ν-ERC /mesothelin σε αρουραίους Kras301

Για να προσδιορίσετε αν το επίπεδο των Ν-ERC /mesothelin ορού είναι διαφορετική σε άγριου τύπου Jcl: αρουραίοι SD και ετερόζυγα και ομόζυγα ποντίκια Kras301, προσδιορίσαμε Ν επίπεδα -ERC /mesothelin σε άγριου τύπου Jcl: SD αρουραίους και ετερόζυγο και τα ομόζυγα ποντίκια Kras301 στην ηλικία των 10 εβδομάδων: ετερόζυγη αρουραίοι F1 παρήχθησαν με αναπαραγωγή ομόζυγο αρσενικούς αρουραίους Kras301 με θηλυκό Jcl: SD αρουραίους. Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο βάρος σώματος ανάμεσα στις αρσενικά ή τα θηλυκά των διαφορετικών γονότυπων (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Τα επίπεδα Ν-ERC ορού /mesothelin ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των τριών γονότυπων (Ρ & lt? 0,0001): 28,3 ± 4,0 ng /ml (n = 19) στην άγριου τύπου Jcl: SD αρουραίους, 51,5 ± 9,2 ng /ml (n = 19) στις ετερόζυγα ποντίκια Kras301, και 77,9 ± 8,2 ng /ml (η = 13) στην ομόζυγη Kras301 αρουραίους (Σχήμα 1Α). Επιπλέον, το επίπεδο των Ν-ERC /mesothelin σε ετερόζυγη αρουραίους F1 στον ορό ήταν σαφώς υψηλότερες από τις αρχικές ετερόζυγα ποντίκια [17]

αρουραίους Ετερόζυγος Kras301 παρήχθησαν από την εκτροφή ομόζυγα ποντίκια Kras301 με άγριου τύπου Jcl:. Αρουραίων SD . (Α) Τα επίπεδα ορού της Ν-ERC /mesothelin σε άγριου τύπου Jcl: αρουραίοι SD και ετερόζυγα και ομόζυγα ποντίκια Kras301. (Β) Τα επίπεδα ορού της Ν-ERC /mesothelin σε αρσενικό (κλειστή ράβδος) και γυναίκες (open bar) άγριου τύπου Jcl: αρουραίοι SD και ετερόζυγα και ομόζυγα ποντίκια Kras301. *, ** Και #, P & lt?. 0,0001 σε σύγκριση με κάθε άλλο

Η

Δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στα επίπεδα ορού Ν-ERC /mesothelin μεταξύ ανδρών (30,3 ± 4,2 ng /ml, n = 9 ) και θηλυκό (26,4 ± 2,8 ng /ml, η = 10) άγριου τύπου Jcl: SD αρουραίους. Αντίθετα, υπήρξε μια σημαντική διαφορά στα επίπεδα του Ν-ERC /mesothelin μεταξύ αρσενικών και θηλυκών ετερόζυγα ποντίκια Kras301 F1 (αρσενικό ορού, 59,2 ± 8,0 ng /ml, η = 8? Γυναίκα, 45,9 ± 5,0 ng /ml, η = 11: P & lt? 0,0001) και ομόζυγα ποντίκια Kras301 (αρσενικοί, 83,4 ± 6,2 ng /ml, η = 6? γυναίκα, 73,2 ± 6,7 ng /ml, η = 7: P & lt? 0,05) (Σχήμα 1Β)

.

επίπεδο ορού της Ν-ERC /mesothelin σε διαφορετικά στελέχη αρουραίων

Για να προσδιορίσετε αν το γενετικό υπόβαθρο επηρεάζονται τα επίπεδα της N-ERC /mesothelin ορού, τα επίπεδα της N-ERC /mesothelin στον ορό ήταν μετράται σε τρία διαφορετικά στελέχη αρουραίου: F344 /DuCrlCrlj, Slc: Wistar /ST, και Slc: SD. Τα επίπεδα Ν-ERC /mesothelin ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των στελεχών αρουραίου (Ρ & lt? 0.0001) (Σχήμα 2Α). Τα επίπεδα Ν-ERC /mesothelin ήταν 45,0 ± 1,5 (η = 12) σε Ρ344 /DuCrlCrlj, 31,4 ± 5,9 (η = 12) σε Slc: SD και 19,6 ± 3,0 (η = 12) σε Slc: Wistar /ST αρουραίοι . Τα επίπεδα Ν-ERC /mesothelin ήταν επίσης σημαντικά διαφορετική μεταξύ των αρσενικών των διαφορετικών στελεχών και τα θηλυκά των διαφορετικών στελεχών (Σχήμα 2Β). Στις επιμέρους στελέχη, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των αρσενικών (n = 6) και γυναίκες (n = 6) αρουραίων (Σχήμα 2Β). Επιπλέον δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ Jcl: SD (n = 19) και Slc:. SD (n = 12) αρουραίους

(Α) διαφορές στέλεχος στα επίπεδα του Ν-ERC /mesothelin ορού. (Β) Τα επίπεδα ορού της Ν-ERC /mesothelin στους άνδρες (κλειστή ράβδος) και γυναίκες (open bar) των διαφορετικών στελεχών αρουραίων. *, P & lt? 0,0001? ** P & lt? 0.005? #, Η P & lt?. 0,0001 σε σύγκριση με κάθε άλλο

Η

επίπεδο ορού της Ν-ERC /mesothelin συσχετίζεται με το μέγεθος του όγκου σε αρουραίους

Για να καθοριστεί εάν τα επίπεδα της N-ERC /mesothelin ορού συσχετίζεται με το μέγεθος του όγκου, θα προσδιοριστούν τα επίπεδα mesothelin Ν-ERC /στην ομόζυγο αρουραίους Kras301 φέρουν πάγκρεας πόρου αδενοκαρκινώματα. Ενήλικες αρσενικοί αρουραίοι ομόζυγα Kras301 θανατώθηκαν 4 εβδομάδες μετά την ένεση ανασυνδυασμένου AxCANCre εντός του παγκρεατικού πόρου μέσω της κοινής χοληφόρου πόρου: βλέπε Fukamachi et al. 2013 [22] για μια λεπτομερή περιγραφή των AxCANCre μεσολάβηση της ενεργοποίησης του ογκογονιδίου Kras σε αρουραίους Kras301. Πολλοί κατάφωρα ορατό υπόλευκο οζίδια όγκου παρατηρήθηκαν σε όλο το πάγκρεας σε διαγονιδιακά ποντίκια. Η ιστολογική εξέταση έδειξε ότι αυτά τα οζίδια ήταν αδενοκαρκινώματα, όπως έχει αναφερθεί προηγουμένως [16], [17]. Νεοπλασματικές αλλοιώσεις δεν βρέθηκαν σε οποιαδήποτε άλλα όργανα. Ανοσοϊστοχημικές μελέτες έδειξαν υψηλότερη έκφραση του ERC /mesothelin σε αλλοιώσεις καρκίνωμα σε σύγκριση με φυσιολογικό ιστό που περιβάλλει, όπως έχει αναφερθεί προηγουμένως [17]. Επιπλέον, ανοσοϊστοχημικές μελέτες έδειξαν ERC /mesothelin επίσης θετικά εκφράζεται σε παγκρεατικά ενδοεπιθηλιακή νεοπλασία (PanIN) βλάβες (Σχήμα 3).

Ανοσοβαφή ERC /mesothelin σε PanIN1 (Α και Β), PanIN2 (C και D) και PDA (Ε και F) αλλοιώσεις. Α, C, E, H & amp? Χρώση Ε? Β, D, F, ERC /χρώση mesothelin. . Μπαρ = 100 μm

Η

Μια αύξηση στο επίπεδο του Ν-ERC /mesothelin συσχετίζεται με αυξημένο μέγεθος του όγκου ορού (R = 0,89665, Ρ & lt? 0,0001, η = 14) (Σχήμα 4). Αυτό το αποτέλεσμα δείχνει μια συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου της Ν-ERC /mesothelin και το μέγεθος του όγκου σε αυτά τα ποντίκια ορό.

Το επίπεδο ορού της Ν-ERC /mesothelin σε ομόζυγη αρουραίους Kras301 φέρουν πάγκρεας πορογενές καρκίνωμα. Το επίπεδο των Ν-ERC /mesothelin ορό συσχετίστηκαν με αυξημένο βάρος του όγκου (Ρ = 0,897).

Η

N-ERC /mesothelin ως δείκτης του χημειοθεραπευτικού αποτελέσματος ενός αντι-καρκίνου

ναρκωτικών

επόμενο διερευνηθεί εάν τα επίπεδα στον ορό Ν-ERC /mesothelin επηρεάστηκαν από αγωγή του αδενοκαρκινώματος παγκρέατος με το χημειοθεραπευτικό φάρμακο γεμσιταμπίνη. 634NOD κυττάρων [17], οι οποίες προέρχονται από ένα πάγκρεας πόρου αδενοκαρκίνωμα από αρουραίο Hras250, εμφυτεύθηκαν υποδορίως στο πλευρό του NOD-SCID ποντικούς. Μετά από 1 εβδομάδα τα ποντίκια χορηγήθηκαν γεμσιταβίνη (200 mg /kg, ε.π.) τέσσερις φορές μέσα σε εννέα ημέρες με ενδοπεριτοναϊκή ένεση. Από την εβδομάδα 1 έως εβδομάδα 7 το μέγεθος του όγκου συνέχισε να αυξάνεται τόσο στον έλεγχο όσο και τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία γεμσιταβίνης (Σχήμα 5Α). Παρά το γεγονός ότι, λόγω της μεγάλης διασποράς των μεγεθών του όγκου, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο μέγεθος του όγκου μεταξύ των δύο ομάδων, το μέσο μέγεθος του όγκου ήταν σημαντικά μικρότερη στα ποντίκια γεμσιταβίνη αγωγή σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου από την εβδομάδα 3 έως εβδομάδες 7 ( Σχήμα 5Α). Στο τέλος της εβδομάδας 7, τα ποντίκια θυσιάστηκαν και οι όγκοι αφαιρούνται και ζυγίζονται? το βάρος του όγκου στα ποντίκια που έλαβαν γεμσιταβίνη (0,33 ± 0,26 g, n = 9) ήταν σημαντικά μειωμένη σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου (1.60 ± 1.37 g, n = 10) (Ρ & lt? 0,05) (Σχήμα 5Β). Δεν υπήρχε μορφολογική διαφορά μεταξύ των όγκων από τις γεμκιταβίνη αγωγή και τον έλεγχο ποντικών (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Στο τέλος της εβδομάδας 7, το επίπεδο ορού του Ν-ERC /mesothelin μειώθηκε σημαντικά (Ρ & lt? 0,01) σε ποντικούς που έλαβαν αγωγή με γεμσιταβίνη (22,4 ± 22,6 ng /ml, η = 9) σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου (123,7 ± 100,6 ng /ml, η = 10) (Σχήμα 5C). Σε αντίθεση, ούτε βάρος ούτε ορό επίπεδα του όγκου του Ν-ERC /mesothelin ήταν σημαντικά διαφορετικές από τον μάρτυρα (η = 10) σε ποντικούς που έλαβαν 75 (n = 10) ή 150 (η = 9) mg /kg γεμκιταβίνη (Σχήμα S1 ). Παρά το γεγονός ότι, λόγω της ευρείας διασποράς των μεγεθών των όγκων και των επιπέδων /mesothelin Ν-ERC, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στο μέγεθος του όγκου ή επίπεδα /mesothelin Ν-ERC μεταξύ των ποντικών που έλαβαν θεραπεία με 75 ή 150 mg /kg γεμκιταβίνη και των ποντικών ελέγχου, ο μέσος όρος των δύο τιμών ήταν μικρότερη στα ποντίκια που έλαβαν γεμσιταβίνη σε σύγκριση με τους ποντικούς ελέγχου. Έτσι, το επίπεδο του ορού Ν-ERC /mesothelin συσχετίζεται καλά με την επίδραση της γεμσιταβίνης (R = 0,96597, Ρ & lt? 0,0001). (Εικόνα 5D)

καρκινικά κύτταρα παγκρέατος αρουραίου (634NOD κύτταρα) εμφυτεύθηκαν υποδορίως σε η πλευρά του NOD-SCID ποντικούς. Μετά από 1 εβδομάδα τα ποντίκια χορηγήθηκαν γεμσιταβίνη (0 ή 200 mg /kg, ε.π.) τέσσερις φορές μέσα σε εννέα ημέρες με ενδοπεριτοναϊκή ένεση. (Α) περιοδική παρατήρηση των όγκων σε NOD-SCID ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με γεμσιταβίνη (0 mg /kg, ανοικτοί κύκλοι? 200 mg /kg, μαύροι κύκλοι). (Β) Το βάρος του όγκου και (Γ) επίπεδο του Ν-ERC /mesothelin ορού μειώθηκε σημαντικά με κατεργασία με γεμσιταβίνη (200 mg /kg, μαύροι κύκλοι) σε σύγκριση με τον έλεγχο (ανοιχτοί κύκλοι) (Ρ & lt? 0,05, Ρ & lt? 0,01 αντίστοιχα ). (D) Συσχέτιση των επιπέδων βάρους του όγκου και του ορού του Ν-ERC /mesothelin. Το επίπεδο ορού της Ν-ERC /mesothelin συσχετίζεται με το βάρος του όγκου και τη θεραπεία γεμσιταμπίνη (R = 0.966). Ανοικτοί κύκλοι, 0 mg /kg? μαύροι κύκλοι, 200 mg /kg.

Η

Συζήτηση

Έχουμε αναφερθεί στο παρελθόν ότι το επίπεδο του Ν-ERC /mesothelin ορό συσχετίζεται με το μέγεθος του όγκου σε ποντίκια με καρκίνο του παγκρέατος κύτταρα μεταμοσχεύονται αρουραίου (634NOD κύτταρα) [17]. Στην παρούσα μελέτη, σε συμφωνία με προηγούμενη έκθεσή μας, το επίπεδο των Ν-ERC /mesothelin συσχετίζεται με το μέγεθος του παγκρέατος όγκων σε αρουραίους ορό (Σχήμα 4). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το σχετικό μέγεθος των όγκων του παγκρέατος μπορεί να εκτιμηθεί από το επίπεδο των Ν-ERC /mesothelin ορό χωρίς να θυσιάζει τα ζώα. Δείξαμε επίσης ότι η Ν-ERC /mesothelin στον ορό ήταν ένας βιοδείκτης που θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για την παρακολούθηση της απόκρισης σε χημειοθεραπεία. Όταν τα ποντίκια με όγκους που προέρχονται από μεταμοσχευμένα 634NOD κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με γεμκιταβίνη, το βάρος του όγκου και του επιπέδου της Ν-ERC /mesothelin στον ορό μειώθηκαν σε σύγκριση με το μάρτυρα. Το επίπεδο στον ορό της Ν-ERC /mesothelin συσχετίζεται με την θεραπευτική επίδραση του φαρμάκου κατά του καρκίνου (Σχήμα 5). Ως εκ τούτου, Ν-ERC /mesothelin μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ποσοτική ανάλυση του θεραπευτικού αποτελέσματος του αντικαρκινικών παραγόντων επί του παγκρέατος στα ζωικά μοντέλα που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη.

Το επίπεδο στον ορό της Ν-ERC /mesothelin σε ομόζυγα ποντίκια Kras301 ήταν σημαντικά υψηλότερες από αυτές του άγριου τύπου ποντίκια. Το επίπεδο στον ορό της Ν-ERC /mesothelin σε ετερόζυγη F1 ομόζυγων αρουραίους ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερη από ό, τι στους αρουραίους άγριου τύπου. Ωστόσο, το επίπεδο της Ν-ERC /mesothelin στις αρχικές ετερόζυγα ποντίκια ορού δεν ήταν διαφορετικά από άγριου τύπου Jcl: SD αρουραίους [17]. Τα ομόζυγα ποντίκια Kras301 διατηρήθηκαν από την αναπαραγωγή ομόζυγο αρσενικών και θηλυκών αρουραίων ομόζυγο. Είναι πιθανό ότι οι αρουραίοι με υψηλά επίπεδα Ν-ERC /mesothelin ήταν τυχαία επιλεγμένο στο πλαίσιο του καθορισμού των ομόζυγη αρουραίους Kras301.

Το επίπεδο ορού της Ν-ERC /mesothelin ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των στελεχών αρουραίων (F344 /DuCrlCrlj, Slc: SD και Slc: Wistar /ST). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το γενετικό υπόβαθρο των διαφορετικών στελεχών αρουραίων επηρεάζει το βασικό επίπεδο στον ορό Ν-ERC /mesothelin. Ως εκ τούτου, για την αξιολόγηση των χημειοθεραπευτικών αποκρίσεων χρησιμοποιώντας ορό Ν-ERC /mesothelin, είναι σημαντικό να χρησιμοποιείται ο κατάλληλος έλεγχος.

N-ERC /mesothelin ανιχνεύθηκε στα υπερκείμενα καλλιεργημένων ανθρώπινων καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος και συσχετίζεται με την επίπεδα έκφρασης του ERC /mesothelin [26]. ERC /mesothelin εκφράζεται συχνά σε πορογενές καρκίνωμα, αλλά όχι σε φυσιολογικό πάγκρεας [11], [26] – [28]. Έτσι, η έκφραση /mesothelin ERC μπορεί να βρεθεί τόσο σε ανθρώπινο και αρουραίου πάγκρεας πόρου αδενοκαρκίνωμα. Ωστόσο, αντίθετα με τις προσδοκίες, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στις συγκεντρώσεις Ν-ERC /mesothelin ορού μεταξύ ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος και υγιείς ομάδες ελέγχου [26]. Ως εκ τούτου, ενώ Ν-ERC /mesothelin μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως βιολογικός δείκτης ορού για καρκίνο του παγκρέατος πορογενές στα ζωικά μοντέλα που χρησιμοποιούνται στην παρούσα μελέτη, δεν είναι κατάλληλο για τον άνθρωπο.

Επί του παρόντος, δεν υπάρχει αποτελεσματική φάρμακο κατά της καρκίνος του παγκρέατος? Ως εκ τούτου, η χρήση των ζωικών μοντέλων για να δοκιμαστεί η ανταπόκριση του καρκίνου του παγκρέατος σε θεραπεία παραμένει υψίστης σημασίας. Η χρήση του αρουραίου Ν-ERC /mesothelin ως δείκτης ορού έγκειται στην ικανότητά του να διακρίνει μεταξύ των αρουραίων, με ή χωρίς καρκίνο του παγκρέατος χωρίς άνοιγμα της κοιλιακής κοιλότητας. Η γεμσιταβίνη γενικά θεωρείται ότι συνιστά θεραπεία πρώτης γραμμής για τον καρκίνο του παγκρέατος. Η μέγιστη ανεκτή δόση gemcitabine σε αρουραίους ήταν 50 mg /kg μία φορά την εβδομάδα. Αυτή η δόση δεν είχε καμία επίδραση επί του μεγέθους όγκου σε αρουραίους Kras301. Ως εκ τούτου, το επίπεδο του Ν-ERC /mesothelin ορού δεν επηρεάστηκε σημαντικά σε αυτά τα ζώα (μη δημοσιευμένα αποτελέσματα μας). Αξίζει να σημειωθεί ότι, σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με γεμσιταβίνη, τα επίπεδα της γεμσιταβίνης που δεν επηρεάζουν σημαντικά το μέγεθος του όγκου δεν επηρέασε το επίπεδο της Ν-ERC /mesothelin (Σχήμα S1) στον ορό. Ενώ γεμκιταβίνη μόνο του δεν αποδεικνύει αντικαρκινικές επιδράσεις επί ενδογενώς ανέπτυξαν καρκίνο του παγκρέατος σε αρουραίους (αδημοσίευτο αποτέλεσμα μας) ή σε μοντέλα ποντικών [29], τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται εδώ καταδεικνύουν την χρησιμότητα της Ν-ERC /mesothelin ως δείκτης ορού σε παρακολούθηση προκλινικές δοκιμές για θεραπεία σε μοντέλα ποντικών και αρουραίων του παγκρέατος πόρου αδενοκαρκίνωμα: οροδιάγνωση σε ζωικά μοντέλα μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την ενίσχυση της διαλογής για υποψήφια χημειοθεραπευτικούς παράγοντες που θα μπορούσαν να αξιολογηθούν για ανθρώπινη χρήση

Υποστήριξη Πληροφορίες

Σχήμα S1..

Επίδραση της γεμσιταβίνης σε NOD-SCID ποντίκια με μεταμοσχευμένα κύτταρα 634NOD. Το επίπεδο βάρος όγκου και τον ορό του Ν-ERC /mesothelin δεν μειώθηκε με θεραπεία με 100 ή 150 mg /kg γεμκιταβίνη

doi:. 10.1371 /journal.pone.0111481.s001

(TIFF)